Actividad reductora in vitro del fruto de Prunus serotina frente a 2,2 Difenil 1 picrylhidrazilo y su cuantificación de antocianinas totales

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(1)Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD FARMACIA Y BIOQUÍMICA. Q. UI. M. IC. A. ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA. BI. O. TESIS II. AC. IA. Y. “Actividad reductora in vitro del fruto de Prunus serotina frente a 2,2Difenil-1-picrylhidrazilo y su cuantificación de antocianinas totales”. RM. PARA OPTAR EL GRADO ACADÉMICO DE:. TE CA. AUTORES:. DE. FA. BACHILLER EN FARMACIA Y BIOQUÍMICA. IO. RENGIFO BECERRA, Henry Abimael. BI BL. ZAVALETA GUZMAN, Daniel Eduardo. ASESOR: Dr. VENEGAS CASANOVA, Edmundo Arturo.. TRUJILLO – PERÚ 2019. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(2) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. DEDICATORIAS A Dios y mis padres Por ser mi fortaleza y guiarme por el buen camino, a mis maravillosos padres Yolanda y Andrés que siempre hacen que logre paso a paso cada meta.. A. A mis hermanos y familiares. M. IC. Porque ustedes son muy importantes en mi vida, gracias Roger, Deyvis, Iván y. UI. Jonathan; a Gianpierre, tía Carmen, Mi Mechita gracias por su apoyo incondicional. Y. BI. O. Q. que cuando nos proponemos algo unidos, logramos todo con armonía, paz y mucha fe.. AC. IA. A mi Esposa e hijo. FA. DE. profesión y ser mejor día a día.. RM. Celinda y Henry Esteban, por ser ustedes mi motor y motivo de seguir avanzando en mi. TE CA. A todos los que hicieron posible que avancemos con nuestra tesis: Gracias Dr. Edmundo A. Venegas Casanova y a nuestro compañero Q.F. Juan por su incansable. BI BL. IO. apoyo incondicional.. ¡Estoy inmensamente agradecido con todos ustedes, sin ustedes no sería igual mi propósito!. Henry. i Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(3) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. A Dios Por darme la fortaleza para afrontar las dificultades y cuidar a quienes considero importantes en mi vida. A mi madre Por inculcarme a ser una persona con valores, por ser mí apoyo constante en todo momento, por sus consejos, enseñanzas, por siempre creer en mí y nunca rendirse.. IC. A. Gracias Vicky por todo el cariño, sacrificio, paciencia y amor que recibí de ti. Estaré. UI. M. siempre agradecido.. O. Q. A mi hermano. BI. A Alex por ser mi compañero y amigo, por las risas, bromas, discusiones y sobre todo. IA. Y. por tu apoyo incondicional. Gracias por todo hermano.. AC. A mis amigos. RM. A Juan por el apoyo en este proceso y su experiencia brindada como profesional y. DE. FA. amigo para la realización de este trabajo. A Paola y Karerin por su amistad, por ver lo. TE CA. bueno en mí y por siempre apoyarme, cada una a su manera, a seguir adelante. A Juan Carlos y Franklin por ser amigos en las buenas y malas, por todo su apoyo en. IO. todo este tiempo. Muchas gracias a todos.. BI BL. A Lourdes gracias por ser mi compañera y amiga. Gracias por siempre encontrar la forma de animarme para no rendirme y avanzar. Te quiero mucho. Daniel. ii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(4) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. AGRADECIMIENTO. A nuestro asesor:. Por su apoyo y comprensión incondicional que nos brindó en cada momento que lo. A. necesitábamos para poder culminar nuestro trabajo.. M. IC. A nuestros distinguidos miembros del jurado dictaminador les agradecemos por sus. Q. UI. consejos y recomendaciones que nos sirvió para culminar la presentación de nuestro. Y. BI. O. trabajo.. AC. IA. Gracias por sus conocimientos, experiencias, tiempo y dedicación que nos brindaron. RM. para la realización del trabajo “Actividad reductora in vitro del fruto de Prunus. FA. serotina frente a 2,2-Difenil-1-picrylhidrazilo y su cuantificación de antocianinas. BI BL. IO. TE CA. DE. totales”. iii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(5) BI BL. IO. TE CA. DE. FA. RM. AC. IA. Y. BI. O. Q. UI. M. IC. A. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. iv Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(6) BI BL. IO. TE CA. DE. FA. RM. AC. IA. Y. BI. O. Q. UI. M. IC. A. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. v Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(7) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. RESUMEN. En el presente estudio se determinó la actividad reductora y el contenido de antocianinas totales del fruto fresco de Prunus serotina “capulí”. La concentración de. IC. A. antocianinas totales se determinó mediante el método de pH diferencial mientras que. M. para determinar la actividad reductora o capacidad antioxidante se usó el método de. Q. UI. captura del radical libre DPPH•. Hallando una concentración de 16,22 ± 0,24 mg de. BI. O. cianidina-3-O-glucósido para el primer caso. Y un IC50 de 61,94 g/mL y con un. IA. Y. porcentaje de 85,4% de captura de DPPH• para el caso de la actividad reductora. Por. RM. AC. tanto, nuestro estudio nos da muestras del alto poder reductor del fruto de Prunus. TE CA. DE. FA. serotina y sus posibles efectos en beneficio de la salud.. BI BL. IO. Palabras claves: antioxidante, radicales libres, antocianinas totales, Prunus serotina.. vi Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(8) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ABSTRACT. In the present study, the reducing activity and total anthocyanin content of the fresh fruit of Prunus serotina "capulí" was determined. The concentration of total anthocyanins. IC. A. was determined by the differential pH method, while the DPPH• free radical capture. M. method was used to determine the reducing activity or antioxidant capacity. Finding a. Q. UI. concentration of 16,22 ± 0,24 mg of cyanidin-3-O-glucoside for the first case. And an. BI. O. IC50 of 61,94 g / mL and with a percentage of 85,4% of DPPH• capture for the case of. IA. Y. reducing activity. Therefore, our study shows us the high reducing power of the Prunus. TE CA. DE. FA. RM. AC. serotina fruit and its possible effects for the benefit of health.. BI BL. IO. Key words: antioxidant, free radicals, total anthocyanins, Prunus serotina.. vii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(9) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ÍNDICE Pág. DEDICATORIA… ....................................................................................................... i AGRADECIMIENTO… ............................................................................................ iii. M. IC. A. PRESENTACIÓN ...................................................................................................... iv. Q. UI. JURADO DICTAMINADOR ..................................................................................... v. BI. O. RESUMEN ................................................................................................................. vi. INTRODUCCIÓN .............................................................................. 1. FA. RM. I.. AC. IA. Y. ABSTRACT… .......................................................................................................... vii. MATERIAL Y MÉTODO… ............................................................................. 4. III.. RESULTADOS ................................................................................................ 15. IV.. DISCUSIÓN .................................................................................................... 19. V.. CONCLUSIONES ........................................................................................... 22. VI.. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS… ......................................................... 23. VII.. ANEXOS ..........................................................................................................27. BI BL. IO. TE CA. DE. II.. viii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(10) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. I.. INTRODUCCIÓN. Desde tiempos ancestrales el hombre ha creado las condiciones para mejorar su calidad de vida haciendo uso de las plantas, ya sea como alimento, medicina y veneno; teniendo efectos benéficos o perjudiciales de acuerdo a la cantidad. A. administrada1-3.. M. IC. En el Perú existe una gran variedad de plantas con información etnomedicinal. UI. para el tratamiento de enfermedades, cómo es el caso de Prunus serotina. O. Q. “Capulí”. La cual es una planta medicinal originaria de Centro América,. Y. BI. perteneciente a la familia de las rosáceas. En la actualidad el árbol crece en. AC. IA. muchos países, se encuentra distribuida en los Andes y amazonia de todo el. RM. Perú, donde crece desde los 2100 - 3900 m.s.n.m. Se propaga por semillas y de. FA. forma vegetativa; su fruto tiene un diámetro aproximado de 1.5 a 2.0 cm, con. DE. cáscara rojo-oscura a negra y pulpa verdo-pálido, jugosa, agridulce y. TE CA. comestibles, los cuales contienen proteínas, carbohidratos, vitaminas A, B1, B2, B5 y C, también minerales como calcio, hierro y fósforo; se consume al estado. BI BL. IO. natural por su sabor agradable; se pueden hacer jaleas y mermeladas. Se le atribuyen. propiedades. medicinales. como. antitusígenas,. sedantes,. cardioreguladoras y antioxidantes4-6. En los últimos años se ha incrementado el interés en la búsqueda de antioxidantes naturales, generalmente constituidos por una mezcla de compuestos con elevada diversidad molecular y funcionalidad biológica. Las plantas contienen metabolitos secundarios, uno de ellos son los flavonoides y los compuestos fenólicos, los cuales juegan un papel fundamental en la variación de. 1 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(11) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. la actividad antioxidante siendo útiles para prevenir enfermedades asociadas a radicales libres presentes en el organismo humano que causan daño oxidativo a diferentes moléculas, tales como lípidos, proteínas y ácidos nucleicos teniendo que ver en la iniciación de enfermedades degenerativas7-9. Las antocianinas o agliconas pertenecen al grupo de los flavonoides y su estructura básica es el ión flavilio, también llamado 2-fenil-benzopirilio, el cual. IC. A. consta de dos anillos aromáticos: un benzopirilio (A) y un anillo fenólico (B). UI. M. estos están unidos por una cadena de tres carbonos. El nivel de hidroxilación y. O. Q. metilación en el anillo “B” de la molécula determina el tipo de antocianidina,. BI. que es la aglicona de la antocianina (figura 1). El color de las antocianinas son. IA. Y. pigmentos hidrosolubles visibles al ojo humano, responsables de la gama de. AC. colores que abarcan desde el rojo hasta el azul en varias frutas, vegetales y. RM. cereales, acumulados en las vacuolas de la célula, dependiendo del número y. DE. FA. orientación de los grupos hidroxilo (sus incrementos producen desplazamientos. TE CA. hacia tonalidades azules) y metoxilo de la molécula (sus incrementos producen. BI BL. IO. coloraciones rojas)10,11.. Figura 1. Estructura y sustituyentes de las antocianinas12.. 2 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(12) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Las antocianidinas también poseen diferentes funciones en la planta como es la atracción de polinizadores, la protección contra los rayos ultravioleta y la contaminación viral y microbiana10,11. Las antocianinas químicamente son glucósidos de las antocianidinas, es decir, están constituidas por una molécula de antocianidina, que es la aglicona, a la que se le une un azúcar por medio de un enlace β-glucosídico en las posiciones 3 y/o. IC. A. 5 con mono, di o trisacáridos que incrementan su solubilidad y estabilidad. Los. UI. M. monosacáridos más comunes son: pentosas como arabinosa y xilosa, o bien. O. Q. hexosas, de las cuales la D-glucosa es la más frecuente, aunque también pueden. BI. estar presentes galactosa o ramnosa. Los disacáridos más frecuentes son. IA. Y. gentobiosa, soforosa, sambubiosa y rutinosa. Los trisacáridos reportados pueden. AC. ser lineales como la gentotriosa, o bien ramificados como xilosilrutinosa o. RM. glucosilrutinosa10,11.. DE. FA. Otra posible variación en la estructura es la acilación de los residuos de azúcares. TE CA. de la molécula con ácidos orgánicos. Los ácidos orgánicos pueden ser alifáticos, tales como: malónico, acético, málico, succínico u oxálico; o aromáticos: p-. IO. coumárico, caféico, ferúlico, sinápico, gálico, o p-hidroxibenzóico. La presencia. BI BL. de estos grupos acilo en la molécula de antocianidina le confiere estabilidad ante condiciones extremas de pH y temperatura. La acidez tiene un efecto protector, es decir en soluciones acuosas a valores de pH inferiores a dos se encuentra en su forma estable o de ión oxonio o catión flavilio (AH+) de color rojo intenso. A valores de pH más altos pierde el protón y adición de agua en la posición 2, dando lugar a un equilibrio entre la pseudobase carbinol o hemicetal (B) y la forma chalcona (C), o de cadena abierta. Tanto el hemicetal como la chalcona, son formas incoloras y bastante inestables. A valores de pH superiores a 7 se 3 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(13) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. presentan las formas quinoidales (A, A-) de color púrpura que se degradan. AC. IA. Y. BI. O. Q. UI. M. IC. A. rápidamente por oxidación con el aire. (Figura 2)10-15.. FA. RM. Figura 2. Estructura de las antocianinas a diferentes valores de pH16.. DE. Cuando en la molécula de antocianina se encuentran únicamente azúcares, se. TE CA. denominan no aciladas; si además de los azúcares están presentes uno o varios. IO. radicales acilos, se catalogan como aciladas10,11.. BI BL. BIOSÍNTESIS DE ANTOCIANINAS Se ha establecido experimentalmente que al anillo A de las antocianinas se sintetiza por la ruta del ácido malónico con la condensación de tres moléculas de malonil-CoA, mientras que el anillo B se sintetiza por la ruta de ácido shikímico. El ácido shikímico da paso a la fenilalanina que por acción de una fenilalanina amonia liasa (PAL), y después de una pérdida de NH3 se convierte en ácido pcoumárico. El p-coumaril-CoA luego participa en una reacción de condensación con las tres moléculas de malonil-CoA para formar una chalcona. 4 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(14) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. de 15 C, reacción propiciada por una chalcona sintetasa. Este compuesto intermedio de 15 C es transformado en una flavanona en una reacción catalizada por una chalcona isomerasa. Finalmente, la flavanona es transformada en la correspondiente antocianidina por una reacción de hidroxilación en el carbono 3 seguida por una deshidratación (Figura 3). La molécula de antocianidina se estabiliza por glicosilación del heterociclo; reacción en la que interviene una. A. glicosil transferasa y posterior posibles reacciones de metilación de los. BI BL. IO. TE CA. DE. FA. RM. AC. IA. Y. BI. O. Q. UI. M. IC. hidroxilos seguidas de acilaciones10-12.. Figura 3. Ruta general de biosíntesis de las antocianinas17.. 5 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(15) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Existen antecedentes que ofrecen a las antocianinas como sustitutos potenciales de los colorantes artificiales, factores como su baja estabilidad y la falta de disponibilidad de material vegetal limitan su aplicación comercial, siendo estas algunas desventajas18. Los colorantes artificiales se relacionan con modificaciones en la hiperactividad de niños de edad escolar lo cual puede considerarse un mal neuronal agudo por. M. IC. A. lo cual se debe disminuir su uso19-21.. UI. Estudios con fracciones de antocianinas provenientes del vino han demostrado. O. Q. que estas son efectivas en atrapar especies reactivas del oxígeno, además de. IA. Y. BI. inhibir la oxidación de lipoproteínas y la agregación de plaquetas22.. AC. Durante el paso del tracto digestivo al torrente sanguíneo de los mamíferos, las. RM. antocianinas permanecen intactas y ejercen efectos terapéuticos relacionados. efectos. anticancerígenos,. DE. coronaria,. FA. con su actividad antioxidante que incluyen la reducción de la enfermedad antitumorales,. antiinflamatorios. y. TE CA. antidiabéticos; además del mejoramiento de la agudeza visual y del. IO. comportamiento cognitivo23.. BI BL. De igual manera, han demostrado que frutos ricos en antocianinas evidencian una alta actividad antioxidante contra el peróxido de hidrógeno (H2O2) y contra radicales peróxidos, (ROO.), superóxido (O2.), hidroxilo (OH.) y oxígeno singulete (1O2)24,25. A las antocianinas también se les atribuye actividad antitumoral y anticancerígena demostraron que el suministro de papas púrpuras dulces y repollo morado a ratas de laboratorio, causan supresión de tumores26.. 6 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(16) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. En cuanto a la actividad anticancerígena, se reportaron la supresión de células cancerígenas HCT-15 provenientes del colon humano y de células cancerígenas gástricas AGS al suministrar fracciones de antocianinas del vino tinto27. Según un estudio referente a la actividad antiinflamatoria, encontraron en extractos concentrados de antocianas efecto inhibitorio de la producción de. A. óxido nítrico en macrófagos activados28.. M. IC. Actualmente existen evidencias epidemiológicas que sustentan la acción. UI. patogénica de los radicales libres en los procesos biológicos. Los radicales libres. O. Q. son compuestos químicos altamente reactivos, se debe a que han perdido uno de. Y. BI. sus electrones e intentan reponerlo tomándolo de otros átomos provocando una. AC. IA. reacción en cadena y que pueden dañar las células. Los antioxidantes se forman. RM. naturalmente en el cuerpo o llamados Antioxidantes enzimáticos intracelular. FA. endógenos como: Catalasa, Glutation peroxidasa, Glutation reductasa,. DE. Superoxido dismutasa, Complejo reparador de ADN; pero un aumento en la. TE CA. concentración de estos puede ser de riesgo para la salud de las personas ya que pueden dañar los componentes principales de las células tal como lo es el ADN,. BI BL. IO. proteínas y las membranas celulares. Dando como resultado envejecimiento, enfermedades inflamatorias, cardiovasculares, cáncer, entre otras. Nuestro cuerpo necesita una fuente exógena de antioxidantes llamados antioxidantes no enzimáticos que se dividen en Extracelulares Endógenos como: Glutatión, Urato, Ubiquinol, Proteínas plasmáticas y los Dietarios Exógenos como B Caroteno, vitamina C y E, Polifenoles, Flavonoides. Los antioxidantes exógenos se obtienen de la dieta principalmente (frutas, verduras y cereales)29,30.. 7 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(17) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Los antioxidantes se clasifican como: primarios (interrumpen la reacción en cadena generando un radical menos activo, como el fenol que es un agente captador de radicales “radical scavengers”) y secundario o preventivo (están los agentes quelantes, actúan atrapando a los cationes metálicos que intervienen en la descomposición del peróxido de hidrógeno a radical hidroxilo; evitando que estos últimos se formen. Están la penicilina, EDTA y el profármaco. IC. A. dexrazoxano)29.. UI. M. Hay muchos factores relacionados con la eficacia de un antioxidante, como la. O. Q. energía de activación, constantes de velocidad, potencial de óxido reducción,. BI. solubilidad del antioxidante. Por consiguiente, aumenta su eficacia un. IA. Y. antioxidante (AH) al disminuir la fuerza del enlace AH. Los antioxidantes. AC. fenólicos son excelentes donadores de electrones o de hidrógeno, siendo sus. FA. RM. radicales intermediarios relativamente estables30.. DE. Estos compuestos fenólicos son de interés por su propiedad protectora de. TE CA. sistemas biológicos contra la oxidación; poseen en común un anillo aromático con uno o más sustituyentes hidroxilos, y que ocurren frecuentemente como. BI BL. IO. glicósidos, combinados con unidades de azúcar29. Para evaluar la capacidad antioxidante existen diferentes métodos (ya sea in vitro o in vivo), siendo uno de ellos el método químico, mediante la neutralización del radical libre 2,2 difenil-1-picrilhidrazilo (DPPH•). El radical DPPH• es estable y con él se mide la capacidad de secuestro de cualquier compuesto con actividad antioxidante. La solución del reactivo de DPPH• es de color violeta y presenta un máximo de absorbancia a 520 nm. La reacción química consiste en que el radical libre DPPH sustrae un átomo de hidrógeno 8 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(18) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. proveniente de un donador (compuesto químico puro o extracto), producto de este cambio se desarrolla un cambio de color, de violeta a amarillo, al disminuir la concentración del. radical libre; esta intensidad es leído en el. espectrofotómetro después de un tiempo de 30 minutos de reacción. (Figura 4)29-. Q. UI. M. IC. A. 32.. Y. BI. O. Figura 4. Reacción química del radical libre DPPH•29.. AC. IA. OBJETIVOS. FA. RM. Objetivo general:. DE. ─ Determinar la Actividad reductora in vitro del fruto de Prunus serotina. IO. totales.. TE CA. frente a 2,2-Difenil-1-picrylhidrazilo y la concentración de antocianinas. BI BL. Objetivos específicos: ─ Determinar la concentración de antocianinas totales del fruto de Prunus serotina “capulí” por el método de pH diferencial, expresados en mg de cianidina-3-O-glucósido. ─. Determinar la Actividad reductora in vitro del fruto de Prunus serotina frente a 2,2-Difenil-1-picrylhidrazilo a diferentes concentraciones del extracto.. 9 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(19) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2. MATERIAL Y METODO. 2.1. MATERIAL DE ESTUDIO. 2.1.1. MATERIAL BIOLÓGICO. Se utilizó 1 kilogramo del fruto de Prunus serotina "Capulí”. Cajabamba. (Altitud:. 2723. IC. de. m.s.n.m.. entre. M. provincia. Cajabamba,. A. procedente del caserío Campana, distrito de. Q. UI. coordenadas geográficas: latitud sur 7° 36′ 19,1″, latitud oeste 78°. Y. BI. O. 02′ 51,4″ al norte de Cajabamba). Región de Cajamarca. AC. IA. 2.1.2. MATERIAL Y EQUIPOS DE LABORATORIO. FA. De uso común en el laboratorio de Farmacognosia.. TE CA. DE. ─. RM. 2.1.2.1.MATERIAL DE VIDRIO.. ─. BI BL. IO. 2.1.2.2. EQUIPOS. Balanza analítica “OHAUS -GA200”, serie N° 2786 (precisión 0.0001g). ─. Balanza mecánica triple brazo “OHAU. S – 700/800”,. serie N° 2,729,439 ─. Bomba. al. vacío. THOMAS. SCIENTIFIC. mod.5KH33DN68. ─. Cocina eléctrica FINELY 10. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(20) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ─. Espectrofotómetro HEWELTT PACKARD mod. 8452ª.. ─. Estufa “MEMMERT” U-40, serie N° 03-56098. ─. Horno mufla “FURNACE 1300”. ─. Refrigeradora “ELECTROLUX”.. Reactivos:. UI. M. ▪. IC. A. 3.1.2.3 REACTIVOS Y SOLVENTES.. Acetato de Sodio. Merck. -. Ácido Clorhídrico 37% Merck. -. Cloruro de Potasio. Merck. -. 2,2-Difenil-1-picrilhidrazilo (DPPH). Sigma Aldrich. Solventes:. BI BL. IO. ▪. TE CA. DE. FA. RM. AC. IA. Y. BI. O. Q. -. -. Agua destilada desionizada. -. Etanol de 96º GL.. 11 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(21) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.2. MÉTODO.. 2.2.1. Preparación de la Muestra 2.2.1.1.RECOLECCIÓN. El fruto de Prunus serotina “Capulí”, se recolectó, en el mes de abril del 2019, dentro del período de maduración del fruto, en el. A. caserío Campana, distrito de Cajabamba, provincia de Cajabamba. M. IC. (Altitud: 2723 m.s.n.m. entre coordenadas geográficas: latitud sur. UI. 7° 36′ 19,1″, latitud oeste 78° 02′ 51,4″ al norte de Cajabamba).. BI. O. Q. Región de Cajamarca. Y. 2.2.1.2. ALMACENAMIENTO.. AC. IA. Para evitar cualquier tipo de alteración que pudiera afectar a la. RM. composición del fruto, inmediatamente después de recolectar los. FA. frutos, en condiciones estandarizadas y alejada de la incidencia. DE. directa de los rayos solares. Posteriormente se almacenó en cajas. TE CA. de tecnopor y llevado a refrigeración. 2.2.1.3. SELECCIÓN.. BI BL. IO. Una vez realizada la recolección de la muestra se seleccionó el material vegetal con el objetivo de realizar una separación de las partes deterioradas y evitar la mezcla con otra especie.. 2.2.1.4. IDENTIFICACIÓN. Un ejemplar de la planta de Prunus serotina “Capulí”, se llevó al Herbario Truxillense de la Universidad Nacional de Trujillo para su identificación taxonómica, según el sistema de clasificación Filogenético de A. Engler.. 12 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(22) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.2.2. CUANTIFICACIÓN DE ANTOCIANINAS TOTALES POR pH DIFERENCIAL33. Fundamento del método: Una alícuota de una solución etanólica de antocianinas es ajustada a pH 1,0 y otra a pH4,5, donde a pH 1,0 (forma oxonium) las antocianinas existen en la forma altamente coloreada y a pH 4,5 están predominantemente en forma. A. incolora (forma hemiacetal). La diferencia de las absorbancias obtenidas a. M. IC. una longitud de onda de máxima absorción será proporcional al contenido de. Q. UI. antocianinas.. BI. O. 2.2.2.1. Obtención de las antocianinas totales. Y. Se pesó 100 g de frutos enteros frescos, se vierte a un balón de 250 mL de. AC. IA. capacidad, luego se agregó 150 mL de etanol 96 °GL y se dejó macerar por. RM. 48h pasado el tiempo se filtró obteniéndose el extracto etanólico.. FA. Posteriormente al marco se agregó 150 mL de etanol 96°GL y se continuó la. DE. maceración por dos veces consecutivas. Finalmente se reunieron los tres. TE CA. filtrados y se llevó a concentrar hasta que se obtiene el extracto blando.. IO. 2.2.2.2. Preparación de Soluciones Reguladoras. BI BL. a. Buffer pH 4, 5: El buffer se preparó de la siguiente manera: 40mL de acetato de sodio 1M más 24 mL de HCl 1N y 36 mL de agua destilada.. b. Buffer pH 1, 0: El buffer se preparó de la siguiente Manera: 12, 5 mL de KCl 0, 2 N más 38, 5 mL de HCl 0,2 N El pH de los buffers se ajustó a medida que se requiere para obtener valores de pH final de 1,0 y 4,5.. 13 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(23) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.2.2.3. Método de pH Diferencial. Para medir la absorbancia, el extracto fue diluido con buffer. La dilución debe ser tal que la muestra a pH 1,0 tenga una absorbancia menor a 1,0 y preferentemente en el rango de 0,4 a 0,6. El factor de dilución debe ser el mismo para ambas muestras (pH 1,0 y pH 4,5). En este caso se ha medido 0,4 mL de macerado y 3.6 mL de buffer. La turbidez de la solución final. A. puede ser corregida midiendo la absorbancia a 700 nm y sustrayendo este. M. IC. valor de la absorbancia a la longitud de onda de máxima absorción (520. O. Q. UI. nm).. BI. La determinación del contenido de antocianinas está basada en la Ley de. AC. IA. Y. Lambert-Beer (A=ε·C·L).. RM. A: corresponde a la absorbancia que es medida con un espectrofotómetro.. FA. ε: corresponde a la absorbancia molar, una constante física para especies. TE CA. DE. moleculares en un solvente a una determinada longitud de onda. La absorbancia molar también se conoce como coeficiente de extinción. BI BL. IO. molar.. C: es la concentración molar y al reestructurar la ecuación de LambertBeer esta sería:. L: es la longitud de recorrido en cm y la mayoría de las cubetas para espectrofotómetro tienen una longitud de 1. La concentración en mg/L puede ser determinada multiplicando por el peso molecular (MW) del pigmento: 14 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(24) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Para el cálculo del contenido de antocianinas se utiliza el peso molecular y la absorbancia molar del pigmento antociano presente en mayor proporción. La absorbancia se obtiene sustrayendo el valor obtenido a pH 4,5 del valor. M. IC. A. obtenido a pH 1,0. O. Q. UI. Las lecturas se realizaron por triplicado.. BI. 2.2.3. Determinación de la actividad reductora in vitro34. IA. Y. Fundamento del método:. AC. El fundamento del método descrito por Brand Williams, consiste en que. FA. RM. el radical libre estable 2,2-difenil-1-picrilhidrazilo (DPPH•) tiene un. DE. electrón desapareado y es de color azul-violeta, decolorándose hacia. TE CA. amarillo pálido por reacción con una sustancia capturadora de radicales libres; la absorbancia es medida espectrofotométricamente a 520 nm. La. IO. diferencia de absorbancias, permite obtener el porcentaje de captación de. BI BL. radicales libres. Preparación de la solución del extracto etanólico de Prunus serotina “Capulí” Del extracto blando, se preparó una dilución al 5%, se pesó 0,5g y se agregó a una fiola de 10 mL, se aforó a 10 mL con etanol al 96 °GL.. 15 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(25) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Preparación del Reactivo: Solución 2,2-difenil-1-picrilhidracilo (DPPH) Se preparó una solución de DPPH• con etanol de 96 °GL a una concentración de DPPH• 0,1 mM (0,03943 mg/mL) Preparación de la recta de calibración para la solución de radical DPPH. IC. A. Procedimiento:. UI. M. De la solución de DPPH• 0.1 mM se midió volúmenes de 2; 4; 6; 8 y 10. O. Q. mL; y se trasvasó a fiolas de 10mL, se aforó con etanol de 96º GL,. Y. BI. obteniendo concentraciones de 0,02; 0,04; 0,06; 0,08 y 0,1mM. AC. IA. respectivamente. (Tabla N°1). RM. Tabla N° 1: Concentración de solución de DPPH• para obtener la recta de. DE. FA. calibración. TE CA. Concentración de solución de DPPH* 0,02 mM. 2mL. 10mL. 0,04 mM. 4mL. 10mL. 0,06 mM. 6mL. 10mL. 0,08 mM. 8mL. 10mL. 0,1 mM. 10mL. 10mL. IO BI BL. Volumen de solución de Volumen de etanol 96° GL DPPH 0,1 mM c.s.p.. Se realizó un barrido espectrofotométrico con la solución DPPH• 0,1 mM hallando la longitud de onda de máxima absorbancia. Se realizó tres lecturas de absorbancias en el espectrofotómetro, de las cuales se obtuvo un promedio, se utilizó un blanco consistente en etanol de 96º GL.. 16 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(26) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Determinación de los porcentajes de captura del radical DPPH Procedimiento En un set de 10 fiolas, se adicionó en cada uno de ellos 10 mL de la solución de DPPH• 0,1 mM. Se tomaron alícuotas de 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1000 uL de la solución etanólica de Prunus serotina “capulí” y se enfrentó con. M. IC. A. la solución de DPPH• 0,1 mM.. Q. UI. Se preparó un control (que consiste en 10 mL de solución de DPPH• 0,1. BI. O. mM) y se leyó la absorbancia a 520 nm en el espectrofotómetro.. AC. IA. Y. Como blanco se utilizó etanol de 96° GL.. RM. Posteriormente, se utilizó los valores de absorbancia problema y la. DE. fueron capturados.. FA. absorbancia control, para calcular el porcentaje de radicales DPPH• que. TE CA. Se calculó el porcentaje de radicales DPPH• capturados, con la siguiente. BI BL. IO. fórmula:. Dónde: Abs. Control: Absorbancia del patrón Abs. Muestra: Absorbancia de la muestra problema. 17 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(27) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. III.. RESULTADOS. Tabla 1: Cuantificación de antocianinas totales del fruto de Prunus serotina “Capulí” Concentración (mg/100g fruto fresco) ± D.E. 16,22 ± 0,24. Q. UI. M. IC. A. Antocianinas totales. IA. Y. BI. O. Tabla 2: Actividad reductora del fruto de Prunus serotina “Capulí”. % Captura DPPH. 61,94. 85,40%. AC. IC50 (µg/mL). BI BL. IO. TE CA. DE. FA. RM. Prunus serotina. 18 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(28) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. IV.. DISCUSIÓN. El estudio de las antocianinas, su concentración y actividad reductora en drogas vegetales permiten tener mejor conocimiento sobre sus características y posibles aplicaciones en la industria farmacéutica. En la Tabla N° 1 observamos que por cada 100 g de fruto fresco de Prunus serotina obtuvimos 16,22 mg de. A. antocianinas expresados como cianidina 3-o-glucósido con una desviación. M. IC. estándar de 0,24. La cuantificación se realizó por el método de pH Diferencial. Q. UI. ya que considerando al pH como uno de los principales factores del medio que. BI. O. afectan la estabilidad de las antocianinas, ya que los espectros de UV-VIS a. AC. antocianinas están o no polimerizadas.. IA. Y. diferentes valores de pH también varían y esto nos permite determinar si las. RM. Según Hurtado, en su estudio tuvieron como resultados una concentración 2,67. FA. mg expresado como cianidina 3-O-glucosido/g de cascara determinado por el. DE. método de pH diferencial14. De igual manera en el estudio realizado por Rojas. TE CA. que determinó la cantidad de antocianinas en la cascara del fruto de capulí. IO. expresaron como resultado 2,285 mg/g de antocianinas36.. BI BL. La actividad reductora de la droga vegetal usada en este estudio es la expresión de los diferentes compuestos antocianos, los que ejercen actividad reductora mediante diferentes mecanismos de acción. Esta capacidad de interaccionar con las especies reactivas de oxígeno (EROS) se mide mediante el método de captura del radical DPPH•, este método es uno de los más utilizados para determinar la actividad reductora de los compuestos con posible actividad antioxidante expresado en el valor del IC50, que se entiende como la cantidad de antioxidante necesario para neutralizar o inhibir el 50% de la concentración de. 19 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(29) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. DPPH• inicial34. En la tabla N° 2 se observa el valor del indicador IC50 es 61,94 µg/ mL, con un porcentaje de captura de 85,4%, esto nos indicaría un alto poder reductor de la muestra frente al radical libre DPPH, este resultado guarda relación con la concentración total hallada de antocianinas totales en el extracto del fruto de Prunus serotina. En el estudio realizado por Jiménez, indica que la mayor actividad de captación. A. de radicales libres se da en los extractos etanólico y metanólico con porcentajes. M. IC. de 73,47 y 72,74 respectivamente, según indica el autor esta actividad está. Q. UI. influenciada directamente por la composición fenólica presente en la droga. BI BL. IO. TE CA. DE. FA. RM. AC. IA. Y. BI. O. vegetal31.. 20 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(30) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. V.. ─. CONCLUSIONES. Se determinó la Actividad reductora in vitro del fruto fresco de Prunus serotina frente a 2,2-Difenil-1-picrylhidrazilo obteniendo un IC50 de 61,94 µg/mL y con un porcentaje de 85,4% de captura de DPPH•.. ─. Se determinó la concentración, mediante la cuantificación de antocianinas. IC. A. totales presentes en el fruto de Prunus serotina “capulí” por el método de pH. UI. M. diferencial, hallando una concentración de 16,22 ± 0,24 mg de cianidina-3-O-. BI BL. IO. TE CA. DE. FA. RM. AC. IA. Y. BI. O. Q. glucósido.. 21 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(31) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. VI.. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS. 1. Escalona L. Uso tradicional de plantas medicinales por el adulto mayor en la comunidad serrana de Corralillo Arriba. Guisa, Granma. Rev.Cubana Plant Med [Internet]. 2015 Dic [citado 2019 May 10];20(4): Disponible en: http://scielo.sld.cu/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S102847962015000400007&lng=es. A. 2. Hoogesteger C. Uso de plantas medicinales. Ed. Árbol editorial. México. 1994. pp.:. M. IC. 1-3.. Q. UI. 3. Palacios J. Plantas medicinales nativas del Perú. 2006: 3º edición. Biblioteca. BI. O. Nacional del Perú; Perú: pp.: 114 – 115. Y. 4. Mostacero J, Mejía F, Gamarra O. Fanerógamas del Perú: taxonomía, utilidad y. AC. IA. ecogeografía. ed. 10. Ed. CONCYTEC. 2009. pp.: 295.. RM. 5. Mostacero J. Plantas medicinales del Perú: Taxonomía, Ecogeografía, Fenología y. FA. etnobotánica. ed. 10. Ed. Instituto Pacífico S.A.C. 2011. pp.: 508.. DE. 6. Guadalupe J. Estudio Preliminar de la Diversidad Genética del Capulí (Prunus. TE CA. serotina) en 5 Provincias de la Región Andina de Ecuador Mediante el Uso de. IO. Marcadores Moleculares Microsatélites. [Internet]. 2012 Dic [citado 2019 Abr 10].. BI BL. Disponible en: http://repositorio.usfq.edu.ec/bitstream/23000/1976/1/105480.pdf 7. Fong O. Potencial antioxidante de un extracto acuoso de hojas del NIM (Azadirachta Indica A. Juss). Rev. Cubana Plant Med [Internet]. 2014 Jun [citado 2019 Abr 14]; 19(2): 205-207. Disponible en: http://scielo.sld.cu/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S102847962014000200009&lng=es 8. Duarte A. Influence of Spatial, Edaphic and Genetic Factors on Phenols and Essential. Oils. of. Myrciaria. cauliflora. Fruits. [Internet].. 2012. Mar. [citado 2019 Mar 18] Disponible en: http://scielo.br/pdf/jbchs/v23n4/a20v23n4.pdf 22 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(32) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 9. Muñoz A. Evaluación de la capacidad antioxidante y contenido de compuestos fenólicos en recursos vegetales promisorios. Rev. Soc. Quím. Perú, vol.73, n.3 [Internet]. 2007 [citado 2019 Mar 18], pp. 142-149. Disponible en: http:// http://www.scielo.org.pe/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1810634X2007000300003 10. Garzón G. Las antocianinas como colorantes naturales y compuestos bioactivos:. A. Revisión. Acta biol Colomb [Internet]. 2008 Dic [citado 2019 Mar 19]; 13(3):27-36.. M. IC. Disponible en: http://www.scielo.org.co/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0120-. Q. UI. 548X2008000300002&lng=en. BI. O. 11. Aguilera M. Propiedades Funcionales de las antocianinas. Rev. De ciencias. Y. biológicas y de la salud. [Internet]. 2011 Nov [citado 2019 May 22]; 20(4):. AC. IA. Disponible en: http://132.248.9.34/hevila/Biotecnia/2011/vol13/no2/2.pdf. RM. 12. Durst R. Separation and characterization of anthocyanins by HPLC. In: handbook of. FA. Food analytical Chemistry. New Jersey: John Wiley & Sons; 2001. p. 33-45. DE. 13. Kuklinski C. Farmacognosia. Estudio de las drogas y sustancias medicamentosas de. TE CA. origen natural. Ed. Omega. Barcelona. 2000. pp.:106-109.. IO. 14. Espino G. Antocianinas, los otros pigmentos del reino vegetal. [Internet]. 2014. BI BL. Enero. [citado 2019 May 22];20(4): Disponible en: http://ubuscientia.blogspot.pe/2014/01/antocianinas-los-otros-pigmentos-del.html 15. Hurtado N. Identificación, Estabilidad y Actividad Antioxidante de las Antocianinas Aisladas de la Cáscara del Fruto de Capulí (Prunus serotina spp capuli (Cav) Mc. Vaug Cav). Inf. tecnol. [Internet]. 2014 Feb. vol.25, n.4 [citado 2019 May 24], pp.131-140. Disponible en: http://www.scielo.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0718-07642014000400015. 23 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(33) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 16. Coultate T. FOOD: The chemistry of its components. Borlington House, London: The Royal Society of Chemistry. 1987. p.113 17. Delgado F. Natural Pigments: Carotenoids, Anthocyanins, and BetalainsCharacteristics, Biosynthesis, Processing, and Stability. Crit Rev Food Sci Nutr. 2000; 40(3):173-289. 18. Cevallos-Casals Ba. Stability of Anthocyaninbased Aqueous Extract of Andean. A. Purple Corn and Red Fleshed Sweet Potato Compared to Synthetic and Natural. M. IC. Colorants. Food Chem. 2004;86: 69-77.. Q. UI. 19. Breakey J. The Role of Food Additives and Chemicals in Behavioral, Learning,. BI. O. Activity, and Sleep Problems in Children. editors. Food additives. New York:. Y. Marcel Dekker Inc.; 2002. p. 87-88.. AC. IA. 20. Birks S. The Potential of Carrots. Food-Manuf. 1999;47(4): 22-23.. RM. 21. Ersus S. Microencapsulation of Anthocyanin Pigments of Black Carrot. FA. (Daucuscarota L.) by Spray Drier. J Food Eng. 2007;80: 805-812.. DE. 22. Ghiselli A. Antioxidant Activity of Different Phenolic Fractions Separated From an. TE CA. Italian Red Wine. J Agric Food Chem. 1998;46 (2),361-367.. IO. 23. Miyazawa T. Direct Intestinal Absorption of Red Fruit Anthocyanins, Cyanidin-3-. BI BL. Glucoside and Cyanidin-3,5-Diglucoside, Into Rats and Humans. J Agric Food Chem. 1999;47: 1083-1091. [Internet] 1999 Feb. [Citado 2019 Mar 10]. Disponible en: https://pubs.acs.org/doi/10.1021/jf9809582 24. Wang S. Scavenging Capacity of Berry Crops on Superoxide Radicals, Hydrogen Peroxide, Hydroxyl Radicals, and Singlet Oxygen. J Agric Food Chem. 2000;48: 5677-5684.. 24 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

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(36) BI. O. Q. UI. M. IC. A. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. BI BL. IO. TE CA. DE. FA. RM. AC. IA. Y. ANEXOS. 27 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(37) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. BI BL. IO. TE CA. DE. FA. RM. AC. IA. Y. BI. O. Q. UI. M. IC. A. ANEXO 01. 28 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(38) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ANEXO 02 MÉTODO Preparación de la muestra fruto fresco: Prunus serotina “Capulí” Se recolectó en abril del 2019. Lugar de recolección: caserío de Campana, distrito de RECOLECCIÓN. IC. A. Cajabamba, provincia de Cajabamba (Altitud: 2723. UI. M. m.s.n.m. entre coordenadas geográficas: latitud sur 7°. O. Q. 36′ 19,1″, latitud oeste 78° 02′ 51,4″ al norte de. AC. IA. Y. BI. Cajabamba). Región de Cajamarca. Para que no sufra alteraciones el fruto fresco se almacenó en caja de tecnopor para su posterior traslado. DE. FA. RM. ALMACENAMIENTO. TE CA. Con el fin de separar partes del fruto fresco deteriorados o en mal estado. BI BL. IO. SELECCIÓN. IDENTIFICACIÓN. Se identificó la planta de Prunus serotina “Capulí” en el Herbario Truxillense de la Universidad Nacional de Trujillo. 29 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(39) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Cuantificación de Antocianinas totales por pH Diferencial Obtención de las antocianinas totales. Se pesó 100 g de frutos enteros frescos. Se vertió en un balón de 250 mL de capacidad. IC. A. Luego se agregó 150 mL de etanol 96 °GL. O. Q. UI. M. Se Maceró por 48 horas. Y. BI. Se filtró obteniéndose el EXTRACTO ETANÓLICO. RM. AC. IA. Posteriormente al MARCO se agregó 150 mL de etanol 96°GL. DE. FA. Se continuó la maceración por 2 VECES CONSECUTIVAS. BI BL. Buffer pH 4, 5. IO. TE CA. Preparación de Soluciones Reguladoras 40mL de acetato de sodio 1M 24 mL de HCl 1N 36 mL de agua destilada. 12, 5 mL de KCl 0, 2 N Buffer pH 1, 0 38, 5 mL de HCl 0,2 N. 30 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(40) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Método de pH Diferencial Extracto obtenido con etanol. Dilución con buffer de KCl pH 0,1 Determinar el factor de dilución 0,4 mL de macerado y 3,6 mL buffer. UI. M. IC. Medir la absorbancia de cada una de las muestras a 520 y 700 nm. A. Dilución con buffer de CH3OONA pH 4,5. Y. BI. O. Q. Las lecturas se realizaron entre 15 y 60 minutos. RM. AC. IA. Obtener una absorbancia en el rango de 0,4 a 0,6 para así cumplir la ley de Beer. DE. FA. Calcular la absorbancia de la muestra diluida con la fórmula. TE CA. Calcular la concentración de antocianinas usando la fórmula. BI BL. IO. Determinación de la actividad reductora in vitro. Preparación de la solución del extracto etanólico de Prunus serotina “Capulí”. Diluir al 5%. Extracto blando. Pesar 0,5 g Agregar y aforar en Fiola de 10 mL con Etanol al 96 °GL. 31 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(41) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Preparación del Reactivo: Solución 2,2-difenil-1-picrilhidracilo (DPPH•). Preparar solución DPPH• 0,1 mM en etanol de 96 °GL. Preparación de la recta de calibración para la solución de radical DPPH• Solución DPPH• 0,1 mM. 6 mL. 8 mL. 0,04 mM. 0,06 mM. 10 mL. UI. 4 mL. 0,08 mM. 0,01mM. AC. IA. Y. 0,02 mM. BI. O. Q. 2 mL. M. IC. A. Medir en Fiolas de 10 mL y aforar con etanol al 96 ºGL. FA. RM. Obtener la recta de calibración. DE. Determinación de los porcentajes de captura del radical DPPH•. Enfrentar con. BI BL. IO. TE CA. Preparar 10 fiolas con 10 mL de solución de DPPH•0,1 mM cada una. Tomar alícuotas de 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1000 uL de la solución etanólica de Prunus serotina “capulí”. Preparar un Control. 10 mL de solución de DPPH• 0,1 mM. Leer la absorbancia a 520 nm. Como Blanco se utilizó etanol de 96° GL. Determinar el % de captación de radicales libres mediante la formula 32 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(42) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ANEXO 03 Cuantificación de antocianinas de Prunus serotina por pH Diferencial. Capuli/etanol. Método pH diferencial pH 4,5. /100g fruto C. X ± d.e. fresco. 700. IC. 510. 0,40384. 0,14665 0,33266 0,12112. 0,0457. 7,6230. m2. 0,40446. 0,14754 0,33527 0,12238. 0,0440. 7,3525. m3. 0,40913. 0,15016 0,33395 0,12138. 0,0464. 7,7483. 16,5446 15,9575. 16,22 ± 0,24. 16,1648. AC. IA. Y. BI. O. Q. m1. M. 700. A. A 510. UI. pH 1,0. 7,7483 ------1000 mL. TE CA. DE. 0,07748-----50 mL. FA. Reemplazar. RM. Cálculos:. 0,07748--------1mL. Extracto. BI BL. IO. 1,862--------25mL. Alícuota. 1,862--------1,5. g ext. Blando. 48,4944-------39,0664 g ext. Blando. 48,4944--------300. g fruto fresco. 16,1648--------100. g fruto fresco. 33 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(43) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ANEXO 04. Determinación de la actividad reductora de Prunus serotina por. BI BL. IO. TE CA. DE. FA. RM. AC. IA. Y. BI. O. Q. UI. M. IC. A. DPPH•. 34 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(44) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. CUADRO N°2: Curva de calibración del DPPH. Q. UI. 1.2000. O. 1.0000. BI. 0.8000. Y. y = 2.6945x + 0.0411 R² = 0.9997. 0.6000. IA. Abs. M. Curva de calibracion 520 nm. IC. A. GRAFICO N°1: CURVA DE CALIBRACION DE DPPH. AC. 0.4000. RM. 0.2000. 0.1. 0.2. 0.3. 0.4. 0.5. cc (ug/ml). TE CA. DE. 0. FA. 0.0000. BI BL. IO. FIGURA N° 6: LECTURA DE DPPH. 35 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(45) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. GRAFICO N° 2: PORCENTAJE DE CAPTURA DPPH VS EXTRACTO (mL). % Inhibicion DPPH 100.0. 60.0 y = 79.533x + 13.29 R² = 0.9588. 40.0 20.0 0.0 0.2. 0.4. 0.6. 0.8. 1. IC. 0. A. % Captura. 80.0. Q. UI. M. Extracto mL). 1.2. BI. O. ➢ Determinación del índice de inhibición medio (IC50) o la concentración en la cual el. IA. Y. porcentaje de inhibición es del 50%.. AC. IC50 = (50 - b)/m. RM. IC50 = 0.462mL. BI BL. IO. TE CA. DE. FA. GRAFICO N° 3: PORCENTAJE DE CAPTURA DPPH VS CANTIDAD DE ANTOCININAS (g). IC50 = 28,62g /0.462mL IC50 = 61.94g/mL. 36 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(46) BI BL. IO. TE CA. DE. FA. RM. AC. IA. Y. BI. O. Q. UI. M. IC. A. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 37 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(47) BI BL. IO. TE CA. DE. FA. RM. AC. IA. Y. BI. O. Q. UI. M. IC. A. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 38 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

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