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“Concentración mínima inhibitoria del aceite esencial de Minthostachys mollis sobre el crecimiento de Streptococcus pyogenes”

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Academic year: 2020

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(1)Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE. CI A. S. BI. O. LO. G. IC AS. MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA. EN. “Concentración mínima inhibitoria del aceite esencial de. DE. CI. Minthostachys mollis sobre el crecimiento de Streptococcus pyogenes” TESIS. CA. PARA OBTENER EL TÍTULO DE. BI. BL. IO. TE. BIÓLOGO - MICROBIÓLOGO AUTORA: Br. Liliana H. Ibáñez Fernández ASESOR: Dr. Pedro Mercado Martínez. TRUJILLO – PERÚ 2017. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(2) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AUTORIDADES DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE. LO. Dr. ORLANDO GONZÁLES NIEVES. G. IC AS. TRUJILLO. EN. CI A. S. BI. O. RECTOR DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO. CI. Dr. RUBÉN VERA VÉLIZ. TRUJILLO. BI. BL. IO. TE. CA. DE. VICE-RECTOR ACADÉMICO DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE. Dr. STEBAN ALEJANDRO ILICH ZERPA. SECRETARIO GENERAL DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO. ii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(3) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. G. Dr. FREDDY ROGGER MEJÍA COICO. IC AS. AUTORIDADES DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS. EN. CI A. S. BI. O. LO. DECANO DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS. CI. Dr. WILLIAM ZELADA ESTRAVER. Dra. BERTHA SORIANO BERNILLA. BI. BL. IO. TE. CA. DE. SECRETARIO DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS. DIRECTORA DE LA ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA. 3 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(4) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. CERTIFICACIÓN DEL ASESOR. IC AS. El que suscribe, Dr. Pedro Mercado Martínez, en calidad de profesor asesor de la tesis: “Concentración mínima inhibitoria del aceite esencial de Minthostachys mollis. LO. G. sobre el crecimiento de Streptococcus pyogenes”. BI. O. CERTIFICA:. Que la investigación ha sido desarrollada de conformidad con los objetivos. observaciones y sugerencias alcanzadas.. CI A. S. propuesto en su perfil académico y que el informe ha sido revisado y acoge las. BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI. los procedimientos según sus fines.. EN. Por ello, autorizo al Br. Liliana Herminia Ibáñez Fernández para continuar con. Dr. Pedro Mercado Martínez ASESOR. 4 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(5) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. PRESENTACIÓN. G. IC AS. Señores miembros del jurado dictaminador:. LO. En cumplimiento con las disposiciones reglamentarias. BI. O. vigentes para la obtención de grados y títulos de la Escuela Académico. S. Profesional de Microbiología y Parasitología, Facultad de Ciencias. CI A. Biológicas de la Universidad Nacional de Trujillo, someto a vuestra. EN. consideración y criterio el presente informe de tesis titulado:. CI. “Concentración mínima inhibitoria del aceite esencial de Minthostachys mollis sobre el crecimiento de Streptococcus pyogenes”, con la cual. IO. TE. CA. Microbiólogo.. DE. pretendo cumplir con los requisitos para optar el título de Biólogo-. BI. BL. Trujillo, Junio del 2017. Br. Liliana Herminia Ibáñez Fernández. v Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(6) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. G. IC AS. MIEMBROS DEL JURADO. LO. Dra. ICELA MARISSA RODRIGUEZ HARO. CI. EN. CI A. S. BI. O. PRESIDENTE. DE. Ms. C. EDUARDO MUÑOZ GANOZA. BI. BL. IO. TE. CA. SECRETARIO. Dr. PEDRO MERCADO MARTINEZ VOCAL. vi Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(7) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. APROBACIÓN. IC AS. Los profesores que suscriben, miembros del jurado dictaminador, declaran que el presente informe de tesis ha cumplido con los requisitos formales y. BI. O. LO. G. fundamentales, siendo aprobado por unanimidad.. S. Dra. ICELA MARISSA RODRIGUEZ HARO. CA. DE. CI. EN. CI A. PRESIDENTE. SECRETARIO. BI. BL. IO. TE. Ms. C. EDUARDO MUÑOZ GANOZA. Dr. PEDRO MERCADO MARTINEZ VOCAL. vii. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(8) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DEDICATORIA. IC AS. A Dios Creador de todas las cosas, por haberme dado la vida y. G. permitirme llegar a este momento tan importante en mi formación. LO. profesional. Por los triunfos y los momentos difíciles que me han enseñado. O. a valorarlo cada día más, y sobre todo por guiarme por el camino de la. CI A. S. BI. sabiduría y darme fuerzas para seguir adelante día a día.. EN. A mis padres, Eriberto Ibáñez Zavaleta y Nila Fernández Aguirre,. CI. quienes a lo largo de mi vida han velado por mi bienestar y educación,. DE. brindándome todo su amor y siendo la fuerza que me impulsa a seguir adelante en la búsqueda de mis metas. Sé que cada alegría y logro mío, es. IO. TE. CA. el de ellos también.. BL. A mis hermanos Pablo y Beto por estar a mi lado, por demostrarme. BI. en todo momento su cariño, que con sus consejos y vivencias forman parte muy importante de mi vida, a quienes quiero y estimo mucho.. viii. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(9) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AGRADECIMIENTO. IC AS. Un agradecimiento a Dr. Pedro Mercado Martinez, mi asesor de tesis, por. LO. G. su apoyo y orientación para la realización de esta investigación.. BI. O. Un especial agradecimiento a Biologo-Microbiologo Ofelia Marivel Lopez. S. Rubio, por su apoyo incondicional en la obtención del material vegetal,. CI A. importante para la realización de la presente tesis y quien con su ayuda. CI. EN. pertinente hizo posible la culminación de este trabajo.. DE. A mis compañeras y amigas Mayra, Angie, Paola, Beatriz y Vania quienes. CA. sin esperar nada a cambio compartieron sus conocimientos, alegrias y. TE. tristezas y que estuvieron a mi lado durante estos cinco años apoyandome. BI. BL. IO. y brindandome su amistad incondicional.. ix. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(10) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. RESUMEN Algunas especies vegetales tales como Minthostachys mollis se han reportado como poseedoras de características antimicrobanas, antifúngicas. IC AS. y fitoterapeuticas debido a los componentes que posee considerados como. actividades. farmacéuticas. para. evitar. la. proliferación. de. LO. en. G. principios activos las cuales la hacen una especie promisoria para su uso. O. microorganismos, esto conlleva a la presente investigación que tenga como. BI. objetivo determinar la concentración mínima inhibitoria “Concentración. CI A. S. mínima inhibitoria del aceite esencial de Minthostachys mollis sobre el crecimiento de Streptococcus pyogenes”. Para ello se obtuvo el aceite. EN. esencial a partir de las hojas de Minthostachys mollis mediante la técnica. CI. de Hidrodestilación tipo Clevenger. Luego se determinó el tiempo de. DE. generación (Tg) de la cepa Streptococcus pyogenes ATCC 19615. Para. CA. determinar la concentración minima inhibitoria (CMI) se utilize la técnica. TE. de dilución en caldo donde se incubó unicamente por el tiempo de. IO. generación de la bacteria. Siendo la CMI hallada de 40 µg/mL, por lo tanto. BL. el aceite esencial de Minthostachys mollis “muña” tiene la capacidad de. BI. inhibir el crecimiento de Streptococcus pyogenesATCC 19615.. Palabras clave: Aceite esencial, Minthostachys mollis ,concentración minima inhibitoria, Streptococcus pyogenesATCC 19615.. 1. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 0 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(11) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. TABLA DE CONTENIDOS. AUTORIDADES DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO.................. ii. IC AS. AUTORIDADES DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS ...................iii. G. CERTIFICACIÓN DEL ASESOR..................................................................................iv. LO. PRESENTACIÓN ........................................................................................................ v. O. MIEMBROS DEL JURADO....................................................................................... vi. S. BI. APROBACIÓN .......................................................................................................... vii. CI A. DEDICATORIA ........................................................................................................ viii. EN. AGRADECIMIENTO ................................................................................................. ix. CI. RESUMEN ................................................................................................................... x. I.. DE. TABLA DE CONTENIDOS ....................................................................................... xi INTRODUCCIÓN ............................................................................................ 1. MATERIAL Y MÉTODO. TE. II.. CA. OBJETIVOS ..................................................................................................... 4. IO. 2.1 Material Biológico ...................................................................................... 5. BI. BL. 2.2 Procedimiento ............................................................................................. 5 2.1.1. Reactivación de Streptococcus pyogenes ATCC 1961………...5 2.1.2 Obtención de Minthostachys mollis “muña”…………………...5 2.1.3. Aceite esencial de Minthostachys mollis “muña”……………..7 • Obtención del aceite esencial Minthostachys mollis • Preparación de solución Stock del aceite esencial. 1. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 1 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(12) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 2.1.4. Obtención de la curva de crecimiento de S. pyogenes ……… ... 7 • Preparación de inóculo de S. pyogenes 2.1. 5. Determinación de la concentración mínima inhibitoria………..8 RESULTADOS……………………….………………………………………9. IV.. DISCUSIÓN ................................................................................................... 11. V.. CONCLUSIÓN............................................................................................... 15. VI.. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS……………………………………. ... 16. LO. G. IC AS. III.. O. ANEXOS…………………………………………………………………………….20. BI. ANEXO 1. Determinación taxonómica de Minthostachys mollis “muña”….21. S. ANEXO 2. Presentación KWIK-STIK, Streptococcus pyogenes ATCC. CI A. 19615TM…………………………………………………………22. EN. ANEXO 3. Minthostachys mollis “muña” ………………………………….22. CI. ANEXO 4. Certificado de Identificación de Streptococcus pyogenes ATCC. DE. 19615 TM ………………………………………………………...23. CA. ANEXO 5. Reporte de análisis de pruebas bioquímicas a Streptococcus. TE. pyogenes ATCC 19615-Laboratorio MICROBIOLOGICS……24. IO. ANEXO 6. Equipo de Hidrodestilación Directa tipo Clevenger …………..25. BI. BL. Figura 02. Exposición de Streptococcus pyogenes ATCC 19615 a las diferentes concentraciones de aceite esencial de Minthostachys mollis “muña”…………………………………………………………………26. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative CommonsxiiReconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(13) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. INTRODUCCION. Streptococcus pyogenes es una bacteria Gram positiva, no móvil, no esporulante, catalasa negativo que se producen en pares o en cadenas. La mayoría de los estreptococos son anaerobios facultativos, y algunos son obligados (estrictos). IC AS. anaerobios y la mayoría requiere de medios enriquecidos (agar sangre)1. Entre los. factores de patogenicidad de S. pyogenes destacan: la proteína M y ácido lipoteicoico. G. para la unión; una cápsula de ácido hialurónico que inhibe la fagocitosis; otros. productos extracelulares, como la toxina pirogénica, que causa la erupción de la. BI. O. LO. escarlatina; y la estreptoquinasa, estreptodornasa (DNasa B) y Estreptolisina1.. Los seres humanos constituyen el reservorio natural de los estreptococos β-hemolíticos. S. del grupo A (Streptococcus pyogenes), y el microorganismo es transmitido de una. CI A. persona a otra por la vía respiratoria. La infección más frecuente causada por estos estreptococos es la Faringitis estreptocócica. La mayoría de los casos de faringitis se. EN. observan en niños de edad escolar (5 a 15 años) durante el invierno o la primavera.. CI. Este microorganismo sigue siendo un patógeno humano extremadamente importante cuyo único reservorio conocido en la naturaleza son la piel y las mucosas de los seres. CA. DE. humanos2.. Las bacterias, por su tremenda capacidad de adaptación, pueden desarrollar. TE. mecanismos de resistencia frente a los antibióticos. Existe una resistencia natural o intrínseca en las bacterias si carecen de diana para un antibiótico. La resistencia. IO. adquirida es la realmente importante desde un punto de vista clínico: es debida a la. BL. modificación de la carga genética de la bacteria y puede aparecer por mutación cromosómica o por mecanismos de transferencia genética. La primera puede ir seguida. BI. de la selección de las mutantes resistentes (rifampicina, macrólidos), pero la resistencia transmisible es la más importante, estando mediada por plásmidos, transposones o integrones, que pueden pasar de una bacteria a otra3, 4.. 1 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(14) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Ante esta problemática existen numerosos tratamientos para contrarrestar la faringitis estreptocócica, que van desde aplicaciones de fármacos como La penicilina y la amoxicilina son los antibióticos de elección para el tratamiento de la faringitis. La asociación de amoxicilina y clavulanato no está indicado como el tratamiento inicial de la infección aguda. Tampoco lo son los macrólidos indicado como terapia de. IC AS. primera línea; que deben reservarse para pacientes alérgicos a la penicilina. El. diagnóstico apropiado de la faringitis bacteriana y el uso adecuado de los antibióticos. basados en la evidencia científica disponible son cruciales45, sin embargo estos tipo de. G. medicamentos en un tiempo prolongado tienden a causar efectos adversos en los. O. LO. pacientes5.. BI. Actualmente se emplean plantas medicinales para combatir ciertas enfermedades, como es el uso de la “muña” Minthostachys mollis, planta oriunda de la sierra del. S. Perú, su uso ampliamente difundido en diversas regiones del país, se debe por poseer. CI A. propiedades curativas, las cuales le atribuyen a sus componentes, entre los cuales destaca el aceite esencial, el cual actúa dependiendo del tipo de microorganismo y está. EN. principalmente relacionado con la estructura de la pared celular y la membrana externa de los mismos5, además que interferirían en la fase de metabolismo intermedio de los. DE. CI. microorganismos inactivan enzimas de reacción6.. Las aplicaciones de los aceites esenciales son muy variadas: son ampliamente. CA. utilizados en perfumería, como saborizantes de alimentos y en medicina. Ejemplo: los aceites esenciales de anís, menta y canela son carminativos y soporíferas; el de clavo. TE. de olor es analgésico7,8. Los aceites esenciales (AE) son líquidos aceitosos aromáticos obtenidos a partir de material vegetal (flores, brotes, semillas, hojas, ramas, cortezas,. IO. hierbas, madera, frutos y raíces). Se pueden obtener por fermentación o extracción,. BL. pero el método de destilación con vapor es el más comúnmente utilizado para la producción comercial de AE 3. Se estima que 3.000 AEs son conocidos, de los cuales. BI. unos 300 están comercialmente destinados principalmente para el mercado de sabores y fragancias9. Se demostró que los AEs presentan, además de las propiedades. antibacterianas10,. 11. , propiedad antiviral11,12, antimicótico13,14, antitoxigénica11,15,. antiparasitario16, e insecticida 17.. 2. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(15) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Teniendo en cuenta el gran número de diferentes grupos de compuestos químicos presentes en los AEs, lo más probable es que su actividad antibacteriana no sea atribuible a un mecanismo específico, sino que existan varios blancos en la célula. 18. como la degradación de la pared celular19, daño a la membrana citoplasmática15, daño a las proteínas de membrana15,. 20. filtración de los contenidos celulares21, 15, 23. , la. .. IC AS. coagulación del citoplasma y el agotamiento de la fuerza motriz protónica. 22. G. Rasheed A, Haider M. (1998) observaron que extractos del té verde inhibían mejor a. LO. Escherichia coli, Streptococcus mutans y Streptococcus salivarius que extractos del té. BI. O. negro comparando estos resultados con amoxicilina, cefradina y eugenol 24.. Fuertes y Munguia (2001) realizaron un estudio comparativo del aceite esencial de. S. Minthostachys mollis (Kunth) Griseb “muña” de tres regiones peruanas: Tarma,. CI A. Huaraz y Huancavelica (utilizaron ensayos físicos, espectro ultravioleta, espectro infrarrojo y composición química), concluyeron que el aceite esencial proveniente de. EN. Tarma contenía en su composición 1-Tetradeceno, 2s-Transmentona, pulegona como. CI. componentes principales y un porcentaje importante de timol, demostrando así que el aceite extraído de ese lugar tiene mejores condiciones que el aceite de los otros dos. DE. lugares25.. CA. Cano y col. (2008) Estudiaron la actividad antimicótica in vitro y metabolitos del aceite esencial de las hojas de Minthostachys mollis (muña) y observaron que el aceite. TE. esencial de muña inhibió completamente el desarrollo de T. tonsurasn, T. mentagrophytes y M. canis y para C. albicans se logró un halo de inhibición de 30 mm. IO. demostrándose así la actividad antimicótica del aceite esencial de muña,. BI. BL. probablemente por la acción de los monoterpenos encontrados 26.. Primo y col. (2001) estudiaron a Minthostachys verticillata “Peperina”, observaron buena actividad contra Staphylococcus aureus, B. cereus, Escherichia coli, P. mirabillis y antiviral contra el virus Herpes Simplex tipo 1 y el virus de la Pseudorrabia, aunque con escasa actividad contra Pseudomonas aeruginosa 27.. 3 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(16) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Contreras G. (1983) estudió la actividad antimicrobiana del aceite esencial de Minthostachys mollis, demostrando cualitativamente su efecto antimicrobiano frente a Shigella dysenteriae, Salmonella typhi y Escherichia coli, resultando Shigella. IC AS. dysenteriae la más sensible al aceite esencial de Muña28. Es por ello, el presente trabajo tiene el objetivo de demostrar el efecto inhibitorio del. aceite esencial de Minthostachys mollis sobre el crecimiento de Streptococcus. G. pyogenes.. LO. Ante esta problemática de que los fármacos generan efectos secundarios para el ser. O. humano causando perjuicios a largo plazo mucho más graves como debilitamiento del. BI. sistema inmune, alergias hasta convulsiones, se busca como otra alternativa el empleo de plantas medicinales que puedan sustituir eficazmente a los fármacos más comunes.. S. Conociendo los estudios ya realizados con esta planta medicinal, Minthostachys. CI A. mollis, que inhibe a otros géneros de bacteria Se espera demostrar el. efecto. inhibitorio del aceite esencial de M. mollis sobre el crecimiento de Streptococcus. Determinar la concentración mínima inhibitoria del aceite esencial de. CA. •. DE. OBJETIVO GENERAL. CI. EN. pyogenes.. Minthostachys mollis sobre el crecimiento de Streptococcus pyogenes ATCC. IO. TE. 19615.. BL. OBJETIVOS ESPECIFICOS. Determinar la fase logarítmica media y el tiempo de generación de. BI. •. Streptococcus pyognenes ATCC 19615.. •. Medir el efecto inhibitorio del aceite esencial de Minthostachys mollis sobre el crecimiento de Streptococcus pyogenes ATCC 19615.. 4 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(17) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. MATERIALES Y METODOS 1. MATERIAL BIOLÓGICO • Planta de Minthostachys mollis procedente de Cungunday de la provincia de la Universidad Nacional de Trujillo (Anexo 1).. IC AS. de Otuzco, La Libertad e identificadas por Herbarium Truxillense (HUT). LO. G. • Se utilizó una cepa bacteriana Streptococcus pyogenes ATCC® 19615™ (Anexo 7).. O. 2. PROCEDIMIENTOS. BI. 2.1 Procedimiento operacional. CI A. S. 2.1.1. Reactivación de Streptococcus pyogenes ATCC 19615. Cada KWIK STIK contenía al microorganismo liofilizado, Streptococcus. EN. pyogenes ATCC 19615, con una ampolla de fluido de rehidratación en la. CI. parte superior y una torunda para su adecuada inoculación (Anexo 2). Para comenzar, se abrió la envoltura de protección impermeable y se retiró. DE. el KWIK STIK, luego se presionó fuertemente la ampolla, ubicada en la parte superior, para liberar el fluido de rehidratación; se hizo ligeros. CA. golpes sobre la mesa de trabajo para su mejor homogenización y por último se estrió en una placa que contenía Agar base sangre que fue. TE. previamente rotulada, incubándose a 37° por 24 horas en condiciones de. BI. BL. IO. anaerobiosis.. 2.1.2 Obtención de Minthostachys mollis “muña” •. Taxonomía La muestra vegetal en estudio según el sistema de Engler & Prantil, modificado por Melchor en 1964, recibe la siguiente clasificación29:. 5 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(18) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. REINO: Vegetal DIVISIÓN: Angiospermae CLASE: Dicotyledoneae SUB CLASE: Simpetaleae ORDEN: Tubiflorales. IC AS. FAMILIA: Lamiaceae GÉNERO: Minthostachys. ESPECIE: Minthostachys mollis (Kunt/Griseb). LO. G. NOMBRE COMUN: “muña”. BI. O. • Descripción botánica. Es una planta de 0.9 a 1.5 m de altura, frondosa en la parte. S. superior, de aspecto bien tupido en hojas, las mismas que son. CI A. opuestas y aserradas presentando pelos en los peciolos y en la cara inferior de las hojas, en las cuales se deposita la mayor. EN. cantidad de (AE). El tallo es ramificado desde la base, que. CI. también presenta pelos, tiene forma prismático cuadrilátero y propenso a la lignificación. Las flores se encuentran en la parte. DE. superior de las ramas reunidas en verticilios. Las flores son pequeñas y blancas; irregulares o zigomorfas. Se. CA. encuentran reunidas en seudo verticilos axilares, formados por. BI. BL. IO. TE. cuatro pequeñas cimas, brevemente pedunculadas, dos en cada axila y situadas en la parte superior de las ramas29, 30 (Anexo 5).. • Distribución geográfica La muña es un recurso natural que tiene un plano altitudinal de crecimiento entre 2.500 y 3.500 msnm. Habita en los diferentes pisos ecológicos de nuestra serranía Peruana10. El clima más apropiado es aquel con abundante lluvias y elevada luminosidad. Los fertilizantes más recomendados son los ricos en contenido de potasio y fosfato, siendo fundamental el abono orgánico ya que influyen favorablemente en la síntesis de la esencia 30.. 6. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(19) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 2.1.3 Aceite esencial de Minthostachys mollis “muña” • Obtención del aceite esencial Minthostachys mollis Se obtuvo 600 g de hojas verdes de M. mollis de áreas de cultivo de Cungunday de la provincia de Otuzco, del departamento de La. IC AS. Libertad, ubicada a 3 169 m.s.n.m. y se determinó las características del suelo, durante los meses de Julio- Agosto.. El aceite esencial se obtuvo a partir de las hojas de M. mollis por el. LO. G. método de Hidrodestilación Directa tipo Clevenger44 (Anexo 6). La obtención del aceite se realizó en el Laboratorio de instrumentales del. O. Departamento de Ingeniería Química de la Universidad Nacional de. BI. Trujillo.. S. • Preparación de solución Stock del aceite esencial. CI A. El aceite esencial de M. mollis se disolvió inicialmente en una mezcla solubilizante (Tween 80) a una concentración de 100 mg/ml. Después,. EN. se tomó una alícuota de 1 mL de esta solución y se diluyó en 9 ml de. CI. Caldo de Enriquecimiento BHI (Merck Millipore®). La solución. 2.1.4. DE. Stock se almacenó a -20 ° C.. Obtención de la curva de crecimiento de S. pyogenes. CA. La curva de crecimiento se obtuvo sembrando 1 ml de suspensión de S. pyogenes equivalente al tubo 0.5 de Mc Farland (1,5x108 UFC/mL). TE. en 99 mL de caldo de enriquecimiento BHI (Merck Millipore®) a 37°. BI. BL. IO. C durante 18 horas en condiciones de anaerobiosis y se determinó la concentración de la población microbiana cada 2 horas por el método de recuento en placa. Con estos recuentos se obtuvo la curva de crecimiento y por consiguiente el tiempo de generación. • Preparación de inóculo de S. pyogenes. Se sembró S. pyogenes en una placa conteniendo Agar Sangre (Merck Millipore®) e incubó a 37° C por 8 horas en condiciones de anaerobiosis para obtener un cultivo en fase logarítmica media 7 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(20) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. (tiempo obtenido en la curva de crecimiento).. 2.1.5. Determinación de la concentración mínima inhibitoria Se realizó por la técnica de dilución en caldo31 en pocillos de microcultivo de 2 ml de volumen. Se adicionó 800 µl de Caldo de. IC AS. Enriquecimiento BHI (Merck Millipore®) en 8 pocillos y para el. primer pocillo se adicionará 800 µL de solución Stock del aceite. esencial de M. mollis. Del primer pocillo se tomará 800 µl y se. G. realizará diluciones hasta el octavo pocillo para obtener las. LO. concentraciones 200; 100; 50; 25; 12.5; 6.25; 3.125 ug/ml. Luego se. O. completará el mililitro con 200 µL de inóculo (3x105 células) para. BI. tener las concentraciones finales de: 320, 160; 80; 40; 20; 10; 5; 2.5. servirá de control del medio.. S. ug/ml. Se adicionará en un noveno pocillo 800 µL de Tween 80 que. CI A. Se incubó los 8 sistemas a 37° C en condiciones de anaerobiosis por el tiempo de generación (obtenido de la cinética de crecimiento).. EN. Luego se sembró una alícuota de 0.1 ml de cada sistema y se realizó tres diluciones al décimo en SSF. Las dos últimas diluciones se. CI. sembraron por superficie en Agar Sangre y se incubará a 37°, para. DE. determinar las UFC/ml25. Cada siembra se realizó por duplicado. Los sistemas completaron su incubación por 24 horas y se verificó el. BI. BL. IO. TE. CA. crecimiento con la aparición de turbidez.. 8. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(21) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. RESULTADOS. La fase logarítmica media fue a las 8 horas de incubación y el tiempo de. IC AS. generación es de 71 minutos para el cultivo de Streptococcus pyogenes ATCC. LO. G. 19615 (Fig. 1).. O. S. pyogenes (cel/ml) 1.00E+11. BI. y = 284923e1.2182x 1.00E+10. S CI A. UFC/mL. 1.00E+09 1.00E+08. 1.00E+06 1.00E+05 0. 2. 4. CI. EN. 1.00E+07. 6. 8. 10. S. pyogenes (cel/ml) Exponencial ( S. pyogenes (cel/ml)). 12. CA. DE. Horas. Figura 1: Curva corregida de la fase logarítmica de crecimiento de. BL. IO. TE. Streptococcus pyogenes ATCC 19615.. BI. Tiempo de generación: 71 minutos. 9 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(22) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. La concentración mínima de aceite esencial de Minthostachys mollis que se necesitó para inhibir el crecimiento de Streptococcus pyogenes ATCC 19615. O. LO. G. IC AS. fue de 40 µg/mL (Figura 2).. BI. F. S. i. CI A. g u. EN. r a. CI. Figura 3. Población microbiana resultante de la exposición a diferentes. BI. BL. IO. TE. CA. DE. concentraciones del aceite esencial de Minthostachys mollis.. 10 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(23) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DISCUSION. La concentración mínima inhibitoria (MIC) se consideran como el “estándar de oro” para determinar la sensibilidad de los microorganismos a los antimicrobianos y se definen como la concentración más baja de. IC AS. antimicrobiano el mismo que inhibirá el crecimiento visible de un. microorganismo bajo condiciones de crecimiento definidas34. Las técnicas más comunes utilizadas para determinar la concentración. G. inhibitoria mínima son la dilución en agar y dilución en caldo. Siendo el. LO. método de dilución en caldo la técnica empleada en el presente trabajo. O. que consiste en la inoculación de un número conocido de bacterias que. BI. contienen volúmenes idénticos de caldo con solución antimicrobiana en concentraciones incrementadas (usualmente geométricamente). Esta. S. técnica se utiliza para determinar las concentraciones mínimas. CI A. inhibitorias (MICs) de los agentes antimicrobianos y son los métodos de. EN. referencia para las pruebas de susceptibilidad a los antimicrobianos32.. En ensayos de dilución se pone a prueba a los microorganismos su. CI. capacidad para producir crecimiento visible sobre una serie de placas de. DE. agar (dilución en agar) o en caldo (dilución de caldo) que contiene diluciones del agente antimicrobiano. La concentración más baja de un. CA. agente antimicrobiano (en mg / L) que, en condiciones definidas in vitro, impide la aparición de crecimiento visible de un microorganismo dentro. TE. de un período de tiempo definido, se conoce como MIC32. Para determinar la concentración mínima inhibitoria del aceite esencial. IO. obtenido de hojas de Minthostachys mollis “muña” se utilizó la técnica. BI. BL. de dilución en caldo (1mL) debido a la polaridad del compuesto natural el cual podría desempeñar un papel negativo en la dilución en agar.. Otra razón por la que no se utilizó la técnica de dilución en agar o difusión en disco es que se puede reducir la eficiencia de estos métodos por la precipitación del aceite esencial en los pocillos o en los discos33. Las bacterias, por su tremenda capacidad de adaptación, pueden desarrollar mecanismos de resistencia frente a los antibióticos.. 11. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(24) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Existe una resistencia natural o intrínseca en las bacterias si carecen de diana para un antibiótico. La resistencia adquirida es la realmente importante desde un punto de vista clínico: es debida a la modificación de la carga genética de la bacteria y puede aparecer por mutación cromosómica o por mecanismos de transferencia genética; pero la. IC AS. resistencia transmisible es la más importante, estando mediada por. plásmidos, transposones o integrones, que pueden pasar de una bacteria a. G. otra3, 4.. LO. Los macrólidos y las lincosamidas (clindamicina) son considerados el. O. tratamiento de elección en pacientes alérgicos o con sospecha de alergia a. BI. β-lactámicos. En los últimos años la resistencia a esos grupos ha aumentado en distintas partes del mundo. Sin embargo, este problema no. S. afecta de la misma manera a todos; mientras que los macrólidos de 14. CI A. átomos (eritromicina, claritromicina) y 15 átomos (azitromicina) presentan cifras de resistencia del 10-30%, los de 16 átomos. EN. (midecamicina, josamicina) y las lincosamidas se mantienen por debajo del 7% de resistencia. En cada zona debe conocerse y actualizarse la. CI. prevalencia de resistencia a macrólidos-lincosamidas, para tener. DE. disponibles alternativas a las penicilinas45.. CA. Ante esta problemática existen numerosos tratamientos para contrarrestar la faringitis estreptocócica, siendo el principal agente responsable. TE. Streptococcus pyogenes o Estreptococcus β hemolítico del grupo A (EBHGA), que van desde aplicaciones de fármacos como penicilina y. IO. amoxicilina. La asociación de amoxicilina /Ac. Clavulánico no está. BI. BL. indicado como el tratamiento inicial de la infección aguda. Tampoco lo son los macrólidos indicado como terapia de primera línea; que deben reservarse para pacientes alérgicos a la penicilina. El diagnóstico apropiado de la faringitis bacteriana y el uso adecuado de los antibióticos basados en la evidencia científica disponible son cruciales45.. La prescripción antibiótica ante una faringoamigdalitis aguada (FAA) es,. 12 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(25) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. en general, exagerada, ya que la mayoría de los casos obedecen a una causa viral. El uso excesivo de antibióticos conlleva la posibilidad de producir efectos secundarios en el paciente, la selección de resistencias y el consiguiente aumento en el gasto sanitario45, es por ello que estos tipo de medicamentos en un tiempo prolongado tienden a causar efectos. IC AS. adversos en los pacientes5.. Actualmente se emplean plantas medicinales para combatir ciertas. G. enfermedades, como es el uso de la “muña” Minthostachys mollis, planta. LO. oriunda de la sierra del Perú, Las plantas producen una variedad de. O. compuestos con actividad antimicrobiana. Algunos están siempre. BI. presentes mientras que otros se producen en respuesta a la invasión microbiana o lesiones físicas. Componentes de aceites esenciales son una. S. familia diversa de compuestos orgánicos de bajo peso molecular con. CI A. grandes diferencias en la actividad antimicrobiana. Los compuestos activos se pueden dividir en tres grupos según su estructura química:. EN. terpenos, terpenoides, fenilpropenos 35.. CI. Los aceites esenciales son fuentes potenciales de nuevos compuestos. DE. antimicrobianos sobre todo contra patógenos bacterianos. Estudios in vitro han demostrado que los aceites esenciales inhiben el crecimiento. CA. bacteriano pero varían en su eficacia debido a que los componentes químicos que actúan como agentes antimicrobianos varían en tipo y. TE. concentración.36 Según Fester y col, analizó la composición química de aceite esencial de Minthostachys mollis procedente de Argentina. IO. encontrando que los componentes principales fueron pulegona y. BI. BL. mentona37,38.. Por otro lado Rojas y Usubillaga, 199539, realizó un estudio del aceite esencial de M. mollis preparado a partir de plantas recogidas a diferentes lugares. Siendo recolectadas de San Rafael, Estado Mérida, Venezuela contenía más de 75% de pulegona. Otro estudio sobre el análisis del aceite de M. mollis de plantas cultivadas en Carroll Co., Indiana, a partir. 13 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(26) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. de semillas compradas en Quito, Ecuador, mostró la presencia de neomentol (29,3%), mentol (20,6%), mentona (24%) y piperitona (9%) 40. ; Los ejemplos recogidos en Zaruma (provincia de El Oro, Ecuador). mentona (16%), carvacryl (10%), pulegona (10%) y carvacrol (9%) 41 .. IC AS. Según Mora y col, 200942, analizó el aceite esencial de M. mollis recogidos de Mollis Tuñame Paramo, estado Trujillo,. Venezuela. mediante la técnica de cromatografía de gases mostrando la presencia de. G. trece compuestos, siendo pulegona (55.2%) y mentona (36%) los. LO. componentes principales además de linalool (0.5%), minomeno(0.1%),. BI. O. isopulegona (1.5%), piperitona (1.5%), piperitenone (1.7%), entre otros.. Los compuestos químicos de los aceites esenciales de los cítricos son. S. altamente volátiles, inclusive a temperatura ambiente, por lo que una vez. CI A. obtenido el aceite se debe conservar en congelación (-20°C) y durante su prolongado 43.. EN. evaluación el tiempo de exposición al patógeno no debe ser muy. CI. El presente estudio el tiempo que se expuso a Streptococcus pyogenes a. DE. las diferentes concentraciones de aceite esencial de Minthostachys mollis fue de 71 minutos, el que además representa el tiempo que necesita la. CA. bacteria para duplicar su población llamado como tiempo de generación (Tg). Otros factores que pueden afectar en la volatilización del aceite. TE. esencial son la humedad, la concentración de los compuestos y la presión. IO. 43.. BI. BL. Al exponer al patógeno a una determinada concentración de aceite esencial, únicamente por su tiempo de generación indica que sus componentes activos principalmente los de mayor concentración necesitarían solo de este tiempo para eliminar a toda la población microbiana. Por lo que, la pulegona debería ser quien cumpla esta función.. 14 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(27) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. CONCLUSION. IC AS. La concentración mínima inhibitoria del aceite esencial de Minthostachys mollis. “muña” determinada para Streptococcus pyogenes ATCC® 19615™ fue de 40. BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI. EN. CI A. S. BI. O. LO. G. µg/mL e inhibe el crecimiento bacteriano.. 15 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(28) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS. 1. Barón S. Microbiología Médica. 4ª ed. Texas. Universidad de Texas Medical Branch en Galveston. 1996.. IC AS. 2. Winn C. W., Allen D. S., Janda M. W., Koneman W. E., Procop W. G., Schreckenberger C. P., Woods L. G. Diagnostico microbiológico. 6ª Buenos Aires: Panamericana; 2008.. ed.. G. 3. García Rodríguez JA, García Sánchez E. Resistencias bacterianas y. LO. antibioterapia. En: Eficacia in vivo Eficacia in vitro. Madrid-Barcelona: ed Doyma, S.A., 1997; 39-50.. O. 4. Martínez Freijo P. Integrones: nueva causa de resistencia a antibióticos. Rev Esp. BI. Quimioterapia 1997; 10: 191-194.. 5. Sanz M, Herrera O, Martfnez A, López JL, Agulrre JM, Garcfa MJ, et al.. CI A. S. Estudio clínico comparativo de la eficacia de azitromicina frente a amoxicilina/A. clavulánico en el tratamiento de infecciones orales agudas. RCOE. 2001; 6(04): 387-394.. EN. 6. Cano C. actividad antimicótica in vitro y elucidación estructural del aceite de las. CI. hojas de Minthostachys mollis (muña). Tesis de Maestría para Magister en recursos vegetales y terapéuticos, Lima- UNMSM, 2007.. DE. 7. Lock Olga. Investigación Fitoquímica, Métodos en el estudio de productos naturales. 2ª ed. Lima: Fondo Editorial PUCP. 1994; 23-34.. CA. 8. Domínguez X. Métodos de Investigación Fitoquímica. 3ª ed. México: Limusa S.A. 1985; 229-238.. TE. 9. Berka-Zougali B, Ferhat MA, Hassani A, Chemat F, Allaf KS. Comparative. IO. study of essential oils extracted from Algerian Myrtus communis L. leaves using microwaves and hydrodistillation.Int J Mol Sci. 2012;13(4):4673-95.. BL. 10. Prabuseenivasan S, Jayakumar M, Ignacimuthu S. In vitro antibacterial activity. BI. of some plant essential oils. BMC Complement Altern Med. 2006;6:39. 11. Reichling J, Schnitzler P, Suschke U, Saller R. Essential oils of aromatic plants with. antibacterial,. antifungal,. antiviral,. and. cytotoxic. properties--an. overview.Forsch Komplementmed. 2009;16(2):79-90. 12. Duschatzky CB, Possetto ML, Talarico LB, García CC, Michis F, Almeida NV,et al. Evaluation of chemical and antiviral properties of essential oils from South American plants.Antivir Chem Chemother. 2005; 6(4):247-51. 16 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

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(30) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. against dental caries. Arch Pharm Res. 1998 Jun; 21(3):348-52. 25. Fuertes C y Munguía Y. Estudio comparativo del aceite esencial de Minthostachys mollis (Kunth) Griseb “muña” de tres regiones peruanas por cromatografía de gases y espectrometría. 26. Cano C, Bonilla P, Roque M, Ruiz J. Actividad antimicótica in vitro y. IC AS. metabolitos del aceite esencial de las hojas d(muña).Rev Peru Med Exp Salud Publica. 2008; 25(3):298-301.. 27. Primo V, Rovera M, Zanón S, Oliva M, Demo M, Daghero J, et al.. LO. G. Determinación de La actividad antibacteriana y antiviral del aceite esencial de. Minthostachys verticillata Griseb Epiing. Rev Argent Mícrobiol 2001; 33(2):. O. 113-117.. BI. 28. Contreras G. Actividad antimicrobiana del Aceite Esencial de Minthostachys. Biólogo UNALM. Lima 1983; 52-73.. S. mollis (muña) frente a bacterias enteropatógenas. Tesis para optar el Título de. CI A. 29. Inga BA., Guerra MB. Efecto del aceite esencial de Minthostachys mollis (muña) contra algunas bacterias y hongos de interés en la Salud [Tesis de. EN. Licenciatura]. Lima: Universidad Nacional Mayor de San Marcos; 2000.. CI. 30. Palacios Vaccaro. Plantas Nativas Medicinales. 1ª ed. Lima: Concytec.1997. 31. Friedman M, Henika PR, Mandrell RE. Bactericidalactivities of plant essential. DE. oils and some of their isolated contituents against Campylobacter jejuni, Escherichia coli, Listeria monocytogenes and Salmonella entérica. J Food Prot.. CA. 2002;65(10): 1545-60.. 32. Comité Europeo para la Prueba de Susceptibilidad a los Antimicrobianos. TE. (EUCAST) de la Sociedad Europea de Microbiología Clínica y Enfermedades Infecciosas (ESCMID). Determinación de concentraciones inhibitorias mínimas. IO. (MICs) de agentes antibacterianos por dilución en caldo. Microbiología Clínica. BL. e Infección. 2003; 9: ix-xv. Doi: 10.1046 / j.1469-0691.2003.00790.x. BI. 33. Sanchez JGB, Kouznetsov VV. Antimycobacterial susceptibility testing methods for natural products research. Braz J Microbiol. 2010; 41(2):270-7.. 34. Andrews JM. Determination of Minimum Inhibitory. Concentrations.. Department of Microbiology, City Hospital NHS Trust. 2006. 35. Roller S. Los antimicrobianos naturales para el procesamiento mínimo de alimentos. 2003.Cambridge: Woodhead Publishing, Limited. 18 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(31) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 36. Hyldgaard M, Mygind T, Meyer RL. Essential oils in food preservation: mode of action, synergies and interaction}ns with food matrix components. Front Microbiol. 2012;3:12. Doi: 10.3389/fmicb.2012.00012. 37. Fester GA, Gargallo MA, Martinuzzi EA. Algunas esencias volátiles de San Luis y Córdoba. Anales de Sociedad Científica Argentina. 1947; 144, 457–471.. IC AS. 38. Fester GA, Martinuzzi EA, Retamar JA, Ricciardi, AIA. Estudios sobre esencias volátiles argentinas. Revista de la Facultad de Ingeniería Quimica. 1960; 29, 21–. G. 44.. LO. 39. Rojas LB, Usubillaga AN. Essential oil of Minthostachys mollis Grisebach from Venezuela. Journal of Essential Oil Research. 1995; 7:211–213.. O. 40. Alkire BH, Tucker AO, Maciarello MJ. Tipo, Minthostachys mollis. Product Communications. 1994; 4 (7).. BI. (Lamiaceae): an Ecuatorian mint. Economic Botany, 48, 60-64. 1000 Natural. S. 41. Malagón, O, Vila R, Iglesias J, Zaragoza T, Cañigueral S. Composition of the. CI A. essential oils of four medicinal plants from Ecuador. Flavour and Fragrance Journal. 2003; 18:527–531.. EN. 42. Mora FD, Araque M, Rojas LB, Ramirez R, Silva B, Usubillaga A. Chemical. CI. composition and in vitro antibacterial activity of the essential oil of Minthostachys mollis (Kunth) Griseb Vaught from Venezuelan Andes. Nat Prod. DE. Commun. 2009; 4(7):997- 1000.. 43. George M. Garrity, Bergey´s Manual, Of Systemati, Bacteriology. 2004;(2).. CA. 44. Ferhat, MA; Meklati, BY; Smadja, J; Chemat, F. An improved microwave Clevenger apparatus for distillation of essential oils from orange peel. Journal of. TE. Chromatography A, 2006; 112: 121-126. 45. Cots JM, Alós JI, Bárcena M, Boleda X, Cañada JL, Gómez N et al.. IO. Recommendations for management of acute pharyngisitis in adults. Enferm. BI. BL. Infecc Microbiol Clin. 2016; 34(9):585-594. 10.1016 / j.eimc.2015.02.010.. 19 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(32) BI. O. LO. G. IC AS. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI. EN. CI A. S. ANEXOS. 20 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(33) BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI. EN. CI A. S. BI. O. LO. G. IC AS. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. ANEXO 1. Determinación taxonómica de Minthostachys mollis “muña”. 21 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(34) O. LO. G. IC AS. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. BI. ANEXO 2. Presentación KWIK-STIK, Streptococcus pyogenes ATCC. BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI. EN. CI A. S. 19615TM. ANEXO 3. Minthostachys mollis “muña”. 22 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(35) BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI. EN. CI A. S. BI. O. LO. G. IC AS. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. ANEXO 4. Certificado de Identificación de Streptococcus pyogenes ATCC 19615. 23 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(36) BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI. EN. CI A. S. BI. O. LO. G. IC AS. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. ANEXO 5. Reporte de análisis de pruebas bioquímicas a Streptococcus pyogenes ATCC 19615 Laboratorio MICROBIOLOGICS.. 24 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(37) CA. DE. CI. EN. CI A. S. BI. O. LO. G. IC AS. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. BI. BL. IO. TE. ANEXO 6. Equipo de Hidrodestilación Directa tipo Clevenger. 25 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(38) CA. DE. CI. EN. CI A. S. BI. O. LO. G. IC AS. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Figura 02. Exposición de Streptococcus pyogenes ATCC 19615 a las diferentes. BI. BL. IO. TE. concentraciones de aceite esencial de Minthostachys mollis “muña”.. 26. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

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