Susceptibilidad in vitro de Escherichia coli y Klebsiella pneumoniae al extracto acuoso de Vaccinium corymbomsum (Arándano azul)

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(1)Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE MEDICINA. IC. IN. A. -U. NT. ESCUELA PROFESIONAL DE MEDICINA. M. ED. TESIS. DE. Susceptibilidad in vitro de Escherichia coli y Klebsiella. AD. pneumoniae al extracto acuoso de Vaccinium. LT. corymbomsum (Arándano azul). FA. CU. PARA OPTAR EL TITULO PROFESIONAL DE: MEDICO CIRUJANO. Autor: Mattos Campos, Fernando Nicolas Gesu. Asesora: Ayala Ravelo, María Soledad. TRUJILO, PERU 2018 1 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(2) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. NT. DEDICATORIA. -U. A Dios, por haberme dado la fuerza necesaria durante estos 6 años de. A. carrera para seguir adelante y no rendirme.. IN. A mis padres, Fernando e Inés, por todo. IC. el apoyo brindado desde el inicio de mis. ED. estudios, por enseñarme lo bueno y lo malo e inculcarme los pilares necesarios. M. para seguir adelante.. DE. A mis hermanos (Sandra y Diego) y tíos (Roberto y Segundo), por haberme. AD. apoyado incondicionalmente y estar. presentes en los momentos que más los. FA. CU. LT. necesitaba.. A todas esas grandes personas que he conocido en mi preciada facultad y que confiaron en mí y me ayudaron en los buenos y malo momentos.. 2 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(3) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. AGRADECIMIENTO. Un agradecimiento especial para mi asesora, Dra. María Soledad Ayala Ravelo, por. NT. su paciencia y dedicación y por el apoyo brindado en el proceso y elaboración de este. -U. trabajo de investigación.. A la Dra.Elva Mejía Delgado por a verme apoyado y aconsejado en la realización de. IN. A. este trabajo de investigación.. IC. A todos los docentes de mi querida facultad que brindaron los conocimientos. ED. necesarios para servir a la comunidad de la mejor manera. Al personal técnico del Laboratorio de Microbiología de la Facultad de Medicina de. M. la UNT, la Sra. Tania Mendoza Mariños y al Sr. Javier Solar Anticona por el apoyo. DE. brindado en la ejecución de la presente investigación. A la Dra. Marilú Soto Vásquez de la Facultad de Farmacia y Bioquímica de la UNT,. AD. por su apoyo en la elaboración del presente trabajo en la parte de Farmacognosia-. FA. CU. LT. Farmacobotánica.. 3 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(4) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. ÍNDICE. Pág. RESUMEN ............................................................................................................. 5. -U. NT. ABSTRACT ................................................................................................................ 6. INTRODUCCIÓN ................................................................................... 7. II.. MATERIALES Y MÉTODO ............................................................. 11. III.. RESULTADOS ................................................................................... 24. IV.. DISCUSIÓN ........................................................................................... 27. V.. CONCLUSIÓNES ................................................................................. 30. VI.. RECOMENDACIONES ..................................................................... 31. FA. CU. LT. AD. DE. M. ED. IC. IN. A. I.. VII.. LIMITACIONES .................................................................................. 32. VIII.. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS ........................................... 33. IX.. ANEXOS ........................................................................................... 39. 4 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(5) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. RESUMEN Objetivo: Evaluar la susceptibilidad in vitro de Escherichia coli y Klebsiella pneumoniae al extracto acuoso Vaccinium corymbomsum (Arandano azul). Material y metodos: Estudio prospectivo, transversal, experimental. La población. NT. estuvo conformada por placas inoculadas con cepas de Escherichia coli ATCC 25922 y Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, y se aplicó el extracto acuoso a. -U. concentraciones de 5%, 10%, 20% y 25%; %; se utilizó como control negativo el. A. cultivo de ambas bacterias sin antibacterianos y como control positivo, los cultivos. IN. bacterianos con amikacina Resultados: El extracto acuoso tuvo efecto inhibitorio. IC. frente de Escherichia coli ATCC 25922 al utilizar las diferentes concentraciones,. ED. teniendo como CBM al 10%. Sin embargo, para Klebsiella pneumoniae ATCC. M. 700603 tuvo efecto inhibitorio al utilizar las diferentes concentraciones, teniendo. DE. como CBM al 20%. Conclusión: La presente investigación demuestra que el extracto acuoso Vaccinium corymbomsum (Arándano azul) presenta susceptibilidad. LT. 700603.. AD. in vitro sobre Escherichia coli ATCC 25922 y Klebsiella pneumoniae ATCC. CU. PALABRAS CLAVE: Susceptibilidad in vitro, extracto acuoso de Vaccinium corymbomsum, Escherichia coli y Klebsiella pneumonia, Concentración bactericida. FA. minima(CBM).. 5 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(6) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. ABSTRACT Objective: To evaluate in vitro susceptibility of Escherichia coli and Klebsiella pneumoniae to the aqueous extract Vaccinium corymbomsum (blueberry). Material. NT. and methods: Prospective, cross-sectional, experimental study. The population consisted of Petri dishes inoculated with Escherichia coli ATCC 25922 and Klebsiella. -U. pneumoniae ATCC 700603 strains, the aqueous extract was applied at concentrations. A. of 5%, 10%, 20% and 25%; it was used as negative control the cultivation of both. IN. bacteria without antibacterial and as positive control, the bacterial cultures with. IC. amikacin. Results: The aqueous extract had an inhibitory effect against Escherichia. ED. coli ATCC 25922 with 10% of CBM. On the other hand, Klebsiella pneumoniae ATCC. M. 700603 had an inhibitory effect when used different concentrations, showing 20%. DE. CBM. Conclusion: The present investigation demonstrates that the aqueous extract of Vaccinium corymbomsum (blueberry) presents in vitro susceptibility on Escherichia. AD. coli ATCC 25922 and Klebsiella pneumoniae ATCC 700603.. LT. KEY WORDS: In vitro susceptibility, Vaccinium corymbomsum aqueous extract,. CU. Escherichia coli and Klebsiella pneumoniae, Minimum Bactericidal Concentration. FA. (MBC). 6 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(7) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. I. INTRODUCCIÓN La infección del tracto urinario (ITU) se define clásicamente como la invasión, colonización y proliferación bacteriana del tracto urinario ya que, éste es. NT. habitualmente estéril y puede comprometer desde la vejiga hasta el parénquima renal, produciendo alteraciones morfológicas o funcionales y una respuesta inmunológica no. -U. siempre evidenciable; asociada a sintomatología clínica variable.1,2,3. A. Las ITU son consideradas una de las infecciones bacterianas más frecuentes,. IN. representando el 10% de las consultas de atención primaria. Se estima que globalmente. IC. ocurren al menos 150 millones de casos por año donde la frecuencia en mujeres es 30. ED. veces mayor que en hombres, sin embargo, conforme el varón envejece la frecuencia. M. tiende a igualarse.4,5,6. DE. Desde el punto de vista clínico, las ITU se clasifican como simples o complicadas. Las simples afectan a personas sanas que no tienen anomalías estructurales o. AD. neurológicas del tracto urinario; estas infecciones se diferencian en infección urinaria inferior (cistitis) y superior (pielonefritis)7,8. Varios factores de riesgo están asociados. LT. como el sexo femenino, ITU previa, actividad sexual, infección vaginal, diabetes,. CU. obesidad y susceptibilidad genética9. Las ITU complicadas se definen como infección. FA. urinaria asociada a factores que comprometen la defensa del tracto urinario o del huésped, incluida la obstrucción urinaria, retención urinaria causada por enfermedad neurológica, inmunosupresión, insuficiencia renal, embarazo y la presencia de cuerpos extraños como cálculos, catéteres permanentes u otros dispositivos de drenaje10. Las ITU son causadas por bacterias Gram negativas, Gram positivas y hongos. El agente causal más común para las ITU es Escherichia coli uropatógena (UPEC) 7 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(8) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. seguido por K. pneumoniae, E. saprophyticus, E. faecalis, Streptococcus del grupo B, P. mirabilis, P. aeruginosa, E. aureus y Candida spp.11 El tratamiento es a base de fármacos, estos son usados dependiendo el grupo etario. NT. y/o comorbilidades que pueda presentar el paciente. En la mayoría de los casos se usa aminoglucósidos, cefalosporinas de tercera generación, quinolonas y en casos. -U. especiales imipenen, meropenen. Usados debido a su amplio espectro sobre los Gram. A. negativos12. El uso repetitivo y el mal manejo de antibióticos genera resistencia de. IN. los patógenos humanos a los medicamentos, el alto costo y el aumento de los efectos. IC. secundarios tóxicos de estas drogas sintéticas ha hecho necesario la búsqueda de. ED. nuevas sustancias antimicrobianas de otras fuentes, incluyendo plantas medicinales.13. M. A lo largo de los años se han usado diversos tipos de medidas alternativas para el. DE. tratamiento de las ITU, una de estas es el arándano. Se sabe que el arándano es una fuente particularmente rica de fenoles, que se han asociado in vitro con propiedades antivirales,. antimutagénicas,. anticancerígenas,. antitumorales,. AD. antibacterianas,. antiangiogénicas, antiinflamatorias y antioxidantes14.. LT. Estructuralmente el arándano está compuesto de proantocianidinas, antocianidinas,. CU. ácidos fenólicos, terpenos, flavonoides. En un primer momento se pensaba que el. FA. agente activo era ácido benzoico y que acidificaba la orina y combatía a las bacterias, luego en 1984 Sabota realizó un estudio refiriendo que los beneficios del arándano se relacionaba por presentar la capacidad de inhibición a la adhesión bacteriana principalmente sobre Escherichia coli 15, 16. En la actualidad se sabe que Vaccinium macrocarpon (Arándano americano) presenta proantocianidinas tipo A (PAC), que es la estructura responsable de las 8 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(9) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. actividades biológicas que interrumpen la colonización inhibiendo la adherencia de las bacterias a las células epiteliales del tracto urinario17,18. Sobre. Vaccinium. corymbomsum (Arándano azul), se sabe que presenta similar composición química,. NT. aun cuando los metabolitos están en menor cantidad, se sugiere que podría tener también efecto preventivo contra la ITU19.. -U. Sun J y cols. en el 2015 demostraron que mediante su actividad fenólica y. A. componentes oligosacáridos, el Arándano americano, fue capaz de reducir la. IN. formación de la biopelícula de E. coli en la adherencia del urotelio; encontrando una. IC. inhibición de hasta un 60% en el crecimiento bacteriano considerando que el Arándano. ED. americano desempeña un papel efectivo en la prevención de una ITU20.. M. Howell y cols. en el 2010 en una investigación consideró que la preparación de. DE. arándano en polvo puede ofrecer cierta protección contra la adhesión bacteriana y la virulencia en el tracto urinario sobre la E. coli después de 24 horas de ser consumidos;. AD. debido a su alta cantidad de proantocianidinas tipo A (PAC)21. Jean Lavigne y cols. en el 2008; en un estudio doble ciego, aleatorizado cruzado. LT. evaluaron la eficacia antibacteriana a través del consumo de arándano en cápsulas. CU. teniendo como resultado la disminución de Escherichia coli y que es dosis dependiente. FA. a la cantidad de arándano22. Ante la escasa información sobre la actividad antibacteriana del Arándano azul; en. este trabajo se pretende determinar la susceptibilidad in vitro de Escherichia coli y Klebsiella pneumoniae al extracto acuoso de Vaccinium corymbomsum (Arándano azul).. 9 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(10) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. 1.1 Problema: ¿Son susceptibles las cepas de Escherichia coli y Klebsiella pneumoniae in vitro al extracto acuoso de Vaccinium corymbomsum (Arándano azul)?. NT. 1.2 Hipótesis: Sí, son susceptibles las cepas de Escherichia coli y Klebsiella pneumoniae in vitro. -U. al extracto acuoso de Vaccinium corymbomsum (Arándano azul).. A. 1.3 Objetivos:. IN. General:. IC. Evaluar la susceptibilidad de las cepas de Escherichia coli y Klebsiella. ED. pneumoniae in vitro a las concentraciones de 5%, 10%, 20% y 25% del extracto. M. acuoso de Vaccinium corymbomsum (Arándano azul).. . DE. Específicos:. Determinar la susceptibilidad de la cepa de Escherichia coli in vitro a las. AD. concentraciones de 5%, 10%, 20% y 25% del extracto acuoso de Vaccinium. . LT. corymbomsum (Arándano azul). Determinar la susceptibilidad de la cepa de Klebsiella pneumoniae in vitro a las. CU. concentraciones de 5%, 10%, 20% y 25% del extracto acuoso de Vaccinium. FA. corymbomsum (Arándano azul).. 10 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(11) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. II.. MATERIAL Y MÉTODOS. La presente investigación de tipo aplicada, prospectiva, transversal y experimental, se llevó a cabo durante los meses de abril a octubre del 2018, en la. NT. Facultad de Medicina de la Universidad Nacional de Trujillo.. 2.1.1. POBLACION Y MUESTRA. A. A) CARACTERISTICAS GENERALES.. -U. 2.1. MATERIAL DE ESTUDIO. y Klebsiella. IN. Se trabajó con cepas de Escherichia coli ATCC 25922. IC. pneumoniae ATCC 700603 expuestas al extracto acuoso de Vaccinium. ED. corymbomsum (Arándano azul).. M. B) CRITERIOS DE SELECCIÓN DE MUESTRA  Criterios de inclusión. DE.  Frutos de Vaccinium corymbomsum (Arándano azul) que reúna. AD. tamaño y aspecto adecuado.  Cepas jóvenes de 18 a 24 horas de Escherichia coli ATCC 25922.. CU. LT.  Cepas jóvenes de 18 a 24 horas de Klebsiella pneumoniae ATCC 700603.. FA.  Criterio de exclusión  Cultivos contaminados durante el experimento..  Criterios de eliminación  Frutos de Vaccinium corymbomsum (Arándano azul) maltratados, rotos y con diámetro menor de 12 mm.. 11 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(12) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT.  Cepas que no lleguen a 18 horas de incubación o que hayan pasado el tiempo de incubación de 24 horas.  Cultivos contaminados durante el experimento.. NT. 2.1.2. DISEÑO ESTADÍSTICO DE MUESTREO. -U. Unidad de análisis. La unidad de análisis lo constituyó cada repetición a las. A. concentraciones 5%, 10%, 20% y 25% al extracto acuoso de Vaccinium. IN. corymbomsum (Arándano azul) en cada tubo de ensayo con el patrón. IC. de turbidez de la escala de Mc Farland con las cepas de Escherichia coli. M. Diseño de muestreo. ED. ATCC 25922 y Klebsiella pneumoniae ATCC 700603.. DE. Se usó el patrón de turbidez al 0,5 de la escala Mc Farland, teniendo una densidad de bacterias aproximada correspondiente a 1,5x108 𝑈𝐹𝐶/. AD. 𝑚𝑙.. LT. Tamaño muestral. FA. CU. Para determinación de la muestra se usó la siguiente fórmula: 2. 𝑛=. (𝑧𝛼 + 𝑍𝛽 ) 2𝑆 2 2. (𝑋1 − 𝑋2)2. Siendo: n: Número de repeticiones a efectuar en cada investigación Z(α/2): 1.96 para α=0.05. 12 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(13) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. Zβ: 0.84 para β=0.20 S: 0.8 (X1-X2) valor asumido por no haber estudios previos. Lo cual dio como resultado 10, que es el número mínimo de. NT. observaciones para cada concentración.. -U. Se realizó 10 repeticiones en cada grupo constituyendo un total de 120. IN.  Para Escherichia coli ATCC 25922:. A. repeticiones.. IC. Grupo 1: 10 repeticiones utilizando la concentración al 5% de extracto. ED. acuoso de Vaccinium corymbomsum (Arándano azul).. M. Grupo 2: 10 repeticiones utilizando la concentración al 10% de. DE. extracto acuoso de Vaccinium corymbomsum (Arándano azul).. AD. Grupo 3: 10 repeticiones utilizando la concentración al 20% de. LT. extracto acuoso de Vaccinium corymbomsum (Arándano azul). Grupo 4: 10 repeticiones utilizando la concentración al 25% de. FA. CU. extracto acuoso de Vaccinium corymbomsum (Arándano azul). Grupo 5: 10 repeticiones utilizando agua destilada estéril (Control negativo). Grupo 6: 10 repeticiones utilizando amikacina 500mg/2ml. (Control positivo).. 13 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(14) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT.  Para Klebsiella pneumoniae ATCC 700603: Grupo 1: 10 repeticiones utilizando la concentración al 5% de extracto acuoso de Vaccinium corymbomsum (Arándano azul).. NT. Grupo 2: 10 repeticiones utilizando la concentración al 10% de. -U. extracto acuoso de Vaccinium corymbomsum (Arándano azul).. Grupo 3: 10 repeticiones utilizando la concentración al 20% de. IN. A. extracto acuoso de Vaccinium corymbomsum (Arándano azul).. IC. Grupo 4: 10 repeticiones utilizando la concentración al 25% de. ED. extracto acuoso de Vaccinium corymbomsum (Arándano azul).. DE. negativo).. M. Grupo 5: 10 repeticiones utilizando agua destilada estéril (Control. Grupo 6: 10 repeticiones utilizando amikacina 500mg/2ml (Control. AD. positivo).. LT. 2.2. METODOS Y TECNICAS. CU. Para la realización del presente estudio se obtuvo el extracto acuoso de Vaccinium corymbomsum (arándano azul), las cepas bacterianas y se preparó el. FA. inóculo. La susceptibilidad de las cepas se demostró mediante la determinación de la concentración inhibitoria mínima (CIM) y la concentración bactericida mínima (CBM).. 14 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(15) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. 2.2.1 OBTENSIÓN. DEL. EXTRACTO. ACUOSO. DE. Vaccinium. corymbomsum (Arándano azul) Recolección e identificación taxonómica de Vaccinium corymbomsum. NT. El fruto completo del Arándano azul (6Kg) se recolectó en el distrito de San José, provincia de Virú, departamento de La Libertad, ubicada a 100. -U. msnm. Un ejemplar, se llevó al Herbarium Truxillense de la Universidad. A. Nacional de Trujillo para su identificación y posterior verificación. IC. Preparación de la muestra vegetal. IN. taxonómica según el sistema filogenético de la especie. (ANEXO N°12). ED. Seleccionado el fruto de Vaccinium corymbomsum fue transportado a la. M. Facultad de Farmacia y Bioquímica en el Laboratorio de Farmacognosia de. DE. la Universidad Nacional de Trujillo donde se verificó el buen estado del fruto, considerando color, olor, textura. Se lavaron los frutos con agua. AD. destilada, seguido de una desinfección utilizando hipoclorito de sodio al 0,5% a una concentración de 200 ppm. Posteriormente, se realizó el. LT. enjuague con agua destilada estéril para retirar los residuos de hipoclorito.. CU. (ANEXO N°12). FA. Preparación del extracto acuoso Vaccinium corymbomsum. Los frutos se licuaron durante cinco minutos con alcohol etanol estéril al 96% en una proporción de material vegetal/solvente (1:3), luego se colocaron en un frasco de vidrio oscuro de capacidad de 3 litros ocupando las ¾ partes del recipiente para luego ser macerados por siete días a temperatura ambiente en la oscuridad. Transcurrido el tiempo, se filtró el 15. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(16) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. macerado en gasa estéril y luego al vacío con papel de filtro Whatman N°1. El extracto etanólico se concentró en un rotavapor y luego se llevó a secar a la estufa a 40 ºC. A partir del extracto seco se prepararon las. NT. concentraciones al 5% (50mg/ml), 10% (100mg/ml), 20% (200mg/ml) y 25% (250mg/ml), disueltas en agua destilada estéril. Finalmente, los. -U. extractos acuosos se guardaron en frascos de vidrio ámbar previamente. A. esterilizados y en refrigeración (4-8°C) hasta su posterior utilización23,24. IN. (ANEXO N°12). IC. 2.2.2 OBTENCION DE LAS CEPAS BACTERIANAS. ED. Se trabajó con cepas de Escherichia coli ATCC 25922 y Klebsiella. M. pneumoniae ATCC 700603, obtenidas de GENLAB del Perú donde. DE. certifican su origen e identificación. (ANEXO N°12) 2.2.3 PREPARACIÓN DEL INÓCULO.. AD. Las cepas de Escherichia coli ATCC 25922 y Klebsiella pneumoniae ATCC 700603 se reactivaron en tubos de ensayo conteniendo el medio. LT. Agar Soya Tripticasa.. CU. Se incubó a 37°C con el fin de obtener colonias jóvenes. Luego de 18 a 24. FA. horas se suspendieron en un tubo con 5ml solución salina estéril (ClNa 0,85%). Se mezcló y se ajustó con la turbidez equivalente al tubo 0,5 de la escala de Mc Farland hasta alcanzar el inóculo 1,5x 108 bacterias/ml. El inóculo se homogenizó y luego se realizó el sembrado en tubos de ensayo conteniendo las diferentes concentraciones del extracto acuoso de Vaccinium corymbosum. 16. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(17) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. 2.2.4 DETERMINACION DE LA CONCENTRACION INHIBITORIA MINIMA (CIM). Se prepararon 12 tubos con las diferentes concentraciones (5%, 10%, 20%. NT. y 25%) del extracto acuoso de Vaccinium corymbomsum, 6 para E. coli ATCC 25922 y 6 para K. pneumoniae ATCC 700603; añadiéndose 1,6 ml. -U. a cada uno de los tubos, de los cuales 2 tubos por cepa fueron para los. A. controles positivo y negativo. Luego se adicionó el inóculo de 0,4 ml del. IN. cultivo de Escherichia coli ATCC 25922 y Klebsiella pneumoniae ATCC. IC. 700603 a cada tubo. Se incubó a 37°C por 24 horas. El efecto del extracto. ED. acuoso se evaluó por turbidez, pero no se pudo determinar debido al color. M. marrón del extracto acuoso. A partir de ello se determinó sembrar cada tubo. DE. en agar Mueller Hinton.. 2.2.5 DETERMINACION DE LA CONCENTRACION BACTERICIDA. AD. MINIMA (CBM).. Para determinar CBM se cultivaron los tubos de cada cepa. Se identificó el. LT. recuento de bacterias viables sembrando 0,1 ml de solución de cada uno de. CU. los tubos en 10 placas para agar Mueller Hinton por cada concentración.. FA. Dichas placas se colocaron en la estufa por 24 h a 37°C y luego se observó el crecimiento del microorganismo mediante el conteo de Unidades Formadoras de Colonias (UFC), considerándose como CBM a la menor concentración en la cual no se observan UFC.. 17 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(18) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. UFC= N/4 x A x D Donde: N= número de colonias. NT. A= Área D= Dilución. -U. Todo el procedimiento se llevó a cabo dentro del diámetro de 10 cm. A. alrededor de la llama de un mechero bunsen y fueron 10 placas Petri por. IN. concentración.. IC. 2.2.6 INSTRUMENTOS DE RECOLECCIÓN DE DATOS. ED. Se llenaron los datos obtenidos en las fichas elaboradas para tal fin (Anexo. M. Nº1 y2). La Tabla contiene:. DE. 1. Identificación de la Concentración Inhibitoria Mínima. FA. CU. LT. AD. 2. Identificación de la Concentración Bactericida Mínima. 18 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(19) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. 2.3. DISEÑO DE LA INVESTIGACION Determinación de la Concentración Inhibitoria Mínima (CIM) y Concentración Bactericida Mínima (CBM). GRUPO 1 GRUPO 2 GRUPO 3 GRUPO 4 GRUPO 5 GRUPO 6. IN. A. Añadir a cada tubo. 0.4 ml de inóculo bacteriano de Escherichia coli ATCC 25922. Incubar por 24 h a 370 C. DE. M. ED. IC. Cada tubo constara 1,6ml con extracto acuoso de acuerdo a cada GRUPO. -U. Escherichia coli ATCC 25922. NT. Extracto acuoso de Vaccinium corymbomsum (Arándano azul) sobre. Primer tubo de ensayo que no presenta turbidez a simple vista corresponde a la CIM. *Al Grupo 5 se le agregara 1.6ml de agua destilada estéril. *Al Grupo 6 se le agregara 1,6ml de amikacina 500mg/2ml. FA. CU. LT. AD. Identificar la turbidez comparando con un tubo control negativo. Para identificar la CBM se cultivará a partir del tubo de la identificación de la CIM.. 19 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(20) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. Extracto acuoso de Vaccinium corymbomsum (Arándano azul) sobre cepas de. Cada tubo constara 1,6ml con extracto acuoso de acuerdo a cada GRUPO. GRUPO1 GRUPO2 GRUPO 3 GRUPO 4 GRUPO 5 GRUPO 6. NT. Klebsiella pneumoniae ATCC 700603. 0.4 ml de inóculo bacteriano de Klebsiella pneumoniae ATCC 700603. Incubar por 24 h a 370 C. M. Identificar la turbidez comparando con un tubo control negativo. *Al Grupo 5 se le agregara 1.6ml de Agua destilada estéril *Al Grupo 6 se le agregara 1,6ml de amikacina 500mg/2ml. FA. CU. LT. AD. DE. Primer tubo de ensayo que no presenta turbidez a simple vista corresponde a la CIM. ED. IC. IN. A. -U. Añadir a cada tubo. Para identificar la CBM se cultivará a partir del tubo de la identificación de la CIM.. 20 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(21) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. 2.4. VARIABLES Y ESCALAS DE MEDICION. DIMENSIONES. Extracto acuoso de Vaccinium corymbomsum (Arándano azul) (Variable Independiente). ESCALA DE MEDICIÓN. NATURALEZA. Cualitativa. Nominal. Unidades Formadoras de Colonias (UFC)/ml.. Cualitativa. Ordinal. Patrón de Turbidez. Cuantitativa. Razón. Unidades Formadoras de Colonias (UFC) /ml.. Cualitativa. Ordinal. Patrón de Turbidez. IN. Razón. ED. IC. Cuantitativa. M. Concentración Inhibitoria Mínima Concentración Bactericida Mínima Concentración Inhibitoria Mínima. DEFINICION OPERACIONAL E INDICADOR Administración del extracto acuoso de Vaccinium corymbomsum (Arándano azul) en concentraciones de 5%,10%,20%,25%.. AD. Susceptibilidad in vitro de cepas de Klebsiella pneumoniae ATCC 700603 (Variable dependiente). Concentración Bactericida Mínima. DE. Susceptibilidad in vitro de cepas Escherichia coli ATCC 25922 (Variable dependiente). A. -U. Cantidad de extracto en ml. NT. VARIABLE. LT. 2.5. DEFINICIONES CONCEPTUALES DE VARIABLES25:. CU. a) Extracto acuoso de Vaccinium corymbomsum (Arándano azul): Extracto con olor característico, obtenido a partir del licuado del fruto de. FA. Vaccinium corymbomsum (Arándano azul) con etanol, seguida de la eliminación de dicho solvente por un procedimiento físico para luego ser disuelto en agua destilada estéril.. 21 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(22) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. b) Susceptibilidad in vitro de Escherichia coli ATCC 25922  CONCENTRACION INHBITORIA MINIMA (CIM) Mínima concentración del extracto acuoso de Vaccinium corymbomsum. NT. (Arándano azul) que inhibe el crecimiento visible de cepas de Escherichia coli ATCC 25922 después de 24 horas de incubación a 370 C.. -U.  CONCENTRACION BACTERICIDA MINIMA(CBM). A. Mínima concentración del extracto acuoso de Vaccinium corymbomsum. IN. (Arándano azul) que elimina a más del 99,9% de cepas de Escherichia. IC. coli ATCC 25922 viables después de ser incubados a 37 0 por 24 horas.. ED. c) Susceptibilidad in vitro de Klebsiella pneumoniae ATCC 700603. M.  CONCENTRACION INHBITORIA MINIMA (CIM). DE. Mínima concentración del extracto acuoso de Vaccinium corymbomsum (Arándano azul) que inhibe el crecimiento visible de cepas de Klebsiella. AD. pneumoniae ATCC 700603 después de 24 horas de incubación a 37°C.  CONCENTRACION BACTERICIDA MINIMA(CBM). LT. Mínima concentración del extracto acuoso de Vaccinium corymbomsum. CU. (Arándano azul) que elimina a más del 99,9% de cepas de Klebsiella. FA. pneumoniae ATCC 700603 viables después de ser incubados a 37°C por 24 horas.. 22 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(23) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. 2.6. ANÁLISIS. ESTADÍSTICO. E. INTERPRETACIÓN. DE. LA INFORMACIÓN Los datos fueron organizados en el programa Microsoft Excel 2015, e ingresados. NT. en los programas IBM SPSS Stadistics 25 para aplicar las pruebas estadísticas. Se usó la prueba no paramétrica Kruskal-Wallis para determinar la existencia de. -U. significancia en las muestras analizadas. Esto se realizó por que no cumplen con. A. las pruebas de normalidad y homogeneidad de varianza.. IN. 2.7. ASPECTOS ETICOS. IC. El proyecto fue aprobado por el Comité Permanente de Investigación y él Comité. ED. de Ética de Investigación de la Facultad de Medicina de la Universidad Nacional. M. de Trujillo.. DE. Además, se tomó en cuenta el principio de precaución en conformidad con el Principio 15 de la Declaración de Río sobre el Medio Ambiente y el Desarrollo26.. AD. Asimismo, se tendrá presente el Protocolo de Cartagena sobre Seguridad de la. LT. Biotecnología del Convenio sobre la Diversidad Biológica27, considerando los. FA. CU. riesgos para la salud humana.. 23 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(24) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. III.. RESULTADOS. 120000000. NT. 100000000. -U. UFC/ml. 80000000 60000000. A. 40000000. IN. 20000000. K.pneumoniae ATCC 700603 E.coli ATCC 25922. E.coli ATCC 25922. DE. M. ED. IC. 0. Control 5% Negativo 115000000 42000000. AD. K.pneumoniae ATCC 700603 114000000. 430000. 10%. 20%. 25%. 0. 0. 0. Control Positivo 0. 95000. 0. 0. 0. LT. Grafico 1. Susceptibilidad in vitro de las cepas de Escherichia coli ATCC 25922 y. CU. Klebsiella pneumoniae ATCC 700603. in vitro frente al extracto acuoso de. FA. Vaccinium corymbomsum (Arándano azul). 24 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(25) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. Tabla 1. Susceptibilidad de la cepa de Escherichia coli ATCC 25922 in vitro frente al extracto acuoso de Vaccinium corymbomsum (Arándano azul). 20%. G5. G6. Control Negativo. Control Positivo. 0. 1,15x108. 0. SI. NO. SI. 25%. (250mg/ml). 4,2x107. 0. 0. NO. SI. SI. IN. A. (100mg/ml) (200mg/ml). DE. M. Susceptibilidad Según CBM. (50mg/ml). 10%. G4. IC. Crecimiento de UFC/ml promedio. 5%. G3. ED. Concentración del extracto acuoso. G2. -U. G1. NT. GRUPOS DE TRATAMIENTO. CBM: concentración bactericida mínima.. FA. CU. LT. AD. FUENTE: Datos obtenidos por el investigador, año 2018.. 25 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(26) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. NT. Tabla 2. Susceptibilidad de la cepa de Klebsiella pneumoniae ATCC 700603 in vitro frente al extracto acuoso de Vaccinium corymbomsum (Arándano azul) GRUPOS DE TRATAMIENTO. G5. G6. 20%. Control Negativo. Control Positivo. 0. 1,14x108. 0. SI. NO. SI. 25%. (200mg/ml). 4,3x105. 0,95x105. 0. NO. NO. (250mg/ml). IC. IN. (100mg/ml). SI. DE. M. Susceptibilidad Según CBM. 10%. G4. ED. Crecimiento de UFC/ml promedio. G3. -U. 5% Concentración del extracto (50mg/ml) acuoso. G2. A. G1. AD. CBM: concentración bactericida mínima.. FA. CU. LT. FUENTE: Datos obtenidos por el investigador, año 2018. 26 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(27) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. IV.. DISCUSIÓN. En el presente estudio sobre la evaluación de la susceptibilidad invitro de las cepas de Escherichia coli y Klebsiella pneumoniae , a las concentraciones de 5%,. NT. 10%, 20% y 25% del extracto acuoso de Vaccinium corymbomsum (Arándano azul),. -U. se evidenció una disminución brusca de las UFC/ml en ambas cepas en relación al control negativo (Gráfico 1), este efecto se debería a la presencia de sustancias. IN. IC. fenólicos, terpenos, flavonoides entre otros.14. A. antibacterianas en V.corymbomsum como proantocianidinas, antocianidinas, ácidos. ED. Las concentraciones del extracto acuoso de V. corymbomsum inhibieron el crecimiento de Escherichia coli ATCC 25922 demostrado a través del hallazgo de la. M. Concentración bactericida mínima (CBM) la cual mostró susceptibilidad a partir del. DE. 10% (Tabla 1). En relación a Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, esta fue. AD. susceptible según la CBM a partir de la concentración del 20% (Tabla 2). Los trabajos de investigación que se han relacionado al efecto inhibitorio del. LT. extracto acuoso de V. corymbomsum sobre Escherichia. coli. ATCC 25922 y. CU. Klebsiella pneumoniae ATCC 700603 son escasos, sin embargo se han hallado. FA. trabajos en los que analizaron este efecto en otra variedad de Vaccinium sobre bacterias Gram negativas, Gram positivas y hongos28 con resultados favorables similares a los del presente estudio. Diversos estudios dan a conocer que Vaccinium corymbomsum contienen metabolitos como ácidos fenólicos, proantocianidinas, antocianidinas, taninos,. 27 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(28) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. flavonoides, antioxidantes que están distribuidos en fruto y hojas proantocianidinas. 29,30,31. . Siendo las. y los taninos34 los principales causantes de la actividad. antimicrobiana contra bacterias como Staphylococus aureus meticilino resistente,. NT. Escherichia coli, Aggregatibacter actinomycetemcomitans, Klebsiella pneumoniae, Streptococcus mutans 32,33. El presente estudio ha identificado a través de una marcha. -U. fotoquímica del fruto de V. corymbomsum la presencia metabolitos secundarios como. A. compuestos fenólicos, flavonoides, antocianidina, y taninos. (ANEXO N°3).. IN. El estudio realizado por Adrianzen35, mostró que el extracto acuoso de V.. IC. corymbomsum presentó actividad antimicrobiana significativa contra Escherichia coli. ED. ATCC 25922 a una concentración de 50mg/ml. Se observó que la susceptibilidad es. DE. taninos que lograron identificar.. M. similar a lo hallado en el presente trabajo, debido a la presencia de antocianidinas y. Del mismo modo Rhbar36 determinó la CBM del extracto alcohólico de. AD. Vaccinium macrocarpon sobre E.coli y K. pneumoniae a las concentraciones de. LT. 1,25%(12,5mg/ml) y 0,0195%(0,195mg/ml) respectivamente, esta variedad presenta. CU. hasta 5 veces más concentración de proantocianidina que V. corymbosum;. FA. atribuyéndole a este compuesto la inhibición del crecimiento bacteriano29. En estudios similares, Cote et al determinó que la inhibición de crecimiento de. Escherichia coli ATCC 25922 al extracto de V. macrocarpon fue a una de. concentración de 16,5mg/ml; dándole mayor importancia al efecto del compuesto fenólico (ácido gálico)37. Este reporte es comparable con la presente investigación. 28 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(29) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. debido a la presencia de metabolitos secundarios (compuestos fenólicos, antocianidinas) presentes en el Vaccinium corymbomsum. (ANEXO N°3) Por otro lado, el trabajo realizado por Laplante et al, sobre frutos de V.. NT. macrocarpon mostraron alta actividad de inhibición del crecimiento sobre E.coli, S.aureus y S.epidermidis ; mostrando un CIM de 20 mg /ml ,0,02 mg /ml y 0,02 mg/ml. -U. respectivamente; atribuyendo su efecto a la presencia de proantocianidinas tipo A.38. IN. A. En dirección similar Silva et al, investigó el efecto del extracto etanólico de V.corymbomsum en E.coli, P.mirabilis y P.aeruginosa, mostrando que la CIM fue de. ED. IC. 125𝜇𝑔/𝑚𝑙 , 250 𝜇𝑔/𝑚𝑙 y 250 𝜇𝑔/𝑚𝑙 respectivamente, donde se evidencia la. M. inhibición de crecimiento bacteriano y se le atribuye a la presencia de antocianidina39. Finalmente, a pesar de las limitaciones en la búsqueda de información se pudo. DE. lograr demostrar alta actividad antibacteriana del fruto de Vaccinium corymbomsum en. AD. bacterias gran negativas como la Escherichia coli y Klebsiella pneumoniae. Esto podría contribuir una terapia alternativa contra agentes patógenos en la Infección del tracto. FA. CU. LT. urinario (ITU) evitando la resistencia de antibióticos a largo plazo.. 29 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(30) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. V.. . CONCLUSIONES. Las cepas de Escherichia coli ATCC 25922 son susceptibles al extracto acuoso de. . NT. Vaccinium corymbomsum a las concentraciones de 10%,20% y 25%. Las cepas de Klebsiella pneumoniae ATCC 700603 son susceptibles al extracto. FA. CU. LT. AD. DE. M. ED. IC. IN. A. -U. acuoso de Vaccinium corymbomsum a las concentraciones de 20% y 25%.. 30 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(31) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. VI. . Identificar. RECOMEDACIONES. y cuantificar los metabolitos secundarios de Vaccinium. corymbomsum. Utilizar el espectrofotómetro para determinar la concentración inhibitoria. NT. . mínima (CIM).. Realizar concentraciones del extracto acuoso de Vaccinium corymbomsum en. -U. . FA. CU. LT. AD. DE. M. ED. IC. IN. A. intervalos cortos.. 31 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(32) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. VII. . LIMITACIONES. Limitación en la disponibilidad de publicaciones sobre el efecto antibacteriano del Vaccinium corymbomsum. El uso del disolvente(metanol) para hallar metabolitos secundarios.. FA. CU. LT. AD. DE. M. ED. IC. IN. A. -U. NT. . 32 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(33) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. VIII. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS 1. Salas P, Barrera P, González claudia, Zambrano P, Salgado I, Quiroz L, et al. Actualización en el diagnóstico y manejo de la infección Urinaria en pediatría. Chil. Pediatría. [Internet].. 2012;83(3):269–78.. Available. from:. NT. Rev. http://www.scielo.cl/pdf/rcp/v83n3/art09.pdf. -U. 2. Ponce Matías M. Características de la Infección del Tracto Urinario Recurrente. A. en Gestantes del Instituto Nacional Materno Perinatal 2007. [Tesis Pre Grado].. Alós JI. Epidemiología y etiología de la infección urinaria comunitaria.. IC. 3.. IN. Lima: Universidad Mayor de San Marcos. 2008. ED. Sensibilidad antimicrobiana de los principales patógenos y significado clínico. M. de la resistencia. Enferm Infecc Microbiol Clin. 2005;23(4): 3-8. DE. 4. Estrada A, Figueroa R,Villagrana Roberto.Infeccion de vías urinarias en la mujer embarazada.Importancia del escrutinio de bacteriuria asintomática. AD. durante la gestación.Perinatol Reprod Hum 2010;24(3):182-186. 5. Marild S, Jodal U. Incidence rate of first-time symptomatic urinary tract. LT. infection in children under 6 years of age. Acta Paediatr. 1998;87(5):549-52. CU. 6. Flores-Mireles AL, Walker JN, Caparon M, Hultgren SJ. Urinary tract. FA. infections: epidemiology, mechanisms of infection and treatment options. Nature reviews Microbiology. 2015;13(5):269-284.. 7. Hooton TM. Uncomplicated urinary tract infection. New Engl J Med. 2012;366:1028–1037. 8. Hannan T, Totsika M, Mansfield K, Moore K, Mark A, Hultgren S.Host– pathogen checkpoints and population bottlenecks in persistent and intracellular 33 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(34) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. uropathogenic Escherichia coli bladder infection. FEMS Microbiol Rev. 2012;36:616–648 9. Foxman B. Urinary tract infection syndromes: occurrence, recurrence,. NT. bacteriology, risk factors, and disease burden. Infect Dis Clin North Am. 2014;28:1–13.. -U. 10. Levison ME, Kaye D. Treatment of complicated urinary tract infections with. A. an emphasis on drug-resistant Gram-negative uropathogens. Curr Infect Dis. IN. Rep. 2013;15:109–115. IC. 11. Becknell B, Schober M, Korbel L, Spencer JD. The Diagnosis, Evaluation and. ED. Treatment of Acute and Recurrent Pediatric Urinary Tract Infections. Expert. M. review of anti-infective therapy. 2015;13(1):81-90.. DE. 12. Echevarria-Zarate J,Sarmiento EOsres-Plenge F.Infeccion del tracto Urinario y manejo antibiótico.Acta Med Per 2006;23(1):26-31. Women:. AD. 13. Al-Badr A, Al-Shaikh G. Recurrent Urinary Tract Infections Management in A. review.. Sultan. Qaboos. University. Medical. Journal.. LT. 2013;13(3):359-367.. CU. 14. Liska DJ, Kern HJ, Maki KC. Cranberries and Urinary Tract Infections: How. FA. Can the Same Evidence Lead to Conflicting Advice? Advances in Nutrition. 2016;7(3):498-506.. 15. Vargas N, Silbaja L. Actividad antimicrobiana del arándano (vaccinium macrocarpon). Revista médica de Costa rica y Centroamerica .2013;53 (605): 9-12. 34 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(35) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. 16. Neri RE, Celis GC, León JS, Gutiérrez,EP, y col. El jugo de arándano y su papel en las infecciones de las vías urinarias. Ginecol Obstet Mex 2009;77(11):5127.. NT. 17. Vargas N, Silbaja L. Actividad antimicrobiana del arándano (vaccinium macrocarpon). Revista médica de Costa rica y Centroamerica .2013;53 (605):. -U. 9-12. A. 18. Ruz E, González C, Jaen S, Escoto P, Urquiza K, Rosenfield L, et al. El jugo. IN. de arándano y su papel en las infecciones de las vías urinarias.. IC. 2009;77(11):512–8.. ED. 19. Jepson RG, Craig JC. A systematic review of the evidence for cranberries and. M. blueberries in UTI prevention. Mol Nutr Food Res. 2007;51(6):738–45.. DE. 20. Sun J, Marais J, Khoo C, LaPlanteK,et al. Cranberry (Vaccinium macrocarpon) oligosaccharides decrease biofilm formation by uropathogenic Escherichia coli.. AD. Journal of Functional Foods. (2015);17, 235–242. 21. Howell AB, Botto H, Combescure C, Blanc-Potard AB, Gausa L, Matsumoto. LT. T, et al. Dosage effect on uropathogenic Escherichia coli anti-adhesion activity. CU. in urine following consumption of cranberry powder standardized for. FA. proanthocyanidin content: A multicentric randomized double blind study. BMC Infect Dis. 2010;10.. 22. Lavigne J, Bourg G, Combescure C, Botto H, Sotto A. In-vitro and in-vivo evidence of dose-dependent decrease of uropathogenic Escherichia coli virulence after consumption of commercial Vaccinium macrocarpon. 35 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(36) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. (cranberry) capsules. Clinical Microbiology and Infection. (2008). 14(4);350– 355. 23. Miranda M. Métodos de Análisis de Drogas y Extractos. Instituto de Farmacia. NT. y Alimentos. Universidad Habana de Cuba.2002. 24. Mehnaz P, Hasnat A, y Beong O. Antibacterial and antioxidant activities. -U. of Vaccinium corymbosum L. leaf extract. Asian Pac J Trop Dis. 2013 Dec;. A. 3(6): 444–453.. IC. Amazonas. Univ Nac Colomb. 2004. IN. 25. Gonzales A. Obtención de aceites y extractos etanólicos de plantas del. ED. 26. Declaración de Rio sobre el Medio Ambiente y el Desarrollo. Rio de Janeiro. M. Rio; 3- 14 de junio de 1992. Rio de Janeiro: Departamento de Asuntos. DE. Económicos y Sociales. División del Desarrollo Sostenible. Organización Mundial de la Salud. 1992.. AD. 27. Protocolo de Cartagena sobre Seguridad de la Biotecnología del Convenio sobre la Diversidad Biológica. Nairobi; mayo de 1992 Montreal: Secretaría del. LT. Convenio sobre la Diversidad Biológica. 2000. CU. 28. Bukhari S, Chiragh S, Tariq S, Alam MA, Wazir MS, Suleman M. in Vitro. FA. Activity of Vaccinium Macrocarpon (Cranberry) on Urinary Tract Pathogens in Uncomplicated Urinary Tract Infection. J Ayub Med Coll Abbottabad [Internet]. 2015;27(3):660–3.. 29. Ferlemi A, Lamari F.Berry Leaves: An Alternative Source of Bioactive Natural Products of Nutritional and Medicinal Value. Antioxidants (Basel).2016; 5(2):17. 36 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(37) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. 30. Li K, Ma C, Jian T, Sun H, Wang L, Xu H, et al. Making good use of the byproducts of cultivation: green synthesis and antibacterial effects of silver nanoparticles using the leaf extract of blueberry. J Food Sci Technol.. NT. 2017;54(11):3569–76. 31. Pervin M, Hasnat MA, Lim BO. Antibacterial and antioxidant activities of. -U. Vaccinium corymbosum L. leaf extract. Asian Pacific J Trop Dis.. A. 2013;3(6):444–53.. IN. 32. Ben Lagha A, LeBel G, Grenier D. Dual action of highbush blueberry. IC. proanthocyanidins on Aggregatibacter actinomycetemcomitans and the host. ED. inflammatory response. BMC Complement Altern Med. 2018;18(1):1–14.. M. 33. Kamonpatana K, et al . Susceptibility of anthocyanins to ex vivo degradation. DE. in human saliva. Food Chem. 2012 November 15; 135(2) 34. Ruxandra S ,et al Vaccinium corymbomsum leaves, a potential source of. AD. polyphenolic compounds. Romanian Biotechnological Letters.2018.. LT. 35. Adrianzen J, Chiroque J. Efecto in vitro del zumo de Vaccinium Corymbomsum. CU. L. sobre Escherichia coli.Facultad de Farmacia y Bioquímica de la Universidad Nacional de Trujillo.2017. FA. 36. Rahbar M,Kambiz D. In vitro activity of cranberry extract against etiological agents. of. urinary. tract. infections.. Journal. of. Pharmacy. and. Pharmacology,2010;4(5), :286-288. 37 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(38) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. 37. Côté J, Caillet S, Doyon G, Dussault D, Sylvain JF, Lacroix M. Antimicrobial effect. of. cranberry. juice. and. extracts.. Food. Control. [Internet].. 2011;22(8):1413–8.. NT. 38. Laplante KL, Sarkisian SA, Woodmansee S, Rowley DC, Seeram NP. Effects of cranberry extracts on growth and biofilm production of escherichia coli and. -U. staphylococcus species. Phyther Res. 2012;26(9):1371–4.. A. 39. Silva S, Costa EM, Mendes M, Morais RM, Calhau C, Pintado MM.. IN. Antimicrobial, antiadhesive and antibiofilm activity of an ethanolic,. IC. anthocyanin-rich blueberry extract purified by solid phase extraction. J Appl. FA. CU. LT. AD. DE. M. ED. Microbiol. 2016;121(3):693–703.. 38 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(39) FA. CU. LT. AD. DE. M. ED. IC. IN. A. -U. NT. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. 39 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(40) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. ANEXO N° 01 A) Determinación de la CIM del extracto acuoso deVaccinium corymbomsum (Arándano azul) sobre Escherichia coli ATCC 25922. 20%. 25%. Turbidez. Turbidez. Turbidez. Turbidez. 2. ND. ND. ND. 3. ND. ND. ND. 4. ND. ND. ND. 5. ND. ND. 6. ND. ND. Control Positivo. Turbidez. +++. -. +++. -. ND. +++. -. ND. +++. -. ND. ND. +++. -. ND. +++. -. ND. A. ND. Turbidez. IN. ND. ND. IC. ND. ED. 1. Control Negativo. -U. 10%. M. 5%. TUBO. NT. Vaccinium corymbomsum (Arándano azul). Leyenda. AD. DE. ND. (+++):Muy turbio. (-):no presenta turbidez. FA. CU. LT. ND:no determinado. FUENTE: Datos obtenidos por el investigador, año 2018. 40 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(41) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. B) Determinación de la CIM del extracto acuoso deVaccinium corymbomsum. NT. (Arándano azul) sobre sobre Klebsiella pneumonia ATCC 700603. 20%. Repeticiones. Turbidez. Turbidez. Turbidez. ND. ND. ND. 2. ND. ND. 3. ND. ND. 4. ND. 5. ND. 6. ND. Turbidez. Control Negativo. Turbidez. Control Positivo Turbidez. ND. +++. -. ND. ND. +++. -. ND. ND. +++. -. ND. ND. ND. +++. -. ND. ND. +++. -. ND. ND. +++. -. ED. IC. IN. 1. 25%. A. 10%. M. 5%. Numero de. -U. Vaccinium corymbomsum (Arándano azul). DE. ND. LT. AD. ND. Leyenda. (+++):Muy turbio. (-):no presenta turbidez. FA. CU. ND:no determinado. FUENTE: Datos obtenidos por el investigador, año 2018. 41 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(42) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. ANEXO N° 02 A) Determinación de la UFC/ml del extracto acuoso de Vaccinium corymbomsum (Arándano azul) sobre Escherichia coli ATCC 25922. 5%. 10%. 20%. UFC. UFC. UFC. Numero de. 25%. 0. 57600000 0. IN. 0. 2. 38400000. 0. IC. 0. 3. 44800000 25600000 32000000. 0. M. 0. 5. 0. ED. 0. 4. 0. 6. DE. 38400000. 0. 7. UFC. 0. AD. LT. CU. FA. 0. 110000000 0. 0. 130000000 0. 0. 150000000 0. 0. 0. 0. 90000000 0. 0. 0. 100000000 0. 0. 0. 0. 110000000 0. 0. 0. 44800000. 4,224x107. 0. 0. 44800000. Promedio. 0. 140000000 0. 0. 10. UFC. 120000000. 51200000 9. Control Positivo. 100000000. 0. 44800000 8. UFC. 0. A. 0. 1. Control Negativo. -U. Repeticiones. NT. Vaccinium corymbomsum (Arándano azul). 0. 100000000 0. 0. 0. 1,15x108. 0. FUENTE: Datos obtenidos por el investigador, año 2018. 42 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(43) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. B) Determinación de la UFC/ml del extracto acuoso de Vaccinium corymbomsum (Arándano azul) sobre Klebsiella pneumonia ATCC 700603. 5%. 10%. 20%. UFC. UFC. UFC. Numero de. 25%. 169600. 0. 449600. 94600. 0. 313600. 88000. 0. 360000. ED. 4. M. 5 6. 116800. 0. 97600. 0. 409600. 68800. 0. 572800. 94400. 0. 452800 4,3x105. UFC 0. 100000000. 0. 0. 130000000 0. 0. 150000000 0. 0. 140000000 0. 0. 90000000 0. 0. 0. 0. 100000000 0. 0. 150000000 0. 0. 120000000. 0,95x105. 0. 0 0. 0. 10000000 1,14x108. 0. FA. CU. Promedio. LT. 10. AD. 8. UFC. Control Positivo. 150000000. 392000. 7. 9. IC. 3. -U. 64000. 0. 547200. 2. Control Negativo. 0. A. 60800. 0. 430400. 1. UFC. IN. 94400. 0. 374400. DE. Repeticiones. NT. Vaccinium corymbomsum (Arándano azul). FUENTE: Datos obtenidos por el investigador, año 2018. 43 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(44) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. ANEXO N° 03 METABOLITOS SECUNDARIOS DEL EXTRACTO ACUOSO DE Vaccinium corymbomsum (Arándano azul).. METABOLITOS. ENSAYOS. RESULTADO. NT. SECUNDARIOS Na2CO3 + Luz UV. Lactonas. Baljet. Triterpenos y Esteroides. Liebermann - Burchard. -. Quinonas. Bornträger. -. Saponinas. Espuma. Compuestos fenólicos. Cloruro Férrico. ++. Flavonoides. Shinoda. ++. Antocianidina. Antocianidinas. +++. A. IN. IC. Gelatina. ++. Kedde. -. Dragendorff. -. Mayer. -. Wagner. -. AD. DE. M. Cardenólicos. -. -. ED. Taninos. Alcaloides. +. -U. Catequinas. Intensidad:. + ++ +++. Baja Moderada Alta. FA. CU. LT. Leyenda: Resultado positivo: + Resultado negativo: –. 44 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(45) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. ANEXO Nº 04 A) Prueba No Parametrica Kruskal Wallis para demostrar la significancia de los valores de UFC/ml del extracto acuoso de Vaccinium corymbomsum. FA. CU. LT. AD. DE. M. ED. IC. IN. A. -U. NT. (Arándano azul) frente Escherichia coli ATCC 25922.. 45 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(46) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. B) Prueba No Parametrica Kruskal Wallis para demostrar la significancia de los valores de UFC/ml del extracto acuoso de Vaccinium corymbomsum (Arándano. FA. CU. LT. AD. DE. M. ED. IC. IN. A. -U. NT. azul) frente Klebsiella pneumoniae ATCC 700603. 46 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(47) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. ANEXO N° 05. FA. CU. LT. AD. DE. M. ED. IC. IN. A. -U. NT. CONSTANCIA DE APROBACIÓN PARA EJECUCIÓN DEL PROYECTO. 47 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(48) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. ANEXO N° 06 CONSTANCIA DE INFORME DE AVANCE DE PROYECTO DE. FA. CU. LT. AD. DE. M. ED. IC. IN. A. -U. NT. INVESTIGACIÓN. 48 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(49) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. ANEXO N° 07 CONSTANCIA DE APROBACIÓN DE MODIFICACIÓN DE. FA. CU. LT. AD. DE. M. ED. IC. IN. A. -U. NT. PROYECTO DE INVESTIGACIÓN. 49 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(50) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. ANEXO N° 08. FA. CU. LT. AD. DE. M. ED. IC. IN. A. -U. NT. CONSTANCIA DE AUTORIZACION DE AMBIENTES Y EQUIPOS DEL LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA Y PARASITOLOGIA DE LA FACULTAD DE MEDICINA DE LA UNT PARA EJECUCION DEL PROYECTO DE TESIS. 50 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(51) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. ANEXO N° 09 CONSTANCIA DE PREPARACIÓN DEL EXTRACTO ACUOSO Vaccinium. FA. CU. LT. AD. DE. M. ED. IC. IN. A. -U. NT. corymbomsum (ARÁNDANO AZUL). 51 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(52) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. ANEXO N° 10 CONSTANCIA DE ADQUISICIÓN DE LA CEPA DE Escherichia coli ATCC 25922 y Klebsiella pneumoniae ATCC 700603 DEL LABORATORIO GEN. FA. CU. LT. AD. DE. M. ED. IC. IN. A. -U. NT. LAB DEL PERU. 52 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(53) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. ANEXO N° 11 CONSTANCIA PARA LA DETERMINACIÓN TAXONÓMICA DE LA. FA. CU. LT. AD. DE. M. ED. IC. IN. A. -U. NT. FRUTA VACCINIUM CORYMBOMSUM (ARÁNDANO AZUL). 53 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(54) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. ANEXO N° 12 ELABORACIÓN DEL EXTRACTO ACUOSO DE VACCINIUM CORYMBOMSUM (ARÁNDANO AZUL) EN EL LABORATORIO DE FARMACOGNOSIA DE LA FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA- UNT. NT. 1) Selección de la muestra y preparación del extracto acuoso Vaccinium. AD. DE. Fig.1. Fruto de arándanos.. M. ED. IC. IN. A. -U. corymbomsum (Arándano azul).. FA. CU. LT. Fig.3 Licuado de los frutos de arándano con etanol de 96%, en una proporción de 1:3.. Fig.2 Lavado de los frutos de arándano azul. 54 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(55) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. Fig.4. Frasco que contiene arándanos licuados con etanol,. ED. Fig.6.1 Concentración del. IC. IN. A. -U. NT. llevado a macerar por 7 días.. extracto etanólico de arándano,. FA. CU. LT. AD. DE. M. en el equipo de rotavapor.. Fig.6.2. Concentración del extracto etanólico de arándano azul, en el papel filtro de whatman. 55 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(56) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. Fig.7. Filtración del extracto etanólico de arándano azul, en el. LT. AD. DE. M. ED. IC. IN. A. -U. NT. equipo de filtración al vacío.. CU. Fig.8. Extracto seco etanólico de arándano azul.. FA. Fig.9. Preparando las concentraciones de los extractos acuosos (aguda destilada esteril) de arándanos.. 56 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(57) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. 2) Método Para Observar “Susceptibilidad in vitro de Escherichia coli Y Klebsiella pneumoniae al. Extracto Acuoso De Vaccinium Corymbomsum. (Arándano Azul) ”En El Laboratorio De Microbiología De La Facultad De Medicina-Unt. FA. CU. LT. AD. DE. M. ED. IC. IN. A. -U. NT. Fig.10 Preparación del extracto acuoso de Vaccinium corymbomsum (Arándano azul). 57 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(58) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. 3) Determinación de CIM para ambas cepas (No se logró determinar y se procedió al sembrado de todas las concentraciones). DE. M. ED. IC. IN. A. -U. NT. Escherichia coli ATCC 25922. FA. CU. LT. AD. Klebsiella pneumoniae ATCC 700603. 58 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(59) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. 4) Sembrado del contenido de los tubos en placa con Mueller Hinton para determinar las unidades formadoras de colonias (UFC) por cada concentración de Vaccinium corymbomsum (Arándano azul) .. IC. IN. A. -U. NT. Escherichia coli ATCC 25922. 10%. 20% 25%. FA. CU. LT. AD. DE. M. ED. 5%. Control +. Control -. 59 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(60) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. -U. NT. Klebsiella pneumoniae ATCC 700603. 10%. 20%. 25%. FA. CU. LT. AD. DE. M. ED. IC. IN. A. 5%. Control + Control -. 60 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(61) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. ANEXOS N° 13 CRITERIOS DE EVALUACIÓN DEL INFORME FINAL DE LOS TRABAJOS DE INVESTIGACIÓN EN LA FACULTAD DE MEDICINA DE LA UNT ASPECTOS. PUNTAJES. I. TITULO. -U. NT. a. Contiene las variables del problema de investigación. No es mayor a quince palabras. b. El título refiere de manera general las variables del problema. Tiene más de 15 palabras. c. El título no refleja el contenido del trabajo.. IN. ED. IC. a. Tiene no más de 200 palabras y palabras clave. b. Tiene más de 200 palabras y palabras clave. c. Tiene más de 200 palabras o no tiene palabras clave. 3. ABSTRACT. A. 2. RESUMEN. 1 0.5 0.1. 0.5 0.3 0.1 0.5. b. Tiene más de 200 palabras y palabras clave con correcto uso del idioma. 0.3. M. a. Tiene no más de 200 palabras y palabras clave con correcto uso del idioma. 4. INTRODUCCIÓN. DE. c. Tiene más de 200 palabras en idioma inglés o no tiene palabras clave o uso incorrecto del idioma inglés.. LT. AD. a. Se basa en antecedentes de conocimientos previos, presenta el problema con sustento, la hipótesis es coherente con el problema y objetivos. b. Se basa en antecedentes de conocimientos previos, el problema no está bien sustentado o la hipótesis no es coherente con el problema y/o objetivos. c. Se basa en antecedentes de conocimientos previos. No presenta problema. 0.1. 3.5 2 1. CU. 5. MATERIAL Y MÉTODO. FA. a. La muestra recolectada es representativa, adecuada y plantea un diseño experimental apropiado a la solución del problema. b. La muestra recolectada es representativa, adecuada y no plantea un diseño experimental apropiado a la solución del problema. c. La muestra recolectada no es representativa, ni adecuada.. 3 2 1. 6. RESULTADOS a. Presenta los resultados en forma sistemática en función de las variables del problema e incluye pruebas estadísticas, figuras y tablas de acuerdo a las normas internacionales.. 4. 61 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.