Efecto in vitro del extracto etanólico de hojas de Annona muricata sobre crecimiento de Shigella boydii ATCC 9207

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(1)Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS. BI O. LO. G. MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA. IC AS. ESCUELA PROFESIONAL DE. Efecto in vitro del extracto etanólico de hojas de. AS. Annona muricata sobre crecimiento de Shigella boydii. EN CI. ATCC 9207. TESIS. PARA OBTENER EL TÍTULO PROFESIONAL DE:. CA. DE. CI. BIÓLOGO- MICROBIÓLOGO. Br. CRUZ CASTILLO, Sheila Jiuliana. IO. TE. AUTORES: Br. CASTILLO RUIZ, María del Carmen. Natividad. BI. BL. ASESOR: Dra. LUJÁN VELÁSQUEZ, Manuela. TRUJILLO – PERÚ 2019. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(2) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AUTORIDADES DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE. Dr. ORLANDO MOISÉS GONZALES NIEVES. BI O. LO. G. Rector de la Universidad Nacional de Trujillo. IC AS. TRUJILLO. AS. Dr. RUBÉN CÉSAR VERA VELIZ. CI. EN CI. Vice-rector Académico de la Universidad Nacional de Trujillo. DE. Dr. WEYDER PORTOCARRERO CÁRDENAS. IO. TE. CA. Vice-rector de Investigación de la Universidad Nacional de Trujillo. Dr. STEBAN ILICH ZERPA. BI. BL. Secretario General de la Universidad Nacional de Trujillo. ii. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(3) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AUTORIDADES DE LA FACULTAD DE CIENCIAS. LO. Dr. FREDDY ROGGER MEJÍA COICO. G. IC AS. BIOLÓGICAS. AS. BI O. Decano de la Facultad de Ciencias Biológicas. EN CI. Dr. WILLIAM ZELADA ESTRAVER. DE. CI. Secretario de la Facultad de Ciencias Biológicas. Dra. MANUELA NATIVIDAD LUJÁN VELÁSQUEZ. BI. BL. IO. TE. CA. Director de la Escuela Profesional de Microbiología y Parasitología. iii. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(4) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DEDICATORIA A Dios todopoderoso por su infinita bendición, por fortalecer mi corazón e iluminar mi mente para continuar en lo adverso,. IC AS. por guiarme en el sendero de lo sensato, por mostrarme día a día que. LO. los mejores padres y disfrutar de su amor día a día.. G. con humildad, paciencia y sabiduría todo es posible, por brindarme a. BI O. A mis padres Manuel Castillo y Elena Ruiz por ser el pilar fundamental en todo lo que soy, por su apoyo incondicional en todo. AS. momento, por aconsejarme siempre en lograr lo mejor en mi vida. A. mi. EN CI. profesional y personal, por ser mi alegría y mi motivación. Los amo. hermano. por. estar. siempre. presente,. DE. etapa universitaria.. CI. acompañándome y por el apoyo moral, que me brindo a lo largo de esta. A mi linda familia porque se han preocupado por mí desde. CA. el momento en que llegué a este mundo, me han formado para saber. BI. BL. IO. TE. cómo luchar y salir victoriosa ante las adversidades de la vida.. María del Carmen Castillo Ruiz. iv. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(5) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DEDICATORIA Dedico este trabajo a mi madre Bertha, por su inmenso. IC AS. amor, comprensión y sacrificios, como el estar en otro país para poder salir adelante, que me sirvieron de ejemplo para luchar por lo que. G. quiero, además de ayudarme a crecer como persona.. LO. A mi abuela Carmen, a mi tía Julia y a mi hermana Karelis. BI O. por su apoyo y palabras de aliento en todo lo que me propongo, ellas son la razón de sentirme orgullosa de culminar mi meta, gracias a toda. AS. mi familia por estar siempre a mi lado, en especial a mi prima Gaby por. BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI. EN CI. sus muchos consejos y a mi sobrina Xiomara.. Sheila Jiuliana Cruz Castillo. v. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(6) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AGRADECIMIENTO A Dios por guiarnos a lo largo de nuestra existencia, ser el apoyo y fortaleza. IC AS. en aquellos momentos de dificultad y de debilidad, por bendecir mi vida con la hermosa oportunidad de estar y disfrutar al lado de las personas que sé. G. que más me aman, y a las que yo sé que más amor en mi vida.. LO. A mis padres quienes son mi motor y mi mayor inspiración, que a través de. BI O. su amor, paciencia, buenos valores, ayudan a trazar mi camino y alcanzar mis objetivos.. AS. A mi familia por estar presente siempre, y mucho más cuando les he. EN CI. necesitado.. CI. A la vida por este nuevo triunfo.. A mis verdaderos amigos no solo por estar presentes aportando buenas. DE. cosas a mi vida, sino por los grandes lotes de felicidad y de diversas. CA. emociones que siempre me han causado.. TE. A la Dra. Manuela Luján Velásquez por su asesoramiento en mi proyecto. IO. de tesis, quien con su experiencia, conocimiento y motivación me oriento. BI. BL. en la investigación.. María del Carmen Castillo Ruiz. vi. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(7) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AGRADECIMIENTO Es importante agradecer a personas e instituciones que me facilitaron las. IC AS. cosas, permitiendo concluir satisfactoriamente este trabajo. De especial manera a la Dra. Manuela Natividad Luján Velásquez, por su confianza. G. y apoyo infinito en el asesoramiento, elaboración y culminación de la. LO. presente tesis.. BI O. Asimismo debo agradecer a todas las personas que nos apoyaron en la realización del proyecto de tesis facilitándonos equipos, materiales y. Sheila Jiuliana Cruz Castillo. BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI. EN CI. AS. ambientes.. vii. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(8) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. IC AS. MIEMBROS DEL JURADO. LO. Dr. HEBER ROBLES CASTILLO. G. ……………………………………………….. EN CI. AS. BI O. Presidente. ………………………………………….. Ms. C. JUAN WILSON KRUGG. TE. CA. DE. CI. Secretario. Dra. MANUELA LUJÁN VELÁSQUEZ Vocal. BI. BL. IO. …………………………………………………….. viii. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(9) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. PRESENTACIÓN. En. cumplimiento. con. las. disposiciones. IC AS. SEÑORES MIEMBROS DEL JURADO DICTAMINADOR reglamentarias. vigentes. G. establecidas en el Reglamento de Grados y Títulos de la Universidad. LO. Nacional de Trujillo, presento a ustedes el informe de tesis titulado: “Efecto. BI O. in vitro del extracto etanólico de hojas de Annona muricata sobre crecimiento de Shigella boydii ATCC 9207”, con lo cual pretendo cumplir. AS. con uno de los requisitos establecidos para obtener el Título Profesional de. Trujillo, mayo del 2019.. ………….………………………………………… Br. MARÍA DEL CARMEN CASTILLO RUIZ. BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI. EN CI. Biólogo - Microbiólogo.. ………….…………………………………....... Br. SHEILA JIULIANA CRUZ CASTILLO. ix. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(10) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DEL ASESOR El que suscribe, profesor asesor de la presente tesis titulada: “Efecto in. IC AS. vitro del extracto etanólico de hojas de Annona muricata sobre. G. crecimiento de Shigella boydii ATCC 9207”. LO. CERTIFICA:. BI O. Que la investigación ha sido desarrollada siguiendo el método científico y los objetivos propuestos en el correspondiente proyecto, asimismo que el presente informe ha sido revisado detalladamente y. AS. contiene las sugerencias pertinentes. Por lo tanto, el autor debe continuar. EN CI. con la tramitación que corresponde para su titulación.. DE. CI. Trujillo, mayo del 2019.. CA. …………………………………………………………….. Asesor. BI. BL. IO. TE. Dra. MANUELA NATIVIDAD LUJÁN VELÁSQUEZ. x. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(11) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. APROBACIÓN. Los miembros del jurado dictaminador firmantes, declaran que el presente. IC AS. Informe ha sido sustentado bajo los términos y cánones de las normas. vigentes de la institución y ha cumplido con los requisitos formales y. BI O. LO. G. fundamentales, siendo APROBADO por UNANIMIDAD.. ……………………………………………... AS. Dr. HEBER MAX ROBLES CASTILLO. EN CI. Presidente. CI. ……………………………………………….... Secretario. ……..…………………………………………................ Dra. MANUELA NATIVIDAD LUJÁN VELÁSQUEZ Vocal. BI. BL. IO. TE. CA. DE. Ms. C. JUAN HECTOR WILSON KRUGG. xi. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(12) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. ÍNDICE AUTORIDADES DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO…………ii. IC AS. AUTORIDADES DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS………….iii. DEDICATORIA……………………………………………………………………..iv. LO. G. AGRADECIMIENTO……………………………………………………………….vi. BI O. MIEMBROS DEL JURADO ……………………………………………………...viii PRESENTACIÓN............................................................................................ix. AS. DEL ASESOR……………………………………………………………………….x. EN CI. APROBACIÓN................................................................................…………..xi INDICE………………………………………………………………………………xii. CI. RESUMEN…………………………………………………………………………xiv. DE. ABSTRACT…………………………………………………………………………xv. CA. I. INTRODUCCIÓN..........................................................................................1 1.1.Objetivos ………………………………………………………………….....6. TE. A. Objetivo general……………………………………………………….....6. IO. B. Objetivos específicos………………………………………………….....6. BL. II. MATERIAL Y MÉTODOS………………………………………………………..7. BI. 2.1 Materiales……………………………………………………………………7 2.2 Métodos…………………………………………………………………......7 2.2.1 Recolección, transporte e identificación taxonómica de las hojas de Annona muricata…………………….......................................7. xii. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(13) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 2.2.2 Preparación del extracto etanólico de las hojas de Annona muricata……………………………………………………………...8 2.2.3 Preparación de las concentraciones del extracto etanólico de de. Annona. IC AS. hojas. muricata………….………………………………….......................9. G. 2.2.4 Determinación del efecto del extracto etanólico de hojas de. LO. Annona muricata sobre crecimiento de Shigella boydii ATCC. BI O. 9207…………………………….…………………………………....9 2.2.5 Lectura e interpretación de resultados………………………......10. AS. 2.2.6 Análisis estadístico………….…………………………………......11. EN CI. 2.2.7 Determinación de la concentración mínima inhibitoria………...11 2.2.8 Identificación de la preparación de metabolitos en el extracto. CI. etanólico de Annona muricata………….…………….................12. DE. III. RESULTADOS……………………………………………………………….. 13. CA. IV. DISCUSION……………………………………………………………………19. TE. V. CONCLUSIONES……………………………………………………………...23. IO. RECOMENDACIONES…………………………………………………………...24. BL. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS……………………………………….........25. BI. ANEXOS…………………………………………………………………………....34. xiii. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(14) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. RESUMEN La presente investigación tuvo como finalidad determinar el efecto in vitro. IC AS. del extracto etanólico de las hojas de Annona muricata sobre el crecimiento de Shigella boydii ATCC 9207. Para lo cual se trabajó con las. concentraciones del extracto etanólico de 250 y 500 mg/mL, el efecto se. LO. G. evaluó mediante el método de difusión en agar Kirby Bauer, se sembró la. bacteria en agar Mueller Hinton; se procedió a realizar pocillos de 6mm de. BI O. diámetro y se agregó 50 uL de cada concentración del extracto; se utilizó como control positivo Ciprofloxacina a concentración de 5ug y como control. mismo, se determinó la concentración. EN CI. realizaron 10 repeticiones, así. AS. negativo agua destilada estéril, se incubaron a 37°C por 24 horas, se. mínima inhibitoria (CMI) mediante el método de macrodilución en caldo. CI. BHI. Se encontró que el diámetro promedio del halo de inhibición para la. DE. concentración de 250mg/mL fue 12,6 mm y para 500mg/mL fue 16 mm y según la escala de Duraffourd, estos resultados clasifican como “sensible”. CA. y “muy sensible” al extracto en estudio; y la Concentración Mínima. TE. Inhibitoria fue de 200mg/mL. Se concluyó que el extracto etanólico extraído. IO. de las hojas de Annona muricata inhibe significativamente el crecimiento. BL. de Shigella boydii ATCC 9207 a las concentraciones de 250 mg/mL y 500. BI. mg/mL siendo la Concentración Mínima Inhibitoria (CMI) 200 mg/mL.. Palabras clave: Extracto etanólico, Annona muricata, crecimiento, Shigella boydii, inhibición.. xiv. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(15) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. ABSTRACT The present investigation was to determine the in vitro effect of the ethanolic extract of the leaves of Annona muricata on the growth of Shigella boydii. IC AS. ATCC 9207. To this end, the ethanolic extract concentrations of 250 and 500 mg/mL were studied, it was evaluated by the diffusion method on Kirby. G. Bauer agar, the bacteria was seeded on Mueller Hinton agar; we proceeded. LO. to make 6 mm diameter wells and 50 uL of each extract concentration was. BI O. added; Ciprofloxacin was used as a positive control at a concentration of 5ug and as a negative control was used sterile distilled water, incubated at. AS. 37 ° C for 24 hours, 10 repetitions were performed, and the minimum. EN CI. inhibitory concentration (MIC) was determined by the macrodilution method in BHI broth. It was found that the average diameter of the inhibition halo for the concentration of 250mg / mL was 12.6mm and for 500mg / mL it was. CI. 16mm and according to the Duraffourd scale, these results classified as. DE. "sensitive" and "very sensitive" to the study extract; and the Minimum. CA. Inhibitory Concentration was 200mg / mL. It was concluded that the ethanolic extract extracted from the leaves of Annona muricata significantly. TE. inhibits the growth of Shigella boydii ATCC 9207 at the concentrations of. IO. 250 mg/mL and 500 mg/mL with the Minimum Inhibitory Concentration. BL. (MIC) being 200 mg/mL.. BI. Keywords: Ethanolic extract, Annona muricata, growth, Shigella boydii, inhibition.. xv. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(16) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. I.. INTRODUCCIÓN. Shigella sigue siendo una de las principales causas de morbilidad y. IC AS. mortalidad infantil. El estudio multicéntrico global entéricamente controlado por caso (GEMS), proporcionó una actualización sólida sobre la incidencia. de Shigella entre las formas graves de diarrea y demostró de manera. LO. G. convincente que en los sitios considerados África subsahariana y Asia, Shigella apareció entre los patógenos de mayor rango identificados. 1. .La. BI O. diarrea es la principal causa de mortalidad en niños menores de 5 años con su impacto a largo plazo en el crecimiento y el desarrollo cognitivo. Aunque. AS. el porcentaje es mayor en las poblaciones de bajos ingresos, la diarrea. EN CI. infecciosa aguda también es una causa frecuente de visitas ambulatorias y de ingresos hospitalarios en regiones de altos ingresos y es un importante. CI. problema de salud a nivel mundial 2.. DE. Los productos naturales, especialmente los derivados de plantas, se han utilizado para ayudar a la humanidad a sostener su salud desde los inicios. CA. de la medicina. Durante el siglo pasado, los fitoquímicos en las plantas han. TE. sido algo fundamental para el descubrimiento farmacéutico. La importancia. IO. de los ingredientes activos de las plantas en la agricultura y principalmente. BL. en la medicina ha estimulado un interés científico significativo en las. BI. actividades biológicas de estos sustancias 3. Por eso, el uso de productos. para la prevención de enfermedades se ha convertido en un área de interés atractiva en las últimas décadas y esto ha llevado al hombre a probar otras fuentes de medicamentos 4, una de ellas son las especies de la familia Annonaceae que han sido utilizadas por los pueblos indígenas en áreas. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(17) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. tropicales como medicinas herbales tradicionales 5. En diferentes países se usan contra una gran variedad de enfermedades, como parasitarias e infecciosas 6.. IC AS. Anona muricata es un miembro de la familia Annonaceae que tiene una. amplia gama de actividades etnomedicinales en hojas, semillas y frutos y. 6,7.. Diferentes partes del. LO. sus efectos antiinflamatorio y anticancerígeno. G. es uno de los muchos extractos de plantas que se han explorado debido a. diversos fines etnomedicinales. 8. BI O. árbol de Annona muricata especialmente las hojas se han utilizado para para tratar varias enfermedades. . Algunas de estas afirmaciones basadas en la experiencia. 11. EN CI. abscesos. AS. incluyendo cáncer, inflamación, diabetes, enfermedades hepáticas y. sobre el uso de la planta se han transformado en información basada en. CI. evidencia por investigaciones científicas, incluidas las infecciones. DE. bacterianas 9,10.. Todas las partes de la planta de guanábana incluyendo la corteza, hojas,. CA. las raíces y las semillas del fruto, son utilizadas dentro de la medicina. TE. tradicional. Según Mishra, las hojas y semillas han sido muy empleadas por. IO. las personas para diversas dolencias, abarcando desde parásitos hasta. BL. hipertensión y cáncer. Tradicionalmente las hojas de guanábana se emplean en problemas como dolores de cabeza, insomnio, diabetes,. BI. artritis, reumatismo y como antiinflamatorio 12. Las hojas de la guanábana son buenísimas cuando se está enfermo de paperas pero las hojas tienen que suavizarse ya sea hirviendo agua y. 2. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(18) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. metiéndolas un poco para poder suavizarlas o asándolas después de esto se ponen en las paperas con la ayuda de un paño esto ayudara a desinflamarlas más rápidamente. Las hojas de la guanábana son 13.. IC AS. excelentes cuando la persona padece de insomnio y nerviosismo. Numerosos compuestos bioactivos y fitoquímicos se ha informado que. químicos. se. han. relacionado. con. las. propiedades. LO. compuestos. G. están presentes Annona muricata (guanábana). Algunos de estos. BI O. etnomedicinales de la planta y sus propiedades antioxidantes 8. Diversos estudios han demostrado sus propiedades anti-hiperglucémico, anti-. antiviral. anticancerígenas. y. 10, 14, 17.. lo. más. importante,. EN CI. molusquicida,. AS. hiperlipidémico, antipalúdico, antiparasitario, antibacteriano 9, insecticida, sus. propiedades. Annona muricata, se utiliza como un agente. CI. anticancerígeno, analgésico, antiespasmódico; el extracto hidroalcohólico. DE. de las hojas tiene actividad gastroprotectora 15, 16, 18. No solo se han realizado extensas evaluaciones fitoquímicas en las hojas. CA. sino también en diferentes partes de la planta de Annona muricata y se. TE. demostró la presencia de diversos fitoconstituyentes y compuestos,. IO. incluidos los alcaloides, flavonol, triglicósidos, fenólicos, ciclopéptidos y. BL. aceites esenciales. Sin embargo, las especies de Annona, incluyendo A. muricata, han demostrado que es una fuente generalmente rica de. BI. compuestos de acetogenina anonáceos. La presencia de diferentes minerales importantes como K, Ca, Na, Cu, Fe y Mg sugiere que el consumo regular de la fruta A. muricata puede ayudar a proporcionar nutrientes y elementos esenciales para el cuerpo humano. 19.. 3. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(19) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Además, se han identificado en extractos etanólicos de hojas de A. muricata la presencia de flavonoides, a los cuales se les atribuye actividades farmacológicas tales como: antidiabética, antibacteriana,. por Florence. 21,. 20, 22, 23.. Pruebas in vivo realizados en ratas. IC AS. antiinflamatoria y antioxidante. determinaron que el extracto acuoso de las hojas de A.. G. muricata presenta un efecto antidiabético. Se debe a que el extracto acuoso. LO. de A. muricata también muestra un efecto antioxidante y protector de las. BI O. células beta pancreáticas. A dosis de 5000 mg/kg no manifiesta toxicidad aguda.24. AS. En una investigación denominada “Actividad antibacterial de plantas. EN CI. medicinales del norte del Perú” concluyó que el extracto etanólico de Prosopis pallida presenta actividad antibacteriana sobre la cepa de. CI. Staphylococcus aureus debido a que produjo un halo de inhibición de 15 mm de diámetro. Luego, en el año 2011, determino que los extractos. DE. acuosos y alcohólicos de Prosopis pallida mostraban baja toxicidad 25.. CA. Estudios reportaron que los extractos etanólicos de hojas de Annona. TE. muricata y de la corteza inhiben el desarrollo de S. aureus en cultivo,. IO. mientras que el extracto etanólico de la raíz inhibe el desarrollo de E. coli Además científicos evaluaron el efecto antimicrobiano de extractos de. BL. 26.. hojas de “guanábana”, Annona muricata y registraron actividad frente a S.. BI. aureus, B. subtilis, K. pneumoniae y P. vulgaris, sugiriendo que podría emplearse en el tratamiento de enfermedades causadas por estos microorganismos. 27.. También se realizaron estudios con otra variedad de. planta, el reporte demuestra que el extracto etanólico de hoja de romero. 4. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(20) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. mostró actividad antimicrobiana contra las bacterias Gram negativas: Shigella sonnei y Salmonella typhimurium, con respecto a las bacterias Gram positivas solamente fue activo sobre Listeria monocytogenes 28.. IC AS. El uso y aplicación de Annona muricata ha adquirido gran importancia. debido a la función que ejerce, situación respaldada por estudios realizados. G. en la actualidad. Se creará una alternativa más natural para combatir a las. LO. bacterias patógenas; donde se usará una especie de la familia Anonaceae,. BI O. con la cual se ha evaluado la actividad antibacteriana de las hojas y semillas frente a otras bacterias patógenas mientras que Shigella sp. no ha sido. AS. probada frente a los compuestos antibacterianos de la especie Annona. EN CI. muricata, siendo este el principal fundamento para el desarrollo del siguiente proyecto. Por lo cual el objetivo es determinar el efecto in vitro del. CI. extracto etanólico de las hojas de Annona muricata a las concentraciones. BI. BL. IO. TE. CA. DE. de 250 y 500 mg/mL sobre el crecimiento de Shigella boydii ATCC 9207.. 5. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(21) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 1.1 OBJETIVOS DEL ESTUDIO. IC AS. A. GENERAL Determinar el efecto in vitro del extracto etanólico de hojas de Annona muricata a las concentraciones de 250 y 500 mg/mL. BI O. LO. G. sobre crecimiento de Shigella boydii ATCC 9207.. B. ESPECÍFICOS. AS. 1. Determinar la Concentración Mínima Inhibitoria del. EN CI. extracto etanólico de las hojas de Annona muricata.. CI. 2. Determinar la presencia de metabolitos secundarios en el. DE. extracto etanólico de las hojas de Annona muricata. BI. BL. IO. TE. CA. mediante tamizaje fitoquímico cualitativo.. 6. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(22) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. II. 2.1.. MATERIAL Y MÉTODOS. MATERIALES. “GENLAB SAC” ubicado en Lima, agosto 2018.. MÉTODOS. LO. 2.2.. G. 2.1.2. Hojas de Annona muricata.. IC AS. 2.1.1. Cepa bacteriana Shigella boydii ATCC 9207 del laboratorio. BI O. 2.2.1. RECOLECCIÓN, TRANSPORTE E IDENTIFICACIÓN TAXONÓMICA DE LAS HOJAS DE Annona muricata. AS. Se realizó la recolección de hojas de la parte inferior, media y. EN CI. superior de los árboles de A. muricata (guanábana) del centro “El C.I.P.A.” ubicado en el distrito de Casa Grande, a 49.3 km de distancia de Trujillo con una altitud de 158 msnm, latitud sur 7º 41',. CI. longitud oeste: 79º 11';. provincia Ascope, departamento La. DE. Libertad, Perú. (Anexo 01). CA. Se transportaron las hojas en bolsas plásticas al laboratorio en Trujillo y se realizó una selección de las hojas descartando las que. TE. presentaron daños. (Anexo 02). IO. Se realizó el montaje y etiquetado de la muestra vegetal. BL. recolectada para su identificación y verificación taxonómica en el. BI. herbario “Herbarium Truxillense” de la Universidad Nacional de Trujillo. (Anexo 03). 7. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(23) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 2.2.2. PREPARACIÓN DEL EXTRACTO ETANÓLICO DE LAS HOJAS DE Annona muricata Se pesó y se lavó 1kg de hojas frescas recolectadas de A. muricata,. IC AS. se limpiaron con ayuda de papel toalla luego se lavaron con agua. potable y posteriormente con agua destilada. Una vez lavada las. G. hojas, se cortaron con ayuda de tijeras desinfectadas con etanol.. LO. Luego se procedió al secado de las hojas en estufa a 60°C por 3. BI O. horas, después se disminuyó la temperatura a 35°C por 4 días. Una vez secadas las hojas se procedió a moler con la ayuda de un. AS. molino unas 3 veces hasta obtener polvo, luego se tamizó a través. EN CI. de un set de tamices con poros de 0.1 mm de diámetro para homogenizar el tamaño de partículas y se obtuvo un total de 400g. CI. de polvo. (Anexo 04). DE. En un envase de vidrio estéril ámbar de boca ancha con 4 litros de capacidad, se agregó un total de 400g de polvo y 4L de etanol (100. CA. g de polvo por cada 1000 mL del solvente etanol), se agitó y se. TE. reservó en el frasco. Luego se maceró en ausencia de luz por 7. IO. días (agitando 10 minutos el macerado dos veces al día).. BL. Transcurrido el tiempo de maceración se filtró con papel filtro. BI. Whatman N°1 para separar el sedimento del líquido, luego se filtró el líquido al vacío con papel de filtro Whatman N° 1. Al líquido filtrado se le denominó extracto etanólico, el cual se concentró en un rotavapor a presión reducida y temperatura. 8. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(24) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. controlada, no mayor a 50°C (Anexo 05). Luego el extracto se colocó en placas Petri estériles y se procedió a secar en estufa a. IC AS. 40ºC. Al producto resultante se le denominó extracto madre 8, 27. 2.2.3. PREPARACIÓN DE LAS CONCENTRACIONES DEL EXTRACTO ETANÓLICO DE HOJAS DE Annona muricata. LO. G. A partir del extracto madre se procedió a preparar las concentraciones de 250mg/mL y 500mg/mL peso/volumen,. BI O. utilizando como solvente dimetilsulfóxido. Luego se esterilizó. AS. usando filtros de membrana Millipore de 0.4 µm y 0.22 µm. Finalmente cada preparado se colocó en viales y se almacenó a. DETERMINACIÓN. ETANÓLICO. DE. HOJAS. CI. 2.2.4.. EN CI. 4°C hasta su posterior utilización.. DEL. DE. EFECTO Annona. DEL. EXTRACTO. muricata. SOBRE. DE. CRECIMIENTO DE Shigella boydii ATCC 9207. CA. La evaluación del efecto del extracto etanólico de las hojas de Annona muricata sobre el crecimiento de Shigella boydii se realizó. TE. mediante el método de difusión en agar Kirby Bauer. 27. mediante. BL. IO. pocillos para lo cual se procedió de la siguiente manera:. BI. Se reactivó la cepa de Shigella boydii ATCC 9207 en caldo BHI, se incubó bajo condiciones de aerobiosis a 37ºC durante 24 horas, luego se sembró en tubos de ensayos con medio de cultivo TSA y se incubó a 37ºC durante 24 horas, con el fin de obtener cultivos puros.. 9. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(25) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Luego se realizó una suspensión Shigella boydii ATCC 9207 en agua destilada estéril con una turbidez semejante al tubo número 0.5 del Nefelómetro de Mc Farland. La suspensión resultante fue. IC AS. aproximadamente de 1.5 x 108 UFC/mL. Posteriormente, dentro de los 15 minutos siguientes al ajuste de la turbidez del inóculo, con. G. un hisopo estéril se distribuyó de manera uniforme la suspensión. LO. bacteriana en cada una de las placas con Agar Müeller Hinton.. BI O. En cada placa con agar Müeller Hinton (5mm de espesor) se realizó 3 pocillos de 6mm de diámetro equidistante, en los cuales se. AS. colocaron 50uL de cada concentración del extracto etanólico a. EN CI. evaluar: 250mg/ mL, 500mg/mL y agua destilada estéril como control negativo. Luego en otra placa se utilizó como control. CI. positivo el antibiótico Ciprofloxacina para lo cual se usó un disco por placa a la concentración de 5ug. Se incubaron las placas a. DE. 37°C durante 24 horas. Se realizaron 10 repeticiones.. CA. 2.2.5. LECTURA E INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS. TE. Después de transcurrido el tiempo de incubación, se realizó la. IO. observación y lecturas de los halos de inhibición del crecimiento. BL. bacteriano (Anexo 06), y se procedió a realizar la medición de los. BI. diámetros (mm) de inhibición con ayuda de una regla milimetrada (Anexo 07). Para la interpretación de los resultados, se utilizó como referencia la escala de Duraffourd. 31. que es utilizada para evaluar. 10. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(26) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. cualitativamente el efecto inhibitorio in vitro según el diámetro de inhibición.. IC AS. 2.2.6. ANÁLISIS ESTADÍSTICO Se realizó un análisis estadístico a través de promedio y luego la. prueba “t student” entre los resultados de las muestras analizadas. LO. G. 52, 54.. BI O. 2.2.7. DETERMINACIÓN DE LA CONCENTRACIÓN MÍNIMA INHIBITORIA (CMI). AS. Para determinar la CMI se empleó el método de macrodiluciones. EN CI. en medio líquido29. Se realizó una suspensión en agua destilada estéril a partir de un cultivo puro bacteriano; la concentración se. CI. ajustó al grado de turbidez del tubo N° 0.5 de la escala de. DE. McFarland que equivale 108 UFC/mL. Se empleó 10 tubos de ensayo con 2mL de caldo BHI a los cuáles. CA. se le agregó la cantidad correspondiente de extracto etanólico para. TE. obtener las concentraciones a evaluar: 500, 450, 400, 350, 300,. IO. 250, 200, 150, 100, 50 mg/mL y luego en cada uno de ellos se. BL. agregó 0.1mL de la suspensión bacteriana. Todos los tubos de. BI. ensayo se incubaron a 37°C por 24 horas, luego de este tiempo se realizó la lectura mediante ausencia de turbidez (inhibición de crecimiento).. 11. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(27) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 2.2.8. IDENTIFICACIÓN DE LA PRESENCIA DE METABOLITOS EN EL EXTRACTO ETANÓLICO DE Annona muricata30 La identificación de la presencia de flavonoides, alcaloides,. IC AS. compuestos fenólicos, esteroides y de otros metabolitos se realizó. LO. según la metodología descrita por Lock de Ugaz30.. G. mediante tamizaje fitoquímico cualitativo del extracto etanólico. En los extractos fluidos preparados se determinaron metabolitos. BI O. secundarios como: compuestos fenólicos mediante reacción FeCl3,. AS. flavonoides mediante reacción Shinoda, leucoantocianidinas. BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI. EN CI. mediante reacción Rosenheim, lactonas. 12. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(28) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. III.. RESULTADOS. Se encontró que a la concentración de 250mg/mL del extracto etanólico de. IC AS. hojas de Annona muricata presentó un promedio de 12,6 mm del tamaño de los halos de inhibición del crecimiento y a la concentración de 500mg/mL. del extracto etanólico de hojas de Annona muricata presentó un promedio. LO. G. de 16 mm (tabla 01 y figura 01), según la escala de Duraffourd estos resultados. clasifican como “sensible” y “muy sensible” al extracto en. BI O. estudio.. AS. La Concentración Mínima Inhibitoria obtenida fue de 200mg/mL. (Tabla 02. EN CI. y figura 02).. Además se determinó mediante tamizaje fitoquímico cualitativo del extracto etanólico la presencia de metabolitos secundarios como: compuestos. BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI. fenólicos, flavonoides, leucoantocianidas, lactonas y quinonas. (Tabla 03). 13. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(29) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Tabla 01. Promedio y desviación estándar de las medidas de los halos de inhibición del crecimiento in vitro de Shigella boydii ATCC 9207 por efecto del extracto etanólico de las hojas de Annona muricata a concentraciones. A. 250. 12,6 ± 1,07497. B. 500. 16 ±1,15470. T STUDENTb. G. PROMEDIO ± DSa. LO. CONCENTRACIONES (mg/mL). p < 0,05. AS. BI O. GRUPO. IC AS. de 250 y 500 mg/mL.. EN CI. A= medidas de los halos de inhibición a 250 mg/mL.. DE. a = desviación estándar. CI. B= medidas de los halos de inhibición a 500 mg/mL.. BI. BL. IO. TE. CA. b = prueba estadística para dos muestras independientes. 14. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(30) EN CI. AS. A. BI O. LO. G. IC AS. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Figura. 01. Presencia de halo de inhibición del crecimiento de. CI. Shigella boydii ATCC 9207 por efecto del extracto etanólico de las. DE. hojas de Annona muricata a la concentración de 250 mg/mL y 500mg/mL en medio Müeller Hinton, (A= agua destilada estéril. BI. BL. IO. TE. CA. como control negativo).. 15. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(31) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Tabla 02. Concentración mínima inhibitoria a través del método de macrodilución en medio líquido BHI del extracto etanólico de las hojas de. IC AS. Annona muricata sobre el crecimiento de Shigella boydii ATCC 9207.. TUBO. CONCENTRACIÓN DEL EXTRACTO ETANÓLICO. 1. 50 mg/mL. 2. 100 mg/mL. 3. 150 mg/mL. 4. 200 mg/mL*. 5. 250 mg/mL. ‾. 6. 300 mg/mL. ‾. 350 mg/mL. ‾. 400 mg/mL. ‾. 450 mg/mL. ‾. 500 mg/mL. ‾. G LO BI O. AS. + ‾. TE. CA. DE. 9. Leyenda:. +. CI. 8. 10. +. EN CI. 7. RESULTADO. IO. (+): Presencia de turbidez. BL. (-): Ausencia de turbidez. BI. (*): Concentración mínima inhibitoria 200mg/mL. 16. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(32) AS. BI O. LO. G. IC AS. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. EN CI. Figura 02. Concentración mínima inhibitoria a través del método de macrodilución en medio líquido BHI del extracto etanólico de las hojas de Annona muricata sobre el crecimiento de Shigella boydii ATCC. BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI. 9207. Tubo A (CMI = 200mg/mL).. 17. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(33) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Tabla 03. Metabolitos secundarios presentes en el extracto etanólico de las hojas de Annona muricata obtenidos mediante tamizaje fitoquímico. IC AS. cualitativo.. METABOLITO. RESULTADO. Tricloruro férrico. Compuestos fenólicos. +. Shinoda. Flavonoides. Rosenheim. Leucoantocianidinas. +. Baljet. Lactonas. +. LO. G. REACCIÓN. EN CI. AS. BI O. +. Quinonas. +. CI. Bortranger. BI. BL. IO. TE. CA. DE. Leyenda: (+): presencia del metabolito.. 18. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(34) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. IV.. DISCUSIÓN. El presente trabajo de investigación demostró la actividad antibacteriana de. IC AS. Annona muricata sobre la cepa Shigella boydii ATCC 9207. De los resultados obtenidos, se encontró que el extracto etanólico extraído de las. hojas de A. muricata inhibe significativamente el crecimiento de S. boydii a. LO. G. las concentraciones propuestas (250 mg/mL y 500 mg/mL), generando. halos de inhibición promedio de 12,6 mm y 16mm y clasificándose según. BI O. la escala de Duraffourd como “sensible” y “muy sensible” respectivamente,. AS. al extracto en estudio31.. Estos hallazgos no concuerdan con lo reportado por Fitriani, el cual. EN CI. encontró que el extracto etanólico provenientes de hojas de A. muricata no presenta un efecto inhibitorio sobre el crecimiento de S. flexneri ATCC. CI. 12022 a concentraciones de entre 500 mg/mL y 1000 mg/mL y con. DE. diámetros de inhibición de 0 mm (efecto nulo). Estas discrepancias pueden ser debidas a múltiples factores como la especie de Shigella a la cual se. CA. enfrenta o la procedencia del material vegetal, la cual determina la. TE. composición química del extracto32.. IO. En este estudio, la marcha fitoquímica realizada al extracto etanólico de A.. BL. muricata reveló la presencia de compuestos fenólicos como flavonoides y. BI. leucoantocianidinas (Anexo 08). Según los resultados obtenidos en la reacción de Shinoda se observó una coloración rojiza intensa lo cual indica la presencia de una alta concentración de flavonas y flavonoles en el extracto etanólico de A. muricata, las cuales están reportadas en una gran. 19. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(35) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. diversidad de estudios como antibacterianos y que posiblemente sean los responsables del efecto hallado en este estudio33, 34,35. No obstante, Fitriani también encontró que A. muricata presenta. IC AS. flavonoides y taninos en sus hojas y, aun así, el extracto etanólico no. presentó efecto sobre S. flexneri32. Esto podría ser debido a los flavonoides. G. presentes en el extracto, ya que se ha demostrado que el efecto. LO. antibacteriano de los flavonoides depende en cierta medida del grado de. BI O. hidroxilación en su estructura y ese efecto se inhibe por su grado de. AS. metoxilación36, 37.. Además, factores como el tipo de extracto estudiado son de suma. EN CI. importancia. Jiménez et al39, encontró que las extracto en acetona de las hojas de A. muricata presentan actividad antibacteriana sobre S. flexneri.. CI. Esto es debido, a que los solventes de maceración tienen la capacidad de. DE. extraer flavonoides con diferentes tipos de estructura. 39. CA. Por otra parte, la zona de recolección del material vegetal es una variable clave en la determinación de la actividad biológica. Jiménez et al39,. TE. encontraron que el extracto de acetato de etilo de hojas de A. muricata. IO. proveniente de Trinidad y Tobago no presentan efecto inhibitorio sobre el. BL. crecimiento de algunas bacterias en comparación a las procedentes de. BI. Cuba. Esto indica que el factor tiempo y lugar influye en la síntesis de diversos tipos de metabolitos secundarios, entre ellos los flavonoides 40. Algunos serotipos de Shigella son más patogénicas y resistentes a los antimicrobianos que otros, como lo son S. dysenteriae y S. flexneri41, 42 que. 20. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(36) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. presentan una mayor capacidad de resistencia a antibióticos que S. boydii según algunos estudios epidemiológicos43,. 44. lo cual coincide con el. resultado encontrado en esta investigación.. IC AS. El efecto antibacteriano producido por A. muricata sobre S. boydii podría ser debido a diferentes mecanismos de acción tales como el efecto de los. G. compuestos fenólicos como los flavonoides que tienen la capacidad de. LO. alterar la permeabilidad de la membrana plasmática de las bacterias,. BI O. desacoplar su fosforilación oxidativa e inhibir la síntesis de sus ácidos. AS. nucleicos36, 45,46.. En el análisis inferencial, la prueba T student para muestras independientes. EN CI. indicó que existe diferencia significativa (p<0.05) entre los halos de inhibición de crecimiento in vitro producidos por las concentraciones de 250. CI. y 500 mg/mL del extracto de A. muricata, lo cual podría indicar un posible. DE. efecto antibacteriano dependiente de la dosis y que concentraciones mayores al estudiado podrían aumentar su efecto inhibitorio.. CA. Por otra parte, los valores hallados en el ensayo de CMI indican que la. TE. mínima concentración del extracto capaz de inhibir el crecimiento de S.. IO. boydii es de 200 mg/mL según el resultado encontrado por el ensayo de. BL. macrodilución en medio líquido BHI.. BI. El CMI hallado en este estudio es elevado en comparación al CMI de otras especies del género Annona48- 54. Aunque no existe un acuerdo sobre un nivel de inhibición aceptable para extractos vegetales, el valor hallado de CMI es elevado según Aligianis et al47 los cuales propusieron un sistema. 21. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(37) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. de clasificación basado en lo siguiente: inhibidores fuertes (CMI < 0.50 mg/mL), moderadamente fuertes (CMI <0,60 y 1,50 mg/mL>) e inhibidores débiles (CMI >1,60 mg/mL).. IC AS. En este estudio, el valor elevado del CMI (200 mg/mL) para A. muricata podría ser debido a diferentes factores tanto como el método utilizado, el. G. cual debe ser corroborado por otros métodos como el de microdilución en. BI O. extracción (metanol y etanol) 38, 55, 56.. LO. 96 pocillos, la técnica de extracción (Maceración, Soxhlet) y solvente de. AS. Todos estos datos indican que A. muricata y especies afines al género presentan metabolitos secundarios que tienen la capacidad de inhibir el. EN CI. crecimiento en las diferentes especies del género Shigella y que sus extractos pueden ser utilizados como fuente promisoria de nuevos. CI. antibióticos.. DE. El presente estudio es de suma importancia, ya que demuestra que las hojas de Annona muricata presenta una actividad antimicrobiana sobre. CA. Shigella boydii, la cual servirá de base para futuras investigaciones tanto in. BI. BL. IO. TE. vitro como in vivo.. 22. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(38) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. V.. CONCLUSIÓN. De acuerdo a los resultados obtenidos en el presente estudio se concluye. IC AS. lo siguiente: El extracto etanólico extraído de las hojas de Annona muricata inhibe. G. significativamente el crecimiento de Shigella boydii ATCC 9207 a las. LO. concentraciones de 250 mg/mL y 500 mg/mL, siendo la Concentración. BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI. EN CI. AS. BI O. Mínima Inhibitoria (CMI) 200 mg/mL.. 23. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(39) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. RECOMENDACIONES 1. Ampliar el estudio de la capacidad inhibitoria del extracto etanólico. IC AS. de las hojas de Annona muricata a través de otros métodos de evaluación, así como la determinación de sus principios bioactivos.. LO. G. 2. Continuar el estudio microbiológico del extracto etanólico de las. BI O. hojas de Annona muricata y validar con otras metodologías.. AS. 3. Profundizar el estudio citotóxico en el extracto etanólico de las hojas. EN CI. de Annona muricata utilizando otros bioensayos, además de realizar. BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI. un estudio de toxicidad in vivo.. 24. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

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