Actividad antifúngica in vitro del aceite esencial de las hojas de Myrcianthes oreophila “Unkia” frente a Candida albicans

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(1)Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA. Y. BI. O. Q. UI M. IC A. ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA. RM. AC. IA. TESIS I. FA. Actividad antifúngica in vitro del aceite esencial de las hojas de Myrcianthes. TE. CA. DE. oreophila “Unkia” frente a Candida albicans.. BI BL. IO. AUTOR:. BENITES TORRES, Evelin Mirian. ASESOR:. Dr. RUIZ REYES, Segundo Guillermo COASESOR: Ms. ALAYO ESPINOZA, Gerardo. TRUJILLO – PERÚ 2018. i Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(2) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. DEDICATORIA. A Dios quien me concedió el privilegio de la vida, por su inmenso amor y por estar conmigo en todo momento ayudándome a aprender de mis errores. Gracias por las pruebas que me hacen crecer como. IC A. persona y me permiten dar lo mejor de mí, pero lo. Y. BI. O. Q. UI M. mejor de todo que me acercan más a ti.. IA. A mis padres Bacilio y Mirian, por enseñarme que. AC. las metas son alcanzables y que una caída no es una. RM. derrota sino el principio de una lucha que siempre. FA. termina en Logros y Éxitos. Gracias por siempre. y sus consejos para hacer de mí una mejor persona.. BI BL. IO. TE. CA. DE. orientarme y estar a mi lado brindándome su apoyo. A mis hermanas Alicia, Suelidt y Lisbeth por siempre estar pendientes de mí, por estar presentes aportando buenas cosas a mi vida, gracias por su apoyo.. Evelin Mirian. i Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(3) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. AGRADECIMIENTO. Expreso mi sincero agradecimiento a todas las personas que me ayudaron de una u otra. IC A. manera en el desarrollo de mi tesis y en especial a:. Q. UI M. A mis padres por brindarme todo su apoyo incondicional.. BI. O. A mi asesor Dr. Segundo Guillermo Ruiz Reyes por brindarme la oportunidad de. AC. IA. Y. realizar este trabajo de investigación y guiarme en el desarrollo del mismo.. RM. Al profesor Gerardo Alayo Espinoza por guiarme y brindarme las facilidades para. DE. FA. realizar el trabajo de investigación y el uso del laboratorio.. CA. A todas aquellas personas que de una u otra forma contribuyeron en la realización del. BI BL. IO. TE. presente trabajo, mi más profundo agradecimiento.. Evelin Mirian. ii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(4) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. PRESENTACIÓN. SEÑORES MIEMBROS DEL JURADO:. En cumplimiento con las disposiciones vigentes del Reglamento de Grado y Título de la. IC A. Facultad de Farmacia y Bioquímica de la Universidad Nacional de Trujillo- La. UI M. Libertad, someto a vuestra consideración y elevado criterio el presente informe de Tesis. O. Q. I titulado:. BI. Actividad antifúngica in vitro del aceite esencial de las hojas de Myrcianthes oreophila. IA. Y. “Unkia” frente a Candida albicans.. RM. AC. Sea propicia esta oportunidad para manifestar mi más profundo agradecimiento a mi. FA. Alma Mater y a toda su plana docente, por su labor de educadores y por la formación. DE. profesional que me han brindado a través de sus enseñanzas.. CA. De manera muy especial agradezco la valiosa colaboración de los señores miembros del. TE. jurado.. BI BL. IO. Dejo a vuestra consideración Señores Miembros del Jurado, la respectiva calificación del presente informe.. Trujillo, 16 de Agosto del 2018. Evelin Mirian Benites Torres. iii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(5) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. JURADO DICTAMINADOR. Dra. Marilú Roxana Soto Vásquez. RM. AC. IA. Y. BI. O. Q. UI M. IC A. PRESIDENTE. MIEMBRO. BI BL. IO. TE. CA. DE. FA. Dr. Segundo Guillermo Ruiz Reyes. Dr. Francisco Abanto Zamora MIEMBRO. iv Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(6) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. RESUMEN. En la actualidad cientos de plantas son utilizadas en la medicina, pero la ciencia moderna quiere conocer los principios activos responsables para procurar su síntesis o proponer modificaciones estructurales en busca de una mayor actividad. El objetivo de este trabajo fue determinar la actividad antifúngica del aceite esencial de. IC A. las hojas de Myrcianthes oreophila “Unkia” frente a Candida albicans. Para ello se utilizó 10 kg de hojas de Myrcianthes oreophila “Unkia” identificación taxonómica N°. UI M. 58317, recolectadas del distrito de Llaugueda, provincia de Otuzco, región La Libertad.. Q. Se procedió a realizar la extracción del aceite esencial mediante el método de. BI. O. destilación por arrastre con vapor de agua y para evaluar la actividad antifúngica, se. Y. utilizó Cepa de Candida albicans ATCC 10231, procedente del Laboratorio de. IA. Microbiología de la Facultad de Ciencias Biológicas de la Universidad Nacional de. AC. Trujillo, aplicándose el Método de Kirby-Bauer (difusión en agar). Para el efecto. RM. antifúngico, el grupo experimental I (aceite esencial al 25%) mostró un promedio de. FA. 5,914 mm de diámetro, para el grupo experimental II (aceite esencial al 50%) reveló un promedio de 13,498 mm de diámetro y para el grupo experimental III (aceite esencial al. DE. 75%) de mayor concentración presentó un promedio de 28,476 mm de diámetro. De. CA. esto se concluye que el aceite esencial de hojas de Myrcianthes oreophila “Unkia” tiene. BI BL. IO. TE. actividad antifúngica in vitro frente a Candida albicans.. Palabras claves: Myrcianthes oreophila, Unkia, Candida albicans, aceite esencial, actividad antifúngica. v Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(7) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ABSTRACT. At present hundreds of plants are used in medicine, but modern science wants to know the active principles responsible for seeking their synthesis or propose structural changes in search of greater activity. The objective of this work was to determine the antifungal activity of the essential oil of. IC A. the leaves of Myrcianthes oreophila "Unkia" against Candida albicans. To do this, 10 kg of leaves of Myrcianthes oreophila "Unkia" taxonomic identification No. 58317 were. UI M. used, collected from the district of Llaugueda, province of Otuzco, La Libertad region.. Q. The extraction of the essential oil was carried out by the steam distillation method and. BI. O. to evaluate the antifungal activity, strain of Candida albicans ATCC 10231 was used,. Y. from the Microbiology Laboratory of the Faculty of Biological Sciences of the. IA. University Nacional de Trujillo, applying the Kirby-Bauer Method (agar diffusion). For. AC. the antifungal effect, experimental group I (25% essential oil) showed an average of. RM. 5.914 mm in diameter, for experimental group II (50% essential oil) it revealed an. FA. average of 13.498 mm in diameter and for the experimental group III (75% essential oil) of higher concentration presented an average of 28.476 mm in diameter. From this it is. DE. concluded that the essential oil of leaves of Myrcianthes oreophila "Unkia" has. BI BL. IO. TE. CA. antifungal activity in vitro against Candida albicans.. Keywords: Myrcianthes oreophila, Unkia, Candida albicans, essential oil, antifungal activity. vi Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(8) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ÍNDICE. i. AGRADECIMIENTO……………………………………………………….... ii. PRESENTACIÓN…………………………………………………………….. iii. IC A. DEDICATORIA………………………………………………………………. UI M. JURADO DICTAMINADOR……………………………………………….... v. BI. O. Q. RESUMEN……………………………………………………………………. iv. vi. IA. Y. ABSTRACT…………………………………………………………………... RM. AC. ÍNDICE….…………………………………………………………………….. 1. FA. INTRODUCCIÓN…………………………………………………………….. vii. CA. DE. MATERIAL Y MÉTODO……………………………………………………. IO. TE. RESULTADOS……………………………………………………………….. 9. 15. 16. CONCLUSIONES…………………………………………………………….. 20. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS………………………………………... 21. ANEXOS………………………………………………………………………. 26. BI BL. DISCUSIÓN…………………………………………………………………... vii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(9) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. I.. INTRODUCCIÓN. La naturaleza que nos rodea, de la cual somos parte y dependemos, nos ofrece una serie de recursos que posibilitan la existencia del hombre sobre la tierra. Entre estos recursos que nos ofrece tenemos a las plantas y animales que desde tiempos remotos se vienen utilizando para tratar enfermedades y que su uso se ha transmitido de. IC A. generación en generación asegurando que los remedios tradicionales y populares a. UI M. base de estos elementos son más seguros y no tienen efectos colaterales que los. Q. fármacos modernos presentan y que estos remedios caseros pueden emplearse de. BI. O. muchas maneras en: infusiones, cocimientos, tinturas, cataplasmas, emplastos,. Y. baños, gárgaras, colirios, inhalaciones, maceración, pomadas y zumo, acompañado. AC. IA. del ritual psicoterapéutico sugestivo-placebo (1).. FA. RM. En la actualidad cientos de plantas son utilizadas en la medicina, pero la ciencia. DE. moderna, analizando y estudiando su efectos terapéuticos, quiere precisar, comparar. CA. y clasificar las diversas propiedades, no con el fin de disminuir esta confianza en la. TE. naturaleza, sino para agrupar a las plantas de efectos similares, para conocer los. IO. principios activos responsables de cortar, aliviar o curar enfermedades, separarlos de. BI BL. las plantas que los contienen, determinar sus estructuras químicas, procurar su síntesis, proponer modificaciones estructurales en busca de una mayor actividad y, finalmente, dar a conocer a la humanidad los resultados de los estudios (2). El empleo terapéutico de las plantas medicinales en los pueblos constituye una parte importante de la cultura universal que ha acumulado la humanidad. El Perú presenta una riqueza y megadiversidad de plantas medicinales nativas que es uno de los pilares de la etnofarmacología y la medicina tradicional, desde la época del Incanato hasta la actualidad, siendo estas utilizadas en forma empírica por sus bondades y 1 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(10) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. propiedades terapéuticas en el cuidado y restauración de la salud, según estudios realizados, podemos agruparlos de la siguiente manera: propiedades nutritivas, antineoplásicas,. antioxidantes,. energizantes,. hipoglicemiantes,. antiinflamatorio,. hipotensoras,. cicatrizantes,. hipocolesterolemiante,. inmuno. estimulante/modulador, protector gástrico, antifúngico, adyuvante de fertilidad, antipruriginoso tópico, antiveneno ofídico, y la propiedad antimicrobiana (3).. IC A. Muchos países se han involucrado en la obtención de medicamentos a partir de las. UI M. plantas; Bulgaria ha estudiado la actividad antiinfecciosa de los polifenoles. O. Q. extraídos de sus plantas medicinales, los países del Tercer Mundo poseen los. Y. BI. primeros lugares en estos programas de estudio, para garantizar la obtención de. IA. preparados asequibles a toda la población, estos estudios de plantas medicinales ha. RM. AC. ganado mucha importancia, ya que la actividad antimicrobiana de los extractos de. FA. plantas y productos naturales ha revelado el potencial de las plantas superiores como. DE. una fuente de agentes antiinfectivos (4).. CA. La actividad antifúngica de las plantas ha sido muy estudiada por la resistencia de. IO. TE. los gérmenes de las micosis a los distintos tratamientos, sobre todas las micosis (3). .. BI BL. superficiales producidas por las diferentes especies de dermatofitos. El hombre, desde tiempos remotos, se ha interesado en las fragancias asociadas con algunas plantas. Hace ya mucho tiempo se descubrió que los principios activos o esenciales a que se deben esos olores tenían consistencia oleosa y podían ser separados por calentamiento o arrastre con vapor de agua, por lo que se les denominó aceites esenciales (5). Se definen como “aceites esenciales” a las fracciones líquidas volátiles, generalmente destilables con agua o en corriente de vapor, que contienen las 2 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(11) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. sustancias responsables del aroma de las plantas y que son importantes en la industria cosmética (perfumes y aromatizantes), alimentaria (condimentos y saborizantes) y farmacéutica (principios activos y saborizantes). Los aceites esenciales generalmente son mezclas complejas de más de 100 componentes que pueden tener la siguiente naturaleza química: compuestos alifáticos de bajo peso molecular (alcanos, alcoholes, aldehídos, cetonas, ésteres y ácidos), terpenoides. IC A. (monoterpenos, sesquiterpenos y diterpenos) y fenilpropanoides. En años recientes. UI M. se han estudiado los extractos y aceites esenciales de condimentos y especias desde. Q. un punto de vista funcional. Es decir, se ha estudiado si los extractos o aceites. BI. O. esenciales tienen actividad antimicrobiana, antifúngica, si actúan como agentes. IA. Y. antioxidantes o si aportan nutrientes (6).. RM. AC. Los aceites esenciales se encuentran casi exclusivamente en vegetales superiores y. FA. según la familia de plantas de que se trate, los aceites esenciales están en estructuras. DE. secretorias especializadas, como pelos glandulares (labiadas), en células, tubos. CA. oleíferos (llamados vitas), canales secretores, etc. Pueden almacenarse en todos los. TE. órganos vegetales: en flores, igualmente en hojas y, aunque sea menos habitual, en. IO. cortezas, leños, raíces, rizomas, frutos, semillas. Aunque todos los órganos de una. BI BL. misma especie pueden contener aceite esencial, la composición de éste puede variar según su localización (7, 8, 9). En la actualidad, se ha revalorado el campo de aplicación de las plantas y especies aromáticas, en farmacología y biotecnología, la investigación científica le abre un nuevo espacio a los aceites esenciales, evaluando sus efectos por medio de pruebas in vitro, estas muestran un amplio espectro de actividades biológicas contra hongos (3). .. 3 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(12) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. El aumento de las infecciones fúngicas invasoras y nosocomiales que se han observado en las últimas tres décadas a nivel mundial, constituyen una causa importante de morbi-mortalidad en pacientes inmunocomprometidos.. Las. inmunodeficiencias primarias o adquiridas, los tratamientos con antibióticos de amplio espectro, los fármacos antineoplásicos e inmunosupresores, los trasplantes de órganos sólidos y médula ósea, la alimentación parenteral, el empleo de catéteres. IC A. intravenosos y la prolongada permanencia en las Unidades de Cuidados Intensivos,. O. Q. desarrollar una infección fúngica invasora grave (10).. UI M. entre otras causas, constituyen los factores predisponentes de mayor riesgo para. Y. BI. El hombre puede resultar infectado con levaduras del género Candida, siendo la. IA. fuente de infección los propios humanos y también los animales u otras fuentes. RM. AC. antes mencionadas. Las levaduras del género Candida tienen una amplia. FA. distribución en la naturaleza, encontrándose en casi todos los hábitats terrestres y. DE. acuáticos. Sin embargo, las conocidas como principales responsables de candidiasis. CA. humana tienen una distribución mucho más restringida y se encuentran. TE. frecuentemente asociadas al hombre y a otros animales homotermos. De ellas, la. IO. mayoría de los autores coinciden en designar como los principales agentes. BI BL. etiológicos de enfermedad a las especies como Candida albicans, C. tropicalis, C. pseudotropicalis, C. guillermondii, C. krusei, C. parapsilosis, C. zeylanoides, C. glabrata, C. viswanathii, C. lusitaniae y C. dubliniensis (10). La Candida albicans es un hongo diploide asexual (forma de levadura) que normalmente se encuentra en la cavidad oral, en el tracto gastrointestinal y en la vagina. Está envuelta en un rol relevante en la digestión de los azúcares mediante un proceso de fermentación. Se empieza a proliferar y puede dar lugar a un con junto de enfermedades denominadas Candidiasis o micosis candidiásica, 4 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(13) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. que pueden consistir en leves infecciones de mucosas y. piel o desencadenar. diseminaciones sistémicas graves, pudiendo afectar órganos vitales. Según la extensión de la infección y el estado general del paciente se decide un tratamiento tópico o sistémico. Así tópicamente se puede emplear cotrimazol al 1%, miconazol, ketoconazol, sertoconazol, terbinafina o naftilina. Los tratamientos sistémicos frecuentemente empleados son itraconazol o fluconazol (10).. IC A. Por lo expuesto anteriormente queremos dar soluciones a los problemas que día a. UI M. día atraviesa nuestra población, especialmente la de bajos recursos. Por ello. O. Q. recurrimos a recursos endémicos que pueden ser aprovechables por la población. Y. BI. como es la “Unkia” y estudiarla para su posible beneficio social.. AC. IA. La familia Myrtaceae es reconocida en el Perú por presentar 20 géneros y 165. RM. especies, la mayoría arbusto y árboles. El género más rico en especies endémicas es. FA. Eugenia. Las Myrtaceae endémicas se encuentran principalmente en las regiones. DE. Bosques Húmedos Amazónicos y Mesoandina, entre los 100 y 3600 m de altitud.. CA. Seis especies endémicas se encuentran dentro del Sistema Nacional de Áreas. IO. TE. Naturales Protegidas por el Estado (11).. BI BL. M. oreophila (Diels) McVaugh “Unkia”. Especie arbórea endémica del Perú, que crece en la sierra. Se trata de un arbusto con flores blancas que frecuenta las laderas Occidentales ubicadas entre los 2600 – 3200 m.s.n.m. en los departamentos de Cajamarca y La Libertad. Las hojas muy olorosas en infusión son usadas comúnmente como estomacales (12). Unkia o Unquia es un arbusto, que de modo general puede llegar a dos metros cincuenta de altura. De hojas ovaladas. La propiedad de esta planta es para curar dolores reumáticos o musculares y cuando las mujeres tienen parto toman el 5 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(14) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. cocimiento de esta planta para macizar las caderas que quedan débiles después del parto (13). Moura y Sarmento (2012) en su trabajo de investigación “Actividad antifúngica del aceite esencial de Eugenia caryophyllata sobre cepas de Candida tropicalis de aislados clínicos”, investigaron la actividad del aceite esencial de Eugenia caryophyllata contra las cepas de C. tropicalis, utilizando el método de difusión en. IC A. disco, la concentración inhibitoria mínima (CIM) y la concentración fungicida. UI M. mínima (CFM). En el método de difusión en disco, con los aceites esenciales de. O. Q. Cinnamomum zeylanicum, Eugenia caryophyllata y Origanum vulgare se. Y. BI. obtuvieron mayores valores de inhibición. La CIM y CFM del aceite esencial de. IA. Eugenia caryophyllata fueron 512 y 1024 µg/mL, mientras que los de la. RM. AC. anfotericina B fueron idénticos, 2 µg/mL. Por lo tanto, se puede concluir que el. FA. aceite esencial de E. caryophyllata tiene potente actividad antifúngica y puede ser. DE. objeto de nuevos estudios sobre esta actividad (14).. aceite. esencial. a. partir. de Eucalyptus. tereticornis sobre. el. hongo. TE. del. CA. Murillo y Acevedo (2011) en su estudio de investigación “Actividad antimicótica. IO. patógeno Fusarium oxysporum”, evaluaron la actividad antimicótica del aceite. BI BL. esencial de Eucalyptus tereticornis (Myrtaceae) y 2 fracciones sobre el hongo Fusarium oxysporum, patógeno de importancia tanto clínica como agrícola. . El aceite esencial total, compuesto principalmente por citronelal (44,8 %), citronelol (9,78 %) presentó un efecto fungicida a una concentración de 3 g/L y actividad fungistática a concentraciones menores. Las fracciones A y B compuestas en su mayoría por p-mentano-3,8-diol (18,95 %) y acetato de citronelol (24,34 %) respectivamente fueron más activas que el extracto total. Las observaciones a nivel microscópico mostraron daños y cambios en hifas y clamidosporas, así como 6 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(15) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. disminución en el número de conidias. La actividad fungistática observada y los daños morfológicos fueron dependientes de la concentración (15). Newar (2009) en su trabajo de investigación “Evaluación preliminar de la actividad fungicida de los aceites esenciales de eucalipto (eucalyptus tereticornis, myrtaceae) y cáscara de naranja (citrus sinensis, rutaceae) sobre algunos hongos filamentosos” determinó la actividad antifúngica de los aceites esenciales de Eucalyptus. IC A. sp (Myrtaceae) y cáscara de naranja, Citrus sinensis (Rutaceae) a diferentes. UI M. concentraciones frente a los modelos biológicos: Trichoderma harzianum, Absidia. O. Q. sp y Fusarium oxysporum, hongo que es considerado como un patógeno importante. Y. BI. de humanos y plantas. El aceite esencial de eucalipto inhibió completamente el. IA. crecimiento de este hongo a 3000 ppm, mostrando mayor potencial inhibitorio que. RM. AC. el fungicida comercial Dithane empleado a 10000 ppm. Los hongos Absidia sp y. FA. Trichoderama harzianum resultaron ser más susceptibles a los componentes del. DE. aceite y su crecimiento fue inhibido por completo a 1000 ppm. El aceite esencial de. CA. cáscara de naranja fue menos efectivo y solamente mostró actividad fungicida sobre. IO. TE. el hongo Trichoderma harzianum a 11000 ppm (16).. BI BL. Por lo anterior, este trabajo de investigación plantea la posibilidad de buscar en los aceites esenciales naturales alternativas terapéuticas eficientes, así como su actividad antifúngica. Por lo cual planteamos el siguiente problema: ¿Presentará actividad antifúngica el aceite esencial de las hojas de Myrcianthes oreophila “Unkia” frente a Candida albicans?. 7 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(16) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 1. HIPÓTESIS: El aceite esencial de las hojas de Myrcianthes oreophila “Unkia” presenta actividad antifúngica frente a Candida albicans. 2. OBJETIVOS: 2.1 OBJETIVO GENERAL: -. Determinar la actividad antifúngica del aceite esencial de las hojas de. IC A. Myrcianthes oreophila “Unkia” frente a Candida albicans.. Obtener el aceite esencial de las hojas de Myrcianthes oreophila. Q. -. UI M. 2.2 OBJETIVOS ESPECÍFICOS:. Determinar la actividad antifúngica in vitro del aceite esencial de las. IA. -. Y. BI. O. ”Unkia”.. RM. AC. hojas de Myrcianthes oreophila “Unkia” a las concentraciones de 25%,. BI BL. IO. TE. CA. DE. FA. 50% y 75% frente a Candida albicans.. 8 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(17) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. II.. MATERIAL Y MÉTODO 1. MATERIAL: 1.1. MATERIAL BIOLÓGICO: •. Material botánico: Se utilizó 10 kg de hojas frescas de Myrcianthes oreophila “Unkia” identificación taxonómica N° 58317, procedentes del. Material microbiológico: Cepa de Candida albicans ATCC 10231,. UI M. •. IC A. distrito de Llaugueda, provincia de Otuzco, región La Libertad.. O. Q. procedente del Laboratorio de Microbiología de la Facultad de Ciencias. Y. BI. Biológicas de la Universidad Nacional de Trujillo.. RM. MATERIAL DE VIDRIO. FA. 1.2.1. AC. IA. 1.2. MATERIAL Y EQUIPOS DE LABORATORIO:. -. TE. EQUIPOS. Balanza Analítica “Ohaus -GA200”. IO. 1.2.2. CA. DE. - Material de vidrio de uso común en laboratorio.. Balanza mecánica triple brazo “Ohaus – 700/800”. -. Cocina Eléctrica “Ilko-Teba”. -. Baño María “Memmert – S-140”. -. Equipo de Destilación por arrastre con vapor de agua. -. Estufa “Memmert” U-40. -. Incubadora “Precisión”. -. Refrigerador “Coldex”. -. Horno mufla “Memmert”. BI BL -. 9 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(18) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Autoclave a Presión “All American 25X”. -. Micropipeta Himedia “LA-289” de 100uL. Agua destilada. -. Agar sabouraud. -. Etanol 96° GL. -. Cloruro de sodio. Merck. -. Dimetil sulfoxido (DMSO). Merck. -. Hidróxido de sodio. Merck. -. Sulfato de sodio anhidro. Merck. O. Q. UI M. -. IC A. REACTIVOS Y SOLVENTES. IA. Y. BI. 1.2.3. -. RM. AC. 2. MÉTODO:. Recolección. DE. 2.1.1.. FA. 2.1. Estudio farmacognostico (17,18,19)). CA. La especie Myrcianthes oreophila “Unkia” fue recolectada del distrito de. TE. Llaugueda, provincia de Otuzco, región La Libertad. Ubicado a una altitud. BI BL. IO. de 2 641 m.s.n.m, latitud sur: 7º54’10’’ y longitud oeste: 78º34’20’’.. 2.1.2.. Identificación y clasificación taxonómica. Un ejemplar completo de la especie vegetal se llevó al Herbarium Truxillense (HUT) para su identificación y posterior clasificación taxonómica según el sistema filogenético de la especie. Código de identificación taxonómica N° 58317.. 10 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(19) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.1.3.. Selección:. La especie vegetal recolectada se separó, principalmente las hojas, descartándose las deterioradas y eliminándose las materias extrañas orgánicas e inorgánicas.. 2.1.4.. Lavado y Limpieza. IC A. La especie vegetal fue lavada con agua potable, seguido de una desinfección. UI M. utilizando hipoclorito de sodio al 0,1%. Posteriormente se realizó un. Extracción del aceite esencial. IA. Y. 2.1.5.. BI. O. Q. enjuague con abundante agua destilada.. AC. Destilación por arrastre con vapor de agua. FA. RM. Las hojas frescas de Myrcianthes oreophila “Unkia”, se colocaron en la. DE. cámara del equipo de extracción de aceites esenciales (B), en el generador. CA. de vapores (A) se colocó agua y se conectó a la energía eléctrica que calentó. TE. hasta ebullición, de esta manera el vapor de agua generado atravesó por la. IO. cámara extractora arrastrando el aceite esencial. Al pasar por el refrigerante. BI BL. (C) condensó los vapores obteniéndose el hidrolato. (Ver anexo 3). Purificación del aceite esencial El hidrolato obtenido se vierte a un embudo de separación en el cual el aceite se posicionó en la fase superior (Ver anexo 4), se le agregó cristales de cloruro de sodio y se procedió a separar.. 11 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(20) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. El aceite esencial, se deshidrato con sulfato de sodio anhidro, y se recibió en un frasco ámbar esterilizado y se almacenó a 4 °C y protegiéndose de la luz con papel de aluminio. 2.2. Actividad antifúngica (19,20) Se realizó por el Método de Kirby-Bauer (difusión en agar). Preparación de las diluciones del aceite esencial. IC A. 2.2.1.. UI M. En crioviales de 2 ml se colocó el aceite esencial y se procedió a realizar las. BI. O. Q. diluciones a diversas concentraciones en Dimetilsulfoxido: 25 uL de aceite esencial + 75 uL de Dimetilsulfoxido.. 50%. 50 uL de aceite esencial + 50 uL de Dimetilsulfoxido.. 75%. 75 uL de aceite esencial + 25 uL de Dimetilsulfoxido.. FA. RM. AC. IA. Y. 25%. DE. Previamente se demostró que el Dimetilsulfóxido no ejercía actividad. CA. inhibitoria sobre el crecimiento de la cepa de Candida albicans ATCC. IO. TE. 10231. Luego se procedió a sellar los crioviales y guardarlos en refrigeración. BI BL. hasta realizar la prueba. 2.2.2.. Ensayo por el método de difusión en disco a. Preparación del Inóculo fúngico Se tomó colonias del cultivo original de la cepa de Candida albicans ATCC 10231 con el asa bacteriológica y se preparó una suspensión en 8 ml de solución salina fisiológica estéril. Se compararon con el patrón de turbidez, ajustando la densidad de la suspensión problema a la del patrón 1 de la escala de McFarland. 12. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(21) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. b. Preparación del Medio de Cultivo Se utilizó Agar Sabouraud como medio de cultivo para la cepa de Candida albicans ATCC 10231. Para la preparación del medio se procedió a calentar el agar en la cocina hasta su homogenización, posteriormente se enfrió y ajustó el pH, se esterilizó en autoclave a 121 ºC por 1 atmosfera durante 45 min de pre. IC A. esterilización y 15 min en esterilización.. UI M. Se agregó 15 mL a las placas Petri de 90 x14 mm; hasta un grosor. Q. homogéneo de aproximadamente 4 mm. Luego se dejó enfriar las placas. BI. O. a temperatura ambiente durante 40 min hasta que gelifique antes de. Siembra en las placas. RM. 2.2.3.. AC. IA. Y. proceder a la siembra.. FA. Después de haber ajustado la densidad del inóculo en la escala de. DE. McFarland, se tomó 100 uL con pipeta estéril y se vertió en cada placa,. CA. luego se procedió a realizar el hisopado, finalmente se llevó a incubar a. BI BL. IO. TE. temperatura 37 °C.. 2.2.4.. Preparación de los discos. Se prepararon discos de 5 mm de diámetro empleando papel de celulosa. Se esterilizaron en estufa a 180 ºC durante 2 h y se conservaron en frascos cerrados, luego se colocó 10 uL por disco de cada una de las concentraciones del aceite esencial al 25%, 50% y 75%.. 13 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(22) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.2.5.. Aplicación de los discos Sobre las placas sembradas se colocó los discos con las distintas concentraciones del aceite esencial presionando con suavidad sobre la superficie del agar con una pinza estéril. En una placa de 90 mm de diámetro se colocaron 3 discos que fueron distribuidos de manera que no se produzca superposición de los halos de. IC A. inhibición. Transcurrido 5 min, las placas serán invertidas y llevadas a. O. Medición de los diámetros de inhibición del crecimiento microbiano. BI. 2.2.6.. Q. UI M. incubar a 37 °C durante 24 h.. IA. Y. Pasado el tiempo de 24 h de incubación, se midió el diámetro de cada. AC. halo o zona de inhibición, se expresó en milímetros. Las mediciones se. DE. 2.3. Análisis estadístico. FA. RM. realizaron colocando una regla sobre el reverso de la placa.. CA. Los datos fueron procesados en el programa estadístico SPSS. Para el contraste. IO. TE. de hipótesis se usó pruebas no paramétricas como la prueba de Kruskal-Wallis y. BI BL. la prueba de Kolmogorov- Simirnov.. 14 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(23) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. III.. RESULTADOS. Tabla N° 01: Promedio de los halos de inhibición producidos por exposición del aceite esencial de las hojas de Myrcianthes oreophila “Unkia” frente a Candida albicans ATCC 10231.. PROMEDIO* 0. Grupo experimental I. Aceite esencial al 25%. 5,914 ± 0,5. Grupo experimental II. Aceite esencial al 50%. 13,498 ± 0,5. Grupo experimental III. Aceite esencial al 75%. IC A. DMSO. 28,476 ± 0,5. UI M. Control negativo (0%). BI. O. Q. Leyenda: * Incluye diámetro del disco.. DE. FA. 25. CA. 20. PROMEDIO. 13,498. TE. 15. IO. MILÍMETROS. 28,476. RM. 30. AC. IA. Y. GRÁFICO N°01: Promedios de los halos de inhibición del aceite esencial de las hojas de Myrcianthes oreophila "Unkia" frente a Candida albicans ATCC 10231.. 5. BI BL. 10. 5,914. 0 0 CONTROL NEGATIVO. GRUPO EXPERIMENTAL I. GRUPO EXPERIMENTAL II. GRUPO EXPERIMENTAL III. En el Gráfico N0 01, se aprecia que conforme aumenta la concentración del aceite esencial de las hojas de Myrcianthes oreophila “Unkia” aumenta el diámetro del halo de inhibición, es decir aumenta el efecto inhibitorio. 15 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(24) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. IV.. DISCUSIÓN. Las plantas han sido desde la antigüedad un recurso al alcance del ser humano para su alimentación y la curación de sus enfermedades; estas últimas llamadas plantas medicinales eran veneradas por las virtudes que se les había reconocido, transmitiéndose sus virtudes de generación en generación (21).. IC A. Aún en la actualidad cientos de plantas son utilizadas en la medicina, pero la ciencia. UI M. moderna, analizando y estudiando los efectos terapéuticos de las plantas, quiere. Q. precisar, comparar y clasificar las diversas propiedades, no con el fin de disminuir esta. BI. O. confianza en la naturaleza, sino para agrupar a las plantas de efectos similares, para. Y. conocer los principios activos responsables de cortar, aliviar o curar enfermedades,. AC. IA. separarlos de las plantas que lo contienen, determinar sus estructuras químicas, procurar. RM. su síntesis, proponer modificaciones estructurales en busca de una mayor actividad y,. DE. FA. finalmente dar a conocer a la humanidad los resultados de estos estudios (21).. CA. El material vegetal al ser sometido al vapor de agua, libera una mezcla odorífera liquida. TE. conocida como aceite esencial de una gran variedad de sustancias volátiles, que. IO. recuerdan el olor en forma muy concentrada de la misma planta. Esta mezcla puede. BI BL. tener desde 50 hasta más de 300 sustancias químicas y está compuesta por hidrocarburos terpénicos, sus derivados oxigenados, alcoholes, aldehídos y cetonas, así como por éteres, esteres, compuestos fenólicos, fenilpropanoides y otros derivados (22). Debido a la variedad de especies dentro de una misma familia, es necesario primero hacer el reconocimiento de la planta a estudiar, por lo cual el material biológico procedente del distrito de Llaugueda, provincia de Otuzco, región La Libertad, fue debidamente identificado en el Herbarium Truxillense de la Universidad Nacional de Trujillo con código de identificación taxonómica N° 58317. 16 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(25) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Después de la identificación de la especie en estudio y el tratamiento de las hojas, para el análisis el que incluyó la recolección, selección y lavado; se procedió a realizar la extracción por destilación del aceite esencial y la determinación de la actividad antifúngica in vitro del aceite esencial de las hojas de Myrcianthes oreophila “Unkia” a concentraciones diferentes de 25%, 50% y 75% frente Candida albicans. a través de la medición de la susceptibilidad antifúngica.. IC A. Con respecto a la determinación de la actividad antifúngica, en la tabla 1 se muestran. UI M. los resultados de los diámetros de los halos de inhibición de las diferentes. O. Q. concentraciones del aceite esencial de las hojas de Myrcianthes oreophila “Unkia”; así. Y. BI. tenemos, para el grupo experimental I (aceite esencial al 25%) un promedio de 5,914. IA. mm de diámetro, para el grupo experimental II (aceite esencial al 50%) 13,498 mm de. RM. AC. diámetro y para el grupo experimental III (aceite esencial al 75%) registró un promedio. FA. de 28,476 mm de diámetro.. DE. No se obtuvo halos de inhibición para el grupo control negativo. Es así que el promedio. CA. del halo de inhibición del grupo experimental III (aceite esencial al 75%) fue mayor que. IO. TE. el de los otros grupos. Estos resultados indican mayor susceptibilidad del efecto. BI BL. antifúngico a una concentración al 75%. El análisis estadístico de la prueba de homogeneidad tiene significancia ˂ 0,05 y confirmando con la prueba de Kruskal-Wallis hay diferencia en la eficiencia de los tratamientos. Si bien es cierto no hay trabajos previos, en la especie Myrcianthes oreophila, con los cuales se pueda contrastar el trabajo realizado; existen investigaciones sobre la familia Myrtaceae, como el trabajo realizado por Moura y Sarmento, se encontró que la actividad antifúngica del aceite esencial de de Eugenia caryophyllata sobre cepas de 17 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(26) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Candida tropicalis de aislados clínicos utilizando el método de difusión en disco, la concentración inhibitoria mínima (CIM) y la concentración fungicida mínima (CFM). En el método de difusión en disco, con los aceites esenciales de Cinnamomum zeylanicum, Eugenia caryophyllata y Origanum vulgare se obtuvieron mayores valores de inhibición, concluyendo que el aceite esencial de E. caryophyllata tiene potente actividad antifúngica (14).. IC A. En la investigación de Giraldo Newar que evaluó la actividad fungicida de los aceites. determinó que el aceite. O. Q. sinensis, rutaceae) sobre algunos hongos filamentosos,. UI M. esenciales de eucalipto (eucalyptus tereticornis, myrtaceae) y cáscara de naranja (citrus. Y. BI. esencial de eucalipto inhibió completamente el crecimiento de este hongo a 3000 ppm,. IA. mostrando mayor potencial inhibitorio que el fungicida comercial Dithane empleado a. RM. AC. 10000 ppm. Los hongos Absidia sp y Trichoderama harzianum resultaron ser más. FA. susceptibles a los componentes del aceite y su crecimiento fue inhibido por completo a. DE. 1000 ppm, incluso mostro más actividad antifúngica que la cáscara de naranja que. CA. fue menos efectivo y solamente mostró actividad fungicida sobre el hongo Trichoderma. IO. TE. harzianum a 11000 ppm (16).. BI BL. En otro trabajo realizado por Murillo y Acevedo se encuentra que el aceite esencial a partir de Eucalyptus tereticornis presenta actividad antifúngica sobre el hongo patógeno Fusarium oxysporum, encontrándose que el aceite esencial total, compuesto principalmente por citronelal (44,8 %), citronelol (9,78 %) presentó un efecto fungicida a una concentración de 3 g/L y actividad fungistática a concentraciones menores. La actividad fungistática observada y los daños morfológicos fueron dependientes de la concentración (15). En forma similar en la presente investigación se halló que los diámetros de los halos de inhibición de Candida albicans fueron mayores a medida que se aumentó la 18 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(27) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. concentración del aceite esencial de las hojas de Myrcianthes oreophila de 25%, 50% y 75%. En lo referente a la acción antifúngica de los metabolitos secundarios, interviene el carácter lipofílico e hidrofílico de sus grupos funcionales y a la polaridad que poseen, para poder tener propiedades antisépticas, antimicrobianas y antimicóticas, siendo esta actividad biológica de mayor a menor en fenoles, aldehídos, cetonas, alcoholes y éteres (23). UI M. IC A. .. Q. Los esfuerzos para encontrar una correlación entre la composición y bioactividad de los. BI. O. aceites esenciales no han sido totalmente dilucidados. Se presume que la actividad. Y. biológica de estos aceites esenciales no está determinada por la cantidad de. AC. IA. monoterpenos, sino más bien por su tasa de concentración (23).. RM. Al encontrar que el aceite esencial de las hojas de Myrcianthes oreophila “Unkia” tiene. DE. FA. efecto antifúngico sobre el crecimiento de Candida albicans., se justificaría su uso y. CA. podría ser de interés y constituir una nueva alternativa terapéutica, de menor costo y. BI BL. IO. TE. mayor eficacia.. 19 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(28) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. V.. CONCLUSIONES. 1. El aceite esencial obtenido de las hojas de Myrcianthes oreophila “Unkia” mediante el método de destilación por arrastre con vapor de agua presenta actividad antifúngica a las concentraciones de 25%, 50% y 75%.. IC A. 2. El aceite esencial de las hojas de Myrcianthes oreophila “Unkia” posee. UI M. actividad antifúngica in vitro frente a Candida albicans, a medida que aumenta la concentración del aceite esencial (25%, 50%, 75%) se obtiene un mayor. BI BL. IO. TE. CA. DE. FA. RM. AC. IA. Y. BI. O. Q. diámetro del halo de inhibición de Candida albicans.. 20 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(29) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. VI.. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS. 1. Arredondo F. Dualidad simbólica de plantas y animales en la práctica médica del curandero- paciente en Huancayo [Tesis magistral en internet]. Lima: Pontificia Universidad Católica del Perú; 2006 [consultado 04 Jul 2017]. Disponible. en:. IC A. http://tesis.pucp.edu.pe/repositorio/bitstream/handle/123456789/74/arredondo_b. UI M. aquerizo_freder_dualidad_simbolica.pdf.txt;jsessionid=86b7494e5252b86a8ff1d. O. Q. 263043ddf80?sequence=5. Y. BI. 2. Del Campo M. Pervivencia de los remedios vegetales tradicionales americanos. IA. en la terapéutica española actual [Tesis doctoral en internet]. Madrid:. RM. AC. Universidad Complutense de Madrid; 2014 [consultado 05 Jul 2017]. p. 29.. FA. Disponible en:. DE. http://eprints.ucm.es/24963/1/T35261.pdf. CA. 3. Condori I, Benique L. Evaluación de la actividad antimicótica de los aceites. IO. TE. esenciales de plantas aromáticas. [Revista on-line]. Juliaca; 2014 [consultado 08. BI BL. Jul 2017]; 14(2). Disponible en: https://revistas.uancv.edu.pe/index.php/rcia/article/viewFile/43/30. 4. Rivero M, Álvarez M, López T. Actividad antifúngica in vitro del Pinus caribaea (pino macho). [Revista on-line].Cuba; 1997 [consultado 12 Jul 2017]; 2(1). Disponible en: http://scielo.sld.cu/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S10284796199700010000 6. 21 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(30) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 5. Vigo S. Caracterización de aceites esenciales en especies vegetales de la familia Labiaceae de la región La Libertad y estudio de su actividad antibacteriana in vitro. [Tesis magistral]. Trujillo: Universidad nacional de Trujillo; 2004. p. 5. 6. Palá J. Contribución al conocimiento de los aceites esenciales del género “Eryngium”, en la Península Ibérica. [Tesis doctoral en internet]. Madrid: Universidad Complutense de Madrid; 2002 [consultado 12 Jul 2017]. p. 21.. estudio de. UI M las drogas. O. C. Farmacognosia:. y sustancias. BI. 7. Kuklisnki. Q. http://biblioteca.ucm.es/tesis/bio/ucm-t26240.pdf. IC A. Disponible en:. IA. Y. medicamentosas de origen natural. Barcelona: Omega S.A; 2003. p. 134-135.. AC. 8. Bruneton J. Farmacognosia: fotoquímica. de plantas medicinales. 2a ed.. FA. RM. Zaragoza: Acribia S.A.; 2001. p.481- 482.. DE. 9. Claus E, Tyler V. Farmacognosia. 5a ed. Buenos Aires: El Ateneo; 1968. p. 164.. TE. CA. 10. Muñoz E, Angulo I, Chávez M. Aislamiento de Candida albicans de mujeres. IO. con candidiasis vaginal atendidas en el hospital regional docente de Trujillo-. BI BL. Perú. [Revista on-line].Trujillo: Revista Científica de la Facultad de Ciencias Biológicas Universidad Nacional de Trujillo; 2012 [consultado 13 Jul 2017]; 32(1). Disponible en: http://webcache.googleusercontent.com/search?q=cache:ag7coaxzqguj:www.fac bio.unitru.edu.pe/index.php%3foption%3dcom_docman%26task%3ddoc_downl oad%26gid%3d113%26itemid%3d149+&cd=1&hl=es&ct=clnk&gl=cl. 22 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(31) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 11. León B, Roque J, Ulloa C. El libro rojo de las plantas endémicas del Perú. [Revista on-line]. Lima: Universidad Nacional Mayor de San Marcos; 2006 [consultado 20 Jun 2018]; 13(2). Disponible en: http://www.scielo.org.pe/pdf/rpb/v13n2/v13n02a082.pdf 12. Mostacero J, Mejía F, Gamarra O. Fanerógramas del Perú: taxonomía, utilidad y. IC A. ecogeografía. Trujillo: CONCYTEC; 2009.p.566.. UI M. 13. Villanueva A. Cachicadan: geohistoria y sus riquezas. Trujillo: Grupo Editor. BI. O. Q. Amauta; 2005.p.83.. Y. 14. Moura J, Sarmento F. Actividad antifúngica del aceite esencial de Eugenia. AC. IA. caryophyllata sobre cepas de Candida tropicalis de aislados clínicos. [Revista. RM. on-line]. Chile: Boletín Latinoamericano y del Caribe de Plantas Medicinales y. FA. Aromáticas Universidad de Santiago de Chile; 2012 [consultado 17 Jun 2018].. DE. Disponible en:. TE. CA. http://www.redalyc.org/pdf/856/85622739002.pdf. BI BL. IO. 15. Murillo W, Acevedo J. Actividad antimicótica del aceite esencial a partir de Eucalyptus tereticornis sobre el hongo patógeno Fusarium oxysporum. [Revista on-line]. Cuba; 2011 [consultado 15 Jun 2018]; 45(2). Disponible en: http://scielo.sld.cu/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S00347515201100020001 1. 16. Giraldo N, Evaluación preliminar de la actividad fungicida de los aceites esenciales de eucalipto (eucalyptus tereticornis, myrtaceae) y cáscara de naranja. 23 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(32) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. (citrus sinensis, rutaceae) sobre algunos hongos filamentosos. [Revista on-line]. Colombia; 2009 [consultado 14 Jun 2018]; 1(4). Disponible en: http://revistas.ut.edu.co/index.php/tumbaga/article/view/76 17. Miranda M. Farmacognosia y productos naturales. 1ª ed. La Habana: Editorial Félix Varela; 2001. p. 141, 207, 291-292.. IC A. 18. Martínez M, Cuellar M. Manual de prácticas de laboratorio: farmacognosia y. UI M. productos naturales. Universidad de la Habana: Instituto de Farmacia y. O. Q. Alimentos. La Habana. Cuba. 2000. p. 125.. BI. 19. Bruneton J. Elementos de fotoquímica y farmacognosia. Barcelona: Acribia. AC. IA. Y. S.A.; 1991. p. 242, 243, 491.. RM. 20. Villar M, Vargas O. Manual de fitoterapia. Lima: EsSalud, Organización. FA. panamericana de la salud; 2001[consultado 02 Abr 2018].p.41. Disponible en:. CA. DE. http://www.bvsde.paho.org/texcom/manualesmec/fitoterapia/cap4.pdf. TE. 21. Lock O. Investigación fitoquímica: métodos en el estudio de productos. BI BL. IO. naturales. Lima: Pontificia Universidad Católica del Perú; 1994 [consultado 02 Abr 2018]; 2(1,2). Disponible en: https://books.google.com.pe/books?id=n36g2qoccxkc&printsec=frontcover&dq =isbn:8483909529&hl=es&sa=x&ved=0ahukewjt7kr4izvcahuf0fkkhvggb3cq6a eijjaa#v=onepage&q&f=false. 22. Stashenko E. Aceites esenciales. Bucaramanga. Santander: Centro Nacional de Investigaciones para la Industrialización de Especies Vegetales Aromáticas y. 24 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(33) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Medicinales Tropicales Universidad Industrial de Santander; 2009 [consultado 20 Abr 2018].p.15. Disponible en: http://cenivam.uis.edu.co/cenivam/documentos/libros/1.pdf 23. Marca M. Actividad antimicótica “in vitro” del aceite esencial Cinnamomum seylanicum Breyn “Canela” frente a Candida albicans ATCC 6538. Tacna:. IC A. Universidad Nacional Jorge Basadre Grohmann de Tacna; 2012 [consultado 05. UI M. May 2018].p.7. Disponible en:. O. Q. http://200.37.105.196:8080/bitstream/handle/unjbg/202/87_2013_marca_cuello_. BI BL. IO. TE. CA. DE. FA. RM. AC. IA. Y. BI. mr_facs_farmacia_y_bioquimica_2013_resumen.pdf?sequence. 25 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(34) AC. IA. Y. BI. O. Q. UI M. IC A. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. BI BL. IO. TE. CA. DE. FA. RM. ANEXOS. 26 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(35) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Anexo 1.- Ejemplar completo de la planta Myrcianthes oreophila “Unkia” después de. BI BL. IO. TE. CA. DE. FA. RM. AC. IA. Y. BI. O. Q. UI M. IC A. ser llevada al Herbarium Truxillense (HUT) de la UNT.. Figura N° 2: Código de identificación taxonómica N° 58317.. 27 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(36) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Anexo 2.- Myrcianthes oreophila “Unkia” antes del proceso de extración del aceite. BI BL. IO. TE. CA. DE. FA. RM. AC. IA. Y. BI. O. Q. UI M. IC A. esencial.. 28 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(37) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Anexo 3.- Equipo de Destilación por arrastre con vapor de agua.. C. Y. BI. O. Q. UI M. IC A. B. BI BL. IO. TE. CA. DE. FA. RM. AC. IA. A. A: Generador de vapores de agua B: Cámara C: Condensador. 29 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(38) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Anexo 4.- Obtención del aceite esencial de las hojas de Myrcianthes oreophila “Unkia”. BI BL. IO. TE. CA. DE. FA. RM. AC. IA. Y. BI. O. Q. UI M. IC A. mediante el método de Destilación por arrastre con vapor de agua.. 30 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(39) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. RM. AC. IA. Y. BI. O. Q. UI M. IC A. Anexo 5.- Cabina de Flujo Laminar.. BI BL. IO. TE. CA. DE. FA. Anexo 6.- Placas llevadas a incubar a 37°C por 24 horas.. 31 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(40) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Anexo 7.- Prueba de Susceptibilidad in vitro del aceite esencial de las hojas de. BI BL. IO. TE. CA. DE. FA. RM. AC. IA. Y. BI. O. Q. UI M. IC A. Myrcianthes oreophila “Unkia” al 25%.. 32 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(41) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Anexo 8.- Prueba de Susceptibilidad in vitro del aceite esencial de las hojas de. AC. IA. Y. BI. O. Q. UI M. IC A. Myrcianthes oreophila “Unkia” al 50%.. BI BL. IO. TE. CA. DE. FA. RM. F. 33 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(42) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Anexo 9.- Prueba de Susceptibilidad in vitro del aceite esencial de las hojas. BI BL. IO. TE. CA. DE. FA. RM. AC. IA. Y. BI. O. Q. UI M. IC A. Myrcianthes oreophila “Unkia” al 75%.. 34 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(43) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Anexo 10.- Halos de inhibicion (mm) del aceite esencial de las hojas de Myrcianthes oreophila “Unkia” frente a Candida albicans ATCC 10231.. Tabla N°1: Halos de inhibición por primera exposición del aceite esencial de las hojas de Myrcianthes oreophila “Unkia” frente a Candida albicans.. Grupo experimental (50%). Grupo experimental (75%). IC A. Grupo experimental (25%). 0. 0. 0. 4. 8. 6. 18. -. 16. 0. 0. 0. 8. 2. -. 22. -. UI M. Control negativo (0%). 28. 32. 28. -. 36. 0. 0. 0. -. -. 6. 12. 16. 6. 36. 26. 22. 0. 0. 0. 12. 2. 6. 10. 6. 34. 30. 36. 18. RM. AC. IA. Y. BI. O. Q. 14. 38. FA. Tabla N°2: Halos de inhibición por segunda exposición del aceite esencial de las hojas. Grupo experimental (25%). Grupo experimental (50%). Grupo experimental (75%). 0. BI BL. IO. TE. Control negativo (0%). CA. DE. de Myrcianthes oreophila “Unkia” frente a Candida albicans.. 0. 0. -. -. 2. 14. 12. 10. -. 28. 22. 0. 0. 0. -. 8. 2. 26. 24. 22. 32. 22. 30. 0. 0. 0. -. 4. 4. 6. 10. 12. 34. 22. 28. 0. 0. 0. 8. 10. 8. 8. 10. 14. 28. 30. 30. 35 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(44) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Tabla N°3: Halos de inhibición por tercera exposición del aceite esencial de las hojas de Myrcianthes oreophila “Unkia” frente a Candida albicans.. Grupo experimental (25%). Grupo experimental (50%). Grupo experimental (75%). 0. 0. 6. 6. 6. 12. 14. 08. 22. -. -. 0. 0. 0. 2. 4. 8. -. -. 12. 28. 32. 34. 0. 0. 0. -. -. 6. 6. 14. 34. 28. 24. 0. 0. 0. 8. -. 8. 8. 10. 28. 32. 22. UI M. 0. IC A. Control negativo (0%). -. IA. Y. BI. O. Q. 12. AC. Tabla N°4: Halos de inhibición por cuarta exposición del aceite esencial de las hojas de. FA. RM. Myrcianthes oreophila “Unkia” frente a Candida albicans.. Grupo experimental (25%). 0. 0. 0 0. 0. Grupo experimental (75%). 10. 6. 4. -. -. 6. -. -. 28. 0. 6. 6. -. 8. 12. 16. 26. 22. 30. 0. 0. 10. 2. 8. 24. 8. -. 34. 24. 22. 0. 0. 6. 12. 4. 28. 22. 26. 32. 26. 30. IO. 0. Grupo experimental (50%). BI BL. 0. TE. CA. DE. Control negativo (0%). 36 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(45) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Anexo 11.- Promedio por repetición de los halos de inhibición producidos por exposición del aceite esencial de las hojas de Myrcianthes oreophila “Unkia” frente a Candida albicans ATCC 10231. REPETICIÓN. DIÁMETROS*(mm) GI. GII. GIII. 1. 0. 5,915. 14,415. 31,497. 2. 0. 4,915. 13,997. 27,582. 3. 0. 6,165. 10,747. 4. 0. 6,662. 14,832. 27,33 27,497. Q. UI M. IC A. Control (-). AC. IA. Y. BI. O. Leyenda: Control (-): DMSO q.p GI: Aceite esencial al 25%, GII: Aceite esencial al 50%, GIII: Aceite esencial al 75%. * Incluye diámetro del disco.. IO. 14,415 13,997 10,747 14,832. BI BL. 15. Repetición 1 Repetición 2 Repetición 3 Repetición 4. 5,915 4,915 6,165 6,662. MILÍMETROS. 20. TE. 30. 27,582 27,33 27,497. DE CA. 35. 25. 31,497. FA. RM. Gráfico N° 01: Medida de los halos de inhibición producidos por la exposición del aceite esencial de las hojas de Myrcianthes oreophila "Unkia" frente a Candida albicans ATCC 10231.. 10. 0 0 0 0. 5 0 Control (-). GI. GI. GIII. DIÁMETROS. 37 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(46) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Anexo 12.- Análisis estadístico de los diámetros de los halos de inhibición inhibición producidos por exposición del aceite esencial de las hojas de Myrcianthes oreophila “Unkia” frente a Candida albicans ATCC 10231.. PRUEBA DE HOMOGENEIDAD DE DATOS Pruebas de normalidada. O. Q. UI M. IC A. Shapiro-Wilk Estadístico gl 1.862 37 1.818 37 1.848 37. Sig. .048 .01 .3. BI. Kolmogorov-Smirnovb Estadístico gl Sig. ge25 .304 37 .06 ge50 .356 37 .01 ge75 .314 37 .044. FA. RM. AC. IA. Y. a. control negativo es constante. Se ha omitido. b. Corrección de significación de Lilliefors. BI BL. IO. TE. CA. DE. PRUEBA DE KRUSKAL-WALLIS. Estadísticos de pruebaa,b Datos. Chi-cuadrado 289.518 gl 3 Sig. .000 asintótica. a. Prueba de Kruskal Wallis b. Variable de agrupación: Grupos. 38 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

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