Actividad antiespasmódica de tessaria integrifolia r et p y artemisia absinthium l en íleon aislado de cavia porcellus”

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(1)Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA. UI M. IC A. ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA. ANTIESPASMÓDICA DE Tessaria integrifolia R. et P. Y Artemisia absinthium L. EN ÍLEON AISLADO DE Cavia porcellus”.. AC. IA. Y. BI. O. Q. “ACTIVIDAD. FA. RM. INFORME DE PRÁCTICAS PRE-PROFESIONALES. Br. CARMEN ROSA SILVA CORREA. BI BL. AUTOR:. IO. TE. CA. DE. PARA OPTAR EL TÍTULO PROFESIONAL DE QUÍMICO FARMACÉUTICO. ASESORA :. Dra. ANA ELENA MANTILLA RODRÍGUEZ.. CO-ASESOR:. Dr. WILLIAM ANTONIO SAGÁSTEGUI GUARNIZ. TRUJILLO – PERÚ 2011. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(2) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. SUMARIO Pág.. 1. ABSTRACT……………………………………………………………………….. 2. IC A. RESUMEN…………………………………………………………………………. INTRODUCCIÓN………………………………………………………………. II.. MATERIAL Y MÉTODO……………………………………………….…….. III.. RESULTADOS…………………………………………………………..……….. IV.. DISCUSIÓN………………………………………………………………............. V.. CONCLUSIONES…………………………………….…………………............. VI.. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS………………………………..……... 29. VII.. ANEXOS…………………………………………………………………............... 32. 3. 7. 15. 24. 28. BI BL. IO. TE. CA. DE. FA. RM. AC. IA. Y. BI. O. Q. UI M. I.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(3) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. RESUMEN Se evaluó la actividad antiespasmódica atribuida popularmente a las especies de Tessaria integrifolia R. et P (pájaro bobo) y Artemisia absinthium L. (ajenjo). Para ello se recolectaron las hojas e inflorescencias de Tessaria integrifolia R. et P. en la ribera del río Chamán, provincia de Chepén, departamento de La Libertad y hojas de Artemisia absinthium L. en la provincia de Contumazá,. IC A. departamento de Cajamarca. Se preparó infusos al 2%, a los cuales se realizó. UI M. un estudio fitoquímico preliminar para la identificación de sus principales. O. Q. fitoconstituyentes. Luego se evaluó la actividad antiespasmódica en el equipo. BI. de órgano aislado PanLab (software PowerChart), utilizando íleon de Cavia de. Acetilcolina. como. agente. espasmogénico,. IA. solución. Y. y. porcellus. AC. encontrándose muy buena actividad antiespasmódica en el infuso de hojas de. RM. Tessaria integrifolia R. et P. y en el de hojas de Artemisia absinthium L.. DE. FA. Posteriormente se aislaron los metabolitos secundarios de estas especies, por. CA. cromatografía en columna, que fueron aplicadas nuevamente sobre el íleon de. TE. Cavia porcellus, obteniendo respuesta antiespasmódica en las fracciones F1 y. IO. F5 de las hojas de Tessaria integrifolia R. et P, y en las fracciones F2 y F7 de. BI BL. hojas de Artemisia absinthium L. En estas fracciones se realizaron por reacciones. de. identificación. y. Cromatografía. en. Capa. Fina. (CCF),. determinándose la presencia de flavonoides en las fracciones F1 y F5 de Tessaria integrifolia R. et P, y en la fracción F2 de Artemisia absinthium L, mientras que en la fracción F7 de Artemisia absinthium L. se determinó la presencia de sesquiterpenlactonas. Palabras clave: Tessaria integrifolia R. et P., Artemisia absinthium L., flavonoides, sesquiterpenlactonas, antiespasmódico. 1 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(4) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. SUMMARY Antispasmodic activity was evaluated to species Tessaria integrifolia R. et P. and Artemisia absinthium L. (wormwood) with antispasmodic activity popularly attributed. This was collected leaves and inflorescences of Tessaria integrifolia R. et P. on the edge of Rio Chaman, Chepén province, department of La Libertad and leaves of Artemisia absinthium L. in Contumaza province,. IC A. department of Cajamarca. Infused was prepared at 2%, which conducted a. UI M. preliminary phytochemical study to identify its main phytoconstituents. Then. Q. assessed the antispasmodic activity in the Isolated Organ Team Panlab. BI. O. (PowerChart software), using Cavia porcellus ileum and acetylcholine solution. IA. Y. spasmogenic agent, being very good antispasmodic activity in the infused leaf. AC. Tessaria integrifolia R. et P. and the leaves of Artemisia absinthium L.. RM. Subsequently, the secondary metabolites isolated from these species by. FA. column chromatography, which were applied again on the ileum of Cavia. DE. porcellus, antispasmodic response in F1 and F5 fractions from the leaves of. TE. CA. Tessaria integrifolia R. et P, and F2 and F7 fractions of leaves of Artemisia. IO. absinthium L. These fractions were made by reactions of identification and Thin. BI BL. Layer Chromatography (TLC) were tested for the presence of flavonoids in fractions F1 and F5 Tessaria integrifolia R. et P, and the F2 fraction of Artemisia absinthium L., while the fraction of Artemisia absinthium L. F7 determined the presence of sesquiterpene lactone. Keywords: Tessaria integrifolia R. et P., Artemisia absinthium L., flavonoids, sesquiterpene lactone, antispasmodic.. 2 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(5) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. I.. INTRODUCCIÓN. Actualmente existe un gran interés por el mejor conocimiento y uso de medicinas alternativas, entre las que destaca la medicina natural, pues se considera que las plantas son capaces de producir cientos de compuestos de amplia diversidad y distinta funcionalidad, sus propiedades pueden provenir de. IC A. cualquiera de sus partes (hojas, tallos, corteza, raíces, flores o semillas) que. UI M. producen sustancias químicas llamadas metabolitos secundarios o principios. Q. activos; éstos tienen la capacidad de producir diversos efectos fisiológicos, que 1,2. .. BI. O. pueden ser benéficos o tóxicos según sea el principio activo que se trate. Y. Los fitoconstituyentes de las plantas son una alternativa en el. AC. IA. tratamiento de las enfermedades gastrointestinales entre los que incluyen:. RM. nauseas, vómitos, dispepsia, gastritis, ulcera péptica, cólicos intestinales,. FA. constipación y diarrea 2, 3.. DE. El cólico intestinal es un síntoma inespecífico que carece de marcadores. CA. biológicos que puedan determinar su valor y significado en las enfermedades. IO. TE. gastrointestinales de carácter orgánico y funcional. Dada la dificultad de su. BI BL. aproximación clínica y fisiopatológica, las posibilidades terapéuticas incluyen una amplia gama de alternativas, entre las que se encuentran los antiespasmódicos y la medicina tradicional que se convierte en una alternativa frente al tratamiento de las alteraciones gastrointestinales 2, 3, 5. Los antiespasmódicos son un grupo de agentes, que incluyen algunos compuestos de origen natural como los alcaloides de la especie vegetal Atropa belladona (atropina, belladona, hiosciamina y escopolamina) o sus derivados. 3 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(6) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. sintéticos, que disminuyen el tono y la motilidad intestinal, por lo que se utilizan para aliviar el dolor tipo cólico del tracto gastrointestinal 3, 4, 5. Aunque se conocen diversos mecanismos farmacológicos que explican el mecanismo de acción de los fármacos antiespasmódicos, el más común es la actividad como antagonista competitivo de la acetilcolina, y con ello impiden la despolarización de la célula muscular y su consiguiente contracción. 6, 7. .. IC A. Se ha estudiado diversas sustancias de muy variada estructura química. UI M. con capacidad de inhibir las contracciones del músculo liso intestinal, y se ha. O. Q. demostrado que algunos compuestos aislados de plantas inhiben in vitro la. Y. BI. contracción del músculo liso aislado a concentración dependiente, entre ellos. IA. tenemos a los Flavonoides (quercetina, apigenina, kaemferol y rutina) y aceites. RM. AC. esenciales (mirceno, pineno y metileugenol) 7, 8, 9.. FA. El modelo de íleon aislado de cobayo, fue descrito inicialmente en 1904. DE. por Magnus y es utilizado para evaluar la actividad antiespasmódica de los. CA. extractos de plantas y fármacos. Este modelo se fundamenta en que las. IO. TE. porciones superior e inferior del intestino delgado son susceptibles a las. BI BL. acciones de las terminales nerviosas por diversas sustancias. y en. consecuencia, es posible valorar la actividad biológica de compuestos naturales o sintéticos 9, 10. En el Perú existen innumerables plantas con propiedades medicinales tradicionales, algunas de las cuales ya cuentan con estudios que confirman su acción farmacológica, por lo que las mismas, se encuentran validadas. Sin embargo, existen muchas otras que no cuentan con estudio alguno, entre ellas. 4 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(7) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. se encuentran Tessaria integrifolia R. et P. (pájaro bobo) y Artemisia absinthium L. (ajenjo), a las cuales se les atribuye actividad antiespasmódica. Tessaria integrifolia R. et P. (Pájaro bobo), perteneciente a la familia de las Asteraceae, es un arbusto de 3 a 10 metros de alto, con hojas alternas lanceoladas y flores marginales, inflorescencias terminales con capítulos amarillos; forma parte de la vegetación ribereña de la costa y selva de nuestro. IC A. país. Es una especie ampliamente distribuida desde el sur de América Central. UI M. hasta América del Sur, incluyendo Panamá, Colombia, Venezuela, Paraguay,. Q. Brasil, Bolivia y Perú. Dentro de uso tradicional, se menciona que es. BI. O. antiasmático, antipirético, antiinflamatorio, diurético, contra la inflamación del. IA. Y. hígado y los riñones, antiespasmódico y como analgésico en cálculos hepáticos. AC. y renales. En la parte aérea y raíz de Tessaria integrifolia R. et P. se han. RM. encontrado: escualeno, acetato de β-amirino, derivados del bistienilo, α-. FA. tertienilo, lignano, sesquiterpenos, flavonas, derivados de eudesmanos y ácido. CA. DE. cafeoilquínico 11, 12, 13.. TE. Artemisia absinthium L. (Ajenjo), pertenece a la familia Asteraceae, se le. BI BL. IO. encuentra en zonas de la Sierra del Departamento de Cajamarca, aunque también se le encuentra en algunas zonas de la Costa norte del Perú. En esta especie se han encontrado algunos metabolitos como: tuyonas α y β y el alcohol tuyílico libre o combinado con ácido acético e isovaleriánico, la absintina (sustancia amarga), además al cis-epoxiocimeno, acetato de sabinilo, acetato de ciscrisantenilo, el cis-crisantenol, el alcanfor, 1,8-cineol y el acetato de bornilo, así como otros monoterpenos y sesquiterpenos, sin embargo a la fecha no se ha realizado un estudio fitoquímico detallado de todos sus componentes y de la importancia biológica. Dentro de sus usos tradicionales, 5 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(8) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. se menciona que es un excelente antiespasmódico, febrífugo, antiséptico, diurético, emenagogo y vermífugo 12. Además tomando en cuenta que Perú es un país que cuenta con condiciones climáticas apropiadas, que genera una diversidad de especies de plantas medicinales, es de vital importancia que se realice investigaciones de estas plantas con la finalidad de establecer si presentan o no las propiedades. IC A. curativas atribuidas, para utilizarlas como una alternativa en la terapéutica, así. UI M. como determinar la efectividad y seguridad que éstas poseen al ser utilizadas. O. Q. por la población.. Y. BI. En base a estos antecedentes se realizó la evaluación de la actividad. AC. IA. antiespasmódica de las hojas de Tessaria integrifolia R. et P. (pájaro bobo) y. RM. Artemisia absinthium L. (ajenjo), ya que a estas especies se les atribuye. FA. propiedades enterorrelajante que no cuentan con una base científica validada.. CA. DE. Para ello se plantea el siguiente problema:. TE. ¿Qué actividad presentan las especies Tessaria integrifolia R. et P. y Artemisia. BI BL. IO. absinthium L. en íleon aislado de Cavia porcellus? Hipótesis:. Las especies Tessaria integrifolia R. et P. y Artemisia absinthium L. presentan actividad antiespasmódica en íleon aislado de Cavia porcellus. 6 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(9) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. II.. MATERIAL Y MÉTODO. 1. MATERIAL BIOLÓGICO 1.1. Muestras de estudio Hojas e inflorescencias de Tessaria integrifolia R. et P.. . (Asteraceae) “Pájaro bobo” recolectadas en la ribera del Río Chamán, provincia de Chepén, departamento de La. IC A. Libertad; identificada taxonómicamente en el Herbarium. UI M. Truxillensis de la Universidad Nacional de Trujillo. ……………………….…. Magnoliophyta. CLASE. ……………………….…. Magnoliopsida. ORDEN. ……………………….…. FAMILIA. ……………………….…. Asteraceae. SUBFAMILIA…………………………. Asteroideae. AC. IA. Y. BI. O. Q. DIVISIÓN. Asterales. …………………………. ESPECIE. ………………….……… integrifolia R et P.. Tessaria. DE. FA. RM. GÉNERO. Hojas de Artemisia absinthium L. (Asteraceae) “Ajenjo”. CA. . TE. recolectada en las zonas áridas de la provincia de. BI BL. IO. Contumazá, departamento de Cajamarca; identificada taxonómicamente en el Herbarium Truxillensis de la Universidad Nacional de Trujillo. DIVISIÓN. ……………………….…. Angiospermae. CLASE. ……………………….…. Dicotyledoneae. ORDEN. ……………………….…. Campanulales. FAMILIA. ……………………….…. Asteraceae. SUBFAMILIA…………………………. Tubulifloras. GÉNERO. …………………………. Artemisia. ESPECIE. ………………….………. absinthium L.. 7 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(10) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 1.2. Animales de experimentación Se utilizaron 12 Cavia porcellus machos con peso promedio de 450 a 550 g, aparentemente sanos, que fueron acondicionados en ambientes controlados de luz y temperatura, con agua y comida “ad libitum”. 2. MÉTODOS Y TÉCNICAS. IC A. 2.1. Secado y Pulverizado de las muestras vegetales. UI M. Las muestras de hojas e inflorescencias se lavaron y secaron a. Q. temperatura ambiente y luego se llevaron a estufa a 45 ºC por. BI. O. 48 horas. Finalmente se pulverizaron con la ayuda de un molino. AC. IA. Y. eléctrico y se almacenaron en bolsas de papel.. RM. 2.2. Preparación de infusos al 2%. FA. Se pesaron 2 gramos de la muestra vegetal, se colocó en un. DE. vaso de precipitación, agregándose 100 ml de agua hirviendo,. IO. TE. CA. dejando por 15 minutos en reposo y luego se procedió a filtrar.. BI BL. 2.3. Análisis fitoquímico preliminar Según la técnica descrita por Olga Lock 14.. 2.3.1. Identificación de Flavonoides Reacción de Shinoda. Se colocó una cantidad del extracto, se agregó etanol y luego una pequeña porción de limaduras de magnesio y dos gotas de ácido clorhídrico concentrado. Con el desarrollo de coloración es indicativo de la presencia de Flavonas (amarillo rojo), Flavonoles (rojo 8 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(11) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. a magenta), flavononas (rojo magenta o azul violeta), isoflavonas (amarillo).. 2.3.2. Identificación de Esteroles y Terpenoides Reacción de Lieberman – Buchard. Se colocó un 1 mL del extracto y se añadió 10 gotas de anhídrido acético, 20. reacción. sirve. para. revelar. la. presencia. de. UI M. Esta. IC A. gotas de ácido acético y una gota de ácido sulfúrico.. Q. compuestos orgánicos como triterpenos, que producen una. BI. O. coloración violeta y esteroides que dan coloraciones que. AC. IA. Y. varían del rosa al verde y finalmente pardas.. RM. 2.3.3. Identificación de Alcaloides. FA. Reacción de Mayer. Se aforó 1.35 g de bicloruro de. DE. mercurio y 4 g de yoduro de potasio en una fiola de 100 mL. CA. con agua destilada. Luego el extracto se acidula con una. IO. TE. solución de ácido clorhídrico al 1%. El reactivo de Mayer. BI BL. precipita al alcaloide en medio ácido, dando un color blanquecino amarillento, sin embargo este precipitado es poco soluble en exceso de reactivo y completamente soluble en alcohol.. 2.3.4. Identificación de Cumarinas Fluorescencia con radiación UV. Se diluyó el extracto en 2 mL de alcohol etílico 96º. Luego se colocó en un tubo de 9 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(12) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ensayo y se llevó a lámpara UV, las fluorescencias se intensifican agregando amoniaco. 2.3.5. Identificación de Sesquiterpenlactonas Reacción de Baljet. Se emplearon dos soluciones que se mezclaron en volúmenes iguales antes de usarse. Solución A, 1 g de ácido pícrico en 100 mL de etanol de 96º,. IC A. solución B, 10 g de hidróxido de sodio en 100 mL de agua.. UI M. Para la prueba se colocó 2-3 mg del extracto y unas 3-4. O BI. IA. Y. anaranjada o roja oscura.. Q. gotas de reactivo, siendo positiva si se forma coloración. AC. 2.3.6. Identificación de Antraquinonas. RM. Reacción de Bortranger. Se colocó en un tubo de ensayo. FA. una pequeña porción de extracto y se añadió unos 5 mL de. DE. benceno, agítese. El benceno toma color amarillo. Luego. TE. CA. se trasvasó el benceno a otro tubo de ensayo y añadir unas. BI BL. IO. gotas de solución de KOH. La aparición de una coloración roja indica la presencia de antraquinonas.. 2.3.7. Identificación de Saponinas.- Reacción de Rossel. Reacción de Rossel. Se colocó en una cápsula de porcelana cantidad suficiente de extracto, y se añadió unas gotas de ácido sulfúrico concentrado. La aparición de un color amarillo, indica la presencia de saponinas.. 10 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(13) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.3.8. Identificación de Compuestos fenólicos Reacción de Tricloruro férrico. Se preparó una solución de Tricloruro de hierro al 3% y se agregó 20 gotas al extracto.. Esta. reacción. se. utiliza. para. identificar. compuestos que posean en su estructura una función fenólica, que varían desde el azul-negro (pirogálicos) hasta. UI M. IC A. verde (catéquicos).. BI. O. Q. 2.4. Evaluación de la actividad antiespasmódica. Y. 2.4.1. Preparación de los segmentos aislado de íleon de. AC. IA. Cavia porcellus. experimental de órgano aislado en intestino de. FA. modelo. RM. Para evaluar la actividad antiespasmódica se utilizó el. DE. cobayo, para lo cual los especímenes se mantuvieron en. CA. ayuno por 24 horas con acceso libre de agua. Se por. dislocamiento. cervical.. La. cavidad. IO. TE. sacrificaron. BI BL. abdominal se abrió mediante incisión longitudinal para extraer un segmento de íleon terminal de 10 cm de longitud, se lavó en solución Tyrode a pH 7.4, con oxigeno permanente y temperatura de 37ºC. Se cortó un segmento de 3 cm y se colocó en el vaso de órgano aislado conteniendo solución Tyrode, la cual fue preparada una hora antes de su uso.. 11 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(14) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.4.2. Preparación de las concentraciones a evaluar Los infusos al 2% de las muestras vegetales fueron evaluadas directamente después de su preparación, mientras que las fracciones cromatográficas, se prepararon en concentraciones de 0.1% diluidas en agua destilada.. IC A. 2.4.3. Evaluación de la Actividad antiespasmódica de los. UI M. Infusos. Q. Luego de colocar el segmento de íleon en el baño de. BI. O. órgano aislado PanLab (software PowerChart), se registró. Y. un período de estabilización (basal) durante 30 minutos,. AC. IA. luego se agregó 0.1 mL de Acetilcolina 1%0, como agente. RM. espasmogénico, hasta conseguir cuanto menos tres. FA. máximas respuestas uniformes. El tejido se lavó tres veces. DE. con solución de Tyrode después de cada aplicación. El. CA. período de lavado entre cada aplicación de acetilcolina fue. IO. TE. aproximadamente entre tres y cinco minutos, tiempo. BI BL. suficiente para que el tejido regresara a la contracción basal. Luego el intestino fue expuesto a dosis crecientes, partiendo de 0.2 mL de los infusos preparados en el paso 2.4.2. hasta agotar respuesta, luego se procedió a realizar el lavado. continuar. Para con. seguir administrando acetilcolina las. experiencias. hasta. perder. y la. automaticidad del intestino.. 12 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(15) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Este procedimiento se repitió con cada uno de los especímenes.. 2.5. Separación cromatográfica de los fitoconstituyentes En los infusos tanto de hojas de Tessaria integrifolia R. et P. y hojas Artemisia absinthium L., que presentaron actividad. IC A. antiespasmódica, se optó por aislar los metabolitos secundarios. UI M. presentes, mediante columna cromatográfica, empacada con. Q. silicagel G-60 70-230 Mesh (Sigma-Aldrich®), usando fase móvil. BI. O. Acetato de etilo – Hexano en gradiente. Se unieron las fracciones. Y. que mostraron igual Rf, luego se desecaron, y guardaron en. AC. IA. refrigeración para realizar los ensayos que permitirían identificar. FA. RM. a la fracción responsable de la acción antiespasmódica.. DE. 2.6. Evaluación antiespasmódica de las fracciones. CA. En las fracciones obtenidas en el procedimiento 2.5. se evaluó la. actividad. antiespasmódica,. según. el. IO. TE. nuevamente. BI BL. procedimiento descrito en el paso 2.4.3.. 2.7. Identificación fitoquímica de las fracciones Se identificaron los metabolitos secundarios presentes en las fracciones. activas. mediante. reacción. de. coloración. y. Cromatografía en Capa Fina, de la siguiente manera:. 13 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(16) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.7.1. Cromatografía en Capa Fina (CCF)  Sistema 1: Fase Móvil: Acetato de etilo – Metanol (6:4)  Sistema 2: Fase Móvil: Diclorometano – Metanol (8:2)  Detección:. durante 2 minutos. Fluorescencia con radiación UV.. BI BL. IO. TE. CA. DE. FA. RM. AC. IA. Y. BI. O. Q. UI M. -. IC A. Revelador vainillina (1 %) en ácido sulfúrico a 107º±1 ºC. -. 14 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(17) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. III.. RESULTADOS. Tabla 1. Metabolitos secundarios encontrados en los infusos de hojas e inflorescencias de Tessaria integrifolia R. et P. y. M. IC. A. Artemisia absinthium L. según la técnica descrita por Olga Lock 14.. Artemisia. integrifolia R. et P.. absinthium L.. Q. UI. Tessaria. BI. O. Prueba. Metabolitos secundarios. Inflorescencias. Hojas. Y. Hojas. -. +. -. -. -. Liebermann - Burchard. +. -. -. Shinoda. +++. +. ++. Baljet.. -. -. -. FeCl3. ++. +. +. Fluorescencia. -. -. -. Rossel. +. -. -. Antraquinonas. Bortranger. Esteroles y Terpenos Flavonoides. TE CA. DE. FA RM. Mayer. Saponinas. + -. BI B. Cumarinas. LI O. Lactonas Compuestos fenólicos. AC IA. -. Alcaloides. : Presencia del metabolito secundario : Ausencia del metabolito secundario. 15 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(18) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. BI B. LI O. TE CA. DE. FA RM. AC IA. Y. BI. O. Q. UI. M. IC. A. Figura 1. Actividad antiespasmódica de N-Butilbromuro de Hioscina sobre íleon aislado de Cavia porcellus. 16 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(19) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Figura 2. Actividad antiespasmódica del infuso de hojas al 2% de Tessaria integrifolia R. et P. sobre íleon aislado de Cavia. BI B. LI O. TE CA. DE. FA RM. AC IA. Y. BI. O. Q. UI. M. IC. A. porcellus.. 17 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(20) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Figura 3. Actividad antiespasmódica del infuso al 2% de inflorescencias de Tessaria integrifolia R. et P. sobre íleon aislado de. BI B. LI O. TE CA. DE. FA RM. AC IA. Y. BI. O. Q. UI. M. IC. A. Cavia porcellus.. 18 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(21) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Figura 4. Actividad antiespasmódica de la fracción cromatográfica F1 de las hojas de Tessaria integrifolia R. et P. sobre íleon. BI B. LI O. TE CA. DE. FA RM. AC IA. Y. BI. O. Q. UI. M. IC. A. aislado de Cavia porcellus.. 19 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(22) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Figura 5. Actividad antiespasmódica de la fracción cromatográfica F5 de las hojas de Tessaria integrifolia R. et P. sobre íleon. BI B. LI O. TE CA. DE. FA RM. AC IA. Y. BI. O. Q. UI. M. IC. A. aislado de Cavia porcellus.. 20 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(23) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. BI B. LI O. TE CA. DE. FA RM. AC IA. Y. BI. O. Q. UI. M. IC. A. Figura 6. Actividad antiespasmódica del infuso de hojas al 2% de Artemisia absinthium L. sobre íleon aislado de Cavia porcellus.. 21 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(24) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Figura 7. Actividad antiespasmódica de la fracción cromatográfica F2 de las hojas de Artemisia absinthium L. sobre íleon aislado. BI B. LI O. TE CA. DE. FA RM. AC IA. Y. BI. O. Q. UI. M. IC. A. de Cavia porcellus.. 22 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(25) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Figura 8. Actividad antiespasmódica de la fracción cromatográfica F7 de las hojas de Artemisia absinthium L. sobre íleon aislado. BI B. LI O. TE CA. DE. FA RM. AC IA. Y. BI. O. Q. UI. M. IC. A. de Cavia porcellus.. 23 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(26) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. IV.. DISCUSIÓN. En el presente trabajo, se realizó el análisis fitoquímico y el ensayo de la actividad antiespasmódica de las hojas e inflorescencias de Tessaria integrifolia R. et P y de las hojas de Artemisia absinthium L, sobre íleon aislado de Cavia porcellus, con la finalidad de determinar y comparar el efecto biológico y la. IC A. dosis de mayor eficacia. Posteriormente se realizó la aplicación de las. UI M. fracciones cromatográficas, para determinar la fracción responsable de la. BI. O. Q. actividad farmacológica.. IA. Y. Se utilizó como agente espasmogénico, la Acetilcolina (Ach) pues es un. AC. neurotransmisor que inerva el intestino, su respuesta es regulada por. RM. activación de dos tipos de receptores muscarínicos (M2 y M3). La activación de. FA. estos receptores origina un incremento en Ca++ intracelular, un efecto regulado. DE. por IP3 que actúa sobre los almacenes de calcio internos. 10, 15, 16. . Posterior a la. TE. CA. aplicación de acetilcolina se procedió a evaluar la actividad de los infusos de. BI BL. IO. las especies investigadas.. Los resultados mostraron que las hojas de Tessaria integrifolia R. et P., preparadas en infuso al 2%, relajan el íleon de Cavia porcellus con mayor intensidad, en comparación al infuso de inflorescencias de Tessaria integrifolia R. et P. (Figura 2 y 3). Además se postula que la actividad antiespasmódica es óptima a la dosis de 0.4 mL, que fue determinada administrando dosis consecutivas del infuso (Figura 2).. 24 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(27) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. El estudio fitoquímico realizado a las hojas de Tessaria integrifolia R. et P. reveló la presencia de Flavonoides, Compuestos Fenólicos, Esteroides y Saponinas,. mientras. que. las. inflorescencias. presentan. Flavonoides,. Compuestos fenólicos y Esteroles (Tabla 1). En la separación cromatográfica de los fitoconstituyentes de las hojas, las fracciones F1 y F5 mostraron mayor actividad antiespasmódica (Figura 4 y 5), determinándose en éstas la presencia. IC A. de flavonoides mediante reacciones de coloración y Cromatografía en Capa. Q. UI M. Fina (CCF).. BI. O. Con respecto a los resultados de Artemisia absinthium L., se encontró. Y. que el infuso obtenido de las hojas, produce una disminución de la contracción. AC. IA. inducida por Acetilcolina, a la dosis de 0.5 mL (Figura 6). Este efecto es similar. RM. al originado con la administración de N-Butilbromuro de Hioscina, en la. FA. reducción del tono intestinal, cuando se agrega en el momento en que. CA. DE. Acetilcolina produce su máximo efecto espasmogénico (Figura 1).. IO. TE. El análisis de la marcha fitoquímica de hojas de Artemisia absinthium L.. BI BL. “Ajenjo”, con reacciones de coloración y precipitación, indican la presencia de los siguientes fitoconstituyentes: Alcaloides, Flavonoides y Compuestos Fenólicos. Considerando la actividad antiespasmódica presentada por el infuso, se procedió a la separación cromatográfica de los metabolitos secundarios, obteniendo 12 fracciones cromatográficas. Los resultados de la evaluación antiespasmódica demuestran que las fracciones activas son las F2 y F7, siendo esta última, la. de mayor potencia enterorrelajante (Figura 7 y 8). En la. identificación fitoquímica realizada a estas fracciones se encontró la presencia. 25 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(28) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. de flavonoides en la fracción F2 y sesquiterpenlactonas en la fracción F7. Es importante señalar que las lactonas son de naturaleza lipofílica, y presentan afinidad por los solventes menos polares; sin embargo las lactonas pueden estar en forma de glucósidos, por lo que pueden aparecer en los extractos o fracciones cromatográficas polares.. IC A. En el sistema gastrointestinal, los flavonoides antiespasmódicos. UI M. prolongan el tiempo de tránsito en el intestino delgado, inhiben la amplitud de la. Q. contracción fásica y disminuyen el tono de íleon aislado de cobayo y. BI. O. antagonizan las contracciones inducidas en preparaciones de órgano aislado. Y. intestinal por varios agentes, entre ellos prostaglandinas E2, Acetilcolina (Ach),. RM. AC. IA. BaCl2 17, 18, 19, 20.. FA. Dentro de los trabajos revisados se encuentran los relativos al. DE. aislamiento de los flavonoides, como: quercetina (Psidium guajava, Matricaria. CA. chamomilla), quercitrina (Euphorbia hirta), genisteína (Genista tridentata),. TE. sakuranetina (Dodonaea viscosa), rutina (Conyza filaginoides) y bisabolol (Ma10, 17, 18, 19. .. BI BL. IO. tricaria chamomilla), que han demostrado actividad antiespasmódica. Además, se postula que la acción enterorrelajante es de tipo no competitivo con Acetilcolina, pues luego se procedió a agregar una nueva dosis de Ach, observando actividad espasmogénica (Figura 2 y 4). Por lo que los principios activos presentes en las especies vegetales ensayadas, podrían estar ejerciendo su efecto antiespasmódico por diferentes mecanismos de acción 15, 16.. 26 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(29) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Existen diversas plantas antiespasmódicas, en las que se ha demostrado una actividad no competitiva con Acetilcolina, se menciona por ejemplo, el flavonoide quercetina que ejerce una acción relajante de la contracciones inducidas por dosis elevadas de K+, en modelos experimentales. BI BL. IO. TE. CA. DE. FA. RM. AC. IA. Y. BI. O. Q. UI M. IC A. utilizando íleon de ratas y cobayos 4, 20 .. 27 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(30) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. V.. CONCLUSIONES. De los resultados obtenidos se concluye lo siguiente:. 1. El infuso al 2% de hojas de Tessaria integrifolia R. et P. presenta. IC A. actividad antiespasmódica.. UI M. 2. La actividad antiespasmódica de Tessaria integrifolia R. et P. se atribuye. Q. a los flavonoides presentes en las fracciones F1 y F5.. BI. O. 3. El infuso al 2% de hojas de Artemisia absinthium L. presenta actividad. IA. Y. antiespasmódica.. AC. 4. La actividad antiespasmódica de Artemisia absinthium L. se atribuye a. RM. los flavonoides presentes en las fracciones F2 y a la presencia de. BI BL. IO. TE. CA. DE. FA. sesquiterpenlactonas en la fracción F7. 28 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(31) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. VI.. 1.. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS. Serrano L. Actividad antiespasmódica de extractos de plantas medicinales en preparaciones de íleon de cobayo. Universidad Autónoma de Nuevo León. Tesis para optar el Grado de Doctor en Ciencias con Especialidad en Química Biomédica; 2005. Disponible en:. Alba C, Camacho R, Polano M, Gómez M. Efecto relajante de las hojas de. UI M. 2.. IC A. www. http://cdigital.dgb.uanl.mx/te/1080126698.pdf. Q. Ocimum basilicum y Foeniculum vulgare colombianas en íleon aislado de. Aoki K, Cortés A, Ramírez M, Gómez M, López F. Pharmacological study. Y. 3.. BI. O. rata. Univ. Med. Bogotá (Colombia).2009; 50 (1): 98-109.. AC. IA. of antispasmodic activity of Mirabilis jalapa Linn flowers. Journal of. Gálvez J, Duarte J, Sánchez F, Jiménez J, Zarzuelo A. Inhibitory effects of. FA. 4.. RM. Ethnopharmacology. 2008; 116: 96-101.. DE. quercetin on guinea-pig ileum contractions. Phytotherapy Research. 1996;. Capasso R, Izzo A, Capasso F, Romussi G, Bisio A, Mascolo N. A. TE. 5.. CA. 10: 66-69.. BI BL. IO. diterpenoid from Salvia cinnabarina inhibits mouse intestinal motility in vivo. Planta Medica. 2004; 70: 375-377. 6.. Bashir S, Janbaz K, Jabeen Q, Gilani A. Studies on spasmogenic and spasmolytic activities of Calendula officinalis flowers. Phytotherapy Research. 2006; 20: 906-910.. 7.. Brown J, Taylor P. Agonistas y antagonistas de los receptores muscarínicos. En: Goodman L, Gilman A, Brunton L, Lazo J, Parker K,. 29 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(32) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. editores. Goodman  Gilman. Las bases farmacológicas de la terapéutica. 11ª ed. México: McGraw-Hill; 2006. p. 171-172, 8.. Fleer H, Verspohl E. Antispasmodic activity of an extract from Plantago lanceolata L. and some isolated compounds. Phytomedicine. 2007; 14: 409-415.. 9.. Webb R. Smooth muscle contraction and relaxation. Advances in. Astudillo A, Matab R, Navarrete A. El reino vegetal, fuente de agentes. UI M. 10.. IC A. Physiology Education. 2003; 27: 201-206.. Q. antiespasmódicos gastrointestinales y antidiarreicos. Rev. Latinoamer.. BI. Marín E, Pérez F, Sagástegui A. Actividad antileishmaniásica in vitro del. Y. 11.. O. Quím. 2009; 37(1).. AC. IA. extracto Metanólico de las flores de Tessaria integrifolia R et P.. Mostacero J, Mejía F, Gamarra O. Taxonomía de las Fanerogamas útiles. FA. 12.. RM. (Asteraceae). Pueblo Cont. 2007; 18(1).. Ono M, Masuoka C, Odake Y, Ikegashira S, Toshihiro Y. Antioxidative. CA. 13.. DE. del Perú. Volumen II. Trujillo: Editora Normas Legales; 2002. p. 868-870. IO. TE. Constituents from Tessaria integrifolia. Food Sci. Technol. Res.2000; 6. 14.. BI BL. (2), 106-1 14.. Lock O. Investigación Fitoquímica. Métodos de Estudio de productos Naturales. 2º ed. Lima: Editorial Pontificia Universidad Católica del Perú; 1994. p. 284-287.. 15.. Bigovic D, Brankovic S, Kitic D, Radenkovic M, Jankovic T, Savikin K. Relaxant. effect. of. the. ethanol. extract. of. Helichrysum. plicatum. (Asteraceae) on isolated rat ileum contractions. Molecules. 2010; 15: 3391-3401.. 30 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(33) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 16.. Emendörfer F, Emendörfer F, Vânia F. Noldin, Rivaldo N, Cechinel V. Evaluation of the relaxant action of some Brazilian medicinal plants in isolated guinea-pig ileum and rat duodenum. J Pharm Pharmaceut Sci. 2005; 8(1):63-68.. 17.. Kamble R, Sathaye S, Shah D. Evaluation of antispasmodic activity of different Shodhit guggul using different Shodhan process. Indian J Pharm. Gutiérrez R, Solis R. Antispasmodic and relaxant activity from freshwater. UI M. 18.. IC A. Sci. 2008; 70: 368-372.. Q. cyanobacteria Blennothrix ganeshii and Microcoleous lacustris extracts.. Kumar R, Sharma R, Bairwa K, Roy R, Kumar A. Pharmacological review. Y. 19.. BI. O. Journal of Medicinal Plants Research. 2009; 3(5): 403-407.. AC. IA. on natural anti-diarrhoel agents. Scholars Research Library. 2010; 2(2):. Di Carlo G, Mascolo N, Izzo A, Capasso F. Flavonoids: old and new. FA. 20.. RM. 66-93.. BI BL. IO. TE. CA. DE. aspects of a class of natural therapeutic drugs. Life Sci. 1999; 65:337-345.. 31 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(34) Q. UI M. IC A. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. BI BL. IO. TE. CA. DE. FA. RM. AC. IA. Y. BI. O. ANEXOS. 32 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(35) BI BL. IO. TE. CA. DE. FA. RM. AC. IA. Y. BI. O. Q. UI M. IC A. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Anexo 1. Tessaria integrifolia R. et P. “Pájaro bobo”. 33 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(36) BI BL. IO. TE. CA. DE. FA. RM. AC. IA. Y. BI. O. Q. UI M. IC A. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Anexo 2. Artemisia absinthium L. “Ajenjo”.. 34 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(37) BI BL. IO. TE. CA. DE. FA. RM. AC. IA. Y. BI. O. Q. UI M. IC A. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Anexo 3. Equipo de Órgano Aislado PanLab. 35 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(38) BI BL. IO. TE. CA. DE. FA. RM. AC. IA. Y. BI. O. Q. UI M. IC A. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Anexo 4. Obtención de segmentos de íleon de Cavia porcellus. 36 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(39) BI BL. IO. TE. CA. DE. FA. RM. AC. IA. Y. BI. O. Q. UI M. IC A. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Anexo 5. Separación cromatografica de los fitoconstituyentes mediante cromatografía en columna.. 37 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(40) IA. Y. BI. O. Q. UI M. IC A. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. BI BL. IO. TE. CA. DE. FA. RM. AC. Anexo 6. Obtención de las fracciones cromatográficas. Anexo 7. Cromatografía en Capa fina de las fracciones obtenidas. 38 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(41) AC. IA. Y. BI. O. Q. UI M. IC A. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. BI BL. IO. TE. CA. DE. FA. RM. Anexo 8. Detección en lámpara UV. Anexo 9. Reacción de Shinoda. 39 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(42) IA. Y. BI. O. Q. UI M. IC A. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. BI BL. IO. TE. CA. DE. FA. RM. AC. Anexo 10. Reacción de Baljet. 40 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

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