Desarrollo de una crema a base de extracto hidroalcohólico de Spinacia oleracea L “espinaca” y evaluación in vitro de su actividad fotoprotectora
68
0
0
Texto completo
(2) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. DEDICATORIA. Esta tesis principalmente se la dedico a Dios todo poderoso por ser luz en este largo camino, por amarme, sobre todo perdonarme y cuidarme en todo. O Q. UI. M. IC. A. momento.. BI. A mis padres Vicente y Socorro, por ser. IA. Y. ejemplo de trabajo y lucha, por su apoyo. AC. incondicional, por confiar en mí en todo. toda mi familia por su comprensión y motivación para llegar a la realización de una de mis metas trazadas en mi vida profesional. BI. BL. IO TE. CA. DE. FA R. M. momento. A mis hermanas karol, lucia y a. A mi asesora Dra. Carmen Ayala Jara por su orientación especializada en la elaboración de esta tesis.. SUSAN NUREÑA. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(3) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. A Dios Por permitirme el haber llegado hasta este momento tan importante de mi formación profesional y por haber puesto en mi camino a aquellas personas que han sido mi soporte y compañía durante. UI. O Q. Mi madre Edita. M. IC. A. todo el periodo de estudio.. BI. Por darme la vida, quererme mucho, creer en mí. M. AC. IA. Y. y porque siempre me apoyaste.. FA R. A mi padre Ernesto. DE. Por los ejemplos de perseverancia y. CA. constancia que lo caracterizan y por el. BI. BL. IO TE. valor mostrado para salir adelante.. A Mi hermana Claudia Por estar conmigo y apoyarme siempre.. GIULIANA PESANTES. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(4) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. AGRADECIMIENTO. Agradezco a Dios todo poderoso por darme fortaleza y guiarme con su amor infinito para culminar esta etapa de mi. M. IC. A. vida profesional.. UI. Agradezco a mis padres Vicente y Socorro, a. O Q. mis hermanas karol y lucia por acompañarme. BI. y apoyarme incondicionalmente día a día en. FA R. M. AC. IA. Y. este camino.. DE. Agradezco a la Dra. Carmen Ayala y profesor Roger Rengifo por su ayuda. IO TE. investigación.. CA. desinteresada en la ejecución de esta. A Ivan Cruzado por el apoyo, cariño y por. BL. enseñarme a mejorar como persona, a mis. BI. compañeras que aportaron sobre mis dudas e inquietudes.. SUSAN NUREÑA. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(5) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Le agradezco a Dios y a la Virgen de la Puerta. por. haberme. guiado. y. acompañado en este proceso de mi profesión y darme las fuerzas para salir. IC. A. adelante y nunca rendirme.. M. Agradezco a mis padres y a mi hermana, por su. O Q. UI. paciencia, comprensión y apoyo durante mis. M. AC. IA. Y. BI. estudios.. FA R. Agradezco a mi asesora Dra. Carmen por su orientación y atención a mis consultas, el. material. facilitado. y. DE. por. BI. BL. IO TE. CA. sugerencias recibidas.. las. GIULIANA PESANTES. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(6) BI. BL. IO TE. CA. DE. FA R. M. AC. IA. Y. BI. O Q. UI. M. IC. A. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(7) BI. BL. IO TE. CA. DE. FA R. M. AC. IA. Y. BI. O Q. UI. M. IC. A. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(8) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. RESUMEN. El presente trabajo tuvo como objetivo desarrollar una crema a base de extracto hidroalcohólico de Spinacia oleracea L. y evaluar in vitro su actividad fotoprotectora. Se inició el estudio con la recolección de las hojas de Spinacia oleracea L. “espinaca” de la Merced, distrito de Carhuaz, provincia de Huaraz, departamento de Ancash por el método. A. de herborización. El extracto se obtuvo por el método de percolación usando como solvente. M. IC. etanol de 70°GL, según la metodología descrito por Sayre y por Mansur et al. El FPS de la. O Q. UI. crema fotoprotectora solar a concentraciones de 1,25%, 2,5% y 5% del extracto fue de 10,96,. BI. 20,65 y 28,64, respectivamente. Obteniendo controles de calidad organolépticos,. IA. Y. fisicoquímicos y microbiológicos, estuvieron dentro de los rangos permitidos. Se concluye. AC. que la crema desarrollada a base de extracto hidroalcohólico de Spinacia oleracea L. a. FA R. M. concentraciónes de 2,5 % y 5% tuvieron FPS alto según COLIPA, eligiendo la de 5% para. DE. una mejor protección.. BI. BL. IO TE. CA. Palabra clave: Spinacia oleracea L., factor de protección solar, crema fotoprotectora.. i Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(9) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ABSTRACT. The objective of this work was to develop a cream based on the hydroalcoholic extract of Spinacia oleracea L. and to evaluate its photoprotective activity in vitro. The study began with the collection of the leaves of Spinacia oleracea L. "spinach" from La Merced, Carhuaz district, province of Huaraz, department of Ancash by the herborization method. The extract. A. was obtained by the percolation method using as solvent ethanol 70 ° GL, according to the. M. IC. methodology described by Sayre and by Mansur et al. The SPF of the sunscreen cream at. O Q. UI. concentrations of 1,25%, 2,5% and 5% of the extract was 10,96, 20,65 and 28,64,. BI. respectively. Obtaining organoleptic, physicochemical and microbiological quality controls,. IA. Y. they were within the allowed ranges, obtaining a quality cream. It is concluded that the cream. AC. developed based on hydroalcoholic extract of Spinacia oleracea L. at a concentration of 2,5%. FA R. M. and 5% had high SPF according to COLIPA, choosing the 5% for better protection.. BI. BL. IO TE. CA. DE. Keyword: Spinacia oleracea L., sun protection factor, photoprotective cream.. ii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(10) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ÍNDICE. Pag. RESUMEN…………………………………………………………………………. i ABSTRACT……………………………………………………………………...... ii INTRODUCCIÓN……………………………………………..………..1. II.. MATERIAL Y MÉTODO………………………………………….......11. III.. RESULTADOS………………………………………………………....24. IV.. DISCUSIÓN…………………………………………………………….34. V.. CONCLUSIÓN……………………………………………….…………38. VI.. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS…………………………………..39. VII.. ANEXOS……………………………………………………...…………45. BI. BL. IO TE. CA. DE. FA R. M. AC. IA. Y. BI. O Q. UI. M. IC. A. I.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(11) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. I.. INTRODUCCIÓN. A comienzo del siglo XIX, Johannes Ritter descubrió que el sol, además de la luz visible, emite una radiación “invisible” de longitud de onda más corta que el azul y el violeta. Esa banda recibió el nombre de “ultravioleta”, dividida en tres subregiones: UV-A, que es la continuación de la radiación visible y es responsable del bronceado de la piel. Su longitud. A. de onda varía entre 400 y 320 nm (1 nanómetro nm= 10^9 m). UV-B: llega a la Tierra muy. M. IC. atenuada por la capa de ozono. Es llamada también UV biológica, varía entre 280 y 320 nm. O Q. UI. y es muy peligrosa para la vida y, sobre todo, para la salud humana, en caso de exposiciones. BI. prolongadas (cáncer de piel, melanoma, catarata, debilitamiento del sistema inmunológico).. IA. Y. Representa sólo el 5% de la UV y el 0.25% de toda la radiación solar que llega a la superficie. AC. de la Tierra. UV-C: es la más peligrosa para el hombre, pero afortunadamente es absorbida. FA R. M. totalmente por la atmósfera. En este sentido, la intensidad de la radiación ultravioleta que llega a la tierra depende de la hora del día y la época del año (ambos factores determinan la 1. CA. DE. altura del sol y, por ende, la inclinación de los rayos solares).. IO TE. De la latitud (la RUV es más intensa entre el ecuador y los trópicos), en relación a la altura. BL. (que se incrementa con la altura), del espesor de la capa de ozono (a mayor concentración. BI. de O3 menor radiación UV-B), del clima (en un día nublado se recibe en general menos radiación que en un día soleado), de la contaminación atmosférica (mayor contaminación, menor radiación), del horizonte (a más amplios horizontes corresponde mayor radiación) y del “albedo”, o capacidad reflectiva de la superficie (la nieve y el agua reflejan la RUV más que el pasto).2. Según la OMS la radiación ultravioleta (UV) son radiaciones electromagnéticas con longitudes de onda entre 100 y 400 nm, estos rayos UV no penetran la superficie terrestre. 1 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(12) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. con la misma intensidad debido a la existencia de la capa de ozono, componente de la atmósfera que permite preservar la vida sobre la tierra y actúa como escudo para protegerla de la radiación ultravioleta-B perjudicial para la vida humana, el ecosistema terrestre y marino. 3. El ozono se encuentra disperso en la estratósfera (de 15 a 50 Km) sobre la superficie de la tierra, distribuye la energía del sol y su función radica en absorber los rayos UV en un 97%.. IC. A. La radiación solar, dentro del espectro de la radiación ultravioleta, emite 8 radiaciones de. UI. M. tres tipos: UVA, UVB, UVC. El tipo UVC es absorbido por la capa de ozono, los tipos UVA. BI. O Q. y UVB llegan a la superficie y producen distintos efectos en los seres vivos. 2. IA. Y. El avance de la tecnología, el aumento de la población mundial y el incremento de la basura,. AC. producen lo que se conoce como contaminación ambiental, suceso que es provocado por la. FA R. M. actividad humana y que por medio de sus reacciones químicas emite gases como el dióxido de carbono y el metano. Los gases de la atmosfera retienen la energía de la superficie. DE. terrestre que ha sido calentada por el sol y sumados a la contaminación elevan la temperatura. CA. produciendo un adelgazamiento del 10% de espesor en la capa de ozono, por lo tanto, los. BL. IO TE. índices de rayos UV se elevan a niveles superiores.4. BI. La radiación ultravioleta tiene efectos beneficiosos para el organismo, ya que participa en el metabolismo de las vitaminas A y D, lo que contribuye a la formación y consolidación de los huesos y dientes. Pero la exposición a la luz solar voluntaria o involuntaria en exceso (mayor de 30 minutos) puede ser perjudicial para el ser humano, en especial a los ojos y a la piel; así también al ciclo vegetativo de las plantas.5. 2 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(13) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. En América Latina el Perú ocupa el primer lugar en radiación UV, en segundo lugar, Bolivia seguido de Argentina y Chile. En el Perú la radiación ultravioleta se ha incrementado debido al adelgazamiento de la capa de ozono. 4. Según el Servicio Nacional de Meteorología e Hidrología del Perú (SENAMHI 2016), estableció niveles “muy altos y extremos” en Costa de Piura donde la radiación solar llegó a 12 puntos UV y Tumbes a “extremo” en la sierra de la región influenciados por los niveles. IC. A. altitudinales CON 13.7 UV.5. UI. M. La fotoprotección se define como un conjunto de medidas que previenen el daño que la. O Q. radiación ultravioleta (UV) provoca en la piel, esta forma parte del espectro. Y. BI. electromagnético comprendido entre los 200 y 400 nm. La exposición aguda a la radiación. IA. ultravioleta produce eritema, quemaduras, fotoqueratitis y fotoconjuntivitis; mientras que. M. AC. sus efectos a largo plazo son el fotoenvejecimiento y la carcinogénesis. 5,6. FA R. Los rayos ultravioletas actúan sobre el oxígeno contenido en la piel y provocan la formación. DE. de radicales libre oxígeno, La característica más importante de los radicales libres es su. CA. capacidad para inducir las reacciones en cadena en la mayor parte de los tejidos vivos. Los. IO TE. radicales libres tienen cuatro blancos que estarán implicados en el inicio de la patología más o menos a largo plazo que son los lípidos de las membranas celulares, los ácidos nucleicos. BI. BL. (ADN, ARN), las proteínas y los hidratos de carbono.7 La foto carcinogénesis se conoce como la relevancia de la exposición a la luz solar con relación al cáncer de piel entendida como la inducción de lesiones precancerosas y carcinomas, siendo la radiación UV el factor carcinogénico de la luz solar, estas inducen alteraciones genéticas en los queratinocitos, conduciendo a la transformación neoplásica, debido a que deprime las respuestas inmunes en la piel que permite el crecimiento de tumores; el cáncer cutáneo no melanocitico se relaciona con la exposición total acumulada. 3 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(14) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. mientras que en el caso de los melanomas es mayor con la exposición intensa e intermitente típicas del verano.8. La elección de un adecuado fotoprotector solar resulta indispensable tener en cuenta que es el producto más empleado para prevenir los efectos nocivos que el sol ejerce sobre nuestra piel a corto y largo plazo. Un fotoprotector está compuesto por tres tipos distintos de filtros. A. solares: filtros físicos o pantallas minerales; filtros químicos y pantallas orgánicas; filtros. M. IC. solares biológicos; Cada uno de estos grupos de filtros se caracterizan por una serie de. O Q. UI. propiedades que los hacen más o menos apropiados en función del tipo de piel, el fototipo. BI. de la persona y las condiciones de exposición solar. Los fotoprotectores, contienen uno, dos. IA. Y. o incluso combinan tres tipos de filtros solares. 9. M. AC. Los filtros solares son compuestos químicos, minerales o biológicos que tienen la propiedad. FA R. de reflejar, absorber o difractar los rayos solares, protegiendo así nuestra piel de los efectos. DE. nocivos del sol. Los primeros filtros solares fueron concebidos para la protección frente al. CA. eritema y las quemaduras producidos por los rayos UVB. Actualmente ya se han. IO TE. desarrollado filtros UVA, pues se revelaron como los más directos responsables del. BL. fotoenvejecimiento cutáneo y de las mutaciones genéticas de las células del epitelio.. BI. Encontramos fórmulas con combinaciones de filtros que protegen de una gran parte del abanico de radiaciones UV e IR. Al clasificar los filtros solares más utilizados cabe distinguir entre filtros: 8,9. Hoy en día encontramos filtros solares inorgánicos y/o físicos como el dióxido de titanio (TiO2) y el óxido de zinc (ZnO). Sus características los hacen idóneos en distintos casos, como los siguientes: son sustancias inertes (pigmentos de origen mineral) cuyo mecanismo de acción consiste en la reflexión de la radiación solar, actúan como eficientes pantallas que. 4 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(15) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. impiden el paso de los rayos ultravioleta e infrarrojos. una ventaja importante respecto al resto ya que al no ser absorbidos y al no penetrar a través de la piel poseen una alta tolerancia cutánea y en raras ocasiones producen alergias. Por otro lado, su principal inconveniente es su cosmética, estos filtros suelen dejar, aunque fina, una capa de color blanco sobre la piel. 9. Son partículas pequeñas, con tamaño entre 20-150 nm. Para obtener la máxima eficacia de estas sustancias, deberían utilizarse en emulsión y colocarse en la fase oleosa de ésta; lo ideal. IC. A. es la combinación de ambas sustancias pues se complementan en su efecto fotoprotector ya. UI. M. que el ZnO absorbe la radiación UV, hasta los 380 nm, mientras que el TiO2 absorbe. O Q. predominantemente UVB y dispersa UVA en menor grado.10. Y. BI. Los filtros orgánicos y/o químicos más empelados en la actualidad pueden estar solos o en. IA. mezclados entre sí y también mezclados con los filtros solares inorgánicos como: ácido. M. AC. paraaminobenzoico (PABA), ésteres, benzofenonas, cinamatos y salicilatos entre otros. Son. FA R. sustancias compuestas por moléculas orgánicas con grupos cromóforos en la región UV, ya. DE. que poseen electrones poco ligados; siendo una de sus ventajasobtener fotoprotectores de. CA. mejor textura y sensación agradable, siendo esto los más utilizados, pero al ser absorbidos. IO TE. presentan riesgos de intolerancia, por ello no están recomendados en niños, pieles lesionadas donde exista riesgo de absorción (cicatrices recientes, quemaduras, tratamientos post-láser). BI. BL. y pieles intolerantes.9,10. La acción fotoprotectora de los filtros se debe a su capacidad de absorber los UV, impidiendo la transmisión de la radiación hacia los tejidos subyacentes y evitando así cualquier efecto nocivo. Los formados por sustancias químicas absorben selectivamente las radiaciones solares en función de su composición y las convierten en otro tipo de energía inofensiva para la piel. 10. 5 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(16) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Los filtros biológicos también llamados “Activos antioxidantes” evitan la formación de radicales libres y completan las acciones de otros filtros, estableciendo sinergias. Los más utilizados son: Vitamina A, E y C, zinc, magnesio y flavonoides. Dos vitaminas antioxidantes son ampliamente usadas en productos cosméticos y solares la vitamina C y la vitamina E ambas combaten los radicales libres y así actúan contra el envejecimiento cutáneo y los canceres fotoinducidos, los cuales son consecuencias posibles a largo plazo, de la. M. IC. A. exposición prolongada al sol. 9,10. O Q. UI. La vitamina E es liposoluble su hidrofobicidad explica su tendencia a estar concentrada en. BI. el interior de las membranas. Esta situación estratégica es importante para combatir los. IA. Y. ataques por radicales libres sobre los lípidos de las membranas, los ataques de estos lípidos. AC. por los radicales libres implica una peroxidación lipídica en el origen de la formación de. FA R. M. radicales libres peroxi, que, por las reacciones en cadena, pueden atacar a otros lípidos de la membrana intactos. También puede reaccionar con estos radicales peroxi. Esta interrumpe. DE. así la reacción en cadena de lipoperoxidación actuando como un antioxidante en las. CA. membranas durante esta reacción, la vitamina E es transformada en radical, por otro lado se. IO TE. ha demostrado que la vitamina C se transforma en radical de la vitamina E, en forma activa.. BL. Este proceso ocurre en la superficie de la membrana ya que la vitamina C, molécula. BI. hidrosoluble, no puede entrar en la membrana lipofílica. 11. La vitamina E no protege tan solo la membrana después de la iniciación de la lipoperoxidación, si no que capta también los radicales libres antes de que ellos ataquen la membrana. Aplicadas en la piel, el contenido en vitamina E aumenta significativamente en la epidermis y se puede medir hasta 24 horas después de su aplicación. Así, en la epidermis se ha encontrado un aumento de la vitamina E, que puede llegar a ser de hasta 14 veces el. 6 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(17) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. incremento en la concentración en la piel de vitamina C, ha sido medido aumentando hasta 4 veces. Esta tiene además un efecto de reserva que persiste durante 3 días incluso aun si se lava.10, 11. Los compuestos vegetales que se pueden utilizar como filtros solares tienen la capacidad de absorber diferentes radiaciones, pero normalmente se formulan asociados con otros componentes orgánicos y/o inorgánicos para asegurar la eficacia filtrante del fotoprotector.. IC. A. Evidentemente, dichos compuestos deben cumplir las características del filtro solar, es decir,. UI. M. han de presentar un amplio espectro de absorción de la radiación UV, han de ser estables en. O Q. las condiciones normales de uso y fabricación de cosméticos y deben ser compatibles con. Y. BI. los excipientes y el material de acondicionamiento de los productos utilizados en las líneas. AC. IA. solares. Además, deben ser atóxicos.12. FA R. M. Dentro de los compuestos de origen vegetal que presentan estas características, algunos de los más comunes actualmente son el aceite de coco, la manteca de karité y el gel de aloe. DE. vera. Estos compuestos además aportan la ventaja del efecto emoliente, calmante, tal es el. IO TE. CA. caso de la Spinacia oleracea L. “espinaca”.8. BL. La Spinacia oleracea L. “espinaca” es originaria del Sudeste de Asía, se cultiva de forma. BI. extensiva durante la primavera y el otoño en el Norte de los Estados Unidos, durante finales de otoño, invierno y comienzos de primavera, también la espinaca fue cultivada por los árabes, estos la llevaron a España, donde se extendió a otras partes del mundo, fue introducida en Europa alrededor del año 1.000 d.C. procedente de regiones asiáticas, pero únicamente a partir del siglo XVIII comenzó a difundirse por Europa principalmente en Holanda, Inglaterra y Francia; se cultivó después en otros países y más tarde pasó a América. Siendo china el mayor productor mundial. 7. 7 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(18) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. La palabra espinaca viene de la palabra española Hispania. Pertenece a la familia de la Chenopodiaceae genero Spinacia y especie oleracea. Es una planta con raíz pivotante, poco ramificada y de desarrollo superficial, que forma una roseta de hojas pecioladas, con un limbo que puede ser más o menos sagitado, triangular-ovalado o triangular acuminado, de márgenes enteros o sinuosos y de aspecto blando, rizado, liso o abollado. La planta puede alcanzar los 15 a 25 cm de altura antes de desarrollar un escapo floral. Se adapta a climas. A. frescos, crece rápido en temperaturas de 15 a 18°C, no tolera calor en exceso. Existen plantas. M. IC. masculinas, femeninas e incluso hermafroditas, que se diferencian fácilmente, ya que las. O Q. UI. femeninas poseen un mayor número de hojas basales, tardean en desarrollar la semilla y por. BI. ello son más productivas. Es una especie sumamente exigente ya que prefiere terrenos. Y. fértiles y suelos limosos, arenosos, sueltos y con buen drenaje crece a una altitud de 1800 a. M. AC. IA. 2800 msnm. 11,14. FA R. La espinaca es una hortaliza con un elevado valor nutricional y regulador, debido a su alto. DE. contenido de agua, fibra, vitaminas y minerales, es baja en calorías, es una fuente rica en. CA. vitamina A, vitamina C, vitamina E, vitamina K, vitamina B1, vitamina B2, vitamina B3,. IO TE. vitamina B6, hierro, calcio, ácido fólico, potasio, magnesio, manganeso, cobre, fosforo, zinc, selenio, betaina, beta-caroteno, bioflavonoides y ácidos grasos omega 3. En la planta. BI. BL. encontramos unos de los antioxidantes más potentes como es el ácido alfa-lipoico.15, 16. Existen estudios donde evalúan la actividad fotoprotectora como es el caso de los autores Soares, G. et al col (2009) analizaron la actividad fotoprotectora del producto por análisis in vitro del factor de protección solar (FPS) de formulaciones tópicas con extracto hidroalcohólico de propóleo verde con espectrofotómetro para lecturas en la región del UVB. Dando como resultado una acción fotoprotectora positiva, e incluso mucho mayor que en formulaciones naturales con plantas y algas17. 8 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(19) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Doroteo, V et al col (2012) evaluaron las actividades antioxidante, antielastasa, anticolagenasa y fotoprotectora in vitro myrciaria dubia (camu camu) y caesalpinia spinosa (tara) mostrando una buena actividad antioxidante en diferentes ensayos in vitro; asimismo, inhibe la enzima colagenasa con mayor potencia que el control positivo epigalocatequina galato asi mismo el extracto hidroalcohólico de camu camu, no mostró una actividad. A. antioxidante relevante; en cambio, en un cultivo de fibroblastos 3T3 determinaron que ejerce. UI. M. IC. un buen efecto protector in vitro (43,6%) contra la radiación UV- B.18. O Q. Cazorla (2013) comprobó de la actividad fotoprotectora in vivo, con efecto sinérgico de las. Y. BI. cremas a partir de hojas de Maracuyá (P. edulis), Ishpingo (O. quixos), con el método de. IA. observación y experimentación científica de las sustancias de interés. M. AC. El estudio in vivo lo realizaron en voluntarios con tipo de piel III con protector basándonos. FA R. en el método de eficacia en productos solares COLIPA, Concluyeron que las cremas. DE. presentaron actividades fotoprotectoras pero no existió un efecto sinérgico. 19. CA. Inocente, M. et al col (2014) evaluaron la actividad antioxidante y fotoprotectora in vitro de. IO TE. una loción y un gel elaborados con extracto estabilizado de los frutos de camu camu. BL. (Myrciaria dubia Kunth), lo cual se determinó la actividad antioxidante por el método de. BI. DPPH y ABTS, concluyendo que ambas formulaciones muestran actividad antioxidante y factor de protección solar acorde a las exigencias normativas. 20. Alayo, W & Fiestas, R (2016) determinaron el factor de protección solar del extracto hidroalcohólico de las hojas de Piper aduncum “matico”. Para poder analizar la capacidad fotoprotectora, recolectaron las hojas de Piper aduncum “matico”, el extracto lo obtuvieron por el método de Soxhlet usando como solvente etanol de 70°GL hasta agotamiento de la droga, las muestras de extracto se analizaron en el espectrofotómetro midiéndose las 9 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(20) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. absorbancias por triplicado en la región de la radiación UVB (290-320 nm), principal responsable por los foto-daños cutáneos, según la metodología de comprobación de FPS in vitro descrita por Sayre y por Mansur et al. Quienes en base al efecto eritemogénico (EE) y la intensidad de la radiación (I) calcularon el factor de protección solar in vitro, concluyendo que el Factor de Protección Solar promedio de las muestras es 9,32. 21 En los seres humanos el alto índice de exposición a la UV, produce diversas afecciones, como. A. eritema, foto-envejecimiento, foto-carcinogénesis, entre otras. En el caso de las plantas, éstas. M. IC. han generado diversos mecanismos de foto-protección, uno de ellos es la síntesis de metabolitos. O Q. UI. secundarios tales como los carotenoides, micosporinas, y polifenoles, que les ha permitido usar. BI. la región visible del espectro electromagnético para la fotosíntesis y eliminar la. IA. Y. radiación UV perjudicial.. AC. Por tal razón el propósito del presente trabajo es desarrollar una crema fotoprotectora a base de. FA R. M. hojas de Spinacia oleracea L. “espinaca” con el fin de proteger la radiación elevada que existe. prevenir el cáncer de piel.. DE. en nuestro continente a la vez evaluar productos naturales que con el tiempo nos permitirá. CA. Los profesionales Químicos Farmacéuticos cumple un rol fundamental en el área de la. IO TE. tecnología cosmética, mediante lo cual se permitirá contribuir con los conocimientos científicos. BL. y hacer extensivo las propiedades de nuestras especies para fomentar su uso y aprovechamiento. BI. como una estrategia de prevención. Teniendo como objetivo principal Desarrollar una crema a base de extracto hidroalcohólico de hojas de Spinacia oleracea L. “espinaca” y evaluar su efecto fotoprotector in vitro como objetivos específicos, Desarrollar una crema a base de extracto hidroalcohólico de hojas de Spinacia oleracea L. “espinaca” y Evaluar el efecto fotoprotector in vitro de la crema desarrollada a base de extracto hidroalcohólico de hojas de Spinacia oleracea L. “espinaca”.. 10 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(21) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. II.. MATERIAL Y MÉTODO. 2.1. MATERIAL DE ESTUDIO 2.1.1 Material Botánico 2000 g de hojas Spinacia oleracea L. “espinaca” procedentes del distrito de. A. carhuaz, provincia de Huaraz, departamento Ancash, en el mes de abril del 2019.. IA. Equipos:. Balanza analítica OHAUS GA-200. -. Balanza común OHAUS U.S.PAT. Serie NO.2729439. -. Baño María PRECISTERM S-140. M. FA R. DE. Estufa MEMMERT TYP U-40. BI. BL. IO TE. -. AC. -. CA. •. Y. De uso común en el laboratorio.. O Q. Material de vidrio y otros:. BI. •. UI. M. IC. 2.1.2. Material de Laboratorio. •. -. Refrigerador marca COLDEX.. -. Espectrofotómetro marca HP serie: 8450 con arreglo de diodos.. -. percolador. MATERIAL QUÍMICO -. Agua destilada. -. Alcohol de 70°GL. -. HCl concentrado. -. NH4OH. -. Cloroformo 11. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(22) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. FeCl3 al 1%. -. NaCl 1%. -. KOH 0,5%,. -. Ácido acético. -. 3 virutas de Magnesio. -. Éter de petróleo. MATERIAL MICROBIOLOGICO Agar de recuento en placa (PCA). -. Agar Baird parker. -. Agar Cetrimide (OGA). -. Solucion salina peptonada. -. Caldo lauril sulfato. -. Caldo lactosado. -. Caldo selenito-cistina. -. Asas bacteriológicas esteriles. FA R. M. AC. IA. Y. BI. O Q. UI. M. IC. A. -. IO TE. 2.2. MÉTODO:. CA. DE. •. -. BI. BL. 2.2.1. Recolección de la materia prima:. Recolección y selección de la especie vegetal: Se utilizó las hojas de Spinacia oleracea L. “espinaca”, procedentes del distrito de carhuaz, situada en altitud 2688 msnm, del Departamento de Ancash, en el mes de abril del 2019.. 12 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(23) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.2.2. Identificación de la especie: Las hojas de Spinacia oleracea L. “espinaca” procedentes del distrito de carhuaz,, fueron llevadas al Herbario Truxillense (HUT) de la Universidad Nacional de Trujillo, para su identificación y depósito, el cual tiene como código de registro N° 59864 (anexo fig.1).. IC. A. 2.2.3. Preparación de la muestra. O Q. UI. M. Selección y lavado de la muestra:. BI. En esta etapa se descartó toda parte de la muestra que no reunió las condiciones. IA. Y. necesarias para su utilización como son las materias extrañas y se seleccionó las. DE. Secado de la droga:. FA R. M. finalmente con agua destilada.. AC. mejores, luego se procedió a lavar el material vegetal con agua potable a chorro y. CA. Las hojas de Spinacia oleracea L. “espinaca” se secaron sobre papel craft. IO TE. separadas unas de otras por 48 horas a temperatura ambiente en un lugar seco y. BI. BL. fresco y luego durante 24 horas a estufa a 40°C, utilizando bolsas de papel craft.. Molienda: Las hojas de Spinacia oleracea L. “espinaca” se molieron en el mortero de porcelana hasta reducir a polvo.. 13 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(24) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Tamizado: El polvo de las hojas de Spinacia oleracea L. “espinaca” se pasaron por un tamiz de número de malla Nº 0,75.. El producto obtenido se guardó herméticamente en frascos de vidrio de boca ancha y aislada de la luz hasta el momento de la extracción.. M. IC. A. 2.2.4. Obtención del extracto: 22. O Q. UI. Se pesó 100 g de polvo de Spinacia oleracea L. “espinaca”, al cual se le añadió. BI. 40 ml de etanol de 70°GL, dejándolo humectar por 10 min. Se colocó la droga. IA. Y. humectada en el equipo de percolación y se añadió 600 mL de etanol de 70° GL. AC. dejándolo macerar en un periodo de 24 horas a temperatura ambiente y aislada de. FA R. M. la luz hasta el momento de la extracción. Pasado el periodo de maceración se procedió a percolar a velocidad constante de 10-20 gotas/ min, eliminando los 100. DE. primeros mililitros, se recolecto 375 mL lo cual fue guardado en un frasco ámbar.. CA. Se continuó con la percolación agregando 400 mL del mismo solvente,. IO TE. recolectando 325 mL, finalmente se adiciono 200 mL del solvente, recolectándose. BL. todo el volumen del percolado. El volumen total del extracto obtenido fue de 1000. BI. mL y se concentró hasta la cuarta parte (250 mL). Este procedimiento se repitió por duplicado, de los 250 mL se midió 100 mL a un vaso de precipitación y se concentró hasta 10 mL; un volumen del extracto concentrado se llevó a sequedad en la estufa a 40°C para determinar los mg de extracto seco/mL de extracto.. 2.2.5. Control de calidad del extracto hidroalcoholico de Spinacia oleracea L. “espinaca”. 14 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(25) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. a. Organoléptico: Para evaluar el comportamiento de estas características, se observó cada 2 días diferencias notables en el color, olor, sensación al tacto y homogeneidad que indiquen cualquier tipo de alteración valorable en el extracto. Durante los 10 días siguientes.. IC. A. b. Farmacognósticos: Determinación de metabolitos secundarios 23. UI. M. Ensayos en extracto etanólico. Y. BI. de solución de tricloruro férrico al 5%.. O Q. • Ensayo de Cloruro férrico: Se midió 2 mL del extracto y se agregó III gota. AC. IA. Reacción: La reacción se consideró positiva con la aparición de coloración. M. rojo-vino indicó compuestos fenólicos en general, la aparición de coloración. FA R. azul indicó la presencia de taninos pirogalotánicos y la aparición de color. DE. verde intenso indicó la presencia de taninos tipo pirocatecólicos.. CA. • Ensayo de Liebermann-Burchart: Se midió 2 mL del extracto, se evaporó. IO TE. hasta extracto blando y se redisolvió en 1 mL de cloroformo. Se agregó 1. BL. mL de anhídrido acético y luego II gotas de ácido sulfúrico concentrado.. BI. Reacción: La reacción se consideró positiva con los cambios de coloración, rosado – azul (muy rápido), verde intenso – visible (rápido), verde oscuro (final de reacción), la cual nos indicó la presencia de esteroides.. • Ensayo de Ninhidrina: Se midió 2 mL del extracto y se agregó 2 mL de solución de ninhidrina al 2%. La mezcla se calentó 5-10 minutos en baño maria.. 15 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(26) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Reacción: La reacción se consideró positiva con la aparición de un color azul violáceo, la cual nos indicó la presencia de aminoácidos. • Ensayo de Resinas: Se midió 2 mL del extracto y se adicionó 10 mL de agua destilada. Reacción: La reacción se consideró positiva con la aparición de un precipitado.. M. IC. A. • Ensayo de Fehling: Se midió 2 mL del extracto, se evaporó hasta extracto. UI. blando, y se redisolvió en 1-2 mL de agua, se agregó 2 mL del reactivo y se. BI. O Q. calentó 5-10 min en baño maria.. Y. Reacción: La reacción se consideró positiva con la aparición de un color. AC. IA. rojo o precipitado rojo, lo cual nos indicó la presencia de azucares. FA R. M. reductores.. CA. reactivo.. DE. • Ensayo de Bajlet: Se midió 2 mL del extracto y se agregó 1 mL del. IO TE. Reacción: La reacción se consideró positiva con la aparición de una coloración o precipitado rojo, la cual nos indicó la presencia de compuestos. BI. BL. con agrupamiento lactónico.. • Ensayo de Borntrager: Se midió 2 mL del extracto, se evaporó hasta extracto blando, y se redisolvió en 1 mL de cloroformo. Se añadió 1 mL de hidróxido de sodio 5%, se agitó mezclando las fases y se dejó en reposo. Reacción: La reacción se consideró positiva con la aparición de un color rosado o rojo en la fase acuosa alcalina (superior), lo cual nos indicó la presencia de quinonas.. 16 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(27) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. • Ensayo espuma: Se tomó una alícuota del extracto, se diluyó con 5 veces su volumen en agua y se agitó vigorosamente durante 5 - 10 minutos. Reacción: La reacción se consideró positiva si hay persistencia de la espuma, la cual nos indicó la presencia de saponinas. • Ensayo de Dragendorff: Se midió 2 mL del extracto, se evaporó hasta extracto blando, se redisolvió en 1 mL de ácido clorhídrico al 1% en agua y. M. IC. A. se agregó III gotas del reactivo de dragendorff.. UI. Reacción: La reacción se consideró positiva con la aparición de. BI. O Q. opalescencia, turbidez definida o precipitado, la cual nos indicó presencia. Y. de alcaloides.. AC. IA. • Ensayo de Shinoda: Se midió 2 mL del extracto, se agregó 1mL de ácido. FA R. M. clorhídrico concentrado y magnesio metálico. Después de 5 minutos se añadió 1 mL de alcohol amílico, se mezcló las fases y se dejó reposar.. DE. Reacción: La reacción se consideró positiva con la aparición de una. IO TE. CA. coloración amarillo, naranja o rojo, la cual nos indicó la presencia de flavonoides.. BI. BL. • Ensayo de Antocianidina: Se midió 2 mL del extracto y se calentó con 1 mL de ácido clorhídrico concentrado. Se dejó enfriar y se adicionó 1 mL de agua y 2 mL de alcohol amílico. Se agitó y se dejó separar las dos fases. Reacción: La reacción se consideró positiva con la aparición de una coloración roja a marrón en la fase amílica.. 17 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(28) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.2.6. Composición de la crema fotoprotectora Oleo/Acuosa (O/A) 24 Se prepararó la crema usando extracto hidroalcohólico concentrado. La. IC M UI. FA R. M. AC. IA. Y. BI. O Q. Materia prima Fase A ( fase oleosa) Cera Lanette N Vaselina liquida Palmitato de isopropilo Propilparabeno Alcohol cetilico Oxido de zinc Tween 60 Fase B (acuosa) Metil parabeno Glicerina Agua desionizada Fase C Extracto seco. A. composición de la crema se detalla a continuación:. DE. Las fases A (fase oleosa) y B (fase acuosa) se calentó por separado a 70-80°C. CA. luego la fase acuosa se añadió lentamente y con agitación constante, cuidando. IO TE. de no formar burbujas, la mezcla se retiró de baño maría continuando su. BL. agitación hasta llegar a una temperatura de 40°C luego se agregó la fase C. las. BI. pruebas de control de calidad se realizaron después de 24 h de elaborada la crema.. 18 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(29) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. A. Control de calidad de la crema a base de extracto hidroalcohólico de Spinacia oleracea L. “espinaca” a. Organoléptico: Para evaluar el comportamiento de estas características, se observarán cada 2 días diferencias notables en el color, olor, sensación al tacto y homogeneidad que indiquen cualquier tipo de alteración valorable en la. M. IC. A. crema.. O Q. Determinación de pH: Utilizando el potenciómetro se determinará el. BI. •. UI. b. Fisicoquímico:25. IA. Y. valor de pH de 3 muestras de 20 mL, midiendo cada muestra por. M. Determinacion de viscosidad: Se realizará en el viscosimetro. FA R. •. AC. triplicado.. DE. rotacional a 25 °C con spindle N°5 a 20 rpm por 3 minutos. Una. CA. velocidad de 100 rpm. IO TE. c. Microbiológico: 24 Toma de muestras: Antes de abrir el envase se desinfectó la superficie. BI. BL. •. con etanol a 70%, luego se secó el envase con gasa estéril. Se extrajo 10 g de la crema a base de extracto hidroalcholico de Spinacia oleracea L. “espinaca” lo cual se trasvaso en un balón estéril y se llevó al equipo de rotavapor durante 2 horas aproximadamente hasta su total secado.. •. Preparación de la muestra y dilución inicial: Se utilizó una espátula estéril y se homogenizó durante un tiempo de 90 segundos; luego se. 19 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(30) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. agregaron a tubo 8 mL de solución salina peptonada para obtener una dilución 10:1. •. Obtención de la dilución 10:2: De la dilución (10:1) se preparó la dilución decimal 10:2, se utilizó pipetas estériles para preparar la dilución. Se colocó 1 mL de la dilución 10:1 y se colocó en un tubo de ensayo el cual deberá 9 mL de solución salina peptonada, evitando que. IC. A. se forme espuma, obteniendo así la dilución 10:2. Se mezcló. O Q. Recuento de microorganismos mesófilos aerobios totales: en placas. BI. •. UI. M. manualmente esta dilución, agitando con movimientos ascendentes.. Y. Petri previamente identificadas, se pipeteo un mL de cada dilución de. AC. IA. muetra. Se agregó a cada uno de las placas 15 mL de agar de recuento. M. de placa (plate count agar - PCA), se fundio en baño maria y se enfrió. FA R. a 46°C; en un tiempo no mayor a 15 min entre la dilución de la muestra. DE. y la siembra en placas.. IO TE. CA. Inmediatamente se mezcló la muestra diluida y el agar mediante agitación manual suave, durante un min, se evitó mojar los border de la. BI. BL. placa, luego se dejó enfriar sobre una superficie plana y horizontal. Una vez solidificado el agar, se invirtió las placas y se incubo a 38°C por un lapso de 48 horas.. •. Escherichia coli: se pesó 10 g de muestra para 90 mL de caldo lactosado (simple). Se incubo por 24 horas a 35°C, se tomo 1 mL del caldo pre-enrequesimiento y se agrego a 10 mL de caldo selenito-cistina y 10 mL de caldo Tetrationato. Se mezclo, luego se incubo de 18 a 24. 20 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(31) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. horas a 35 °C. a partir de caldo lactosado, se aislo las colonias resembrando por estria cruzadas en el Agar levine-azul de metileno (EMB) o en el agar McConkey. •. Staphylococus Aureus: En placas Petri se agregó 15mL de agar Baird Parker (B.P.) previamente fundido en baño maria y enfriado a 46°C. Luego se pipeteo 0.1 mL de cada dilución de muestra y se agregó a la. M. IC. A. placa Petri previamente identificada.. O Q. UI. Inmediatamente se dispersó la muestra diluida en el agar con ayuda del. BI. asa bacteriológica durante un lapso igual o superior a un minuto; Se. IA. Y. dejó enfriar sobre una superficie plana y horizontal.. M. AC. Se invirtió las placas y se incubo a 38°C por un lapso de 48 horas.. FA R. Pasado el tiempo, se retiró las placas de la incubadora y observo la. DE. presencia o ausencia mediante la formación de colonias características. Pseudomona aeruginosa: Se pesó 10 g de muestra para 90 mL de. IO TE. •. CA. de estos microorganismos.. BL. Tripticasa Soya.. BI. Se mezclo e incubo a 35°C por 24 – 48 horas. Se tomo una azada de este cultivo y se sembró por estria cruzada en el siguiente medio de cultivo para Pseudomona aeruginosa: Agar Cetrimida. Luego se incubo a 35° C por 24 horas.. 21 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(32) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.2.7. Método del análisis de factor de protección solar (FPS) 25. Se preparó soluciones hidroalcohólicas, pesando 0,5g de extracto seco de la especie en estudio y se transfirió a un matraz de 100 mL, que contenga 30 mL de etanol de 96°G.L para disolver el extracto y posteriormente se aforó el volumen con el mismo solvente. De esta solución se midió una alícuota de 1 mL, transfiriéndose a un matraz de 25 mL y se aforó el volumen con etanol de 96°G.L,. IC. A. lo cual dio una concentración final de 0,2 mg/mL, de esta solución se medió un. UI. M. mililitro a una fiola de 100 mL y se aforó con etanol de 96°G.L. leyéndose las. O Q. absorbancias de las soluciones por triplicado en un espectrofotómetro UV-VIS,. Y. BI. en el rango de 290 a 320 nm; con las lecturas obtenidas, se calculó el factor de. 320. M. AC. IA. protección solar mediante la siguiente fórmula:. FA R. 𝐹𝑃𝑆 𝑒𝑠𝑝𝑒𝑐𝑡𝑟𝑜𝑓𝑜𝑡𝑜𝑚é𝑡𝑟𝑖𝑐𝑜 = 𝐹𝐶 𝑥 ∑( 𝐸𝐸 (𝜆) 𝑥 𝐼 (𝜆) 𝑥 𝐴 (𝜆)). DE. 290. CA. Dónde:. IO TE. FC = factor de la corrección (igual a 10).. BL. EE (λ) = efecto eritemogénico de la radiación de longitud de onda λ.. BI. I (λ) = intensidad del sol en la longitud de onda. A (λ)= absorbancia de la solución en la longitud de onda.. 22 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(33) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Los valores del efecto eritemogénico (EE) versus la intensidad de la radiación (I) para cada longitud de onda se presentan a continuación.. Relación entre el efecto eritemogénico (EE) versus Intensidad de radiación (I) para cada longitud de onda () (EE) x (I). 290. 0,0150. IC. A. (nm). UI. M. 295. O Q. 300. Y. BI. 305. 0,2874 0,3278 0,1864. AC. IA. 310. 0,0817. M. 315. 0,0180. CA. DE. FA R. 320. 0,0839. BL. IO TE. 2.2.6. Tratamiento estadístico de los datos obtenidos de las muestras:. BI. A los resultados obtenidos se les aplicó las pruebas estadísticas: Q de rechazo de datos, Media, desviación estándar, coeficiente de variación.. 23 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(34) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. III.. RESULTADOS. Tabla 1. Características organolépticas del extracto hidroalcoholico de las hojas oleracea L. “espinaca”.. Resultados. Color. Verde Oscuro. A. Características. M. IC. Spinacia. Suigéneris. O Q. UI. Olor. Suave al tacto. IA. Y. BI. Sensación al tacto. Homogéneo libre de partículas. BI. BL. IO TE. CA. DE. FA R. M. AC. Homogeneidad. 24 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(35) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Tabla 2. Tamizaje fotoquímico del extracto hidroalcoholico de Spinacia oleracea L. “espinaca”. METABOLITOS. ENSAYOS. EXTRACTO ETANOLICO. Compuestos. Baljet. (-). Liebermann-Burchart. Alcaloides. Dragendorff. Alcaloides. Mayer. Resinas. Resinas. Azucares reductores. Fehling. Saponinas. Espuma. (+) (+) (+) (-) (-). FA R. M. AC. IA. Y. BI. O Q. UI. M. Esteroides. IC. A. lactónicos. DE. (+). Cloruro férrico. (+). Ninhidrina. (+). Borntrager. (+). Flavonoides. Shinoda. (+). Antocianinas. Acido - Base. (-). BI. BL. Quinonas. IO TE. Aminoácidos. CA. Fenoles. 25 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(36) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Tabla 3. Análisis de estabilidad acelerada de la crema fotoprotectora solar a base del extracto de Spinacia oleracea L. “espinaca”.. Textura. -. -. -. -. 15. -. -. -. -. 22. -. -. -. -. 7. -. -. -. -. 15. -. -. -. 22. -. -. -. -. 7. -. -. -. -. -. -. -. -. -. -. -. A. 7. IC. Separación Olor de Fases. O Q BI. -. AC. 5%. FA R. 15 22. IA. Y. 2.5%. UI. M. 1.25%. Color. M. Concentración Cantidad del extracto en de días la crema. -. DE. (-)= ausencia de alteraciones. BI. BL. IO TE. CA. (+) = presencia de alteraciones. 26 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(37) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Tabla 4. Análisis de estabilidad en estantería de la crema fotoprotectora solar a base del extracto de Spinacia oleracea L. “espinaca”.. Olor. Textura. 13/05/2019. -. -. -. -. 20/05/2019. -. -. -. -. 27/05/2019. -. -. -. -. 03/06/2019. -. -. 12/06/2019. -. -. 13/05/2019. -. 20/05/2019. -. 27/05/2019. -. 03/06/2019 12/06/2019. -. -. -. -. -. -. -. -. -. -. -. -. -. IA. -. -. -. -. -. -. -. -. -. -. -. 20/05/2019. -. -. -. -. 27/05/2019. -. -. -. -. 03/06/2019. -. -. -. -. 12/06/2019. -. -. -. -. FA R. CA. M. UI. O Q BI Y. BL. IO TE. IC. -. 13/05/2019. 5,0%. A. Separacion de las fases. AC. 2,5%. Color. M. 1,25%. Fecha de analisis. DE. Concentracion Del extracto en la crema. BI. (-) significa ausencia de alteraciones (+) Significa presencia de alteraciones. 27 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(38) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Tabla 5. Análisis organoléptico de la crema fotoprotectora solar a base del extracto de Spinacia oleracea L. “espinaca”.. ANALISIS ORGANOLÉPTICO. CREMA 5%. Homogéneo. Color. Verde claro. Olor. Suigéneris. IA. Y. BI. O Q. UI. M. IC. A. Aspecto. Buena. BI. BL. IO TE. CA. DE. FA R. M. AC. Consistencia. 28 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(39) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Tabla 6. Análisis fisicoquímico de la crema fotoprotectora solar a base del extracto de Spinacia oleracea L. “espinaca”.. CREMA. pH (25°). 5,7. M. IC. A. ANALISIS FISICOQUIMICO. 2800. BI. BL. IO TE. CA. DE. FA R. M. AC. IA. Y. BI. O Q. UI. Viscosidad cps (25°). 29 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(40) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Tabla 7. Análisis microbiológico de la crema fotoprotectora solar a base del extracto de Spinacia oleracea L. “espinaca”.. Ensayo de límite microbiano. Especificaciones. Resultados. Recuento total de microorganismos. <1000 ufc/mg. <10 ufc/mg. Escherichia Coli. Ausente. Estafilococos aureus. Ausente. M. Ausente. Ausente Ausente Ausente. BI. BL. IO TE. CA. DE. FA R. M. AC. IA. Y. BI. O Q. UI. Pseudomona aeruginosa. IC. A. aerobios mesófilos viables. 30 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(41) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Tabla 8. Factor de protección solar del extracto hidroalcohólico de Spinacia. FPS. 1. 8,3525. 2. 8,5239. 3. 8,2890. 4. 8,4552. 5. 8,6651. UI. M. IC. MUESTRA. A. oleracea L. “espinaca”. 8,3006. O Q. 6. 8,2743. Y. BI. 7. 8,4265. AC. IA. 8. FA R. 10. M. 9. 8,5412 8,3154. IO TE. Leyenda. CA. DE. PROMEDIO. 8,6324. BI. BL. FPS: factor de protección solar. 31 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(42) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Tabla 9. Factor de Protección solar de la crema fotoprotectora solar a base del extracto de Spinacia oleracea L. “espinaca”.. FPS 2,5%. 5%. 1. 11,46. 20,49. 28,36. 2. 10,49. 21.89. 3. 11,24. 20,43. 4. 10,38. 5. 10,89. 6. 10,37. 7. 10,37. 8. 10,70. 9. 12,46. IC M. BI. UI. 28,37 28,65. Y IA AC M. FA R. DE. 29,63. 20,37 20,47. 11,24. 28,64. 20,21. 28,39. 20,42. 29,25. 20,65. 28,66. 21,48. 28,39. 20,15. 28,28. BL. Leyenda. IO TE. CA. 10. A. 1,25%. O Q. Muestras. BI. FPS: factor de protección solar. 32 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(43) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Tabla 10. Parámetros de la crema fotoprotectora solar a base del extracto de Spinacia oleracea L. “espinaca” a la concentración de 5%.. 1.25%. 2.5%. 5. FPS Promedio. 10,9586. 20,6557. 28,639. Desviación Estándar. 0,6649. 0,5688. 0,0413. CV. 0,0607. 0,275. 0,014. O Q. UI. M. IC. A. Parámetro. BI. BL. IO TE. CA. DE. FA R. M. AC. IA. Y. BI. Leyenda: FPS: factore de protección solar CV: coeficiente de variación. 33 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(44) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. IV. DISCUSIÓN. En los seres humanos el alto índice de exposición a la UV, produce diversas afecciones, como eritema, foto-envejecimiento, foto-carcinogénesis, entre otras. En el caso de las plantas, Ciertos extractos vegetales han demostrado poseer efectos fotoprotectores12, 13. IC. A. Para la obtención del extracto hidroalcoholico de las hojas de Spinacia oleracea L.. UI. M. "espinaca". Se realiza la elección de los solventes de extracción que se justifica por su. O Q. composición fotoquímica, que contiene principalmente sustancias hidrosolubles como. BI. compuestos fenólicos, flavonoides, y minerales; debido a ello estos compuestos. IA. Y. pueden ser extraídos en soluciones polares hidroalcoholicas, Además, Meyer R. resalta. AC. la ventaja de utilizar extractos de esta naturaleza (hidrosoluble) ya que son fáciles de. FA R. M. incorporar en formulaciones tópicas, como la crema elaborada en el presente estudio.28. DE. La evaluación farmacognostica en hojas de Spinacia oleracea L. "espinaca" fue de. CA. vital importancia ya que permitió su identificación en el Herbarium Truxillense de la. IO TE. Universidad Nacional de Trujillo como Spinacia oleracea L. "espinaca", con el. BL. registro N° 59864 (HUT), como muestra la Figura 1. BI. Con respecto a las características organolépticas del extracto hidroalcoholico de las hojas de Spinacia oleracea L. “espinaca” se obtuvo resultados aceptables esto se muestra en la (tabla 1), fueron color verde oscuro, olor suigeneris, textura suave al tacto; no presentando alteraciones en cuanto a estas características. Los fitoconstituyentes identificados en extractos de etanol de las hojas Spinacia oleracea L. “espinaca” mostrada en la (tabla 2) en el extracto etanólico se identificó esteroides, alcaloides, saponinas, fenoles, aminoácidos, quinonas y flavonoides, como 34 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(45) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. se han identificado en estudios previos, los mismos que a su vez podrían estar relacionados con la actividad fotoportectora: Todos estos metabolitos activos encontrados en el extracto, nos indican que la espinaca tiene actividad medicinal y efectos beneficiosos sobre la salud .Han sido reportadas actividades farmacológicas de Spinacia oleracea L, tales como antioxidantes, antiproliferativa, protección contra la radiación gamma, etc. Los flavonoides se han denominado pigmentos no-. A. fotosintéticos por sus efectos fotoprotectores en plantas actuando como filtros solares. M. IC. por absorción de los rayos UV y disipando el exceso de energía, poseen efectos. O Q. UI. antioxidantes, protegiendo así a las plantas contra el estrés oxidativo inducido por la. BI. UVR. Adicionalmente, existe una amplia evidencia en la literatura acerca de los. IA. Y. beneficios coadyuvantes en formulaciones foto-protectoras de uso tópico. Las. AC. principales bioactivos foto-protectores, son su amplia distribución en las plantas,. FA R. M. permitiendo su fácil disponibilidad. Los flavonoides ofrecen protección a los tejidos fotosintéticos de las plantas frente a la UVR y dicho mecanismo podría ser extrapolado. DE. a la foto-protección en humanos. La biosíntesis de flavonoides inducida por la UVR,. CA. sugiere que la absorción de estas radiaciones nocivas puede ser una característica foto-. BL. IO TE. protectora aprovechable de estos compuestos bioactivos. 29, 30, 31, 32, 33.. BI. La estabilidad es parte del componente de calidad en el proceso de diseño del producto, que nos permite asegurar que en un intervalo de tiempo definido y frente a condiciones ambientales a las que pueda ser sometido, el producto conserva sus características, propiedades organolépticas, fisicoquímicas y microbiológicas, así como su funcionalidad.34. En el análisis de estabilidad acelerada (tabla 3) y estabilidad en estantería (tabla 4). Se observó que la crema fotoprotectora solar a base del extracto Spinacia oleracea L. “espinaca”, no presento alteraciones en cuanto al color, separación. 35 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(46) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. de fases, olor y textura en ningunas de las cremas de distintas concentraciones (1,25 %, 2,5 %, 5%). La crema elaborada a base del extracto de Spinacia oleracea L. “espinaca” fue sometida a diversos controles de calidad como organolépticos presentando aspecto homogéneo, color verde claro, olor suigéneris y consistencia buena. (tabla 5). Los resultados del Ph de la formulación (Tabla 6), se encuentra en el rango de 5,7; lo. IC. A. cual indica que se encuentra en condiciones favorables para la piel humana, y la. UI. M. viscosidad de 2800 mPas se encuentra en el rango aceptable.35. O Q. Los resultados reportados en la (tabla 7) se presentan los resultados al control de. Y. BI. calidad microbiológico, el recuento de aerobios mesófilos fue < 10 UFC/g, hubo. IA. ausencia de Pseudomona aeruginosa, S. aureus y E. coli ; lo que permite observar que. AC. la crema cumple con las especificaciones establecidas por la Comunidad Andina de. FA R. M. Naciones.36. DE. Los resultados reportados en la (tabla 8) el factor de Proteccion Solar “FPS” promedio. CA. del extracto hidroalchólico de Spinacia oleracea L. "espinaca" procedentes del distrito. IO TE. de Carhuaz, provincia de Huaraz del Departamento de Ancash, en el mes de Mayo del 2019 es de 8,31.. BI. BL. En cuanto a la determinación del Factor de Protección Solar (FPS), se adoptó el método in vitro de Mansur, debido a razones económicas, prácticas y éticas. Los resultados sugieren una asociación sinérgica entre el extracto y los filtros solares sintéticos. 37 Los valores de FPS de la Formulación (filtros sintéticos más extracto)a concentraciones de 1,25%, 2,5 % y 5% tuvo un valor de 10.96, 20.65 y 28,64, con una desviación estándar de 0.66, 0.57, 0.04 y coeficiente de variación de 0.06, 0.28 y 0.01, respectivamente presente en la (tabla 10).. 36 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(47) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Lo cual sugiere que de acuerdo con la Nueva Clasificación de FPS COLIPA, se encontraría en la clasificación Alto (15 - 25). Esto puede deberse a que la eficacia de un filtro solar; es decir, la actividad fotoprotectora, depende de la capacidad de absorción de 72 energía radiante atribuida a los grupos cromóforos, siendo proporcional a su concentración, intervalo de absorción y longitud de onda donde ocurre la absorción máxima.38,39. A. Además, los valores bajos de FPS en las formulaciones con extracto, podrían. M. IC. relacionarse con el método empleado para la determinación de la actividad. O Q. UI. fotoprotectora, puesto que este método es específico para compuestos que absorben. IA. Y. BI. radiación sólo en el rango UVB (290 a 320 nm).40. AC. Se eligió filtros solares basados en nuevas tecnologías de protección anti UV,. FA R. M. altamente eficientes y disponibles en el mercado, además de ser ampliamente utilizados en fotoprotectores diversos y que además tienen estudios científicos de. DE. eficacia frente a la protección contra las radiaciones UVA y UVB. La concentración. CA. de filtros sintéticos utilizada se determinó tomando en cuenta los valores máximos. BI. BL. FDA .40 ,41.. IO TE. permitidos de acuerdo a la Nueva Clasificación de FPS COLIPA desarrollada por la. 37 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(48) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. V. CONCLUSIÓN •. Se desarrolla una crema a base de extracto hidroalcohólico de hojas de Spinacia oleracea L. “espinaca” en una concentración de 1.25%, 2.5% y 5 %.. •. El mayor factor de protección solar de la crema a base de extracto hidroalcohólico de hojas de Spinacia oleracea L. “espinaca”, procedentes de Carhuaz, departamento. BI. BL. IO TE. CA. DE. FA R. M. AC. IA. Y. BI. O Q. UI. M. IC. A. Ancash, es de 28,44. 38 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
Outline
Documento similar