Efecto del extracto etanólico de Moringa oleífera sobre la supervivencia de Listeria monocytogenes ATCC 19115 in vitro

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(1)Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS ESCUELA PROFESIONAL DE. BI. O. LO. G. IC. AS. MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA. CI EN. CI. AS. Efecto del extracto etanólico de Moringa oleífera sobre la supervivencia de Listeria monocytogenes ATCC 19115 in vitro. TESIS. PARA OPTAR EL TÍTULO PROFESIONAL DE. CA. DE. BIOLÓGO-MICROBIÓLOGO. Br: VALQUI CHÁVEZ, Dalia Brisset. IO. TE. AUTORES: Br. MORENO GAMBOA, Segundo Enrique. BI. BL. ASESOR: Dr. GUEVARA GONZALES, Juan José. TRUJILLO-PERU 2019. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(2) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DEDICATORIA A Dios ,por ser el artífice de que estemos cumpliendo una de. AS. nuestras metas y ser nuestro soporte en todo momento. IC. A nuestros padres y familia , por el apoyo inconmensurable. BI. O. LO. cada proyecto que nos determinamos a realizar. G. que nos brindan, por cada palabra propicia ,por ser parte de. A las personas que nos ayudaron asiduamente con sus. CI EN. CI. AS. conocimientos, experiencias académicas y consejos. A los amigos que siempre estuvieron presentes para brindarte. BI. BL. IO. TE. CA. DE. toda su solidaridad y apoyo. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(3) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AGRADECIMIENTO A la Universidad Nacional de Trujillo, casa de estudios que nos formó académicamente estos cinco años ,por los maestros que. AS. nos inculcaron y las instalaciones que fueron testigo de. G. IC. nuestro desarrollo profesional.. LO. A nuestro asesor Juan Guevara Gonzàlez, por el apoyo. O. brindado y los aportes pertinentes en el proceso de realización. BI. de tesis.. AS. A los maestros que nos apoyaron desinteresadamente en la. BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI EN. CI. culminación del proyecto de investigaciòn. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(4) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. JURADO DICTAMINADOR Los miembros del jurado dictaminador firmantes, declaran que el presente. AS. informe ha sido sustentado bajo los términos y cánones de las normas. BI. O. LO. G. fundamentales ,siendo APROBADO por UNANIMIDAD.. IC. vigentes de la institución y ha cumplido con los requisitos formales y. DE. CI EN. CI. AS. Dr. Guevara Gonzales Juan José Presidente. Secretaria.. BI. BL. IO. TE. CA. Dra. Rodríguez Haro Icela Marissa. Dr. Muñoz Ganoza José Eduardo Vocal. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(5) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. INDICE. INDICE…………………………………………………………………………………………..2. AS. RESUMEN .................................................................................................................... 7. IC. INTRODUCCIÓN .......................................................................................................... 8. G. MATERIAL Y MÉTODOS ........................................................................................... 15. LO. Muestras .............................................................................................................. 15. O. Recolección e identificación taxonómica de Moringa oleifera............................... 15. BI. Preparación del extracto etanólico. ...................................................................... 15. AS. Preparación de las concentraciones .................................................................... 16. CI. Reactivación de la cepa Listeria monocytogenes ATCC 19115 ........................... 16. CI EN. Curva de crecimiento de Listeria monocytogenes26. ............................................ 17 Evaluación de la supervivencia bacteriana ......................................................... 17. DE. RESULTADOS ........................................................... ¡Error! Marcador no definido.. CA. DISCUSIÓN ................................................................................................................ 21 CONCLUSIÒN ............................................................................................................ 23. TE. ANEXOS........................................................................ ¡Error! Marcador no definido.. BI. BL. IO. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS ............................................................................ 24. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(6) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. PRESENTACIÓN. cumplimiento. con. las. disposiciones. reglamentarias. vigentes. IC. En. AS. SEÑORES MIEMBROS DEL JURADO DICTAMINADOR. G. establecidas en el Reglamento de Grados y Títulos de la Universidad. LO. Nacional de Trujillo, presento a ustedes el informe de tesis titulado: “Efecto. O. del extracto etanólico de Moringa oleífera sobre la supervivencia de. BI. Listeria monocytogenes ATCC 19115 in vitro, con lo cual pretendemos. AS. cumplir con uno de los requisitos establecidos para obtener el Título. Trujillo, 17 de diciembre. del 2019. CA. DE. CI EN. CI. Profesional de Biólogo- Microbiólogo.. Br. DALIA BRISSET VALQUI CHÁVEZ. BI. BL. IO. TE. Br. SEGUNDO ENRIQUE MORENO GAMBOA. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(7) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DEL ASESOR El que suscribe, profesor asesor de la presenta tesis titulada: “Efecto del. AS. extracto etanólico de Moringa oleífera sobre la supervivencia de. G. IC. Listeria monocytogenes ATCC 19115 in vitro”.. LO. CERTIFICA:. O. Que la investigación ha sido desarrollada siguiendo el método científico. BI. y los objetivos propuestos en el correspondiente proyecto, asimismo que el presente informe ha sido revisado detalladamente y contiene las. AS. sugerencias pertinentes. Por lo tanto, el autor debe continuar con la. Trujillo,17de diciembre del 2019.. DE. CI EN. CI. tramitación que corresponde para su titulación.. Asesor. BI. BL. IO. TE. CA. Dr. JUAN JOSÉ GUEVARA GONZALES. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(8) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. RESUMEN El presente trabajo tuvo como objetivo evaluar la supervivencia de Listeria. AS. monocytogenes ATCC 19115 frente a tres diferentes concentraciones de. IC. extracto etanólico de semillas de M. oleifera . Para la obtención del extracto se. G. utilizó el método de extracción de Soxhlet , y para determinar la supervivencia. LO. antibacteriana , se emplearon cultivo de L. monocytogenes que fueron. O. reactivados en Caldo BHI por 24 horas a 37°C y estandarizadas al tubo N° 0.5. BI. del Nefelómetro de Mac Farland (1.5 x108 UFC/mL). La supervivencia bacteriana. AS. frente al extracto se determinó utilizando el método de dilución en tubo en caldo. CI. Mueller Hinton ,temperado a 37°C y a concentraciones de 10, 40 y 60 mg/mL;. CI EN. asimismo un control conteniendo caldo Mueller Hinton con inóculo bacteriano. Se sembraron por superficie en placas Petri con Agar Mueller Hinton, La supervivencia se midió mediante el recuento en placa comparados con un. DE. control. Se observó disminución de colonias en las tres concentraciones. CA. empleadas en proporción directa con la concentración; a mayor concentración mayor efecto. El análisis de varianza determinó que existen diferencias. TE. significativas entre cada concentración del extracto con el control, siendo la. IO. concentración de 60 mg/mL la de efecto inhibitorio sobre L.monocytogenes que. BL. las concentraciones de 10 y 40 mg/ mL ( P<0,05). BI. Palabras claves: Listeria monocytogenes; Moringa oleifera, supervivencia, extracción de Soxhlet. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(9) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. ABSTRACT. AS. The present work aimed to evaluate the survival of Listeria monocytogenes. IC. ATCC 19115 against three different concentrations of ethanolic extract of M.. G. oleifera seeds. To obtain the extract, the Soxhlet extraction method was used,. LO. and to determine antibacterial survival, L. monocytogenes culture was used,. O. which were reactivated in BHI broth for 24 hours at 37 ° C and standardized in. BI. tube No. 0.5 of the Mac Farland nephelometer (1.5 x108 CFU / mL). Bacterial. AS. survival against the extract was determined using the tube dilution method in. CI. Mueller Hinton broth, tempered at 37 ° C and at concentrations of 10, 40 and 60. CI EN. mg / mL; also a control containing Mueller Hinton broth with bacterial inoculum. They were seeded by surface in Petri dishes with Mueller Hinton Agar. Survival was measured by plate count compared to a control. Colony reduction was. DE. observed in the three concentrations used in direct proportion to the concentration; The higher the concentration, the greater the effect. The analysis. CA. of variance determined that there are significant differences between each. TE. concentration of the extract with the control, the concentration of 60 mg / mL. IO. being that of inhibitory effect on L. monocytogenes than the concentrations of. BL. 10 and 40 mg / mL (P <0.05 ) Keywords: Listeria monocytogenes; Moringa. BI. oleifera, survival, Soxhlet extraction. Keywords: Listeria monocytogenes; Moringa oleifera, survival, Soxhlet extraction. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(10) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. INTRODUCCIÓN La inseguridad alimentaria es un frecuente problema de salud pública en todo el mundo, ya que los productos alimenticios están propensos a la contaminación. AS. causada por agentes patógenos, algunos de ellos generados durante el. IC. almacenamiento, el transporte o el procesamiento después de la cosecha, lo que. G. trae consigo pérdidas significativas en la calidad, cantidad y composición de. LO. nutrientes1. La calidad microbiana y la seguridad de los alimentos se pueden. O. lograr constantemente mediante la implementación y el cumplimiento de Buenas. BI. prácticas higiénicas y buenas prácticas de fabricación (GMP) en el. AS. procesamiento2.. CI. Los microorganismos causantes de enfermedades transmitidas por los alimentos. CI EN. contaminados , son principalmente Listeria monocytogenes, Salmonella enterica, Escherichia coli y Campylobacter jejuni 3. Estos microorganismos presentan resistencia y han sido responsables del fracaso de muchos programas de. DE. desinfección4.. CA. De las diecisiete especies reconocidas de Listeria, solo L. monocytogenes y L.. TE. ivanovii se consideran como patógenos e infecciosos, mostrando capacidades. IO. hemolíticas5. L monocytogenes, patógeno Gram-positivo, agente causante de la. BL. listeriosis, infección oportunista altamente mortal causada por los alimentos6, puede. crecer. a. diferentes. condiciones. durante. el. procesamiento. y. BI. almacenamiento de alimentos, a temperaturas tan bajas como -0.4 ° C y a un pH de 4.3 a 9.4. L. monocytogenes también es capaz de formar biopelículas en varias superficies, lo que permite una mayor resistencia al estrés ambiental y provoca dificultades con la desinfección y saneamiento de la superficie.7. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(11) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. La bacteria patógena L. monocytogenes es un anaerobio facultativo, en forma de bastón, no formador de esporas, ubicuo en el medio ambiente. Las colonias aisladas de L. monocytogenes en agar BHI son pequeñas (~ 1 mm), de color. AS. blanco cremoso y con forma de cúpula. La temperatura óptima de crecimiento. IC. de L. monocytogenes es de 30–37 ° C.8. G. El ser humano a través del tiempo ha investigado en los recursos naturales. LO. especies de importancia medicinal, que producen sustancias que exhiben. O. actividades antimicrobianas frente a diferentes cepas bacterianas de relevancia. BI. clínica 9. El Perú posee una diversidad de flora muy variada, abriendo campo. AS. para el hallazgo de nuevos compuestos con actividad antimicrobiana, el norte de. CI. nuestro país representa el centro del “eje de salud”, haciendo uso de la medicina. CI EN. natural desde tiempos antiguos10. Vicent y col. evaluaron a 40 plantas en el norte del Perú, los extractos de éstas , presentaron actividad antibacteriana frente a bacterias Gram negativas y Gram positivas, especialmente en especies. DE. de Enterococcus y Staphylococcus, además, nueve especies mostraron MIC. CA. ≤0.3 mg / mL para diversos microorganismos11.. TE. Moringa oleífera es una planta tropical. Las hojas, flores, vainas y semillas de éste árbol presentan componentes químicos con propiedades farmacológicas,. IO. antimicrobianas y nutricionales para las poblaciones con bajos recursos 12.Las. BL. semillas de Moringa contienen compuestos bioactivos que incluyen alcaloides,. BI. glucosinolatos, isotiocianatos y tiocarbamatos, muchos de éstos inhiben el crecimiento de microorganismos patógenos13. El componente bioactivo del recubrimiento de semilla de M. oleifera ha exhibido un potencial de antibiofilm contra Gram positivos, Gram negativos y levaduras14.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(12) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Todos los extractos son ricos en metabolitos secundarios, especialmente el extracto de M. oleifera (alcaloides, polifenoles, flavonoides, antraquinonas, cumarinas, saponinas, taninos, triterpenos y esteroides); Sin embargo, la. AS. actividad no depende solo de la presencia de metabolitos secundarios en los extractos de plantas, sino principalmente de su concentración y las posibles 15.. Los extractos de diferentes partes de. IC. interacciones con otros constituyentes. LO. G. esta planta tienen efecto antibacteriano; importante para disminuir la resistencia a los antibióticos de ciertos patógenos, ya que esta resistencia impone una. BI. O. amenaza urgente a la salud pública16.. AS. “El sulforafano (SFN) y la moringina (GMG-ITC) son isotiocianatos(ITC). CI. comestibles presentes como precursores de glucosinolatos en vegetales. CI EN. crucíferos y en la planta M. oleífera respectivamente, y reconocido por sus propiedades quimiopreventivas y medicinales”17. Las ITC pueden unirse a grupos sulfhidrilo en sitios activos de enzimas importantes involucradas en el. DE. crecimiento y la supervivencia microbiana. En consecuencia, las reducciones en los niveles celulares de importantes grupos tiol conducen a la formación de. CA. oxígeno y otros radicales libres.18. TE. Borges y col. evaluaron la actividad antimicrobiana in vitro de dos isotiocianatos,. IO. alilisotiocianato y 2-feniletilisotiocianato contra E. coli, P. aeruginosa, S. aureus. BL. y L monocytogenes, donde se determinó que la concentración mínima inhibitoria. BI. de ambos isotiocianatos contra las cuatro cepas bacterianas fue de 100 μg / mL. La concentración mínima bactericida para S. aureus y L.monocytogenes fue > 1,000 μg / mL para ambos fitoquímicos; para E. Coli y P. aeruginosa fue 1.000 μg / ml y > 1.000 μg / mL para alilisotiocianato y feniletilisotiocianato respectivamente19.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(13) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Lamer y col. en un trabajo realizado sobre la actividad antimicrobiana de los compuestos separados de la semilla de M. oleifera frente a S. aureus, E. coli, P. aeruginosa , C. albicans y A. niger in vitro, utilizando métodos de dilución de. AS. caldo reportaron que los compuestos tuvieron actividad antimicrobiana más efectivo contra las especies probadas que niazimin y la concentración mínima. IC. inhibitoria de RBI (isotiocianato de 4- (α-L-ramnosiloxi) -bencilo ) en S. aureus. LO. G. fue de 0.005%, E. coli 0.5%, P. aeruginosa 0,5%, C. albicans 0,5% y A. niger. O. fue 0.1%,mientras que la MIC de niazimicina en S. aureus fue 0.1%20.. BI. Oluduru y col. afirman que el compuesto bioactivo 4- (β-D-Glucopyranosyl-1 →. AS. 4-α-L-ramnopiranosiloxi) bencil tiocarboxamida presente en la semilla de. CI. Moringa oleífera tiene actividad bactericida muy alta contra algunos patógenos. CI EN. (Shigella dysenteriae, Bacillus cereus, E. coli y Salmonella typhi). Utilizando 5mg/L del extracto crudo de M. oleifera, obtuvo como resultados en 4 horas de contacto los siguientes porcentajes de inhibición: En Shigella dysenteriae un. DE. 99,2%, Bacillus cereus, E. coli y Salmonella typhi un 100%) 21.. CA. Vieira y col. evaluaron el efecto del extracto acuoso y etanólico de semillas de. TE. M. oleífera sobre S. aureus, V.cholerae, E. Coli a concentraciones de 1: 5 y 1:10 en volúmenes de 50, 100, 150 y 200 μL. Resultando para el extracto acuoso una. IO. inhibición efectiva (halo >13mm) en las tres bacterias mencionas, y una inhibición. BL. total frente a E. Coli por el extracto etanólico22.. BI. Albuquerque R y col. evaluaron la bioactividad in vitro de extractos de semilla de M.. oleífera frente a 100 cepas de vibrios aislados del camarón marino. Litopenaeus vannamei ; demostrando así que los extractos de etanol son bioactivos a baja temperatura un 92% y caliente un 90%. 23.. Majali y col.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(14) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. determinaron las concentraciones mínimas inhibitorias de un extracto etanólico de semillas de Moringa peregrina contra E. Coli, Staphylococcus aureus y Klebsiella neumonía resultando 13,9 y 7 mg/ml respectivamente24.. AS. Sabiendo que los alimentos son vehículos de transmisión de microorganismos. IC. patógenos como es el caso de L.monocytogenes y al consumirlos generan. G. consecuencias que perjudican la salud del ser humano, lo que conlleva a evaluar. LO. la actividad antimicrobiana de M. oleífera ya que posee isotiocianatos (ITC). O. considerados los inhibidores más potentes de la actividad microbiana ,siendo. BI. estudiada en los últimos años como se ha mencionado, resaltando mayormente. AS. las propiedades de hojas y flores de esta especie vegetal. Sin embargo, la. CI. evaluación del extracto de la semilla ha sido poco estudiada, significando una. CI EN. posible alternativa para desempeñar un rol importante por su alta actividad antibacteriana.. La finalidad del presente trabajo fue evaluar el efecto de las concentraciones de. DE. 10, 40 y 60 mg/mL del extracto etanólico de la semilla de M. oleifera sobre la. CA. supervivencia de L. monocytogenes ATCC 19115;utilizando el método de. TE. dilución en tubo y posterior recuento en placa, esperando que la concentración de 60 mg/mL. presente un mayor efecto sobre la supervivencia que las. BI. BL. IO. concentraciones de 10 y 40 mg/mL de L. monocytogenes ATCC 19115. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(15) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. MATERIAL Y MÉTODOS. Moringa oleífera. -. Cepa Listeria monocytogenes ATCC 19115. G. -. IC. AS. 2.1 MUESTRA. LO. 2.2 PROCEDIMIENTO. BI. O. 2.2.1 Recolección e identificación taxonómica de Moringa oleifera Se recolectó el material vegetal (flores , rama , frutos maduros y hojas) en el. AS. centro poblado de Mocan, distrito Casa Grande, provincia Ascope, región La. CI. Libertad . Se hizo el prensado, secado de la especie y el ejemplar se llevó al. CI EN. Herbarium Truxillense para su identificación taxonómica. (Anexo 1) 2.2.2 Preparación del extracto etanólico25.. DE. Se recolectaron 1 kg de frutos maduros de M. oleífera del centro poblado de Mocan. Se seleccionaron las semillas de Moringa, luego de un lavado se. CA. procedió a la desinfección con hipoclorito de sodio a una concentración de. TE. 200ppm durante 5 minutos. Las semillas se sometieron a dos procesos de. IO. secado: primero a temperatura ambiente por 24 horas, y luego en la estufa de. BL. circulación de aire por convección forzada a una temperatura de 40°C en el. BI. laboratorio de Farmacognosia de la Facultad de Farmacia y Bioquímica. Una vez secadas las semillas se molieron con ayuda de un mortero. El polvo obtenido se pasó a través del tamiz Nº 0.75. Posteriormente se pesaron 30 g del polvo de semillas, luego se vertió en un cartucho de papel de filtro, se colocaron. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(16) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. en el extractor del equipo de Soxhlet y se pasó a extraer con 150ml de alcohol etílico absoluto a una temperatura de 60oC a 80oC durante 2 horas. Transcurrido el tiempo , el extracto etanólico se filtró con presión negativa. Luego. AS. se llevó a concentrar al rotavapor y después se llevó a secar a la estufa de. IC. circulación de aire a 40°C, hasta obtener extracto seco.. G. 2.2.3 Preparación de las concentraciones. LO. A partir del extracto seco se prepararon las concentraciones de 10,40 y 60. O. mg/mL, primero se pesó en la balanza analítica y se disolvió el extracto seco con. BI. ayuda de dimetilsulfóxido (DMSO). Luego cada concentración se guardó en. AS. frascos de vidrio de color ámbar y se llevó a refrigeración (4-8°C) hasta su. CI. posterior utilización26.. CI EN. 2.2.4 Reactivación de la cepa L. monocytogenes ATCC 19115 Listeria monocytogenes ATCC 19115 se obtuvo de GenLab Laboratory en Perú,. DE. un representante de MicroBiologics Laboratory (EE. UU.) La reactivación de la cepa se realizó según indicación de KWIK STIK. Con un. CA. hisopo estéril embebido con el microorganismo liofilizado se sembró por estría. TE. en cinco placas con agar BHI y se incubó a 35°C por 24 horas , pasado el tiempo. IO. de incubación ,se hizo resiembra, extrayendo una alícuota del medio y se sembró. BL. en agar BHI por la técnica de siembra en estrías por agotamiento en 8 placas, luego se incubó a 35°C durante 24 horas, con la finalidad de obtener colonias. BI. aisladas.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(17) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 2.2.5 Curva de crecimiento de L. monocytogenes27. 1. Se seleccionó una colonia aislada de L.monocytogenes y se inoculó en un matraz con 20ml de caldo de enriquecimiento BHI .Se llevó a incubar a 37°C. AS. por 20-24 horas. Manteniendo una relación de volumen de medio constante a volumen total del. IC. matraz estandarizando así los niveles de aireación y las tasas de crecimiento. G. resultantes.. LO. En una celda se colocó 100ul de caldo BHI más 900ul del caldo con el inóculo y. O. se midió la densidad óptica (D.O) a 600 nm .A partir del primer matraz se extrajo. BI. una alícuota , se diluyó en un nuevo matraz con 50ml de caldo BHI y se dejó. AS. a incubar por 24 horas determinando cada 2 horas la D.O. 600.. .La. fase. CI. exponencial de crecimiento comenzó a las 4 horas.. CI EN. 2.2.6 Preparación del inóculo de L.monocytogenes Se prepararon una suspensión de L.monocytogenes de 1 ml equivalente al tubo. DE. N° 0.5 del Nefelómetro de Mac Farland (1.5 x 10 8 UFC/mL), esto se determinó por espectrofotometría. CA. 2.2.7 Evaluación de la supervivencia bacteriana. TE. La evaluación de la supervivencia de L.monocytogenes se realizó mediante el. IO. método de dilución en tubo. Se utilizó microtubos con 500 uL de caldo Mueller. BL. Hinton y 100 uL de inóculo bacteriano, a los cuales se le añadió 200 uL del. BI. extracto etanólico a las concentraciones de 10, 40 y 60 mg/mL. Después de 24. horas de incubación, se hicieron diluciones al décimo (cuatro diluciones) , se tomaron 100 uL del contenido de cada tubo de prueba y se sembraron por. superficie en agar Muller Hinton por triplicado, para su posterior lectura dentro de 24 horas28.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(18) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 2.2.8 Análisis Estadístico Los datos de los experimentos fueron analizados mediante un. ANOVA. AS. unidireccional, con comparaciones por pares de los valores medios de. IC. tratamiento realizados utilizando el procedimiento de Tukey y considerando. LO. G. significativo P <0.05. la supervivencia de L.monocytogenes ATCC 19115. BI. En la evaluación de. O. -RESULTADOS. AS. utilizando extracto etanólico de semillas de M. oleífera en comparación con un grupo control (bacteria + medio de cultivo), se obtuvo como resultado que L.. CI. monocytogenes creció a concentraciones de 10 y 40 mg/mL en mayor cantidad. CI EN. que a la concentración de 60 mg/mL ,al realizar el conteo en placa luego de 24. BI. BL. IO. TE. CA. DE. horas de incubación.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(19) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Tabla1.Número de colonias de L. monocytogenes ATCC 19115 sometidos < tres concentraciones (mg/mL de extracto etanólico de semilla de M. oleífera y. AS. comparada con un grupo control en agar BHI.. 40. 2x 107. 60. 2x 106. G. 6 x 107. BI. O. LO. 10. IC. Concentración (mg/mL) UFC/ml. 3x 108. CI. AS. Grupo control A. BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI EN. Grupo Control A: Caldo Muller Hinton + Inóculo. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(20) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Tabla 2. Número de colonias de L. monocytogenes ATCC 19115 en unidades logarítmicas de diferentes concentraciones (mg/ml) de extracto etanólico de. 40. 7.21. 60. G. 7.80. LO. 10. IC. UFC/mL. O. Concentración (mg/mL). AS. semilla de M. oleífera y un grupo control en agar BHI.. BI. 6.36. 8.52. CI. AS. Grupo control A. BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI EN. Grupo Control A: Caldo Muller Hinton + Inóculo. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(21) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. I.. DISCUSIÓN. La resistencia de las bacterias a los antibióticos habituales ha provocado una alta incidencia de fracasos del tratamiento y un aumento considerable de los. AS. costos del tratamiento29. Las plantas medicinales podrían utilizarse como. IC. alternativa, ya que presentan propiedades farmacológicas y actividad. G. antimicrobiana. Los extractos de plantas son ricos en metabolitos secundarios,. LO. que tienen potencias como conservantes de alimentos.. O. El presente estudio tuvo como objetivo la detección de un posible agente de. BI. biocontrol de M. oleifera contra el patógeno transmitido por los alimentos L.. AS. monocytogenes . Como se observó en nuestro estudio, la resistencia a los. CI. antibióticos en L. monocytogenes se ha documentado previamente. Deans y col. CI EN. , observaron que algunos aceites esenciales parecen ser más específicos en su actividad antimicrobiana, ejerciendo una mayor actividad inhibitoria contra las. DE. bacterias Gram-positivas30.. El extracto etanólico de M.oleifera mostró una actividad antibacteriana muy. CA. notable sobre Listeria en la concentración de 60 mg/mL. que sobre las. TE. concentraciones de 10mg/mL, 40mg/mL y el control.. IO. Lanciotti R. y col evaluaron la supervivencia de L. monocytogenes Scott A frente. BL. a tratamientos antimicrobianos ,siendo el aceite esencial de tomillo (100 mg / L),. BI. el que mostró una disminución en la viabilidad celular de 8.53 ± 0.36 a 7.20 ±. 0.22 log UFC / ml con un factor de tolerancia de 0.85 ( P = 0.04).31 También observó que las células expuestas al etanol solo durante 1 hora y especialmente en células tratadas con etanol más citral (85 mg / L), carvacrol (20 o 35 mg / L) o aceite esencial de Tomillo afectó los niveles de proteínas relacionadas con. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(22) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. el metabolismo de nucleótidos y nitrógeno de manera diferente. Los niveles más altos de GMP sintasa [GuaA] que está involucrado en el metabolismo de las purinas) 31.. AS. Las células microbianas en la fase de crecimiento estacionario son generalmente. IC. menos sensibles a las lesiones causadas por los antibióticos que las de la fase. G. de crecimiento exponencial32.. LO. Las semillas de Moringa contienen compuestos bioactivos que incluyen. O. alcaloides, glucosinolatos, isotiocianatos y tiocarbamatos, muchos de éstos. BI. inhiben el crecimiento de microorganismos patógenos. Los isotiocianatos. AS. pueden unirse a grupos sulfhidrilo en sitios activos de enzimas importantes. CI. involucradas en el crecimiento y la supervivencia microbiana. La actividad. CI EN. antibacteriana de las semillas de Moringa podría atribuirse a la clase individual de estos compuestos presentes en las fracciones crudas y al solvente activo o al efecto sinérgico que cada clase de compuesto ejerció para dar los resultados. BI. BL. IO. TE. CA. DE. observados de la actividad antibacteriana.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(23) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. II.. CONCLUSIONES. Los ensayos mostraron que las concentraciones de 10,40 y 60 mg/mL del extracto de semilla de Moringa oleífera presentan efecto sobre la supervivencia. AS. de L. monocytogenes ; siendo la concentración de 60 mg/mL la que presenta. IC. diferencia significativa en mayor grado comparado con las concentraciones de. BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI EN. CI. AS. BI. O. LO. G. 10,40 mg/mL y con al grupo control.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(24) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS 1. Negi PS. Plant extracts for the control of bacterial growth: efficacy, stability and safety issues for food application. Int J Food Microbiol. 2012;156(1):7-. AS. 17.. IC. 2. Pérez IM, Truong VD, Webber A, McFeeters RF. Microbial growth and the. G. effects of mild acidification and preservatives in refrigerated sweet potato. LO. puree. J Food Prot. 2008;71(3):639-42.. O. 3. Timme RE , Rand H, Shumway M , Trees EK , Simmons M , Agarwala R. BI. ,et al1. Benchmark datasets for phylogenomic pipeline validation,. AS. applications for foodborne pathogen surveillance. PeerJ. 2017; 5: e3893. 4. Chorianopoulos NG, Tsoukleris DS, Panagou EZ, Falaras P, Nychas GJ.. CI. Use of titanium dioxide (TiO2) photocatalysts as alternative means for. CI EN. Listeria monocytogenes biofilm disinfection in food processing. Food Microbiol. 2011;28(1):164-70.. DE. 5. Orsi RH, Wiedmann M. Characteristics and distribution of Listeria spp., including Listeria species newly described since 2009. Appl Microbiol. CA. Biotechnol. 2016; 100(12):5273-5287.. TE. 6. Vázquez Boland JA ,Kuhn M, Berche P, Chakraborty T, Domínguez Berna. IO. G, Goebel W, et al. Listeria pathogenesis and molecular virulence. BL. determinants. Clin Microbiol Rev. 2001; 14(3): 584–640.. BI. 7. Zhu Q, Gooneratne R, Hussain MA . Listeria monocytogenes in Fresh Produce: Outbreaks, Prevalence and Contamination Levels. Foods. 2017;. 6(3): 21.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(25) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 8. Abdollah Jamshidi and Tayebeh Zeinali. Significance and characteristcs of Listeria monoctogenes in Poultry Prodcuts. Int J Food Sci. 2019; 2019:. AS. 7835253.. 9. Barboza TJ, Ferreira AF, Ignacio AC, Albarello N. Antimicrobial activity of. IC. Anonna mucosa (Jacq.) grown in vivo and obtained by in vitroculture. Braz. LO. G. J Microbiol. 2015; 46(3):785-89.. 10. Bussmann RW. The Globalization of Traditional Medicine in Northern. BI. O. Peru: From shamanism to molecules. Ev Bas Compl Alt Med. 2013; 2013:146.. AS. 11. Roumy V, Gutierrez Choquevilca AL, López Mesia JP, Ruiz L, Ruiz. CI. Macedo JC ,Abedini A,et al. In vitro antimicrobial activity of traditional plant. CI EN. used in mestizo shamanism from the Peruvian amazon in case of infectious diseases. Pharmacogn Mag. 2015; 11(Suppl 4): S625-S633.. DE. 12. Leone A, Spada A, Battezzati A, Schiraldi A, Aristil J , Bertoli S. Cultivation, genetic, ethnopharmacology, phytochemistry and pharmacology of Moringa. CA. oleifera Leaves: An Overview. Int J Mol Sci. 2015; 16(6): 12791–12835.. TE. 13. Leone A, Spada A, Battezzati A, Schiraldi A, Aristil J, and Bertoli S.. IO. Moringa oleifera Seeds and Oil: Characteristics and uses for human health.. BL. Int J Mol Sci. 2016;17(12).. 14. Onsare JG, Arora DS. Antibiofilm potential of flavonoids extracted from. BI. Moringa oleifera seed coat against Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa and Candida albicans. J Appl Microbiol. 2015; 118(2):313-25.. 15. Dzotam JK, Touani FK, Kuete V. Antibacterial and antibiotic-modifying activities of three food plants (Xanthosoma mafaffa Lam., Moringa oleifera. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(26) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. (L.) Schott and Passiflora edulis Sims) against multidrug-resistant (MDR) Gram-negative bacteria. BMC Complement Altern Med. 2015 ;16(1):9. 16. Elgamily H, Moussa A, Elboraey A, EL Sayed H, Al Moghazy M, Abdalla. AS. A. Microbiological assessment of Moringa Oleifera extracts and its incorporation in novel dental remedies against some oral pathogens. Open. IC. Access Maced J Med Sci. 2016 ; 4(4): 585–590.. LO. G. 17. Michl C, Vivarelli F, Weigl J, De Nicola GR, Canistro D, Paolini M, Iori R, Rascle A. The Chemopreventive Phytochemical Moringin Isolated from. BI. O. Moringa oleifera Seeds Inhibits JAK/STAT Signaling. PLoS One. 2016; 11(6): e0157430.. AS. 18. Jacob C, Anwar A. The chemistry behind redox regulation with a focus on. CI. sulphur redox systems. Physiol Plant. 2008 ;133(3):469-80.. CI EN. 19. Michl C, Vivarelli F, Weigl J, De Nicola GR, Canistro D, Paolini M, Iori R, Rascle A. The Chemopreventive Phytochemical Moringin Isolated from. DE. Moringa oleifera Seeds Inhibits JAK/STAT Signaling. PLoS One. 2016; 11(6): e0157430.. CA. 20. Jeon SR, Lee KH, Shin DH, Kwon SS, Hwang JS. Synergistic antimicrobial. TE. efficacy of mesoporous ZnO loaded with 4-(α-L-rhamnosyloxy)-benzyl. IO. isothiocyanate isolated from the Moringa oleifera seed. J Gen Appl. BL. Microbiol. 2014; 60(6):251-255.. 21. Oluduro OA, Aderiye BI, Connolly JD, Akintayo ET, Famurewa O.. BI. Characterization and antimicrobial activity of 4-(β-D-glucopyranosyl-1→4-. α-L-rhamnopyranosyloxy)-benzyl thiocarboxamide; a novel bioactive compound from Moringa oleifera seed extract. Folia Microbiol (Praha). 2010; 55(5):422-6.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(27) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 22. Viera GH, Mourao JA, Angleo AM, Costa RA, Vieira RH. Antibacterial effect (in vitro) of Moringa oleifera and Annona muricata against Gram positive and Gram negative bacteria. Rev Inst Med Trop Sao Paulo. 2010;. AS. 52(3):129-32. 23. Albuquerque Costa R, Viana de Sousa O, Hofer E, Mafezoli J, Barbosa. IC. FG, Vieira RHSDF. Thiocarbamates from Moringa oleifera Seeds Bioactive. LO. G. against Virulent and Multidrug-Resistant Vibrio Species. Biomed Res Int. 2017: 7963747.. BI. O. 24. Ibhahim SM, Sawsan AO , Khaled MAK, Haitham Q , Walid AR , Osama. extracts.2015;9(51):2410-2414.. AS. YA. Althunibat. Assessment of the antibacterial effects of Moringa peregrina. CI. 25. Caamal IO, Carrillo LM, Escalante DY, Hernández DA,3 Azamar JA.. CI EN. “Antimicrobial and antiproliferative activity of essential oil, aqueous and ethanolic extracts of Ocimum micranthum Willd leaves”. BMC Complement. DE. Altern Med. 2018; 18: 55.. 26. Rukayadi Y, Shim JS, Hwang JK .Screening of Thai medicinal plants for. CA. anticandidal activity. Mycoses Diagnosis Therapy and Prophylasis of. TE. Fungal Diseases .2008; 51(4): 308-12. IO. 27. Grant SJ , D’Orazio SE. Listeria monocytogenes: Cultivation and. BL. Laboratory Maintenance. Curr Protoc Microbiol. 2013 ; 31: 9B.2.1–9B.2.7.. 28. Schumacher A, Vranken T, Malhotra A, Arts JJC, Habibovic P. In vitro. BI. antimicrobial susceptibility testing methods: agar dilution to 3D tissueengineered models. Eur J Clin Microbiol Infect Dis.2018; 37(2): 187-208.. 29. World Health Organization WHO. Geneva, Switzerland: World Health Organization; 2017.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(28) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 30. Deans SG, Noble RC, Hiltunen R, Wuryani W, Penzes LG. Antimicrobial and antioxidant properties of Syzygium aromaticum (L) Merr Perry: impact upon bacteria, fungi and fatty acid levels in ageing mice. Flavor Fragrance. AS. J. 1995;10:323–328. 31. Lanciotti R, Braschi G,, Patrignina F, Gobbetti M, De Angelis M. How in. LO. 32.. G. antimicrobial compounds. 2019(1) ;10: 447. repase Natural. IC. Listeria monocytogenes shapes its proteome. Corona F., Martinez J.L. Phenotypic resistance to antibiotics.. BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI EN. CI. AS. BI. O. Antibiotics. 2013;2:237–255. doi: 10.3390/antibiotics2020237.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(29) ANEXOS. BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI EN. CI. AS. BI. O. LO. G. IC. V.. AS. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(30) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Anexo 01. Identificación taxonómica de Moringa oleífera en el Herbarium. BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI EN. CI. AS. BI. O. LO. G. IC. AS. Truxillense de la Universidad Nacional de Trujillo.. Anexo 02. Colonias de Listeria monocytogenes ATCC 19115 reactivado en Agar BHI a partir de un cultivo liofilizado. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(31) IC. AS. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. LO. G. Curva de crecimiento de Listeria monocytogenes ATCC 19115 3. O BI. 2. AS. 1.5. CI. 1 0.5. 0 0. 2. 4. CI EN. Densidad óptica(600nm). 2.5. 6. 8. 10. 12. 14. 16. CA. DE. Tiempo (h). TE. Anexo 03. Curva de crecimiento de Listeria monocytogenes ATCC 19115 en. BI. BL. IO. caldo BHI. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(32) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. tiempo(h). 0.041. 4. 0.056. AS 0.430. 6. CI. 1.200. 12. 2.230 2.280 1.970. BI. BL. IO. TE. CA. DE. 14. CI EN. 8 10. LO. 2. O. 0.023. BI. 0. G. DO 600. IC. ATCC 19115 en un periodo de 14 horas en Agar BHI. AS. Anexo 04. Densidad óptica a 600nm de un cultivo de Listeria monocytogenes. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(33) AS. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Anexo 05. Conteo de colonias de Listeria monocytogenes ATCC 19115. IC. sometidos a las diferentes concentraciones de Extracto etanólico de Moringa. LO. G. oleífera y un grupo control.. (mg/ml). 60mg/ml. 2x106. 2x107. 2x107. 3x108. 2x106. 3x106. 4x108. 3x108. DE. Grupo Control A. 7x107. AS. 1x107. CI EN. 40mg/ml. 3. 6x107. CI. 6x107. 10mg/ml. 2. BI. 1. O. N°conteos. Concentración de Moringa. BI. BL. IO. TE. CA. Grupo Control A : Caldo Muller Hinton + Inóculo. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(34) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AS. Anexo 06. Conteo de colonias de Listeria monocytogenes ATCC 19115 en. IC. unidades logarítmicas sometidos a las diferentes concentraciones de Extracto. O. LO. G. etanólico de Moringa oleífera y un grupo control.. N°conteos. (mg/ml). BI. Concentración de Moringa. 2. 3. 7.778. 7.845. 7.301. 7.301. 6.301. 6.301. 6.477. 8.477. 8.602. 8.477. AS. 1 7.778. CI. 10mg/ml. 7.000. CI EN. 40mg/ml 60mg/ml. DE. Grupo Control A. BI. BL. IO. TE. CA. Grupo Control A : Caldo Muller Hinton + Inóculo. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(35) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AS. Anexo 07. IC. Análisis de la varianza. O BI. AS. Cuadro de Análisis de la Varianza (SC tipo III) F.V. SC gl CM F p-valor Modelo 7.48 3 2.49 202.42 <0.0001 Tratamientos 7.48 3 2.49 202.42 <0.0001 Error 0.10 8 0.01 Total 7.58 11. LO. G. Variable N R² R² Aj CV Log UFC/ml 12 0.99 0.98 1.49. BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI EN. CI. Test:Tukey Alfa=0.05 DMS=0.29015 Error: 0.0123 gl: 8 Tratamientos Medias n E.E. 60 6.36 3 0.06 A 40 7.20 3 0.06 B 10 7.80 3 0.06 C Control 8.51 3 0.06 D Medias con una letra común no son significativamente diferentes (p > 0.05). Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(36) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Est 8.68 Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil D. Versión Estudiantil. Versión Est. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil 8.41 Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Est. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Est Versión Estudiantil Versión 8.14 Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. AS. Versión Estudiantil Versión Estudiantil. Versión Est. Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil7.87 Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión C Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Est. Versión Estudiantil Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Est. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Est. Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil 7.06 Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Est. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. BI. Versión Estudiantil. Versión Est. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Est. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión EstudiantilB Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil7.33 Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. IC. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. G. Versión 7.60 Estudiantil. Log UFC/ml. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. LO. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. O. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Est. Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil 6.52 Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Est Versión Estudiantil. Versión Estudiantil A. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. CI EN. Versión Estudiantil. CI. Versión Estudiantil. AS. Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Est 6.79 Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Est Versión Estudiantil Versión 6.25 Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil 60 40 10 Control Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Est Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Tratamientos. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. BI. BL. IO. TE. CA. DE. Anexo 08. Tratamiento de tres concentraciones(mg/mL) del extracto etanólico de M.oleifera contra el recuento de células viables en placa( LogUFC/mL) con agar Mueller Hinton. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.. Versión Est.

(37) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Est 8.71 Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Est. Versión Estudiantil. 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(38) BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI EN. CI. AS. BI. O. LO. G. IC. AS. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

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