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I N S T I ' W T O RAGTONAL DT m G I F N E
25 d e niayo de
1987
25 de noviembre de 1QR7
ADRIAN W"ET)TNA G4RCTA
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Introducciba.
La
toxina dermonecrbtioa
( T n )
deBardetella
pertuanlme m
material proteico
que nel o c a l i s a
ea e1 cltoplaria
decéiulaa jovmea(’),
ai m í t i r o nliquidar viajen, l a toxihe
teunbien
ae1s encuentra
ene1 robranaanate denpu&m de eiimi
-
nar
laucólulfím.
Lanctiridrd
dearta toxina como una rnibrtq
cia dennonecrótica fue demomtnda per primern ves por Wrdet
( 2 )
hltg00 YII
1909
.
CUFUidO I O i B y ü C t RDer
V hmbarttaea
0-duce
un
edema
hemorrdgicaque
110- R darm a necrdair
ye v q
tualmente deja una Ú l c e n
1ncual
m&rtarde cimtrlsa.
h o u e
ycol.,(’)~rapurieron
uno a8l o r
métodorpríncipa-
l e a p a n p u r i f i c a r l a
TI%
a t e método
fu&
modificado por
Ii-da y
~ o ~ ~ g i ( 4 ) ~ a i ~ ~ ~
encantrnron
quei a
d o r i a m í n i m amortal
(ma)
detoxina
p ~ r ne l rntbn
e a de0.1 a
0 . 6 ~ g deproteína
l a
donirmínima nRcmrnnte
or
de 0.005a
o.oae/gy
l a
d o r i rque
reduce e1 pero del baso
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de
0.07 a
O.O%g.e rebe
quel a
toxina emuna p r o t e h a
p o r quetiene
mmkximo
deabsorci6n
a
27T
nil,una pueba poritiva a prateinan
yminohidon
y ORderitnirlda
Dordigentian con triprina
DWOno
por mara o iüiara
.
-
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( 5 )
Lar céiuiar
deBordeteiia perturpia que crecen
enun
m e
d i o
r i m
en
mrignaeo prenentaa
untareducción
en
l a r
nivelende
Tiüi,
a d
comootrnr actlrida&ea
bioi6gi~am;l a p h l l d n
dei
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i-i
La toxina uuede s e r transformada en toxoide n o r tmtalii- ento con f o r a a i i n z y en esta
forma
esun
buen Fintípeno, i~i t oxina Rctiva no l o es. Los anticuemoa n e u t m l i z m 18 toxina
activa.
La
TDN es un m a t e r i dm y
inestable; soluciones tbxi-cas pierden e l
25%
de su actividad entre5
y 22 C en 2 6188,R
3 7 O r :
e l 95% de l a actividad e s destruidaen
e l mismolzbso
de tiemao y a
56%
dumnte 10 minutos vdcticamente t o d n l atoxicidad demostmble desanarece.
6
La TDF no narece tener un naael arominente en
la
caaaci-s i n
( 7 )
dad 8e rlordetella nertussis n8ra nroducir infección
embargo,
is
toxina aroduce tina i n f i a m ~ c i 6 n y necrosis en e ltracto r e s n i m t o r i o
v
este efecto uarect contribuir en l aua-
togénesia de l a t o s f e r i n a
.
En embriones de n o l l o uroduce leciones en c é l u l a s e a i t e l i a l e s d e lmlm6n.
Cuando se adainis-
tra a coballos aor d a intracerebral la8 leaiones son observa
-
das en e l cerebro y meninges. Almnos investigadores ( 9 ) han
aensado que e s t a toxina juega un p a w l i m o r t a n t e en
l a s
ence-
f a i o a a t i e aalmnas
veceaen l a
tosferina.( 8 )
En 1940 Toad deecribfo
un
interesante efecto de l a TDN en ratón; encontró oue en ratonem muertoe uor una dosie del a
toxina administrsds nor v i a aibcutanes mastraben h e a o m p i a s p r t i c u l a n n e n t e en l o s msculos abdoainelesI En ratones
sobre
-
vivientes a una invección intraueritoneaí Ae l a toxina m e r
-
toas.una 8eaBna o doa meses deuuós, mostraban una Inarcaaa s t r o-
f i a
del
bazo,
eetos e r a n pequeños,sin
eangra y frecuentemen-t e no wsaban
d s
de1/4
d e lmso
nonnanl.t-
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i#uños y c o l . , (lO)calentaron a
56%
durante39
minutos ydeeuués de i n o c u l a r esta areaaraci6n
en
mtbn no se o b s e da t r o f i a
.
Las
nmuiedadee de T?iN mencionadas anteriormente se con- sideran D a r t e de l a e actividades tóxicas de Rordetella aertu- euis ya aue exigten otros factores involucrados en este e&-t o
en
animales exaeriinentriles coino son:e l
f a c t o r nromotor del a l i n f o c i t o s i n
(FFL)
e l f a c t o r arnaibilizante a l a histamina(FSH)
v
l a
endotoxina establea l
cnlor.-
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0bjetivo.-
El
objetivo Drimordinl de este t m b a j o estribR en tratarun l o t e mezcla de vacuna nertuesis de diferentes fonaas (ca-- lentamicnto, agitación o refriRaracibn)*
aara
estableces l a scondicione8 más ontimas WFII 1~ deatoxificaci6n basandose en
uno de l o s efectos brOdUcidOB
nor
TIIN en ratones como e s l ae ) Ceaa.
La vacuna fué oronucida con cenas de RordeteliFi
-
vertus s i e
134
v
50Q embleeda en l a aroduccidn de l a vacunacontra
la
tosferina en e l I n s t i t u t o 'FracionR1 de Higie-
ne
. ( INH).
Las cenas se cultivaron en medio de c u l t i v o R base de
alutnnato y nrolina.
-
b) V e d i o de c u l t i v o .
c) vroceuo de aroduccibn.
La
vacunn se obtuvo medimte e l método de fpraentaci-6n
u t i l i z a d o en e l INIT (diaerama 1). d ) 5 garrafones de 4 1 con enuiao de bunta. e ) 2 sarmfonee de 20 1 con eauiuo de cosecha. f ) Vatraces e s t d r i l e s de 250 m l .a )
Pimtna e s t € r i i e s de diferentes volunienes.h)
Pennentsdor IF70-NRS
(can. 70 1).i ) Aaitndor
ñ-25
o similar. j ) Xstufa de incubacidn.k) R O U ~ D O I)RIT~ d e s t o x i f i c a r 8 n i v e l de garrafon de 4
1.
i)
camarafrfa.
ni) P m s c o ~ de 45 ml de v i d r i o t m n s m n n t e s aara aueRtrB.
n) Potencioaetro.
o ) Esaectofotometro.
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p) ~ i C r O ü C O b i 0
q ) derinqas.
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m a j a s .s ) Ratones ne
15
di& de nacidosCultivo 42 horns
1
~oncentraci6n ne biamsa
(manit
ci6n
EI p)l 4 i1
Eliminación de so brenadante
C é l u l a s
1
FAPH
4 Sobnnadente a P)l4
1
I
C6lulaa a PH
7
Células más Wertioiato
L
Prosrama de trabajo.-
1) Se cuenta con l o t e s de vacuna nertussis 29-514, 29-521
de ceuas 134 y 509 respectivamente y con volumenes de
10.5 JT 9.2 1
2) Se reunen e s t o s en un
solo
l o t e nam f o m r una mezcla(2gW-80, G 1:l) con
un
volumen t o t a l de 19.7 1, se ajusta~h a 6-7 y 200 uoa/ml.
3)
De
e s t e volumen se toma8
1 nara envasar 4 garrafones con2 1 cerin uno de vacunn nertusuis y e l r e s t o se almucena en
camarP f d p (11.7 l\.
4 ) E l ndmero t o t e 1 de garrafones gem:
C 1:5 (11.7
1)
C 2:5 ( 2.0 1) C 3:5 ( 2.0 1)
C 4:5 ( 2.0
1)
G 5:5 ( 2.0
1)
5 )
A cada uno de e s t o s garrafones se l e sonletera a d i f e r e n t e s 1;m
t a a i e e t o s fi
sicoauímic os.Cr 2:5 Colocar en a a i t a c i h suave a 35OC (50-m) m e s t r e a r
a
los
5,
7 ,
10, 15 días. Cerrar uruebas de m m z adu
-
1 4
e h e -
~~~~ -- ~G
3:5 Colocar a 35OC e s t h t i c a y a g f t a r una vez a l d í a , mu-~~~~~~ ~ ~~ ~
e e t e r a r a l o s 5*
7,
15 d í a s .Correr
meb bas debureza
uor
1 4 días.0
4:5
Desmés de e n m s a r en Rarrmfon de 4 1, colocar eaui-uo de destoxificaci6n; calentar a 56% durante .Wniin
m e s t r e a r y c o r r e r oruebas de toxicidad. B s w r a r
re-
su
Ita
d o s.0
5:5
l)esaués de envasar se refrigera en caaara f d a dum-t e 3 meses, m e s t r e a r y c o r r e r DNebaS de mreza'.
E sue FE, r r e s u l t ado s.
Para cad=
nrueba de toxicidad ea necesario u t i l i z a r30
ratones (20 n a m e i nroblema y 10 coa0 t e s t i g o s ) nue se inocu
-
i a d n con 0.5 ai de Vacuna nertussis o solución saiinn s e m
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1.
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La v a m a
nertusnir ne produce
en cultivo
aumqg--J y
l a concentrndidai
del a
bioaaaa sel l e v a acabo
terlomente esta6 célrilsa
ranrometidar a diferenten
tratamicmtor
(calentamiento, n g i t n c i h , refrigeracídn
) psrnpoder obtener e l
modor
mátodo
dede~toxificnci6n.
Es conocido
quaBbrtietellapertu
a n i r esintrín-
necnmente t d d c a debido
R unnaerie
decoaponenten
c4lularen que rnauifientsm ente efecto
de unau
otrn
ma-nom.
Laprueba que
magiere l aOrganisncibn
-din1
de
l a Snlul
(Om)
parademontrnr
1 nreduccibn
de1n
toxicidrd
de l a v n m aen l a propuesta por gttmnn
yüox,
que caiainte
en peanr grupon
de 20rntonea
conpeio
entre
14-16 gr.loa cualen
non inoclrlndoa porr i a
intraperitoneal
otni 0.5m í
de tRcunnRjuwtada
n10 unidsdee
de opacidnd(10
X
10' bacterias/")
yun
regundo grupo
de
20rntanea
con
e l mimo
promedio depero, como controles,
rmboe grnpom mepenan, tanto a l
i n i c i o
de l a prueba,
a
l v
72
hrn. J nloa
7
bina.por
mediode prenipitncibn con &ido cftrico
J pon- 'Los
ratonea inyeatadon
c m tmn vacunano
t o d c a
recuperan
nu peao i n i a i a l
n l a r 72 hra. deripoer de 1sinyeccion
yparn
e l
7
d a uun graraucia de3
gr.corapq
rad0 con tm pero
i n i c i a l .
Ln
t o d o i d n d del a vncunft
ne
obaena
p o r mi bajoincremento
de ~ e a o . e na1
ratbn
J
l a muerta
dearto
(T~IPR).Ihi
e l preaente trabajo ne
eatudide l
efectoque
ne
l e puede producir
ni s toxin8 prearnte
cml a
vndu-na
p o rdiferontea trntiunientoa
como calentnmiento,
ngitación
yrefrigeracisa.
La
evnluncibn
delon
efectoa aobre
1ntodnft eon
evaluador meaimte
l a nmebfirugemida
porl a
OMS, eacanrenisnta aclarar quo 1 n prueba
nolo ne
rea1Im con
16
rrtonea
tentigoi en iugar
de 20debido a
la
f a l t a
de estos.
loa
gnrmfones mametidos a
m atemperaturn
de35Oc
Jagitaban
n 50rpm.
(tabla 1) nonlam
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IQFor
grado detoxicidad
conun n a p r n d a e r o
de ratononmuartam.
i m ~ ~ r r a i a a e n
quepenuaecioraa aatáticor
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35Oc y
agitndoe mole
mn ve5 nl dfn(tabla
11)mest-
folimi menor grado de
t o d a i d s d
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en
i o n urndom
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diatribuida en
1.va-
De
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remltadoa
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en
gL
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t n t a d o p o rocrlrataaaianto
(L 56Ocpor
un
periodo de30
m i n .
( t a b l allÍ)remalto
d e n t s d f i o r cdo, confimimdone que
l n t o e n a
una temperaturn de 56'c pierde (IP rotitidnd blol6gIoa p o rl o
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r i n a me l e conod. tnmbi&n COBLO
t e e n
t e m o l a b i l(HLT)
ib 01 cnmo del
gnmfan
refrigerado durante3
m=aea ( t a b l a
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debido 8 qua l a t o d a 8 a0nufn
ninguna alteraoí-
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compnrncih
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t o d c i d n d aerín e ltratar
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fonmalina.1.-
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toxina
dezmonecretiea
em uuntoxima tersol.-
Ea1
( S n ) . l r imal
pierde m netirfdadbiolÓgiea
p e r crlentnmiento
(I56'c
por 30min.
2.-
Ln toxicidnd
no ea diriniariidnpor
mediarmecnn;l,
coao refrigenrclon
por
trammenea.
3.-
La
prueba detodcidad deberá
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n n l i s r d a on
miibrr
l o t e
pn>dacdao.4.-
@I ietedo meguro pameliminar l a todcidrrd
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inmuiologicnl and other b i o l o a i c d ectivitee. %i*
c e l Tekker, inc. Pew York vol. 4:20
11.-
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Pelczar Wichnel, R e i d , Chan, ~icrobio1oPfR Ed,A QUIEN CORRESPONDA:
Por medio de l a presente, hago constar que e l alumno
con matrícula 8 0 3 3 2 5 3 0
obtener l a
con área de
---
A solicitud d time conve-
niente, se extiende l a p
t r i t o Federal, a l o s e DICIEMERI:
de m i l novecien
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Av Mtchorin y Purisma. Col Vicsntma. Inapaiapa. 0 F C P 09340 Te1 686-03-22