Evaluación de la fagocitosis "y digestión intracelular por leucocitos polimorfonucleares de individuos sanos para dos especies de estafilococos coagulasa negativos

" E V A L U A C I O N DE LA FAGOCITOSIS"Y

DIGESTION INTRACELULAR POR LEUCOCITOS

POLIMORFONUCLEARES DE I N D I V I D U O S SANOS

PARA DOS ESPECIES DE ESTAFILOCOCOS

COAGULASA NEGATIVOS "

QUE EN OPCIÓN A t ORADO DE MAESTRO EN CIENCIAS

CON ESPECIALIDAD EN MICROBIOLOGIA MEDICA

P R E S E N T A

O.'C.B. LYDIA GUADALUPE RIVERA MORALES

:ÏM Z 6 6 5 8 FM

UNIVERSIDAD AUTONOMA DE NUEVO LEON

FACULTAD DE MEDICINA

TESIS QUE EN OPCION AL GRADO DE MAESTRO EN CIENCIAS

CON ESPECIALIDAD EN

MICROBIOLOGIA MEDICA

PRESENTA:

Q.C.B. LYDIA GUADALUPE RIVERA MORALES

T M

F M

"EVALUACION DE LA FAGOCITOSIS Y DIGESTION INTRACELULAR

POR LEUCOCITOS POLIMORFONUCLEARES DE INDIVIDUOS SANOS

PARA DOS FSPECIES DE ESTAFILOCOCOS COAGULASA NEGATIVOS".

PRESIDENTE : DR. MANUEL R

SECRETARIO : M. EN C.

1er. VOCAL : DRA. ALMA YOL

2do. VOCAL : DR. MARIO CESAR SALINAS CA8H0NA.

EL PRESENTE TRABAJO SE LLEVO A CABO EN EL DEPARTAMENTO

DE INMUNOLOGIA DE LA FACULTAD DE MEDICINA DE LA U.A.N.L.

BAJO LA ASESORIA DE :

D E D I C A T O R I A .

A DIOS NUESTRO SEÑOR.

POR CONCEDERME LA MARAVILLA DE VIVIR Y PERMITIRME LLEGAR AL FINAL DE ESTE TAN ANHELADO TRABAJO.

A MI MADRE.

PROFRA. NA. GUADALUPE MORALES DE RIVERA. (IN MEMORIAM)

POR SU EJEMPLO COMO MADRE Y PROFESIONISTA, POR SU FORTALEZA, CONSTANCIA Y TENACIDAD EN ALCANZAR SIEMPRE CUALQUIER OBJETI VO QUE UNO SE PROPONGA REALIZAR.

A MI PADRE.

SR. LUIS ALBERTO RIVERA FLORES.

POR SUS CONSTANTES ESTIMULOS Y DECIRME ¡VAMOS HIJA, TU PUEDES, ADELANtE!

A MI ESPOSO.

Q.B.P. JUAN MANUEL ADAME RODRIGUEZ.

D E D I C A T O R I A

A NI HIJA.

LYDIA MARCELA ADAME RIVERA.

ORGULLO DE MI VIDA.

A ELLOS DOS.

QUE AUNQUE TODAVIA NO LOS CONOZCO, ME HAN ACOMPAÑADO EN TODO

MOEMENTO DESDE HACE 8 MESES EN LA PARTE FINAL DE LA TESIS.

A MI ASESORA.

DRA. ALMA YOLANDA ARCE MENDOZA.

POR SU CONSTANTE ASESORIA, POR ENSEÑARME QUE EL EXITO ES FRUTO DEL TRABAJO, POR CREER Y CONFIAR EN MI EN QUE LLEGARIA AL TERMI NO DE ESTE TRABAJO Y CUYA IMAGEN ME MOTIVA A SEGUIRME SUPERANDO.

A MIS COASESORES.

DR. JAVIER RAMOS JIMENEZ Y DR. MARIO CESAR SALINAS CARMONA.

POR SUS SUGERENCIAS Y COMENTARIOS Y SU AYUDA INCONDICIONAL EN LA ELABORACION DE ESTE TRABAJO DE TESIS.

AL:

i

DR. AMADOR FLORES ARECHIGA.

A:

Q.C.B. MAYELA CARMONA PEÑA.

TEC. EN LAB. ANASTACIO TORRES SEGOVIA.

Q.C.B. ISABEL PEREZ RIVERA.

Q.C.B. ERNESTO TORRES LOPEZ.

Q.F.B. MIGUEL A. HERNANDEZ BALBOA.

SECRETARIA. MA. DEL REFUGIO REYES CEDILLO.

POR SU VALIOSA COOPERACION, SIN LA CUAL NO HUBIERA PODIDO REALIZAR ESTE TRABAJO.

A:

MIS MAESTROS Y AMIGOS.

POR SUS CONSTANTES ESTIMULOS Y BRINDARME SU APOYO PARA SEGUIR ADE LANTE.

A:

PAGINA.

I . - INTRODUCCION 10

I I . - HIPOTESIS 15

I I I . - OBJETIVOS 16

IV.- MATERIAL Y METODOS 17

V.- RESULTADOS 24

V I . - DISCUSION 48

V I I . - CONCLUSIONES 56

V I I I . - RESUMEN 58

I N T R O D U C C I O N

Los e s t a f i l o c o c o s son m i e m b r o s de la f a m i l i a Mici-ococcaceae,

( 2 6 ) son c o c o s g r a m p o s i t i v o s , i n m ó v i l e s , c a t a l a s a p o s i t i v o s ,

aer-óbicos y a n a e r A b ic os f ac u 1 tat i v o s y c r e c e n a g r u p á n d o s e c

omftn-m e n t e en r a c i omftn-m o s i r r e g u l a r e s ( g r i e g o S t a p h y 1 e: rae irnos de u v a s ) . <

1 , 2 ) .

El p r i m e r o en d e s c r i b i r al e s t a f i l o c o c o en el p u s h u m a n o ,

fué R o b e r t o K o c h en el año de 1878. Dos afios d e s p u é s , P a s t e u r

c u l t i v A a este g e r m e n en m e d i o l i q u i d o y al a ñ o s i gui ente O g s t o n

(nos t rfi q u e era p a t ó g e n o p a r a los an i mal e s de exper i men tac i bn c orno

los r a t o n e s y c o b a y o s . En i¡3¡=¡4 , Ro senbac h de ser ib i 6 d o s esp ec i es ,

éstas f u e r o n d i s t i n g u i d a s de a c u e r d o a su p a t o g e n ic i dad p a r a el

h o m b r e : las e s p e c i e s de S t a p h y 1 o c o c c u s a u r e u s f u e r o n c o n s i d e r a d a s

como p a t ó g e n a s y las e s p e c i e s de S t a p h y 1 o c o c c u s e c i d e r n u dis c o m o

c o m o las e s p e c i e s no patógenas.*. 1 >.

E s t a s esp eci es p u e d e n ser di s 1 1 n g u i d a s por las p r u e b a s de

f e r m e n t a c i fin del man i tol y p o r la p r o d u c e i fin de la c o a g u 1 a s a .

E s t a s p r u e b a s son p o s i t i v a s p a r a S_¡_ a u r e u s y n e g a t i v a s p a r a

Las e s p e c i e s de aur eus e s u s a n la mayor-la de las

i n f e c c i o n e s s u p u r a t i v a s s u p e r f i c i a l e s ¡ é s t a s t i e n d e n hab i t u a l m e n t e

a p e r m a n e c e r l o c a l i z a d a s eri forma de a b s c e s o s , d i v i e s o s ,

p ú s t u l a s , f uró.ncul os y en un g r a n p o re en taj e , son c a u s a n t e s de

e n v e n e n a m i e n t o a l i m e n t a r i o . Del 2 0 - 6 0 % de los s e r e s h u m a n o s son

p o r t a d o res de este m i c r o o r g a n i s m o eri sus f o s a s n a s a l e s , su

c a p a c i dad p a r a p r o d u c ir enf e r m e d a d no ha d i s m i n u i d o afm con la

i nt r-oducc i <5n de los ari t ib i A t icos , ya que son a m e n u d o r e s i s t e n t e s

a uno o más de los a g e n t e s an11 mi c r o b i a n o s.< 2 , 3 >.

Por otro l a d o , las e s p e c i e s de e s t a f i l o c o c o s c o a g u l a s a

n e g a t i v o s , f o r m a n un g r u p o de b a c t e r i a s c o n s i d e r a d a s c o m o s a p r o

-f í t i c a s p a r a el h o m b r e ya que son p a r t e de la -f1 ora n o r m a l de la

p i e l . A d e m á s , c o n t r i b u y e n s i g n i f i c a t i v a m e n t e al m e t a b o l i s m o de

los p r o d u c t o s de d e s e c h o de v a r i a s s u b s t a n c i a s e x c r e t a d a s p o r la

piel y las g 1 á n d u 1 as , p r o p o r c i o n a n d o las c o n d i c i o n e s n e c e s a r i a s

que 1 i m i tan el c r e c i m i e n t o de d i v e r s o s p a t ó g e n o s . ( 3 >.

A c t u a l m e n t e , son r e c o n o c i d a s más de 2 0 espec i es de

e s t a f i l o c o c o s c o a g u l a s a n e g a t i v o s e n t r e e l l a s e s t á n :

S. ep i dermi d i s , S . saproi' h y t i c u s , S . h a e m o 1 y 11 cus , S . h o m i n i s ,

5 . cap 11 i s . S.i c ohn i i „ S . s i mu 1 a n s . S . w a r n e r i . S.fi a u r i c u 1 a r i s ,

O r d i n a r i a m e n t e , los e s t a f i l o c o c o s c o a g u l a s a n e g a t i v o s son

mic: r o o r g a n i smo s de b a j a v i r u l e n c i a que no s u e l e n o c a s i o n a r

i n f e c c i o n e s en el h o m b r e a m e n o s que e x i s t a una alteracifln de las

b a r r e r a s n a t u r a l e s de las d e f e n s a s del h u e s p e d c a u s a d a s p o r

c i rugí a, c o l o c a c i ón de c a t é t e r e s , i n s e r c 1 6 n de p r ó te s i s, s o n d a s

de p l á s t i c o i ri t r a v a se u lares o de una der i vac i fin , o b i e n , en

hue s p e d e s i n m u n o s u p r i mi dos t a l e s c o m o : n e o n a t o s p r e m a t u r o s ,

pac i en te s con c a r c i n o m a o g r a n u l oc i t operi la y a q u e l l o s que han

r e c i b i d o t r a n s p l a n t e s y que están b a j o t e r a p i a i n m u n o s u p r e s o r a .

< 4 ,5, é>, 7 , 8 >.

Se ha o b s e r v a d o un m a r c a d o i n c r e m e n t o de la s u s c e p t ib i 1 i dad

a la i n f ecc i ór» p o r c u e r p o e x t r a ñ o c a u s a d a s p o r este tipo de —

m i c r o o r g a n i s m o s . < 4 , 5 , 6 , 7 , 8 >. U n a p r o b a b 1 e exp 1 icac i fin de e s t o , es

que los es tafi 1 o c o c o s c o a g u l a s a n e g a t i v o s son c a p a c e s de a d h e —

ri rse y p e r s i s t í r en superf icies de m a t e r i a l de p l á s t i c o . ( 9 , 1 0 ,

1 1 , 1 2 , 1 3 , 1 4 >.

B a y s t o n y P e n n y < 1 5 ) o b s e r v a r o n , que de las d e r i v a c i o n e s

v e n t r i c u l a r e s irtf ec t a d a s se p r o d u c í a una s ubs tanc ía m u c o i d e que

f a c i l i t a b a la c o l o n i z a c i ó n de las s u p e r f i c i e s p l á s t i c a s . E s t u d i o s

sobre la c o m p o s i c i ó n q u í m i c a de este m a t e r i a l d e m o s t r a r o n que

está c o n s t i t u í da de un 4 0 % de c a r b o h i dra tos y 2 7 % de p r o t e 1 ñas

a p r o x i m a d a m e n te <" lé. >, r e c i e n t e m e n t e , se ha d e t e c t a d o que la

(17 >. O t r o s e studi os s u g i e r e n que e s p e c i e s p r o d u c t o r a s de este

m a t e r i a l m u c o i de 11 a m a d o g 1 ic oca 1 i >; < s 1 i me > , t i erieri m a y o r

v i r u l e n e ia c u á n d o está p r e s e n t e el cue)"• po ex trafio ( 9 , Í O , 1 1 ) .

Un f a c t o r p a t o g é n i c o a d i c i o n a l en las i n f e c c i o n e s p o r e s t a

f i l o c o c o s c o a g u l a s a n e g a t i v o s son los c a m b i o s ero si vos que se m a

-n i f i e s t a -n e-n la super-f ic ie i-nerte de las vál v u l a s o c a t é t e r e s ,

estas a l t e r a c i o n e s han sido d e m o s t r a d a s d e s p u é s de la a d h e r e n c i a

de d i c h o s m i c r o o r g a n i s m o s iri vi tro . (9 , 10 > . E s t o s e s t u d i o s e x p 1 i

-can la gran d i f i c u l t a d de la errad icac i Ar» de este tipo de m f e c —

c i o n e s sin a n t e s r e m o v e r el c u e r p o e x t r a ñ o .

Se ha r e p o r t a d o que c i e r t a s e s p e c i e s de e s t a f i l o c o c o s

c o a g u l a s a n e g a t i v o s , se a i s l a n más f r e c u e n t e m e n t e de c u a d r o s c l í

-n i c o s e-n el h u m a -n o ( 4 , 5 , 6 ) . Lo que se c o -n o c e a c t u a l m e -n t e es que

los m e c a n i s m o s p a t o g é n icos b á s i c o s de los m ic r o o r g a n i s m o s c o n s i

-d e r a -d o s c o m o s a p r o f í t i c o s , sftlo se p o n e n -de m a n i f i e s t o c u á n -d o se

p r o d u c e un r o m p i m i e n t o d i r e c t o de las b a r r e r a s n a t u r a l es de de —

f erisa , la p r e s e n c i a de C U 6 \ p 0 6 X t r a ñ o y p r o b a b l e m e n t e ai

f a c t o r de c o l o n i z a c i i n p r o d u c i d o por los e s t a f i l o c o c o s c o a g u l a s a

n e g a t i v o s.

Por otro l a d o , el d e s c o n o c i m i e n t o de si p o s e e n m e c a n i s m o s de

e v a s i fin de la a c t i v i d a d f a g o c i t a r i a y b a c t e r i c i d a de los l e u c o

r e s i st ene i a b a c t e r i a n a sea debi da a la p r o d u c e ión de s u b s t a n c i a s

que de a l g u n a man era pudi eran a f e c t a r la fagoc i tos i s o b i e n la

m u e r t e y d i g e s t i & n i n t r a c e 1ular y p o r lo t a n t o , c o n t r i b u i r a la

H I P O T E S I S

La a l t a f r e c u e n c ia de i nf ere i one s p o r c u e r p o e x t r a ñ o

p r o d u c i d a s p o r S t a p h y 1 o c o c c u s e n i d e r m i d i s . es d e b i d o a que este

m i c r o o r g a n i s m o es c a p a s de e v a d i r los m e c a n i s m o s de la

f a g o c i t o s i s y d i g e s t i ó n í n t r a c e l u l a r por l e u c o c i t o s

O B J E T I V O S

D e m o s t r a r si los e s t a f i l o c o c o s c o a g u l a s a n e g a t i v o s que

más f r e c u e n t e m e n t e c a u s a n p a t o g e n í c i dad p a r a el h u m a n o

son c a p a c e s de r e s i s t i r la f a g o c i t o s i s de l e u c o c i t o s

po1 i m o r f o n u c 1 p a r e s o b t e n i d o s de i n d i v i d u o s sanos en

p r e s e n t í a de suero n o r m a 1 y suero i n a c t i v a d o .

D e m o s t r a r si los e s t a f i l o c o c o s c o a g u l a s a n e g a t i v o s son

c a p a c e s de r e s i s t i r la d i g e s t i ó n i n trace 1 u lar- de

l e u c o c i t o s po 11mo r f o n u c 1 e a r es o b t e n i d o s de i n d i v i d u o s

s a n o s .

D e m o s t r a r si hay d i f e r e n c i a en los t i e m p o s de

g e n e i a c i ñ n de las d i f e r e n t e s e s p e c i e s de e s t a f i l o c o c o s

c o a g u l a s a n e g a t i v o s que p u d l e r a n i n t e r v e n i r en la

v i r u l e n ci a •

M A T E R I A L V M E T O D O S

1 E S P E C I E S B A C T E R I A N A S U T I L I Z A u A S V SU M A R C A D O R A D I O A C T I V O .

Se u t i l i z a r o n dos e s p e c i e s de e s t a f i l o c o c o s r o a g u l a s a

n e g a t i v o s o b t e n i d o s del A m e r i c a n Type C u l t u i © C o l l e c t i o n

Stap h y l o c o c c u * e p i. derm i di s <14.990 ) y S t a p h y 1 o c o c c u s cap i t i s

ú ' 7 8 4 0 > . De un c u l t i v o de 1S¡ h o r a s en agar C a s o y de c a d a uno

de estos m i c r o or garu s m o s , se t o m a r o n v a r i as c o 1on i as y

f u e r o n i n o c u l a d a s en 4 . 8 mi de ca1 do C a s oy al c ud1 se a g r e g d

0 . 2 mi d© 11 mi di na t r 111 a d a <5.0 Ci / mmo 1.) . D e s p u é s de 1S

ho ras de i n c u b a c i fin a 3 7 ° C , las b a c t e r i a s f u e r o n co s ec h a d a s

y 1 a v a d a s tres v e c e s con so 1 uc i óri s a l i n a e s t é r i l con un p H

de 7 . 2 - 7 . 4 . P o s t e r i o r m e n t e la s u s ^ e n s i fin bac te t i ana se

a j u s t ó a una conc en t r-ac ífln de 1.0 - 3 . 2 X 10^ p o r

e s p e c t r o f o t o m e t r l a y c o n f i r m a d o p o r c o n t e o en p l a c a en el

m e d i o de a g a r C a s o y en U F C / m l (13).

1 1 . - O B T E N C I O N DE LFUCOCITilS POL IMORFONi iC-LEARES DE S A N G R E

V E N O S A P E R I F E R I C A I>E I N D I V I D U O S S A N O S .

Se o b t u v i e r o n 6 0 mi de s a n g r e v e n o s a p e r i f é r i c a d u r a n t e dos

o c a s i o n e s de c i n c o s u j e t o s s a n o s del sexo m a s c u l i n o en

en a l í c u o t a s de 10 mi en ci n e o tufo o s e s t é r i l e s de 16 X 150 mm

con h e p a r m a Cío u n i d a d e s de h e p a r i n a por c a d a m i l i l i t r o de

sangre.) y los 10 mi r es t¿*n tes se c o l o c a r o n en t u b o s de i -3 X 100

mm p a r a o b t e n e r s u e r o f r e s c o de c a d a uno de e s t o s s u j e t o s s a n o s .

Los l e u c o c i t o s p o l í m o r f o n u c 1 e a r e s se o b t u v i e r o n por

s e d imen t ac i éri en de;, t ran (Si gma No . D - 4 751 Ml»j: 8 2 0 0 0 .:> al 6% en

so 1 uc i fin s a l i n a e s t é r i l . A 3 mi de dextr a n , se m e z c l a r o n c.on 10

mi de s a n g r e v e n o s a p e r i f é r i c a hepar ini rada. Se i n c u b a r o n en baño

mar ía a 3 7 ° C d u r a n t e 4 5 m i n u t o s y se r e c o 1 e c 1 4 el p l a s m a r i c o en

l e u c o c i t o s c o n una p i p e t a p a s t e a r e s t é r i l en t u b o s de c e n t r 1 f u g a

de 15 mi e s t é r i les. Se ceritri f ugat on a 180 g ( 1 2 0 0 i pm> d u r a n t e

15 mi ñ u t o s , s e d e s e a rté el s o b r e n a d a n t e y el foo16n 1 e u c o c i tar i o se

lavó 11 es v e c e s c on el m e d i o de c u l t i v o c o m e r c i a l R P M I 1 £.40

( S i g m a N o . R - 4 1 3 0 > . La pofo1ación c e l u l a r se aj u s 1 6 a una

c oncen t r a e i 6n de 1 X 10^ c é l u l a s p o r mi <. 18; .

111.- F U E N T E S DE O P S O N I N A S V C'PSüN IZ A C I O N DE B A C T E R I A S

Se o b t u v i e r o n de 5 - 1 0 mi de s a n g r e v e n o s a p e r i f é r i c a de

v e i n t e d o n a d o r e s v o l u n t a r i o s s a n o s . L=»s muesti d S , se roloc-aron en

t uho s e s t é r i l e s , se de o ar orí <_oagu lar y se o b t u v o el s u e r o de c a d a

una. P o s t e r i o r m e n t e se m e z c l a r o n los s u e r o s y se g u a r d a ) o n en

a l í c u o t a s de 2 mi en c o n g e 1 a c i fin a - 7 0 ° C' h a s t a su uso c orno f uen te

P a r a la o p s o n i z a c í ó n b a c t e r i a n a , se u t i l i z ó el m é t o d o

p r o p u e s t o p o r V e r b r u g h y c o i s (13>. De c a d a 2 mi de s u e r o

c o n g e l a d o a -70°C", 1 mi se d e j ó en h i e l o y 1 mi se i n a c t i v ó a

5 6 ° C p o r 3 0 m i n u t o s . Pa ra la op son i z a c i ó n de las b a c t e r i a s , ]as

m u e s t r a s de s u e r o se di 1uyeron al 5 % en m e d i o de c u l t i v o p a r a

c é l u l a s RF'MI 1640.

Las b a c t e r i a s ya a j u s t a d a s a una c o n c e n t r a c i ó n de 1.0 - 3 . 2

x 1 06 U F C / m 1 , se m e z c l a r o n t a n t o con s u e r o n o r m a 1 c o m o c o n el

i nact i v a d o d i l u i d o s al 5% con una r el ac i ón vol timen a vo 1 tunen en

m a t r a c e s E r 1 e n m e y e r e s t é r i l e s de 125 m i . Se c o l o c a r o n en baño

mar f a a 3 7° C y en agi tac i fin duran te v e i n t e mi ñ u t o s .

P o s t e r i o r m e n t e las b a c t e r i a s y a o p s o n i z a d a s f u e r o n c e n t r i f u g a d a s

en una u 1 trac ent r 1 f u g a r e f r i g e r a d a <.Bec kman L 8 7 n M ) a 5 0 0 0 g

( 2 0 0 0 0 rpm> d u r a n t e t r e i n t a m i n u t o s . Se d e s c a r t ó el s o b r e n a d a n t e

y las c é l u l a s b a c t e r i a n a s se r e c u s p e n d i e r o n a su v o l u m e n o r i g i n a l

con el m e d i o F^PMl 1640. La s u s p e n s i ó n se man t uvo en h i e l o has ta

s u u s o .

W - - D E T E R M I N A C I O N DE LA F A G O C I T O S I S .

P a r a e s t a de t e r ntinac i ón se u t i l i z ó el m é t o d o d e s c r i t o p o r

V e r b r u g h y c o i s (io >.

1 . - En t u b o s e s t é r i l e s de v i d r i o se a ñ a d i e r o n i muí t é n e a m e n t e 0 . 2

s u s p e n s i ó n de b a c t e r i a s ( í . o - 3 . 2 X 1 06> , p r e v i a m e n t e

i n c u b a d a s c o n : s u e r o n o r m a l , s u e r o i n ^ c t i v a d o y sin s u e r o

( u t i l i z a d o como c o n t r o l n e g a t i v o ) . C a d a s e r i e de t u b o s se

inc ubó en baño m a r ! a a 37 °C en a g i t a c i ó n con t m u a , y se

f u e r o n obt en i endo las mué st ras a los s i g u i e n t e s t i e m p o s :

0 - 3 , 15, 3 0 , fc-0 y 120 m i n u t o s . Se c o 1ocai on i nmedi a t a m e n te en

h i e l o p a r a su p r o c e s a m i e n t o ,

2 . - Las m u e s t r a s se c e n t r i f u g a r o n a lfc-0 g <.800 rpm .) , y el botón

c e l u l a r se 1avó dos v e c e s con soluc i fin a m o r t i g u a d o ) a s a l i n a

f o s f a t o s e s t é r i l pH 7 . 2 - 7 . 4 p a r a remover las b a c t e r i a s no

a d h e r i d a s a los 1 e uc oc i tos. Las tres v a n a n t e s fuei on

e f e c t u a d a s por t r i p 1 i c a d o .

3 . - Al b o t ó n c e l u l a r 1 eucoc. i tar i o s se le a ñ a d i ó 3 mi de 1lqui do

de c e n t e l l e o y las c u e n t a s por m i n u t o (,cpm.) e m i t i d a s por las

b a c t e r i a s d e n t r o de los l e u c o c i t o s se d e t e c t a r o n en un

c o n t a d o r de c e n t e l l e o ma rea P a c k a r d . El po re en ta j e de- la

f a g o c i t o s i s se c a l c u l ó con la s i g u i e n t e

f ó r m u l a :

% de

V . " D E T E R M I N A C I O N DE LA M U E R T E Y D I G E S T I O N 1 N T R A C E L Ü L A R .

1. Se firoce d i à a i n c u b a r los po11 mor f on uc1ear e s con las b a c

te rías / los s u e r o s de la m isma for m a que p a r a la f a g o c i

-t o s i s y se 1avÔ e1 b o-tôn c e l u l a r d e s p u e s de c en -tri f u g a r 1 o a

160 g < 8 0 0 r ¡.un > . La mue i t e bac ter i a n a se de ter m i nô po r e 1

m é t o d o de V e r b r u g h y C'ols. (18 .).

2 . - Al b o t fin c e l u l a r 1 eue oc i tar \ o ya 1 a v a d o se le a fiad i 4 1 ml de

a g u a des t i 1 a da e s t é r i l con 0 , 0 1 % de al bi>un 11 ia s è n e a b o v i n a

( S i g m a N o . A - 7 9 0 6 ) p a r a lisar a los l e u c o c i t o s . Los

m i c r o o r g a n i s m o s r e s i s t e n t e s a la m u e r t e y d i g e s t í ô n

m t r a c e l u l a r f u e r o n l i b e r a d o s y se t o m a r o n 0.1 ml de la

s u s p e n s i ôn p a r a d i 1 ui r 1 a en 0 . 9 ml de s o 1 uc i ôn sa ] m a

e s t é r i l . Las d i l u c i o n e s fi nale s o b t e n i d a s f u e r o n 1 : 1 0 , 1 : 1 O O ,

1 ï 1 0 0 0 , 1 : 1 0 0 0 0 , 1 :ÎOOOOO y 1 : 1 0 0 0 O U 0 .

3. ~ De c a d a una de las d i 1 uc i o n e s , se t o m a r o n 2 0 /.t 1 p a r a

p r o c e d e r a c u l t i v a r por el m é t o d o de g o t e o según M i l e s y

rlisra (22 > , E s t a téci i ica c o n s i s t e en inocular s o b r e la

s u p e r f i c i e del m e d i o f r e s c o de a g a r C a s o y , libre de

humftdrtd , ti es g o t a s por s e r i a d o de c ida d 11 uc i 6i i con

p i pe ta a itoiritica en una mi tad 1e la p laca de pe tri con

el m e d i o C a s o y . Los 2 0 ul del iriôculo ( v o l u m e n de c a d a

g o t a ) sobre el m e d i o en t a l e s c o n d i c i o n e s , que dará c i r

-ver-á en l 0 - 1 5 m i n u t o s . A c on 11 nuac. i 6n , 1 as p l a c a s se i n

c uhari en po s y c i fin i n v e r t i d a a 3 7 ° C por 2 4 4 8 h o r a s y d e s

-pué s de este t i e m p o , se se 1 e c c i o n a n p a r a el r e c u e n t o las

di 1 uc i o m p s en d o n d e apa P'ca un má>; i mn de v e i n t e c o l o

-n i a s . O b t e -n e r la m e d i a ¿el r e c u e -n t o y m j l t i f l i c a r por

c i n c u e n t a y por 1 * i n v e r s a de la dilucifin c o r r e s p o n d i e n

-te.

4.- Para obtener- el n í m e r o total de UFC'/m 1 se a c e p t a

n A m e r o de c o l o n i a s o b t e n i d a s c o r r e s p o n d e al n u m e r o

m i c r o o r g a n i s m o s c a p a c e s de resistir al m e c a n i s m o

m u e r t e y d i g e s t i ó n i n t r a c e l u l a r .

V I . - D E T E R N I N A C tON DEL T I E M P O DE G E N E R A C I O N DE C U A T R O

E S P E C I F S DE E S T A F I L O C O C O S C ü A G U L A S A N E G A T I V O S .

Se u t i l i z a r o n c u a t r o e s p e c i e s de e s t a f i l o c o c o s c o a g u l a s a

n e g a t i v o s o b t e n i d o s del AT Ct : S¿. ey.- i derm i di s <. 14':>,:?o > ,

S. cap 111 s ( 2 7 8 4 0 > , S_¿. s ap r uphyt-¿ c us (. 1 5 3 0 S > y s n u i i

(29<'>fc.0>. F1 t i e m p o de g e n e r a c i ó n se e f e c t u ó de a c u e r d o al

m é t o d o p r o p u e s t o por G r a h t r e e and Hi n c d 111 . (. .

Se u t i l i z ó un c u l t i v o r e c i e n t e de 1ü h o r a s en c a l d o de c a d a

e sp ec i e b a c t e r i a n a , se i no ulai on <">. 2 mi de c a d a cul Ci /o en

m a t r a c e s de Er 1 e n m e y e r con 1 0 0 mi de C d l d o C'asoy, se ínuihai ON en

baño mar la, a 37°C en a g i t a c i ó n y se toma i on a l í c u o t a s al t i e m p o

O , 1, 2 , 3 , 4 , 5 , 1", 12, n a s t a 2 4 y a s h o r a s .

q " e , el

de

El r e c u e n t o c o l o n i a l se d e t e r m i n ó pot la t é c n i c a de g o t e o de

M i l e s y M i s r a <22 ). C-ada d e t e r m i n a c i ó n se realizft por

t r i p 1 i c a d o .

P a r a calculai- e1 t i e m p o de g e n e r a e iôn p o r c u e n t a v i a b l e se

ut 111 zô la s i g u i e n t e f órmu 1 a <.23 ) :

g = t 1 o g 2 1 o g b - 1 o g a

d o n d e : t = T i e m p o (minutos.) p a r a n ge ne i ar i o n e s .

a = N o . de bac ter i as en e1 inicio de la o b s e r v a c i ó n ,

R E S U L T A D O S

Los r e s u l t a d o s de las e x p e r i m e n t o s de la f a g o c i t o s i s se

m u e s t r a n en las gráf i c a s c o m o el p r o m e d i o de los porc e n t a j es de

las 3 v a r i a n t e s u t i l i z a d a s : f a g o c i t o s i s sin s u e r o , f a g o c i t o s i s

con s u e r o n o r m a l y f a g o c i t o s i s con s u e r o i n a c t i v a d o en los

t i e m p o s u t i l i z a d o s ! de O - o , 15, 3 0 , 6 0 y 120 m i n u t o s . El

p o r c e n t a j e de la f a g o c i t o s i s fué o b t e n i d a de la f ó r m u l a

s i gui e n t e :

% de F a g o c i t o s i s = c p m del b o t ó n 1 e u c o c i tari o e n " X " t i e m p o . X 1 0 0 c p m del b o t ó n al t i empo O .

En las g r á f i c a s 1, 2 , 3 , 4 y 5 se c o m p a r a n los r e s u l t a d o s de

la f a g o c i t o s i s con las t r e s v a r i a b l e s j u n t a s : sin s u e r o , s u e r o

n o r m a l y s u e r o i n a c t i v a d o , en c a d a t i empo e x p e r i m e n t a d o y e n t r e

a m b a s e s p e c i e s b a c t e r i a n a s . A l l í se o b s e r v a que la f a g o c i t o s i s

se p r e s e n t a d e s d e el t i e m p o 0 - 3 m i n u t o s p a r a las t r e s v a r i a b l e s ,

con una t e n d e n c i a a d i s m i n u i r a m e d i d a que se i n c r e m e n t a e1

t i e mp o .

En el eje de las a b s c i s a s , se e n c u e n t r a el t i e m p o u t i l i z a d o

p a r a a m b a s e s p e c i e s b a c t e r i a n a s y en p r e s e n c i a de las t r e s v a

-r i a b l e s y en el eje de las o -r d e n a d a s el % de la f a g o c i t o s i s

En las g r á t i c a s 6 , 7 y 8 , se c o m p a r a la f a g o c i t o s i s p a r a las

dos espec i es b a c t e r i a n a s , con una v a r i a b 1 e y su c o m p o r t a m i e n t o

e n t r e t o d o s los ti empo e s t u d i a d o s . A q u í los h a l l a z g o s i m p o r t a n t e s

f u e r o n que la f a g o c i t o s i s en p r e s e n c i a de s u e r o i n a c t i v a d o y de

s u e r o n o r m a l fué m e j o r p a r a ep i de rmi d i s que p a r a S». can i t i s .

A con t i n u a c i <5 r< se p r e s e n t a n los va lo res de p de las c i n c o

g r á f i c a s , en d o n d e se c o m p a r a el e f e c t o de la f a g o c i t o s i s sin

s u e r o < cor» t rol > c o n la f a s g o c i t o s i s en p r e s e n c i a de s u e r o

n o r m a l e i n a c t i v a d o y p o r otro lado la f a g o c i t o s i s en s u e r o

norma 1 c o n la f a g o c i t o s i s en s u e r o i n a c t i v a d o p a r a a m b a s e s p e c i es

b a c t e r i a n a s < e x i s t e d i f e r e n e ia e s t a d í s t i c a m e n t e s i g n i f i c a t i v a

c u a n d o p < 0 . 0 5 >.

F A G O C I T O S I S

b a c t e r i a : ep i dermi di s .

T i empo

Sin s u e r o

-S u e r o n o r m a l

S i n s u e r o

-S u e r o inact ivado

S u e r o n o r m a l

-S u e r o inact i v a d o

0 - 3 m i n . .036 . 0 0 6 . 104.

15 m i n . .011 .010 .240

3 0 m i n . .017 .017 .863

6 0 m i n . .011 .010 .599

F A G O C I T O S I S

b a c t e r i a : S . cap i t i s .

Ti empo

Sin s u e r o

-S u e r o n o r m a l

S i n s u e r o

-S u e r o i n a c t i v a d o

S u e r o n o r m a l

-S u e r o i n a c t i v a d o

0 - 3 m i n . . O O S .017 . 3 9 9

15 m i n . 0 0 3 .003 . O S O

3 0 m i n . .023 . 0 0 5 . 0 1 5

6 0 m i n . .093 . 0 1 0 . 0 6 3

1 2 0 m i n . . 154 . 0 5 9 .937

En las g r á f i c a s 1 a la 5 , se o b s e r v a una d i f e r e n c i a

s i gn i f icat i v a p a r a e p i d e r m i d i s e n t r e los e x p e r i m e n t o s sin

s u e r o y s u e r o n o r m a l y con el s u e r o i n a c t i v a d o , en t o d o s los

t i e m p o s . No se e n c o n t r ó d i f e r e n c i a en la f a g o c i t o s i s e n t r e el

s u e r o n o r m a l y el s u e r o i n a c t i v a d o p a r a SJJ. c a p i t i s s o l a m e n t e se

o b s e r v ó d e s d e 0 - 3 h a s t a los 3 0 min en a u s e n c i a de s u e r o ( c o n t r o 1 )

y s u e r o n o r m a l y de 0 - 3 h a s t a 6 0 m i n en la fagoc i tos i s sin s u e r o

( c o n t r o 1 ) y s u e r o inac t i v a d o . No se e n c o n t r ó d i f e r e n c ia

s i gn i f i c a t i va e n t r e la f a g o c i t o s i s con el s u e r o n o r m a l y el

inact i v a d o p a r a a m b a s espec i es b a c t e r i a n a s , e x c e p t u a n d o el ti e m p o

Fagocitosis

98

88

70

58

48

38

28

18

%

rr:

• • 1 _{- • 1}

_____ ____ _________ _____ F

• • 1 _{- • 1}

1 ;

1 ;

•

S. epidemidis S. capitis

TIEMPO 0 - 3 '

SIN SUERO

SUERO HOffltoL

SUERO INftCTIUtfO

Gráfica 1.- Comparación del efecto del suero normal y el suero inactívado en la

Fagocitosis

S. epiderwidis JL capitis

TIEMPO 15'

SIN SUERO

SUERO NORMAL

SUERO INACTIWlBO

Gráfica No.2.- Comparación del efecto del suero nonnal y el suero inactivado en la

Fagocitosis

íes

%

S_. ep ideniidis

TIEMPO 30'

SIN SUERO

SUERO MORRAL r

^ SUERO INACTIUADO

Gráfica No.3.Comparación del efecto del suero nonnal y el suero inactivado en la

100

%

Fagocitosis

90

88

-7 0 . .

58

S. ep i d e m M i s

capitis

TIEMPO 60'

SIN SUERO

SUERO NORMAL ( - J

SUERO INACTIUABO

Gráfica No. i - Comparación del efecto del suero nonnal y el suero inaetivado en

lee

%

Fagocitosis

%

? e . .

6 0 - -I

58

48

-3 6 . .

2 8 - .

16

e

i

1L epideraidis capitis

TIEMPO 120'

SIN SUERO

SUERO HORMAL F ~ 1 SUERO IHftCTIVABO

Gráfica No. 5. Comparación del efeto del suero normal y el suero mactivado en la

En las g r á f i c a s 7 y 3 se c o m p a r a n los r e s u l t a d o s e n t r e

las dos b a c t e r i a s en t o d o s los t i e m p o s e s t u d i a d o s ( d e s d e 0 - 3

h a s t a 1 2 0 m i n . > p a r a a n a 1 i zar su c o m p o r t a m i e n t o con c a d a u n a de

las c o n d i c i o n e s e x p e r i m e n t a l e s uti1 i z a d a s sin s u e r o , s u e r o n o r m a l

y s u e r o i n a c t i v a d o .

En el eje de las a b s c i s a s , se e n c u e n t r a n los t i e m p o s

u t i l i z a d o s en el e s t u d i o s 0 - 3 , i5, 3 0 , 6 0 y 1 2 0 m i n u t o s y en el

eje de las o r d e n a d a s el p r o m e d i o de los p o r e e n t a j e s de la

f a g o c i t o s i s ( t o d o s los e x p e r i m e n t o s se e f e c t u a r o n p o r

t r i p l i c a d o ) .

Los v a l o r e s de p en las g r á f i c a s 6 , 7 y 3 se p r e s e n t a n

a c o n t i n u a c idn:

S I N S U E R O

T I E M P O

B a c t e r i a [ 0 - 3 ] ' a 15' 1 5 ' - 3 0 ' 3 0 ' - 6 0 ' 6 0 ' - 120'

S. ep i dermi di s

S. cap i t i s

. 0 3 6

. 138

. 3 7 2

. 3 0 3

.069

. 2 6 8

.110

. 162

S U E R O N O R M A L

T I E M P O

B a c t e r ia [0-3]'a 15' 15'- 30* 3 0 - 6 0 ' 6 0 ' - 120'

S . e p i d e r m i dis .856

.258 .222 .023 .388 .056 .078 .004 S . c a p i t i s

S U E R O I N A C T I V A D O

T I E M P O

B a c t e r i a C0-33'a 15' 15'- 3 0 * 3 0 ' - 6 0 ' 6 0 ' - 1 2 0 '

S . ep i dermi di s .058 .OIS .009 . 0 0 8

S . cap i t i s .854 .571 .009 .006

En la g r á f i c a N o . 6 en d o n d e se p r e s e ritan los v a l o r e s de p

p a r a los r e s u 1 t a d o s de los e x p e r i m e n t o s p a r a a m b a s b a c t e r i a s en

p r e s e n e ia de la f a g o c i t o s i s sin s u e r o < c o n t r o l ) no se o b s e r v a

d i f e r e n e ia si gn i f icat iva.

En c a m b i o , en p r e s e n c i a de s u e r o n o r m a l se o b s e r v ó s o l o

d i f e r e n c i a s i gri i f icat iva p a r a S^. cap i t i s a p a r t i r del t i e m p o 15

m i n . Por otro 1 a d o , en p r e s e n e ia de s u e r o inac t ivado se o b s e r v ó

d i f e r e n c i a s i g n i f i c a t i v a p a r a a m b a s b a c t e r i a s : S;. ep i dermi d i s a

Fagocitosis SIN SUERO

CONTROL

%

160

90

8 8

70

-60

50

40

30 - -1

28 1 0 - .

0

-fr-3'

15' 38'

TIEMPO

^

w

38' (¡9

S. epideywidis

S. capitis

Gráfica No. 6 .- Fagocitos^ de los polimoifonucleares para S. epidermidis y

S. capitis en solución salina. Se utilizó como control de la fagocitosis sin agentes

Faaocitosis SUERO NORMAL

166

%

98-1-88

78

66 4

TIEMPO

¿L epiderwidis

S. capitis

Gráfica No.7.- Fagocitosis de los leucocitos polimorfonucleares para

Fagocitosis SUERO INACTIVADO

íee

%

9 8

1

8 8

78

-TIEMPO

S. epiderttidis S . c a p i t i s

Gráfica No. 8.- Fagocitosis de los leucocitos polimorfonucleares para

Los r e s u l t a d o s de los e x p e r i m e n t o s de m u e r t e y d i g e s t i ó n

iri-t r a c e 1ular son e x p r e s a d o s en un i d a d e s f o r m a d o r a s de c o l o n ias

< U F O > en p a p e l s e m i l o g a r i t m i c o , g r a f i c a n d o en el eje de las —

absc i sas el t i empo uti 1 i zado y en el eje de las o r d e n a d a s las —

un i d a d e s f o r m a d o r a s de c o l o n i a s p o r m i l i l i t r o . Se p r e s e n t a n los

r e s u l t a d o s de c a d a e s p e c i e b a c t e r i a n a y con las t r e s v a r i a n t e s

ut i 1 i zadas : d i g e s t i ó n i n trac el ul a r er» a u s e n c i a de s u e r o , en

p r e s e n e ia de s u e r o n o r m a l y en p r e s e n c i a de s u e r o inact i v a d o .

Las un i d a d e s f o r m a d o r a s de c o 1 o n ias ind ican el m i m e r o de b a c t e

-r i a s que -r e s i s t i e -r o n a la m u e -r t e i n t -r a e e l u l a -r .

En las g r á f i c a s 9 y 10 se p r e s e n t a n los r e s u l t a d o s de la

d i g e s t i ó n i n t r a c e 1ular con las t r e s vari a n t e s p a r a c a d a b a c t e r i a

en los t i e m p o s 0 - 3 , 15, 3 0f feO y 1 2 0 m i n u t o s . P o s t e r i o r m e n t e en

las g r á f i c a s 11, 12 y 13 se c o m p a r a n los r e s u l t a d o s en f o r m a

independi en te de la d i g e s t i ó n i n t r a e e 1 u l a r en a u s e n c i a de s u e r o

< gráf ica 11 ), con s u e r o n o r m a l < gráf ica 12 ) y c o n s u e r o

i n a c t i v a d o < g r á f i c a 13 > e n t r e a m b a s e s p e c i e s b a c t e r i a n a s .

< T o d o s los e x p e r i m e n t o s se r e a l i z a r o n p o r t r i p l i c a d o ).

Se p u e d e o b s e r v a r en las g r á f i c a s 9 y 10 una di s m i n u c i írn de

las uni d a d e s f o r m a d o r a s de c o l o n i a s p o r m i l i l i t r o p a r a a m b a s

b a c t e r i a s a los t r e s m i n u t o s m o s t r a n d o m a y o r e f e c t i v i d a d la

d i g e s t i ó n en p r e s e n c i a de s u e r o n o r m a l .

una de las v a r i a n t e s ( g r á f i c a s 1 1 , 1 2 y 13 ) se o b s e r v a que fufe

s i m i l a r , m o s t r a n d o S_¡_ cap i t is u n a m a y o r r e s i s t e n c i a a la m u e r t e

30

30

g s

o

IL 3

30

xTniDn (Min )

- -ff L

s '

o

u_ s

S

ï s

-ft

Los r e s u l t a d o s de los t i e m p o de g e n e r a e i fin de las c u a t r o

e s p e c i e s de e s t a f i l o c o c o s c o a g u l a s a n e g a t i v o s , se p r e s e n t a n en

las g r á f i c a s 14 y 15 r e a l i z a d a s en p a p e l s e m i l o g a r i t m i c o . En el

eje de las a b s c i s a s se e n c u e n t r a el t i e m p o u t i l i z a d o : O , 1, 2 ,

3 , 4 , 5 , 6 , 7 , 8 , 10, 12, y 2 4 h o r a s y en el eje de las o r d e n a

das las un i d a d e s f o r m a d o r a s de c o l o n i a s p o r m i l i l i t r o d e t e r m i

-nan do el t i empo de g e n e r a e i fin p o r el mé todo de c u e n t a v i a b 1 e

c a l c u l a d o cor» la s i g u i e n t e f o r m u l a ( 2 3 >: < T o d o s los e x p e r i

-m e n t o s se real i zaron p o r tri p 1 i c a d o >.

g = t 1 o q 2

log b - log a

d o n d e : t = T i empo < m i n u t o s > p a r a n g e n e r a e i o n e s .

a = N o . de b a c t e r i a s en el i n i c i o de la o b s e r v a c i d n .

b = N o . de b a c t e r i a s d e s p u e s de n g e n e r a c i o n e s .

Los t i e m p o s de gene rae i óri que se ob t uv i eron f u e r o n los

T I E M P O DE G E N E R A C I O N

B A C T E R I A S C U E N T A V I A B L E

< U F C >

S. se i uri 1 3 m i n

S . s a p r o p h v t i c u s 16. m i n

S. e p i d e r m i d i s 3 0 min

S. c a p i tis 5 2 m i n

Cor» c a d a e s p e c i e de e s t a f i l o c o c o s se o b t u v ó d i f e r e n c i a en s u

d i v i s i ó n c e l u l a r , m o s t r a n d o cap i t i s m á s r e t a r d o en su m u l t i

-p l i c a c i ó n , f a c t o r que -p u e d e ser i m -p o r t a n t e en los e x -p e r i m e n t o s

e f e c t u a d o s .

La i m p o r t a n e ia de e s t a s di f e r e n e ias p a r a la i n t e r p r e t a c i ón

D I S C: U S I O N

D u r a n t e las ftlt imas dos d é c a d a s , se ha v i s t o que los

e s t a f i l o c o c o s c o a g u l a s * n e g a t i v o s , c a u s a n i n f e c c i o n e s

r e l a c i o n a d a s ai uso de c a t é t e r e s , c o n o c i d a s c o m o i n f e c c i o n e s p o r

c u e r d o ex trali'o < 9 , 10, 11, 12, i3, 14-, 15 .> .

Se e s t a b l e c i ó la h i p ó t e s i s de que la a l t a f r e c u e n c i a

de i r<f ere i on es p o r c u e r p o ex t rañ'o p r-oduc i das por ep i d e r m i di s

en c o m p a r a c i ó n c o n cap i 11s m e n o s f r e c u e n t e m e n t e a i s l a d o , era

debido a que e p i • i e r m i d i s era c a p a z de resistir- a la

f a g o c i t o s i s y d i g e s t i ó n í n t r a c e l u l a r p o r los l e u c o c i t o s

pol ímor-fonuc 1 e a r e s .

E s t o s m e c a n i s m o s de r e s i s t e n c i a no e s p e c í f i c o s a la

i n f e c c i ó n no h a b l a n sido e s t u d i a d o s p a r a este tipo de

Í T U C roorgavi i s m o s , y a que é s t o s , han sido c o n s i d e r a d o s c o m o no

p a t ó g e n o s , en c o m p a r a c i ón con o t r o s c o n s i d e r a d o s c o m o de más

p a t o g e n íc i dad c o m o S_¡_ a u r e u s <. 18, 19 >.

En 1 o © X per i méritos de la f a g o c i t os i s , c o m o se p u d o observar-en las grátfxr.as, &e p r e s e n t a d e s d e el t i e m p o de 0 - 3 m i n u t o s p a r a

las tres v a r i a n t e s que f u e r o n u t i l i z a d a s : sin s u e r o , u t i l i z a d o

como e x p e r i m e n t o c o n t r o l , con s u e r o n o r m a l y con s u e r o i n a c t i v a

t i empo h a s t a las d o s h o r a s e s t u d i a d a s . L o s r e s u l t a d o s d i f i e r e n de 1 o r e p o r t a d o p o r Verforugh y c o i s < 18 ) p a r a míe r o o r g a n i s m o s c o m o 5. a».()•• e u s . En d i c h o s e x p e r i m e n t o s , el f e n ó m e n o f a g o c l t i c o se p r e s e n t ó d e s d e el t i e m p o de 3 m i n u t o s c o n u n a t e n d e n c i a a a u m e n -tar h a s t a los v e i n t e m i n u t o s q u e i n c l u y ó el e s t u d i o .

Se ene o n t r o di f e r e n c i a s i g n i f i c a t i v a e n t r e las d o s e s p e c i e s b a c t e r i a n a s . La f a g o c i t o s i s fué m e j o r p a r a S ^ e c a d er m id i s que

p a r a S_._ c a p i t i s en p re sene i a de s u e r o inac 11 v a d o que en p re s e n e i a de s u e r o n o r m a 1, e v e n t o c o n t r a r i o al r e p o r t a d o p o r Ve r h o e f y c o i s < 21 ), en d o n d e e l l o s e f e c t u a r o n e x p e r i m e n t o s de la f a g o c 1 1 o s i s con s u e r o n o r m a 3. , s u e r o inac t i v a d o y s u e r o d e f i c i e n t e en el c o m -p o n e n te del c o m -p l e m e n t o C 2 a d i f e r e n te s t i e m -p o s : 1 , 5 , 1!5 y 6 0 m i n u t o s a 3 7 ° C p a r a la b a c t e r i a S_¡_ a u r e u s; e n c o n t r a n d o que la m e j o r f a g o c i t o s i s se man i f e stó en p r e s e n c i a de s u e r o n o r m a l que con c u a l q u i e r a de las o t r a s dos v a r i a n t e s ut i 1 i z a d a s p o r e l l o s .

Se h a d e m o s t r a d o que la f a g o c i t o s i s en p r e s e n c i a de s u e r o ñor mal es m e j o r q u e c orí s u e r o i n a c 11 v a d o , e s t o d e b i d o a q u e e 1

su a d h e s i ó n o f a g o c i t o s i s en los p r i m e r o s m i n u t o s del e s t u d i o .

Por lo t a n t o , p o d e m o s d e d u c i r que los r e s u l t a d o s o b t e n i d o s

en este t r a b a j o baj o las concl i ones e x p e r i m e n t a l e s 11 e v a d a s a

c a b o , p u d i e r a n e x p l i c a r s e b a j o el c o n t e x t o de que tal v e ^ , el

f e n ó m e n o que se está p r e s e n t a d o desde 0 - 3 m i n u t o s sed d e b i d o a un

m e c a n i s m o inicial de a d h e r e n c i a de las b a c t e r i a s a la s u p e r f i c i e

de la m e m b r a n a de los f a g o c i t o s d e b i d o a un factor e;:trace 1 i.i 1

ai-b a c t e r i a n o .

G'u i e y he 1 <an i < 11- > , m enci onan que la a d h e r e n c i a es un

p r e r r e q u i sit o inicial p a r a la p a t o g é n e s i s de todas las

i n f e c c i o n e s o c a s i o n a d a s por b a c t e r i a s y que es necesai ia pai a que

o c u r ra la c o ] o n i z ac: i ó 11 c. o n la p o s t e r i o r p r o d u c c i ó n de f a c t o r e s

e x t r a c e l ü l a r ? s que c o n t r i b u y a n a la v i r u l e n c i a del g e r m e n , p o r lo

que la p e r s i s t e n c i a de la«; i n f e c c i o n e s o c a s i o n a d a s por los

es t a f 1 1 o c o c os c o a g u l a b a n ^ g a t i vos p u d i e r a estar r e l a c i o n a d a con

la c a p a c i d a d de p r o d u c i r una s u b s t a n c i a < a d h ^ s i n a > que le

p e r m i t i e r a al m i c r o o r g a n i s m o ¿ v a d i r uno o /cirios de los

m e c a n i s m o s de r e s i s t e n c i a n a t u r a l a n i v e l de la f a g o c i t o s i s .

3e ha p u b l i c a d o que é s t o s m i c r o o r g a n i s m o ^ p r o d u c e n una

s u b s t a n c i a e x t r a e e 1 u l a r de g l i c o c a l i x < m o c o o s l i m e .) , e s t a

s u b s t a n c i a está f o r m a d a por- 4 0 % de caí boh i d ra tos y 77% de

p r o t e í n a s ( 16 }, este m a t e r i a l m u c o s o en e s t o s m i c r o o r g a n icm o s

v á l v u l a s y a d e m á s le p e r m i t e al m i c r o o r g a n i s m o c u b r i r s e de una

mati-i >; p r o tec tora que p o d r í a e x p l i c a r a 1 gurí a s d i f i c u l t a d e s

encont r a d a s en el tratami ento a n t í m í c robi a n o de las i nf ecri o n e s

banteriana-j por c u e r p o exti afio y p o s i b 1 e m e n t e p o d r í a a d e m á »

preven ir la recuperacifiri de la^ b a c t e r i a s en las m u é s t ras del

c a t é t e r d u r a n t e los c u l t i v o s bac t e r i o 1 <5gi co s de r u t i n a . <. ).

£ s t a p a r e d e s p e s a de m o c o ( s l i m e ) no Fué r e g u l a r m e n t e

encon trada sólo en los cat ó tere s c o l o n i z a d o s por los

es taFi 1 o c o c o s c o a g u l a s a n e g a t i v o s sino t a m b i é n en c a t é t e r e s

co 1 on i 2<ados por o t r o s microoi g a n i s m o s c o m o s o n : S ^ a u r e n s , P.

« e r u g i n o s a , A c i n e t o b a c t e r c a l c o a c e t í c u s y o t r o s m i c r o o r g a n i s m o s

< 16 ) .

T a m b i ím se p u d i e r a e x p l i c a r que la f a g o c i t o s i s o b s e r v a d a en

p r e s e n c i a de s u e r o i n a c t i v a d o , p r obab 1 e/nen t- e p u d i e i a d e b e r s e a

que el c a l e n t a m i e n t o n e c e s a r i o p a r a i n a c t i v a r el s u e r o no i mal a

5 6 C por 3 0 m i n u t o s e l i m i n e algftn o a l g u n o s c o m p o n e n t e s p r e s e n t e s

en el s u e r o n o r m a l que f a v o i e z c a n la f o r m a c i ó n de m o c o , y a que

é s t e , segón M o b l e y c o i s . C 2 4 > es c a p á z de i n t e r f e r í r su

i n g e s t i ó n por los f a g o c i t o s . Con esto , se pod i 1 a e s p e c u l a r que

el s u e r o n o r m a l y p r o b a b 1 e m e n t e a l g u n a s pr u t e 1 n a s del s ue ro

i n a c t i v a d o f a v o r e c i e r a n su p r o d u c c i ó n despu.es de las dos d o i a s ,

( entre más t i e m p o , mayor p r o d u c c i ó n del g l i c o c a l i > > que al

p r i n c i p i o p e r m i t e la a d h e s i ó n a las c é l u l a s , pero c o n f o r m e se v *

p r u d u c i e n d o , ejerce una f une i Ón a n t i f a g o c 1 1 i c a . E s t a seria una

^ e p i d e r m i d i s , el cuál se s u p o n e , r e s i s t i r l a más a e s t e m e c a n i s m o que Sj. c a p í t i s c o n s i d e r a d o c o m o el m e n o « v i r u l p n t o .

Por otro lado , los r e s u l t a d o s de 3 a d i g e s t i ó n ii.tr ac e 1 u l a r fueron e x p r e s a d o s en u n i d a d e s f o r m a d o ) a s de c o l o n i a s ( U F C / m l > p a r a las dos b a c t e r i a s e s t u d i a d a s en p r e s e n c i a de las t r e s v a r i a n t e s u t i l i z a d a s . Las u n i d a d e s foí m a d e r a s de c o l o n i a s i n d i c a n

el n Cimero de b a c t e r i a s que son c a p a c e s de r e s i s t i r a la d i ge s 116u i n t r a c e 1 u 1 a r .

C a b e s e ñ a l a r que a m b a s e s p e c i e « c o n las ti es v a r i a n t e s , mos t r-aron u n a t e n d e n e ia a aurnentar las ui11 d a d e s f o r m a d o r a s de c o l o n i a s < U F C / m l > d e s p u é s de los 3 0 m i n u t o s . E s t o p u d i e r a d e b e r s e a q u e los l e u c o c i t o s po 1 i mor fonu.c 1 ear e s t i e n e n una v i d a m e d i a de 6 - 7 h o r a s en la ci r e u 1 a c i fin t i e m p o qup d i s m i n u y e c u á n d o d i c h a s c é l u l a s se e n c u e n t r a n f u e i a de n ú e s ti o o r g a n i s m o

< 1 3 , 1 9 ). E s t o , eiunado al i n c r e m e n t o del m e t a b o l i s m o c e l u l a r o c a s i o n a d o por el m a n e j o de las c é l u l a s "in v i t i o " , p u d i e r a i n t e r v e n ir t-n la di s m i n u c i fin de la c a p a c i dad degi a d a t t i v a del p o 1 1 m or forme1ear.

Por otra p a r t e , los m i c r o o r g a n i s m o s i n c l u i d o s en el e s t u d i o , t i e n e n el cin t ees den t e de n u t r i r s e y d e s a r r o l l a r s e c o n f o r m a c 15 n de c o l o n i a s en m e d i o s a u s e n t e , de n u t r i e n t e s y en p r e s e n c i a de a r t e f a c t o s a r t i f i c i a l e s c o m o sor los c a t é t e- es y / o v á l v u l a s . E s t o

nos hac e pensar que dichos m i c r o o r g a n i s m o s t i e n d e n a

m u l t i p l i c a r s e , a u m e n t a n d o las un i da des f o i meado r as de c o l o n i a s ,

razón por- la cuá 1 se d e c i d i ó de te rmi nar sus ti empo s de

gene rae i ó n , ya que p ud i e r ari a f e c t a r la in terpr etaci 6n de los

re s u1 ta dos de la f a g o c i t o s i s y d i g e s t i ó n intrac e1ulco-. A d e m á s

cabe s u p o n e r que los de m e n o s t i e m p o de g e n e i a u i ó n p u e d e n

m u í t i p 1 i c a r s e más r á p i d a m e n t e y p o r lo t a n t o , c o l o n i z a r más

p r o n t o , c o m o serla el caso de e p i d e r m i d i s el c u á l , p r e s e n t a

m e n o s ti empo de gene rae i ó n y p o r lo t a n t o , su f r ec uenc. i a de

a i. s 1 ami en t o pudi era ser at r i b u ib 1 e a este c o m p o r t ami en t o en

c o m p a r a c i ó n con S_¡_ c: a p i 11 s , de mayor- t i e m p o de g e n e r a c i ó n .

De a c u e r d o a los r e s u l t a d o s de la d i ges 11ón i n t r a c e 1ulai

p r e s e n t a d o s en las g r á f i c a s 9 - 1 3 , se e n c o n t r ó que S_¡_ c.ap i t i s

m o s t r ó m á s r e s i s t e n c i a a su d e g r a d a c i ó n que S^. epi d e r m i d i s b a j o

las c o n d i c i o n e s en que se t r a b a j ó .

E s t o , p u d o ser defo i do a lo s i gu i e-n t e s

io. Que ep i de r mi d i s p o d r í a tener una m a y o r c a p a c i d a d

en:? 3 m í t i c a p a r a la p r o d u c c i ó n del glicocali;: (. s l i m e > y

esto la lleve a una más fác11 a d h e r e n c i a a la c é l u l a y una

más f á c i l c a p t a c i ó n y una a p a i e n t e fá^il d i g e s t i ó n

m t r a c e l u l a r en los p r i m e r o s m i n u t o s del e s t u d i o , ya que

al i n c r e m e n t a r se el t i e m p o , el f e n ó m e n o se fué i n v i r t i e n d o

C o m o se p u e d e o b s e r v a r , los e • p e r í m e n t o s de la d i g e s t i ó n

f avoi-ec i do s sólo en los p r i m e ros 3 0 y 6 0 m i n u t o s re spec t i vameri t e

y al i n c r e m e n t a r s e el t i e m p o h a s t a las dos h o r a s e s t u d i a d a s , se

p r e s e n t ó una m a y o r r e s i s t e n c i a a su m u e r t e i ri t r ac e 1 u 1 ar ; e¿to

p u d i e r a ser- d e b i d o a:

lo. Que el ri tmo de la d i g e s t i ó n i n t r a c e 1 u l a r es menor que e1

i i tmo de la d i v i s i ó n del m i c r o o r g a n i s m o , d e m o s t r á n d o s e un

a u m e n t o p a u l a t i n o en las u n i d a d e s f o r m a d o r a s de c o l o n i a s de

c a d a m i c r o o r g a n i s m o e s t u d i a d o .

2o. En el c a s o de S ^ ep idermi di s. a m e d i d a que pase el t i e m p o ,

é s t e , p o d r í a haber- p r o d u c i d o m á s gl i c oca 11 x < s 1 i me > ,

cubr-iíndose c a d a ves de una c a p a más g r u e s a de este

m a t e r i a l , a u m e n t a n d o su g r o s o r / h a c i é n d o s e asi m i s m o , m á s

r e s i s t e n t e a la d e g r a d a c i ó n de las e n z i m a s i n t r a l e u c o c i

ta-ri a s .

Se hace incap i é en la p o s J b1e i n t e r v e n c i ó n del p a p e 1 del

gl icoca1 i x en este trabaj o f u n d a m e n t a d o por los d i v e r s o s r e p o r t e s

r e c i e n t e m e n t e p u b 1 i c a d o s , a c e r c a de su e f e c t o s o b r e los

1 eucoc i tos p o 1 i m o r f o n u c l e a r e s y m o n o n u c 1 e a r e s . y a que p u e d e

p r e s e n t a r e f e c t o s a d ver sos de los m e c a n i s m o s de r e s i s t e n c ^ del

h u e s p e d , c o m o son la q u i m i o t a x i s , i n g e s t i ó n y r e s p u e s t a ,

o x í d a t i v a s de los f a g o c i t o s ( 24 ), asi c o m o una d i s m i n u c i ó n á»

la r e s p u e s t a 1 1 n f o p r o 1 i f e r a t i v a de las c é l u l a s m o n o n u c i e a i es a

m a t e r i a l se p u e d e ir- p r o d u c i e n d o con el t i e m p o y que f i n a l m e n t e

d e s p u é s de las dos horas p u d i e r a o b s e r v a » s e un e f e c t o

ant i f a g o c i t i c o y an t i d e g r a d a t i v o y por lo t an t o de sari-o 11 ar un

efecto inmuno i n h i b 1 1 o r i o s i s t é m i c o y p r o b a b l e m e n t e a n i v e l l o c a l .

De acuer-do a los r e s u l t a d o s o b t e n i d o s de d i c h o s e v e n t o s en

este e s t u d i o , no se encontrfi que ep i de »-mi di s r e s i s t i e r a a la

f a g o c i t o s i s y d i g e s t i ó n i n t r a c e l u l a r p o r l e u c o c i t o s

po 1 imo rforiuc l e a r e s en el 1 ap so de t i empo e s t u d i a d o , por lo que no

se p u e d e e x p l i c a r s a t i s f a c t o r i a m e n t e la a 1 ta f r e c u e n c i a de las

i n f e c c i o n e s o c a s i o n a d a s p o r 3_;_ e p i d e r m i d i s b a j o este c o n t e x t o ,

por lo t a n t o n u e s t r a h i p ó t e s i s no se c o m p r o b ó .

C o m o se p u d o obs er-var , los r e s u l t a d o s f u e r o n c o n t r a r i o s a lo

e s p e r a d o , por lo que surgen m u c h a s i n t e r r o g n n t e s , c o m o es ver si

existe a 1gtin c o m p o n e n t e o c o m p o n e n t e s en el s u e r o m a c t i v a d o

v e r s u s suero n o r m a l que r e a l m e n t e es ten f a v o r e c i e n d o la

product: ion del g l i c o c a l ix < slime ) o si r e a l m e n t e éste a f e c t e la

f a g o c i t o s i s y d i g e s t i ó n i n t r a c e 1ul*»- por l e u c o c i t o s

p o 1 i m o r f o n u c 1 e a r e s e v a l u a n d o a h o r a su e f e c t o d e s p u é s de dos

horas e s t u d i a d a s i n c l u s o h a s t a las 4 8 - 9 6 h o ¡ a s , o b i e n , si la

di f erenc i a en los r e s u l t a d o s o b t e n i d o s e n t r e 1*s dos e s p e c i e s

C O N C L U S I O N E S

Con los r e s u l t a d o s ob t en i dos en este t rabaj o se p u e d e

cont: 1 u2 r q u e ;

3o. La f a g o c i t o s i s de a m b a s b a c t e r i a s se p r e s e n t a d e s d e el

t i empo 03 m i n u t o s con una t e n d e n c i a a di s m i n u i r a m e d i

-da que se incr emen ta el t i e m p o .

2o. La f a g o c i t o s i s en p r e s e n c i a de suero n o i m a l y s u e r o

i n a r i i v a d o fué m e j o r p a r a S_¡_ e p i d e r m i d i s que p a r a

S . cap i t i s•

3o. Los e x p e r i m e n t o s con suero n o r m a l e i n a c t i v a d o , f a v o r e

-cen la d i g e s t i ó n i n t r a c e l u l a r sólo en los p r i m e r o s 3 0 y

6ü m i n u t o s r e s p e c t i v a m e n t e y al inci emeiitai se t-1 t i e m p o ,

se p r e s e n t ó mayor- r e s i s t e n c i a a la m u e r t e i n t r a c e l u l a r .

Se p ropon e que:

El suero f a v o r e c e la p r o d u c c i ó n del g l i c o r a l i x (.slime) ,

'y é s t e , c on t r íbuye a la r e s i s t e n c i a ar 111 f a g o c í 11 ca y a la

d e g r a d a c i ó n intracelular- por ios l e u c o c i t o s po 11 m o r f or iu-c 1 enr es ,

po 5 i b 1 emen te al p r e s e n t a r s e el 11 empo de ge ner a - i ó i, de c * d a una

Sí la p r o p u e s t a es c i e r t a , h a b r í a q u e e s t u d i a r :

Si el s u e r o n o r m a 1 y/o el s u e r o i n a c 1 1 v a d o r e a l m e n t e

están f a v o r e c i e n d o la p r o d u c c i ó n del g l i c o c a l i x ( s l i m e )

Es el g 1 íc oca 11 >: ( s 1 i me > pr oduc i do p o r los

e s t a f i l o c o c o s c o a g u l a s a n e g a t i v o s el que e f e c t i v a m e n t e

e s t á a f e c t a n d o la f a g o c i t o s i s y d i g e s t i ó n intercelular'^

La d i f e r e n c i a o b s e r v a d a en la f a g o c i t o s i s y d i g e s t i ó n

i n t r a c e l u l a r e n t r e las dos bacte» ías, e s t á i e l a c i o n a d a

con la c a n t i d a d del g l i c o c a l i x ( s l i m e ) p r o d u c i d o ?

Ex i s 1 1 r á a c a s o otro fac tor de p a t o gen ici dad que no lo

h e m o s v i s u a l i z a d o y que tal v e z es el q u e l l e v a a

5. ep i de rmi d i s a c a u s a r la m a y o r f r e c u e n c i a de las

R E S U M E N

Los e s t a f i l o c o c o s c o a g u l a s a n e g a t i v o s , son m í e r o o r g a n i s m o s

de b a j a v i r u l e n c i a . No suelen o c a s i o n a r i n f e c c i o n e s en el h o m b r e

a m e n o s que e x i s t a una a l t e r a c i ó n de las b a r r e r a s n a t u r a l e s de

d e f e n s a , como es el uso de c a t é t e r e s . A c t u a l m e n t e se ha

r e p o r t a d o una a l t a f r e c u e n c i a de i n f e c c i o n e s p r o d u c i d a s por

S t a p h y Ip c p c c u s ep i dermi di 5 en c o m p a r a c i&n con otras e s p e c i e s

m e n o s f r e c u e n t e m e n t e a i s l a d a s como Stap hyl o c o c c u s cac-itis, lo que

nos llevó a e s t u d i a r si ep i dermi di s es c a p a s de resistir- a la

f a g o c i t o s i s y digestión m t r a c e 1 u 1 a r por l e u c o c i t o s p o 1 í m o r f o

-n u c l e a r e s .

La f a g o c i t o s i s de a m b a s b a c t e r i a s se p r e s e n t ó desde el

tiempo 0 - 3 m i n . h a s t a los 3 0 min. con una t e n d e n c i a a d i s m i n u i r a

m e d i d a que se i n c r e m e n t a el t i e m p o . La f a g o c i t o s i s en p r e s e n c i a

de suero n o r m a l e inactivad.o fué mejor- p a r a S_¡_ ep i dertni d i s que

para cap 111 s . Los e x p e r i m e n t o s con suero normal e i n a c t i v a d o

f a v o r e c i e r o n la digestión í n t r a c e l u l a r sólo en los p r i m e ) o s 3 0 y

é.U m i n u t o s r e s p e c t i v a m e n t e y al i n c r e m e n t a r s e el t i empo se p r e

-sentó r e s i s t e n c i a a la muerte intrace 1ulai .

De a c u e r d o a los r e s u l t a d o s o b t e n i d o s , se e n c o n t r ó que tanto

S,. ep i de rm i d \ s c o m o cap i 11s, m o s t r a r o n una t e n d e n c i a a r e s i s

po 1 imorf o n u c 1 e a r e s a ón en p r e s e n c i a de suer o n o r m a l , e x i s t i e n d o

sólo d i f e r e n c i a en el t i e m p o que la p r e s e n t a r o n . Esta c a p a c i d a d

ari t i f a g o c 111 c a y an 11 de g r a d a 11 v a p o d r í a ser debi da a la p r o d u c

-ción de una s u b s t a n c i a tipo a d h e s i na c o n o c i d a c o m o g l i c o c a l i x

( S í i m e ) p r o d u c i d a por e s t a s b a c t e r i a s que esté a f e c t a n d o los

r e s u l t a d o s y que la d i f e r e n c i a de c o m p o r t a m i e n t o e n t r e las dos

b a c t e r i a s sea debi d a , a que su p r o d u c c i bn esté r e l a c i o n a d a con el

B I B L I O G R A F I A

D a v i s , B. D . , D u l b e c c o R. y C o l s . 197S. T r a t a d o de

Mi c rob i o 1 o g 1 a. 2a. Ed. Sal v a t E d i t o res. Bare e 1 o n a ,

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Was h i n g t o n , D. C. 1044 p .

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N e g a t i v e S t a p h y l o c o c c i . A l m q u i s t & W i k s e l l

I n t e r n a t i o n a 1 . S t o c k h o l m , S w e e d e n .

F l e e r , A . , Ve r h o e f , J. and H e r n a n d e z , A . 1 9 3 6 .

C o a g u l a s e N e g a t i v e S t a p h y l o c o c c i as N o s o c o m i a l

P a t h o g e n s in N e o n a t e s . A m . J . M e d . SO (supp1 6 B ) :

1 6 1 - 1 6 5 .

B a d d o u r , L . M . , C h r i s t e n s e n , G . D . H e s t e r , M. G.

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V a r i a b i l i t in S p e c i e s V i r u l e n c e . J . I n f e c t D i s .

6 . - B e w e l l , C H . M . , C l a r r i d g s , J . E . , Y o u n g , E. J. and

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7 . - Zimmer-Ii, U. , L e w , P.D. and W a l d v o g e l , F.A. 1984.

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for a L o c a 1 G r a n u 1ocyte De fect. J.CI a n . I n v e s t .

73.! i 1 9 1 - 1 2 0 0 .

8. - Z i m m e r 1 i , W. , Wa 1 dvogel , F . Vatidaux , P. and W y d e g g e r , U.

1982. P a t h o g e n e s i s of F o re i gn B o d y I n f e c t i o n : D e s c r i p t i o n

and C h a r a c t e r i s t i c s of an A n i m a l M o d e 1 . J . I n f e c t D i s .

146 < 4 > : 4 8 7 — 4 9 8 .

9 . - P e t e r s , G . , Locci , R . and F'ul v e r e r , G. 1982. Adhe r-ence

and Gr-owt h of C o a g u l a s e N e g a t i ve S t a p h y 1 ococc i on

S u r f a c e s of I n t r a v e n o u s C a t h e t e r s . J.Infeet.Dis.14fa

(4): 4 7 9 - 4 8 2 .

10.- C hr i s ten s e n , G . , S i m p s on, W. A . , Bi s n o , A . L . a n d B e a c h e y , £ .

1982. A d h e r e n c e of S l i m e P r o d u e i n g S t r a i n s of

S t a p h y 1 o c o c c us ep i dermi di s to S m o o t h S u r f a c e s . I n f e c t

11.- H o g t , A . H . , D a n k e r t , J . , d e V r i e s , J . A . and F e i j e n ,

1983. A d h e s i o n of C o a g u l a s e N e g a t i v e S t a p h y l o c o c c i

B i o m a t e r i a l s. J . G e n . M i c r o h i o 1 . 1 2 9 : 2 9 5 9 - 2 9 6 3 .

12.- S h e t h , S . K . , F r a n s o n , T . R . , R o s e , H . D . , B u c k m i r e , F . L .

Co o p e r , J . A . and S o h n 1e, P . G . 1993. C o l o n i z a t i o n

of Bac t e r i a on Po 1 y v i n y I C h 1 o r i de and Te f 1 on

1 n t r a v a s c u 1 a r C a t h e t e r s in H o s p i t a l i z e d P a t i e n t s .

J .Clin. M i c r o b i o l . 1J5 <5)s 1 0 6 1 - 1 0 6 3 .

13.- M a r r i e , T . J . , N o b l e , M . A . and C o s t e r t o n , J . W . 1983.

E x a m i n a t i o n of the M o r p h o 1 ogy of Bac t e r-ia A d h e r i n g

to Pe ri tonea 1 Dia lys i s C a t h e t e r s by S c a n n i ng and

T ran sm i s s i on E l e c t r o n M i c r o s c o p y . J . C 1 1 n . M i c r o bio 1 .

18 ( 6 ') : 1388~ Î 3 9 8 .

14.- M a r r i e , T . J . and C o s t e r t o n , J . W . 1984. S c a n n ing and

T r a n s m i s s i o n E 1 ec t ron M i c r o scopy of In S i t u Bac t er- ial

Co 1 o n i z a t i on of I n t r a v e n o u s and In tr a a r t e r i al Cat he t e r s .

J.Cl i n . M i c r o b i o l . 19 ( 5 ) s 6 8 7 - 6 9 3 .

15.- B a y s t o n , R , and P e n n y , 3 « R , 1 9 7 2 . E x c e s s i v e P r o d u c 1 1 o n

of M u c o i d S u b s t a n c e i n S t a p h y î o c o c c u s S 11 A: A P o s s i b l e

F a c t o r in C o l o n i z a t i o n of H o l t e r S h u n t s . D e v . M e d , C h i i d .

N e u r o l . 1_4 <'suppl 2 7 ) s 2 5 - 2 8 .

a .

Qu i e , P . G , a n d B e l a n i , K . K . 1987. C o a g u l a s e N e g a t i v e S t a p h y l o c o c c a l A d h e r e n c e a n d P e r s i s t e n c e . J . I n f e c t . D i s .

156 < 4 > s 5 4 3 - 5 4 7 .

17.- L u d w i c k a , A . , IJhlenbru.ck, G . , P e t e r s , G . , G r a y , E . D . , 3 e 1 j a s s e w i c s , J . a n d P u l v e r e r , 0 . 1984. Inve s tig a t i on

on Ex t r a c e l i u i a r S l i m e S u b s t a n c e P r o d u c e d by

S t a p h y l o c o c c u s e p i d e r m i d i s . Z b 1 » B a k t . H y g . A 2 5 8 . 2 5 6 - 2 6 7 .

18.- V e r b r u g h , H = A . , P e t e r s , R . , P e t e r s o n , P . k . and V e r h o e f , J . 1 9 7 8 . P h a g o c y t o s i s and K i l l i n g of S t a p h y 1 o c o c c i by H u m a n P o l i m n r p h o n u c 1 ear and M o n o n u c 1 e a r L e u c o c y t e s . J . C l i n .

P a t h o l . 3 1 . 5 3 9 - 5 4 5 .

19.- V e r h o e f , J. P e t e r s o n , P . K . a n d Q u i e , P. i'^77. K i n e t i c s of S t a p h y 1 o c o c c a 1 Op son i zat i on , A t t a c h m e n t , I n g e s t i on arid Ki 11 irig by H u m a n Po 1 i m o r p h o n u c 1 ear- L e u c o c y t e s 5 A

Quart 11 tat i v e A s s a y U s i n g 3 H T h y m i d i n e L a b e l e d B a c t e r i a . J. I m m u n o 1 M e t h o d s . .14 . 3 0 3 - 3 1 1 .