Efecto del aceite de sacha inchi (plukenetia volubilis L ) sobre el desarrollo de cáncer de colon inducido con 1,2 dimetilhidrazina en ratas holtzman

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(1)Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE MEDICINA. fo r. m. át ica. yC. om un. ica ció. DEPARTAMENTO DE CIENCIAS BÁSICAS. n. ESCUELA DE MEDICINA. de. In. TESIS PARA OPTAR EL GRADO DE BACHILLER EN MEDICINA. as. EFECTO DEL ACEITE DE SACHA INCHI (Plukenetia volubilis L.) SOBRE. em. EL DESARROLLO DE CÁNCER DE COLON INDUCIDO CON 1,2 -. de. Si. st. DIMETILHIDRAZINA EN RATAS HOLTZMAN. CÉSAR ABEL CENTURIÓN RODRÍGUEZ. ió. n. AUTOR:. Di re cc. ASESOR:. DR. JUAN JORGE HUAMÁN SAAVEDRA. COASESOR: DR. VÍCTOR RAÚL REQUENA FUENTES. TRUJILLO – PERÚ 2016. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(2) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. DEDICATORIA. A Dios por haberme permitido desarrollar con éxito cada una de las. ica ció. n. etapas del presente trabajo de investigación. A mi mamá Magda, por ser el pilar de mi formación como persona y. om un. motivo de inspiración para ser mejor cada día.. A mi abuelita Olga, por ser el sustento diario para poder alcanzar todas. yC. mis metas.. át ica. A mi hermano Franco, por ser el impulsor de mi mejora como persona. fo r. m. y por ser un modelo a seguir.. In. A mi tía Esmeralda y a mi primo Pool, por los estrechos lazos que nos. de. une y por darme la oportunidad de compartir el conocimiento. em. as. aprendido.. st. A mi abuelito Jacinto Espino por haber sido fuente de inspiración para. de. Si. llevar acabo el presente trabajo. n. A mis asesores Dr. Jorge Huamán y Dr. Víctor Requena, por su apoyo. Di re cc. ió. incondicional y orientación en la realización del presente trabajo de investigación.. Abel Centurión. i Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(3) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. AGRADECIMIENTO. Al Dr. Jorge Arroyo, por su fundamental y desinteresado apoyo para. ica ció. n. poder dar inicio a la fase experimental del presente trabajo de investigación.. om un. Al personal del laboratorio de Bioquímica, Fisiología, Farmacología y Microbiología, por su apoyo en la ejecución de las distintas etapas del. yC. desarrollo del presente trabajo de investigación. En especial a la Dra.. át ica. María Ayala, Tec. Adrián Valverde, Tec. Julio Briones y Tec. Pedro. fo r. m. Ramírez.. In. Al personal del laboratorio de patología del Hospital Belén, en especial. de. a la Tec. Jovita por su apoyo y dedicación en la elaboración de las. em. as. láminas histopatológicas.. st. A mis compañeros de facultad en especial a Darwin, José, Mayra y. de. Si. Jorge, por su aliento e interés para que pueda terminar el presente. Di re cc. ió. n. trabajo de investigación.. ii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(4) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. INDICE. ica ció. n. Pág.. RESUMEN...........................................................................................1. 2.. ABSTRACT .........................................................................................2. 3.. INTRODUCCIÓN ..............................................................................3. 4.. MATERIAL Y MÉTODOS ...............................................................7. 5.. RESULTADOS ...................................................................................14. 6.. DISCUSIÓN ........................................................................................19. 7.. CONCLUSIONES...............................................................................26. 8.. RECOMENDACIONES ....................................................................27. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS ..............................................28. ió. n. 9.. de. Si. st. em. as. de. In. fo r. m. át ica. yC. om un. 1.. Di re cc. 10. ANEXOS ..............................................................................................36. iii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(5) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. RESUMEN Introducción: El cáncer de colon (CC) es una de las principales causas de mortalidad en el mundo. Los componentes de la dieta son importantes reguladores. n. en su desarrollo. Durante los últimos años se ha reportado un déficit en la ingesta. ica ció. de Omega-3, que ha demostrado poseer cierto efecto anticancerígeno. Es así que, el. om un. aceite de Sacha Inchi (ASI) podría ser un potencial anticarcinógeno debido a su elevado contenido de Omega-3. Objetivo: Evaluar el efecto protector del ASI sobre. yC. el desarrollo de CC inducido con 1,2 – Dimetilhidrazina (DMH) en ratas Holtzman.. át ica. Materiales y Métodos: Estudio experimental con 28 ratas albinas machos de la cepa Holtzman distribuidas al azar en 4 grupos: dos grupos controles expuesto solo. m. a DMH (C1) y solo ASI a 150 μL/kg/día (C2), y dos grupos experimentales. In. fo r. expuestos a DMH y ASI a 150 μL/kg/día (E1) y a 300 μL/kg/día (E2). El DMH se. de. aplicó por 8 semanas y el tiempo total de inducción fue de 22 semanas. Luego se. as. realizó el análisis patológico mediante la identificación de lesiones tumorales en los. em. intestinos. El efecto protector se evaluó en base a los porcentajes de ausencia de. st. lesión. Resultados: Se identificaron lesiones tumorales cancerosas en: dos. de. Si. especímenes del grupo C1, un espécimen del grupo E1 y dos especímenes del grupo. n. E2. No se identificaron lesiones intestinales en el grupo C2. El porcentaje de. Di re cc. ió. ausencia de lesión fue: en el grupo C1 fue de 75%, el grupo E1 de 87.5% y el grupo E2 de 75%. No encontrándose diferencias significativas (p>0.05). Conclusión: No se evidencio un efecto protector significativo del ASI sobre el desarrollo de CC inducido con DMH en ratas Holtzman, respecto al grupo control. Palabras claves: Aceite de Sacha Inchi; Cáncer de colon; 1,2-Dimetilhidrazina.. -1Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(6) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ABSTRACT Effect of Sacha Inchi oil (Plukenetia volubilis L.) on 1,2- dimethylhydrazine-. n. induced colon carcinogenesis in Holtzman rats. ica ció. Introduction: Colon cancer is one of the leading causes of death worldwide. The. om un. components of the diet are important regulators in their development. In recent years it has reported a deficit in the intake of Omega-3, which has been shown to. yC. have certain anti-cancer properties. Thus, Sacha Inchi oil (SIO) could be a potential anticarcinogen due to its high content of Omega-3. Objective: To evaluate the. át ica. preventive effect of SIO on 1,2 – dimethylhydrazine (DMH)-induced colon. m. carcinogenesis (CC) in Holtzman rats. Material and Methods: Experimental study. fo r. with 28 Holtzman male albino rats randomly distributed into 4 groups: two control. de. In. groups exposed only to DMH (C1) and only SIO at 150 uL/kg/day (C2), and two. as. experimental groups exposed to DMH and SIO at 150 uL/kg/day (E1) and at 300. em. uL/kg/day (E2). DMH was applied for 8 weeks and the total induction time was 22. st. weeks. Pathological examination was performed by identifying tumor lesions in the. Si. guts. The preventive effect was evaluated based on percentages protection (lack of. de. tumor lesions). Results: Tumor lesions were identified in: two specimens of group. Di re cc. ió. n. C1, one specimen of group E1 and two specimens of group E2. No intestinal lesions were identified in group C2. Percentage protection was: in group C1 of 75%; in group E1 of 87.5% and group E2 of 75%. No significant differences (p> 0.05). Conclusions: It was not found a significant protective effect of SIO on DMHinduced CC in Holtzman rats, compared to control group. Key words: Sacha Inchi oil; Colon cancer; 1,2-Dimethylhydrazine.. -2Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(7) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. INTRODUCCIÓN El cáncer de colon (CC), también denominado cáncer colorrectal, es una de las principales causas de morbilidad y mortalidad alrededor del. mundo,. ica ció. n. predominantemente en los países más industrializados, correspondiendo aproximadamente al 9% de los canceres diagnosticados, y siendo el tercer cáncer. om un. más común en incidencia y el cuarto en mortalidad, en ambos sexos (1). En el Perú, según el Ministerio de Salud, se ha registrado un promedio de 612 nuevos casos de. yC. CC anualmente desde el 2006. Correspondiendo al sexto cáncer más común en. át ica. hombres y al séptimo en mujeres (2). Incidencia que se incrementa significativamente pasado los 40 años de edad, y la cual está asociada. fo r. m. principalmente con la dieta, el estilo de vida y factores hereditarios (3).. de. In. Se sabe que los componentes de la dieta son factores que actúan como. as. modificadores pro y antinflamatorios en el proceso de desarrollo del CC,. em. estimándose una proporción de riesgo atribuible de cerca del 50% (4). Es así que,. st. entre los alimentos que incrementan el riesgo se encuentran aquellos abundantes en. Si. grasas, carbohidratos refinados, calorías, aminas heterocíclicas, hidrocarburos. de. aromáticos, entre otros; y entre aquellos que reducen el riesgo se encuentran los. ió. n. abundantes en fibra, calcio, folato, selenio, vitaminas, antioxidantes, entre otros.. Di re cc. Siendo los primeros, los que se encuentran en gran concentración en la dieta occidental contemporánea, caracterizada por el amplio uso de la tecnología alimentaria y la agroindustria en el refinamiento de las fuentes alimentarias (5). Dentro de los componentes de la dieta occidental, la grasa, principalmente de origen animal (compuesto por ácidos grasos saturados), ha demostrado una sugerente. -3Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(8) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. asociación con el incremento del riesgo de CC, basado en la promoción de factores pro-inflamatorios en modelos animales y resultados mixtos en ensayos clínicos aleatorizados. Siendo recomendado reducir su ingesta o reemplazarla en parte, por. n. aquella grasa de origen marino o vegetal (compuestos por ácidos grasos. ica ció. poliinsaturados) (6).. om un. Además, los grandes cambios en la dieta occidental durante los últimos 150 años, especialmente en el tipo y cantidad de grasas consumidas, han generado un déficit. yC. de ácidos grasos esenciales (Omega-3 y Omega-6), junto con un desbalance en la. át ica. proporción en que estos ácidos grasos son consumidos, resultando en una relación de aproximadamente 16/1 (Omega-6/Omega-3), que propicia un estado fisiológico. fo r. m. protrombótico y proagregatorio que promueve la patogénesis de enfermedades tales. de. In. como las cardiovasculares, las inflamatorias y autoinmunes, y el cáncer (7).. as. En relación a estos hallazgos, estudios experimentales han demostrados efectos. em. antiinflamatorios, antiagregantes y antiarrítmicos de los ácidos grasos omega-3:. st. Ácido Eicosapentanóico (EPA), Ácido Docosahexanóico (DHA) y Ácido α-. Si. Linolénico (ALA); presentes en gran cantidad en aceites de origen marino y vegetal.. de. De la misma manera, se han demostrado efectos opuestos en los ácidos grasos. ió. n. omega-6: Ácido Linoleico (LA) y Ácido Araquidónico (AA); presentes en el resto. Di re cc. de aceites comerciales y productos de origen animal (8). Por lo cual, se ha propuesto la reducción de la relación Omega-6/Omega-3 en la dieta como medio para reducir el riesgo de enfermedades como el CC. Demostrándose la reducción de marcadores de inflamación y proliferación celular rectal con el aumento en la ingesta de omega3, en especial de DHA y EPA, abundante en aceites de pescado (9).. -4Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(9) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. A nivel molecular, se han identificado los mecanismos de la actividad anticancerígena de los ácidos grasos omega-3 de cadena larga (EPA y DHA), los cuales están relacionados con la modulación de la actividad de la cicloxigenasa-2. n. (COX-2), la alteración de la dinámica de membrana y de los receptores de superficie. ica ció. celular, el incremento del estrés oxidativo, y el rol de mediadores antinflamatorios. om un. lipídicos (10). Sin embargo, la evidencia aún no es concluyente respecto al efecto anticancerígeno de ALA (precursor de EPA y DHA). Sumado a la ineficiente tasa. yC. de conversión de ALA en EPA (y posteriormente en DHA) en humanos, cuya vía. át ica. enzimática a la vez compite con la utilizada para la conversión de LA a AA (Ácidos grasos Omega-6) (11).. fo r. m. No obstante, nuevos estudios experimentales utilizando dietas con alto contenido. In. de ALA, han podido demostrar efectos antinflamatorios mediante la inhibición de. de. la producción de interleucinas (IL-1 y IL-6), factor de necrosis tumoral α (TNF-α),. as. Leucotrieno B4 (LTB4) y COX-2; además efectos antioxidantes mediante la. em. regulación de la expresión del glutation y óxido nítrico sintasa inducible (12,13).. Si. st. De esta manera, el consumo de aceites de origen vegetal (abundantes en ALA). de. constituye una alternativa para aprovechar los beneficios de los ácidos grasos. ió. n. Omega-3, caracterizados por ser ecológicamente sustentables y libre de. Di re cc. contaminantes marinos a los que pueden ser expuestos los aceites de pescado (como metales pesados, bifenilos policlorados y dioxinas) (14). Dentro de los aceites de origen vegetal con elevados niveles de ácidos grasos Omega-3, encontramos al Aceite de Sacha Inchi – “ASI” - (Plukenetia volubilis L.), planta nativa de la Amazonía peruana, cuya semilla contiene hasta un 60% de aceite, el cual está compuesto de hasta en 93% de ácidos grasos insaturados, entre -5Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(10) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. los cuales encontramos a ALA hasta en un 51%, a LA por lo menos en un 34% y al Ácido Oleico (OA), perteneciente a los ácidos grasos Omega-9, en aproximadamente un 9%. Siendo caracterizado como un aceite con elevada. n. concentración de ALA (Omega-3), superior a muchos aceites vegetales en donde. ica ció. predomina LA (Omega-6) y similar al aporte de ácidos grasos del aceite de linaza.. om un. Lo cual, sumado a la presencia de compuestos bioactivos antioxidantes, a predominio de γ- y δ-tocoferol (Vitamina E) y β-caroteno (Pro-vitamina A), hacen. yC. del ASI una importante fuente de fitoquímicos promotores de la salud (15,16).. át ica. Es así que, diversos modelos experimentales de CC en animales se han desarrollado con la finalidad de poner a prueba el efecto de compuestos específicos en la dieta.. fo r. m. Siendo los modelos más frecuentes, los químicamente inducidos con 1,2 –. In. Dimetilhidrazina (DMH) y Azoximetano (AOM) en roedores, debido a que. de. comparten muchas similitudes con el CC esporádico en humanos y permiten la. as. evaluación, bajo condiciones experimentales controladas, de agentes preventivos. em. del proceso de desarrollo del CC. Procedimiento necesario antes de su. Si. st. extrapolación en ensayos clínicos en humanos (17).. de. Debido a que no existen muchas investigaciones sobre el efecto de aceites con. ió. n. elevados niveles de ácidos grasos Omega-3 de origen vegetal en el desarrollo de. Di re cc. CC, y siendo los más representativos aquellos realizados utilizando el aceite de linaza (Linum usitatissimum), los cuales aún no han demostrado resultados concluyentes (18). Se plantea la siguiente investigación para evidenciar si el ASI tiene un efecto protector sobre el desarrollo de CC inducido con DMH en ratas Holtzman.. -6Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(11) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. MATERIAL Y MÉTODOS Diseño y población de estudio. n. Estudio experimental, realizado en ratas albinas machos de la cepa Holtzman, de. ica ció. entre 3 a 3.5 meses de edad y de 300 a 350 g de peso, procedentes del bioterio del. om un. Instituto Nacional de Salud del Perú (Anexo 01).. Los especímenes fueron mantenidos en un ambiente del Laboratorio de Bioquímica. yC. de la Facultad de Medicina de la Universidad Nacional de Trujillo, a una. át ica. temperatura de entre 23 a 27ºC, sometidos a ciclos de 12 horas de luz y oscuridad, y alimentados con una dieta a base de alimento balanceado para roedores. (Anexo 02).. as. de. Determinación de la muestra. In. fo r. m. procedente de la Universidad Agraria La Molina (Lima) y de agua ad libitum. em. El tamaño de la muestra se determinó aplicando la fórmula para estudios de. st. estimación de valores medios poblaciones (19), con un nivel de confianza de 95%,. Si. poder de prueba de 90%, proporción en grupo control de 1.94 𝑥 10−4 (según el. de. programa de Vigilancia y Epidemiología del Instituto de Nacional de cáncer) (20),. ió. n. y proporción en grupo experimental de 0.933 (según el protocolo de inducción de. Di re cc. CC de Gigola et al.) (21). Obteniéndose una muestra mínima de 7 especímenes por grupo, a lo cual se agregó un margen de mortalidad de 1 espécimen, utilizándose un total de 8 especímenes por grupo de experimentación y la mitad (4 especímenes) en el grupo control negativo, de acuerdo a las recomendaciones de la “Guía para el cuidado y uso de animales de laboratorio” del Consejo Nacional de Investigación de los Estados Unidos (22). -7-. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(12) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Grupos de experimentación Se formaron cuatro grupos compuestos por un grupo control positivo (C1), un grupo control negativo (C2) y dos grupos experimentales (E1 y E2), los cuales recibieron. n. dos dosis de ASI y variable exposición carcinogénica, tal como se describe en la. ica ció. Tabla 1.. Denominación. Nro de. Exposición. Especímenes. carcinogénica. C1. “DMH”. 8. C2. “ASI*150”. 4. E1. “DMH+ASI*150”. 8. E2. “DMH+ASI*300”. yC. Grupo. om un. Tabla 1. Distribución de los 28 especímenes de experimentación.. fo r. m. át ica. DMH. Ninguna. Ninguna. 150 μL /kg /día. DMH. 150 μL /kg /día. DMH. 300 μL /kg /día. In. 8. Dosis de ASI. as. de. DMH: 1,2 – Dimetilhidrazina; ASI: Aceite de Sacha Inchi.. em. Definiciones operacionales. Si. st. Aceite de Sacha Inchi (ASI). de. Aceite obtenido a partir de la semilla de Sacha Inchi (Plukenetia volubilis L.),. n. planta perenne y oleaginosa perteneciente a la familia Euphorbiaceae, cuyo. Di re cc. ió. nombre común es “maní del monte”, “sacha maní” o “maní del inca”, crece en la selva amazónica peruana entre los 200 a 1500 m. de altitud, y es utilizado desde tiempos ancestrales por las poblaciones originarias de estas regiones. Este aceite ha sido objeto de diversas investigaciones debido a sus altos contenidos de ácidos grasos esenciales (15,23,24).. -8Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(13) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. En la presente investigación se utilizó el aceite Inca Inchi®, aceite de semillas seleccionadas de Sacha Inchi procesadas por la empresa Agroindustrias Amazónicas, con registro sanitario C1304308N/UIARAA, con una composición. n. especifica de ácidos grasos Omega-3 de 48.61%, Omega-6 de 36.80% y Omega-. ica ció. 9 de 8.28%, además de Vitamina A de 681μg y Vitamina E de 17mg por cada. om un. 100gr. Componentes que ya han sido puestos a prueba en una investigación local y una extranjera (25–27).. yC. 1,2 – Dimetilhidrazina (DMH). át ica. Es un agente alquilante ampliamente utilizado en la inducción de la carcinogénesis de colon en roedores. Tras ser administrado, se metaboliza en el. fo r. m. hígado hacia formas intermedias de AOM y metilazoximetanol (MAM), y luego. In. al ion metildiazonio (IM). Posteriormente el MAM puede ser excretado hacia la. de. bilis y transportado hacia el colon, o ingresar directamente a las células. as. epiteliales del colon desde la circulación sanguínea. Es así que el IM, ion. em. altamente reactivo, produce la metilación en la posición O6 o N7 de la guanina. Si. st. del ADN de las células epiteliales, lo cual produce activación de la apoptosis. de. celular, incremento de la proliferación y de las mutaciones en el epitelio del. ió. n. colon. Cambios responsables de la aparición de tumores intestinales y. Di re cc. extraintestinales (17,21,28). Cáncer de colon (CC) Tumor maligno localizado en el colon, originado predominantemente del epitelio glandular (adenocarcinoma), caracterizado por penetrar la capa muscular de la mucosa y por poseer grados variables de diferenciación.. -9Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(14) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Según la Organización Mundial de la Salud (OMS) se clasifican por su tipo histológico en: adenocarcinoma (de patrón tubular, tubulovelloso o velloso), adenocarcinoma mucinoso (si más del 50% del tumor está compuesto de mucina. n. extracelular), carcinoma de células en añillo de sello (si más del 50% está. ica ció. compuesto por células con prominente mucina intracitoplasmática), carcinoma. om un. indiferenciado (si no se distinguen estructuras glandulares), y otros menos frecuentes como carcinoma de células pequeñas, carcinoma de células. yC. escamosas y carcinoma medular. Junto a los cuales, se describen lesiones. át ica. precursoras al adenocarcinoma como los focos de criptas aberrantes (FCA) y el adenoma (pólipo adenomatoso), y lesiones reactivas (benignas) como los pólipos. fo r. m. inflamatorios y pólipos linfoides (29,30).. de. In. Procedimientos. as. El proceso experimental tuvo una duración total de 26 semanas y estuvo compuesto. em. por 4 fases que se resumen en la Figura 1. Tras lo cual se prosiguió con el análisis. Si. st. patológico. Procedimientos que se describen a continuación.. Di re cc. ió. n. Grupos. de. Figura 1. Esquema del diseño de experimentación aplicado en el presente estudio. Todos. Fases / Semanas. 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26. Alimentacion con dieta balanceada. 26 Semanas. C2 (ASI*150 ), Administración de Aceite de E1 (DMH+ASI*150 ); Sacha Inchi (150; 300μL/kg /día) E2 (DMH+ASI*300 ) C1 (DMH ), E1 (DMH+ASI*150 ), E2 (DMH+ASI*300 ). 23 Semanas. Exposición a 1,2 dimetilhidrazina. 8 Semanas. C1 (DMH ), E1 (DMH+ASI*150 ), Desarrollo de cáncer de colon E2 (DMH+ASI*300 ). 22 Semanas. - 10 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(15) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Alimentación con dieta balanceada Los 28 especímenes fueron distribuidos al azar en los cuatro grupos descritos en la Tabla 1, a continuación, se inició una dieta a base de alimento balanceado y. ica ció. n. agua de mesa, en una cantidad aproximada al 10% de su peso por día. Administración de ASI. om un. Transcurrido 3 semanas, a los especímenes de los grupos C2 y E1 se le adicionó a su dieta: 150 μL /kg /día de ASI (Inca Inchi®), dosis media recomendada por. yC. Vicuña et al. (26), administrado por vía oral, utilizando una micropipeta. át ica. automática, hasta el final de la fase experimental (un total de 23 semanas). De la misma manera, a los especímenes del grupo E2, se le adicionó a su dieta el. fo r. m. doble de dosis (300 μL /kg /día) de ASI, cantidad muy por debajo de la dosis. In. letal media descrita por Gorriti et al. (31), utilizando los mismos procedimientos. as. de. y durante el mismo periodo de tiempo.. em. Exposición a DMH. st. Transcurrido 10 días de haber iniciado la administración de ASI, se inició con la. Si. exposición a DMH a los especímenes de los grupos C1, E1 y E2, mediante la. de. inyección por vía intramuscular de una dosis de 20 mg/kg semanal durante un. ió. n. total de 8 semanas, de acuerdo al protocolo descrito por Gigola et al. (21).. Di re cc. Para lo cual, se diluyó el Diclorhidrato de N,N' - Dimetilhidrazina (al 98%, manufacturado por Sigma-Aldrich Química) en solución fisiológica, se estabilizó con ácido etilendiaminotetracético (EDTA) y se llevó a pH 7.0 con una solución de bicarbonato de sodio 1M. Obteniéndose una concentración de 10 mg de DMH/ 1 ml de solución.. - 11 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(16) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Desarrollo de CC Transcurrido las 8 semanas, se realizó el seguimiento diario de la evolución del estado general y control semanal del peso de todos los especímenes durante 14. n. semanas, para completar un tiempo total de inducción de 22 semanas, tiempo en. ica ció. el que se esperó el efecto de la DMH sobre el epitelio del colon. Tras lo cual se. om un. finalizó la fase experimental. Análisis patológico. yC. Finalizado el proceso experimental, los especímenes fueron sacrificados. át ica. mediante el protocolo de eutanasia con Pentobarbital sódico (Halatal, Montana SA), común y aceptablemente utilizado en roedores, mediante la inyección. fo r. m. intraperitoneal de una dosis de 200 mg/kg (32).. In. Tras lo cual, se procedió con la disección de la pared abdominal y extracción del. de. tejido intestinal (intestino delgado e intestino grueso). Los cuales fueron. as. almacenados y fijados en frascos con una solución de formol al 10%, durante un. em. periodo de 4 semanas.. Si. st. Para el análisis macroscópico, se abrió el intestino mediante una incisión. de. longitudinal, para proceder a identificar lesiones tumorales macroscópicas. ió. n. (mayores de 5 mm de diámetro) denominadas como lesiones en placa múltiples. Di re cc. (LPM), descritas como lesiones de la mucosa intestinal en forma de placas o nódulos y consideradas como centros iniciales de carcinogénesis intestinal (33). Además, estos hallazgos fueron reportados según su ubicación para lo cual se dividió el intestino en intestino delgado proximal (IDP) y distal (IDD), e intestino grueso proximal (IGP): ciego y colon proximal, y distal (IGD): colon. - 12 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(17) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. distal y recto. Luego, las LPM fueron recortadas, incluidas en parafina y seccionadas en cortes de 5 μm, para ser teñidas con hematoxilina y eosina. Para el análisis microscópico, se utilizó un microscopio óptico para observar a. de. lesiones. tumorales. cancerosas. asociadas. al. CC,. ica ció. histopatológica. n. 20x y 40x las láminas patológicas de las LPM, identificando la presencia. om un. clasificándolas de acuerdo a los tipos de tumores de colon y recto descritos por la OMS (29).. yC. Aspectos éticos. át ica. Se siguieron las normas internacionales sobre ética en el manejo de animales de experimentación especificadas en la “Guía para el cuidado y uso de animales de. fo r. m. laboratorio” del Consejo Nacional de Investigación de los Estados Unidos (22).. de. In. Análisis de datos. as. Para evaluar el efecto protector del ASI sobre el desarrollo de CC, se utilizó el. em. análisis de tablas de contingencia entre los grupos de especímenes expuestos DMH. st. y los “porcentajes de ausencia de lesión” (especímenes que no desarrollaron. Si. lesiones tumorales / número de especímenes del grupo) en el grupo control positivo. de. (C1) – “porcentaje de fallo” - y los grupos experimentales alimentados con ASI (E1. ió. n. y E2) “porcentaje de protección”. Además, se aplicó la prueba de chi-cuadrado para. Di re cc. evaluar diferencias de estos porcentajes. Los programas utilizados para el análisis de datos fueron el paquete estadístico SPSS (Statistical Product and Service Solutions) versión 20 y Microsoft® Excel versión 2013.. - 13 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(18) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. RESULTADOS Durante el proceso experimental se registró semanalmente la ganancia promedio de peso de cada grupo de experimentación. Al finalizar las 22 semanas de inducción. n. de CC la ganancia total fue en orden decreciente: 101.50 g (± 27.18) en el grupo E2. ica ció. (“DMH+ASI*300”), 99.37 g (± 46.24) en el grupo C1 (“DMH”), 97.50 g (± 50.09). om un. en el grupo C2 (“ASI*150”) y 95.12 g (± 32.62) en el grupo E1 (“DMH+ASI*150”). Tal como se describe en la Figura 2. Sin embargo, no se encontró diferencias. yC. significativas entre los grupos (p = 0.989).. át ica. Figura 2. Variación semanal de pesos de los especímenes según grupo de. m. experimentación.. In. fo r. 140. de. 120. as em. 80 60. st. Pesos (gr.). 100. de. Si. 40. n. 20. Di re cc. ió. 0. 1. 2. DMH. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22. Semanas ASI*150. DMH + ASI*150. DMH + ASI*300. DMH: 1,2 – Dimetilhidrazina; ASI: Aceite de Sacha Inchi y dosis en μL/kg/día. No se encontraron diferencias significativas a la semana 22 (p = 0.989) Fuente: Pesos registrados semanalmente por investigador. - 14 -. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(19) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Figura 3. Lesiones en placas múltiples identificadas en el análisis macroscópico de. yC. om un. ica ció. n. los intestinos de los especímenes de experimentación expuestos a DMH.. (b). as. de. In. fo r. m. át ica. (a). (d). Di re cc. ió. n. de. Si. st. em. (c). (e). (f). Descripción: Muestras intestinales con lesiones en placas múltiples de diferentes formas y tamaños en (a) y (b) Intestino delgado proximal, (c) Intestino delgado distal, (d) Ciego, (e) Intestino grueso proximal y (f) Intestino grueso distal.. - 15 -. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(20) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Tras el análisis microscópico de las LPM de los intestinos de los 28 especímenes, se identificaron lesiones tumorales cancerosas en dos especímenes del grupo C1, un espécimen del grupo E1 y dos especímenes del grupo E2. Adicionalmente, se. n. identificó una lesión reactiva (benigna) en un espécimen del grupo E1. No se. ica ció. identificaron lesiones intestinales en el grupo C2. Estos hallazgos se describen en la. om un. Tabla 2 y Figura 4; y finalmente resumen en la Tabla 3.. Tabla 2. Hallazgos microscópicos en las muestras intestinales de los especímenes. DMH. In. C1. fo r. “2”. Ubicación Hallazgo patológico IGP. Adenocarcinoma. IGD. Adenocarcinoma. IDP*. Adenocarcinoma. IGP. Adenocarcinoma. m. espécimen. át ica. Nro. de. Grupo Denominación. yC. de experimentación.. as. de. “3”. Si. E1. -. -. +. st. DMH. em. ASI·150 μL/kg/día. C2. de n. Di re cc. ió. E2. +. ASI·300 μL/kg/día. IDP*. Adenocarcinoma mucinoso. IGP. Pólipo Linfoide. “8”. ASI·150 μL/kg/día DMH. No lesiones tumorales. “7”. IGP. Carcinoma de células en anillo de sello. “8”. IDP*. Adenocarcinoma mucinoso. DMH: 1,2 – Dimetilhidrazina; ASI·: Aceite de Sacha Inchi y dosis; IGP: Intestino Grueso Proximal; IGD: Intestino Grueso Distal; IDP: Intestino Delgado Proximal. *Metástasis Fuente: Análisis laminas patológicas realizado por investigador y coasesor.. - 16 -. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(21) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Figura 4. Tipos histológicos de lesiones tumorales cancerosas encontradas en los. yC. om un. ica ció. n. intestinos de los especímenes de experimentación. (b). em. (d). Di re cc. ió. n. de. Si. st. (c). as. de. In. fo r. m. át ica. (a). (e). (f). Descripción: Cortes representativos de lesiones intestinales con coloración H&E. (a) Intestino normal (20x), (b) Adenocarcinoma (20x), (c) Adenocarcinoma mucinoso (20x), (d) Pólipo linfoide (20x), (e) Carcinoma de células en anillo de sello (20x) y (f) Células en anillo de sello (40x).. - 17 -. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(22) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Tabla 3. Frecuencia y porcentaje de lesión y ausencia de lesión tumoral intestinal en los especímenes de experimentación expuestos a DMH. Lesionados Denominación n. %. n. %. DMH. 2. 25.0. E1. DMH + ASI·150 uL/kg/día. 1. 12.5. E2. DMH + ASI·300 uL/kg/día. 2. 25.0. 6. 75.0. 7. 87.5. om un. C1. ica ció. n. Grupo. No lesionados*. 6. 75.0. yC. DMH: 1,2 – Dimetilhidrazina; ASI·: Aceite de Sacha Inchi y dosis.. Di re cc. ió. n. de. Si. st. em. as. de. In. fo r. m. át ica. * No se encontraron diferencias significativas (p=0.777).. - 18 -. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(23) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. DISCUSIÓN El presente trabajo de investigación tuvo como finalidad evaluar la presencia del efecto protector del ASI sobre el desarrollo de CC inducido por DMH en ratas. n. Holtzman, para lo cual se utilizaron dos grupos controles: C1 y C2 (positivo y. om un. dos dosis de ASI (150 y 300 μL/kg/día, respectivamente).. ica ció. negativo, respectivamente), y dos grupos experimentales: E1 y E2, alimentados con. El efecto protector se evaluó en base a la incidencia de lesiones tumorales. yC. cancerosas en los intestinos de los especímenes, lo cual se analizó junto a otros. át ica. parámetros cuantitativos y cualitativos, como la ganancia de peso, la efectividad del modelo aplicado, el tipo de lesión histopatológica, la localización anatómica y la. fo r. m. diseminación tumoral.. In. Respecto a la ganancia de pesos tras finalizar el proceso experimental, no se. de. encontraron diferencias significativas en el incremento neto del peso de todos los. as. grupos. Este hallazgo fue similar al de Hijová et al. (34), al encontrar similar. em. variación en el peso de ratas sometidas a un modelo experimental de CC y. Si. st. alimentadas con diversas sustancias bioactivas como el aceite de linaza, aceite con. de. similar concentración de Omega-3 que el ASI (15). No obstante, se evidenciaron. ió. n. valores relativamente superiores de ganancia de peso en el grupo E2, el cual recibió. Di re cc. la mayor administración de ASI. Contrastándose con lo encontrado por Sarotra et al. (35), al encontrar un incremento significativo respecto al grupo control en la ganancia de peso de ratas sometidas a un modelo experimental de CC y alimentadas con una combinación de aceite de pescado y aceite de maíz, abundantes en Omega3. Lo cual refleja el probable efecto protector que podrían tener los aceites con Omega-3 sobre el síndrome de anorexia-caquexia desarrollado en los canceres. - 19 -. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(24) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. avanzados, el cual se ha investigado principalmente con la suplementación con EPA, sin obtener aun resultados concluyentes (10). Efecto que podría no haberse apreciado en su totalidad debido a que se utilizó el tiempo mínimo necesario para. ica ció. n. el desarrollo de CC. Respecto a la efectividad del modelo experimental de CC aplicado, se obtuvo solo. om un. un 25% de incidencia de CC en el grupo C1 expuesto solo a DMH, grupo en el cual se quiso replicar el protocolo descrito por Gigola et al. (21), en el que se describe. yC. un 93.3% de incidencia de CC con la misma dosis de DMH aplicada durante 8. át ica. semanas en ratas Wistar-Lewis y tras 24 semanas de inducción, el cual fue ajustado utilizando ratas Holtzman y con un tiempo de inducción total de 22 semanas.. fo r. m. Este hallazgo evidencia la dependencia de largos periodos de inducción. In. carcinogénica para poder evidenciar una alta efectividad en los modelos de CC. de. experimentales. Sin embargo, este tipo de limitación encontrada en la efectividad a. as. corto plazo, puede atribuirse a un análisis patológico limitado a la identificación. em. lesiones tumorales cancerosas tardías con cierto grado de diferenciación como el. Si. st. adenocarcinoma y demás tipos tumorales identificados. Efectividad que pudo. de. incrementarse con un análisis basados en la cuantificación de las LPM (36),. ió. n. identificación de adenomas con altos grados de displasia (37) y otras lesiones pre-. Di re cc. neoplásicas (17), que usualmente se identifican tras 8 a 12 semanas de inducción carcinogénica, entre los cuales se describen a los FCA (con Azul de metileno), FCA sin mucina (con Hierro Diamina - Azul Alcián) y Criptas con acumulo de β-catenina (con tinción inmunohistoquimica), cuya implementación resultaría ser de gran utilidad en los trabajos de investigación referentes a agentes preventivos de origen. - 20 -. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(25) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. vegetal (38). No obstante, estos métodos podrían asociarse a un incremento significativo de los costos. Cabe mencionar, que otros factores como la dosis y vía de administración de la. n. DMH, y la cepa/edad de los especímenes utilizados pudieron haber influido en la. ica ció. efectividad obtenida, es así que tal como describen Perše et al. (28), existen diversos. om un. protocolos de inducción de CC basados en distintas dosis de DMH (entre 15 a 40 mg/kg), administradas por diferentes vías (subcutánea, intraperitoneal, oral),. yC. utilizando diversas cepas de ratas (Fisher, Sprague-Dawely, Wistar) y con. át ica. diferentes edades iniciales (de 6 a 10 semanas). Factores que influyen directamente en el porcentaje de inducción finalmente obtenido.. fo r. m. Cuantitativamente, respecto a la incidencia de lesiones tumorales cancerosas en los. In. intestinos de los especímenes, comparando el porcentaje de ausencia de lesión del. de. grupo control positivo C1 (expuesto solo a DMH) versus los grupos experimentales. as. E1 y E2 (alimentados con ASI), se pudo evidenciar cierto efecto protector no. em. significativo en el grupo E1 que recibió la dosis de 150 μL/kg/día y ningún efecto. Si. st. sobre el grupo E2 con la dosis de 300 μL/kg/día.. de. Estos hallazgos se correlacionan en menor proporción con lo planteado por Ren et. ió. n. al. (39), Zha et al. (40) y Hassan et al. (13), referente al potencial efecto. Di re cc. antiinflamatorio del ALA (presente en el 48% del ASI utilizado), mediante la inhibición de la expresión del Factor Nuclear κB (NF-κB) por medio la inhibición de la translocación de la proteína p65 y de la degradación/fosforilación del factor inhibidor κBα (I-κBα), además de la disminución de proteínas quinasas activadas por mitógenos (MAPK) tales como ERK, JNK y p38, implicadas en la respuesta a las citoquinas y al estrés celular. Resultando en una contrastable disminución de la. - 21 -. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(26) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. producción de IL-6, IL-1β y TNF-α. Efecto que estaría implicado en la inhibición de las vías asociadas a factores crecimiento dependientes de la activación de la señalización inflamatoria, las cuales son responsables del desarrollo de lesiones. n. adenomatosas precursoras del CC (41).. ica ció. Sin embargo, estos hallazgos parecen contrastarse en mayor proporción con lo. om un. planteado por diversos autores (10,42–45), respecto al efecto anticancerígeno experimental de los ácidos grasos Omega-3, restringido a los de cadena larga: EPA. yC. y DHA (no presentes en el ASI), efecto atribuido a: La modulación de la actividad. át ica. de la COX-2, mediado por EPA al disminuir la formación de prostaglandinas de la serie-2 (PGE2) a favor de la serie-3 (PGE3) y por DHA al unirse e inhibir a la COX-. m. 2; La alteración de la dinámica de membrana y receptores celulares implicados en. In. fo r. la regulación de la proliferación y apoptosis; La alteración del equilibrio REDOX. de. e incremento del estrés oxidativo, resultando en un incremento intracelular de. as. especies reactivas de oxigeno (ROS) que propician la apoptosis; y La producción. em. de mediadores lipídicos antiinflamatorios derivados de EPA como la resolvina E1,. st. y de DHA como la resolvina D, las protectinas y las maresinas. Efectos que han. de. Si. podido contrastarse en estudios experimentales animales y humanos de manera más. n. concluyente a diferencia que los atribuidos al ALA. El cual, si bien puede ser. Di re cc. ió. convertido mediante elongación y desaturación a EPA y luego a DHA, mediante la vía de la Δ-6 desaturasa; no obstante, la eficiencia de esta conversión en mamíferos es muy baja (cerca de 0.2%) y la vía enzimática utilizada es compartida de manera competitiva con la conversión de LA a AA. Es así, el ALA es principalmente utilizado para proveer energía mediante la β-oxidación (11,12,44). Lo cual permite. - 22 -. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(27) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. comprender el nulo o poco efecto anticancerígeno evidenciado con la alimentación con ASI, al proveer principalmente ALA a los especímenes. Además, otro de los componentes del ASI que pudo haber influido en el efecto. n. evidenciado, fue el LA (presente en el 36% del ASI utilizado) que ha demostrado. ica ció. poseer efectos proinflamatorios mediados por su conversión a AA y su posterior. om un. metabolismo a PGE2, LTB4 y derivados del ácido Epoxieicosatrienoico (11,12EET), reflejados en el aumento de citoquinas inflamatorias como el TNF-α, IL-1 e. yC. IL-6 (8). Efecto que evidenciaría un efecto opuesto al de los ácidos grasos Omega-. át ica. 3 y que podrían interferir con su efecto anticancerígeno, tal como parece evidenciar nuestros resultados.. m. Por otro lado, estos hallazgos podrían estar en relación a la administración de dosis. In. fo r. de ASI no adecuadamente suficientes para alcanzar un efecto protector. de. (anticancerígeno). Debido a los pocos los estudios que se han realizado para evaluar. as. el efecto inmunomodulatorio del ASI, entre los cuales, investigaciones locales de. em. Mesía et. al (46), refieren mayor un porcentaje de actividad antiinflamatoria a dosis. st. de 200 μL/kg; y de Pinedo (47), refiere un mayor porcentaje de activación de la. de. Si. respuesta inmune a dosis de 400 μL/kg. Lo que parece concordar con lo afirmado. n. por Valenzuela et. al (48), respecto a que aún no están establecidas las dosis. Di re cc. ió. específicas y los tiempos de administración de las diversas fuentes de Omega-3 disponibles. Lo cual se suma al posible margen de perdida de ASI asociado a la vía de administración utilizada, describiéndose el uso alternativo de sondas oroesofágicas y orogástricas en investigaciones similares (49,50). Cualitativamente, respecto al tipo histopatológico de las lesiones tumorales cancerosas identificadas, se pudo evidenciar lesiones solo del tipo adenocarcinoma. - 23 -. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(28) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. en el grupo control expuesto solo a DMH (Grupo C1), tipo de lesión que suele aparecer en estadios iniciales de CC y que preservan cierto grado de diferenciación celular; a diferencia de las lesiones encontradas en los grupos experimentales. n. alimentados con ASI, en los cuales se evidenciaron lesiones del tipo. ica ció. adenocarcinoma mucinoso (Grupo E1) y carcinoma de células en anillo en sello. om un. (Grupo E2), tipo de lesiones poco diferenciadas que aparecen de manera tardía en el CC, están asociadas a altos niveles de inestabilidad de microsatélites y tienen. yC. mayor propensión a desarrollar metástasis (17,30,51).. át ica. Estos hallazgos corroboran el poco o nulo efecto protector evidenciado tras la administración de dos dosis de ASI, y que por el contrario sugieren cierto efecto. m. potenciador de la carcinogénesis. Lo cual podría relacionarse con el efecto. In. fo r. proinflamatorio de los ácidos grasos Omega-6, previamente descrito.. de. Topográficamente, respecto a la localización anatómica intestinal de las lesiones. as. tumorales cancerosas identificadas, se pudo evidenciar que en por lo menos un. em. espécimen de todos los grupos expuestos a DMH (Grupos C1, E1 y E2) se. Si. st. desarrollaron lesiones tumorales ubicada en la región proximal del intestino grueso.. de. Localización anatómica que suele afectarse de manera tardía en los modelos de CC. ió. n. experimentales y se caracterizan por poseer lesiones con menor grado de. Di re cc. diferenciación y mayor inestabilidad de microsatélites, cuyo mecanismo de origen se ha relacionado al desarrollo de FCA inducidos por la activación del oncogén KRas. Es así que usualmente se presentan lesiones en colon proximal luego de una media de 22 semanas de inducción con DMH (17,28,52). Estos hallazgos se correlacionan con la potencia inductora de CC de la DMH, que se evidencio en el desarrollo de lesiones tumorales en los grupos que recibieron este. - 24 -. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(29) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. carcinógeno, cuya localización en el colon proximal seria compatibles con estadios tardíos en el proceso de desarrollo de CC experimental. Lo cual concuerda cronológicamente con las 22 semanas de tiempo de inducción utilizadas en la. n. presenta investigación, compatibles con el tiempo medio descrito para la aparición. ica ció. de lesiones en esta parte del colon. Además, lo evidenciado sugiere una vez más la. om un. ausencia de un efecto protector evidenciable con las dosis de ASI utilizadas, al no haber podido evidenciar indicios de limitación de la progresión del desarrollo de. yC. CC.. át ica. Respecto a la diseminación tumoral, en relación a las lesiones tumorales metastásicas extracolónicas identificadas, se pudo evidenciar que por lo menos un. lesiones. tumorales. en. el. intestino. delgado,. tales. como. In. desarrollaron. fo r. m. espécimen de todos los grupos expuestos a DMH (Grupos C1, E1 y E2) se. de. adenocarcinoma y adenocarcinoma mucinoso. Habiéndose encontrado incluso una. as. lesión tumoral macroscópica en la región proximal del intestino delgado de un. em. espécimen del grupo que recibió ASI a 150 μL/kg/día.. Si. st. Estos hallazgos evidenciarían el potencial de diseminación por contigüidad hacia el. de. intestino delgado desarrollado en el modelo de CC aplicado, lo cual se asocia con. ió. n. estadios avanzados en la progresión del CC. Pero que no corresponde a los sitios de. Di re cc. metástasis más habituales (en roedores) como los ganglios linfáticos y el peritoneo (17,28,53). Sitios que no fueron objeto de estudio en la presente investigación. Finalmente, lo descrito sugeriría una vez más el potencial inductor de la DMH y la poca evidencia de un efecto protector del ASI en las dosis suministradas.. - 25 -. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(30) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. CONCLUSIONES En conclusión, el ASI no logró evidenciar un efecto protector significativo sobre el desarrollo de CC inducido con DMH en ratas Holtzman.. ica ció. el desarrollo de CC inducido con DMH en ratas Holtzman.. n. El ASI a dosis de 150 μL/kg/día evidenció un efecto protector no significativo sobre. om un. El ASI a dosis de 300 μL/kg/día no evidenció un efecto protector sobre el desarrollo. Di re cc. ió. n. de. Si. st. em. as. de. In. fo r. m. át ica. yC. de CC inducido con DMH en ratas Holtzman.. - 26 -. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(31) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. RECOMENDACIONES Realizar trabajo de investigación similares que permitan comprender mejor los efectos del ASI sobre el desarrollo de CC, teniendo en cuenta lo siguiente: Utilizar modelos experimentales de CC con dosis mayores de DMH y/o. ica ció. n. . periodos de inducción más prolongados que permitan garantizar una efectividad. om un. óptima. Teniendo como alternativa el uso de carcinógenos más eficientes como el AOM.. Utilizar diferentes dosis de ASI y vías de administración alternativas que. yC. . át ica. permitan asegurar la correcta administración de ASI, para poder evidenciar fehacientemente los efectos de sus componentes.. m. Utilizar otros métodos de identificación tumoral que permitan evaluar de. fo r. . In. manera fidedigna el efecto de la administración de ASI, tales como lesiones pre-. Realizar de manera complementaria la medición (dosaje) sistemática de. as. . de. neoplásicas y otros marcadores tumorales tempranos.. em. marcadores inflamatorios como TNF-α, IL-1 e IL-6, que permitan evaluar el. Di re cc. ió. n. de. Si. st. efecto de la administración de ASI a nivel celular.. - 27 -. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(32) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS 1.. Haggar FA, Boushey RP. Colorectal cancer epidemiology: incidence, mortality, survival, and risk factors. Clinics in colon and rectal surgery.. 2.. ica ció. n. 2009;22(4):191. Ramos WC, Venegas DR. Análisis de la Situación del Cáncer en el Perú, 2013.. Winawer SJ. Colorectal cancer screening. Best Practice & Research Clinical. 4.. át ica. Gastroenterology. 2007;21(6):1031–48.. yC. 3.. om un. Lima: Ministerio de Salud, Dirección General de Epidemiología. 2013;. Huxley RR, Ansary-Moghaddam A, Clifton P, Czernichow S, Parr CL,. fo r. m. Woodward M. The impact of dietary and lifestyle risk factors on risk of. In. colorectal cancer: a quantitative overview of the epidemiological evidence.. Campos FG, Logullo Waitzberg AG, Kiss DR, Waitzberg DL, Habr-Gama A,. as. 5.. de. International journal of cancer. 2009;125(1):171–80.. em. Gama-Rodrigues J. Diet and colorectal cancer: current evidence for etiology. Si. st. and prevention. Nutr Hosp. 2005;20(1):18–25. Vargas AJ, Thompson PA. Diet and nutrient factors in colorectal cancer risk.. de. 6.. Di re cc. ió. n. Nutrition in Clinical Practice. 2012;27(5):613–23. 7.. Simopoulos AP. Evolutionary aspects of diet, the omega-6/omega-3 ratio and genetic variation: nutritional implications for chronic diseases. Biomedicine & Pharmacotherapy. 2006;60(9):502–7.. 8.. Schmitz G, Ecker J. The opposing effects of n- 3 and n- 6 fatty acids. Progress in lipid research. 2008;47(2):147–55.. - 28 -. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

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(35) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 23. Zegarra CM, Solís VES, Del Castillo D, Vásquez-Ocmín G. Caracterización química de nueve ecotipos de Plukenetia volubilis L. de los departamentos de Loreto y San Martin. Folia Amazónica. 2008;17(1-2):39–45.. ica ció. n. 24. Chirinos R, Zuloeta G, Pedreschi R, Mignolet E, Larondelle Y, Campos D. Sacha inchi (Plukenetia volubilis): a seed source of polyunsaturated fatty acids,. om un. tocopherols, phytosterols, phenolic compounds and antioxidant capacity. Food. yC. chemistry. 2013;141(3):1732–9.. 25. Proyecto-Omega. El Inca Inchi. Agroindustrias Amazónicas Lima–Perú.. át ica. 2002;6.. fo r. m. 26. Vicuña Ríos A, Izquierdo Henríquez EJ, Huamán Saavedra JJ. Gemfibrozilo. In. versus aceite de Sacha Inchi en la reducción de niveles de triglicéridos séricos. de. en Rattus rattus var albinus. Acta Médica Peruana. 2012;29(2):85–8.. as. 27. Gonzalez-Aspajo G, Belkhelfa H, Haddioui-Hbabi L, Bourdy G, Deharo E.. em. Sacha Inchi Oil (Plukenetia volubilis L.), effect on adherence of Staphylococus. Si. st. aureus to human skin explant and keratinocytes in vitro. Journal of. de. ethnopharmacology. 2015;171:330–4.. ió. n. 28. Perše M, Cerar A. The dimethylhydrazine induced colorectal tumours in rat-. Di re cc. experimental colorectal carcinogenesis. Radiol. 2005;39(1):61–70.. 29. Hamilton SR, Aaltonen LA. WHO Classification of Tumours. Pathology and genetics of tumours of the digestive system. Vol. 48. Lyon: IARC press; 2000.. - 31 -. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

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(39) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 49. Justil H, Arroyo J, Valencia J. Extracto etanólico de Baccharis genistelloides (carqueja) sobre el cáncer de colon inducido con 1, 2-dimetilhidrazina en ratas. An Fac Med(Perú). 2010;71(2):88–96.. ica ció. n. 50. Córdova M, Cotillo A, Cózar J, Cruz S, Espinoza D, Félix L, et al. Evaluación de la toxicidad aguda y la acción hipolipemiante del aceite de Plukenetia. om un. volúbilis, Sacha Inchi. Horizonte Médico. 2006;6(1):45–52.. yC. 51. Negrette S, Montenegro M, Borda JT, Burna AN. Lesiones neoplásicas tempranas (LNT) y tumores del colon inducidos con 1, 2-Dimetilhidrazina. át ica. (DMH) en ratas. Rev Vet. 2000;1:1–4.. fo r. m. 52. Rosenberg DW, Giardina C, Tanaka T. Mouse models for the study of colon. In. carcinogenesis. Carcinogenesis. 2009;30(2):183–96.. de. 53. Tanaka T. Colorectal carcinogenesis: review of human and experimental. Di re cc. ió. n. de. Si. st. em. as. animal studies. Journal of carcinogenesis. 2009;8(1):5.. - 35 -. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(40) át ica. yC. om un. ica ció. n. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Di re cc. ió. n. de. Si. st. em. as. de. In. fo r. m. ANEXOS. - 36 -. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(41) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ANEXO 01 Certificado sanitario de los especímenes de investigación utilizados en la. Di re cc. ió. n. de. Si. st. em. as. de. In. fo r. m. át ica. yC. om un. ica ció. n. presente investigación.. Figura 1. Certificado sanitario expedido por el bioterio del INS.. - 37 -. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(42) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ANEXO 02. át ica. yC. om un. ica ció. n. Distribución de los 28 especímenes en cuatro grupos. Figura 2: Grupo C2: “ASI*150”. Di re cc. ió. n. de. Si. st. em. as. de. In. fo r. m. Figura 1. Grupo C1: “DMH”. Figura 3. Grupo E1: “DMH + ASI*150”. Figura 4. Grupo E2: “DMH + ASI*300”. - 38 -. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.