Efecto del aceite esencial de Citrus limon sobre la viabilidad de Escherichia coli y Staphylococcus aureus in vitro

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(1)Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO. AS. FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS. CI. AS. BI. O. LO. G. IC. ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE MICROBIOLOGÍA y PARASITOLOGÍA. DE. CI EN. Efecto del aceite esencial de Citrus limon sobre la viabilidad de Escherichia coli y Staphylococcus aureus in vitro. TE. CA. TESIS PARA OPTAR EL TÍTULO PROFESIONAL DE. BI. BL. IO. BIÓLOGO-MICROBIÓLOGO. AUTOR:. Br. Denis Efrén Calderón Vidal.. ASESOR:. Dr. Juan Guevara González. TRUJILLO – PERU 2017. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(2) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AUTORIDADES DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO QUE. LO. G. IC. AS. OTORGAN EL TÍTULO PROFESIONAL DE BIÓLOGO MICROBIÓLOGO.. BI. O. RECTOR DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO. CI EN. CI. AS. Dr. Orlando Gonzales Nieves. VICE-RECTOR ACADÉMICO. IO. TE. CA. DE. Dr. Rubén Vera Veliz. Dr. Steban Ilich Zerpa. BI. BL. SECRETARIO GENERAL DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO. i Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(3) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AS. DECANO DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS. AS. BI. O. LO. G. IC. Dr. Freddy Rogger Mejia Coico. CI. SECRETARIO DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS. CA. DE. CI EN. Dr. William Zelada Estraver. MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA Dra. Bertha Soriano Bernilla. BI. BL. IO. TE. DIRECTORA DE LA ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE. II. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(4) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. ASESOR. AS. El que suscribe, profesor asesor de la presente tesis declara que ésta ha sido ejecutada de. IC. conformidad con su correspondiente proyecto y con las debidas orientaciones al tesista. En. G. cuanto al informe, éste ha sido revisado y acoge las observaciones y sugerencias. LO. correspondientes.. O. Por lo tanto, autorizo al Br. DENIS EFREN CALDERON VIDAL, continuar con el trámite. IO. TE. CA. DE. CI EN. CI. AS. BI. de reglamento correspondiente.. BI. BL. Dr. Juan Guevara González. III. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(5) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AS. PRESENTACIÓN. IC. SEÑORES MIEMBROS DEL JURADO DICTAMINADOR:. G. En cumplimiento con las disposiciones establecidas en el reglamento de grados y títulos. LO. de la Universidad Nacional De Trujillo, pongo a vuestra consideración y criterio, el. O. informe de tesis titulado: “efecto del aceite esencial de Citrus limon sobre la viabilidad. BI. de Escherichia coli y Staphylococcus aureus in vitro” con el propósito de obtener el. Trujillo, Agosto de 2017. BL. IO. TE. CA. DE. CI EN. CI. AS. Título Profesional de Biólogo- Microbiólogo.. BI. _________________________ Br. Denis Efrén Calderón Vidal. IV. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(6) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AS. MIEMBROS DEL JURADO. IC. ___________________________. G. Ms. C. Pedro Alvarado Salinas. CI EN. CI. AS. BI. O. LO. PRESIDENTE. ____________________________. SECRETARIO. BI. BL. IO. TE. CA. DE. Dr. Juan Guevara González. ___________________________ Dra. María Nelly Vásquez Valles VOCAL. V. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(7) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. APROBACIÓN. AS. Los profesores que suscribe, miembros del Jurado dictaminador, declaran que el presente informe de Tesis ha cumplido con los requisitos formales y fundamentales, siendo. O. LO. G. IC. aprobada por unanimidad.. BI. ___________________________. AS. Ms. C. Pedro Alvarado Salinas. DE. CI EN. CI. PRESIDENTE. Dr. Juan Guevara González SECRETARIO. BI. BL. IO. TE. CA. ____________________________. ___________________________ Dra. María Nelly Vásquez Valles VOCAL. VI. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(8) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DEDICATORIA. AS. Mi tesis la dedico con todo mi amor y cariño:. IC. A Dios quien me dio la oportunidad de vivir y regalarme una familia maravillosa.. LO. G. Con mucho cariño a mi madre Angélica Vidal Guevara por medio de quien vine a la vida y ha estado conmigo en todo momento. Gracias por todo mamá por darme una carrera para. O. mi futuro y por creer en mí, aunque hemos pasado momentos difíciles siempre han estado. AS. BI. apoyándome y brindándome todo tu amor, por todo te agradezco de todo corazón. Con mucho cariño a mi hija Jimena Calderón Saldarriaga, mi motivación, mi alegría y mi. BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI EN. CI. impulso para seguir adelante.. VII. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(9) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AGRADECIMIENTO. LO. G. IC. confianza y asesoramiento en la realización de la presente tesis.. AS. Mi profundo agradecimiento a mi asesor Dr. Juan Guevara González, por su apoyo,. BI. O. A mi esposa Angie por su apoyo, amor y compañía.. CI EN. CI. AS. A mis hermanos Edgar, Mónica, Jhonny y Joel por su apoyo moral. BI. BL. IO. TE. CA. DE. A mi abuelita Basilia Guevara Esquivel por su apoyo y cariño. VIII. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(10) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. CONTENIDO. AS. AUTORIDADES DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO……. I III. PRESENTACION…………………………………………………………….... IV. MIEMBRO DEL JURADO…………………………………………………….. V. LO. G. IC. ASESOR………………………………………………………………………... VI. DEDICATORIA……………………………………………………………….... VII. BI. O. APROBACIÓN…………………………………………………………………. VIII. CONTENIDO……………………………………………………………………. IX. RESUMEN……………………………………………………………………….. XII. CI EN. CI. AS. AGRADECIMIENTO………………………………………………………….... INTRODUCCIÓN………………………………………………………………... DE. MATERIAL Y MÉTODOS. 1. 11. 2. Recolección y transporte del material vegetal…………………………….. 12. CA. 1. Material……………………………………………………………………. 13. 3.1. Reactivación de los Cultivos bacterianos…………………………….. 13. 3.2. Estandarización de los inóculos bacterianos………………………………………………... 13. IO. TE. 3. Preparación de los inóculos bacterianos………………………………………….. 13. 5. Análisis estadístico………………………………………………………... 14. BL. 4. Preparación de las diferentes concentraciones de aceite esencial…………………. 16. DISCUSIÓN……………………………………………………………………….... 20. CONCLUSIÓN…………………………………………………………………….... 26. BI. RESULTADOS…………………………………………………………………….. IX. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(11) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS………………………………………………. 27. ANEXOS………………………………………………………………………………. IC. LO. G. ANEXO 01. Constancia del Herbarium Truxillense (HUT). AS. 35. O. ANEXO 02. Análisis microbiológico para el efecto del aceite esencial Citrus limón. AS. BI. sobre la viabilidad Escherichia Coli y Staphylococcus Aureus. CI. ANEXO 03. Diámetros de los halos de inhibición formado por el cultivo de S. aureus. CI EN. y por el promedio de ellos, obtenidos frente a las concentraciones de 20, 40, 60, 80 y 100% del aceite de C. limón, con los halos de inhibición. DE. obtenido frente vancomicina (Control Positivo) y Etanol absoluto (Control Negativo). Por Triplicado. CA. ANEXO 04. Diámetros de los halos de inhibición formado por el cultivo de E. coli. TE. y el promedio de ellos, obtenidos frente a las concentraciones de 20, 40,. frente Gentamicina (Control Positivo) y Etanol absoluto (Control negativo). Por triplicado. BI. BL. IO. 60, 80 y 100% del aceite de C. limón con los halos de inhibición obtenido. ANEXO 05. a) Halos de inhibición de S. aureus frente a las concentraciones de 20 y 40% b) Halos de inhibición de S. aureus frente a las concentraciones de. X. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(12) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 80% de aceite de C. limón y frente a vancomicina y c) Halos de inhibición de S. aureus frente a las concentraciones de 60, 80 y 100%. IC. AS. de aceite de C. limón. G. ANEXO 06. Halos de inhibición de E. coli frente a las concentraciones de 20, 40. LO. y 60% y b) Halos de inhibición de E. coli frente a las concentraciones. AS. BI. O. de 80, 100% aceite esencial de C. limon “limón ”, y frente a Gentamicina. ANEXO 07. Análisis estadístico realizados a los halos de inhibición de S. aureus a. CI. las diferentes concentraciones (20, 40, 60, 80 y 100%) del aceite de C.. CI EN. limón “limón” y frente al control Vancomicina. ANEXO 08. Análisis estadístico realizados a los halos de inhibición de E. coli a las. DE. diferentes concentraciones (20, 40, 60, 80 y 100%) del aceite de C. limón. BI. BL. IO. TE. CA. “limón” y por el control (Gentamicina). XI. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(13) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. RESUMEN. AS. Se determinó el efecto del aceite esencial de Citrus limon sobre la viabilidad de. Escherichia coli y Staphylococcus aureus in vitro. La extracción de los aceites. IC. esenciales (AE) se realizó mediante el método de destilación por arrastre con. LO. G. vapor de agua, a partir de los flavedos de Citrus limon, se utilizó concentraciones. O. de 20, 40, 60, 80 y 100% de aceite usando etanol absoluto como diluyente. Para. BI. determinar la inhibición de crecimiento antibacteriano se empleó el método de. AS. difusión en pozo; añadiendo 50 𝜇𝐿 de cada concentración en pozo de 6 mm de. CI. diámetro sobre placas de Petri con Agar Mueller Hinton, los cuales fueron. CI EN. sembrados con S aureus y E. coli por superficie, con concentraciones similares al tubo N° 0,5 del nefelómetro de Marc Farland (1,5 x 10 8 UFC/ml); utilizando Vancomicina y Gentamicina como controles S. aureus y E. coli respectivamente.. DE. La lectura se realizó a las 24 horas de incubación a 37 °C midiendo el halo de. CA. inhibición en cada ensayo. Para los análisis de datos se realizó ANOVA y Post-. TE. Anova mediante la prueba Kolmogorov-Smirnov, obteniéndose diferencia significativas, (p< 0.05) entre las concentraciones que inhiben mejor el. IO. crecimiento. Los resultados mostraron que hay mayor inhibición a mayor. BL. concentración del aceite esencial, siendo la concentración de 100%, la que logro. BI. inhibición máxima 26 mm para S. aureus. Se concluye que el aceite esencial de. Citrus limon muestra efecto inhibitorio sobre la viabilidad de S. aureus y E. coli. Palabra clave: aceite esencial, Citrus limon, viabilidad, Staphylococcus aureus y Escherichia coli. XII. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(14) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. I.. INTRODUCCIÓN La gran capacidad de adaptación y de sobrevivencia que presenta E. coli y. AS. S. aureus hace particularmente compleja su eliminación en los alimentos, es por. IC. eso que la industria alimentaria a lo largo de los años ha hecho uso de productos. G. químicos para inhibir el crecimiento de microorganismos causantes de alteraciones. LO. de alimentos, infecciones e intoxicaciones; una alternativa natural es el uso de. O. aceites esenciales, ya que son eficaces para la seguridad y conservación de. AS. BI. alimentos debido a la presencia de una amplia gama de componentes volátiles1.. CI EN. CI. Dadas las cualidades antisépticas de las plantas aromáticas y medicinales; sus extractos y aceites esenciales han sido reconocidos desde la antigüedad, desempeñando un papel fundamental en la vida del hombre, siendo durante siglos. DE. la fuente de agentes terapéuticos, constituyendo su uso una costumbre profundamente arraigada en las culturas de los pueblos2, por su biodiversidad y. CA. riqueza en metabolitos secundarios, proporcionan una interesante fuente de. TE. posibles sustancias activas contra muchas bacterias; en los últimos años se ha ido. IO. desarrollando un creciente interés en la búsqueda de muchos vegetales con efectos. BI. BL. antimicrobianos.3, 4. Los aceites esenciales o esencias son mezclas de compuestos provenientes,. en su gran mayoría, del metabolismo de organismos vegetales5 obtenidos de diferentes partes de la planta, como flores, brotes, semillas, hojas, ramas, cortezas,. 1 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(15) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. hierbas, madera, frutas, y raíces. Son compuestos líquidos, volátiles, solubles en lípidos con un olor fuerte. En la naturaleza, los aceites esenciales protegen las. AS. plantas sirviendo como agentes antibacterianos, antivirales, antifúngicos, e. IC. insecticidas, repelen a los herbívoros y atraen insectos para facilitar la polinización. G. y la comunicación alelopática entre las plantas6. Los aceites esenciales son una parte. LO. importante de la farmacoterapia tradicional en zonas templadas de los países. BI. AS. industria cosmética, farmacéutica y alimento7.. O. tropicales. También confieren características que los hacen populares con la. CI. Los aceites esenciales son extraídos por métodos de destilación,. CI EN. generalmente por arrastres de vapor e hidrodestilacion .Estos son principalmente mezclas de terpenos, sesquiterpenos y específicamente monoterpenos8. Los. DE. hidrocarburos monoterpénicos son los compuestos más abundantes en los aceites esenciales, y precursores de los más complejos, que son los terpenos oxidados,. CA. limoneno es el precursor de los principales componentes de la esencia de las mentas,. TE. como carvona y mentol. El limoneno se encuentra también en cítricos y en el eneldo. BI. BL. IO. (Anethum graveolens)9.. Según la organización mundial de salud (OMS), cualquier planta que. contiene sustancias que pueden ser utilizadas con fines terapéuticos o que son precursores de nuevas drogas semi-sintéticas se conoce como planta medicinal, siendo la mejor fuente para obtener medicamentos. 10. 2. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(16) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. C. limon, pertenece a la familia de las Rutáceas, la cual se originó en la zona tropical y subtropical sudeste asiático común. Limón es una planta medicinal. AS. importante, la cual se cultiva principalmente por sus alcaloides, que tienen actividad. O. LO. G. cualquiera de sus partes (raíz, tallo, hojas, flor o fruto).11, 12. IC. contra el cáncer y potencial efecto antibacteriano, en extractos crudos de ésta y. BI. Los cítricos en general contienen polisacáridos, lípidos, tocoferoles,. AS. carotenoides, terpenos, vitaminas, minerales, algunos ácidos orgánicos como ácido cítrico o ácido ascórbico y flavonoides (flavononas y flavonoles) que actúan como. CI EN. CI. antioxidantes. El limón es una buena fuente de vitamina C, potasio y calcio. 13,14. El limón, es uno de los cultivos más importantes de cítrico comercial,. DE. cultivada en todos los continentes del mundo. Dado que el zumo de cítricos es menos. CA. de la mitad del peso de la fruta, muy grandes cantidades de subproducto de desechos,. TE. como las cáscaras se forman cada año; las cáscaras mínimamente utilizadas en alimentación animal o fertilizantes, generalmente terminan en rellenos sanitarios y. IO. siendo un problema para las agencias de vigilancia de la contaminación. Gran parte. BL. del residuo sólido de cáscaras y semillas de cítricos son una fuente rica de aceites. BI. sin explotar, la cual no es tóxica y pueden ser utilizados por la industria cosmética, alimentaria y farmacéutica. 16,17. 3. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(17) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Las cáscaras de cítricos son ricos en nutrientes y contienen muchos fitoquímicos, estos pueden ser utilizados de manera eficiente como medicamentos. La. AS. cáscara del limón es una rica fuente de glicósidos flavonoides, cumarinas, β y γ-. IC. sitosterol, glucósidos y aceites volátiles. Además, la fibra de cítricos también contiene. G. compuestos bioactivos, tales como polifenoles y flavonas polimetoxilatos, que. O. LO. contribuyen a su actividad antibacteriana y son raras en otras plantas. 17. BI. Los cítricos se cultivan en más de 140 países en todo el mundo, de los cuales,. AS. naranjas, toronjas y limones son los más altamente consumidos, llamando la atención. CI. de los investigadores por su multitud de compuestos bioactivos, incluyendo a sus. CI EN. cáscaras y semillas. Estudios in vitro demuestran actividad antibacteriana, antifúngica,. DE. antiparasitaria, insecticida, antioxidante y antiproliferativa. 18,19. El estudio indio de Srividhya y col (2013) evaluó la eficacia de extractos de. CA. cáscaras de limón, naranja, lima y toronja con disolventes como etanol, acetona,. TE. cloroformo y hexano, contra patógenos comunes del tracto gastrointestinal: Salmonella spp., Shigella spp. y E. coli, revelando que dichos extractos tienen mejores efectos. IO. inhibidores que los compuestos sintéticos. Además, en el concentrado de extracto de. BL. etanol, el limón mostró un mejor efecto inhibitorio sobre la E. coli y Shigella spp. que. BI. con los otros cítricos con mismo diluyente. 20. El estudio malayo de Sekar y col (2013) compara las propiedades antibacterianas del extracto de metanol de cinco variedades de cáscaras de cítricos,. 4. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(18) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. incluido el limón, por el método de difusión en disco. Los resultados indican que el extracto de metanol de variedades de cítricos, mostró moderada actividad. AS. antibacteriana hacia S. aureus y E. coli, habiendo mejor inhibición con las cáscaras. LO. G. IC. de mandarina y naranja dulce. 21. O. El estudio indio de Dhanavade y col (2011) evalúa el efecto antibacteriano. BI. del extracto de las cáscaras del limón con diferentes disolventes como etanol,. AS. metanol y acetona. Probando una mayor actividad antibacteriana con el disolvente. CI EN. como metanol y acetona. 22. CI. de etanol contra P. aeruginosa y S. aureus, en comparación de otros disolventes. El estudio japonés de Miyake y col (2011) identifica y aísla cuatro. DE. sustancias antibacterianas de la cáscara del limón, que eran activos contra las bacterias orales que causan la caries dental y la periodontitis, como Streptococcus. CA. mutans, Prevotella intermedia, y Porphyromonas gingivalis. Las sustancias. TE. antibacterianas que son extraídas son 8-geranyloxypsolaren, 5-geranyloxypsolaren, 5-geranyloxy-7-metoxicumarina y floroglucinol 1-β-D-glucopiranósido, que. IO. debido a sus propiedades hidrofóbicas se extrajeron eficazmente con etanol y n-. BL. hexano, pero no del agua. El etanol fue superior al n-hexano como disolvente de. BI. extracción para los compuestos anteriores. 23. El estudio británico de Fisher y col (2006), investigó la eficacia de aceites esenciales y sus componentes volátiles de limón, bergamota y naranja contra una. 5. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(19) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. serie de patógenos trasmitidos por alimentos comunes. Mostraron que los tres cítricos poseen actividad antibacteriana, siendo la bergamota la más efectiva.. AS. Además, encontraron que las bacterias Gram positivas eran más susceptibles que. IC. las Gram negativas in vitro. De las bacterias Gram positivas ensayadas S. aureus. O. LO. G. fue el menos susceptible a tantos los aceites como a los componentes probados. 24. BI. El estudio venezolano de Martínez y col (2003) evalúa la actividad. AS. antibacteriana del aceite esencial de mandarina, extraídos de su corteza, usando etanol como solvente sobre diversos patógenos. Obtuvo resultados comparables al estudio. CI. británico de Smith y col en 1998, donde las bacterias Gram positivas demostraron ser. CI EN. menos resistentes que las bacterias Gram negativas a los aceites esenciales de mandarina, limón y naranja. Concluyen que los aceites esenciales de mandarina tienen. DE. actividad antibacteriana del tipo bactericida contra las cepas bacterianas patógenas: S.. CA. aureus, Listeria monocytogenes y Bacillussubtilis.25,26. TE. En el Perú, como en otros países en vías de desarrollo, las plantas. IO. medicinales representan aún la principal herramienta terapéutica en medicina. BL. tradicional. En los últimos años después de un período en que la industria farmacéutica se dedicó exclusivamente a la fabricación de fármacos de síntesis, hay. BI. un cambio a la búsqueda de nuevos medicamentos de origen herbario. Así tenemos, la investigación de Fernandez y col (2010) en el que evalúa efecto fungicida contra cepas de Candida albicans de los aceites esenciales de eucalipto, orégano, limón y. 6. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(20) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. mandarina. Demostrando efecto fungicida por parte de todos los aceites, incluído. AS. el limón. 27,28. IC. S. aureus es una bacteria Gram positiva, anaerobio facultativo; se encuentra. LO. G. en la piel, la nariz y en la piel de animales de sangre caliente. Hasta 30-50% de la población humana son portadores. S. aureus puede crecer en un amplio rango de. BI. O. temperatura, comprendido entre 7-48.5ºC con un óptimo de 30-37ºC, pH de 4.2 9.3, con un óptimo de 7-7.5 y concentración de cloruro de sodio hasta 15%, puede. AS. crecer y sobrevivir a baja actividad de agua (AW=0.86)29. Estas características. CI. permiten que S. aureus crezca en una amplia variedad de alimentos. Algunas cepas. CI EN. de S. aureus son capaces de producir enterotoxina estafilococócica y son los. DE. agentes causantes de intoxicación alimentaria estafilocócica30.. CA. La contaminación con S. aureus puede ser evitado por el tratamiento de calor en los alimentos, sin embargo esta se mantiene como mayor causa de. TE. enfermedades transmitidas por alimentos porque puede contaminar los productos. IO. alimentarios durante la preparación y procesamiento31. Los síntomas de. BL. intoxicación alimentaria estafilocócica tienen un inicio rápido (2-8 h), e incluyen. BI. náuseas, vómitos violentos, calambres abdominales, con o sin diarrea.31,32. E. coli también está implicado en las enfermedades alimentarias. Es un bacilo Gram negativo, anaerobio facultativo, móvil por flagelos peritricos,. 7. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(21) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. asporógeno, tiene requerimientos nutricionales sencillos: fermentan la glucosa, reducen los nitratos y son catalasa positivos y oxidasa negativos. E. coli puede. AS. crecer en un amplio rango de temperatura, comprendido entre 7-46 ºC con un. IC. óptimo de 37 ºC, pH de 4.4 -9, con un óptimo de 6 - 7, su actividad de agua (AW). G. mínima es 0.95 y su AW óptimo es 0.99533. Es el miembro más frecuente e. LO. importante del género Escherichia. Las cepas de E. coli poseen antígenos flagelares. BI. AS. alrededor de 100 capsulares y 170 somáticos34.. O. (H), capsulares (K) y somáticos (O). Se conocen más de 50 antígenos flagelares,. CI. Los compuestos utilizados como antimicrobianos atacan varios sitios dentro. CI EN. de las células microbianas y dependiendo de la concentración utilizada, pueden. DE. causar la inhibición o inactivación de los microorganismos35.. CA. Los sitios de acción de los antimicrobianos en la célula microbiana,. TE. incluyen a la membrana celular, pared celular, enzimas metabólicas, síntesis de proteínas y el sistema genético, todos ellos estratégicos para la supervivencia de. BI. BL. IO. ciertos microorganismos 36.. Los efectos de los compuestos fenólicos pueden ser de dos niveles, sobre. la integridad de la pared celular y membrana citoplasmática así como sobre la respuesta fisiológica del microorganismo. Los compuestos fenólicos pueden desnaturalizar a las enzimas responsables del inicio de la germinación de las. 8. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(22) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. esporas o interferir con el uso de aminoácidos necesarios para iniciar el proceso de. IC. AS. germinación37.. G. La hidrofobicidad de los constituyentes de los aceites esenciales les permite. LO. integrar a los lípidos de la membrana celular bacteriana y de la mitocondria,. O. alterando las estructuras y haciéndolas más permeables. Una gran pérdida del. BI. contenido celular puede conducir a la muerte celular38. Los aceites esenciales son. AS. más efectivos en bacterias Gram positiva que en Gram negativa in vitro, aceites esenciales obtenidos de Ocimum basilicum L. y otras especies de Ocimum fueron. CI. más efectivo contra bacterias Gram positivas (Bacillus sp., Staphylococcus sp.,. CI EN. Micrococcus sp., Sarcina sp., Lactobacillus sp.) que en bacterias Gram negativas (Enterobacter sp., Pseudomonas sp., E. coli, Salmonella sp.)39. Estudios con aceites. DE. esenciales demuestran que los aceites esenciales interactúan con membranas celulares de las bacterias cambiando su permeabilidad a cationes como H+ y K+; la. CA. salida de potasio intracelular ocasiona alteraciones estructurales y pérdida de la. TE. viabilidad celular, así lo demuestra el estudio del aceite esencial de Origanum. BI. BL. IO. compactum frente a S. aureus y P. aeruginosa40.. La resistencia bacteriana es reconocida ampliamente como una amenaza. para el tratamiento antibiótico en todo el mundo, la cual apareció con mayor incidencia en los ambientes hospitalarios, por ejemplo las reportadas con especies de : Klebsiella, P. aeruginosa, E. coli, Acinetobacter y S. aureus meticilino y. 9. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(23) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. vancomicino, cada vez más difíciles de tratar con los antibióticos, usuales microbios sigue siendo uno de los problemas de salud más importantes a nivel. AS. mundial y esta situación se inclina a empeorar cuando los esfuerzos científicos en. IC. la búsqueda de nuevos fármacos antimicrobianos se ven frustrados por los. G. siguientes factores: La terapia sostenida a altas concentraciones, Prolongados. LO. periodos de tratamiento, Elevada toxicidad de los fármacos antimicrobianos y. AS. BI. O. Resistencia bacteriana a la terapia de elección.. En este contexto, es necesario encontrar estrategias alternativas o fuentes. CI. naturales eficaces contra bacterias que son actualmente difíciles de tratar. La. CI EN. búsqueda de nuevos antimicrobianos es una tarea incesante de muchos centros de investigación alrededor del mundo. Es necesario destacar que en los albores de la. DE. terapéutica farmacológica, las plantas eran la principal fuente de principios activos valiosísimos. Estas drogas naturales podrían representar un enfoque interesante. CA. para limitar la aparición y propagación de microorganismos, que originan. TE. problemas en la salud pública .Los aceites esenciales de C. limon ofrecen una. IO. terapia alternativa ya que poseen compuestos con efecto inhibitorios. Por. BL. consiguiente, la presente investigación tiene por finaidad evaluar el efecto del. BI. aceite esencial Citrus limon sobre la viabilidad Staphylococcus aureus y. Escherichia coli in vitro.. 10. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(24) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Objetivo General . AS. Determinar el efecto de las diferentes concentraciones del aceite esencial de Citrus. G. IC. limon sobre la viabilidad de Escherichia coli y Staphylococcus aureus in vitro.. LO. Objetivos específicos . O. Determinar el efecto de las concentraciones de 20, 40, 60, 80 y 100% del aceite. BI. esencial de Citrus limon sobre la viabilidad de Escherichia coli y Staphylococcus. CI. AS. aureus.. . CI EN. Determinar cuál de las bacterias (Escherichia coli y Staphylococcus aureus) presenta mayor inhibición del crecimiento frente al aceite esencial de Citrus limon.. MATERIAL Y MÉTODOS. DE. II.. Cultivo. de. Escherichia. TE. . CA. MATERIAL BIOLÓGICO coli,. aislados. de. ambientes. intrahospitalarios,. IO. proporcionados por el laboratorio Hospital Belén del Ministerio de Salud de la. BL. ciudad de Trujillo.. Cultivo de Staphylococcus. aureus, aislados de ambientes intrahospitalarios,. BI. . proporcionados por el Laboratorio Referencial del Ministerio de Salud de la ciudad de Trujillo.. . Cáscara de Citrus limón “limón” proveniente del distrito de Chocope.. 11. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(25) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. PROCEDIMIENTO. AS. 1. Recolección y transporte del material vegetal. IC. Los frutos de C. limon se obtuvieron del distrito de Chocope, departamento La. G. Libertad-Perú.. LO. Las muestras fueron llevadas al HERBARIUM de la Universidad Nacional de. AS. BI. O. Trujillo para su identificación taxonómica.. CI. 2. Extracción del aceite esencial de C. limón. CI EN. MÉTODO: Destilación por arrastre con vapor de agua Se depositaron 500 gramos de la cáscara de C. limón “limón” en un balón de. DE. 1000 mL.. El balón estuvo conectado a otro balón con una cantidad adecuada de agua. CA. mediante un tubo conector, que fue hasta el fondo del balón con el material vegetal.. TE. El extremo superior de este balón estuvo conectado a un condensador.. IO. El balón conteniendo agua se calentó hasta ebullición por un tiempo de tres horas,. BL. de tal forma que el vapor pasó a través de la muestra y del condensador, y se colectó. BI. posteriormente en una pera de decantación. Se separó el agua contenido en la pera de decantación y se colectó el aceite esencial en frascos de color ámbar. Se adicionó cloruro de calcio (0.2 gramos) como deshidratante y se llevó a. 12. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(26) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. refrigeración a 10 ºC41.. AS. 3. Preparación de los inóculos bacterianos. IC. 3.1. Reactivación de los Cultivos bacterianos. G. Cada cultivo bacteriano fue reactivado en caldo infusión cerebro corazón. LO. (BHI) por 18 horas a 37 °C y posteriormente sembrado en Agar BHI por 18. BI. O. horas a 37 °C42,43.. AS. 3.2. Estandarización de los inóculos bacterianos. CI. Las colonias de S. aureus y de E. coli fueron suspendidas en solución. CI EN. salina fisiológica estéril hasta alcanzar la turbidez equivalente al tubo N°1 del Nefelómetro de Mac Farland (3x108ufc/mL), realizándose el recuento. CA. DE. respectivo para comprobar dicha concentración44.. TE. 4. Preparación de las diferentes concentraciones de aceite esencial El aceite obtenido fue considerado como tratamiento al 100%, a partir del cual. IO. se realizaron diluciones para obtener las concentraciones de 20, 40, 60 y 80% de aceite. BL. de C. limon; utilizando como solvente etanol absoluto. Se tuvo en cuenta que las. BI. concentraciones de aceite preparadas no estuvieran en contacto con la luz, debido a que es fotosensible44.. 13. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(27) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 5. Prueba de inhibición de crecimiento Método de difusión en agar. AS. El efecto inhibitorio del aceite de limón se determinó utilizando los cultivos. IC. bacterianos, siguiendo la técnica de difusión en agar en placas que contenían de 22 a. G. 25 ml de agar Mueller-Hinton, por triplicado, a las que se sembraron por superficie. LO. 0.1ml del inóculo bacteriano y se distribuyó con asa de Drigalsky, por triplicado a. O. cada placa se le hizo 3 orificios de 4 mm de diámetro y 4 mm de profundidad cada. BI. uno utilizando un sacabocado estéril, posteriormente a cada orificio se agregó 50uL. AS. de cada una de las concentraciones de aceite de C. limon, se dejó reposar por 20. CI. minutos y luego placas se incubaron a 37°C por 24 horas.. CI EN. El efecto inhibitorio del aceite se determinó midiendo el halo de inhibición, el tamaño de esta zona de inhibición indicó si las bacterias objeto de análisis tienen una. DE. sensibilidad alta, intermedia o baja frente a las soluciones del aceite.. CA. También se evaluaron tres placas control utilizando discos de los antibióticos vancomicina y gentamicina como controles positivos para S. aureus y E.coli. BL. IO. TE. respectivamente.44,45,46. BI. Análisis Estadístico Los halos de inhibición de crecimiento (mm) de S. aureus y E. coli fueron sometidos. al test de Kolmogorov-Smirnov para determinar la distribución normal de los valores (Normal: p>0.05, y No Normales: p<0.05). Como los valores no siguieron una. 14. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(28) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. distribución normal fueron analizados con el test no paramétrico de Kruskal-Wallis para determinar diferencia significativa entre tratamientos, posteriormente se realizó. AS. la prueba de comparaciones múltiples no paramétrica de Dunn con un intervalo de. IC. confianza del 95%, y para determinar la diferencia significativa entre. G. concentraciones de aceite y cultivo de bacteria se utilizó del test Z de kolmogorov-. LO. Smirnov para dos muestras independientes; para lo cual se utilizaron los programas. O. estadísticos para lo que se utilizaron los programas estadísticos SPSS Statistics 17.0. BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI EN. CI. AS. BI. para Windows, G-Stat 2.0 y Microsoft Office Excel 2016.. 15. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(29) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. III.. RESULTADOS. AS. En la Fig. 1 Se presentan los resultados de los diámetros promedios de los halos de inhibición del crecimiento de S. aureus a concentraciones de 20, 40, 60, 80, y 100%. IC. del aceite de C. limon “limón” inhibitorio lo tiene la concentración de 100%”. LO. G. observándose que el mayor efecto inhibitorio lo tiene la concentración de 100% que presenta un halo de inhibición de 26 mm. También se observa que existe. BI. O. diferencia significativa entre las concentraciones estudiadas y que el efecto. AS. inhibitorio aumenta a mayor concentración del aceite esencial C. limon. En la Fig. 2 Se presentan los resultados de los diámetros promedios de los halos de. CI. inhibición del crecimiento de E. coli a concentraciones de 20, 40, 60, 80, y 100%. CI EN. del aceite de C. limon “limón” inhibitorio lo tiene la concentración de 100%” observándose que el mayor efecto inhibitorio lo tiene la concentración de 100%. DE. que presenta un halo de inhibición de 20 mm. También se observa que existe diferencia significativa entre las concentraciones estudiadas y que el efecto. CA. inhibitorio aumenta a mayor concentración del aceite esencial C. limon.. TE. En la Fig. 03. Se presentan los resultados de los diámetros promedios de los halos. IO. de inhibición del crecimiento de E. coli y S. aureus, a las concentraciones de 20,. BL. 40, 60, 80, y 100% del aceite esencial C. limon . Se observa que es mayor la. BI. inhibición del crecimiento S. aureus y menor en E. coli. 16. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(30) TE CA. DE. CI. EN. CI AS. BI. O. LO. G. IC AS. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. O. Fig. 1 Halos de inhibición crecimiento (mm) de Sthaphylooccus aureus por la acción de las. BI. BL I. concentraciones 20, 40, 60, 80 y 100% de aceite de Citrus limón y del grupo control “vancomicina”(p>0,05). 17. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(31) BL I. O. TE CA. DE. CI. EN. CI AS. BI. O. LO. G. IC AS. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Fig. 2 Halos de inhibición de crecimiento (mm) de Escherichia coli por la acción de las concentraciones (20, 40, 60, 80. BI. y 100%) de aceite de Citrus limón y el grupo control “Gentamicina” (p<0.05).. 18. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(32) TE CA. DE. CI. EN. CI AS. BI. O. LO. G. IC AS. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. BL I. O. Fig. 3 Comparación de promedios de los halos de inhibición (mm) de Staphylococcus aureus y de Escherichia coli. BI. a concentraciones de 20, 40, 60, 80 y 100% de aceite de Citrus limón (p>0,05). 19. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(33) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. IV.. DISCUSIÓN. AS. Muchos estudios se han realizado con los extractos y aceites esenciales obtenidos de. IC. diferentes plantas clasificadas como medicinales o como especias; la intención ha sido. G. buscar compuestos que inhiban el crecimiento ya sea de bacterias, hongos, virus y. LO. parásitos en alimentos, en aguas residuales o también para ser utilizados como. O. medicamentos1. En aquellos extractos y aceites esenciales que han presentado mayor. BI. capacidad inhibitoria se han encontrado mayormente compuestos tales como el timol,. CI. AS. el carvacrol, el linalool, el aldehído cinámico,terpenos, la alicina y el eugenol 47.. CI EN. Ardila y Col indica que dichos componentes por a su acción lipofílica tienen la capacidad de atravesar la membrana celular, romper polisacáridos, ácidos grasos y lípidos, provocando su permeabilización, la cual produce pérdida de iones, colapso. DE. de la bomba de protones y disminución del ATP, conduciendo a la muerte celular; también se ha encontrado que a nivel citoplasmático pueden actuar sobre lípidos y. TE. CA. proteínas coagulando dichas moléculas48.. IO. En los resultados obtenidos S. aureus y E. coli son sensibles al aceite de C. limon,. BL. formando halos de inhibición promedio de diámetros entre 17y 26 mm y de 7 y 20. BI. mm respectivamente.. En la Fig. 1 Se observa que S. aureus es sensible frente a las concentraciones de 20 y 40%, acción del aceite de C. limón, con formaciones de halos de inhibición del. 20. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(34) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. crecimiento de 17 y 20 mm (Anexo 3) respectivamente, pero estos halos son menores. AS. si los comparamos con el halo de inhibición del crecimiento formado por el antibiótico Vancomicina (control) con 23 mm, indicando que estas concentraciones. IC. no son eficaces. Para poder determinar si existen diferencias significativa entre los. LO. G. promedios de las concentraciones se realizó la prueba de ANOVA(ver Anexo 7), obteniendo como resultado que no existe una diferencia significativa entre los. BI. O. promedios de las concentraciones realizándose posteriormente una prueba post ANOVA para determinar la máxima concentración que inhibe el crecimiento de S.. AS. aureus para lo cual se realizó la prueba de comparaciones múltiples de Kolmogorov-. CI. Smirnov obteniéndose 6 subgrupos de 20%, 40%, 60%, 80% , 100% y Vancomicina. CI EN. (control) existiendo p>0.05, lo que demuestra que no existe diferencia significativa. DE. entre las diferentes concentraciones y la vancomicina.. Se observa también que los halos de inhibición formados a las concentración de 60. CA. y 80% del aceite respecto con formaciones de halos de inhibición del crecimiento de. TE. 21 y 23 mm (Anexo 3) respectivamente, pero estos halos son menores para 60%s e igual para 80% ,si los comparamos con el halo de inhibición del crecimiento formado. IO. por el antibiótico Vancomicina (control) con 23 mm, existiendo p>0.05, lo que. BL. demuestra que no existe diferencia significativa entre las diferentes concentraciones. BI. y la vancomicina. ; Mientras que el halo formado a la concentración del 100% de aceite supera al halo formado por el antibiótico Vancomicina, presentando un p<0.05, lo cual indica que el halo de inhibición formado por el aceite al 100% es. 21. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(35) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AS. significativamente mayor al formado por el control positivo (vancomicina).. Estos resultados nos permiten asegurar que S. aureus es significativamente más. IC. sensible al 100% de aceite de C. limon que al antibiótico utilizado, determinando. LO. G. que mientras mayor sea la concentración del aceite, S. aureus presentará una mayor. BI. O. sensibilidad.. En la Fig. 2 Se muestra que el mayor halo de inhibición de E. coli es de 7 mm y el. AS. menor de 20 mm a las concentraciones de aceite del 20% y 100% respectivamente;. CI. sin embargo, E. coli presentó un halo de inhibición de 24,00 mm frente a. CI EN. Gentamicina, el cual es mucho mayor que el formado frente al 100 % de aceite, existiendo un p<0,05, lo cual indica que E. coli es menos sensible al aceite de C.. DE. limon que al antibiótico (Gentamicina).. CA. En la Fig. 3 se presentan la comparación de los promedios de los halos de inhibición. TE. de cada concentración de aceite presentado en la Fig. 1 y Fig. 2, observándose que en todas sus concentraciones S. aureus presenta mayor inhibición en comparación. IO. con el crecimiento presentada por E. coli; siendo la concentración de 100 % la que. BI. BL. tiene mejor efecto sobre ambas bacterias.. La acción antibacteriana de los aceites esenciales se debe a su composición. El aceite esencial de C. limon tiene un alto contenido de limoneno, este terpeno actúa. 22. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(36) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. acumulándose en la membrana plasmática microbiana y por lo tanto causar una. AS. pérdida de la integridad de la membrana y disipación de la fuerza motriz 49. La composición del esencial de C. citratus tiene un alto contenido de citral, este. IC. terpenoide actúa en las membranas de las células bacterianas haciéndolas. LO. G. permeables. En bacterias Gram negativas desintegran la membrana externa, liberando lipopolisacáridos e incrementa la permeabilidad de la membrana. BI. O. citoplasmática al ATP. En bacterias Gram positivas, interactúa con la membrana celular bacteriana donde se disuelve en la bicapa de fosfolípidos y se asume para. AS. alinear entre la cadena de ácidos grasos. Esta distorsión de la estructura física haría. CI. provocar la expansión y desestabilización de la membrana, el aumento de la fluidez. CI EN. de la membrana, que a su vez aumenta la permeabilidad50.. a. DE. En los resultados respecto al efecto inhibitorio del aceite esencial de C. limón. diferentes concentraciones, se encontró que a mayor concentración hubo mayor. CA. inhibición, demostrándose efecto en S. aureus como E. coli; sin embargo se considera. TE. que puede haber una zona máxima de inhibición a dosis bajas de un determinado producto, así como una menor inhibición a dosis más elevadas. Este fenómeno es. IO. apreciado particularmente en la determinación de inhibición del crecimiento. BL. bacteriano, empleado por el método de difusión; en el presente estudio, la relación. BI. directa entre la concentración y el efecto del aceite C. limon se fundamenta en el hecho de que la suspensión de microorganismos se expuso directamente con el aceite C. limon51.. 23. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(37) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. El efecto del aceite C. limon fue mayor en S. aureus que en E. coli, esta diferencia. AS. se debería a la diferencias de estructura de sus membranas ya que las Gram negativas (E. coli ), poseen una pared celular más compleja compuesta por dos capas situadas. IC. por fuera de la membrana citoplasmática, la primera y más cercana a la membrana. LO. G. es similar (más delgada) a la de las bacterias Gram positivas, está constituida por péptidoglicanos, la segunda denominada membrana externa está constituida por. BI. O. fosfolípidos con ácidos grasos saturados y entre las dos capas se halla un espacio periplasmico rico en enzimas, esta estructura les confiere un mayor grado de. presencia. de. b-lactamasas,. modificación. CI. como:. AS. resistencia a los agentes antimicrobianos52, además poseen mecanismos de defensa enzimática. del. agente. CI EN. antimicrobiano, cambios en la permeabilidad de la membrana externa debida a la presencia de bombas de expulsión, etc, que generan dificultades para encontrar. DE. sustancias que sean efectivas contra ellas53.. CA. La actividad antibacteriana demostrada en este estudio coincide con los resultados. TE. obtenidos por Martínez et al. (2003) quienes observaron actividad antibacteriana del aceite esencial de Citrus reticulata variedad Dancy contra S. aureus, E. faecalis, E.. IO. coli, Klebsiella sp. y Proteus mirabilis y menor actividad frente a P. aeruginosa54;. BL. así como los hallazgos de Sartoratto et al. (2004) quienes determinan que las. BI. bacterias Gran negativas: E.. coli, P. aeruginosa, Salmonella tiphymurium,. Salmonella cholerae suis y Vibrio cholerae y las bacterias Gram positivas: S. aureus. y Bacillus cereus, mostraron diferentes grados de sensibilidad, concluyendo en que. 24. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(38) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. el aceite de Citrus reticulata posee alta actividad microbiana contra todas las. AS. bacterias Gram positivas evaluadas que contra las Gram negativas53,55.. IC. De acuerdo a los resultados obtenidos y basándose en trabajos anteriores, se puede. LO. G. afirmar que S. aureus presento mayor inhibición del crecimiento frente al aceite C. limon que E. coli y también a las estructura y constitución de las membranas.. BI. O. Quedando demostrado que la familia del genero Citrus presenta potencial en la medicina por su efecto antimicrobiano en bacterias de interés clínico y alimentario,. CI. BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI EN. en la industria alimentaria. 56.. AS. en especial C. limon que presenta diversos usos no solo para la medicina sino también. 25. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(39) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. CONCLUSIONES . Escherichia coli y Staphylococcus aureus presentan inhibición a las diferentes. G. Todas las concentraciones del aceite esencial Citrus limon. Tienen efecto. LO. . IC. concentraciones de 20, 40, 60, 80 y 100% de aceite Citrus limon.. AS. V.. El aceite esencial de Citrus limon es significativamente más efectivo contra. BI. . O. inhibidor del crecimiento sobre y Staphylococcus aureus.. BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI EN. CI. AS. Staphylococcus aureus que contra Escherichia coli.. 26. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(40) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. VI.. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS. AS. 1. Si W, Ni X, Gong J, Tsao R, Han Y, Chambers JR, et al. Antimicrobial activity of. IC. essential oils and structurally related synthetic food additives towards Clostridium. G. perfringens. J Appl Microbiol 2009;106(1):213-220.. LO. 2. Henao J, Muñoz L, Rios E, Padilla L, Giraldo G. Evaluation of antimicrobial. O. activity of Lippia origanoides Plant extracts cultivated in the department of. BI. Quindio. Revista de investigacion de la Universidad de Quindio.2009;19:159-164. AS. 3. Pérez E, Isaza G, Acosta M. Actividad antimicrobiana de Phenax rugosus y. CI. Tabeburia chrysantha. BIOSALUD 2007; 6: 59 – 68.. CI EN. 4. Ardila I, Vargas F, Pérez E, Mejía F. Ensayo preliminar de la actividad antimicrobiana de Allium sativum, Coriandrum sativum, Eugenia caryophyllata, Origanum vulgare, Rosmarinus officinalis y Thymus vulgaris frente a Clostridium. DE. perfringes. BIOSALUD 2009; 8: 47 – 45. 5. Lambert J, Skandamis P, Coote J. Astudy of the mínimum inhibitory concentration. CA. and mode of action of oregano essential oil, thymol and carvacrol. Journal of. TE. applied Microbiology. 2001;91(3):453-462.. IO. 6. Yangui T, Bouaziz M, Dhouib A, Sayadi S. Potential use of Tunisian Pituranthos. BL. chloranthus essential oils as a natural disinfectant. Lett Appl Microbiol. BI. 2009;48(1):112-117.. 7. Chorianopoulos G, Giaouris D, Skandamis N, Haroutounian A, Nychas J. Desinfectant test against monoculture and mixed-culture biofilms composed of technological, spoilage and pathogenic bacteria: bactericidal effect of essential oil. 27. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

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