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EFECTO PROTECTOR DEL EXTRACTO ETANÓLICO DE Lupinus mutabilis SOBRE LA CITOTOXICIDAD Y GENOTOXICIDAD DEL DICROMATO DE POTASIO EN MERISTEMOS RADICULARES DE Allium cepa

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Academic year: 2020

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(1)Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE CIENCIAS BIOLOGICAS. A. Y. CO. M. UN IC. AC IÓ. N. ESCUELA ACADEMICO PROFESIONAL DE CIENCIAS BIOLOGICAS. ÁT. IC. EFECTO PROTECTOR DEL EXTRACTO ETANÓLICO DE Lupinus mutabilis. RM. SOBRE LA CITOTOXICIDAD Y GENOTOXICIDAD DEL DICROMATO DE. IN FO. POTASIO EN MERISTEMOS RADICULARES DE Allium cepa. DE. TESIS PARA OPTAR EL TÍTULO DE. EM. AS. BIÓLOGO. SI ST. Autor: Br. Karen Judith Fajardo Fernández. TRUJILLO-PERÚ 2012. DI. RE. CC. IO. N. DE. Asesor: Dr. José Antonio Saldaña Jiménez. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(2) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AUTORIDADES DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO QUE OTORGAN EL TÍTULO PROFESIONAL DE BIÓLOGO. N. RECTOR. UN IC. AC IÓ. Dr. Orlando Velásquez Benites. VICERRECTOR ACADÉMICO. Y. CO. M. Dra. Vilma Julia Méndez Gil. IC. A. VICERRECTOR ADMINISTRATIVO. RM. ÁT. Dr. Flor Marlene Luna Victoria Mori. IN FO. JEFE DE LA OFICINA DE REGISTRO ACADÉMICO. AS. DE. Msc. Roberto Rodríguez Rodríguez. EM. DECANO DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS. DE. SI ST. Dr. Hermes Escalante Añorga. Dr. César Augusto Jara Campos. RE. CC. IO. N. SECRETARIO DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS. DI. DIRECTOR DE LA ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE CIENCIAS BIOLÓGICAS Dr. Eloy López Medina. ii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(3) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AC IÓ. N. JURADO DICTAMINADOR. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. M. UN IC. Dr. Radigud Fernández Romero PRESIDENTE. Dr. José Antonio Saldaña Jiménez VOCAL. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. AS. DE. IN FO. Ms. C. Gina Zavaleta Espejo SECRETARIA. iii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(4) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. VºBº DEL ASESOR. El que suscribe, profesor asesor de la presente tesis para optar por el Título. AC IÓ. N. Profesional de Biólogo, certifica que ha sido desarrollada de conformidad con los objetivos propuestos y que el informe ha sido revisado y acoge las. M. UN IC. observaciones y sugerencias alcanzadas.. CO. Por lo tanto autorizo a la Br. Karen Judith Fajardo Fernández a continuar con los. EM. AS. DE. IN FO. RM. ÁT. IC. A. Y. trámites correspondientes.. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. Dr. José Antonio Saldaña Jiménez ASESOR. iv Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(5) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. APROBACIÓN DE TESIS. Los profesores que suscriben, miembros del jurado dictaminador, declaran que. AC IÓ. N. ésta reúne todos los requisitos exigidos, por lo que fue aprobada por. IC. A. Y. CO. M. UN IC. UNANIMIDAD, el 28 de Marzo del año 2012.. EM. AS. DE. IN FO. RM. ÁT. Dr. Radigud Fernández Romero PRESIDENTE. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. Dra. Gina Zavaleta Espejo SECRETARIA. Dr. José Antonio Saldaña Jiménez VOCAL. v Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(6) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DEDICATORIA. A Dios por darme la vida, iluminar,. N. guiar mi camino y permitir que. AC IÓ. cumpla una de mis metas, ya que. CO. M. UN IC. sin su ayuda no lo habría logrado.. A mis padres Alberto y Alicia por. A. Y. el amor, confianza y los consejos. IC. que me brindan en todo momento. siempre están conmigo.. DE. IN FO. RM. ÁT. y a pesar de las dificultades. A mis hermanos Katherine, Franklin. AS. y Jackson por darme tantas alegrías,. EM. estar siempre a mi lado y entregarme. N. DE. SI ST. todo su amor y cariño.. IO. A mis amigas y amigos por los. CC. momentos compartidos y estar. RE. conmigo en los momentos. DI. tristes y alegres.. vi Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(7) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AGRADECIMIENTO. Mi más sincero y profundo agradecimiento a mi asesor de tesis, el profesor Dr.. AC IÓ. N. José Antonio Saldaña Jiménez, por su apoyo y aportes en el desarrollo de esta tesis, por brindarme siempre su apoyo incondicional a lo largo de mi carrera. A la vez, expresarle mi más grande admiración y. M. ser una mejor profesional.. UN IC. universitaria, por la paciencia y sus valiosos consejos y críticas para así lograr. EM. AS. DE. IN FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. respeto.. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. Karen Judith Fajardo Fernández. vii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(8) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. PRESENTACIÓN. AC IÓ. N. Señores miembros del Jurado Dictaminador:. En cumplimiento a lo dispuesto en el reglamento de Grados y Títulos de la. UN IC. Facultad de Ciencias Biológicas de la Universidad Nacional de Trujillo, me es. M. honroso presentar y someter a vuestra consideración y elevado criterio el. Y. CO. presente informe de tesis titulado:. IC. A. “Efecto protector del extracto etanólico de Lupinus mutabilis sobre la. RM. ÁT. citotoxicidad y genotoxicidad del dicromato de potasio en meristemos. IN FO. radiculares de Allium cepa”. AS. DE. Con el cual pretendo obtener el Título Profesional de Biólogo.. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. Trujillo, el 28 de Marzo del año 2012.. DI. Br. Karen Judith Fajardo Fernández. viii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(9) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. ÍNDICE. AUTORIDADESUNIVERSITARIAS…………………………………………...ii. N. JURADO DICTAMINADOR…………………………………………………....iii. AC IÓ. VºBº DEL ASESOR………………………………………………………………iv. UN IC. APROBACIÓN DE TESIS………………………………………………………..v. M. DEDICATORIA………………………………………………………………….vi. CO. AGRADECIMIENTO…………………………………………………………...vii. Y. PRESENTACIÓN…...………………………………………………………….viii. IC. A. INDICE…………………………………………………………………………...ix. RM. ÁT. RESUMEN………………………………………………………………………..x. DE. IN FO. ABSTRACT……………………………………………………………………...xi. AS. INTRODUCCIÓN………………………………………………………………...1. EM. MATERIALES Y MÉTODOS……………………………………………………6. SI ST. RESULTADOS…………………………………………………………………..11. DE. DISCUSIÓN……………………………………………………………………..21. N. CONCLUSIONES……………………………………………………………….25. CC. IO. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS…………………………………………...26. DI. RE. ANEXOS…………………………………………………………………………32. ix Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(10) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. RESUMEN. En el presente trabajo se determinó el efecto protector del extracto etanólico. AC IÓ. N. (70º) seco al 20% de semillas de Lupinus mutabilis “chocho” a concentraciones. de 100 mg, 200 mg y 300 mg sobre la citotoxicidad y genotoxicidad del. UN IC. dicromato de potasio a 0.25 mg/L en células meristemáticas de Allium cepa. M. “cebolla” var. Roja Arequipeña. Para ello, se obtuvieron raicillas de 2 a 3 cm de. CO. longitud que fueron expuestas a tratamientos designados según el diseño. A. Y. establecido. Posteriormente se procedió a aislar las raicillas para fijarlas,. ÁT. IC. colorearlas, realizar el análisis citológico y determinar el índice mitótico (IM),. RM. de fases y puentes anafásicos (Ap). Los resultados obtenidos, evidenciaron que. IN FO. el IM mínimo (5.1%) y el mayor porcentaje de Ap (37.31%) se alcanzaron en T2. En relación al índice profásico, se observó un incremento en los diferentes. DE. tratamientos, excepto en T1, llegando a su máximo valor en T2 (74.7%), lo cual. EM. AS. generó una sucesiva disminución en los siguientes índices de fases. A 300 mg. SI ST. de extracto etanólico (70º) seco al 20% de semillas de L. mutabilis, se determinó un mayor efecto protector, a través de la normalización de los valores de IM y de. DE. fases e impidiendo la formación de Ap. El tratamiento estadístico de los. IO. N. resultados, mediante el análisis de varianza mostró la existencia de diferencias. DI. RE. CC. significativas, lo cual fue confirmado mediante la prueba de Duncan.. PALABRAS CLAVES: Lupinus mutabilis, extracto etanólico, Allium cepa, dicromato de potasio, citotoxicidad, genotoxicidad.. x Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(11) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. ABSTRACT In this study, it was determined that the protective effect of ethanolic extract. N. (70°) dry to 20% of seeds from Lupinus mutabilis "cunt" at concentrations of. AC IÓ. 100 mg, 200 mg and 300 mg on the cytotoxic and genotoxic damage caused by. UN IC. potassium dichromate (0.25 mg/L) in meristematical cells of Allium cepa "onion" var. Red Arequipeña. To do so, they were obtained rootlets of 2 to 3 cm. CO. M. in length and were exposed to treatments designed according to the established. Y. design. We proceeded to isolate the rootlets to attach them, color them, perform. IC. A. cytological analysis and determine the mitotic index (MI), and bridges anaphasic. RM. ÁT. phase (Ap). The results obtained showed that the lowest MI (5.1%) and the. IN FO. highest percentage of Ap (37.31%) were achieved in T2. In relation to the prophasic index, there was an increase in the different treatments, except T1,. DE. reaching its maximum value at T2 (74.7%), generating a successive decrease in. AS. the following phase indices. At 300 mg ethanolic extract (70°) to 20% of dry. EM. seeds of L. mutabilis, was determined a greater protective effect through the. SI ST. normalization of the values of MI and of phases preventing the formation of Ap.. DE. The statistical treatment of the results through the variance analysis showed. DI. RE. CC. IO. N. significant differences, which was confirmed by the Duncan test.. KEYWORDS: Lupinus mutabilis, ethanol extract, Allium cepa, potassium dichromate, cytotoxicity, genotoxicity.. xi Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(12) DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. AS. DE. IN FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. M. UN IC. AC IÓ. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(13) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. INTRODUCCIÓN. El dicromato de potasio es una sal de color intenso anaranjado, la cual es un. AC IÓ. N. oxidante muy fuerte, obtenida a partir de la acidulación del cromato de potasio, así como, por medio de intercambio catiónico entre el dicromato de sodio y el. UN IC. cloruro de potasio 1,2,3. Es utilizado en la elaboración de productos pirotécnicos,. M. explosivos, colorantes, de impresión, curtido de pieles, telas repelentes al agua,. CO. baterías eléctricas, en el blanqueo de aceite de palma, ceras y esponjas, como. A. Y. inhibidor de corrosión, reactivo analítico, en la industria cerámica y en la. IN FO. RM. ÁT. IC. obtención de pigmentos, entre otros 4,5,6.. La capacidad oxidante de este compuesto genera daños genotóxicos a nivel. DE. celular, debido probablemente a que el cromo hexavalente sobrepasa la. AS. capacidad de reducción del citoplasma, entonces migra directamente al núcleo,. EM. en el que puede ser reducido in situ. sin modificaciones citoplasmáticas,. SI ST. llevando a una producción de radicales de oxígeno y sulfuro muy cerca del. DE. DNA. También es capaz de disminuir la capacidad de replicación del DNA,. N. fijándose directamente a grupos tioles a lo largo de las polimerasas, lo que. DI. RE. CC. IO. ocasionaría daño oxidativo con la consiguiente inhibición del proceso 7,8,9,10.. Se ha demostrado también que el dicromato de potasio, por ser un. compuesto hexavalente es mutagénico, lo cual implica que es causante directo de modificaciones en los pares de bases del DNA Salmonella sp. y. 11. . Estudios realizados en. Escherichia coli, han permitido comprobar que este 1. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(14) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. compuesto es causante de citotoxicidad y mutagenicidad. 8,12. . Además posee. una elevada capacidad de incrementar la frecuencia de micronúcleos tanto “in vitro”, como “in vivo” en ratas y hámsters chinos. 13,14,15. . Del mismo modo se. N. reportaron alteraciones cromosómicas durante la división mitótica en Vicia. UN IC. AC IÓ. faba 16.. CO. M. Durante el ciclo celular, las aberraciones cromosómicas inducidas por. Y. compuestos químicos son la evidencia citológica de una serie de fenómenos. IC. A. ocurridos en otros niveles de organización biológica. Para que se produzcan tales. ÁT. alteraciones es necesario que el agente deba inducir un daño a nivel del DNA y. RM. ésta a su vez debe amplificarse desde el nivel molecular hacia el nivel. IN FO. microscópico, evidenciándose en alteraciones estructurales de los cromosomas.. DE. Esto puede ocurrir por una replicación incompleta del DNA, reparación errónea. AS. o falta de reparación. La comprobación de que se produzca daño genético en. EM. condiciones in vivo es una prueba concluyente respecto a la mutagenicidad de la. SI ST. sustancia química ensayada; lo cual elevaría la tasa de mutación de la especie o bien pueda generar procesos de transformación celular con el consiguiente. En 1,938 el uso de A. cepa se introdujo como un sistema de prueba. DI. RE. CC. IO. N. DE. riesgo de cáncer 17.18,19.. biológico para evaluar los efectos citogenéticos de la colchicina; desde entonces ha constituído un material biológico de amplio uso en pruebas de laboratorio; debido al crecimiento rápido de sus raíces y la respuesta de su material genético a la presencia de citotóxicos y genotóxicos potenciales en líquidos de prueba como algunos extractos, siendo de esta manera, frecuentemente utilizada por sus 2. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(15) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. meristemos, para estudios de dinámica celular a nivel de sus meristemos, ya que constituyen un sistema in vitro ideal para estudiar los mecanismos regulatorios 19,20,21,22,23. .. AC IÓ. N. que puedan afectar el ciclo celular. UN IC. Existen múltiples reportes del efecto genotóxico y cancerígeno del dicromato de potasio y los seres humanos tenemos una permanente exposición a. CO. M. este compuesto 24. Es por esto que actualmente se están realizando estudios para. Y. evaluar los efectos de las diferentes plantas medicinales de acuerdo al uso. IC. A. popular que se les atribuye, ya que algunos vegetales contienen ciertos. ÁT. fitoquímicos no nutricionales que ejercen acciones protectoras sobre la salud. IN FO. RM. humana 25,26,27,28.. DE. Lupinus mutabilis “chocho” es una planta leguminosa de la familia. EM. AS. Fabaceae, que se originó a lo largo de los Andes, actualmente se encuentra. SI ST. únicamente en Ecuador, Perú y Bolivia, con cierto desarrollo agronómico y agroindustrial. Es cultivada en Ancash, La Libertad, Cajamarca, Cuzco,. DE. Huánuco, Huancavelica, Junín, Pasco, Piura, Puno. En la alimentación, se usa. IO. N. solamente el grano, el cual es conocido como chocho, en el norte de Perú y. DI. RE. CC. Ecuador; como tarwi en el centro del Perú 29,30.31,32.. Su alto contenido en proteínas, mayor que el de la soja, la convierte en una planta de interés para la nutrición humana y animal, pues contiene hasta más de 43% de proteínas, 25.5% de fibras, 13.5% de azúcares, además de un alto porcentaje de aceites, constituyéndose en un buen alimento de niños y ancianos, 3. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(16) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. debido a que la proteína es rica en lisina, cisteína y metionina. 31,33,34. . Algunos. investigadores indican que las semillas poseen ácidos grasos como palmítico (13%), oleico (40%) y linoleico (37%), siendo éste último esencial para el ser. AC IÓ. N. humano; también presentan alcaloides: esparteína, lupinina, lupanidina, que tienen efecto analgésico y antiinflamatorio; además de.isoflavonas con actividad. UN IC. biológica importante, al suprimir los radicales libres y conferir protección. Y. CO. M. antioxidante 35,36,37,38.. IC. A. Las isoflavonas presentan actividad anticarcinogénica in vivo. Se postula. ÁT. que la genisteína y quizás otros fitoestrógenos, inhibe el crecimiento de células. RM. tumorales por intervención en la actividad de la tirosina quinasa de los. IN FO. receptores del factor de crecimiento activado y de la tirosina quinasa. DE. citoplasmática e inhibe las topoisomerasas de DNA, las cuales son esenciales 39,40. . Resultados de un estudio. AS. para la transducción de señales mitogénicas. EM. reciente en células de cáncer de mama humana reveló que la genisteína y. SI ST. daidzeína poseen acciones estrogénicas; en un rango de concentración fisiológicamente relevante, actuaría como un agonista reemplazante de. DE. estrógenos y como un regulador del crecimiento. Además se observó que la. DI. RE. CC. IO. N. genisteína inhibe el crecimiento de células de mama cancerígenas in vitro 40,41.. La actividad antioxidante de estas isoflavonas protegería a las células del daño de los radicales libres, los cuales iniciarían el proceso del cáncer; en otro estudio realizado con ratas se demostró, que el tiempo de exposición a la genisteína es importante para la quimioprevención del cáncer. Por otro lado, el 4. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(17) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. extracto etanólico de semillas de soya, hizo posible la normalización en los valores del índice mitótico y de fases. Así como también disminuyó la frecuencia en la formación de puentes anafásicos y telofásicos y micronúcleos. N. ocasionados por el dicromato de potasio, esto se debería a la presencia de. UN IC. AC IÓ. isoflavonas presentes en dicho extracto 41,42,43,44.. CO. M. Por todo lo mencionado anteriormente, en el presente trabajo, se determinó al 20 % de semillas de L.. Y. el efecto protector del extracto etanólico (70º). IC. A. mutabilis, a concentraciones de 100 mg, 200 mg y 300 mg sobre el daño. ÁT. citotóxico y genotóxico ocasionado por el dicromato de potasio (0.25 mg/L), a. RM. través de la normalización del ciclo celular y la disminución en la frecuencia de. IN FO. aberraciones cromosómicas como puentes anafásicos (Ap) en meristemos. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. AS. DE. radiculares de A. cepa.. 5 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(18) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. MATERIALES Y MÉTODOS. 1. MATERIAL BIOLÓGICO. AC IÓ. N. 1.1. Bulbos de Allium cepa L. Var. Roja Arequipeña “cebolla”, con un peso aproximado de 60-80 g cada uno, forma de perilla y excelente estado. UN IC. de conservación. Fueron adquiridos de Mercado Mayorista de la Ciudad de. M. Trujillo, Distrito de Trujillo.. CO. 1.2. Semillas de Lupinus mutabilis “chocho”,. en condiciones. A. Y. fitosanitarias adecuadas. Procedentes del Mercado Mayorista, Trujillo –. IN FO. 2. MÉTODOS Y TÉCNICAS. RM. ÁT. IC. Perú. (ANEXO 1). DE. 2.1. Lavado de semillas de L. mutabilis “chocho” 10. AS. 250 g de semillas de L. mutabilis “chocho” se hirvieron durante. EM. minutos, luego se desaguaron por 7 días cambiando el agua diariamente.. DE. SI ST. (ANEXO 2).. N. 2.2. Secado y triturado de las semillas de L. mutabilis “chocho”. DI. RE. CC. IO. Las semillas se secaron en estufa durante 72 horas a 40º C, posteriormente se procedió a triturar las semillas secas utilizando un molino de mano, obteniéndose un polvillo, el cual se cernió con la ayuda de un colador (ANEXO 2).. 6 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(19) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 2.3. Obtención de las raicillas de A. cepa “cebolla” Se utilizaron 10 bulbos de “cebolla” para cada repetición con un peso aproximado de 60 – 80 g cada uno; a cada bulbo, se le quitaron las. AC IÓ. N. catáfilas y raicillas secas. En la parte ecuatorial se introdujeron 3 a 4 mondadientes distribuidos equidistantemente para sostener el bulbo en la. UN IC. boca del vaso plástico de 100 mL, el cual previamente se lleno con 80. M. mL de agua. Esto hizo posible que el líquido se ponga en contacto con el. CO. disco germinativo para así permitir la emisión de nuevas raicillas,. IC. A. Y. necesarias para la experiencia.. RM. ÁT. 2.4. Obtención de los extractos etanólicos de L. mutabilis “chocho”. IN FO. Se colocaron 20 g del polvillo de semillas en 100 mL de alcohol de 70º para su maceración durante una semana, agitándose manualmente por un. DE. tiempo de 2 horas diarias. Después de este tiempo en maceración, se filtró. AS. la solución, para luego aforar el volumen a 100 mL con alcohol de 70º, con. EM. lo cual se obtuvo un extracto etanólico de semillas de L. mutabilis. SI ST. “chocho” al 20%. A partir de este extracto y en tres repeticiones se. DE. tomaron 5 mL., para obtener así el peso seco promedio, con el cual se. N. determinó la cantidad de extracto seco presente en 100 mL. Finalmente. presente en 1 mL de solución alcohólica 70º al 20%, a partir del cual, se prepararon concentraciones del extracto etanólico de “chocho” a razón de. DI. RE. CC. IO. con este resultado se obtuvo la cantidad de extracto seco de L. mutabilis. 100 mg, 200 mg y 300 mg. (ANEXO 3 Y 4).. 7 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(20) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 2.5. Preparación de la solución de dicromato de potasio. Se pesó 250 mg de dicromato de potasio, se colocó en una probeta y se. AC IÓ. N. aforó hasta 1 litro con agua potable.. 2.5. Acondicionamiento del material biológico. sistema de soporte diseñado. UN IC. Las cebollas se mantuvieron en un. M. especialmente hecho de triplay; se utilizó un motor de pecera para. CO. proporcionar aireación constante a razón de 10 – 20 mL/min a una. A. Y. temperatura de 20Cº  5Cº, la renovación del agua contenida en los vasos. ÁT. IC. fue diaria; 48 horas después se seleccionaron aquellos bulbos con más de. RM. 15 raicillas con longitud promedio de 2 a 3 cm, a fin de asegurar la. DE. IN FO. presencia de cinética del ciclo celular. (ANEXO 5).. 2.6. Diseño experimental. EM. AS. Se realizó un diseño en bloques con tres repeticiones para cada bloque,. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. estableciéndose ocho tratamientos (Tabla 1).. 8 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(21) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Tabla 1: Diseño experimental según los tratamientos establecidos. T4. T5. T6 100 mg. T7 200 mg. T8 300 mg. de. de. de. extracto. extracto. extracto. etanólico. etanólico. etanólico. N. T3. AC IÓ. T2. 200 mg. 300 mg. (70º) al. (70º) al. (70º) al. de. de. de. 20% de. 20% de. 20% de. extracto. extracto. extracto. semillas. semillas. semillas. Dicromato de. etanólico. etanólico. etanólico. de. de. de. Potasio (0.25. (70º) al. (70º) al. (70º) al. Lupinus. Lupinus. Lupinus. Sólo. mg/L). 20% de. 20% de. 20% de. mutabilis. mutabilis. mutabilis. agua. durante. semillas. semillas. semillas. durante 16. durante 16. durante 16. 32 h. 16 horas.. de. de. de. horas.. horas.. horas.. Lupinus. Lupinus. Lupinus. +. +. +. mutabilis. mutabilis. mutabilis. Dicromato. Dicromato. Dicromato. durante. durante. durante. de. de. de. 16 horas.. 16 horas. 16 horas.. Potasio. Potasio. Potasio. (0.25 mg/L). (0.25 mg/L). (0.25 mg/L). durante 16. durante 16. durante 16. horas. horas. horas. M. CO. Y. A IC. ÁT. EM. AS. DE. IN FO. UN IC. 100 mg. RM. T1. SI ST. Luego de aplicar el extracto etanólico (70º) seco al 20 % de semillas de L.. DE. mutabilis “chocho” a diferentes concentraciones (16 horas) y después de. IO. N. aplicar los tratamientos a la acción genotóxica del dicromato de potasio. DI. RE. CC. (16 horas), se evaluó el índice mtitótico y de fases; así como la presencia o ausencia de puentes anafásicos. Finalmente se realizó las comparaciones estadísticas entre los diferentes tratamientos.. 2.7. Obtención de preparados citológicos Finalizado cada uno de los tratamientos, las raicillas fueron aisladas y colocadas en la solución fijadora de Carnoy`s, luego sacadas y lavadas 9 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(22) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. tres veces en agua potable para retirar de esta manera los restos del fijador. Posteriormente se secaron con papel toalla para eliminar los restos de agua en la superficie. Por último, éstas fueron depositadas sobre una. N. luna de reloj para su respectiva coloración de acuerdo a la técnica rápida. UN IC. AC IÓ. de Tjio y Levan 44 (ANEXO 6).. M. 2.8. Análisis citológico para la determinación de la citotoxicidad y la. CO. genotoxicidad. Y. Los ápices coloreados fueron colocados entre porta y cubreobjetos para. IC. A. realizar el “squash” (aplastamiento) (ANEXO 6). Los preparados. RM. ÁT. citológicos se observaron con un microscopio compuesto con el objetivo. IN FO. de 100x. Posteriormente, se procedieron a contar un total de 2000 células meristemáticas por cada uno de los diferentes tratamientos ensayados¸ lo. DE. cual se realizó por triplicado, utilizando la técnica de barrido. Para la. AS. evaluación de la citotoxicidad se estimaron los valores del índice mitótico. EM. y de fases (ANEXO 7 y 8). Y para la determinación de la genotoxicidad se. SI ST. tomaron en cuenta la cantidad puentes anafásicos (Ap) (ANEXO 9). Los. DI. RE. CC. IO. N. DE. resultados obtenidos fueron expresados en porcentaje.. 2.9. Análisis estadístico. Los datos obtenidos fueron organizados en tablas, gráficos y figuras para realizar la comparación de los diferentes tratamientos ensayados mediante el análisis de varianza. 46. ; utilizando el programa Statgraphics Centurion. versión 16.1.15 para Windows 47.. 10 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(23) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. RESULTADOS En la tabla 2, se muestran los valores promedios de los porcentajes de los. N. índices mitótico (IM) y de fases; así como también, de los puentes anafásicos. UN IC. AC IÓ. (Ap).. La figura 1, muestra el gráfico del IM de los tratamientos, en el cual se. CO. M. observa una disminución del mismo en el tratamiento expuesto sólo a la. IC. A. Y. concentración de 0.25 mg/L de dicromato de potasio (T1).. ÁT. En la figura 2, el gráfico del índice profásico muestra un aumento notable en. RM. los tratamientos, siendo el máximo valor en T2. Las figuras 3, 4 y 5, muestran los. IN FO. gráficos de los índices metafásico, anafásico y telofásico, los cuales disminuyen. DE. en relación a los valores encontrados en T1; los valores mínimos para dichos. AS. índices se encontraron en T2 existiendo diferencias estadísticamente significativas. SI ST. EM. respecto a los otros tratamientos.. DE. En la figura 6, el gráfico del índice de puentes anafásicos (Ap) en los. N. tratamientos, se observa un mayor incremento en el T2. La figura 7 muestra los. IO. efectos genotóxicos del dicromato de potasio a la concentración de 0.25 mg/L a. DI. RE. CC. través de la presencia de puentes anafásicos (Ap).. 11 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(24) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. M UN IC AC IÓ. N. Tabla 2. Valores promedios de los porcentajes (%) ± Desviación Estándar de los valores obtenidos de los distintos parámetros evaluados en meristemos radiculares de Allium cepa var. Roja Arequipeña expuestos a concentraciones de Dicromato de potasio (0.25 mg/L), Extracto Etanólico (70º) seco al 20% de semillas de Lupinus mutabilis (100 mg, 200 mg, 300mg) y al efecto sucesivo de ambos.* Parámetro. Índice Telofásico. Puentes Anafásicos (Ap). 28.3 ±0.208167. 0 ±0.0. 6.0 ± 0.5. 9.9 ±0.152753. 37.31±1.7. 9.94 ±0.625327. 25.75 ±0.474377. 0 ±0.0. 9.44 ±0.249867. 23.64 ±0.330454. 0 ±0.0. 10.29 ± 0.185831. 7.62 ±0.122202. 21.99 ±0.631691. 0 ±0.0. 9.66 ± 0.26727. 8.30 ±0.453982. 23.88 ±0.551936. 14.40 ±2.3. 11.14 ± 0.291433. 9.25 ±0.01. 24.43 ±0.497226. 6.88 ±1.25. 13.56 ± 1.08214. 9.96 ±0.316596. 26.84 ±0.436501. 0 ±0.0. Índice Mitótico. Índice Profásico. Índice Metafásico. Índice Anafásico. T1. 12.7± 0.3. 46.8 ± 0.057735. 14.9 ± 0.057735. 9.8 ± 0.208167. T2. 5.1 ± 0.189297. 74.7 ± 0.472582. 8.6 ± 0.665833. T3. 12.75 ± 0.180278. 50.45 ± 0.620108. 13.85 ± 0.26839. T4. 10.78 ± 0.453689. 54.57 ± 1.35681. 12.36 ± 1.26456. 9.40 ± 0.377492. 60.09 ± 0.924626. T6. 9.85 ± 0.76974. 58.16 ± 1.03467. T7. 10.6 ± 0.840139. 55.17 ± 1.23049. T8. 12.00 ± 0.132288. 49.65 ± 0.523864. Y A IC. RM ÁT. IN FO. DE. AS. EM. ST. * Leyenda : Tratamientos:. DE. T1: Control Negativo, solamente agua potable 16 horas de exposición. SI. T5. CO. Tratamiento. T2: Control Positivo, 0.25 mg/L Dicromato de Potasio 16 horas de exposición. O. N. T3: 100 mg de Extracto Etanólico al (70º) seco al 20 % de semillas de Lupinus mutabilis 16 horas de exposición. CC I. T4: 200 mg de Extracto Etanólico al (70º) seco al 20 % de semillas de Lupinus mutabilis 16 horas de exposición T5: 300 mg de Extracto Etanólico al (70º) seco al 20 % de semillas de Lupinus mutabilis 16 horas de exposición. RE. T6: 100 mg de Extracto Etanólico al (70º) seco al 20 % de semillas de Lupinus mutabilis 16 horas de exposición + 0.25 mg/L Dicromato de Potasio 16 horas de exposición. DI. T7: 200 mg de Extracto Etanólico al (70º) seco al 20 % de semillas de Lupinus mutabilis 16 horas de exposición + 0.25 mg/L Dicromato de Potasio 16 horas de exposición T8: 300 mg de Extracto Etanólico al (70º) seco al 20 % de semillas de Lupinus mutabilis 16 horas de exposición + 0.25 mg/L Dicromato de Potasio 16 horas de exposición. 12 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(25) SI ST. EM. AS. DE. IN FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. M. UN IC. AC IÓ. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. CC. IO. N. DE. Las letras (a-e) representan los 5 grupos estadísticamente homogéneos según los test de comparación múltiple de medias. Los promedios relacionados con la misma letra no presentan diferencias significaticas entre ellos para un valor de p<0,05.. DI. RE. Figura 1. Promedio de los porcentajes ± DE del índice mitótico en meristemos radiculares de Allium cepa var. Roja Arequipeña, expuestos a los diferentes tratamientos.. 13 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(26) DE. SI ST. EM. AS. DE. IN FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. M. UN IC. AC IÓ. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. RE. CC. IO. N. Las letras (a-f) representan los 6 grupos estadísticamente homogéneos según los test de comparación múltiple de medias. Los promedios relacionados con la misma letra no presentan diferencias significaticas entre ellos para un valor de p<0,05.. DI. Figura 2. Promedio de los porcentajes ± DE del índice profásico en meristemos radiculares de Allium cepa var. Roja Arequipeña, expuestos a los diferentes tratamientos.. 14 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(27) SI ST. EM. AS. DE. IN FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. M. UN IC. AC IÓ. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. CC. IO. N. DE. Las letras (a-f) representan los 6 grupos estadísticamente homogéneos según los test de comparación múltiple de medias. Los promedios relacionados con la misma letra no presentan diferencias significaticas entre ellos para un valor de p<0,05.. DI. RE. Figura 3. Promedio de los porcentajes ± DE del Índice Metafásico en meristemos radiculares de Allium cepa var. Roja Arequipeña, expuestos a los diferentes tratamientos.. 15 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(28) EM. AS. DE. IN FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. M. UN IC. AC IÓ. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. N. DE. SI ST. Las letras (a-e) representan los 5 grupos estadísticamente homogéneos según los test de comparación múltiple de medias. Los promedios relacionados con la misma letra no presentan diferencias significaticas entre ellos para un valor de p<0,05.. DI. RE. CC. IO. Figura 4. Promedio de los porcentajes ± DE del Índice Anafásico en meristemos radiculares de Allium cepa var. Roja Arequipeña, expuestos a los diferentes tratamientos.. 16 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(29) SI ST. EM. AS. DE. IN FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. M. UN IC. AC IÓ. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. RE. CC. IO. N. DE. Las letras (a-e) representan los 6 grupos estadísticamente homogéneos según los test de comparación múltiple de medias. Los promedios relacionados con la misma letra no presentan diferencias significaticas entre ellos para un valor de p<0,05.. DI. Figura 5. Promedio de los porcentajes ± DE del Índice telofásico en meristemos radiculares de Allium cepa var. Roja Arequipeña, expuestos a los diferentes tratamientos.. 17 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(30) SI ST. EM. AS. DE. IN FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. M. UN IC. AC IÓ. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. N. DE. Las letras (a-d) representan los 4 grupos estadísticamente homogéneos según los test de comparación múltiple de medias. Los promedios relacionados con la misma letra no presentan diferencias significaticas entre ellos para un valor de p<0,05.. DI. RE. CC. IO. Figura 6. Promedio de los porcentajes ± DE de los Puentes Anafásicos (Ap) en meristemos radiculares de Allium cepa var. Roja Arequipeña, expuestos a los diferentes tratamientos.. 18 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(31) M. UN IC. AC IÓ. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. IC. A. Y. CO. (c). (a) (d). DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. AS. DE. IN FO. RM. ÁT. (b). Figura 7. Células meristemáticas de A. cepa, control negativo, mostrando: (a) Profase. (b) Anafase. (c) Telofase. (d) Interfase a 100x.. 19 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(32) CC. IO. N. DE. SI ST. EM. AS. DE. IN FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. M. UN IC. AC IÓ. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. RE. Figura 8. Células meristemáticas de A. cepa expuestas a dicromato de potasio (0.25. DI. mg/L) durante 16 horas mostrando un puente anafásico a 100x.. 20 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(33) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DISCUSIÓN Al analizar los resultados obtenidos a partir de los diferentes tratamientos,. N. se observó que los valores del índice mitótico (IM) disminuyen a comparación. AC IÓ. del control negativo (T1), el cual mantuvo su cinética mitótica tanto a las 16. UN IC. horas como a las 32 horas, alcanzando un mínimo de 5.1% en T2 (Tabla 2, Figura 1, Anexo 14). Esto se debería a que el CrVI se reduce hasta CrIII, ya que. CO. M. el anión cromato (Cro4)-2 atraviesa fácilmente la membrana celular, generando. Y. así intermediarios como el CrIV y CrV, los cuales estarían impidiendo la. IC. A. formación del complejo CdK1-ciclina B; que forma a su vez el Factor Promotor. ÁT. de la Mitosis (FPM), lo que permite que las células no transiten normalmente de. RM. la fase G2 hacia la mitosis; deteniéndose entonces en interfase y. IN FO. consecuentemente disminuyendo el número de células en división. Similares. DE. resultados se obtuvieron en ensayos utilizando dicromato en células de Vicia. EM. AS. faba 2,16,47,49.. SI ST. En el caso de T3, T4 y T5 (Tabla 2, Figura1, Anexo 14), se nota una. DE. disminución de los índices, llegando a su mínimo en T5, lo que demuestra que. N. en la ausencia de una sustancia oxidante en el medio, las isoflavonas genisteína. IO. y daidzeína con propiedades anticancerígenas presentes en el extracto actúan. RE. CC. alterando la formación de cdk1; impidiendo así, que las células transiten. DI. normalmente desde la interfase hacía la mitosis, interfiriendo de esta manera con la proliferación celular. Sin embargo en los tratamientos donde se evaluó el efecto sucesivo (extracto etanólico 70º seco al 20 % de semillas de L. mutabilis y después dicromato de potasio) (T6, T7 y T8), se encontró una recuperación de los valores del IM (Tabla 1 y Figura 1) con respecto al tratamiento que sólo 21. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(34) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. incluye dicromato de potasio, lo que demostraría la actividad biológica importante de las isoflavonas, al suprimir los radicales libres y conferir protección antioxidante en el extracto etanólico, permitiendo que las células. AC IÓ. N. desarrollen normalmente su ciclo celular 38,39.. UN IC. En relación al IP (Tabla 2 y Figura 2, Anexo 15), se observó que este se. M. incrementa notablemente, alcanzando su valor máximo de 74.7% en el. CO. tratamiento con dicromato de potasio (T2), con respecto a los tratamientos. Y. expuestos sólo a extracto (T3, T4 y T5). Lo cual denotaría en principio el efecto. IC. A. oxidativo del dicromato y luego el efecto antimitótico de las isoflavonas. RM. ÁT. mencionado anteriormente. Esto se debería a que estos compuestos al interferir. IN FO. en menor o mayor grado con la formación del complejo ciclina B- cdk1, que entre otras funciones es responsable de activar a las proteínas del mantenimiento. DE. estructural cromosómico (SMC) conocidas como condensinas y de llevar a cabo. AS. la polimerización de microtúbulos para la formación del huso mitótico, traería. EM. como consecuencia que los procesos de condensación del ADN, llevados a cabo. SI ST. por estas moléculas y la formación del huso acrómatico se vean seriamente. DE. afectados, no transitando entonces las células normalmente desde la profase 19,23,24. . Los valores en los tratamientos que se evalúa el efecto. N. hacía la metafase. CC. IO. sucesivo (T6, T7 y T8), son menores con respecto al IP de T2, por lo que indica. RE. el efecto protector antioxidante de los flavonoides genisteína y daidzeína. DI. presentes en dicho extracto, sobre todo a la tercera concentración 17,18,49.. El índice metafásico de T2, T3, T4, T5, T6 y T7 (Tabla 2, Figura 3, Anexo 16), disminuye respecto a T1. Esto se debería a la inhibición del complejo Cdk1 - Ciclina B, que actúa sobre los centros de organización de microtúbulos, 22 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(35) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. disminuyendo. el. ensamblaje. del. huso. mitótico,. ocasionando. así. la. polimerización de microtúbulos que se elaboran perpendicularmente al eje mayor del cromosoma y se anclan por una de sus extremidades en el cinetocoro,. AC IÓ. N. logrando solo pasar a metafase un número reducido de células 15,20,23.. UN IC. Los índices anafásicos y telofásicos tienen el mismo perfil, es decir. M. disminuyen respecto a T1 (Tabla 2, Figura 4 y 5, Anexo 17 Y 18). La. CO. disminución en IA, estaría ocurriendo debido a que el aumento del número de. Y. células en profase genera una disminución en metafase y por ende una. IC. A. disminución en anafase. Además la disminución del IT, se originaría debido a. RM. ÁT. que el dicromato de potasio estaría inhibiendo la actividad catalítica de las. IN FO. cohesinas, las cuales a su vez se encargan de llevar a cabo el proceso de segregación de cromátidas hermanas; no permitiendo entonces, que las células. EM. AS. DE. transiten normalmente hacia anafase y consecuentemente hacia telofase 16,18,19.. SI ST. La presencia de puentes anafásicos (Ap) en T2, T6 y T7 ( Tabla 2, Figura 6, Anexo 19), se estaría generando debido a los efectos cleistogénicos a nivel de las. DE. regiones teloméricas del DNA, por la interacción entre el CrIII – DNA, lo que. IO. N. volvería “pegajosos” a los cromosomas, haciendo posible la formación de estos. CC. puentes. Sin embargo, en el tratamiento en el cual primero se expuso los. DI. RE. meristemos radiculares a la acción del extracto etanólico a la concentración de 300 mg, y después a dicromato de potasio, la frecuencia en la formación de estos Ap, desapareció por completo. Lo cual es resultado probablemente de la acción protectora antioxidante, ejercida por las isoflavonas genisteína y daidzeína presentes en el extracto etanólico a esta concentración 16,18,19,44. 23. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(36) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Los análisis de varianza realizados en cada uno de los parámetros ensayados, evidenciaron la existencia de diferencias significativas; lo cual fue confirmado mediante la prueba de Duncan, estableciendo la conformación de diferentes. AC IÓ. N. grupos estadísticamente homogéneos en función a su efecto (Anexo 20, 21, 22,. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. AS. DE. IN FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. M. UN IC. 23,24 y 25). 24 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(37) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. CONCLUSIONES. N. El dicromato de potasio a la concentración de 0.25 mg/L, durante 16 horas,. AC IÓ. ocasiona una disminución en los valores de los índices mitóticos, metafásico,. CO. M. UN IC. anafásico, telofásico; y un incremento en el índice profásico.. Y. El extracto etanólico (70º) seco al 20% de semillas de L. mutabilis a 300. IC. A. mg ejerce un mayor efecto protector frente a la citotoxicidad y genotoxicidad del. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. AS. DE. IN FO. RM. ÁT. dicromato de potasio a 0.25 mg/L durante 32 horas.. 25 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(38) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS 1. ALBERT L. Introducción a la Toxicología Ambiental. Centro Panamerica-no de. N. Ecología Humana y Salud. OPS/OMS, 227-46 pp. 1997.. AC IÓ. 2. TURNER MA. & RUST RH. Effects of chromium on growth and mineral nutrition. UN IC. of soybeans. Soil Sci. Soc. Am. Proc. Pág. 755-758. 1971.. 3. LEVINA A. LAY PA. Mechanistic studies of relevance to the biological activities. CO. M. of chromium. Coordination Chemistry Reviews; 249:281-98. 2005.. Y. 4. REDISKE JH. Chromium toxicity in plants. In biology research: annual report,. IC. A. 1955, Richland, Washington, Hamford Atomic Products Operations, 32-9 (Report. “Historia y alcance de la Toxicología”. En:. RM. 5. KLAESSEN C. WATKINS J.. ÁT. HW-35917). 1956.. IN FO. Manual de Toxicología la ciencia básica de los tóxicos. Quinta edición. Ed.. DE. McGraw-Hill Interamericana. México. Pág. 3-10. 2001.. AS. 6. REPETTO R, REPETTO G. “Metales”. En: Manual de Toxicología Básica. Ed.. SI ST. 619-646. 2000.. EM. E. Mencías R., L.M. Mayero F. Editorial Díaz de Santos, Madrid, España. Pág.. DE. 7. DULOUT F, OLIVERO O. Anaphase - telophase analysis of chromosomal damage. N. induced by chemicals. Environ Mutagen; 6: 299-310. 1984.. IO. 8. ANTTILA S. Biological effects of occupational and environmental exposure to. RE. CC. chromium. Metal Ions in Biology and Medicine; Pág. 315-319. 1990.. DI. 9. LI W, ZHAO Y AND CHOU I. Cytoskeletal injury induced by hexavalent chromate. Toxicology in vitro; 1992. 6 (5): 433-444.. 10. BLANKENSHIP L. “Apoptosis is tha mode of cell death cause by carcinogenic chromium”. Toxicology and applied pharmacology. Pág. 75-83. 1994.. 26 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(39) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. FERNÁNDEZ G. “Cromo, medio ambiente y salud. 11. GUZMÁN RAMOS A,. humana: comentarios sobre la situación en las Toscas (Santa Fe, Argentina”. Centro de Investigaciones ecogeográficas y ambientales, UNCPBA, Tandil, Argentina.. AC IÓ. N. 50p. 2000. 12. DEVORET, R. Test Bacterianos de Substancias Potencialmente Cancerígenas. En. UN IC. Análisis Eds. El Cáncer p.p. 46-56. Libres de Investigación Científica. Prensa. MA. “Neuroinmunotoxicología de metales pesados:. CO. 13. LA FUENTE GIMENEZ. M. Científica. España. 1979.. A. Y. posibles marcadores de exposición”. Revista de Toxicología, vol. 18 (3): Pág. 139-. ÁT. IC. 140. Madrid, España. 2001.. RM. 14. DULOUT FN. Mutagénesis y carcinogénesis ambiental. En: Elementos de política. IN FO. ambiental. F. Goñi y R. Goñi (Eds.) Honorable Cámara de Diputados de la Provincia de Buenos Aires, Argentina; Pág. 693-704. 1993.. DE. 15. DULOT, F.; PASTORI, M.; OLIVERO, O.; VON GURADZE, H. Los Ensayos. EM. AS. Citogenéticas in vivo en Estudios de Mutagénesis Química. Actas del V Congreso. SI ST. Latinoamericano de Genética. Santiago de Chile. p.p. 209-225. 1982. 16. PRIETO Z, FERNANDEZ R, LEÓN I, QUIJANO C, VALLEJO R. Genotoxicidad. DE. del dicromato de potasio en meristemos radiculares y meiocitos de Vicia faba.. IO. N. Revista Concytec; 15(2): 217-226. 2008.. CC. 17. KORTE, C.; JALAL, S. 2,4-D Induced Exchanges in Culturad Human. DI. RE. Limphocytes. The journal of Heredity. 1982. 73: 224-226.. 18. VALLEJO RODRIGUEZ, R. Evaluación de la genotoxicidad del dicromato potásico en Allium cepa después de la adsorción por Chondracanthus chamissoi en columnas de lecho empacado. Universidad Nacional de Trujillo. Tesis para optar el título de Biólogo. Trujillo – Perú. 2009. 27. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(40) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 19. VERDE RODRÍGUEZ, T. Efecto del extracto acuoso de Cyperus rotundus a diferentes concentraciones y tiempos de exposición sobre el ciclo celular de Allium cepa. Universidad Nacional de Trujillo. Tesis para optar el título de Biólogo. Trujillo–Perú.. AC IÓ. N. 2009. 20. HOWARD, F.; FLANDERS. Reparación Inducible del DNA. En Anális Eds. El. UN IC. Cáncer p.p. 36-46. Libres de Investigación Científica. Prensa Científica. España.. M. 1982.. CO. 21. LODISH, H.; BERK, A.; ZIPURSKY, L.; MATSUDAIRA, P.; BALTIMORE, D.;. Y. DARNELL, J.; Biología Celular y Molecular. Cuarta Edición. Editorial Médica. IC. A. Panamericana. España. 2002.. RM. ÁT. 22. PANIAGUA, R.; NISTAL, M.; SESMA, P.; ALVAREZ – URCIA, M; FRAILE,. IN FO. B.; ANADÓN, R.; SÁENZ, F. Citología e Histología Vegetal y Animal. Tercera Edición. Editorial Mc. Graw – Hill. Interamericana. España. 2002.. DE. 23. JIMÉNEZ, L.; MERCHANT, H. Biología Celular y Molecular. Primera Edición.. AS. Editorial Pearson Ecuación. México. 2003.. EM. 24. KARP, G. BIOLOGÍA CELULAR Y MOLECULAR. Cuarta edición. Editorial. SI ST. Mc. Graw – Hill. Interamericana. España. 2005.. DE. 25. PURVES, W.; SADAVA, D.; ORINAS, G.; CRAIG, H. Vida la Ciencia de la. IO. N. Biología. Sexta edición. Editorial Médica Panamericana S.A. España. 2003.. CC. 26. RUIZ, M. A.; SOTELO, A. Chemical composition, nutritive value, and toxicology. RE. evaluation of Mexican Wild Lupinus. J. Agric. Food Chem, 2001. 49, 5336-5339.. DI. 27. PRIETO Z, FERNANDEZ R, LEÓN I, QUIJANO C, VALLEJO R. Genotoxicidad del dicromato de potasio en eritrocitos de sangre periférica de Oreochromis niloticus (Tilapia). Revista Concytec; 2008. 15(2): 217-226.. 28 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(41) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 28. ARÉVALO R, HORNA, C. "Estudio Fitoquímico y Ensayo Antiinflamatorio del extracto de raíz de la Especie Euphorbia Hipercifolia (Lecherita) en animales de Experimentación Oryctolages Cuniculus". Tes. Bach. Trujillo-Perú. UNT Fac.. AC IÓ. N. Farm. Y Bioq.1985. 29. MANZUR, W., AND ADLERCREUTZ, H.. Natural and anthropogenic. UN IC. environmental oestrogens: the scientific basis for risk assessment. Naturally. M. occurring oestrogens in food. Pure & Appl. Chem., 1998. Vol. 70, Nº 9, 1759-1776.. CO. 30. GROSS, R. Y TUESTA, L. El cultivo y la Utilización de los Lupinos. Perú:. Y. Instituto Interamericano de Cooperación para la Agricultura. Pp. 154 – 165. 1977.. IC. A. 31. BLOMH, H. Lupinus mutabilis In: Poisonous Plants of Venezuela. Cambridge. RM. ÁT. Harvard University. 39p. 1962.. IN FO. 32. BERMUDEZ, A., OLIVEIRA-MIRANDA, M. y VELAZQUEZ, D. La Investigación Etnobotánica Sobre Plantas Medicinales Vol.30. Caracas -. DE. Venezuela. 2005.. AS. 33. CARDICH, A. Vegetales y recolecta en Lauricocha. Algunas inferencias sobre. EM. asentamientos y subsistencia preagrícolas en los Andes Centrales. Relaciones de la. SI ST. Sociedad Argentina de Antropología 1976. 8: 27-47.. DE. 34. ALIMENTACIÓN SANA. La soya: Valor nutritivo y Alimentación. Disponible en:. N. http://www.alimentacion-sana.com.ar/informaciones/novedades/soja.htm. Mayo. 14. CC. IO. 2011.. RE. 35. CASTAÑEDA, B; MANRIQUE, R; IBÁÑEZ, L; GAMARRA, F; GALAÁN, L;. DI. QUISPE, H. Evaluación del efecto antiinflamatorio del Extracto Acuoso de las Semillas de Lupinus mutabilis Sweet (Chocho), en Animales de Experimentación. Rev. Horizonte Médico; vol. 2 No 1-2 Dic. 35-47. 2002.. 36. VELEZ, A. Fundamentos de Medicina. Corporación para investigaciones biológicas. V edición. Medellín, Colombia, pp. 455 – 461. 1996. 29 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(42) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 37. VELÁSQUEZ. Farmacología Básica y Clínica. 17a edición; editora médica Panamericana. España. 2005. 38. AVILA CAZORLA. Alcaloides del Lupinus mutabilis (desamargado del tarwi). AC IÓ. N. sobre los ácaros de la sarna de las alpacas. Instituto de Investigaciones para el Desarrollo Social del Altiplano. Universidad Nacional Técnica del Altiplano. Puno,. UN IC. Perú. 1982.. 39. CAMPANA, A. Contenido de Alcaloides en el grano de Tarwi. Perú: Instituto. CO. M. Interamericano de Cooperación para la Agricultura. pp. 303 – 305. 1988.. IC. importancia biológica. 2007. Vol. 71, pp. 54-56.. A. Y. 40. LUDUEÑA, B y col. Isoflavonas en soja, contenido de daidzeína y genisteína y su. RM. ÁT. 41. MURKIES, A., WILCOX, G. AND DAVIS, S. Phytoestrogens. J. of Clin.. IN FO. Endocrinology & Metabolism. 1998. Vol. 83, No. 2, 297- 303. 42. LAMARTINIERE, C., COTRONEO, M., FRITZ, W., WANG, J., MENTOR-. DE. MARCEL, R. and ELGAVISH A. Genistein chemoprevention: Timing and. AS. mechanisms of action in Murine Mammary and Prostate. J. Nutr. 2002.. EM. 43. FALLO, F. Manual de Fisiología, Patología Post - Cosecha y Control de Calidad de. SI ST. Frutas y Hortalizas. II Edición Armenia, Colombia. Pp. 189 – 230. 1997.. DE. 44. DÍAZ RETO, A. Efecto protector de Glycine max sobre la citotoxicidad y. N. genotoxicidad del dicromato de potasio en meristemos radiculares de Allium cepa.. CC. IO. Tesis para obtener el Título de Biólogo. UNT. Perú. 2011. RE. 45. TJIO Y LEVAN. The use of oxiquinolone in chomosome analisis. Analysis. Ann.. DI. Estac. Expti. Aula Dei. 2:21 – 64. 1950.. 46. STEEL, R Y J. TORRIE. Bioestadística: Principios y Procedimientos. 2da edición. Editorial Mc. Graw Hill S.A. México. 1993. 47. STATGRAPHICS CENTURION 16.1.15. Versión de prueba para Windows. [Citado: Febrero 2012]. Disponible en: http://statgraphics.softonic.com/. 30 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(43) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 48. SHIMOTOHNO, A.; MATSUBAYASHI, S.; YAMAGUCHI, M.; UCHIMYA, H.; UMEDA. Differential phosphorylation activities of CDK – activating Kinases in Arabidopsis thaliana. FEBS Lett. 534. 2003.. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. AS. DE. IN FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. M. UN IC. AC IÓ. N. 49. ITO, M.; Factors controlling cyclin B expresion .Plant Mol. Biol. 2000. 43: 677-. 31 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(44) IC. A. Y. CO. M. UN IC. AC IÓ. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. AS. DE. IN FO. RM. ÁT. ANEXOS. 32 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(45) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. EM. AS. DE. IN FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. M. UN IC. AC IÓ. N. ANEXO 1. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. Figura 8. Semillas de Lupinus mutabilis “chocho”. 33 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(46) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. ANEXO 2. Y. CO. M. UN IC. AC IÓ. N. Obtención de polvillo de semillas de Lupinus mutabilis “chocho”. (b). AS. DE. IN FO. RM. ÁT. IC. A. (a). (d). DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. (c). (e). Figura 9. (a) Semillas de L. mutabilis “chocho” se hirvieron. (b) Desaguado de semillas de L. mutabilis “chocho”. (c) Secado de semillas de L. mutabilis a 40ºC - 72 h. (d) Triturado de las semillas. (e) Polvillo de L. mutabilis “chocho”. 34 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(47) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. ANEXO 3. CO. M. UN IC. AC IÓ. N. Preparación del extracto etanólico(70º) al 20% de semillas de L. mutabilis. (b). AS. DE. IN FO. RM. ÁT. IC. A. Y. (a). (d). RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. (c). DI. (e). Figura 10. (a) Pesado de 20g del polvillo de semillas de L. mutabilis (b) Dilución en 100 ml. Alcohol de 70º. (c) Filtrado de la solución - 2 veces. (d) Separar 5ml./ crisol. (e) Secado a 40ºC 5ml./ crisol y obtención de peso promedio.. 35 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(48) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. ANEXO 4. UN IC. 5ml. 1ml.. Y mg = Xw / 5 = Z ¿? ml. 1 ml.. A. Y. CO. mg de extracto seco Z. M. Xw mg de extracto seco Ymg. AC IÓ. N. Xw = peso seco promedio. RM. ÁT. IC. Entonces:. AS. DE. IN FO. ¿? ml. = (100, 200,300) mg de extracto seco / Z. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. Figura 11. Obtención del extracto etanólico (70º) seco al 20% de semillas de L. mutabilis. 36 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(49) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. IN FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. M. UN IC. AC IÓ. N. ANEXO 5. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. AS. DE. Figura 12. Acondicionamiento de material biológico. 37 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(50) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. ANEXO 6. M. UN IC. AC IÓ. N. Obtención de preparados citológicos. (b). IN FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. (a). (d). IO. N. DE. SI ST. EM. AS. DE. (c). (f). CC. (e). DI. RE. Figura 12. (a) Raicillas en una luna de reloj. (b) Orceína – Hcl a las raicillas. (c) Prueba de los tres humos. (d) Reposar por un lapso de 30minutos. (e) Se realizó el “squash” (aplastamiento). (f) Observación en microscopio compuesto con el objetivo de 100x. 38 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

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