6.3.2.1 DESINFECCIÓN DEL QUISTE DE ARTEMIA QUE SALE DEL CASCARÓN.
6.3.2.3 BIOENCAPSULACIÓN DE TINSIONES EN EL NAUPLIO DE ARTEMIA
Se dirigieron los Pre-experimentos en un sistema que consistió en caja Petri y entonces un último sistema se introdujo con los tubos de ensayo. En los primeros sistema, se agregaron 50 ml de agua de mar estéril a cada plato de Petri y en el segundo sistema, 20 ml a cada prueba de los sistema de plato de Petri y cinco copias en la prueba .El agua era filtrada a través de 0.45 micras, el carbón activado, UV, se esterilizó y finalmente el autoclave. En el sistema del tubo de ensayo, se agitaron con el agua vigorosamente para oxigenar la muestra.
108 Un lote del nauplio estéril se agregó a un frasco con 200 ml con la inoculación bacteriana a una densidad de 100 nauplio a 10 ml de celulas bacterianas. Otro lote se agregó a un frasco similar pero sólo con el agua de mar estéril. Después de una hora los nauplio se enjuagaron completamente con el agua de mar estéril y se contaban para agregar 30 nauplio por plato de Petri o 10 por el tubo de ensayo. El plato de Petri con la inoculación de bacterias fue agregado para desafiar al nauplio. Para el segundo sistema el primer lote era más allá dividido en 2 y los nauplio se agregaron a un segundo frasco conteniendo otra inoculación de bacterias, durante una hora. Entonces ellos fueron enjuagados, se contaban y se agregaron a los tubos de ensayo. Los nauplios que salieron en los platos de Petri o tubos de ensayo después de 48 hr, entonces los nauplios vivos eran contados. Al final del experimento los nauplios se analizaron la carga bacteriana (vea 2.1.4)
6.3.2.4 PROYECTO EXPERIMENTAL
Se resumen los experimentos dirigidos con el nauplio de Artemia descrito en tabla 6.2.
Tabla 6.2 Experimentos para probar la supervivencia de los nauplios de Artemia cuando se inocularon con un potencial patógeno y el potencial de bacteria probióticas. Ex p Tratamiento Sistem a Rep. Observaciones 1 2 3 4 1 C14- H2O C14- HL58 H2O- HL58 C14-C14 PD 3 1.0 ml de bacteria 2.0 en PD 2 C14- H2O C14- HL58 H2O- HL58 C14-C14 PD 2 0.1 ml de bacteria 0.2 en PD. 3 C14- H2O C14 -HL58 HHL582O- - TT 4 0.5 ml de bacteria, 50 ml frasco. 4 C14- H2O C14- HL58 H2O- HL58 HL58-C14 TT 5 0.5 ml en los 50 ml frasco. 5 C14- H2O C14 -HL58 HHL582O- HL58-C14 TT 5 0.5 ml en los 50 ml frasco. 6 C14- H2O C14 -HL58 H2O- HL58 HL58-C14 TT 5 0.5 ml en los 50 ml frasco. 20 nauplios TT- Las cepas a la izquierda se inoculó primero y después de lavar la otra cepa, PD=Placa de Petri, sistema de T, T=Tubos de ensayo, Rep.=Número de repeticiones.
Experimento 1.
El objetivo: para evaluar la supervivencia del nauplio de Artemia cuando inoculó con las bacterias del potencial probiótico y bacterias patógenas.
109 Los nauplios de Artemía se procesaron como descrito anteriormente y un lote estéril era dividido en tres (Fig. 6.2). Un lote se puso en un plato de Petri con 50 ml de agua de mar estéril y 1 ml de tinsión C14 (O.D. 1.00 a 610 nm); ellos permanecían en este caldo para 1 hr después de que se lavó. Otro lote permaneció en el agua de mar estéril y el tercer lote se puso en otro plato de Petri con 50 ml de agua de mar y 1 ml de tinsión HL58 (C.D. 1.00 a 610 nm). Del primer lote, se contaban 30 nauplio y se pusieron en la caja de Petri llenado con 50 ml de agua de mar, uno tenía 1 ml de tinsión 014, otro 1 ml de HL58 y el tercero sólo el agua de mar (tabla 6.2). Los nauplios permanecían después de 48 hr en los platos después de que la supervivencia era contada, cada tratamiento era seguido con antifricción triple.
Experimente 2.
El objetivo: para evaluar la supervivencia del nauplio de Artemia cuando inoculó con una baja densidad de bacterias del potencial probióico y bacterias patógenas.
Figura 6.2. Diagrama de experimentos 1 y 2.
Este experimento era similar al anterior pero 0.1 ml de las tinsiones se inoculó en los platos de Petri con 50 mm de agua de mar (Fig. 6.2). Se realizaron Dos copias de cada tratamiento (Tabla 6.2). Después de 48 hr de desafío el nauplio vivo se contaba.
Experimento 3.
110 Las bacterias del potencial probiótico y bacterias del patógeno.
El objetivo: reducir el tiempo de exposición del nauplio a las tinsiones probadas y examinar el sistema del tubo de ensayo.
Capítulo 6
Un lote del nauplio de Artemia se expuso a la tinsión C14 por una hr, se enjuagó y fue dividido en 2 (Fig. 6.3), un lote fue expuesto para probar HL58 durante una hora extensa entonces, mientras el otro permanecía en el agua de mar esteril. Otro lote no fue expuesto para probar C14
pero directamente
expuesto para probar HL58 para una hr.
De unos de los lotes (los tratamientos,
Tabla 6.2) se contaron diez nauplios y se intruducían en los tubos de ensayo con 20 ml de agua de mar estéril dónde ellos permanecían hasta 48 hrs. Los tratamientos (Tabla 6.2)
Se hacían cuatro copias. Después de ese tiempo se contaban los sobrevivientes y el volumen bacteriano analizado.
Experimento 4
El objetivo: para observar la actuación del nauplio de Artemia cuando inoculó con una tinsión del potencial probiótico y para desafiarlos con una tinsión del patógeno y viceversa.
Este experimento era similar al número 3, pero otro tratamiento fue introducido (tabla 6.2, Fig. 6.4). Un lote de nauplio se inoculó primero con la tinsión del patógeno HL58 durante una hora, se enjuagó y entonces se inoculó durante otra hora con el potencial probiótico tinsión C14. Los tratamientos se corrieron con cinco copias y la supervivencia se estimó
111 a 48 hrs. Se probaron Nauplios después de la inoculación y al final del experimento se analizó las cargas bacterianas.
Experimente 5
El objetivo: para observar la actuación del nauplio de Artemia cuando inoculó con una tinsión del potencial probiótico y después desafiarlos con una tinsión del patógeno y viceversa.
Este experimento era una reproducción de experimento 4 (Tabla 6.2, Fig. 6.4).
Experimento 6
El objetivo: para observar la actuación del nauplio de Artemia cuando inocula con una tinsión del potencial probiótico y entonces para desafiarlos con una tinsión del patógeno y viceversa pero a una densidad alta de nauplio por ml.
Este experimento es similar a los experimentos 4 y 5 pero en lugar de 10 nauplio por el tubo de ensayo, se agregaron 20 en cada tubo de ensayo (Tabla 6.2, Fig. 6.4).