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9. RESULTADOS Y DISCUSIÓN

9.4 Cultivo sólido en módulo de producción

9.4.1 Caracterización de las cepas en sustrato sólido

Debido a la importancia del género Ganoderma se caracterizó el crecimiento de las cepas en el modulo de fructificación. Es importante resaltar la significancia del subgénero Ganoderma, ya que en la mayoría de los trabajos publicados la incidencia de Ganoderma lucidum es en la que un gran número de metabolitos con actividad funcional han sido caracterizados. Para el género Elfvingia, la fructificación de las especies resulta importante ya que, al pertenecer al género Ganoderma posiblemente se obtengan compuestos con novedosas actividades funcionales. Por lo tanto, se realizaron cultivos en sustrato sólido de las cepas CP-381, CP- 382, CP-383, CP-387, CP-390, CP-391, CP-392, CP-397, CP- 407, CP-409, CP-444, CP-451 subgénero Ganoderma. Así como, de las cepas CP-38, CP-388, CP-389, CP-399, CP-400, CP-447 subgénero Elfvingia. Para la fructificación se utilizó la fórmula COLPOS-17, la composición de la fórmula se describe en la sección 7.7.1. El crecimiento del micelio de las 18 cepas fue bueno cubriendo el sustrato en un tiempo aproximado de 6 a 9 días. Una vez cubierto el sustrato, se inicio la etapa de incubación. Al monitorear las unidades de producción en la fase de incubación se observó la aparición temprana de primordios en las cepas CP-381, CP-382, CP-387, CP-388, CP-390, CP-392, CP-397 y CP-451. Es importante mencionar la aparición temprana de fructificaciones en esta familia, ya que para algunas especies se han reportado tiempos de fructificación de 7 a 9 meses. En el módulo de fructificación se mantuvo una temperatura máxima promedio de 23ºC y una mínima de 14ºC, entre el mes de enero y abril con un 68.5 % de humedad. (Stamets, 1996; Chen y Miles, 1996; Royse, 1997) reportan la formación de cuerpos fructíferos de apariencia típica al fructificar a Ganoderma lucidum a temperaturas que oscilan entre los 20ºC a 28ºC, así como al mantener una humedad relativa del 85 al 95%. Una observación adicional en el cultivo de estas cepas fue la inhibición de la fructificación a bajas temperaturas ya que en los meses de invierno no se logro finalizar la fructificación del material biológico seleccionado.

9.4.2 Fructificación de Ganoderma spp.

Se inocularon en sustrato sólido 18 cepas de Ganoderma, de las cuales 9 solamente fructificaron, obteniendo rendimientos máximos de 202 g/k de peso seco de sustrato utilizado para la cepa CP-383 (subgénero Ganoderma) y una mínima de 68 g/k para la cepa CP-388 (subgénero Elfvingia), la eficiencia biológica fue baja en todas las cepas ya que los valores obtenidos no fueron mayores al 10% (Tabla 6).

Se inocularon las cepas CP-381, CP-382, CP-383, CP-387, CP-390, CP-391, CP-392 y CP- 451 pertenecen al subgénero Ganoderma (complejo laqueado), en donde, al parecer coexiste un complejo de especies de este subgénero, y solamente fructificó una cepa del subgénero Elfvingia, CP-388. Un dato importante fue la fructificación, debido a la importancia de los subgéneros, caracterizándolo como un importante recurso genético, el cual puede ser utilizado para su producción y comercialización.

Para la cepa CP-391 identificada como Ganoderma lucidum se obtuvo una producción de 132 ± 15 g/k de peso seco. También las cepas CP-381, CP-387, CP-392 y CP-451 especies no identificadas (Ganoderma spp.), mostraron altos rendimientos. Guillermo et al. (2001) reportaron altos porcentajes de eficiencia biológica al utilizar materiales agroindustriales puros como viruta de encino y olote de maíz, obteniendo porcentaje mayores del 40%.

Cabe mencionar que las cepas CP-399 (Ganoderma sp.); CP-389 (Ganoderma sp.); CP-400 (Ganoderma sp.) y CP-447 (Ganoderma applanatum), agrupadas dentro del subgénero Elfvingia (complejo no laqueado) no fructificaron. Al parecer los requerimientos ambientales para estas especies así como los tiempos de fructificación fueron distintos a los ensayados, ya que algunas cepas agrupadas dentro de este género mostraron aparición de primordios. Sin embargo, para la cepa CP- 388 (Ganoderma subamboinense) agrupada dentro del subgénero Elfvingia se obtuvieron fructificaciones alcanzando rendimientos moderados con respecto a los obtenidos del género Ganoderma con una producción de 68.166 g/k de peso seco.

La fructificación de la cepa CP-388 (Ganoderma subamboinense, subgénero Elfvingia) es de relevante importancia ya que en algunas especies pertenecientes a este subgénero se han caracterizado metabolitos con actividad medicinal (Kiet, 1998; Turner y Aldrich, 1983); sin embargo, el material biológico utilizado en estos estudios han sido de origen silvestre. Por tal razón, la fructificación de CP-388 significó un importante avance en la disponibilidad de los recurso genéticos con novedosos y potentes metabolitos. Es importante señalar los resultados obtenidos en este trabajo en cuanto a la eficiencia biológica y rendimiento, ya que la evaluación de estos parámetros en Ganoderma spp. no han sido reportados, adquiriendo relevancia en el cultivo comercial. Para las cepas CP-38, CP-397, CP-407, CP-409 y CP-444, aunque se obtuvieron fructificaciones, no se consederron los datos ya que su seguimiento de interrumpió debido a una suspensión laboral.

Tabla 6. Producción (g/k de peso seco) y eficiencia biológica (EB) obtenidas empleando la formulación COLPOS-17.

Subgénero Especie Cepa TD (mm/día) EMA TC al 100% (Días) Producción (g/833.258 pss) Producción (g/k Ps S) Eficiencia biológica (%) Ganoderma Ganoderma sp. CP-381 6.64 ± 0.08 9 122.25 ± 66.4 146.65 ± 66.4 5.86 Ganoderma Ganoderma sp. CP-382 8.04 ± 0.34 9 82.5 ± 22.0 99.00 ± 22.0 3.96 Ganoderma Ganoderma sp. CP-383 7.29 ± 0.17 9 169 ± 38.6 202.81 ± 38.6 8.11 Ganoderma Ganoderma sp. CP-387 6.67 ± 0.23 6 111.5 ± 13.1 133.81 ± 13.1 5.35 Ganoderma Ganoderma sp. CP-390 8.19 ± 0.24 9 138 ± 26.3 166 ± 26.3 6.66

Ganoderma Ganoderma af.

lucidum CP-391 6.67 ± 0.36 9 110.5 ± 15.0 132 ± 15.0 5.34 Ganoderma Ganoderma sp. CP-392 6.69 ± 0.34 9 128.5 ± 14.1 154 ± 14.1 6.16 Ganoderma Ganoderma sp. CP-397 7.70 ± 0.40 9 ______ ______ ______ Ganoderma Ganoderma sp. CP-407 8.72 ± 0.34 9 ______ ______ ______ Ganoderma Ganoderma sp. CP-409 7.62 ± 0.30 9 ______ ______ ______ Ganoderma Ganoderma sp. CP-444 5.65 ± 0.18 9 ______ ______ ______ Ganoderma Ganoderma sp. CP-451 7.98 ± 0.35 6 124 ± 16.1 124 ± 16.1 5.95 Elfvingia Ganoderma sp. CP-38 7.37 ± 0.09 9 ______ ______ ______

Elfvingia Ganoderma af.

subamboinense CP-388 10.31 ± 0.43 9 56.8 ± 24.0 68.166 ± 24.0 4.77 Elfvingia Ganoderma sp. CP-389 8.29 ± 0.18 9 ______ ______ ______

Elfvingia Ganoderma sp. CP-399 8.47 ±0.35 9 N/F N/F N/F

Elfvingia Ganoderma sp. CP-400 3.77 ± 0.05 9 N/F N/F N/F

Elfvingia Ganoderma af.

applanatum CP-447 4.52 ± 0.05 9 N/F N/F N/F

N/F= No hubo fructificación. _____= Sin datos. TD= Tasa de desarrollo en cajas de Petri estériles con medio de cultivo de agar con extracto de malta. TC= Tiempo promedio de colonización del substrato. Pss= peso seco del sustrato.

9.4.3 Caracterización morfológica de los cuerpos fructíferos de Ganoderma spp.

Las características de los cuerpos fructíferos cosechados en las cepas CP-381, CP-382, CP- 383, CP-387, CP-388, CP-390, CP-391, CP-392 y CP-451 fueron variadas, el color rojizo del píleo fue predominante en las cepas, el color del himenio varió de blanquecino a amarillento, el diámetro del sombrero varió de 18.5 cm a 2.5 cm y el tamaño del estípite fue de 3.7 cm a 1.7 cm. De igual manera se hicieron observaciones de la forma del sombrero, tipo de cutícula, tipo de crecimiento del carpóforo, así como también del color, forma y tamaño de la espora (Tabla 7). Características similares fueros observadas por Torres-Torres y Guzmán-Dávalos (2005) al estudiar la morfología de Ganoderma curtissi. Una característica importante de la cepa CP- 392 fue la forma del sombrero la cual fue típica a las colectadas de manera natural mostrando la forma de riñón. En la figura 11 se muestran las formas de los cuerpos fructíferos cosechados.

Las características fenotípicas evaluadas de los cuerpos fructíferos coinciden con lo reportado por Stamets (1996); Murrill (1917); Ryvarden (1976); García et al. (1998) manteniendo la forma similar a los especímenes nativos recolectados.

Figura 11. Cuerpos fructíferos cosechados en el módulo experimental de Ganoderma spp. A: CP- 381, B: CP-382, C: CP-383, D: CP-388, E: CP-390, F: CP-387, G: CP-391, H: CP-392, I: CP-451, J: CP-444, K: CP-389 y L: CP-409.

La diversidad morfológica dentro del grupo de especies fructificadas fue amplia, en la cual se observaron desde formas típicas de los cuerpos fructíferos tales como dimidiados, circulares, sonados de presencia única o agregados, así como atípicas, en forma de dedos, con la presencia de píleo múltiple, con sombreros amorfos no circulares ni dimidiados y en ocasiones con escaso contexto. Es evidente que las características morfológicas de los cuerpos fructíferos varia dependiendo de las condiciones ambientales en las que se desarrollen, principalmente altura sobre nivel del mar y temperatura, puesto que algunas especies al momento de fructificarlas mantuvieron las características originales de los progenitores de donde fueros aisladas mientras que otras cambiaron completamente, lo cual sugiere la hipótesis de que las condiciones ambientales juegan un pape importante sobre las características fenotípicas de los carpóforos.

Tabla 7. Características morfológicas de los cuerpos fructíferos cosechados de especies de Ganoderma.

Cepa crecimiento Tipo de del píleo Forma Laca ancho del Largo y píleo (cm) Color del píleo Cutícula Largo y diámetro del estípite (cm) Color del himenio

CP-381 Solitario Abanico Presente 14.3 x 5.2 Rojizo Irregular y radiado 13 x 2.9 Crema CP-382 Solitario Abanico Presente 2.5 x 2.2 Café rojizo Regular y liso 13.5 x 3.5 Blanquecino CP-383 Agregados Cespitoso Presente 18.5 x 3.5 Rojizo Regular, liso y

radiado 7.2 x 3.2 Blanquecino CP-387 Agregados Cespitoso Presente 10.5 x 3.2 Amarillento Regular y rugosa 10.5 x 3.5 Blanquecino CP-388 Solitario Abanico Presente 22.3 x 21.5 Rojizo Irregular y rugosa 10.5 x 2.5 Crema CP-390 Solitario Abanico Presente 10.5 x 7.7 Amarillento Regula y liso 7.5 x 2.3 Blanquecino CP-391 Agregados Cespitoso Presente 17.5 x 3.5 Amarillento Irregular rugosa 8.2 x 3.2 Blanquecino CP-392 Solitario Reniforme Presente 18.5 x 17.3 Rojizo Regular y radiado 10.5 x 2.8 Blanquecino CP-451 Solitario Abanico Presente 17.5 x 14.2 Rojizo Irregular y lisa 11.2 x 2.5 Crema

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