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La técnica analítica para la cuantificación de Enalapril maleato en tabletas recubiertas, por espectrofotometría UV/VIS, actualmente no figura en ninguna obra oficial, por lo tanto al no estar registrado o contemplado en alguna farmacopea, debe ser validado previamente a su uso en rutina (3, 8).

La validación de un método analítico debe iniciarse con el análisis de la selectividad o especificidad, ya que éste parámetro demuestra que el método es capaz de discriminar entre el analito, sustancias de composición similar y otras sustancias que pueden estar presentes en la muestra, como excipientes o productos de degradación. Los resultados están vinculados principalmente al origen de la muestra, su preparación y las condiciones instrumentales (9, 14).

En las tablas 1 y 2 se observa los porcentajes de interferencias para las muestras sometidas a estrés (degradación ácida, alcalina, oxidación, fotólisis y termólisis) donde se obtuvo para cada caso un valor menor del 2% de interferencia, con lo cual se evidencia que ni los excipientes de la formulación ni los posible productos de degradación interfieren en la degradación del principio activo, ya que no se detecta ninguna respuesta significativa, con estos resultados se demuestra la selectividad del método.

La guía ICH (International Conference on Harmonización) hace mención que una relación lineal debe ser evaluada en toda la gama del procedimiento analítico. Se puede demostrar directamente sobre la sustancia activa (por dilución de una solución madre estándar) o pesadas separada de mezclas sintéticas de los componentes del producto, utilizando el procedimiento propuesto. Este último aspecto puede ser estudiado durante la investigación de la gama. Linealidad debe evaluarse mediante

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inspección visual de una trama de señales en función de la concentración de analito o contenido (15).

Dentro del rango establecido se recomienda analizar un mínimo de 5 concentraciones: 80%, 90%, 100%, 110%, 120%, cada una por triplicado, con un total de 15 determinaciones. Para realizar los análisis se recomienda hacer pesadas independientes, ya que así se elimina el posible error sistemático que se podría arrastrar partiendo de una sola pesada y realizando diluciones (3, 9).

Cabe mencionar que es recomendable usar pesadas independientes cuando la cantidad a pesar es confiable con respecto al equipo que se utilice, cuando las cantidades a pesar son muy pequeñas se recomienda usar diluciones teniendo una solución patrón y de ella obtener las soluciones a las concentraciones que se deseen.

La Tabla 3 muestra los resultados para el parámetro de linealidad del sistema, obtenidos al evaluar estadísticamente las concentraciones analizadas: 80%, 90%, 100%, 110%, 110%, 120%. Así mismo, en la tabla 4, se presentan los parámetros de linealidad del método para las concentraciones: 80%, 90%, 100%, 110%, 110%, 120%. Estos comportamientos se objetivizan en los gráficos 1 y 2.

En la tabla 3, se muestra el valor del coeficiente de determinación r2 de 0,995674, siendo el valor mínimo aceptable de 0,990; mientras que en la Tabla 4, el valor del coeficiente de determinación r2 fue 0,9945001. En ambos casos se demuestra que el método presenta una buena corrección entre las concentraciones y las respuestas, señalando que el sistema conserva la linealidad esperada. Para confirmar que dicha regresión es lineal, se aplicó el test de Student, cuyo valor t experimental fue mayor que el t tabla (54,7043 > 2,160) para linealidad del sistema y de igual manera para la

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linealidad de método (48,4837 > 2,160), por lo que ambos casos la pendiente difiere significativamente de cero. En el test de proporcionalidad, el t experimental es mayor que el t tablas (26,7421 > 2,160) para la linealidad del sistema y de igual manera para la linealidad del método (771,510 > 2,160), lo que indica que el intercepto es estadísticamente diferente de cero (14, 16, 17, 18).

Otro de los parámetros evaluados es la exactitud, cuya finalidad es comprobar que el método tiene la capacidad de revelar dentro de un límite aceptable la cantidad de sustancia de interés que esté presente en la muestra, como se puede observar en la tabla 5, el valor de los porcentajes promedio de muestra recuperada de Enalapril maleato fue de 99.91%, el cual está dentro de los límites de las especificaciones (98% - 102%) señalando la recuperación como satisfactoria; se debe tener en cuenta que la recuperación esperada depende de la matriz de la muestra, del procedimiento de la preparación de la muestra y de la concentración del analito en la misma (9).

Al aplicar el test G de Cochran resultó que el G experimental es menor que G tablas (0,784 ˂ 0,797) lo cual significa que las varianzas de las tres concentraciones son equivalentes, es decir, que la variable concentración no influyó en los resultados.

Para demostrar que no hay diferencia significativa entre la recuperación media y el 100% se aplicó un test estadístico denominado test de Student (Tabla 5), donde se muestra que el t experimental es menor que t tabla (0,741 ˂ 2,306) por lo que la exactitud es correcta según sus respectivas especificaciones. Este resultado nos condujo a considerar que los errores sistemáticos del método un fueron significativos, por lo que éste puede considerarse exacto (9, 17, 19).

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Los factores que pueden influir en un comportamiento de no exactitud son los errores sistemáticos como: la utilización de equipos de medición no adecuados, una calidad de reactivos incorrecta o no utilizar el método analítico apropiado, lo que hace que se obtengan valores superiores o inferiores al valor verdadero.

El parámetro de precisión, se evaluó en términos de repetibilidad y precisión intermedia.

Con respecto al ensayo de repetibilidad, se evaluó a nivel de repetibilidad de sistema cuya finalidad es medir el grado de reproducibilidad que tiene el procedimiento bajo condiciones normales de operación y la repetibilidad del método que se hace con la finalidad de medir el grado de reproducibilidad que tiene el procedimiento aplicado a la muestra y nos da un indicador de consistencia de los resultados. En la Tabla 6 se observa resultados satisfactorios, pues el coeficiente de variación determinado fue de 0,632%, para la repetibilidad del sistema y 0,474% para la repetibilidad del método, es decir se obtienen valores por debajo del límite máximo especificado (2%). Se debe tener en cuenta que los resultados obtenidos para la repetibilidad del sistema dependen del equipo, mientras que la repetibilidad del método depende del proceso de preparación de la muestra (9, 18).

Para el ensayo de precisión intermedia, que expresa las variaciones intralaboratorio: diferentes días, diferentes analistas, diferentes equipos, etc. Como se muestra en la Tabla 6 el valor obtenido fue de 0,59% siendo el valor máximo 2%, según el resultado obtenido se observa que la técnica analítica aplicada es capaz de dar valores cercanos entres si cuando se aplican en similares condiciones operativas por los analistas en diferentes días.

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La variabilidad del método puede deberse a errores aleatorios inherentes a todo método de ensayo. Los factores susceptibles a influir sobre los resultados de un ensayo no pueden ser siempre controlados como el analista, el equipo instrumental, los reactivos, el tiempo, etc., es por ello la importancia de este ensayo (9, 14).

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