Obtención de callos de cyclamen persicum mill a partir de hojas de “violeta de los alpes” por efecto del 2,4 diclorofenoxiacético
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(2) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Ó. N. DEDICATORIA. AC I. A Dios Todopoderoso, por haberme. M UN. IC. dado la vida e iluminarla día a día.. A mí madre Martha y mi querido padre Andrés, por. CO. su cariño, apoyo incondicional, sacrificio Y por hacer. Y. de mí un profesional con valores humanos para servir. RM. ÁT. IC. A. con emoción social a los seres humanos que me rodean.. FO. A mi hermano Yonel por apoyarme y. Por. ser. mi. amigo. A mis hermanas Yessica y Yanira que con su apoyo me ayudaron a superar adversidades de la vida y motivarme profesionalmente Y de quienes recibo fortaleza en los momentos difíciles.. CC. IO. N. DE. SI. ST. EM AS. incondicional y cómplice intelectual.. DE. sueños.. IN. compartir conmigo experiencias y. RE. A Raúl por el apoyo brindado antes,. DI. durante y después de la ejecución de la tesis, siendo una pieza clave en mi vida y en mi carrera. ii. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..
(3) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AGRADECIMIENTOS. N. A la Universidad Nacional de Trujillo, a través de los docentes de la Facultad de Ciencias Biológicas, por. M UN. IC. AC I. Ó. las enseñanzas transmitidas durante los cinco años de formación académica.. Al profesor asesor Dr. Segundo Eloy López Medina por compartir sin recelo sus conocimientos, por. CO. desear que sus alumnos siempre continúen creciendo. Gracias por apoyarme en el desarrollo de la tesis y. IC. A. Y. por incentivar los deseos de investigación.. RM. ÁT. A la profesora Marlene Rodríguez Espejo por la disposición y orientación para el desarrollo de la presente. IN. FO. tesis.. EM AS. DE. Al profesor Roger Veneros Terrones por las sugerencias y aporte científico de la presente tesis.. DE. SI. ST. A la profesora Carmen Zavaleta por sus enseñanzas y orientación en la ejecución de la presente tesis.. IO. N. A los servicios brindados por el laboratorio de fisiología y cultivo de tejidos vegetales de la universidad. DI. RE. CC. nacional de Trujillo.. iii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..
(4) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Ó. N. AUTORIDADES DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO QUE OTORGA EL TITULO PROFESIONAL DE BIOLOGO. AC I. RECTOR. Y. CO. M UN. IC. DR. ORLANDO VELASQUEZ BENITES. IC. A. VICERRECTORA ACADEMICA. DE. IN. FO. RM. ÁT. DRA. VILMA JULIA MÉNDEZ GIL. EM AS. VICERRECTOR ADMINISTRATIVO. SECRETARIO GENERAL: DR. SANTIAGO ALBERTO UCEDA DUCLOS. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI. ST. DRA. FLOR MARLENE LUNA VICTORIA MORI. iv Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..
(5) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Ó. IC. A. Y. CO. M UN. IC. DR. HERMES MARIO ESCALANTE AÑORGA. AC I. DECANO DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS. N. AUTORIDADES DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS. ÁT. SECRETRIO DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS. EM AS. DE. IN. FO. RM. DR. CÉSAR AUGUSTO JARA CAMPOS. BIOLÓGICAS. SI. ST. DIRECTOR DE LA ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE CIENCIAS. DI. RE. CC. IO. N. DE. DR. SEGUNDO ELOY LÓPEZ MEDINA. v Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..
(6) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. PRESENTACIÓN. AC I. Ó. N. SEÑORES MIEMBROS DEL JURADO DICTAMINADOR:. En cumplimiento con las disposiciones del reglamento de grados y títulos de la. M UN. IC. Escuela Profesional de Ciencias Biológicas de la Facultad de Ciencias Biológicas de la Universidad Nacional de Trujillo, someto a vuestra consideración y elevado criterio, el. A. Y. CO. presente trabajo de investigación titulado:. IC. OBTENCIÓN DE CALLOS DE Cyclamen persicum MILL A PARTIR DE HOJAS DE. FO. RM. ÁT. VIOLETA DE LOS ALPES POR EFECTO DEL 2,4-DICLOROFENOXIACÉTICO.. IN. Con el cual estoy cumpliendo con uno de los requisitos indispensables para obtener el título. EM AS. DE. profesional de Biólogo.. ---------------------------------------------Br. MEDINA ZAVALALETA ERICA FLOR. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI. ST. Trujillo, Enero 2014. vi Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..
(7) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. ---------------------------------------. CO. Dra. MARLENE RODRÍGUEZ ESPEJO. M UN. IC. AC I. Ó. N. MIEMBROS DEL JURADO DICTAMINADOR. IN. FO. RM. ÁT. IC. A. Y. PRESIDENTA. DE. -----------------------------------------. EM AS. Dr. ROGER VENEROS TERRONES. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI. ST. SECRETARIO. ----------------------------------------Dr. SEGUNDO ELOY LÓPEZ MEDINA VOCAL. vii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..
(8) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DEL ASESOR. IC. AC I. Ó. N. Quien suscribe, Profesor Segundo Eloy López Medina. CO. M UN. CERTIFICA:. Y. Que la presente tesis ha sido ejecutada conforme a los objetivos propuestos y con las. ÁT. IC. A. orientaciones pertinentes a la tesista.. RM. En cuanto el informe, este ha sido revisado y acogido las observaciones y sugerencias, por. FO. lo que autorizo a la bachiller MEDINA ZAVALETA ERICA FLOR, para continuar con. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI. ST. EM AS. DE. IN. los trámites correspondientes.. -----------------------------------------------Dr. SEGUNDO ELOY LÓPEZ MEDINA ASESOR. viii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..
(9) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. APROBACIÓN Los profesores que suscriben, miembros del Jurado Dictaminador, declaran que la presente. N. tesis ha cumplido con los requisitos formales y fundamentales, siendo aprobado por. CO. ---------------------------------------. M UN. IC. AC I. Ó. unanimidad.. DE. IN. FO. RM. ÁT. PRESIDENTA. IC. A. Y. DRA. MARLENE RODRÍGUEZ ESPEJO. EM AS. -----------------------------------------. SECRETARIO. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI. ST. DR. ROGER VENEROS TERRONES. ----------------------------------------DR. SEGUNDO ELOY LÓPEZ MEDINA VOCAL ix. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..
(10) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. INDICE DEDICATORIA ................................................................................................................................ iii. Ó. N. AGRADECIMIENTOS ..................................................................................................................... iii. AC I. AUTORIDADES DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO QUE OTORGA EL. M UN. IC. TITULO PROFESIONAL DE BIOLOGO ........................................................................................ iv AUTORIDADES DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS ........................................... v. CO. PRESENTACIÓN .............................................................................................................................. vi. IC. A. Y. MIEMBROS DEL JURADO DICTAMINADOR ............................................................................ vii. ÁT. DEL ASESOR .................................................................................................................................. viii. RM. APROBACIÓN .................................................................................................................................. ix. IN. FO. INDICE .............................................................................................................................................. ix. DE. RESUMEN......................................................................................................................................... xi. EM AS. ABSTRACT ...................................................................................................................................... xii INTRODUCCIÓN .............................................................................................................................. 1. SI. ST. MATERIALES Y MÉTODOS ........................................................................................................... 7. DE. RESULTADOS ................................................................................................................................. 12. IO. N. DISCUSIÓN ..................................................................................................................................... 20. CC. CONCLUSIÓN ................................................................................................................................. 23. RE. RECOMENDACIONES ................................................................................................................... 24. DI. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS .............................................................................................. 25 ANEXO ............................................................................................................................................. 28. x Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..
(11) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. RESUMEN. N. Cyclamen persicum Mill “Violeta de los Alpes”, es una planta muy hermosa por sus. AC I. Ó. flores de diversos colores, gran duración en macetas y alto valor en el mercado. La. IC. obtención masiva de plantas por propagación tradicional es difícil de realizar siendo una. M UN. alternativa la técnica de cultivo de tejidos vegetales, donde el cultivo de callos es una. CO. poderosa herramienta a partir de los cuales es posible mediante morfogénsesis o embriogénesis somática, propagar grandes volúmenes y en menor tiempo plántulas in vitro,. A. Y. por lo que el objetivo del presente trabajo fue la obtención de callos de Cyclamen persicum. ÁT. IC. Mill, a partir de hojas de “violeta de los alpes” por efecto del 2,4-Diclorofenoxiacético. Las. RM. plantas madres fueron obtenidas de tiendas locales y llevadas al laboratorio, donde se. FO. seleccionaron las mejores hojas y fueron cortadas en trozos de 1cm2. Dentro de la cámara. IN. de flujo laminar previamente desinfectada se realizo las desinfecciones de los explantes con. DE. alcohol al 70% por 3 minutos e hipoclorito de sodio al 1.5 % durante 2 minutos, luego. EM AS. fueron enjuagados con agua destilada estéril para ser sembrados en medio de cultivo que. ST. contenía sales de Murashige y Skoog (1962), suplementado con 2,4-diclorofenoxiacético en. SI. concentraciones de 0.0, 0.5, 1.0 y 1.5 mg/l. Los explantes se incubaron en una cámara. DE. oscura a 20 ± 2 °C durante 60 días. Se utilizó el diseño de bloques completos al azar. Los. IO. N. resultados muestran diferencias significativas para el desarrollo de altura y ancho de callo a. CC. 1.0 mg/l, y para el desarrollo de largo de callos a 1.5 mg/l. Se concluye que el 2,4-D, induce. RE. la formación de callos a las concentraciones trabajadas y que la más adecuada para altura y. DI. ancho de callo es a 1.0 mg/l y para largo de callo a 1.5 mg/l. PALABRAS CLAVE: Cyclamen persicum MILL, callos, cultivo in vitro, 2,4Diclorofenoxiacético. xi. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..
(12) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. ABSTRACT. N. Cyclamen persicum Mill “Violet of the Alps”, is a very beautiful for flowers of. AC I. Ó. different colors plant pots and durability in high market value. The mass production of. IC. plants by traditional breeding is difficult to perform being an alternative technique of plant. M UN. tissue culture, where the callus culture is a powerful tool from which is possible by. CO. morphogenesis or somatic embryogenesis, and propagate large volumes shorter seedlings in. Y. vitro, so the aim of this study was to obtain callus Cyclamen persicum Mill, from leaves of. IC. A. "Violet Alpine " effect of 2, 4-dichlorophenoxyacetic. The mother plants were obtained. ÁT. from local stores and taken to the laboratory , where the best leaves were selected and were. RM. cut into pieces 1cm2.Dentro of laminar flow chamber previously disinfected disinfections. FO. of explants with 70% alcohol was performed for 3 minutes and sodium hypochlorite at 1.5. medium. contained. Murashige. DE. IN. % for 2 minutes , then were rinsed with sterile distilled water to be seeded in culture and. Skoog. (1962),. supplemented. with. 2,4-. EM AS. Dichlorophenoxyacetic acid at concentrations of 0.0, 0.5 , 1.0 and 1.5 mg /l. The explants. ST. were incubated in a dark chamber at 20 ± 2 ° C for 60 days. The design of randomized. SI. complete blocks was used. The results show significant development of height and width of. DE. callus 1.0 mg / l, and for the development of callus over 1.5 mg / l differences. It is. IO. N. concluded that 2,4- D induces callus formation at concentrations that worked best for callus. CC. height and width is 1.0 mg / L for callus over 1.5 mg / l. Cyclamen. persicum. MILL,. callus. culture. in. vitro,. 2,. 4-. DI. RE. KEYWORDS:. Dichlorophenoxyacetic.. xii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..
(13) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. INTRODUCCIÓN. AC I. Ó. N. Cyclamen persicum Mill “Violeta de los Alpes”, es una especie destacada por sus. IC. características estéticas, larga duración y alto valor en el mercado, es una planta muy hermosa no. M UN. solo por sus flores de diversos colores y gran duración en macetas; sino también por su follaje, cada flor puede durar cuatro semanas sin perder frescura y lozanía, y la planta puede permanecer. A. Y. CO. floreciendo durante cuatro meses.(1). ÁT. IC. El género Cyclamen perteneciente a la familia de las primuláceas, está formado por. RM. plantas herbáceas, de flores aromáticas, con cinco pétalos que suelen plegarse sobre sí mismos.. FO. Florece desde el otoño a primavera (floración invernal). Esta planta es originaria de los bosques. IN. de Medio Oriente, zona con mucha luminosidad, donde vive entre 400 y 800 m.s.n.m., en los. DE. lugares protegidos de los rayos directos del sol, en donde la humedad relativa es alta y las. EM AS. temperaturas oscilan entre 12 y 22 °C, por lo que necesita lugares ventilados, con mucha luz, no. SI. ST. muy calurosas.(1). DE. A escala mundial es posible identificar tres grandes consumidores de plantas. IO. N. ornamentales: La Unión Europea, Estados Unidos y Japón. La Unión Europea es considerada. CC. como la principal región que consume plantas ornamentales (más del 50% de la producción. RE. mundial), Alemania es el principal consumidor de plantas ornamentales dentro de la Unión. DI. Europea representando el 27% del total. En segundo lugar, se ubica Francia con 17%, seguido por Italia y Reino Unido, ambos con 16%. Por último, Holanda y Austria, con una participación del 7% y 3%, respectivamente. En la actualidad Alemania es el mayor productor de C. persicum 1. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..
(14) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. en Europa con cantidades de 25 millones de plantas anuales, mientras que Francia produce unos. N. 6 millones e Italia 3 millones.(2). AC I. Ó. C. persicum se propaga por semilla y vegetativamente, sin embargo, ambos métodos de. IC. propagación son difíciles. La reproducción por semilla no se recomienda, a pesar de que este es. M UN. el único método usado por los productores profesionales. La germinación de las semillas de C.. CO. persicum es lenta y errática, y se necesitan 9 a 15 meses para producir las plantas que florecen a. Y. tamaño real, incluso en las mejores condiciones de invernadero. La propagación vegetativa. A. también es problemática por tener pocos puntos de crecimiento en cada tubérculo individual, y. RM. ÁT. IC. los tubérculos son propensos a la desecación y la podredumbre, una vez cortadas.(3). FO. Una de las alternativas a este proceso de propagación; son las técnicas de cultivo de. IN. tejidos vegetales o cultivos in vitro; es un método de multiplicación en condiciones totalmente. DE. asépticas, en las que a partir de un pequeño segmento inicial de tejido es posible regenerar en. EM AS. poco tiempo miles o millones de plantas genéticamente iguales a la planta madre. A diferencia. ST. de las técnicas tradicionales de cultivo, esta poderosa herramienta permite la propagación de. SI. grandes volúmenes, en menor tiempo y libres de patógenos. El enorme potencial que posee esta. DE. metodología ha propiciado que en los últimos años se haya incrementado el número de. IO. N. laboratorios de cultivo de tejidos en el país para la producción comercial de plantas ornamentales. CC. y frutales lo que ha motivado que algunos floricultores la estén utilizando como una alternativa. DI. RE. viable en sus programas de producción.(4). Una de las técnicas de la propagación in vitro es el cultivo de callo; un callo es una masa de células más o menos organizada que usualmente se origina como resultado de heridas en 2 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..
(15) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. órganos y tejidos ya diferenciados, por tanto, un callo no es homogéneo sino que por el contrario, está formado por células diferenciadas e indiferenciadas; una de las características importantes. N. del callo es su irregular crecimiento, el cual permite desarrollar órgano (raíces, brotes y. AC I. Ó. embriones) y la regeneración de plantas completas. El desarrollo de algunos callos es. IC. fuertemente lignificado y duros en textura, los que no se pueden separar fácilmente en pequeños. M UN. fragmentos; por el contrario los callos frágiles se separan fácilmente y se los denomina callos. CO. friables. Los callos pueden ser amarillentos, blancos, verdes, o coloreados con antocianinas. La. Y. pigmentación será en todo el callo, o en algunas regiones sin pigmentar. Su anatomía, es de. IC. A. variación considerable a lo largo de la diferenciación celular. El cultivo de callo puede derivarse. ÁT. de una variedad de órganos de la planta (raíz, tallo, hoja), los tejidos juveniles son los más. RM. adecuados para producir callos, a partir de una porción vegetal, la cual se pone en contacto con. FO. medio de cultivo y mantenga un crecimiento y una división celular continua, generalmente se. IN. utilizan el medio Murashige y Skoog (MS, 1962) por ser ampliamente utilizado en la actualidad.. DE. La formación de un callo es de importancia como proceso intermediario para la organogénesis,. ST. EM AS. embriogénesis, así como estudios de morfogénesis, bioquímica, citología; genética, etc.(5). SI. La formación del callo depende del tipo de regulador del crecimiento y su concentración. DE. en el medio depende del genotipo y del contenido endógeno de hormonas del explante; por lo. IO. N. que es necesario aportar, sólo auxinas, sólo citoquininas o ambas; las citoquininas más utilizadas. CC. son la kinetina (Kin) y la benciladenina (BA) y dentro de las auxinas las más empleadas son el. RE. ácido 2,4-diclorofenoxiacético (2,4-D), ácido naftalenacético (ANA) y ácido indolacético (AIA);. DI. el IBA y NAA son usados frecuentemente para enraizamiento, en cambio el 2,4-D ha sido reportado como el regulador de crecimiento sintético mas adecuado para la obtención y mantenimiento de callos en diversas especies vegetales cultivadas in vitro. La cantidad de callo 3. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..
(16) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. formado esta relacionado con la concentración de auxina aplicada. Además esta auxina ha sido señalada como inductor de inestabilidad, ejerciendo profundos efectos sobre la respiración. N. celular, el consumo de azúcares y en el control de la división celular. Por ello se especula acerca. AC I. Ó. de su rol indirecto en la inducción de cambios en el metabolismo celular y tisular de plantas. M UN. IC. creciendo in vitro.(6,7). CO. 2,4-diclorofenoxiacético (2,4-D) es una potente auxina que se usa en el cultivo in vitro. Y. para la formación de callos, ha sido utilizado como regulador de crecimiento para diversas. IC. A. especies de plantas dando buenos resultados en los explantes de hojas, el inicio de la formación. ÁT. de los callos se hace evidente cuando estos empiezan a arrugarse, se separan del medio de cultivo. RM. y se tornan de color verde claro; asimismo se observa la formación de pequeñas protuberancias. FO. en los bordes y sobre la nervadura principal, formándose en esta ultima células menos. DE. IN. diferenciadas en comparación con el resto del explante.(8,9,10). EM AS. En el cultivo in vitro de células y tejidos, los principales parámetros físicos a controlar. ST. son la calidad e intensidad de luz empleada y la temperatura. Aunque normalmente la. SI. fotosíntesis proporciona a las plantas un suplemento suficiente de energía, la síntesis de. DE. estructuras y compuestos celulares, en el cultivo in vitro de tejidos y células, las condiciones. IO. N. frecuentemente no son suficientes como para soportar un desarrollo autótrofo, así que la. CC. fotosíntesis generalmente no es funcional aunque el cultivo sea verde; no obstante,. RE. incrementando la luz y proporcionando CO2 es posible conseguir la autótrofía de algunos. DI. cultivos. Dado que en la micropropagación la luz de día es completamente reemplazada por fuentes de luz artificial con diferente espectro, tales cambios pueden inducir respuesta inhibitoria del crecimiento de células y tejidos vegetales.(11) 4. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..
(17) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Las plantas ornamentales de C. persicum, a parte de su belleza tienen gran demanda en el. N. mercado, y la obtención de callos a partir de explantes vegetales pueden ser utilizados en el. AC I. Ó. mejoramiento genético para la obtención de nuevas variedades de plantas resistentes a diversos. IC. factores o para la obtención de plántulas completa por la organogénesis indirecta; que pueden. M UN. resultar prácticos desde el punto de vista agrícola o de la investigación. Ya que una de las. CO. propiedades importantes del tejido calloso es la llamada friabilidad, esta se puede definir, como. Y. la tendencia de las células a separarse unas de otras, por cual un callo friable es aquel que se. IC. A. disgrega con facilidad. Desde el punto de vista morfogénico, la característica más importante del. ÁT. callo es la totipotencialidad de sus células, que con un manejo adecuado de las condiciones. RM. nutricionales, hormonales y ambientales, tienen la capacidad de desarrollar brotes, raíces,. DE. IN. FO. embriones, etc. (12,13). EM AS. Los primeros trabajos de inducción y cultivo de callo fueron realizados por White (1939) en explantes de Nicotiana glauca y Nicotiana langsdorfii. Esta investigación respaldó la teoría. SI. ST. del totipotencialidad celular, que consiste en que todas las células vegetales tienen la capacidad. DE. para formar plantas completas. Así mismo, Reinert y Steward (1958) describieron la inducción. N. de embriones somáticos a partir de callos derivados del ápice radical de Daucus carota. RE. CC. IO. “zanahoria”.(14). DI. Teniendo en cuenta estos antecedentes y con la necesidad de la obtención de callos en C.. persicum, que tiene gran importancia y demanda comercial se realizó este trabajo que tuvo como objetivos:. 5 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..
(18) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Determinar el efecto de las concentraciones del 2,4-Diclorofenoxiacético en la obtención de callo a partir de hojas de plantas de Cyclamen persicum Mill . “Violeta de los. N. Alpes”.. AC I. Ó. Determinar que concentración de 2,4-Diclorofenoxiacético es la mas adecuada. IC. para el desarrollo del callo a partir de hojas de plantas de Cyclamen persicum Mill. “Violeta. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI. ST. EM AS. DE. IN. FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. M UN. de los Alpes”.. 6 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..
(19) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. N. MATERIALES Y MÉTODOS. AC I. Ó. El proyecto se realizó en el laboratorio de fisiología y cultivo de tejidos vegetales de la Nacional de Trujillo. El material vegetal procedió de tiendas de plantas. IC. Universidad. M UN. ornamentales, del distrito de Trujillo, donde se escogio a las mejores y fueron llevadas al. CO. laboratorio.. Y. En la fase de establecimiento, se empleó el método descrito por (Bancroft y McDonald,. IC. A. 1995). Para la desinfección de los explantes, se cortó hojas de Cyclamen persicum Mill.“violeta. ÁT. de los Alpes” que fueron lavados con detergente y enjuagados con abundante agua para. RM. garantizar el desprendimiento de polvo y otras impurezas y luego con la ayuda de un bisturí. FO. sobre una placa petri se procedió a cortar las hojas en cuadros de 1cm2; los cuales fueron puesto. DE. IN. en agua para evitar la deshidratación, (Fig.1).. ST. B. C. D. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI. A. EM AS. Fig.1: Desinfección y preparación del material vegetal de Cyclamen persicum Mill, para la obtención de callos in vitro. A: Corte de hojas de la planta madre B: Lavado de hojas con detergente. C: Enjuague de hojas con abundante agua. D: corte de hojas.. 7 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..
(20) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Para la preparación de la hormona 2,4-Diclorofenociacético, se obtuvo del herbicida. N. Hedonal (72 SL); muy conocido en la agricultura, la cual tiene como ingrediente activo 2,4-D. AC I. Ó. (720 gr/l) del cual se preparo una solución madre 1000 mg/l y posteriormente una solución stock. IC. de 50 mg/l, del cual según cálculos se prepararon las diferentes concentraciones.. M UN. Para la preparación de medios de cultivo se utilizó en todos los experimentos las sales. CO. propuestas por Murashige y Skoog (1962) como medio basal (Anexo 01), suplementado con. ÁT. IC. A. concentraciones de 0.0, 0.5, 1.0 y 1.5 mg/l. según la tabla 1.. Y. sacarosa al 3% y agar al 0.8%. Se le adicionó 2,4-Diclorofenoxiacético (2.4-D) en las. TRATAMIENTOS. [ ] 2,4 D (mg/l). T1. 0.0. T2. 0.5. T3. 1.0. T4. 1.5. CC. IO. N. persicum Mill. DCyclamen E SI ST EM AS DE. IN. ESPECIE. FO. RM. Tabla 1: Concentraciones del 2,4-diciorofenoxiacetico (mg/l) para cada tratamiento en obtención de callos de Cyclamen persicum “Violeta de los Alpes”.. RE. El medio fue dispensado 2 ml en cada frasco de vidrio previamente lavados y. DI. esterilizados; los cuales fueron sellados con papel aluminio. Todos los frascos con medios fueron empaquetados y esterilizados en una autoclave a 1 atmósfera de presión durante 15 minutos y a una temperatura de 121ºC (Fig. 2).(15) 8. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..
(21) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AC I. C. B. FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. M UN. IC. A. Ó. N. Fig.2: Preparación del medio de cultivo, utilizado como medio basal sales de Murashige y Skoog suplementado con 2,4-Diclorofenoxiacetico para la obtención de callos de Cyclamen persicum Mill. A. Agregando los ingredientes B: Disolviendo el medio sobre la parrilla calefactora. C: Vertido del medio a los frascos.. IN. En el establecimiento in vitro, en la cámara de flujo laminar previamente desinfectada. DE. con hipoclorito de sodio al 2%. Se realizó la primera desinfección de los explantes con alcohol al. EM AS. 70% por 3 minutos, luego con hipoclorito de sodio (NaClO) al 1.5% durante 2 minutos,. ST. posteriormente se eliminó los residuos de NaClO mediante tres enjuagues sucesivos con agua. DE. DI. RE. CC. IO. N. (Fig. 3). (16). SI. destilada estéril. Se sembró cada explante en cada frasquitos con el medio de cultivo preparado. 9 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..
(22) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. B. C. D. ST. EM AS. DE. IN. FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. M UN. IC. AC I. A. Ó. N. Fig.3: Desinfección y siembra del explante a partir de hojas de Cyclamen persicum Mill, para la obtención de callo in vitro. A: Desinfección con alcohol al 70%. B: Desinfección con hipoclorito de sodio al 1.5%. C: Enjuague del explante con agua destilada estéril D: Siembra de los explantes.. SI. Los explantes establecidos en el medio de cultivo se mantuvieron en una sala de. DE. incubación a una temperatura de 20-22°C en una cámara oscura. El material se mantuvo en estas. IO. N. condiciones por 60 días. se observó cada 15 días para determinar el inicio de formación del. DI. RE. CC. tejido calloso y visualizar la presencia de agentes contaminantes en los cultivos (Fig. 4).. 10 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..
(23) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Fig. 4: Formación de callos in vitro de los diferentes tratamientos a partir de hojas de Cyclamen persicum Mill. In vitro a los 60 días; Trujillo-2013. T2. T3. T4. Y. CO. M UN. IC. AC I. Ó. N. T1. IC. A. Se utilizó el diseño de boques completos al azar (D.B.C.A). Para establecer el efecto de la. ÁT. hormona sobre el explante. Se trabajó con 4 tratamientos, cada uno con tres repeticiones y cada. FO. RM. tratamiento consta de ocho unidades muéstrales. A los 60 días de la siembra de los explantes se. DE. IN. evaluaron las unidades muéstrales.. EM AS. Con los datos obtenidos se determino entre los parámetros cuantitativos Altura, Ancho y Largo de callo, en cuanto a los parámentros cualitativos se determino forma y color.. ST. Los datos fueron estadísticamente analizados con la prueba de ANOVA para determinar. DE. SI. si hay o no diferencia significativa, y los promedios de los tratamientos fueron comparados empleando la prueba de Duncan con un nivel de significancia de 0,05 para determinar el mejor. DI. RE. CC. IO. N. tratamiento para la obtención de callos en Cyclamen persicum. (17). 11 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..
(24) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. N. RESULTADOS. AC I. Ó. Tabla 2: ANOVA para Altura (cm) de callos de Cyclamen persicum Mill, obtenidos de los. IC. diferentes tratamientos (T1, T2, T3, T4) por efecto del 2,4-Diclorofenoxiacético a los. Suma de. gl. Media cuadrática. F. Sig.. Y. cuadrados. CO. FUENTE. M UN. 60 día; Trujillo-2013.. Bloque. 0.339. 2.000. Error. 3.041. 90.000. Total Corregida. 4.377. 0.332. 9.834. 0.000. 0.169. 5.015. 0.009. RM. 3.000. FO. 0.997. IN. Tratamiento. ÁT. IC. A. tipo III. DE. EM AS. 95.000. DE. SI. ST. (p<0.05). 0.034. N. Se puede observar en la tabla de ANOVA para la Altura (cm) de callos de Cyclamen. CC. IO. persicum respecto al análisis de varianza entre tratamientos presenta un valor de F= 9.834 con. RE. una significancia de 0.000. Respecto al análisis de varianza entre bloques, se observa un valor de. DI. F= 5.015 con una significancia de 0.009.. 12 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..
(25) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Tabla 3: POST ANOVA con la Prueba de Duncan entre tratamientos para altura (cm) de callos. N. de Cyclamen persicum Mill, por efecto del 2,4-Diclorofenoxiacético obtenidas in vitro. 24. 2. 24. 4. 24. 3. 24. 1. 0.188. 0.346. 0.471. IN. DE. 1.000. 0.375. 0.584. 0.074. EM AS. Sig.. 0.375. FO. RM. ÁT. IC. A. Y. 1. 3. CO. 2. AC I. Subconjunto. IC. N. M UN. TRATAMIENTO. Ó. a los 60 días; Trujillo-2013.. ST. (p<0.05). DE. SI. En la prueba de Duncan, para altura (cm) de callos de Cyclamen persicum muestra los. N. datos en tres subconjuntos, el primer subconjunto indica que el tratamiento 1 presenta diferencias. IO. significativas (p<0.05) con todos los demás tratamientos, el segundo subconjunto indica que los. RE. CC. tratamientos 2 y 4 no presentan diferencias significativas (p>0.05) entre sí, y el tercer. DI. subconjunto indica que los tratamientos 3 y 4 tampoco presentan diferencias significativas (p>0.05) entre sí. Pudiéndose agregar que el tratamiento 4 es estadísticamente igual (p>0.05) al tratamiento 2 y al tratamiento 3, pero siendo estadísticamente diferentes (p<0.05) entre sí los tratamientos 2 y 3. 13. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..
(26) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Tabla 4: POST ANOVA con la Prueba de Duncan entre bloques para altura (cm) de callos de. N. Cyclamen persicum Mill por efecto del 2,4-Diclorofenoxiacético obtenidas in vitro a. AC I. Subconjunto. 0.294. 2. 32. 0.313. 1. 32. Y. 32. FO. ÁT. IC. A. 3. CO. 1. RM. 2. IC. N. M UN. BLOQUE. Ó. los 60 días; Trujillo-2013.. 0.684. 1.000. DE. IN. Sig.. 0.428. EM AS. (p<0.05). ST. Prueba de Duncan, muestra los datos en dos subconjuntos, el primer subconjunto indica. SI. que los bloques 2 y 3 no presentan diferencias significativas (p>0.05) entre sí, pero si presentan. DE. diferencias significativas (p<0.05) con el bloque 1, el segundo subconjunto indica que el bloque. DI. RE. CC. IO. N. 1 presenta diferencias significativas (p<0.05) con todos los demás bloques.. 14 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..
(27) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Tabla 5: ANOVA para Largo (cm) de callos de Cyclamen persicum Mill, obtenidos de los. N. diferentes tratamientos (T1, T2, T3, T4) por efecto del 2,4-Diclorofenoxiacético a los. Media. cuadrados. F. AC I. de gl. IC. Suma. Sig.. M UN. FUENTE. Ó. 60 día; Trujillo-2013.. cuadrática. 6.412. 3. 2.137. Bloque. 0.061. 2. 0.030. Error. 7.497. 90. Total Corregida. 13.970. 95. 25.660. 0.000. 0.365. 0.695. RM. ÁT. IC. A. Tratamiento. Y. CO. tipo III. DE. IN. FO. 0.083. EM AS. (p<0.05). ST. Se puede observar en la tabla de ANOVA que presenta un valor de F= 25.660 respecto al. DE. SI. análisis de varianza entre tratamientos con una significancia de 0.000, lo cual indica que existen. N. diferencias significativas (p<0.05) en al menos dos tratamientos. Respecto al análisis de varianza. IO. entre bloques, se observa un valor de F= 0.365 con una significancia de 0.695, lo cual indica que. DI. RE. CC. no existen diferencias significativas (p>0.05) entre bloques.. 15 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..
(28) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Tabla 6: POST ANOVA con la prueba de Duncan entre tratamientos para Largo (cm) de callos. Ó. N. de Cyclamen persicum Mill por efecto del 2,4-Diclorofenoxiacético obtenidas in vitro. N. Subconjunto. M UN. TRATAMIENTO. 3. 24. 4. 24. Y. 24. A. 2. 0.350. IN. FO. RM. ÁT. IC. 24. 1. CO. 2 1. IC. AC I. a los 60 días; Trujillo-2013.. DE. 1.000. 0.123. SI. ST. (p<0.05). 0.929 1.008. EM AS. Sig.. 0.871. DE. Prueba Duncan, muestra los datos en dos subconjuntos, el primer subconjunto indica que. IO. N. el tratamiento 1 presenta diferencias significativas (p<0.05) con todos los demás tratamientos, y. CC. el segundo subconjunto indica que los tratamientos 2, 3 y 4 no presentan diferencias. DI. RE. significativas (p>0.05) entre sí, pero si presentan diferencias significativas (p<0.05) con el tratamiento 1.. 16 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..
(29) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Tabla 7: ANOVA para Ancho (cm) de callos de Cyclamen persicum Mill obtenidos de los. N. diferentes tratamientos (T1, T2, T3, T4) por efecto del 2,4-Diclorofenoxiacético a los. Media. cuadrados. F. AC I. gl. IC. Suma de. cuadrática. 3. 0,625. BLOQUE. 0,645. 2. 0,323. Error. 6,207. 90. Total corregida. 8,727. 95. 9,064. 0,000. 4,678. 0,012. RM. ÁT. IC. A. TRATAMIENTO 1,875. Y. CO. tipo III. Sig.. M UN. FUENTE. Ó. 60 día; Trujillo-2013.. DE. IN. FO. 0,069. EM AS. (p<0.05). ST. Se puede observar en la tabla de ANOVA que para Ancho (cm) de callos de Cyclamen. DE. SI. persicum presenta un valor de F= 9.109 respecto al análisis de varianza entre tratamientos con. N. una Significancia de 0.000, lo cual indica que existen diferencias significativas (p<0.05) en al. IO. menos dos tratamientos. Respecto al análisis de varianza entre bloques, se observa un valor de. RE. CC. F= 4.678 con una significancia de 0.012, lo cual indica que existen diferencias significativas. DI. (p<0.05) en al menos dos bloques.. 17 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..
(30) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Tabla 8: POST ANOVA con la Prueba de Duncan entre tratamientos para Ancho (cm) de callos. Ó. N. de Cyclamen persicum Mill por efecto del 2,4-Diclorofenoxiacético obtenidas in vitro. N. Subconjunto. 1. 0.238. 4. 24. ÁT. 2. 24. 3. Y. 24. FO. RM. IC. A. 1. IN. CO. 2. M UN. TRATAMIENTO. IC. AC I. a los 60 días; Trujillo-2013.. 1.000. 0.089. SI. ST. (p<0.05). EM AS. Sig.. 0.571 0.588. DE. 24. 0.450. DE. Prueba de Duncan, muestra los datos en dos subconjuntos, el primer subconjunto indica. IO. N. que el tratamiento 1 presenta diferencias significativas (p<0.05) con todos los demás. CC. tratamientos, y el segundo subconjunto indica que los tratamientos 2, 3 y 4 no presentan. RE. diferencias significativas (p>0.05) entre sí, pero si presentan diferencias significativas (p<0.05). DI. con el tratamiento 1.. 18 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..
(31) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Tabla 9: POST ANOVA con la Prueba de Duncan entre bloques para Ancho (cm) de callos de. AC I. Ó. N. Cyclamen persicum Mill por efecto del 2,4-Diclorofenoxiacético obtenidas in vitro a. N. Subconjunto. CO. BLOQUE. M UN. IC. los 60 días; Trujillo-2013.. 1. 0.384. 2. 32. 0.425. 1. 32. IC. 32. 0.575. DE. IN. FO. RM. ÁT. 3. A. Y. 2. 0.538. 1.000. EM AS. Sig.. ST. (p<0.05). DE. SI. Prueba de Duncan, muestra los datos en dos subconjuntos, el primer subconjunto indica que los bloques 2 y 3 no presentan diferencias significativas (p>0.05) entre sí, pero si presentan. IO. N. diferencias significativas (p<0.05) con bloque 1, el segundo subconjunto indica que el bloque 1. DI. RE. CC. presenta diferencias significativas (p<0.05) con todos los demás bloques.. 19 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..
(32) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Ó. N. DISCUSIÓN. AC I. La diferencia significativa entre tratamientos (tabla 2), respecto al carácter altura de. M UN. IC. callos de Cyclamen persicum Mill, demostrados mediante el análisis de varianza, se deben a que el 2,4-D al actuar a diferentes concentraciones promueve la desdiferenciación celular. CO. produciendo la formación de callos diferentes (Fehér 2002), lo cual concuerda con los resultados. Y. obtenidos por Ruiz 2000, en la inducción de callos de Anthurium andraeanum a diferentes. IC. A. concentraciones. De la misma manera, en el mismo cuadro la diferencia significativa entre. RM. ÁT. bloques, nos explica que probablemente las condiciones en las cuales se distribuyó cada bloque. FO. no fueron homogéneas y de alguna manera influyeron en los resultados obtenidos para el. DE. IN. carácter altura de callo en explantes de hoja de Cyclamen persicum Mill. (18, 19,20). EM AS. La diferencia significativa en la prueba de Duncan para altura de callo de Cyclamen. ST. persicum Mill (Tabla 3), a nivel de tratamiento 1 respecto a los otros tratamientos, nos indica que. SI. la no presencia de 2,4-D en el tratamiento 1, el crecimiento en altura del callo es deficiente. DE. respecto a los otros tratamientos (Matos, 2007), entre los cuales no existe una diferencia utilizar cualquiera de las. IO. N. significativa real, lo cual nos da a entender que podemos. DI. RE. CC. concentraciones con resultados favorables.(21,22,23). Respecto al comportamiento de los bloques (tabla 4), el bloque número 1 se desarrolla en. condiciones ambientales relativamente mejores que. los otros bloques, aspectos que está. justificando la aplicación de este tipo de diseño para este trabajo. (24,25) 20 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..
(33) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. La diferencia significativa entre tratamientos (tabla 5), respecto al carácter largo de callos. Ó. N. Cyclamen persicum Mill, demostrados mediante el análisis de varianza, se debe a que el 2,4-D al. AC I. actuar a diferentes concentraciones estimula de diferente manera la formación de callos,. IC. haciéndose evidente cuando estos empiezan a arrugarse y formarse pequeñas protuberancias en. M UN. los bordes y sobre la nervadura principal, resultado que coincide con lo expresado por Yeoman y. CO. Forche, 1980 relacionados con la acción de dicha hormona, al mismo tiempo la no diferencia. Y. significativa entre bloques nos indica que las condiciones ambientales trabajadas han sido. RM. ÁT. IC. A. homogéneas.(26,27). FO. La diferencia significativa en la prueba de Duncan (tabla 6), para largo de callo de persicum Mill (Tabla 6), observados en el tratamiento 1, respecto a los otros. IN. Cyclamen. DE. tratamientos, nos indica que al estar ausente el 2,4-D, el largo de callo es casi nulo en relación a. EM AS. los otros tratamientos que tienen hormona (khana y Raina, 1998), en los cuales no hay diferencia. SI. ST. significativa. (28,29). DE. La diferencia significativa entre tratamientos (tabla 7) para ancho de callo de Cyclamen. IO. N. persicum Mill, demostrados mediante el ANOVA, se debe a que el 2,4-D, al actuar a diferentes. CC. concentraciones determina la cantidad de callo formado (Krikorian, 1991), del mismo modo las. DI. RE. diferencias significativas entre bloques para Cyclamen persicum Mill, indican que las condiciones ambientales no fueron homogéneas, influenciando los resultados obtenidos para el carácter ancho de callo. (30,31). 21 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..
(34) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. La diferencia significativa en la prueba de Duncan (tabla 8) para ancho de callo de. M UN. IC. AC I. Ó. no existir 2,4-D, su crecimiento es casi nulo en relación a los otros tratamientos.(32,33). N. Cyclamen persicum Mill, del tratamiento 1 en relación a los otros tratamientos nos indica que al. La diferencia significativa en la prueba de Duncan (Tabla 9) entre bloques para ancho de. CO. callos de Cyclamen persicum Mill, por efecto del 2,4-D obtenidas in vitro, nos muestran que. Y. existen diferencias significativas entre el bloque 1 en relación a los otros, probablemente a que. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI. ST. EM AS. DE. IN. FO. RM. ÁT. IC. A. las condiciones ambientales fueron uniformes. (34,35). 22 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..
(35) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. N. CONCLUSIÓN. AC I. Ó. El 2,4-Diclorofenoxiacético a concentraciones de 0.0, 0.5, 1.0 y 1.5 mg/l induce la formación. M UN. IC. de callos a partir de hojas de plantas de Cyclamen persicum Mill . “Violeta de los Alpes”.. CO. La concentración más adecuada de 2,4-Diclorofenoxiacético para el desarrollo de altura y. Y. ancho de callo a partir de hojas de plantas de Cyclamen persicum Mill. “Violeta de los. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI. ST. EM AS. DE. IN. FO. RM. ÁT. IC. A. Alpes”, fue a 1.0 mg/l, y para el desarrollo de largo de callos fue a 1.5 mg/l.. 23 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..
(36) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. RECOMENDACIONES. AC I. Ó. N. Continuar estudios experimentales con otros tipos de explante, para determinar cuál de. M UN. IC. estos permiten obtener un mejor resultado.. Ejecutar nuevos trabajos de investigación, experimentando combinaciones de auxinas y. A. Y. CO. citoquininas, a fin de lograr callos viables.. ÁT. IC. Realizar estudios experimentales empleando diferentes medios de cultivo, para. FO. RM. determinar cuál de estos permiten obtener un mejor resultado.. IN. Realizar nuevos trabajos utilizando luz, oscuridad y fotoperiodo, para demostrar cuál de. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI. ST. EM AS. DE. estos factores nos dan mejores resultados en la obtención de callos.. 24 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..
(37) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS. N. 1.- Debussche M, J.D. Thompson 2002. Morphological differentiation among closely related. Ó. species with disjunct distributions: A case study of mediterranean Cyclamen l. Subgen.. AC I. Psilanthumschwarz (primulaceae). Botanical Journal of the Linnean Society 132: pp.133-. IC. 144.. M UN. 2.- Debussche M, J.D.Thompson 2003. Habitat differentiation between two closely related mediterranean plant species, the endemic Cyclamen balearicum and the widespread C.. CO. repandum. Acta Oecologica-International Journal of Ecology 24 pp. 35-45.. Y. 3.- http://www.clemson.edu/extension/hgic/plants/indoor/flowering/hgic1564.html 20 de Mayo del. A. 2013. ÁT. IC. 4.- http://www.ujcm.edu.pe/bv/links/cur_agronomica/ModMetodosBiotecnologicos.pdf 20 de. RM. Mayo del 2013. 5.- Ochoa, A. 1990. Establecimiento de cultivos in vitro. En fundamentos teórico prácticos de. FO. cultivo de tejidos vegetales. Editor Codmo H. Rossell y M. Víctor.Villalobos. 23-27. Roma. IN. FAO.. DE. 6.- Krikorian, A. 1991. Medios de cultivo: generalidades,composición y preparación. Cultivo de. EM AS. tejidos en la agricultura. Fundamentos y aplicaciones.CIAT.Colombia. p. 65 7.- Chawla, H. 2002. Introduction to plant biotechnology. Science Publishers Inc., USA. pp. 189–201.. ST. 8.- Medero, V. 2006. Embriogénesis somática en yuca (Manihot esculenta, Crantz.). Tesis en. SI. opción al grado científico de Doctor en Ciencias Agrícolas. Centro de Bioplantas,. DE. Universidad de Ciego de Ávila, Cuba. 100 p.. N. 9.- Michaux-Ferriere, N.; M.P. Carron 1989. Histology of early somatic embryogenesis in. IO. Hevea brasiliensis. The importance of the timing of subculturing. Plant Cell Tissue and. CC. Organ Culture. 19:157.. RE. 10.- Rivero, N. et al. 2008. Embriogénesis somática en Anthurium andraeanum Lind variedad. DI. Lambada.Ra Ximhai. 4 (1):135.. 11.- Piqueras, A. Y P. Debergh. 1999. Morphogenesis in micropropagacion. En Morphogenesis in plant tissue cultures. Ed Woong-Young Soh y Sant S Bhojwani. Kluwer Academia Publishers. Boston, USA, pp 443-462. 25. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..
(38) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 12.- Freshney, R.; G. Vunjak Novakovic. 2006. Culture of Cells for Tissue Engineering. WileyInterscienceScience.. N. http://datateca.unad.edu.co/contenidos/203024/Contenido_para_descarga_PDF_.pdf. IC. AC I. memorias. Bogotá. Universidad Nacional de Colombia.. Ó. 13.- Montoya, D.; L.A Sastoque. 2004. Biotecnología para no biotecnologos:. M UN. 14.- Doyle, A, J.B.Griffiths 1998. Cell and Tissue Culture: Laboratory Procedures in. CO. Biotechnology. New York. John Wiley and Sons.. 15.- Bejarano, F.; V. Harikrishan; J. Souza.; M.E. Rozas.; E. Nivia.; F. Ramírez.; M. Cárcamo; H.. Y. González. 2007. 2,4-D Razones para su prohibición mundial. RAP-AL. Cooperativa Tlatolli.. IC. A. 1era edición. México.. ÁT. 16.- González, M. et al. 2005. Influencia de la época del año en la respuesta in vitro del Cafeto. RM. Coffea canephora P. Var. Robusta. Revista Colombiana de Biotecnología Vol. VII No. 1 pp.. FO. 5-14.. IN. 17.- Portilla M., S. Eraso, C. Galé, I. García, J. Moler, y M. Blanca. 2006 Manual práctico del. DE. paquete estadístico SPSS para Windows (3ª edición revisada). Universidad Pública de Navarra: Navarra.. EM AS. 18.- Ruiz, B. 2000. Efecto de BAP y 2,4-D en la inducción de organogénesis indirecta in vitro de Anthurium andraeanum L. Proyecto especial del programa Ingeniero Agronomo, Zamorano,. ST. Honduras. 36p.. SI. 19.- Fehér, A.; T. Pasternak.; K. Otvös; P. Mis kolczi; D. Dudits. 2002 Induction of embryogenic. DE. competente in somatic plant cells: a review. Biology 57:5-12 20.- Kuehnle, R.; F. Chen; N. Sugii 1992 Somatic embryogenesis and plant regeneration in. IO. N. Anthurium andraeanum hybrids. Plant Cell Rep. 11:438-442. CC. 21.- Matos, A. 2007. Inducción de callo en plantas silvestres de Aloe vera “zábila” con diferentes. RE. combinaciones de 2,4-D, BA y Kinetina. Boletín del Centro de Investigaciones Biológicas. DI. Volumen 41, Nº. 4, 2007, PP. 503–516 Universidad del Zulia, Maracaibo, Venezuela.. 22.- Martinez, A.; A. Gutierrez. 2005. obtención de callos friables a apartir de hojas de la Morinda citrifolia. Bioproyecto, EAFIT. Medellin, p. 15.. 23.- Pedroza, J. et al. 2007. Micro propagación de Dodonea viscosa L. Jacq: Una especie en vías de extinción. Revista Colombiana de Biotecnología, Vol. IX Nº002. Pp. 33-44. 26 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..
(39) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 24.- García Leal, J. & A.M. Lara Porras, (1998). “Diseño Estadístico de Experimentos. Análisis de la Varianza.” Grupo Editorial Universitario.. N. 25.- Lara, A. 2000. “Diseño Estadístico de Experimentos, Análisis de la Varianza y Temas. Ó. Relacionados: Tratamiento Informático mediante SPSS” Proyecto Sur de Ediciones.. AC I. 26.- Jocobsen, H. 1983. Biochemical mechanisms of plant hormona activity. En: Handbook of. IC. plant Cell Culture. Vol.1.Ed. por D.A.Evans,W.R.Sharrp, P.V.Amirato,Y.Yamada.Collier. M UN. Macmillan Publisher.Londres.. 27.- Yeoman, M. y E. Forche, 1980.Cell proliferation and callus cultures. Internacional review of. CO. Cytology, Supplement 11A. 1-24p.. http://repositorio.utc.edu.ec/bitstream/27000/831/1/T-UTC-0602.pdf. A. L.). 25. de. IC. alba. Y. 28.- Cholo, M. y H. Delgado Rodríguez, Formación de callos en el cultivo de la morera (Morus. ÁT. noviembre 2013. RM. 29.- Khanna H.; S.K. Raina, 1998 Genotype x media culture interaction effects on regeneration response of three Indica rice cultivars. Plant Cell Tiss. Org. Cult. 52:145-153. FO. 30.- Krikorian, A. 1991.Medios de cultivo: generaliades, composicion y preparacion. En cultivo. IN. de tejidos en la agricultura. Ed. Por W. M. Roca y L.A.Mroginski. CIAT. Cali Pp 41-78.. DE. 31.- Flick C.E.; D.A. Evans, y W.R.sharp, 1983 Organogenesis. En: Handbook of Plamt cell. EM AS. Culture. Vol.1 por D.A.Evans,W.R.Sharrp, P.V.Amirato,Y.Yamada.Collier Macmillan Publisher.Londres. Pp. 13-81.. 32.- Puco A.; V.I. Venegas, 2010. Micropropagacion, formación y regeneración de callos en el. ST. cultivo del clavel (Dianthus caryophyllus L) var. Rojo español. Traba- jo de diploma. Centro. SI. de Estudios de Biotecnología Vegetal. Universidad de Granma. Bayamo Cuba.. DE. 33.- Martínez D.; R. Hernández, B.Restrepo,Estandarización de un protocolo para la obtención de. N. callos friables de Borojoa patinoi Cuatr. fase I Revista Colombiana de Biotecnología, vol. IX,. CC. IO. núm. 2, diciembre, 2007, pp. 45-55 34.- Lentner, M. And T.Bishop. 1986. Experimental design and analysis. Valley Book Company,. DI. RE. Blacksburg. 565 p.. 35.- Littell, R.; G.A. Milliken, W.W. Stroup y R.D. Wolfinger. 1996. SAS System for Mixed Models. SAS Institute. Cary, NC. 633 p.. 27 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..
(40) RM. ÁT. IC. A. Y. CO. M UN. IC. AC I. Ó. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI. ST. EM AS. DE. IN. FO. ANEXO. 28 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..
(41) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Anexo 1: Composición del medio nutritivo MS (Murashige y Skoog, 1962).. MG/L. Nitrato de amonio. NH4NO3. 1,650.00. Nitrato de potasio. KNO3. 1,900.00. Cloruro de calcio dihidratado. CaCl2.2H2O. 440.00. Cloruro de calcio (anhidro). CaCl2. Sulfato de magnesio heptahidratado. MgSO4.7H2O. Fosfato de potasio. KH2PO4. IC. M UN. 370.00 170.00. Y. CO. 332. MnSO4.H2O. Sulfato de Zinc. ZnSO4.7H2O. Ácido bórico. H3BO3. Yoduro de potasio. KI. 0.83 0.25. ÁT. RM. Na2MoO4.2 H2O. IN. Molibdato de sodio dohidratado Cloruro de cobalto hexahidratado. EM AS. COMPUESTOS ORGÁNICOS. Tiamina. DE. Ácido nicotínico. SI. ST. Glicina. CC. 16.9 8.60 6.20. CuSO4.5H2O. 0.02. CoCl2.6H2O. 0.02. C6H12O6. 100. NH2CH2COOH. 2. C12H17CIN4OS.HCl. 4. C6H5NO2. 1. C8H11NO3.CIH. 1. C12H22O11. 30 g/L. IO. N. Piridoxina Agar. DE. Sulfato de cobre pentahidratado. Sacarosa. IC. Sulfato de manganeso monohidratado. FO. A. MICRO ELEMENTOS. Myo-inositol. Ó. FÓRMULA. AC I. MACROELEMENTOS. N. SALES. 7 g/L. REGULADORES DEL CRECIMIENTO Cl2C6H3OCH2CO2H. 3. DI. RE. Ácido 2,4 diclorofenoxiacético(2,4-D). Componentes para un litro de medio de cultivo sólido Murashige & Skoog (MS)(1962).. 29 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..
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