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APROBADO
________________________________ Adriana del Pilar Pulido Villamarín Bact. MSc.
Director
Pontificia Universidad Javeriana
________________________________ Rubiela Castañeda Salazar MV. MSc.
Jurado
________________________ __________________________ Ingrid Schuler. Ph.D Janeth Arias P. Bact. MSc., M Ed
Decana Académica Directora
A la Dra Adriana del Pilar Pulido Villamarín, por su esfuerzo, entrega, dedicación y compresión durante todo este tiempo; por su ayuda incondicional y por compartir conmigo sus
conocimientos; además de hacer cada vez de mi una mejor persona llena de grandes metas y responsabilidades
1. INTRODUCCION ... 19
2. PLANTEAMIETO DEL PROBLEMA Y JUSTIFICACION ... 20
3. OBJETIVOS ... 21
3.2 OBJETIVOS ESPECIFICOS ... 21
4. MARCO TEORICO ... 21
4.1 GÉNERO ENTEROCOCCUS ... 21
4.1.1 Antecedentes y Taxonomìa ... 21
4.1.2 Características Generales ... 22
4.1.4. Mecanismos de resistencia a antimicrobianos ... 24
4.2 IMPORTANCIA CLÍNICA ... 25
4.2.1 Implicación clínica en mastitis bovina ... 25
4.2.2 Importancia clínica en humanos ... 27
4.2.3 Implicaciones zoonóticas ... 27
4.3 DIAGNÓSTICO ... 28
4.3.1 Aislamiento y Medios de cultivo ... 28
4.3.2 Identificación ... 30
4.4 TRATAMIENTO PARA EL HUMANO Y LA MASTITIS BOVINA ... 31
4.5 CONTROL Y PREVENCIÓN DE LAS INFECCIONES POR Enterococcus sp ... 31
5.1 Ubicación Geográfica ... 32
5.2 Población ... 32
5.3 Obtención de Muestras ... 33
5.3.1 Muestras de leche ... 33
5.3.2 Derivados lácteos ... 33
5.4 Procesamiento de muestras ... 34
5.4.1 Muestras de leche ... 34
5.4.1.1 Prueba de Hotis: ... 34
5.4.1.2 Aislamiento e identificación: ... 34
5.4.1.3 Pruebas de Sensibilidad Antimicrobiana: ... 34
5.4.2 Procesamiento de leche de Cantinas:... 34
5.4.3 Derivados lácteos ... 34
5.5 Análisis Estadístico ... 35
6. RESULTADOS Y DISCUSION ... 35
6.1 Aislamiento e Identificación de microorganismos en muestras de leche ... 35
6.2 Pruebas de susceptibilidad a Antibióticos ... 38
6.3 Hallazgos en muestras de cantinas ... 41
6.4 Evaluación de calidad del producto lácteo ... 43
7. CONCLUSIONES ... 47
+* $0Pruebas diagnósticas utilizadas para la detección de mastitis………....17
+* ". Fundamento de los medios de cultivo utilizados para detección de
Enterococcus ssp………...19
+* 10 Fundamento de las bioquímicas utilizadas para la detección de ...21
+* 20Porcentaje de Sensibilidad a los Antibióticos utilizados en los diferentes
microorganismos…...……….…….30
+* 30Características organolépticas del primer y segundo procesamiento de quesos
-)& $0Prueba de California Mastitis test………24
-)& "0Toma de muestras por ordeño manual ……….25
-)& 10 Muestras de leche directamente del animal de todas las fincas N: 62………….…..28
-)& 20Resultados de muestras de leche tomadas directamente del animal………..……….29
-)& 30Aislamientos microbianos en agar sangre, enterocococsell y MacConkey…...30
-)& 40Muestras de cantinas………..33
-)& 50 Porcentajes de positividad de microorganismos en muestras de leche de
cantinas de los tres hatos………..………..34 -)& 60 Aislamientos de diferentes microorganismos en 3 hatos muestreados a partir de muestras de leche provenientes de cantinas………35
-)& $#0 Queso pera antes y después de su fecha de vencimiento………....36
-)& $$0 Porcentaje de positividad a vancomicina R en el primer y segundo
muestreo de muestras de queso en la planta 1 y 2……….37
-)& $"0 en agar enterocococsell con vancomicina
El objetivo principal de este estudio, fue determinar la presencia/ausencia de microorganismos del género Vancomicina Resistentes ( ) en leche cruda proveniente de hembras con mastitis clínica y/o subclínica en 3 hatos lecheros de la Sabana de Bogotá y en queso pera procesado con la leche de dichas vacas. Se recolectaron 62 muestras de leche de los cuartos afectados con mastitis subclínica grado III de hembras productoras no tratadas con terapia antibiótica, 22 muestras de leche cantina y 100 muestras de queso pera. A las muestras de leche se les realizo la prueba de hotis y posteriores aislamientos en agar BHI + sangre, MacConkey y Enterocococsell con vancomicina, se incubaron a 37 °C por 48 horas; además se realizó identificación bioquímica de los microorganismos aislados. Las colonias presuntivas para fueron evaluadas mediante tinción de Gram y pruebas de identificación como catalasa, tolerancia a NaCl 6.5 % e hidrólisis de la esculina.
Se realizaron pruebas de sensibilidad antibiótica a 33 microorganismos clínicamente importantes en el proceso de mastitis bovina. A las muestras de queso pera se les evaluó características organolépticas y microbiológicas en agar enterocococsell para determinar ausencia/presencia del microorganismo. Los resultados mostraron que no fue un agente etiológico en el proceso de mastitis subclinica grado III como si lo fueron γ y α hemolítico y . Los antibióticos de elección para tratar la mastitis subclínica en las
fincas son la Cefoperazona y Ciprofloxacina. Un alto porcentaje de en
$0
El consumo regular de leche por parte del ser humano, se remonta al momento en que los antepasados dejaron de ser nómadas y comenzaron a domesticar animales y a cultivar la tierra para alimentar los animales que mantenían junto al hogar. En esos tiempos la leche se guardaba en pieles o vejigas de animales o la dejaban expuestas al sol por lo que el producto se coagulaba, allí surgió la idea del primer derivado lácteo. El uso de la leche como alimento se remonta a más de 3500 años A.C y a lo largo del tiempo las diferentes culturas la han aprovechado de distintas maneras. 7 8, 9 "##:; &)89 "##4<
A mediados de siglo XIX, los descubrimientos de Louis Pasteur representaron la primera victoria de la ciencia contra toxinas y microorganismos patógenos, y de esta forma se logro conservar por más tiempo las propiedades nutritivas de los alimentos. El tratamiento térmico conocido como pasteurización, el descremado mecánico y las técnicas de enfriamiento, sumados a otros avances, permitieron hacia fines de siglo XIX la modificación de la producción industrial de leche y sus derivados. 7 8, 9 "##:<
Si bien son incuestionables las cualidades nutritivas de la leche y los subproductos lácteos, desde su síntesis en la glándula mamaria hasta su llegada al consumidor, esta está sometida a un gran número de riesgos como: la contaminación y multiplicación de microorganismos patógenos, formación de toxinas, alteración físicoPquímica de sus componentes, absorción de olores extraños, generación de malos sabores y contaminación con sustancias químicas tales como pesticidas, antibióticos, desinfectantes, metales, detergentes, entre otros, todos estos atentan contra la calidad higiénica y nutricional del producto, afectando la salud pública y económica del país. 7 = ** / & & 9 "##3; &)89 "##4<
• Los productos lácteos y la leche pueden contaminarse con microorganismos patógenos o sus toxinas y provocar enfermedad en el consumidor
• Los microorganismos pueden causar alteraciones de la leche y productos lácteos haciéndolos inadecuados para el consumo
• Los microorganismos producen cambios deseables en las características físico químicas de la leche durante la elaboración de diversos productos lácteos
"0
La leche, representa una alta proporción de ingresos totales en la ganadería y anualmente se calculan grandes pérdidas ocasionadas por mastitis; la mastitis bovina es una de las patologías que ocasiona una gran cantidad de pérdidas económicas a nivel mundial y en especial en las regiones con una producción lechera intensiva; adicionalmente es una de las causas más comunes para el sacrificio temprano de las vacas lecheras, seguida de problemas de fertilidad; el 26.5% de las vacas lecheras sacrificadas en el continente americano es debido a trastornos ocasionados por esta patología.7 > ' *09 "###; &)89 "##4<Los daños ocasionados por la mastitis subclínica son mucho mayores, ya que esta forma es por lo menos unas 20 a 50 veces más frecuente que la clínica; además de los altos costos financieros para el ganadero la mastitis tiene una gran importancia en el valor higiénico de la leche y de los subproductos 7 &+ ** 9 $665;
> ' *09 "###<
Se reconocen diversos agentes etiológicos; sin embargo, microorganismos como los pertenecientes al género sp aún no han sido reconocidos como causantes de esta patología, pero sí son reconocidos como agentes importantes en salud publica y especialmente los resistentes a antibióticos. Una de las posibles fuentes alimenticias de infección en humanos puede ser la leche cruda y los productos lácteos. Consumir estos alimentos, implica riesgos para la salud humana; en Colombia, a pesar de la normativa establecida por el ICONTEC NTC 399 y el decreto número 2838 de 2006 del Ministerio de Protección Social, donde se reglamenta la prohibición de comercializar estos productos y los requisitos que debe cumplir la leche cruda como materia prima para su comercialización y consumo, sigue siendo consumida en algunos sectores rurales y urbanos. El consumo de este producto implica riesgos para la salud, debido a que puede estar contaminado por varios microorganismos debido a la alta manipulación, el medio ambiente o por provenir de animales enfermos.7 8, 9 "##: ; * + 9 "#$#<
Frente a este problema se hace necesario un estudio que permita determinar la presencia o ausencia de presentes en la leche cruda proveniente de bovinos, de cantinas y derivados lácteos; debido a la limitada información reportada actualmente con respecto a la relación entre este microorganismo en el área clínica veterinaria e industrial. Por ello la finalidad de este estudio, es investigar mediante trabajo de campo y de laboratorio, las
implicaciones de y reconocer su poder patógeno en la glándula mamaria
y la importancia de la contaminación en leche y queso pera, para así realizar sugerencias a quien corresponda y garantizar un adecuado control y prevención sobre ellos. 7 8, 9 "##:;
10
10$
Determinar la presencia/ausencia de microorganismos del género Vancomicina Resistentes en leche cruda proveniente de hembras con mastitis clínica y/o subclinica y en queso pera procesado con la leche muestreada.
10"
• Demostrar la implicación de Vancomicina Resistentes como agente etiológico asociado en el proceso de mastitis clínica o subclínica.
• Reportar el perfil de sensibilidad y/o resistencia de los microorganismos implicados en el proceso de mastitis clínica o subclínica.
• Determinar la presencia/ausencia de Vancomicina Resistentes en queso pera.
20
20$ ?
20$0$ ' / @ A
Los enterococos son microorganismos considerados dentro del grupo de Bacterias Ácido Lácticas (BAL), ya que son fermentadoras y productoras de acido láctico, función por la cual son usadas en la industria para darle ciertas características a los alimentos. Los primeros intentos para clasificar taxonómicarnente las bacterias acido lácticas se deben a Orleáns en 1919, quien, basándose en la morfología, en la disposición celular y en criterios fisiológicos tales como el tipo de metabolismo fermentativo de la glucosa, el tipo de isómero del ácido láctico producido y la capacidad de desarrollarse a 10 y a 45 °C, las clasificó en los géneros sp
sp y ! sp de morfología bacilar, y sp "
sp y # sp de morfología cocoide 7 '&.-) 89 "##$; B *09 "##"; ) & / C* 9 "##1<0
Desde el reconocimiento de los estreptococos, su clasificación se basa en las características antigénicas según Lancefield, respecto a esto y según las pruebas serológicas se tiene constancia que los Enterococos pertenecen al grupo D de la clasificación de Lancefield, junto con los no enterococos que pertenecen al grupo de los 7 '&.-) 89 "##$; ) & / C* 9 "##1<0
estreptococos, que constituyen un nuevo género, ubicado dentro de la familia Enterococcaceae.
7 '&.-) 89 "##$<0
20$0" & &. & *
sp, son bacterias GramPpositivas, de morfología cocoide no esporulada que aparecen al microscopio formando pares y/o cadenas cortas. Son microorganismos quimiótrofos y su desarrollo depende fundamentalmente de la presencia de carbohidratos, igualmente, poseen un metabolismo fermentativo, por lo que no tienen la capacidad de sintetizar ATP por respiración; sin embargo, son microorganismos anaerobios facultativos, catalasa negativos, ureasa negativos e incapaces de sintetizar citocromos; no obstante, se ha observado que
es capaz de sintetizarlos en presencia de una fuente de hemina 7 D&() 89 $663; & 9 $665; B *09 "##"< Los enterococos presentan ciertos requerimientos nutricionales, siendo necesarios para su crecimiento al menos 10 aminoácidos, bases púricas y pirimídicas y ciertas vitaminas como: biotina, nicotinato, pantotenato, riboflavina y piridoxina, además,
requiere ácido fólico en el caso de utilizar el piruvato como fuente de energía. La mayoría de los enterococos se desarrollan en un intervalo de 10 y a 45 °C y a valores de pH 4,4 y 9,6 y en presencia de un $ %&de NaCl. La separación de los enterococos del grupo de los estreptococos surgió del conocimiento de su mayor resistencia a diferentes condiciones ambientales y a que sobreviven a 60 °C durante 30 minutos, además de ser capaces de hidrolizar la esculina; estas características siguen hoy vigentes para la diferenciación de este grupo de cocos gram positivos. La confirmación de diferentes pruebas genéticas (pruebas de hibridación de ácidos nucleicos) ha permitido establecer esta separación. 7 D&() 89 $663; B *09 "##"<0 Respecto a su hábitat, los enterococos son esencialmente bacterias que habitan en el intestino tanto del hombre como de diversas especies animales e incluso de insectos, influyendo favorablemente en su equilibrio microbiano. 7 & 9 $665<0
20$01 & ' = &)*
Una de las causas que determina la infección enterocóccica, consiste en la colonización de las mucosas humanas o de animales por parte del microorganismo, el cuenta con moléculas superficiales que actúan como adhesinas, esto implica la necesidad de que existan receptores en las células del huésped y son generalmente de naturaleza proteica, glicoprotéica, lipoprotéica o glicosídica, sobre los tejidos. 7 * *09 "##$< Además de su reconocida capacidad para adquirir resistencia a antibióticos, los enterococos desarrollan intercambio de información genética por conjugación, características que aumentan su virulencia. Dentro de estas características están: la adherencia a tejidos del huésped, la invasión y formación de abscesos, la respuesta inflamatoria, la secreción de productos tóxicos y la síntesis de enzimas hidrolíticas.
7 &-) *09 "##5< Las infecciones enterocóccicas también pueden ocurrir debido a que el microorganismo resiste la acción de diversos mecanismos de defensa del humano o animal, mediante la participación de algunas cápsulas de polisacáridos y de proteínas superficiales con actividad antifagocitaria. Enterococo puede producir cambios directos en los tejidos del animal por producción de toxinas, o indirectos por mecanismos inflamatorios. 7 & ' ' ' /
-)& ' ' *9 "##"<
Algunos de los factores de virulencia importantes en vancomicina R, son la citolisina o hemilisina, Sustancia de agregación (AS), Gelatinasa, Proteína de superficie de enterococos, Carbohidratos de la pared celular y polisacáridos capsulares. 7 * 9 "##$; - *E
20$010$ * G *
La citolisina es una enzima de capaz de destruir células de eucariotes y procariotes, así como a los eritrocitos de humano y de animales como el caballo, la vaca y el conejo. Se considera que dicha sustancia desempeña un papel importante durante la primera fase de la infección por enterococos la cual, aún cuando es asintomático, implica la penetración bacteriana en los tejidos intestinales humanos, así como una toxemia y cierto daño tisular que antecede a la segunda fase, en la que ocurre la manifestación de los principales síntomas. 7G &&D 89 "##5; - *E
*09 "##4< La citolisina desempeña relevantes funciones patogénicas: actúa como toxina, provocando la ruptura del sistema membranoso de los glóbulos rojos y de diversas células humanas. Los mecanismos implicados en el daño tisular son desconocidos, pero es probable que esta proteína induzca la liberación de mediadores inflamatorios a partir del tejido dañado o de las células fagocitarias y de esta manera contribuya a la severidad del proceso inflamatorio.
7 * *09 "##$; * 8) * *09 "##5<
20$010" ) ' -& - , 7 <
Esta sustancia tiene un papel decisivo en la patogenia; esta es una proteína superficial, cuya presencia incrementa la adherencia e internalización enterocóccica en los macrófagos, interaccionan con las integrinas CD11b, CD18 y CR3, presentes también en otras células de defensa del humano. 7G &&D 89 "##5; * 8) * *09 "##5; * & *09 "##6<
En general, las principales funciones que desempeña la sustancia de agregación AS, son las siguientes:
- Potenciación de la conjugación de plásmidos.
- Adhesión a los tejidos del hospedero.
- Internalización y la supervivencia en los fagocitos.
, ' * H)- , ' *D ' 0
Una de las características más importantes del género radica en la eficacia con la que lleva a cabo la conjugación plasmídica; el proceso inicia cuando un clon que actúa como potencial receptor libera al medio ciertos péptidos, denominados feromonas, que promueven la aproximación de enterococos hacia ella y la secuencial transferencia de diversos plásmidos provenientes de las células bacterianas capaces de actuar como donadoras. 7 '&.-) 89 "##$;
' ' / -)& ' ' *9 "##"; * 8) * *09 "##5<
'B , * H ' ' * B ' & 0
& , ' * & * 8 , / * ) &= = * E
-En las numerosas infecciones endógenas debidas a enterococos, es determinante el papel de los macrófagos, los cuales suelen actuar como vehículos responsables de la translocación del microorganismo, desde el intestino hasta el sistema linfático o el torrente circulatorio del individuo involucrado. 7 * *09 "##$<
20$0101 *
Es una enzima capaz de degradar a la gelatina, caseína, hemoglobina y a ciertos péptidos bioactivos, incluidas las feromonas quimiotácticas de , las cuales promueven la llegada de neutrófilos a los tejidos colonizados por el microorganismo; una de las posibles funciones de esta proteasa podría consistir en modificar, junto con las feromonas quimiotácticas, la defensa del hospedero, induciendo alternativamente la ausencia o la acumulación de leucocitos en los tejidos colonizados.7 * & *09 "##6<
20$0102 & . ' ) &E ' &
La proteína de superficie extracelular de Enterococos, es una adhesina que se describió inicialmente en MMH594, una cepa muy virulenta y resistente a la gentamicina. (G &&D 89 "##5<
20$0103 &+ B '& ' * & ' *)* & / * D& ' )* &
Son componentes de las cápsulas bacterianas que juegan un papel importante en la patogenia de las enfermedades infecciosas, ya que debido a su complejidad y a su capacidad para conferir resistencia a la fagocitosis pueden intervenir en los procesos de evasión del sistema inmunitario del hospedador. 7G &&D 89 "##5<
Por último, diversos estudios ' han demostrado que las adhesinas enterocóccicas más destacadas corresponden a proteínas, ácidos lipoteicoicos de la pared celular y uno o más carbohidratos superficiales. Cuando el microorganismo ya ha realizado el proceso de adherencia, puede invadir otras regiones e ingresar al sistema linfático o a la circulación sanguínea, lo que provoca diversas alteraciones patológicas, muchas de estas inician con severas respuestas inflamatorias, e inclusive, con la participación de enzimas y toxinas enterocóccicas.( * *09 "##$; * & *09 "##6<0
20$020 ' & & +
Microorganismos del género Enterococcus, son intrínsecamente resistentes a varios antibióticos empleados para tratar infecciones humanas como cefalosporinas, vancomicina, penicilinas, quinolonas, clindamicina, trimetoprim y sulfametoxazol. Además de esta resistencia intrínseca, los enterococos han adquirido resistencia a muchos otros antibióticos, tanto por mutaciones como por su elevada capacidad de adquirir material genético externo mediante la transferencia de plàsmidos o trasposones. ( B / /I) 9 "##2; *+ & 8 *09 "##3< Los enterococos
Los enterococos desarrollan resistencia glicopéptidos como la vancomicina alterando los precursores peptidoglucanos de la pared celular bacteriana, de manera que la vancomicina no se puede unir a ellos y por lo tanto no puede inhibir la síntesis de la pared bacteriana. Existen varios fenotipos de resistencia a la vancomicina como los son VanA, VanB, Van B2 y VanC 7 =&
*09 $66:; *09 "##1; *+ & 8 *09 "##3; * & *09 "##6<Al menos los cuatro fenotipos de
resistencia a glicopèptidos en este género bacteriano son definidos por el nivel de resistencia a vancomicina, la expresión de la resistencia constitutiva o inducible, la capacidad de ser transferida por conjugación, codificación plasmídica o cromosòmica y producción o no de proteínas de membrana. 7 D&() 89 $663; G &&D 89 "##5; B & / B ** 9 "##6<
Van A es el fenotipo que presenta mayor relevancia clínica al ser codificado por un transposón, que habitualmente está integrado en plásmidos, puede diseminarse entre los sensibles; el Van B, los de este fenotipo son resistentes a Vancomicina, entre las cepas con mayor grado de resistencia es posible que pertenezcan a este fenotipo o bien a un grupo heterogéneo de genes VanB. La resistencia es transferida por conjugación y su presencia no está asociada a plásmidos y el fenotipo VanC presenta moderada resistencia a vancomicina.
7 *09 "##1; * & *09 "##6<
20" !
A pesar de ser reconocido como habitante normal de tracto gastrointestinal, es también reconocido su papel patógeno tanto en animales como en humanos en algunas patologías específicas.
20"0$ * , *. + =
La mastitis bovina es una patología donde se refleja una reacción inflamatoria de la glándula mamaria, que produce alteraciones físicas y químicas en la leche, aumento del número de células somáticas por la presencia de microorganismos patógenos y pérdida de la funcionalidad. La inflamación sucede como consecuencia de la respuesta de los tejidos a lesiones traumáticas, a sustancias irritantes, a la presencia de agentes infecciosos y/o a las toxinas que ellos secretan en el tejido. 7 &+ ** 9 $665; & ** / 8D* 89 "##3; &)89 "##4; *' &, / '&.-) 89 "##5<
Desde el punto de vista de su signología, la mastitis se divide en clínica y subclínica. En la mastitis clínica, el cuarto afectado se inflama, hay dolor, edema, la leche presenta coágulos y grumos, se vuelve amarilla o rojiza por la presencia de pus o de sangre; en casos severos hay aumento de la temperatura y del pulso, decaimiento, pérdida del apetito y baja de la producción. Los casos clínicos de mastitis se pueden definir según su gravedad en mastitis clínica ligera, mastitis clínica moderada y mastitis severa.7 & ** / 8D* 89 "##3; *' &, / '&.-) 89 "##5<
de una relación sodioPpotasio aumentada en la leche y un aumento de la concentración de interleuquinaP8 (ILP8), cuando no hay mastitis clínica, el aumento de los niveles de sodio e ILP8 indican que está ocurriendo una respuesta inflamatoria, a pesar de la ausencia de signos clínicos0 7 & 9 "###; ** *09 "##4<
Con base en su etiología infecciosa, los patógenos causantes de la mastitis bovina se han clasificado en contagiosos, ambientales y oportunistas, de acuerdo con su origen y forma de
transmisión. Patógenos contagiosos como , ,
( ' y ! ' ; tienen su reservorio en la glándula mamaria y la
leche de vacas infectadas, su transmisión puede ocurrir en el momento del ordeño por prácticas como el uso compartido de toallas para lavar y secar las ubres o por medio de las manos contaminadas de los ordeñadores o por el uso de pezoneras no desinfectadas entre vacas en los ordeños mecánicos; los patógenos ambientales son microorganismos Gram negativos,
habitantes normales del ambiente como, , ) sp, sp,
sp, * sp y * sp, algunas bacterias Gram positivas como:
y patógenos oportunistas,
y muchas otras especies de estafilococos, que forman parte de la flora normal de la piel. 7 B *9 "##"< Los estreptococos y enterococos que habitan en las vacas y en el ambiente como
' entre otros,
pueden causar cuadros subclínicos y también clínicos de diferente intensidad, desde leves hasta agudos.7 & ** / 8D* 89 "##3; *' &, / '&.-) 89 "##5<
La mastitis, particularmente subclínica, es la más persistente y más común del grupo de enfermedades de importancia económica en ganado de leche. Ocurre frecuentemente y puede conducir a grandes pérdidas económicas debido al reducido rendimiento de leche y multas a causa de los elevados recuentos de células somáticas presentes en los tanques de leche.
Algunas pruebas utilizadas para el diagnóstico de mastitis bovina se encuentran registradas en la tabla a continuación.
+* $0 &) + ' - , ) * 8 ' & * ' , '
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* E &
7
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Es una prueba realizada en campo, que detecta el estado de salud de la ubre mediante la estimación gruesa del contenido de las células somáticas. Se basa en la gelificación que tiene lugar cuando el ADN es liberado de las células somáticas presentes en la leche por la acción de un detergente aniónico como el alkylParilPsulfonato de sodio en la paleta que contiene 4 compartimentos; por tanto, a mayor contenido celular de la leche mayor gelificación0 7 & ** / 8D* 89 "##3 /
&) + ' G
Esta prueba se realiza en el laboratorio, se utiliza como un examen visual que consiste en revelar la presencia de microorganismos que fermentan la lactosa al agregar a 9 ml de leche 0.3 ml de púrpura de bromocresol 9%, si están presentes el color de esta mezcla vira a amarillo esto se debe a una disminución de pH en la solución y la reacción es negativa cuando no hay cambios o adquiere una coloración grisácea con o sin sedimentos0 7 -) & *09 "###<
20"0" & *. B)
Por formar parte de la flora intestinal los enterococos son capaces de producir infecciones en pacientes ambulatorios y hospitalarios, anteriormente se pensaba que la mayoría de las infecciones causadas por este tipo de microorganismo eran endógenas; sin embargo, la mayoría de las infecciones ocurren en pacientes hospitalizados o bajo tratamiento de diálisis en los cuales el agente es exógeno, encontrándose el microorganismo en el medio ambiente o en las manos del personal hospitalario. En algunos países ocupa el segundo o tercer lugar en frecuencia como causa de infección nosocomial. 7 '&.-) 89 "##$<
Los enterococos han sido aislados de infecciones del tracto urinario, bacteremia y endocarditis, infecciones pélvicas, abdominales y de heridas sobreinfectadas como lo ha reportado una investigación hecha por la dirección general de salud pública de Catalunya.7 & '
' ' / -)& ' ' *9 "##"<Se han encontrado en heridas quirúrgicas de tejidos blandos y bacteremias; ocasionalmente se aisla del liquido pleural y del líquido cefalorraquídeo, la infección puede ser mucho más severa en pacientes inmunosuprimidos 7 *09 "###; B *09 "##"<0 El atributo más sorprendente de los enterococos es su resistencia relativa y absoluta a los antimicrobianos de uso más común en las infecciones por Gram positivos.
20"01 * 8 ,
La presencia de y en leche es indicativa de
contaminación fecal y reflejo de condiciones higiénico sanitarias de producción deficientes. Situación que no ha limitado el empleo de la leche cruda en la elaboración de más del 50% de queso blanco que se consume en el país. ( / *09 "##"< Todos estos problemas son derivados de mal manejo sanitario, de la deficiencia en las prácticas ganaderas y de manejo e higiene de la unidad de explotación o empresa pecuaria. Investigaciones han atribuido a alimentos muy contaminados con enterococos, casos y brotes de intoxicaciones alimentarías presentándose nauseas intensas, cólicos abdominales, diarrea, entre otros; sin embargo, ha sido complicado demostrar su implicación, indicándose una asociación sinérgica con otro microorganismo07 I* 9 "##"; & EE 9 "##"<
aminas biógenas, que están implicadas en las intoxicaciones alimentarias por el consumo de alimentos fermentados como el queso; los síntomas son aumento del ritmo cardiaco, de la respiración y de la presión sanguínea, además son responsables de la migraña que se produce después del consumo de este alimento. ( )> 8 *09 "##5; * & *09 "##6< Por dichas implicaciones en salud pública, este grupo de microorganismos deben ser tenido en cuenta dentro del control de calidad de productos de consumo como alimentos y bebidas fermentadas tales como el queso, la leche, cerveza, vinos entre otros. ( & EE 9 "##"<
201 %
2010$ * / ' ' )* =
Estas, son bacterias cuyas necesidades nutricionales son fácilmente suministradas en medios de cultivo con peptona y extracto de levadura como el agar BHI y Columbia con sangre para el aislamiento primario, la mayoría de las especies producen colonias visibles luego de una incubación de 24 horas a 37 °C en aerobiosis. Dado que su metabolismo es exclusivamente de tipo fermentativo, crecen también en condiciones de microaerofilia o anaerobiosis, aunque algunas especies crecen mejor en atmósfera enriquecida con CO2. 7 B *09 "##"<
Su aislamiento es sencillo, si se parte de muestras clínicas como orina y exudados, cuando se trabaja con muestras intestinales es necesario utilizar medios de cultivo selectivos, para lo cual se aprovecha la capacidad que tienen de crecer en condiciones adversas utilizando agentes como sales biliares, colorantes y antibióticos; existen más de 60 medios selectivos diferentes basados en estas características, como el medio de Slanetz y Barley o el caldo con kanamicina y esculina 7 B *09 "##"<0 Por otra parte, los enterococos se han aislado de numerosos alimentos, entre los que se incluyen la leche y sus subproductos, embutidos crudos, vegetales, aceitunas negras y pescado. 7 & 9 $665<
Algunos de los medios de cultivo utilizados para el aislamiento e identificación del género Enterococcus se observan en la tabla a continuación
+* "0 ) ' ' * ' ' )* = ) * 8 ' & ' , '
' ' )* = ) '
- & C )* 8 ' 7C <9 / *' )* 8 '
El medio líquido se utiliza para la detección presuntiva de Enterococos y el medio sólido permite la detección confirmativa, hidrolizan la esculina con la producción de glucosa y esculetina, la cual reacciona con el amonio hierro (III) citrato para dar un complejo de color variable entre el verde y el negro. 7 & ().
9 0 "##1<
- & * = & & 7 & E * & , & +& < J 7 + < & ** - &
celular inhibiendo la síntesis del peptidoglicano, la resistencia intrínseca de bajo nivel en los enterococos usualmente se debe a la presencia de genes ' (ya que estos inhiben la unión de la vancomicina al microorganismo0 7 & I9$662; 9 I
' /9 "##1<
*' G K & B
Updyke y Nickle, basándose en trabajos, modificaron el medio para obtener crecimientos de Estreptococos ßPhemolíticos contiene una alta concentración de sustancias proteicas90 7 & (). 0 0 "##1< 7 8 ' / = * ' * < Medio específico para los Enterococos ya que no se
producen crecimientos de bacilos GramPpositivos ni cocos GramPnegativos, la presencia del Sodio Azida y el Violeta de Etilo hacen de este un medio selectivo, la mezcla de peptonas constituye el elemento nutritivo y la Glucosa la fuente energética. los fosfatos hacen las funciones de regulación del pH y el Sodio Cloruro le da la salinidad necesaria para mantener el equilibrio osmótico, el ajuste de la concentración de Violeta de Etilo es crítico para el buen crecimiento de los Enterococos y la inhibición del resto de los microorganismos, la Glicerina según algunos autores facilita la fermentación de la glucosa por los Enterococos 7 & I9$662<
- & L ' D ' & 7 G < Medio para el recuento en placa en leches y sus derivados, la composición del medio basada en la peptona de caseína como aportación nutritiva, el extracto de levadura como sustrato vitamínico y la glucosa como fuente energética, favorece el crecimiento de la mayor parte de los microorganismos, sin precisar de otros aditivos0 7 & (). 0 0 "##1<
- & *'
La presencia de la peptona, glucosa, manganeso y magnesio se aportan los componentes nutritivos y energéticos para el crecimiento de los Lactobacilos., el diPAmonio Hidrógeno Citrato inhibe el crecimiento de la mayor parte de gérmenes contaminantes, el diPPotasio Hidrógeno Fosfato se emplea para estabilizar el pH del medio, mientras que el Tween constituye su fuente de ácidos grasos0 7 & I9$662<
- & * / *
El efecto inhibidor se debe a la alta concentración de Sodio Cloruro del medio. Con la fermentación de la D(P )PManita se genera ácido que ocasiona el viraje del rojo de fenol al amarillo, permitiendo así una mayor claridad en el momento de establecer el diagnóstico, ya que la mayoría de los Estafilococos patógenos fermentan este azúcar0 7 & (). 0 0 "##1<
/ & - &
La infusión de corazón permite el cultivo de una amplia variedad de microorganismos. La infusión de carne y peptonas son las fuentes de nitrógeno orgánico, carbón, azufre y vitaminas. La dextrosa es la fuente de carbohidratos.El medio tiene como solución buffer el fosfato disódico y la vancomicina esta en una concentración de 6 W/mL que es usado para determinar la resistencia a este antibiótico0 7 9
2010" ' E ,
La identificación de este tipo de bacteria de origen clínico, presenta pocas dificultades ya que son cocos gram positivos, catalasa negativos, oxidasa negativos debido a que carecen de citocromo oxidasa y con un metabolismo homofermentativo por lo que producen acido láctico como producto final de la fermentación de la glucosa, sin formación de gas.
El fundamento de algunas de las pruebas bioquímicas utilizadas para la confirmación de sp se encuentran registradas en la tabla a continuación:
+* 10 ) ' ' * + (). ) * 8 ' & * ' , '
&) +
&
& '
) '
&) + ' *
El peroxido de hidrogeno se utiliza como reactivo para la prueba de la Catalasa. La catalasa es una enzima propia de la mayoría de las bacterias aerobias y anaerobias facultativas que poseen citocromos, con la excepción de Estreptococos. Su función es descomponer el Peróxido de Hidrógeno (H2O2) desprendiendo oxígeno libre. La catalasa también se determina en organismos anaerobios07 & (). 9 0 "##1<
&) + * )*
Se basa en la capacidad de los Estreptococos del grupo D y de los para crecer en un medio de cultivo que contiene 40% de bilis y de hidrolizar la esculina a esculetina; esta se combina con el citrato ferroso que posee el medio, dando un complejo de color negro. Esta se prueba se realizara sembrando en superficie tubos de agar bilis esculina inclinado y su interpretación positiva se muestra con ennegrecimiento del medio0 7 '&.-) 89 "##$<
&) + ' * & * *
Se basa en la capacidad de los enterococos de crecer en una concentración de 6.5% de NaCl. Se trata de un medio de cultivo líquido que contiene además de NaCl, glucosa y un indicador de pH: púrpura de bromocresol. Esta prueba se realizará inoculando en el cado salado la cepa a estudiar y se incubara 18P24 horas a 35 °C. En la interpretación de los resultados, se considera una prueba positiva cuando aparece turbidez con o sin solidificación del medio, que se observara como un viraje de color del púrpura al amarillo. La no aparición de la turbidez indica una prueba negativa07 '&.-) 89 "##$<
nutricionales más complejas, por ello, producen colonias de tamaño más pequeño que los enterococos cuando las condiciones en cuanto a los medios de cultivo, temperatura, atmósfera y tiempo son iguales y además requieren periodos de incubación de 48 horas. El crecimiento en caldo 6.5 % de cloruro sódico en un intervalo de a 10 y 45 °C y a un pH de 9.6 a una temperatura de 60 °C durante 30 minutos, permiten tener una diferenciación respecto a estos dos géneros bacterianos, muchos medios de cultivo selectivos incorporan sales biliares y esculina, ya que los enterococos tienen la capacidad de hidrolizar la esculina en presencia de sales biliares, esta propiedad solo la comparten los estreptococos del grupo D de Lancefield.
7 B *09 "##"<
202 G
Los enterococos presentan resistencia intrínseca y/o adquirida a muchos antibióticos como clindamicina, cefalosporinas y aminoglucósidos entre otros; por ello aún se encuentran en estudio fármacos que puedan tratar la infección de este microorganismo. Las especies de sp son generalmente sensibles a vancomicina, antibiótico que se utiliza en procesos clínicos, aunque en la última década se ha comprobado un importante cambio en los patrones de sensibilidad de estas bacterias, ya que se ha empezado a detectar resistencias a la vancomicina, producción de ßPlactamasas y resistencias de alto nivel a los aminoglucósidos.
7 =& *09 $66:; ' &* ' &9 "##5; G )+ 9 "##1<A fines de la década de 1980 fue descrita en Europa la resistencia a la vancomicina único antimicrobiano útil frente a las cepas resistentes a otros fármacos” causando desde entonces impacto en otras partes del mundo. El tratamiento de las infecciones enterocócicas es complicado, tanto por los patrones especiales de sensibilidad o resistencia que ellos exhiben, como por la necesidad de pruebas de estudio de la sensibilidad especiales para demostrar su verdadera susceptibilidad + ' ,. ( '&.-) 89 "##$; * = 9 "##$<
Por otra parte, una terapia antibacterial para tratar la mastitis bovina consiste en la terapia de “la vaca seca”, esta hace parte de un sistema de dirección recomendado para reducir el nivel de infecciones intramamarias y prevenir nuevas infecciones durante el periodo seco. También se estima la importancia para prevenir esta enfermedad en hembras bovinas, mediante prácticas de desinfección, secado y sellantes; medidas higiénicas de manejo en los equipos de ordeño y en el ambiente en que se encuentran los animales, antes de llegar a un tratamiento antibiótico, ya que la mayor consecuencia del abuso de los antibióticos incluye el desarrollo de resistencia antibiótica en la flora bacteriana de los animales y las poblaciones humanas con un aumento del riesgo de residuos antibióticos en los alimentos entre ellos la leche. Por consiguiente, algunos países han adoptado el uso selectivo de la terapia de la vaca seca, en ciertas vacas o algunos cuartos.
203 %
Aunque hasta el momento no se han reportado importantes infecciones de mastitis bovina
producida por Vancomicina Resistentes - ., dentro de los
mantener una revisión periódica del programa de manejo de la salud de la ubre. 7 -* / 9 "##$; M ** + & *09 "##"; ' &* ' &9 "##5<
Los antisépticos y desinfectantes compuestos por amonio cuaternario tienen una gama amplia de aplicaciones veterinarias y juegan un papel importante en control de enfermedades infecciosas en los animales. En la industria lechera se usan normalmente para la desinfección del equipo de ordeño y en la desinfección del pezón para prevenir la mastitis infecciosa. Se ha demostrado que la desinfección de los pezones después de ordeñar, reduce la incidencia de la mastitis, causada por los microorganismos La desinfección de las ubres es un componente importante en el control de la mastitis. 7 & &) / G 9 "##2; ' &* ' &9 "##5<
30
30$ + , -&DE
Se recolectaron muestras de leche directamente de bovinos y de cantina en 3 fincas lecheras ubicadas en la Sabana de Bogotá (Hato 1: Mosquera, Hato 2: Soacha y Hato 3: Tocancipá);.
Adicionalmente, en dos plantas procesadoras de productos lácteos ubicadas en Bogotá, se obtuvieron muestras de queso tipo pera elaborado con la leche de los bovinos muestreados en campo.
Las muestras de leche y los quesos tipo pera, fueron transportados en condiciones de refrigeración, posteriormente fueron procesados y analizados en los laboratorios de la Pontificia Universidad Javeriana (Sede Bogotá).
30" +* ,
Al total de la población de hembras para ordeño, se les realizó la prueba CMT con el fin de identificar los animales que presentaban algún grado de mastitis; la selección se estableció de acuerdo con la interpretación por espesamiento de la mezcla cuando y subsecuente formación de gel, debido a la presencia promedio de 200 000 cel somáticas /ml de leche, lo determina que existe algún grado de mastitis en el cuarto del animal. 7 ** + &- & / B9 "###; .& 8 *09 "##$<.
-)& $0 &) + ' * E & 0
A.Reactivo de CMT; B. Paleta que contiene la leche y el reactivo, C. Mastitis subclinica grado III
Se recolectaron 62 muestras de leche de los cuartos afectados de hembras productoras no tratadas con terapia antibiótica, las cuales habían sido previamente diagnosticadas por California mastitis test (CMT) como positivas para mastitis subclínica grado III.
Se obtuvieron al azar 100 muestras de queso tipo pera procesados con la leche obtenida de las hembras muestreadas.
301 + , ' ) &
3010$ ) & ' * B
A partir de los animales que presentaron algún grado de mastitis se obtuvieron 62 muestras de leche provenientes directamente del animal por ordeño manual (Hato 1: 11, Hato 2: 29 y Hato 3: 22) con las respectivas medidas de asepsia durante el procedimiento. Para la obtención de las muestras se descartaron los primeros chorros y luego se recolectó en tubos de ensayo. Se tuvo en cuenta que la realización del procedimiento cumpliera con las medidas de asepsia y bioseguridad apropiadas.
-)& "0 ' ) & & &' > ) *
Adicionalmente se tomaron 22 muestras de cantina (Hato 1: 8, Hato 2: 2 y Hato 3: 12). Los tubos fueron rotulados, identificados y transportados en condiciones de refrigeración, se procesaron en un periodo no mayor a 5 horas. 7 > ' *09 "###<
3010" & = ' *D
Se eligieron al azar 100 muestras de queso tipo pera, procesados con la leche obtenida de las hembras muestreadas en las fincas analizadas. Las muestras de queso obtenidas de la planta 1 fueron procesadas con leche del hato 1 y 2 y las de la planta 2 con la leche del hato 3. Estas muestras fueron suministradas por el productor y se obtuvieron en su empaque original por ser producto final para consumo y comercialización. Cada muestra fue debidamente identificada y transportada en condiciones de refrigeración, se procesaron en un periodo no mayor a 5 horas.
302 & ' ) &
3020$ ) & ' * B
3020$0$ &) + ' G N
Esta prueba fue realizada a 62 muestras de leche provenientes directamente del animal diagnosticados con mastitis subclínica grado III y a 22 muestras de cantina. A 9.5 ml de leche se le adicionaron 0.5 ml de solución de púrpura de bromocresol al 9%, se incubó a 37°C por 24H, posteriormente se evaluaron cambios como proteólisis y/o acidificación.7 > ' *09 "###<0
3020$0" * ' E , N
Los tubos de la prueba de hotis fueron sembrados en agar BHI con sangre 5%, MacConkey y Enterocococsell con vancomicina, se incubaron a 37 °C por 48 horas; se realizaron aislamientos e identificación bioquímica a los diferentes microorganismos encontrados07 M
-*09 $664; & & *09 "##:< Las colonias presuntivas para vancomicina Resistente -' . fueron evaluadas mediante tinción de Gram y pruebas de identificación bioquímica como catalasa, tolerancia a NaCl 6.5 % e hidrólisis de la esculina.
3020$01 &) + ' + * ' ' & + N
Se realizaron pruebas de sensibilidad antibiótica por el método de difusión Kirby Bauer a 33 microorganismos clínicamente importantes en el proceso de mastitis bovina ( γ
hemolítico, α hemolítico, * sp, , ) sp,
hemolítica, y sp) , para esto se realizó una suspensión en solución salina fisiológica a la concentración del patrón 0.5 de MacFarland; los antibióticos utilizados fueron cefoperazona, tetraciclina, ciprofloxacina, streptomicina, timetropim sulfa, metronidazol y amoxacilina + ac clavulánico. La incubación se realizó a 37º por 24h. 7 / *09 "##"; & ** / 8D* 89 "##3< y la lectura se determinó midiendo el diámetro de inhibición para cada microorganismo y antibiótico. 7 B I * - *09 "##4)
3020" & ' * B ' N
La leche de cantinas fue inoculada en medios agar BHI con sangre 5%, MacConkey y Enterocococsell con vancomicina, se incubaron a 37 °C por 48 horas. Posteriormente, se realizó aislamiento e identificación bioquímica a las diferentes colonias y las presuntivas para fueron evaluadas mediante tinción de Gram y pruebas para identificación bioquímica como catalasa, tolerancia a NaCl 6.5 % e hidrólisis de la esculina.
30201 & = ' *D
303 D* '.
Los resultados fueron analizados mediante estadística descriptiva, organizados y representados a través de tablas e histogramas.
:0
Para evaluar el estado de salud de la ubre, se realizó la prueba de California Mastitis Test, esta se basa en la gelificación del ADN cuando es liberado de las células somáticas presentes en leche a consecuencia de la respuesta inmune y/o inflamación. 7 & ** / 8 * 9 "##3 / H 9 "##6< En este estudio se evaluaron un total de 62 muestras de animales con mastitis subclínica grado III, en ninguno de los hatos se presentaron animales con mastitis clínica.
:0$ * ' E , ' & &- ) & ' * B
Aunque la identificación de microorganismos diferentes a no fue objetivo
propuesto para el trabajo, los medios de cultivo utilizados permitieron la identificación de otros microorganismos importantes asociados con mastitis bovina.
A partir de las 62 muestras analizadas, se presentó un 1.6 % (n=1) de muestras positivas para , que corresponde a la presencia de menor positividad en comparación con los demás aislamientos obtenidos en el estudio, confirmando con esto que no es un agente etiológico en el proceso de mastitis en las fincas evaluadas0
La mayoría de aislamientos correspondieron a γ hemolítico 33.8% (n=21) y α hemolítico (Esculina negativa y NaCl 6.5% negativo) 29% (n=18),
9.7% (n=6) sp 8.1% (n=5) y con en menor porcentaje * sp
6.5% (n=4), β hemolítico 4.8% (n=3) 3.2% (n=2) y unas
pocas para hemolítica 1.6% (n=1) y " sp 1.6% (n=1) como lo muestra la figura 3. Estos resultados coinciden con lo reportado por Contreras y Ordoñez, 1995 en un estudio bacteriológico de muestras de leche realizado en el Valle de Ubaté, ya que no muestran ninguna implicación del en la mastitis bovina, en aquel estudio se encontraron
microorganismos correspondientes en mayor porcentaje a y cepas de
Staphylococcus sp diferentes a como agente etiológico de la mastitis bovina
7 & & *09"##:; B I * - *0 "##4< La presencia de es poco frecuente en animales; pero se corrobora que existen diferentes tipos de aislamientos de interés clínico implicados en la enfermedad.7 > ' *09 "### / B I * - *09 "##4< En reportes
por Araya et al., 2005, Hariharan et al., 2004 y Lukosova et al., 2003, se reconocen a
y como microorganismos importantes en procesos de
-)& 10 ) & ' * B ' & ' * * ' ' * E N :"
γy α hemolítico fueron los microorganismos que se aislaron con mayor frecuencia en los hatos estudiados, especialmente γ hemolítico en los hatos 2 y 3 con 48.3 % (n=14) y 31.8 % (n=7) respectivamente y α hemolítico en el hato 1 con 63.6% (n=7) y en el 2 con 34.5% (n=10), por presentar la mayor positividad en comparación con los demás aislamientos, es posible considerarlo como el agente etiológico más frecuentemente aislado en casos de mastitis bovina y responsable de la mastitis subclínica en las fincas analizadas, resultados que concuerdan con una investigación reportada por Contreras, 2008 y Rojas, 2009. Es considerado como un patógeno contagioso de la glándula mamaria que penetra luego se adhiere y por último invade los tejidos, según los reportes, la forma de trasmisión se da principalmente durante la práctica de ordeño, permitiendo la diseminación de las bacterias de glándulas infectadas a glándulas sanas, estas una vez alcanzan el interior de la glándula mamaria pueden ocasionar taponamientos con obstrucción al desplazamiento de la leche.
7 &&, *09 "##1; ' & *09 "##39 & & 9 "##:; I B *09 "##5<
-)& 20 )* ' ' ) & ' * B ' ' & ' * *
En el hato 3 se presentó mayor presencia 18.2 % (n=4) en comparación con los otros 2 hatos analizados. De acuerdo con, Taponen y Pyoralla en el 2009, se reportó sp como un microorganismo frecuentemente aislado de mastitis subclínica, que puede persistir en la glándula mamaria y aumentar el recuento de células somáticas causando así la sintomatología: esta infección se origina patógeno por un ordeño manual o mecánico en malas condiciones sanitarias que puede ser diseminado por el ordeñador o por el equipo de ordeño mecánico, entre la población animal ordeñada07 H 9 "##6<0
Otros géneros bacterianos encontrados en este estudio en baja proporción corresponden a
* sp, ) sp y " sp, con presencia esporádica y origen ambiental; adicionalmente " sp encontrado en cuadros clínicos de mastitis hemorrágicas y ocasionalmente gangrenosa 7C I) B 9 $663;G && & *09 "##3; H 9 "##6<0
-)& 30 * & + - & -& 9 & ** / I /
0 en agar sangre. . . en agar MacConkey
En resumen, los factores que pudieron incidir directamente en este estudio y que posiblemente se presentaron son: una incorrecta rutina de ordeño, presencia de ambientes contaminados y deficiencias en las principales medidas de control de la mastitis como la higiene del ordeño y tratamiento de los casos clínicos. 7 & & *09 "##:<
:0" &) + ' ) + * ' ' + ,
Los resultados obtenidos en las pruebas de sensibilidad a antibióticos a partir de los diferentes microorganismos clínicamente importantes en el proceso de mastitis bovina se encuentran registrados en la tabla 4, donde se puede analizar el comportamiento de los aislamientos frente a los 7 antibióticos evaluados. Existen diferencias considerables para cada microorganismo estudiado; así, el género que presentó mayor sensibilidad fue α hemolítico y quien presentó resistencia a todos los antibióticos con excepción de Amoxacilina + Ac clavulánico fue
. Asimismo, se puede asegurar que según este estudio y a lo reportado por Armenteros et al, 2006, los antibióticos de elección a emplear en los animales de los 3 diferentes hatos lecheros podría ser la cefoperazona y la ciprofloxacina, debido a que la mayoría de los aislamientos bacterianos enfrentados a estos antimicrobianos presentaron alto grado de sensibilidad.
-)& :0 &) + ' + * ' ' + , )** & B / -& 0
A. B. *
Fue importante el perfil de sensibilidad que evidenciaron más del 50% de las bacterias frente a
Ciprofloxacina ( α hemolítico, * sp, ) sp y
hemolítica); ya que este antibiótico ha demostrado que en Colombia puede llegar ser una
alternativa en el tratamiento contra la infección en bovinos. 7 8 *09 "##$; & & *09 "##:<0 Básicamente para la terapia antibacterial de mastitis bovina se recomiendan ß lactámicos,
aminoglucósidos, lincosamidas, macrólidos, tetraciclina, polipéptidos, trimetoprimPsulfonamidas combinadas , quinolonas; la cefoperazona y la ciprofloxacina que corresponden a β lactámicos y quinolonas respectivamente son el tratamiento de elección por los hallazgos del presente estudio y lo reportados por Castañeda et al., 2000
.
+* 2. & H ' + * ' ' * + , ) * 8 ' * ' E & &
&-Antibiótico Tetraciclina Streptomicina Trimetropim
Sulfa
Metronidazol Amoxacilina Ac Cla
n % n % n % n % n % n % n %
Streptococcus
α hemolítico
N:10
10 100 8 80 8 80 0 0 5 50 0 0 9 90
Pseudomonas sp N: 7
1 14.2 0 0 7 100 3 42.2 1 14.2 0 0 0 0
Staphylococcus aureus
N: 4
4 100 3 75 2 50 0 0 2 50 0 0 2 50
Klebsiellasp N: 4
0 0 0 0 4 100 0 0 1 25 0 0 0 0
Streptococcus Ÿ hemolítico
N:5
5 100 5 100 1 20 0 0 0 0 0 0 1 20
Escherichia colihemolítica
N:1
1 100 0 0 1 100 0 0 1 100 0 0 1 100
Escherichia coli
N: 1
0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 100
Enterococcus sp VanR
N=1
1 100 1 100 0 0 0 0 1 100 0 0 1 100
Cefoperazona Ciprofloxacina
Bacterias como y * presentaron un alto grado de resistencia a
la Tetraciclina y al Trimetropim Sulfa, lo que coincide con lo reportado por Armenteros et al, 2006; este grado de resistencia puede ser por el uso indiscriminado de algunos antibióticos en el tratamiento de los diversos procesos infecciosos en bovinos, entre ellos mastitis. Adicionalmente, se puede observar en la tabla 4 que el 100% (N=33) de los microorganismos presentaron resistencia al Metronidazol, esto se debe a que los medicamentos a los que se genera mayor resistencia es a los Nitroinidazoles (Metronidazol), presentando una taza de resistencia alta en países industrializados; en países como Colombia, donde el uso indiscriminado de antibióticos es muy frecuente, tanto en patologías humanas como veterinarias, la tasa de resistencia es mucho mayor razón por la cual no se recomienda este medicamento para una terapia antibacterial. 7 /
problema para la salud pública, por la transmisión a través de los alimentos y traer graves repercusiones económicas en el productor.7 & / *09 "##3; - *09 "##6<
Las pruebas de susceptibilidad demostradas indican que los microorganismos
sp (n=4) y (n=1) evidencian sensibilidad al antibiótico Trimetoprimsulfa y una resistencia del 100% a la Streptomicina y al Metronidazol, ya que probablemente en las regiones evaluadas se han utilizado con frecuencia este tipo de fármacos para el control de las infecciones, lo cual conduce a las bacterias al desarrollo de la resistencia. Investigaciones previas han demostrado que la Streptomicina es un antibiótico que induce la resistencia de alto nivel con mayor frecuencia.7 B / /I) 9 "##2; & / *9 "##3 / , 8 *09 "##:; * 8) *
*09 "##6<0 Lo que se confirma en este estudio, ya que es el segundo fármaco al que se presenta mayor porcentaje de resistencia en los microorganismos, comparado con el resto de antibióticos.
Es importante tener en cuenta que aunque no tuvo en este estudio gran
importancia como agente etiológico, aun así se evaluó la sensibilidad que puede presentar a diferentes antimicrobianos, este estudio muestra que el microorganismo presento un 100% (n=1) de resistencia a la streptomicina, según Palavecino, 2001 son intrínsecamente resistentes a varios grupos de agentes antimicrobianos entre ellos los aminoglucósidos (Streptomicina). Por la falta de alternativas para tratar infecciones producidas por este microorganismo se recomienda la evaluación de la susceptibilidad que puede presentar a fármacos como la tetraciclina. Se debe saber, que se encuentran en estudio nuevos agentes antimicrobianos para tratar infecciones
causadas por , el tratamiento aun no está establecido debido a la falta de
información sobre su correlación clínica; ya que la tasa de curación espontánea de casos de mastitis subclínica a microorganismos ambientales se encuentra alrededor del 65% y la cura espontánea de casos clínicos de mastitis es baja <20O07 ) --9 "##3<
Finalmente es importante tener presente que antes de pasar a un tratamiento antibiótico para combatir la enfermedad se recomienda controlarla con desinfectantes diseñados y aplicados en el postordeño y en la forma recomendada; los cuales reducen hasta el 50% los casos de contaminación de la glándula mamaria y las buenas prácticas de higiene a los propietarios del hato lechero o al personal que labora en los mismos, ya que el antibiótico puede ser incapaz de eliminar las bacterias de la glándula mamaria y por el contrario promover la presencia de cepas resistentes a diferentes antibióticos. Adicionalmente no se debe olvidar el uso de antibióticos de amplio espectro como las Quinolonas (ciprofloxacina) tienen efectiva actividad contra los microorganismos Gram negativos y Gram positivos y los β lactámicos (cefoperazona), ya que son antibióticos que interfieren con la formación de la pared celular bacteriana y a que presentaron una efectividad mayor al 50% en general para los microorganismos encontrados en el estudio. Por la importancia que tienen dichas bacterias en este y otros estudios se recomienda realizar pruebas de susceptibilidad bacteriana frente a antibióticos antes formular una terapia.
7 '&.-) 8 *09 "##$ / & *09 "##"<
:01 G ** 8- ) & '
Los resultados del presente trabajo demuestran que existe una alta presencia del
microorganismo de interés 95.5% (n=21), seguido de
77.3% (n=17) y * sp 50% (n=11) en muestras de cantina en los hatos estudiados como lo muestra la figura 8.
-)& 40 ) & '
Una posible razón por el cual se presentó un alto porcentaje para y en muestras de cantina en los 3 hatos muestreados, puede deberse a que estos microorganismos son considerados indicadores fecales, por encontrarse en concentraciones de 106 UFC/g y 10 5 P107 UFC/g respectivamente. 7 &- & / *09 "##4; ** 9 "##5<0
Es posible que se encuentren en muestras de cantina por un ambiente
-)& 50 & H ' = ' ' ' & &- ) & ' * B ' ' * & B
En cuanto a la distribución geográfica las muestras positivas para , presentaron similitud en los 3 hatos muestreados. En los hatos 2 y 3 la positividad llegó a su totalidad 100% (n= 2 y 12) respectivamente como se muestra en la figura 9, esto puede deberse a que existe un mayor nivel de contaminación fecal en la leche, equipo de ordeño y cantinas al cual llega este producto. 7 & / *09 "##3<
Por otra parte de acuerdo con la literatura, el alto grado de resistencia que han adquirido los sp a los Glicopéptidos en muestras de leche, es por el uso indiscriminado de los antibióticos como avoparcina que es una sustancia promotora de crecimiento en ganadería a nivel terapéutico para promover el crecimiento de los animales incrementando el aumento de peso y mejorando la utilización del alimento perteneciente a este grupo de antibióticos, por esta razón el uso de este tipo de fármacos en la dieta animal, está siendo prohibido como una medida de seguridad en la salud pública 7 L 89 "##39 && / J & 8 - 9 "##"; * 8) * *09 "##6<. Este mecanismo de resistencia a los fármacos puede ser de manera intrínseca o adquirida; esta última se basa en la adquisición de plásmidos y transposones; los cuales pueden estar presentes en los alimentos actuando como reservorio de genes para la resistencia de antibióticos ( I
*09 "##3 ; D B 8 *09 "##6<
Adicionalmente, se detectó la presencia de microorganismos ambientales como
* sp, y " estas son bacterias
formadoras de biopelìculas en alimentos, compuestos que causan deterioro en los productos de consumo como la leche y el queso y en la maquinaria en la cual son procesados; aunque este análisis no hizo parte de la metodología llevada a cabo en el presente estudio, esta puede ser una de las posibles fuentes por el cual se encontraron este tipo de microorganismos en la leche,
especialmente la proveniente de los cantinas a donde fue llevada después del ordeño. 7 *' &, /
'&.-) 89 "##5<
Es muy importante tener en cuenta que la leche es un producto indispensable en la dieta del hombre, por esta razón, es necesario consumirla en adecuadas condiciones, ya que de lo contrario se pondría en peligro la salud de quienes la consumen, por la diseminación de bacterias causantes de enfermedades tales como: tuberculosis, brucelosis, faringitis estreptocócica, entre otras. 7 H 9 "##6<
Finalmente se debe tener en cuenta el control en la toma de muestras de leche a partir de cantina, ya que es una herramienta importante para establecer un diagnóstico sobre el estado sanitario de las fincas, si por el contrario no se practicaran este tipo de procedimientos podría traer como consecuencia patologías al hombre. 7 ) 9 "##6<
:02 = *) , ' * ' ' ' * & ') *D
A partir de 100 muestras de queso pera provenientes de dos plantas de productos lácteos (Planta 1 y 2), en nuestro estudio se realizó un seguimiento en cuanto a sus características organolépticas tales como color, olor y textura; al estudiar la relación existente entre la presencia del microorganismo y la fecha de vencimiento se encontró una correlación, lo que indica que la
fecha de vencimiento incide con la presencia de , ya que el queso pera
