“Determinación de la Concentración Mínima Inhibitoria y Concentración Mínima Bactericida del aceite esencial de Citrus sinensis (Naranja) variedad Tangelo en el crecimiento de Staphylococcus aureus y de Escherichia coli ”
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(2) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AUTORIDADES DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE. AC IÓ. N. TRUJILLO QUE OTORGAN EL TÍTULO PROFESIONAL DE. CO. M. UN IC. BIÓLOGO-MICROBIÓLOGO. IC. A. Y. RECTOR DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO. AS. DE. IN FO. RM. ÁT. Dr. Orlando Gonzales Nieves. Dr. Rubén Vera Veliz. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. VICE-RECTOR ACADÉMICO. SECRETARIO GENERAL DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO Dr. Esteban Ilich Zerpa. ii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..
(3) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AC IÓ. N. DECANO DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS. ÁT. IC. A. Y. CO. M. UN IC. Dr. Marco Salazar Castillo. IN FO. RM. SECRETARIO DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS. DE. SI ST. EM. AS. DE. Dr. Enrique Padilla Santos. MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA Dra. Eva Villanueva Tarazona. DI. RE. CC. IO. N. DIRECTORA DE LA ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE. iii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..
(4) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AC IÓ. N. ASESOR. El que suscribe, profesor asesor de la presente tesis declara que ésta ha sido. UN IC. ejecutada de conformidad con su correspondiente proyecto y con las debidas. M. orientaciones al tesista. En cuanto al informe, este ha sido revisado y acoge las. Y. CO. observaciones y sugerencias correspondientes.. IC. A. Por lo tanto, autorizo a la Br. ANGIE ELIANA SALDARRIAGA CESPEDES,. SI ST. EM. AS. DE. IN FO. RM. ÁT. continuar con el trámite de reglamento correspondiente.. DE. ________________________. IO. N. Dr. Pedro Mercado Martínez. DI. RE. CC. ASESOR. iv Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..
(5) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AC IÓ. N. PRESENTACIÓN. UN IC. SEÑORES MIEMBROS DEL JURADO DICTAMINADOR:. En cumplimiento con las disposiciones establecidas en el Reglamento de. CO. M. Grados y Títulos de la Universidad Nacional de Trujillo, pongo a vuestra. Y. consideración y criterio, el informe de tesis titulado: “Determinación de la. IC. A. Concentración Mínima Inhibitoria y Concentración Mínima Bactericida del aceite. ÁT. esencial de Citrus sinensis (Naranja) variedad Tangelo en el crecimiento de. RM. Staphylococcus aureus y de Escherichia coli.”con el propósito de obtener el. EM. AS. DE. IN FO. Título Profesional de Biólogo – Microbiólogo.. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. Trujillo, Abril del 2016. Br. Angie Eliana Saldarriaga Céspedes. v Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..
(6) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. CO. M. Dra. Manuela Lujan Velásquez. UN IC. AC IÓ. N. MIEMBROS DEL JURADO. IN FO. RM. ÁT. IC. A. Y. PRESIDENTE. SECRETARIO. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. AS. DE. Dr. Pedro Mercado Martínez. Dr. Luis Alberto Llenque Díaz VOCAL. vi Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..
(7) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AC IÓ. N. APROBACIÓN. Los profesores que suscriben, miembros del jurado dictaminador, declaran. UN IC. que el presente informe de tesis ha cumplido con los requisitos formales y. ÁT. IC. A. Y. CO. M. fundamentales, siendo aprobado por unanimidad.. IN FO. RM. Dra. Manuela Lujan Velásquez. Dr. Pedro Mercado Martínez SECRETARIO. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. AS. DE. PRESIDENTE. Dr. Luis Alberto Llenque Díaz VOCAL. vii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..
(8) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AC IÓ. A ti Dios que me diste la oportunidad de vivir y regalarme una familia. N. DEDICATORIA. CO. M. UN IC. maravillosa.. Y. Con mucho cariño a mi hija Jimena Calderón Saldarriaga, mi motivación, mi. IO. DI. RE. CC. .. N. DE. SI ST. EM. AS. DE. IN FO. RM. ÁT. IC. A. alegría y mi impulso en todo momento.. viii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..
(9) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AGRADECIMIENTO. N. Mi profundo agradecimiento a mi asesor Dr. Pedro Mercado Martinez,. AC IÓ. profesor del Departamento de Microbiología y Parasitología de la Universidad. UN IC. Nacional de Trujillo, por su apoyo, confianza y asesoramiento en la realización. CO. M. de la presente Tesis.. A. Y. A mis Padres Beatriz y Belisario por apoyarme a lo largo de toda mi. IN FO. RM. ÁT. IC. carrera universitaria.. AS. DE. A mis Hermanos Liset y Kevin por su apoyo constante.. SI ST. EM. A Denis por su apoyo, amor y compañía.. más lo necesite.. DI. RE. CC. IO. N. DE. A Don carlos, por su apoyo, confianza y por estar siempre ahí, cuando. ix Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..
(10) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. RESUMEN. N. El presente trabajo tuvo por objetivo la Determinación de la Concentración Mínima. en el crecimiento de. Staphylococcus aureus y de. UN IC. (Naranja) variedad Tangelo. AC IÓ. Inhibitoria y Concentración Mínima Bactericida del aceite esencial de Citrus sinensis. Escherichia coli. El aceite se obtuvo por destilación de arrastre con vapor de agua a. CO. M. partir del flavedo de la naranja. Los cultivos empleados para determinar la Concentración Mínima Inhibitoria(CMI) y la Concentración Mínima Bactericida(CMB) fueron:. A. Y. Staphylococcus aureus y de Escherichia coli. La CMI se determinó con el método de. ÁT. IC. Macrodilución en caldo utilizando 8 concentraciones; dando como promedio el 3.8%. RM. frente Staphylococcus aureus y un promedio el 8.7 % del aceite esencial frente. IN FO. Escherichia coli. La CMB se obtuvo por el método de siembra en superficie en agar nutritivo; los promedios fueron 7.2% para Staphylococcus aureus y 12.3% del aceite. DE. esencial para Escherichia coli. El aceite esencial de Citrus sinensis (Naranja) variedad. AS. Tangelo resultó tener un mayor efecto antibacteriano en los cultivos de Staphylococcus. SI ST. EM. aureus que en los cultivos de Escherichia coli Palabras clave: Concentración Mínima Inhibitoria, Concentración Mínima Bactericida,. DI. RE. CC. IO. N. DE. Citrus sinensis, Staphylococcus aureus , Escherichia coli.. x Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..
(11) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. CONTENIDO ii. Asesor………………………………………………………………………………. iv. Presentación………………………………………………………………………... v. AC IÓ. N. Autoridades de la Universidad Nacional de Trujillo……………………..……….... vi. Aprobación……………………………….………………………………………….…….. vii. Dedicatoria…………………………………………………………………………. viii. M. UN IC. Miembros del Jurado………………….……………………………………………. ix. Resumen……………………………………………………………………………. x. Y. CO. Agradecimiento…………………………………………………………………….. xi. ÁT. IC. A. Contenido…………………………………………………………………………... RM. INTRODUCCIÓN…………………………………………………………………... IN FO. MATERIAL Y METODO. DE. MATERIAL BIOLOGICO ....................................................................………….. AS. PROCEDIMIENTO……………………..………………………………………... 9. 1.1 Preparación de los frutos de la naranja. …………………………………... 9. 1.1.1. Recolección de la muestra………………………………….......... 9. DE. SI ST. EM. 9. Selección ………………………………………………..……..... 9. 1.1.3. Lavado …………………………………………………………... 10. 1.1.4. Extracción del flavedo …...…………………………………….... 10. 1.1.5. Corte……………………………………………………………... 10. N IO CC RE. 9. 1. Obtención del aceite esencial de la naranja…………………………………. 1.1.2. DI. 1. 1.2 Extracción. del. aceite. esencial. de. Citrus. sinensis…………………………………………………..……………….. 1.2.1. 10. MÉTODO: Destilación por arrastre con vapor de agua. xi Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..
(12) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. …………………………………………………………………... 10. 2. Evaluación del efecto antibacteriano del aceite esencial de C.. 11. sinensis(Naranja) in vitro……………………………..…………………………............ Estandarización. del. inóculo. de. aureus…………………………………………………... 11. M. Determinación de la Concentración Mínima Inhibitoria. CO. 2.1.2.. 11. S.. UN IC. 2.1.1.. AC IÓ. sinensis(Naranja) en el crecimiento de S. aureus……………….. N. 2.1. Evaluación del efecto antibacteriano del aceite esencial de C.. de Citrus sinensis(Naranja). Y. del aceite esencial. 11. A. variedad Tangelo en el crecimiento de S. aureus. ........... Determinación. la. del. aceite. Concentración esencial. 11. Mínima de. Citrus. IN FO. Bactericida. de. RM. 2.1.3.. ÁT. IC. 2.1.2.1. Método: Macrodilución en caldo ……................ sinensis(Naranja) variedad Tangelo en el crecimiento de. 11. DE. S. aureus………………………...……………………………... AS. 2.2. Evaluación del efecto antibacteriano del aceite esencial de C.. 12. 2.2.1.. Estandarización del inóculo de E. coli …………..……... 12. 2.2.2.. Determinación de la Concentración Mínima Inhibitoria. DE. SI ST. EM. sinensis en el crecimiento de E. coli…………………….………….. (CMI) del aceite esencial de C. sinensis(Naranja) en el. 2.2.2.1 Método: Macrodilución en caldo…………………..…... DI. RE. CC. IO. N. crecimiento de E. coli……………………………………. 12 12 13. 2.2.3.. Determinación. de. la. Concentración. Mínima. Bactericida del aceite esencial de Citrus sinensis (Naranja) variedad Tangelo en el crecimiento de E.. xii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..
(13) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. coli……………………………………………………….……... 13. 2.2.3.1 Método: Macrodilución en caldo……………….. 13. AC IÓ. esencial de Citrus sinensis var. Tangelo en el. N. 2.2.3.2 Concentración Mínima Bactericida del aceite. UN IC. crecimiento de E. coli………………………………. 13. CO. M. 3. Análisis Estadístico ……………………………………………………. 13. a. los. cultivos. RM. frente. A. sinensis (Naranja) variedad Tangelo. ÁT. Bactericida del aceite de Citrus. y Concentración Mínima. IC. Tabla 1. Concentración Mínima Inhibitoria. 14. Y. RESULTADOS…………………………………………......………………………. de. Staphylococcus. IN FO. aureus………………………..…………………………………………………..…... 15. Tabla 2. Concentración Mínima Inhibitoria y Concentración Mínima. a. los. AS. frente. DE. Bactericida del aceite de Citrus sinensis (Naranja) variedad Tangelo cultivos. de. Escherichia 16. SI ST. .. EM. coli………………………………………..……………………………………….….. DE. Tabla 3. Concentración Mínima Inhibitoria y Concentración Mínima. N. Bactericida del aceite de Citrus sinensis (Naranja) variedad Tangelo en 17. CC. IO. especies de Escherichia coli y Staphylococcus aureus………………………. 18. CONCLUSIONES……………………………………………………………….... 21. RECOMENDACIONES…………………………………………………………... 22. DI. RE. DISCUSION……………………………………………………………………... REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS……………………………………………... 23. xiii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..
(14) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. ANEXOS…………………………………………………………………………... 31. ANEXO 1: El equipo de destilación por arrastre con vapor de agua utilizado en la extracción del aceite de citrus sinensis variedad (Naranja).. AC IÓ. N. Tangelo .. UN IC. ANEXO 2: Set de tubos de ensayo donde se determinó la Concentración. Mínima Inhibitoria (CMI) del aceite esencial de Citrus sinensis (Naranja). CO. M. variedad Tangelo, evaluando el crecimiento de S. aureus.. Y. ANEXO 3: Placa con agar nutritivo donde no se observó crecimiento de. RM. ÁT. Citrus sinensis (Naranja) variedad Tangelo.. IC. A. Staphylococcus aureus en una concentración del 7% del aceite esencial de. IN FO. ANEXO 4:Tubos de ensayo donde se observa el crecimiento de Escherichia coli hasta la concentración de 9% del aceite esencial de Citrus. DE. sinensis (Naranja) variedad Tangelo, se determinó la presente como. AS. Concentración Mínima Inhibitoria (CMI).. EM. ANEXO 5: Placas Petri con agar nutritivo donde no se presentó. SI ST. crecimiento Escherichia coli en la concentración de 12% comparado con. DE. otra de Concentración 10% del aceite esencial de Citrus sinensis (Naranja). IO. N. variedad Tangelo.. DI. RE. CC. ANEXO 6: Análisis estadístico realizados a la Concentración Mínima Inhibitoria (CMI) y Concentración Mínima Bactericida (CMB) del aceite de Citrus sinensis(Naranja) variedad Tangelo, frente a los cultivos de Staphylococcus aureus. ANEXO 7: Análisis estadístico realizados a la Concentración Mínima. xiv Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..
(15) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Inhibitoria (CMI) y Concentración Mínima Bactericida (CMB) del aceite de Citrus sinensis (Naranja) variedad Tangelo frente Escherichia coli.. AC IÓ. Mínima Inhibitoria (CMI) y Concentración Mínima Bactericida (CMB) del. N. ANEXO 8: Análisis estadístico realizado a los valores de la Concentración. aceite de Citrus sinensis(Naranja) variedad Tangelo frente Staphylococcus. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. AS. DE. IN FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. M. UN IC. aureus y Escherichia coli, para saber si existe diferencia significativa.. xv Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..
(16) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. INTRODUCCIÓN. N. En los últimos años el mundo ha optado por el consumo de agentes antimicrobianos de. CI. Ó. origen natural (derivados de vegetales), esto debido a que se ha asociado al consumo. CA. excesivo de conservadores químicos con intoxicaciones, esto sumado al uso irracional. UN I. de antibacterianos que ha traído como consecuencia la resistencia de microorganismos. IC A. Y. CO. M. a diversos antibióticos.1. ÁT. Las propiedades antimicrobianas de hierbas y especias han sido reconocidas y usadas. RM. desde tiempos antiguos en la preservación de los alimentos y en la medicina, pero. FO. científicamente confirmado hace pocos años2. Los aceites esenciales poseen actividad. IN. antimicrobiana por lo cual los convierte en una opción atractiva para la sustitución de. DE. conservantes sintéticos, aunque añadido va a cambiar o mejorar el sabor de los. AS. alimentos. La industria alimentaria principalmente utiliza a los aceites esenciales como. EM. saborizantes, pero estos representan una interesante fuente de antimicrobianos. SI. ST. naturales para la conservación de alimentos3. Sin embargo, la aplicación de aceites. DE. esenciales como conservantes de alimentos requiere un conocimiento detallado de sus. N. propiedades, es decir, la concentración mínima inhibitoria (CMI), el modo de acción y. DI RE. CC. IO. el efecto de los componentes en la matriz de los alimentos4.. Los cítricos se originaron hace unos 20 millones de años en el sudeste asiático. Desde entonces hasta ahora han sufrido numerosas modificaciones debidas a la selección natural y a hibridaciones tanto naturales como producidas por el hombre. El género. 1. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..
(17) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Citrus, pertenece a la gran familia de las Rutáceas, presenta las siguientes especies: Citrus sinensis (Naranja dulce), Citrus aurantium (naranja agria), Citrus reticulata. CA. CI. Ó. N. (Mandarina), Citrus aurantifolia (Limón), etc5.. UN I. Citrus sinensis (Naranja) es el que tiene mayor demanda a nivel mundial y una de las más. M. utilizadas en el país, entre las que destaca la variedad Tangelo que da frutos de tamaño. CO. mediano, corteza un tanto gruesa, dura y coriácea. Se han reportado estudios que. IC A. Y. demuestran que poseen características antifúngicas, antimicrobianas y fitoterapéuticas, las. ÁT. cuales le hacen una especie promisoria para su uso en actividades farmacéuticas, control. RM. de plagas en el sector agrícola y la preservación de los alimentos para evitar la. DE. IN. FO. proliferación de microorganismos causantes de enfermedades6.. AS. Todo cítrico contiene aceite esencial y principios amargos (flavonoides), las hojas. EM. maduras pueden contener alcaloides, taninos y monoterpenos. Las flores contienen. ST. además glucósidos y cumarinas. El flavedo (cáscara) del fruto contiene α-pineno, β-. SI. pineno, mirceno, limoneno, p-cimeno, γ-terpineno, linanol, acetato de linalilo, α-. DE. terpineol, citronelol, acetato de geranilo, N-metilantranilato de metilo, entre otros. CC. IO. N. componentes7.. DI RE. Staphylococcus aureus es una bacteria Gram positiva, anaerobio facultativo; se encuentra en la piel, la nariz y en la piel de animales de sangre caliente. Hasta 30-50% de la población humana son portadores. S. aureus puede crecer en un amplio rango de temperatura, comprendido entre 7-48.5ºC con un óptimo de 30-37ºC, pH de 4.2 a 9.3,. 2. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..
(18) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. con un óptimo de 7 a 7.5 y concentración de cloruro de sodio hasta 15%, puede crecer y sobrevivir a baja actividad de agua (AW=0.86)8. Estas características permiten que. N. S. aureus crezca en una amplia variedad de alimentos. Esto, más su nicho ecológico,. CI. Ó. pueden fácilmente explicar su incidencia en todos los alimentos que requieren. CA. manipulación procesamiento, incluyendo productos alimenticios fermentados tales. UN I. como el queso. S. aureus es un importante patógeno debido a una combinación de. M. virulencia mediada por las toxinas, invasividad y resistencia a antibióticos. Algunas. CO. cepas de S. aureus son capaces de producir enterotoxina estafilococócica y son los. ÁT. IC A. Y. agentes causantes de intoxicación alimentaria estafilocócica9.. RM. La contaminación con S. aureus puede ser evitado por el tratamiento de calor en los. FO. alimentos, sin embargo esta se mantiene como mayor causa de enfermedades. DE. IN. transmitidas por alimentos porque puede contaminar los productos alimentarios 10. AS. durante la preparación y procesamiento . Los alimentos que han sido frecuentemente. EM. incriminados en la intoxicación por estafilococos son la carne, aves de corral, de. ST. huevos, leche y derivados, ensaladas, productos de panadería, en particular rellenos de. N. DE. SI. crema pasteles y tortas y sándwiches rellenos11.. IO. E. coli también está implicado en las enfermedades alimentarias. Es un bacilo Gram. DI RE. CC. negativo, anaerobio facultativo, móvil por flagelos perítricos, esporógeno, tiene requerimientos nutricionales sencillos: fermentan la glucosa, reducen los nitratos y son catalasa positivos y oxidasa negativos. E. coli puede crecer en un amplio rango de temperatura, comprendido entre 7-46 ºC con un óptimo de 37 ºC, pH de 4.4 a 9, con un óptimo de 6 a 7, su actividad de agua (AW) mínima es 0.95 y su AW óptimo es. 3. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..
(19) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 0.99512. Las cepas de E. coli poseen antígenos flagelares (H), capsulares (K) y somáticos (O)13.. N. Los aceites esenciales poseen compuestos que presentan distintos niveles de actividad. CI. Ó. antibacteriana, son extraídos de diferentes frutos cítricos y plantas aromáticas, su. CA. volatilidad a temperatura ambiente, a diferencia de otros agentes antimicrobianos; los. UN I. hace atractivos para su estudio y aplicación como una alternativa adecuada y natural. Y. CO. M. de aditivos alimentarios14.. IC A. Los aceites esenciales son utilizados como saborizantes en la industria alimenticia,. ÁT. esta característica unida a su potencial saborizante, antimicrobiano y antioxidante,. RM. tiene un gran beneficio, por ser un producto natural y sin riesgo a la salud humana. 15. .. FO. Bajo esta concepción se han realizado diversos estudios con aceites esenciales,. IN. evaluando su efecto antimicrobiano, fungicida e insecticida. 15. , con la finalidad de. DE. utilizarlos como alternativas terapeúticas contra las infecciones producidas por. EM. AS. microorganismos resistentes a los antibióticos 16.. ST. Los aceites esenciales del flavedo de los cítricos contienen de 85 a 99% de. DE. SI. componentes volátiles y de 1 a 55% de componentes no volátiles. La actividad. N. antimicrobiana del aceite esencial de los cítricos depende de diversos factores, entre. CC. IO. los que destacan la estructura química de los componentes del aceite y su. DI RE. concentración. Es extremadamente difícil correlacionar la actividad antimicrobiana a un único compuesto o clase de compuestos, ya que los diversos componentes de cualquier aceite pueden actuar sinérgicamente. 17. 4. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..
(20) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. La hidrofobicidad de los constituyentes de los aceites esenciales les permite integrar a los lípidos de la membrana celular bacteriana y de la mitocondria, alterando las estructuras y haciéndolas más permeables. Una gran pérdida del contenido celular. Ó. N. puede conducir a la muerte celular18. Los aceites esenciales son más efectivos en. CI. bacterias Gram positivas que en Gram negativa in vitro, aceites esenciales obtenidos. UN I. CA. de Ocimum basilicum L. y otras especies de Ocimum fueron más efectivas contra bacterias Gram positivas (Bacillus sp., Staphylococcus sp., Micrococcus sp., Sarcina. CO. M. sp., Lactobacillus sp.) que en bacterias Gram negativas (Enterobacter sp.,. Y. Pseudomonas sp., Escherichia coli, Salmonella sp.)19. Estudios con aceites esenciales. IC A. demuestran que los aceites esenciales interactúan con membranas celulares de las +. +. RM. ÁT. bacterias cambiando su permeabilidad a cationes como H y K ; la salida de potasio. FO. intracelular ocasiona alteraciones estructurales y pérdida de la viabilidad celular, así lo. IN. demuestra el estudio del aceite esencial de Origanum compactum frente a S. aureus y. AS. DE. P. aeruginosa20.. ST. EM. Se han realizado estudios sobre la actividad antibacteriana y la concentración mínima. SI. inhibitoria (CMI) del aceite esencial de mandarina (Citrus reticulata Blanco) variedad. DE. Dancy, en donde las cortezas de las frutas fueron prensadas al frío para la obtención. IO. N. del aceite. Las cepas bacterianas que se utilizaron para determinar la actividad. DI RE. CC. antibacteriana fueron: Bacillus subtilis, Staphylococcus aureus ATCC 259923,. Listeria monocytogenes, Proteus mirabilis, Klebsiella pneumoniae, Pseudomona aeruginosa ATCC 27853, y Escherichia coli ATCC 2592221,22. La actividad antibacteriana se determinó por el método de difusión en agar utilizando las siguientes. 5. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..
(21) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. concentraciones de aceite: 1, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90 y 100%. La CMI se determinó por el método de dilución en caldo utilizando 6 concentraciones. El aceite esencial presentó actividad antibacteriana del tipo bactericida contra B. subtilis, S.. Ó. N. aureus y L. monocytogenes a todas la concentraciones excepto al 1%. La CMI del. CI. aceite esencial de mandarina variedad Dancy para B. subtilis fue de 9%, para S. aureus. CO. M. UN I. CA. y L. monocytogenes fue de 7%22.. Y. El principal constituyente volátil del aceite esencial de Citrus sinensis variedad. IC A. Valencia encontrado según investigaciones ha sido el monoterpeno con una. ÁT. concentración de 99.93%, y su potencial aplicación, para ser aprovechado como más. IN. FO. RM. que un abono.23. DE. La actividad antibacteriana del aceite esencial de Pseudognaphalium caeruleocanum. AS. obtenido por el método de difusión en agar con discos frente a Staphylococcus aureus. ST. EM. (ATCC 25923), Enterococcus faecalis (ATCC 29212), Escherichia coli (ATCC. SI. 25922), Pseudomonas aeruginosa (ATCC 27853) y Klebsiella pneumoniae (ATCC. DE. 23357) mostraron que el aceite inhibió el desarrollo de S. aureus y E. faecalis, a una. CC. IO. N. concentración mínima inhibitoria (CMI) de 80 y 120 μg/mL, respectivamente24.. DI RE. Diversos autores evaluaron la actividad bactericida y determinaron la concentración mínima inhibitoria (CMI) del extracto etanólico y del aceite esencial de hojas de Rosmarinus officinalis sobre microorganismos de interés alimentario: Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Salmonella typhimurium, Shigella sonnei, Listeria monocytogenes, Pseudomonas aeruginosa, Bacillus cereus y Lactobacillus plantarum. 6. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..
(22) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. en el 2010. El aceite esencial exhibió un amplio espectro de acción antimicrobiana tanto para bacterias gram positivas como gram negativas con CMI entre 512 – 4096 ppm. El extracto etanólico mostró actividad antimicrobiana contra las bacterias S.. CA. CI. Ó. N. sonnei, S. typhimurium y L. monocytogenes con CMI de 1024 ppm23.. UN I. Se han realizado estudios sobre la actividad antibacteriana del aceite esencial de. M. mandarina, reportándose que dicho aceite presentó actividad del tipo bactericida contra B.. IC A. Y. CO. subtilis, S. aureus y Listeria monocytogenes22.. ÁT. La gran capacidad de adaptación y de sobrevivencia que presenta E. coli y S. aureus. RM. hace particularmente compleja su eliminación en los alimentos, es por eso que la. FO. industria alimentaria a lo largo de los años ha hecho uso de productos químicos para. IN. inhibir el crecimiento de microorganismos causantes de alteraciones de alimentos,. DE. infecciones e intoxicaciones; una alternativa natural es el uso de aceites esenciales, ya. EM. AS. que son eficaces para la seguridad y conservación de alimentos debido a la presencia 25. .Es por esta razón que se propuso la. ST. de una amplia gama de componentes volátiles. SI. realización de la presente tesis con el propósito de la determinación de la. DE. Concentración Mínima Inhibitoria y Concentración Mínima Bactericida del aceite. IO. N. esencial de Citrus sinensis (Naranja), variedad Tangelo en el crecimiento de. DI RE. CC. Staphylococcus aureus y de Escherichia coli.. Por lo citado anteriormente, en el presente informe se plantearon los siguientes objetivos:. 7. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..
(23) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Objetivo General:. -. Determinar la Concentración Mínima Inhibitoria (CMI) y la Concentración. Ó. N. Mínima Bactericida (CMB) del aceite esencial Citrus sinensis(Naranja). CA. CI. variedad Tangelo en el crecimiento de Staphylococcus aureus y Escherichia. M. UN I. coli de (Pruebas in vitro).. Determinar si existe o no diferencia significativa entre la Concentración. ÁT. -. IC A. Y. CO. Objetivos Específicos:. Determinar si existe o no diferencia significativa entre la Concentración. DE. -. de. IN. Staphylococcus aureus.. (Naranja) variedad Tangelo con cultivos. FO. aceite de Citrus sinensis. RM. Mínima Inhibitoria (CMI) y la Concentración Mínima Bactericida (CMB) del. AS. Mínima Inhibitoria (CMI) y la Concentración Mínima Bactericida (CMB) del. ST. EM. aceite de Citrus sinensis (Naranja) variedad Tangelo con cultivos de. Establecer si existe o no diferencia significativa de las Concentraciones. DE. -. SI. Escherichia coli.. IO. N. Mínima Inhibitoria y de las Concentraciones Mínima Bactericida promedio del. CC. aceite de Citrus sinensis(Naranja) variedad Tangelo con los cultivos de. DI RE. Staphylococcus aureus y Escherichia coli.. 8. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..
(24) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Ó. N. MATERIAL Y MÉTODO. CA. CI. MATERIAL BIOLÓGICO. UN I. -Cultivos de Staphylococcus aureus (FGB-001, FGB-002, FGB-003, FGB-004,. CO. M. FGB-005 y FGB-006), proporcionados por el Laboratorio de Fisiología y. IC A. Y. Genética Bacteriana.. ÁT. -Cultivos de Escherichia coli (EC-001, EC-002, EC-003, EC-004, EC-005 y EC-. RM. 006), proporcionados por el Laboratorio de Referencia Regional “La Libertad” de. IN. FO. la ciudad de Trujillo.. ST. EM. PROCEDIMIENTO. AS. DE. -Citrus sinensis (Naranja) variedad Tangelo.. DE. SI. 1. Obtención del aceite esencial de la naranja Preparación de los frutos de la naranja.. N. 1.1. DI RE. CC. IO. 1.1.1 Recolección de la muestra: Las frutos de Citrus sinensis(Naranja) variedad Tangelo fueron obtenidos del supermercado “TOTTUS” de Trujillo.. 1.1.2 Selección. 9. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..
(25) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Sólo fueron utilizadas aquellas naranjas que no presentaron magulladuras, cortes o demás lesiones en su flavedo.. Ó. N. 1.1.3 Lavado. UN I. restos de tierra que estuvieron adheridos a la materia prima.. CA. CI. Se realizó el lavado de los frutos, eliminando partículas extrañas, suciedad,. M. 1.1.4 Extracción del flavedo. CO. Se extrajo la parte blanca de la cascara, para la obtención del flavedo.. IC A. Y. 1.1.5 Corte. ÁT. En esta etapa se cortó el flavedo en pedazos.. Extracción del aceite esencial de Citrus sinensis. RM. 1.2. MÉTODO: Destilación por arrastre con vapor de agua26, 27. FO. 1.2.1. IN. Se realizó un proceso de destilación por arrastre con vapor de agua (Anexo. DE. 1), en donde se colocaron 150g del flavedo en una pera de decantación, el. AS. cual estuvo conectado a un balón de 1000ml que contenía agua, éste último. EM. fue calentado en una cocina hasta alcanzar la temperatura de ebullición del. SI. ST. agua, lo cual generó la salida de los aceites esenciales del flavedo de la. DE. naranja que estaba en la pera de decantación. El aceite esencial fue arrastrado. N. por el vapor de agua, que al condensarse, formó una mezcla de aceite y agua. DI RE. CC. IO. en una segunda pera de decantación. La mezcla obtenida, se centrifugó a 6000 rpm durante 15 min, con el fin de separar la fase acuosa de la oleosa, la separación de la menor porción de agua se hizo con la ayuda de una jeringa.. El tiempo de extracción fue de 80 min, contándose desde el instante en el que cayó la primera gota en la segunda pera de decantación.. 10. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..
(26) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. El aceite fue envasado en frascos ámbar de 12 ml de capacidad y se conservó. N. en refrigeración a 4 ºC para los análisis posteriores.. CI. Ó. 2. Evaluación del efecto antibacteriano del aceite esencial de Citrus sinensis in. CA. vitro.. UN I. 2.1 Evaluación del efecto antibacteriano del aceite esencial de Citrus sinensis en. CO. M. el crecimiento de S. aureus. Y. 2.1.1 Estandarización del inóculo de S. aureus28,29. IC A. Se sembró en agar nutritivo e incubó a 37 ºC por 10 horas. Posteriormente, se. ÁT. realizó una suspensión en solución salina fisiológica a una turbidez equivalente. FO. RM. al estándar 0,5 del Nefelometro de Mc Farland.. Mínima. Inhibitoria(CMI). del. IN. 2.1.2 Determinación de la Concentración. AS. 30, 31. EM. de S. aureus.. DE. aceite esencial de Citrus sinensis (Naranja) variedad Tangelo en el crecimiento. ST. 2.1.2.1 Método: Macrodilución en caldo (Anexo. 2). SI. Se usaron 9 tubos de ensayo que contenían caldo nutritivo, tween 80 al. DE. 0.5%(v/v) y aceite esencial en concentraciones de 0(control), 2, 3, 4, 5, 6, 30. DI RE. CC. IO. N. 7, 8, 9% de un volumen final de 2ml.. A cada uno de los tubos se le adicionó 0.02 ml del inóculo de S.aureus, se homogenizó y se llevó a incubar a 37 ºC por 24 horas. La lectura se hizo en relación a la definición de CMI que es la menor concentración del aceite que inhibe el crecimiento bacteriano visible. El ensayo se realizó por triplicado.. 11. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..
(27) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 2.1.3. Determinación de la Concentración Mínima Bactericida(CMB) del aceite esencial de Citrus sinensis (Naranja) variedad Tangelo en el crecimiento de. Ó. N. S. aureus.32.33 (Anexo 3). CA. CI. De la lectura de la Concentración mínima inhibitoria, a partir del tubo que. UN I. no se observó crecimiento bacteriano (Inhibición del crecimiento), se. M. contaron 4 tubos que no presentaron turbidez. De cada tubo seleccionado. CO. se extrajo 0.1 ml para realizar la técnica de siembra por superficie en. IC A. Y. placas con agar nutritivo.. ÁT. También se utilizó una placa control para cada una de las bacterias: un. FO. RM. control en agar nutritivo con 0.1ml de inóculo. DE. IN. Se incubó durante 24 horas a 37 °C.. AS. Luego se procedió con la lectura; se consideró la CMB, a la placa que no. EM. presento crecimiento bacteriano, teniendo la menor concentración de. SI. ST. aceite de Citrus sinensis variedad Tangelo.. IO. N. DE. 2.2 Evaluación del efecto antibacteriano del aceite esencial de Citrus sinensis en 34, 35. .. CC. el crecimiento de E. coli. DI RE. 2.2.1 Estandarización del inóculo de E. coli Se sembró E. coli en agar nutritivo e incubó a 37 ºC por 6 horas. Se realizó una suspensión en solución salina fisiológica a una turbidez equivalente al estándar del tubo 0,5 de Nefelometro de Mc Farland.. 12. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..
(28) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 2.2.2 Determinación de la Concentración Mínima Inhibitoria (CMI) del aceite. N. esencial de Citrus sinensis en el crecimiento de E. coli.. CI. Ó. 2.2.2.1 Método: Macrodilución en caldo(Anexo 4).. CA. Se usaron 9 tubos de ensayo que contenían caldo nutritivo, tween 80 al. UN I. 0.5%(v/v) y aceite esencial en concentraciones de 0(control), 6, 7, 8, 9, 10,. CO. M. 11, 12, 13% de un volumen final de 2ml.. Y. A cada uno de los tubos se le adicionó 0.02 ml del inóculo de E. coli, se. IC A. homogenizó y se llevó a incubar a 37 ºC por 24 horas.. ÁT. La lectura se hizo en relación a la definición de CMI que es la menor. RM. concentración del aceite que inhibe el crecimiento bacteriano visible.. IN. FO. El ensayo se realizó por triplicado. 2.2.3. Determinación de la Concentración Mínima Bactericida(CMB) del aceite. AS. de Escherichia coli.. DE. esencial de Citrus sinensis (Naranja) variedad Tangelo en el crecimiento. EM. Se realizó el mismo procedimiento realizado en CMB del aceite esencial de. DE. SI. ST. C. sinensis sobre S. aureus(Anexo 5).. IO. N. 3. Análisis Estadístico. CC. El análisis de los resultados obtenidos para la determinación CMI y CMB del. DI RE. aceite esencial de Citrus sinensis (Naranja) variedad Tangelo en el crecimiento Escherichia coli y Staphylococcus aureus se efectuó mediante el programa SPSS versión 18.0. Se realizó el análisis de varianza(Anexo 6, 7 y 8), específicamente un ANAVA unifactorial, a los datos obtenidos para determinar si hay diferencias significativa. La significancia se reportó con un nivel de confianza del 95%.. 13. 34. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..
(29) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. CA. CI. Ó. N. RESULTADOS. UN I. La tabla 1 muestra la Concentración Mínima Inhibitoria y la Concentración Mínima. M. Bactericida del aceite esencial Citrus sinensis(Naranja) variedad Tangelo, con los. CO. cultivos de S. aureus, donde los promedios de la CMI y la CMB fueron 3.8 y 7.2%. RM. ÁT. IC A. Y. respectivamente.(Anexo 6).. FO. La tabla 2 muestra la Concentración Mínima Inhibitoria y la Concentración Mínima. IN. Bactericida del aceite esencial Citrus sinensis(Naranja) variedad Tangelo, frente a los. SI. ST. EM. AS. respectivamente. (Anexo 7).. DE. cultivos de E. coli, donde los promedios de la CMI y la CMB fueron 8.7 y 12.3%. DE. La tabla 3 muestra que no existe diferencia significativa entre las Concentraciones. IO. N. Mínima Inhibitoria promedio del aceite esencial Citrus sinensis (Naranja) variedad. CC. Tangelo con especies de S. aureus y E. coli, en cambio sí existe diferencia. DI RE. significativa entre las Concentraciones Mínima Bactericida promedio del aceite esencial Citrus sinensis (Naranja) variedad Tangelo con especies de S. aureus y E. coli, (Anexo 8).. 14. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..
(30) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. y Concentración Mínima. sinensis (Naranja) variedad Tangelo. CI. Bactericida del aceite de Citrus. Ó. N. Tabla 1. Concentración Mínima Inhibitoria. Concentración Mínima. Staphylococcus. Inhibitoria (%). IC A. 3. RM. ST-002. IN. 6. 4. 7. ST -005. 4. 7. ST -006. 4. 7. Promedio ( ̅ ):. 3.8. 7.2. CC. IO. N. DE. ST. EM. ST-004. AS. DE. 2. SI. ST-003. 9. 7. FO. 4. Bactericida (%). ÁT. aureus ST-001. Concentración Mínima. Y. Cultivos de. CO. M. UN I. CA. con los cultivos de Staphylococcus aureus.. DI RE. (p<0.05). 15. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..
(31) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Ó. N. Tabla 2. Concentración Mínima Inhibitoria y Concentración Mínima Bactericida. CA. CI. del aceite de Citrus sinensis (Naranja) variedad Tangelo frente a los. Cultivos de. Concentración Mínima. IC A. Concentración Mínima. Y. CO. M. UN I. cultivos de Escherichia coli.. Escherichia coli. Bactericida (%). RM. ÁT. Inhibitoria (%). 12. 9. 13. 11. 12. 7. 14. 9. 12. EC-006. 8. 11. Promedio ( ̅ ):. 8.7. 12.3. 8. IN. FO. EC-001. DE. EC-002. EM. AS. EC-003. ST. EC-004. DI RE. CC. IO. N. DE. SI. EC-005. (p>0.05). 16. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..
(32) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Ó. N. Tabla 3. Comparación del promedio de la Concentración Mínima Inhibitoria y del. variedad Tangelo. en especies de Staphylococcus. UN I. sinensis (Naranja). CA. CI. promedio de la Concentración Mínima Bactericida del aceite de Citrus. RM. ÁT. IC A. Y. CO. M. aureus y Escherichia coli.. FO. Prueba. Concentración Mínima. Inhibitoria (%). Bactericida (%). DE. IN. Cultiv os. Concentración Mínima. 3.8. 7.2. 8.7. 12.3. p>0.05. p<0.05. DI RE. CC. IO. N. DE. SI. ST. EM. E. coli. AS. S. aureus. 17. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..
(33) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Ó. N. DISCUSIÓN. CA. CI. Se han reportado estudios de aceite esenciales que poseen actividad. UN I. antimicrobiana, donde se indica que las especie vegetales cítricas, poseen. M. características antifúngicas, antimicrobianas y fitoterapéuticas, las que las hacen una. CO. especie promisoria para evitar la proliferación de microorganismos causantes de. Y. enfermedades35,36, los aceites de naranja y toronja mostraron tener actividad. IC A. antibacteriana contra cepas bacterianas de: Staphylococcus aureus, Escherichia coli,. FO. RM. ÁT. Bacillus subtilis, Pseudomona aeruginosa y Salmonella entre otras37,38.. IN. En la tabla 1 se demuestra que, el aceite esencial de Citrus sinensis (Naranja). DE. variedad Tangelo tiene efecto inhibitorio y bactericida frente a Staphylococcus aureus. AS. presentando como promedio una CMI del 3.8% y un promedio de una CMB de 7.2%,. EM. así mismo se muestra que el efecto bactericida del aceite esencial es significativamente. ST. mayor en la CMB comparado con la CMI de cultivos de Staphylococcus aureus con. N. DE. SI. p<0.05. (Anexo 06).. CC. IO. En la tabla 2 los resultados demuestran que, el aceite esencial de Citrus. DI RE. sinensis variedad Tangelo tiene efecto inhibitorio y bactericida frente a Escherichia coli presentando como promedio una CMI del 8.7% y un promedio de una CMB de 12.3%, por esto se muestra que el aceite esencial estadísticamente actúa significativamente por igual en ambas concentraciones con los cultivos de Escherichia coli con p>0.05. (Anexo 06).. 18. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..
(34) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. En la tabla 3 se observa que el promedio CMI del aceite esencial Citrus sinensis. N. variedad Tangelo entre especies de S. aureus y E. coli, los valores son cercanos, por lo. UN I. CA. CMB entre las dos especies, donde si se observa diferencia significativa.. CI. Ó. que no actúa significativamente, siendo lo opuesto si se compara con el promedio del. M. En los resultados obtenidos en la tabla 1 y tabla 2, el aceite esencial de Citrus. CO. sinensis(Naranja) variedad Tangelo tiene un mayor efecto inhibitorio y bactericida en. Y. Staphylococcus aureus que en Escherichia coli debido a su diferencia de estructuras. IC A. morfológicas, como lo es en su membrana y su pared celular.39,40 La interacción en la. RM. ÁT. membrana con las bacterias, generalmente es producida por su carga positiva y su. FO. atracción electrostática hacia las superficies polianionicas, ya sea en los ácidos. IN. teicoicos en Gram positivos o lipoolisacáridos en Gramnegativos.41. DE. La diferencia que existe en el efecto de este aceite esencial de naranja frente a. AS. Staphylococcus aureus y Escherichia coli también se debería a la estructura y. EM. constitución de su pared celular, Escherichia coli es una bacteria Gram negativa. SI. ST. presenta una pared celular y una membrana más compleja; la pared celular es similar. DE. en constitución (más delgada) a la de las bacterias Gram positivas como. N. Staphylococcus aureus, está constituida por péptidoglicanos, tiene una membrana. CC. IO. externa y una membrana interna, está constituida por fosfolípidos con ácidos grasos 42. DI RE. saturados y entre las dos capas se halla un espacio periplásmico rico en enzimas.. La acción antibacteriana de los aceites esenciales se debe a su composición. El aceite esencial de C. sinensis tiene un alto contenido de monoterpeno, este terpeno. 19. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..
(35) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. actúa acumulándose en la membrana plasmática microbiana y por lo tanto causa una pérdida de la integridad de la membrana y disipación de la fuerza motriz44, 45. En los Gram negativos como Esherichia coli su membrana externa actúa como una barrera. N. que limita la entrada de varios tipos de agentes antimicrobianos, entre estos los aceites. CI. Ó. esenciales46 . Lo último respaldaría al efecto bactericida en la tabla 3 muestra la CMI. UN I. CA. y CMB promedio en microorganismos como Staphylococcus aureus y Escherichia coli. Para Staphylococcus aureus se utilizó una cantidad menor del aceite esencial. IC A. Y. concentración bactericida será mayor estadísticamente.. CO. M. Citrus sinensis(Naranja) variedad Tangelo, mientras que para Escherichia coli la. ÁT. Estudio realizado muestra similares resultados con esta investigación, en el. RM. que se utilizó el aceite esencial Citrus sinensis L. (naranja dulce) inhibe mejor a cepas. FO. de microorganismos Gram positivos, como: Staphylococcus aureus ATCC 25933 y. IN. Staphylococcus epidermidis, demostrando actividad antibacteriana significativa a. DE. concentraciones de 100 y 50%, respectivamente, que con los microorganismos Gram. ST. EM. AS. negativos: Escherichia coli y Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 47.. SI. En otros estudios se utilizaron el aceite esencial de zingiber officinale,. DE. (jengibre) el cual mostró ser más eficaz contra cepas Staphylococcus aureus que,. IO. N. contra cepas Pseudomonas aeruginosa48 y el aceite esencial de Origanum vulgare L.. CC. ante bacterias aisladas en leche de bovino, tuvo un buen efecto contra bacterias Gram. DI RE. positivas, para Staphylococcus coagulasa negativa49. Comparado con los resultados promedio de la tabla 3, los microorganismos Gram positivos como Saphylococcus aureus resultan ser más sensibles ante agentes antimicrobianos, que los Gram negativos como Escherichia coli.. 20. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..
(36) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. CONCLUSIONES. N. 1. La Concentración Mínima Bactericida del aceite esencial de Citrus sinensis. CO. M. UN I. CA. mayor que la Concentración Mínima Inhibitoria de la misma especie.. CI. Ó. (Naranja) variedad Tangelo frente a Staphylococcus aureus es significativamente. Y. 2. No hubo diferencia significativa entre la Concentración Mínima Inhibitoria y la. FO. RM. ÁT. variedad Tangelo frente a Escherichia coli.. IC A. Concentración Mínima Bactericida del aceite esencial de Citrus sinensis (Naranja). IN. 3. No hubo diferencia significativa entre las Concentraciones Mínima Inhibitoria. DE. promedio del aceite esencial de Citrus sinensis (Naranja) variedad Tangelo con. EM. AS. especies de Staphylococcus aureus y Escherichia coli; en cambio la Concentración. DI RE. CC. IO. N. DE. SI. S. aureus.. ST. Mínima Bactericida promedio para E. coli fue significativamente mayor que para. 21. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..
(37) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. CI. Se sugiere evaluar, en posteriores trabajos, la actividad antimicrobiana con los. CA. -. Ó. N. RECOMENDACIONES. UN I. componentes mayoritarios aislados del aceite esencial de Citrus sinensis (Naranja). M. variedad Tangelo sobre los microorganismos evaluados y desarrollar estudios. CO. sobre matrices alimentarías específicas que permitan valorar el comportamiento in. Y. situ del aceite esencial del flavedo de Citrus sinensis (Naranja), evaluando el. IC A. efecto sensorial sobre el producto que se desea conservar y el efecto de los. Se sugiere también realizar estudios de extracción de aceite esencial en otras. DE. -. IN. FO. RM. ÁT. procesos de elaboración y de otros aditivos sobre la actividad antimicrobiana.. AS. especies, principalmente en la región La Libertad, que puedan contribuir al. DI RE. CC. IO. N. DE. SI. ST. EM. desarrollo agroindustrial.. 22. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..
(38) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Ó. N. REFERENCIAS BIBLOGRAFICAS. CA. CI. 1. Rodríguez E. Uso de Agentes Antimicrobianos Naturales en la Conservación de. M. UN I. frutas y hortalizas. Ra Ximhai 2011; 7 (1): 153-170.. CO. 2. Nostro A, Cannatelli M, Morelli I, et al. Efficiency of Calamintha officinalis. IC A. Y. essential oil as preservative in two topical product types. J Appl Microbiol 2004;. RM. ÁT. 97(2) : 395-401.. FO. 3. Cosentino S, Tuberoso C, Pisano B, et al. In vitro antimicrobial activity and. EM. AS. 1999; 29(2) : 130-135.. DE. IN. chemical composition of Sardinian Thymus essential oils. Lett Appl Microbiol. ST. 4. Hyldgaard M, Mygind T, Meyer RL. Essential oils in food preservation: mode of. SI. action, synergies, and interactions with food matrix components. Front Microbiol. DE. 2012; 1(3): 1-24.. CC. IO. N. 5. Agusti M. Citricultura. 2 ed. España: Aedos; 2003.. DI RE. 6. Webber B. Citrus Industry. Univ Calif Press 2000; 19(3): 1-99. 7. Cáceres A. Plantas de Uso Medicinal en Guatemala. 1 ed. Guatemala. Universidad de San Carlos; 1996; 150-155.. 23. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..
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