Sensibilidad de Staphylococcus aureus y Pseudomonas aeruginosa frente a diferentes concentraciones del aceite esencial de Eucaliptus globulus

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(1)Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO. FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE MICROBIOLOGÍA. RM. ÁT. IC A. Y. CO. M. UN IC AC IÓ. N. Y PARASITOLOGÍA. IN FO. Sensibilidad de Staphylococcus aureus y Pseudomonas. SI ST. EM. AS. DE. aeruginosa frente a diferentes concentraciones del aceite esencial de Eucaliptus globulus.. TESIS. DE BIÓLOGO - MICROBIÓLOGO. DI R. EC CI. O. N. DE. PARA OBTENER EL TÍTULO PROFESIONAL. AUTOR: Br. SAGUMA MONTALVÁN GRACE FYORELLA ASESOR: Ms. C. VASQUEZ VALLES MARIA NELLY COASESOR: Ms. CASANOVA LUJÁN JUAN TRUJILLO – PERU 2014. i. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(2) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DIRECTIVOS DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO. UN IC AC IÓ. N. Dr. Orlando Velásquez Benites RECTOR. CO. M. Dra. Vilma Méndez Gil. ÁT. IC A. Y. VICERRECTORA ACADÉMICA. IN FO. RM. Dr. José Mostacero León DECANO DE LA FACULTAD DE CIENCIAS. EM. AS. DE. BIOLÓGICAS. SI ST. Dr. William Zelada Estraver. CIENCIAS BIOLÓGICAS. DI R. EC CI. O. N. DE. PROFESOR SECRETARIO DE LA FACULTAD DE. Dra. Bertha Soriano Bernilla DIRECTORA DE LA ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA ii. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(3) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. MIEMBROS DEL JURADO DICTAMINADOR Los suscritos, miembros del jurado, declaran que la presente tesis ha sido ejecutada en concordancia con las normas de la Escuela Académica Profesional de Microbiología y. Y. CO. _________________________. M. UN IC AC IÓ. N. Parasitología de la Universidad Nacional de Trujillo.. DE. IN FO. RM. ÁT. PRESIDENTE. IC A. Ms.C. Pedro Alvarado Salinas. AS. ________________________. SECRETARIO. DI R. EC CI. O. N. DE. SI ST. EM. Ms. C. Anibal Quintana Diaz. ____________________________ Ms.C. María Nelly Vásquez Valles. VOCAL. iii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(4) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. APROBACIÓN. Los profesores que suscriben, Miembros del Jurado Dictaminador, declaran. UN IC AC IÓ. N. que la presente tesis ha cumplido con los requisitos formales y. CO. M. fundamentales, siendo aprobada por UNANIMIDAD.. IC A. Y. _________________________. ÁT. Ms.C. Pedro Alvarado Salinas. AS. DE. IN FO. RM. PRESIDENTE. EM. ________________________. SECRETARIO. DI R. EC CI. O. N. DE. SI ST. Ms. C. Anibal Quintana Diaz. ____________________________ Ms.C. María Nelly Vásquez Valles. VOCAL. iv Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(5) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. CERTIFICACIÓN DEL ASESOR. UN IC AC IÓ. N. La que suscribe, Ms. C. Nelly Vásquez Valles, asesora de la tesis titulada:. “Sensibilidad de Staphylococcus aureus y Pseudomonas aeruginosa frente a diferentes. CO. M. concentraciones del aceite esencial de Eucaliptus globulus”.. IC A. Y. CERTIFICA:. RM. ÁT. Que la presente investigación ha sido desarrollada de acuerdo al reglamento. IN FO. establecido por la Facultad de Ciencias Biológicas de la Universidad Nacional de Trujillo, estando en conformidad con su correspondiente proyecto y que el informe ha. EM. AS. DE. sido redactado acogiendo las observaciones y sugerencias alcanzadas.. SI ST. Por lo tanto autorizo a la Bachiller GRACE FYORELLA SAGUMA MONTALVÁN,. DI R. EC CI. O. N. DE. continuar con el trámite del reglamento correspondiente.. Ms. C. Nelly Vásquez Valles ASESORA. v Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(6) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DEDICATORIA. siempre mí camino. A. mi. amada. UN IC AC IÓ. N. A DIOS, por iluminar y cuidar. madre. Liliana. M. Montalván, por su valentía y fortaleza,. CO. por enseñarme con el ejemplo que todo. y. optimismo;. por. su. ÁT. esfuerzo. IC A. Y. lo bueno en la vida, se consigue con. RM. comprensión y confianza en mí y por. DE. IN FO. ser mi modelo a seguir.. AS. A mis abuelitos Víctor Montalván y. EM. Priscila Miranda, por sus cuidados, amor,. SI ST. alegría e incondicionalidad para conmigo,. DE. porque me enseñaron con delicadeza los. N. valores de vida y lo maravilloso que es. DI R. EC CI. O. tener una familia unida.. A. mis. hermanas. Natalia. y. Geraldine por su compañía, amor y apoyo.. vi Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(7) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. UN IC AC IÓ. N. AGRADECIMIENTOS.  Agradezco de manera especial a mi asesora Ms. C. Nelly Vásquez Valles, por. M. brindarme su apoyo, dedicación, guía y orientación durante el desarrollo de la. IC A. Y. CO. presente investigación.. IN FO. RM. ÁT.  Al Ms.C. Juan Casanova por su apoyo en la ejecución de esta investigación.. DE.  Al Ing. Wilson Reyes por su apoyo en la extracción del aceite de Eucalyptus. SI ST. EM. AS. globulus.. DI R. EC CI. O. N. DE. A cada uno de ustedes, muchas gracias. vii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(8) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. PRESENTACIÓN. UN IC AC IÓ. N. SEÑORES MIEMBROS DEL JURADO DICTAMINADOR:. En cumplimiento con las disposiciones vigentes establecidas en el Reglamento de Grados y Títulos de la Escuela Académica Profesional de Microbiología y Parasitología. CO. M. de la Facultad de Ciencias Biológicas de la Universidad Nacional de Trujillo, someto a. Y. vuestra consideración y elevado criterio el presente informe de tesis titulada:. IC A. “Sensibilidad de Staphylococcus aureus y Pseudomonas aeruginosa frente a diferentes. IN FO. RM. el Título Profesional de Biólogo – Microbiólogo.. ÁT. concentraciones del aceite esencial de Eucaliptus globulus”, con el propósito de obtener. DE. Esperando que los miembros del jurado se sirvan calificar este trabajo según su. Trujillo, Abril del 2014. DI R. EC CI. O. N. DE. SI ST. EM. AS. criterio establecido, y a que el presente sea merecedor de vuestra aprobación.. Br. Grace Fyorella Saguma Montalván. viii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(9) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. CONTENIDO. UN IC AC IÓ. N. Directivos de la Universidad Nacional de Trujillo ........................................................... ii Miembros del Jurado Dictaminador ................................................................................ iii Aprobación .......................................................................................................................iv. CO. M. Certificación del Asesor .................................................................................................... v. IC A. Y. Dedicatoria .......................................................................................................................vi. ÁT. Agradecimiento .............................................................................................................. vii. IN FO. RM. Presentación ................................................................................................................... viii. DE. Contenido .........................................................................................................................ix. AS. RESUMEN .......................................................................................................................xi. SI ST. EM. ABSTRACT ................................................................................................................... xii INTRODUCCIÓN ............................................................................................................. 1. N. DE. MATERIAL Y MÉTODOS ............................................................................................ 11. EC CI. O. Material Biológico ........................................................................................................... 11. DI R. Método ............................................................................................................................. 11 A. Obtención del aceite esencial de Eucalyptus globulus ........................................ 11 1. Obtención de hojas de Eucalyptus globulus .................................................. 11 2. Extracción del aceite esencial de Eucalyptus globulus ................................. 11 2.1. Selección................................................................................................ 11 ix Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(10) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 2.2. Lavado ................................................................................................... 12 2.3. Cortado .................................................................................................. 12 2.4. Extracción del aceite por Arrastre con vapor de agua .......................... 12. UN IC AC IÓ. N. 2.5. Envasado................................................................................................ 13 2.6. Almacenamiento .................................................................................... 13 B. Estudio Físico del aceite esencial ........................................................................ 13. M. 1. Densidad ........................................................................................................ 13. CO. 2. Índice de Refracción ...................................................................................... 13. Y. C. Preparación de las diferentes concentraciones del aceite esencial ...................... 14. IC A. D. Preparación de los inóculos bacterianos .............................................................. 14. RM. ÁT. 3. Reactivación de los Cultivos bacterianos ...................................................... 14. IN FO. 4. Estandarización de los inóculos bacterianos ................................................. 14 E. Prueba de sensibilidad ......................................................................................... 15. DE. F. Lectura ................................................................................................................. 15. AS. G. Análisis de Datos ................................................................................................. 16. SI ST. EM. RESULTADOS ............................................................................................................... 17. DE. DISCUSIÓN .................................................................................................................... 21. O. N. CONCLUSIONES ........................................................................................................... 27. EC CI. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS ............................................................................ 28. DI R. ANEXOS ......................................................................................................................... 43. x Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(11) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. N. RESUMEN. UN IC AC IÓ. Se determinó la sensibilidad de Staphylococcus aureus y Pseudomonas aeruginosa frente a concentraciones de 25, 50, 75 y 100% del aceite esencial de Eucaliptus globulus, el cual se obtuvo a partir de las hojas de este, por el método. CO. M. de destilación por arrastre con vapor de agua. La sensibilidad de estos. Y. microorganismos se determinó por el método de difusión en agar, utilizando. IC A. Vancomicina y Ciprofloxacina como controles para Staphylococcus aureus y. ÁT. Pseudomonas aeruginosa respectivamente, realizando ensayos por triplicado y. RM. con cuatro repeticiones. Aunque todas las concentraciones tuvieron efecto. sensibilidad, estadísticamente. significativa. (p. <. 0.05),. a. las. DE. mayor. IN FO. inhibitorio en ambas bacterias; se determinó que Staphylococcus aureus presentó. AS. concentraciones de 75 y 100% del aceite esencial en relación a la Vancomicina,. EM. mientras que Pseudomonas aeruginosa frente a la concentración de 100% en. SI ST. relación a la Ciprofloxacina.. DE. Palabras clave: Sensibilidad bacteriana, aceite, Eucaliptus globulus, difusión en. DI R. EC CI. O. N. agar. Staphylococcus aureus y Pseudomonas aeruginosa.. xi Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(12) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. UN IC AC IÓ. N. ABSTRACT. It was determined the sensitivity of Staphylococcus aureus and Pseudomonas aeruginosa to concentrations of 25, 50, 75 and 100% of the essential oil of. M. Eucalyptus globulus, which was obtained from the leaves of this, by the. CO. method of distillation with water vapor. The sensitivity of these. IC A. Y. microorganisms was determined by the agar diffusion method, using. ÁT. Vancomycin and Ciprofloxacin as controls for Staphylococcus aureus and. RM. Pseudomonas aeruginosa, respectively, performing triplicate assays with four. IN FO. replications. Although all concentrations had an inhibitory effect on both bacteria; Staphylococcus aureus was determined which had a higher. DE. sensitivity, statistically significant (p <0.05) at concentrations of 75 and 100%. AS. of the essential oil in relation to Vancomycin, whereas Pseudomonas. SI ST. EM. aeruginosa against concentration of 100% in relation to Ciprofloxacin.. DE. Keywords: Bacterial sensitivity, oil, Eucalyptus globulus, agar diffusion,. DI R. EC CI. O. N. Staphylococcus aureus and Pseudomonas aeruginosa.. xii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(13) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. INTRODUCCIÓN Actualmente la propagación de los microbios patógenos no sensibles a drogas. enfermedades infecciosas. UN IC AC IÓ. N. es una de las amenazas más graves para el éxito del tratamiento de las debido al uso inadecuado o generalizado de. antibióticos1, esta falta de sensibilidad consiste en que los microorganismos. M. crean mecanismos de defensa frente a los antibióticos, con la consiguiente. CO. pérdida de acción de estos medicamentos. De allí que con el discurrir del tiempo. IC A. Y. se incrementó el interés en el uso de compuestos orgánicos biológicamente. ÁT. activos, extraídos de especies de plantas que presentan la capacidad de eliminar. RM. a microorganismos patógenos por sí mismos2.. IN FO. Las plantas presentan dentro de su proceso de síntesis dos rutas metabólicas, una. DE. donde sintetizan los metabolitos primarios que son necesarios para el desarrollo. AS. de la propia planta y otra ruta metabólica donde se sintetizan en específico un. EM. metabolito secundario en función de la genética de cada especie, en mayor o. SI ST. menor proporción2. Entre los metabolitos secundarios importantes relacionados con los mecanismos de defensa, destacan los flavonoides, fenoles, terpenos,. N. DE. alcaloides, lecitinas, polipéptidos y aceites esenciales3.. EC CI. O. Los aceites esenciales provienen del metabolismo secundario de las plantas. DI R. superiores4 Se caracterizan por ser una mezcla compleja de varios compuestos de volátiles: hidrocarburos (terpénicos), alcoholes, aldehídos, cetonas, ésteres, éteres y fenoles. Son líquidos de consistencia aceitosa, aromáticos, que son obtenidos de flores, brotes, semillas, hojas, corteza, hierbas, madera, frutas y raíces3.. 1 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(14) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. En la actualidad se conocen más de 3000 aceites esenciales en todo el mundo de los cuales aproximadamente 300 son comercialmente importantes y son destinados principalmente al mercado de. fragancias, saborizantes y. UN IC AC IÓ. N. farmacéutica5. Algunos aceites esenciales poseen propiedades bien definidas. como agentes antimicrobianos y antioxidantes6. Obteniéndose de la canela (cimaldehido)2, clavo (eugenol)7, orégano (carvacrol)8, tomillo (timol)9 y. CO. M. eucalipto (1,8-cineol o eucaliptol)10 entre otros.. Y. Los componentes mayoritarios de los aceites pueden constituir hasta un 85% del. IC A. total mientras que la concentración del componente con actividad antimicrobiana. RM. ÁT. puede ser muy variable11. Los aceites esenciales pueden extraerse mediante. IN FO. varios métodos: destilación con vapor de agua, extracción con solventes volátiles, enflorado y con fluidos supercríticos12.. DE. El eucalipto, miembro de la familia Myrtaceae13 es un árbol alto de hoja. AS. perenne, nativo de Australia y Tasmania, introducido con éxito en todo el. SI ST. EM. mundo, ahora plantado extensivamente en muchos otros países14. En el Perú fue introducido en los valles interandinos de la sierra peruana entre los años 1860 –. DE. 1870, desde allí el ritmo de las plantaciones de eucalipto ha crecido en los especie forestal con un enorme potencial en la. O. N. últimos años, siendo una. EC CI. actualidad15. El eucalipto tiene glándulas que segregan aceites esenciales en sus. DI R. hojas, los cuales producen su característico olor y poseen componentes que pueden ser diferenciados en productos químicos de valor industrial12. Más de 300 especies de este género contienen aceites volátiles en sus hojas pero menos de 20 especies son conocidas por su alto contenido de 1,8-cineol, las cuales son usadas comercialmente para la producción de aceites esenciales en las 2. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(15) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. industrias farmacéutica y cosmética16.En la farmacopea internacional el aceite esencial de Eucalipto es obtenido principalmente de la especie Eucalyptus. N. globulus17.. encuentran. en. aplicaciones. como. UN IC AC IÓ. Los aceites esenciales tienen gran demanda en el mercado17 ya que se anestésico,. antiséptico,. astringente,. desodorante, diaforético, desinfectante, expectorante, febrífugo, fumigante,. CO. M. repelente de insectos, rubefaciente, sedante pero estimulante, vermífugo, un. Y. remedio popular para los abscesos, artritis, asma, forúnculos, bronquitis,. IC A. quemaduras, diarrea, la disentería, la encefalitis, la enteritis, la erisipela, fiebre,. ÁT. gripe, inflamación, laringalgia, laringitis, mastitis, miasma, faringitis, tisis,. IN FO. RM. rinitis, dolores, dolor de garganta, espasmos y heridas18 también su demanda es alta en la fabricación de jabón17.. DE. En la medicina popular de Túnez, la inhalación del aceite esencial de Eucalyptus. EM. AS. se ha utilizado tradicionalmente para el tratamiento de trastornos del tracto tales. como. faringitis,. bronquitis,. sinusitis19.. La. acción. SI ST. respiratorio. antimicrobiana del aceite esencial es generalmente más activa en bacterias Gram. DE. positivas que en Gram negativas.. EC CI. O. N. Staphylococcus aureus y Pseudomonas aeruginosa son dos patógenos. DI R. oportunistas que causan infecciones graves y potencialmente mortales en pacientes inmunocomprometidos20. S. aureus es un microorganismo Gram positivo,. principal responsable de la infección postoperatoria de heridas,. síndrome de choque tóxico y la intoxicación alimentaria21 S. aureus enterotoxigénico produce toxina estafilocócica, ésta enterotoxina es causa de intoxicaciones alimentarias por la ingesta de productos contaminados, 3 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(16) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. generalmente de origen cárnico y lácteo22. P. aeruginosa es una bacteria Gram negativa, aeróbica, comúnmente invasiva y toxigénica, patógeno oportunista en humanos, representa un problema importante de salud en centros hospitalarios,. UN IC AC IÓ. N. especialmente cuando se trata de pacientes con cáncer23 o quemados24. Una vez que se establece la infección, P. aeruginosa produce una serie de compuestos tóxicos que causan no sólo daño tisular extenso, sino adicionalmente interfieren . Entre las proteínas que. M. 26. CO. con el funcionamiento del sistema inmune25,. Y. intervienen en la infección de P. aeruginosa se encuentran toxinas, como las. IC A. exotoxinas A y S, así como enzimas hidrolíticas que degradan las membranas y. ÁT. el tejido conjuntivo de diversos órganos25, 26. Esta situación se ve agravada por la. RM. dificultad para tratar las infecciones por P. aeruginosa, ya que esta bacteria. y es responsable de infecciones nosocomiales en los. inmunocomprometidos29.. Asimismo, P.. aeruginosa presenta. AS. huéspedes. 28. DE. desinfectantes27,. IN FO. presenta una muy alta resistencia natural a distintos antibióticos y a. EM. problemas en la industria alimentaria ya que puede descomponer los alimentos. SI ST. que se mantienen en refrigeración al mantener un metabolismo basal en estas. DE. condiciones y producir enzimas hidrolíticas30.. N. Muchos pacientes tienen susceptibilidad a infecciones por P. aeruginosa,. EC CI. O. incluyendo aquellos con enfermedades pulmonares crónicas como la fibrosis. DI R. quística (FQ)31, bronquiectasias y enfermedad pulmonar obstructiva crónica32;. pacientes inmunocomprometidos con SIDA, pacientes de quimioterapia del cáncer, médula ósea o trasplante de pulmón; incluso aquellos pacientes que usan catéteres33-35. Varios estudios han documentado el aumento de las tasas de insensibilidad de S. aureus y P. aeruginosa a los antibióticos14, 36-38.. 4 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(17) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. El interés científico en este campo se ha expandido con la finalidad de demostrar la acción antimicrobiana de algunos aceites, por mencionar, la eficacia del aceite esencial de Eucalyptus globulus como antifúngico contra Trichophyton rubrum,. Candida albicans18,. 39-41. UN IC AC IÓ. N. Trichophyton soudanense, Microsporum canis, Scopulariopsis brevicaulis, y contra otros hongos fitopatógenos42,. frente a Plasmodium falciparum44; antihelmíntico. 43. .Antiparásito. contra Pheretima. CO. M. posthumag45. Insecticida y repelente46; como larvicida y pupicida contra Musca. Y. domestica47, 48, Anopheles49, Aedes aegipti50, acaricida51, contra piojos52.. IC A. En investigaciones realizadas con la finalidad de comprobar la actividad. ÁT. antibacteriana de algunos aceites contra Helicobacter pylori utilizaron el aceite 54. , los resultados de. IN FO. RM. de E. globulus en sinergismo con Thymus vulgaris53,. aquellas investigaciones revelaron el efecto antibacteriano de E. globulus y T.. DE. vulgaris sobre H. pylori, esta bacteria también presentó sensibilidad frente a los. AS. aceites esenciales de Smyrnium olusatrum “apio”55, Chenopodium ambrosioides. SI ST. EM. “paico”, Lippia alba “pronto alivio” y Azadirachta indica “lila india” 56. La actividad antibacteriana del aceite esencial de E. globulus quedó comprobada. DE. frente a Staphylococcus aureus54 aislado de pacientes con infecciones de piel y. O. N. tejidos blandos; frente a Enterococcus faecium resistente a Vancomicina57 frente. EC CI. a B. subtilis, E.coli y S. aureus51,57-59. Cermelli, en su estudio determinó el efecto. DI R. antibacteriano para 20 aislamientos de Streptococcus pneumoniae, 40 aislamientos de Haemophilus influenzae, 30 aislamientos de H. parainfluenzae, 10 aislados de Klebsiella pneumoniae y 10 aislamientos de Stenotrophomonas maltophilla, resultando que H. inflzuenzae, H. parainfluenzae y S. maltophilia fueron los más susceptibles, seguido por S. pneumoniae39, 58. 5. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(18) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. En otras investigaciones se comprobó la actividad antimicrobiana del aceite de E. globulus obtenido del Nor este de Tunez contra K. pneumoniae, P. aeruginosa, S. aureus , Streptococcus agalactiae , Streptococcus pneumoniae y. UN IC AC IÓ. N. Streptococcus pyogenes18, 59, contra Pseudomona flurescens60 en este estudio se demostró que el uso de aceites esenciales en la fase de vapor es más ventajosa que la fase líquida; además, el efecto antibacteriano de los vapores de aceites. CO. M. esenciales puede ser mejorada significativamente por la adición de iones. Y. negativos del aire; y en una de las últimas investigaciones realizada en Asia se. IC A. demostró la actividad antibacteriana del aceite esencial de E. globulus al 25, 50,. RM. ÁT. 75 y 100% frente a E. coli y S. aureus61.. IN FO. El aceite esencial de E. globulus también presenta actividad antioxidante, tal como lo indican investigaciones realizadas por un grupo de científicos entre las. DE. que destacan la investigación realizada por Ahlem, pues demostró que la. AS. administración oral del aceite reduce el estrés oxidativo62; Amakura encontró un. EM. nuevo galotanino en el extracto de la hoja de E. globulus y concluye que puede. SI ST. ser usado como antioxidante natural y aditivo alimentario63; Pastene detectó un. DE. componente antioxidante en el aceite de eucalipto64; Tyagi investigó la actividad. N. antibacteriana de aceite esencial (en líquido, así como en fase de vapor) y los. EC CI. O. iones negativos del aire demostró que el uso de aceites esenciales en la fase de. DI R. vapor es más ventajosa que la fase líquida y que el efecto antibacteriano de los vapores de los aceites puede ser mejorada significativamente por la adición de iones negativos del aire60 ofreciendo un enfoque novedoso y eficiente para el. control de la contaminación bacteriana que podría ser aplicado para las prácticas de estabilización de alimentos; Aaza demostró su actividad antioxidante y. 6 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(19) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. antiacetilcolinesterasa65 y Manccioni demostró la actividad conservante en cosméticos, entre otros66.. N. La problemática de la pérdida de sensibilidad de algunas bacterias frente a. UN IC AC IÓ. antibióticos sintéticos debido a la síntesis, producción y uso irracional de estos,. en los últimos 50 años se ha incrementado, esto está confirmado por el boletín informativo emitido por la Organización Mundial de la Salud67 donde alertó y. CO. M. formuló: “La naturaleza global de la pérdida de sensibilidad antimicrobiana. Y. necesita una respuesta global”. Y en un informe de vigilancia por el Centro. IC A. Europeo de Prevención y Control de Enfermedades, sobre las tendencias de. RM. ÁT. insensibilidad de los siete principales patógenos bacterianos de importancia para. IN FO. la salud humana, S. aureus y P. aeruginosa se detallan con particular interés debido a su ubicuidad y la tolerancia intrínseca a muchos antibióticos68.. DE. Además las enfermedades transmitidas por Alimentos ETAs son causadas por. EM. AS. microorganismos, estas enfermedades pueden tener gran impacto social por. SI ST. tener consecuencias directas sobre la salud de los individuos, sobre el sistema de salud y sistema económico69. Hay dos categorías de ETAs: las intoxicaciones. DE. alimentarias, causadas por toxinas producidas por microorganismos y las. O. N. infecciones alimentarias causadas por el crecimiento de los microorganismos en. DI R. EC CI. el cuerpo humano, después de haber ingerido alimentos contaminados69. Debido a su ubicuidad S. aureus está presente en piel de animales y personas, además de en sus fosas nasales y gargantas21, 69; P. aeruginosa puede aislarse de muestras de suelo, aguas pristinas y contaminadas, así como de plantas y animales69.Ambos son de amplia distribución y. llegan con facilidad a los. alimentos y extiende una eventual contaminación, sus efectos son agudos y 7 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(20) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. aparatosos pero remiten de forma rápida. Los manipuladores de alimentos pueden favorecer su rápida extensión tal como lo indica un estudio realizado por. N. el Instituto Nacional de Colombia70.. UN IC AC IÓ. De allí que uno de los principales problemas de los procesadores de alimentos a través de los años, ha sido la conservación de los mismos. Actualmente los consumidores demandan productos naturales porque relacionan los compuestos. CO. M. químicos con alergias y enfermedades diversas. Con base en esto, ha aumentado. Y. el interés en la búsqueda de nuevas formas para la conservación de los alimentos. IC A. en base a productos naturales en lugar de conservadores sintéticos7, 63, ya que. RM. ÁT. actuales estudios revelan los problemas de salud asociados con la acumulación. IN FO. de radicales libres en el organismo, así como la utilización de antioxidantes sintéticos en productos alimentarios71-73.. DE. En tal sentido, lograr que la población disponga de alimentos rigurosamente. EM. AS. libres de patógenos o contaminantes, es un propósito de muchos investigadores,. SI ST. además hace un bien a la Salud Pública y teniendo en cuenta que los informes señalan una problemática mundial que implica una respuesta inmediata por la. DE. comunidad científica, se exige el uso alternativo de antimicrobianos de origen. O. N. natural y vegetal como los aceites esenciales que en los sistemas productivos es. EC CI. una alternativa viable, alto rendimiento, pureza del aceite obtenido, de fácil. DI R. extracción porque no requiere tecnología sofisticada12 permite la explotación de recursos naturales, abundantes y renovables, no contamina el ambiente, buen antioxidante62, no genera disminución de la sensibilidad bacteriana, y no requiere elevadas concentraciones. Además E. globulus desde que fue introducido en el país, ha logrado aclimatarse 8. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(21) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. perfectamente a las condiciones edáficas y medioambientales de la sierra, costa e incluso la selva alta, y aquí en la región. La Libertad pese a que en su. Silvicultura no se ha utilizado las técnicas más apropiadas de propagación, el. UN IC AC IÓ. N. ritmo de las plantaciones de eucalipto ha crecido en los últimos años, incluso se. han establecido plantaciones sin definir el uso final o específico, por lo que constituye una. especie forestal con un enorme potencial en la actualidad,. CO. M. recurso renovable, importante para la actividad económica del país pero sobre. Y. todo que debe ser aprovechado en beneficio de los habitantes de este distrito de. ÁT. ya mencionadas de E. globulus como. RM. Y según las investigaciones. IC A. Tayabamba, para su desarrollo y crecimiento económico.. IN FO. antimicrobiano, indujo suponer que el aceite esencial de E. globulus inhibe el crecimiento de bacterias de allí que la investigación estuvo orientada a la. DE. determinación de la Sensibilidad de Staphylococcus aureus y Pseudomonas. AS. aeruginosa frente a concentraciones de 25, 50, 75 y 100% del aceite esencial. SI ST. EM. de Eucaliptus globulus.. N. DE. La presente investigación tuvo como objetivos:. EC CI. O. Objetivo General:. DI R.  Determinar la sensibilidad de Staphylococcus aureus y Pseudomonas aeruginosa frente a las diferentes concentraciones del aceite esencial de Eucalyptus globulus.. 9 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(22) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Objetivos específicos:  Determinar que concentración del aceite esencial de Eucalyptus. contra Staphylococcus aureus.. UN IC AC IÓ. N. globulus es significativamente más eficaz en relación a la Vancomicina,.  Determinar que concentración del aceite esencial de Eucalyptus significativamente. más. eficaz. en. relación. M. es. a. la. CO. globulus. IC A. Y. Ciprofloxacina, contra Pseudomonas aeruginosa.. ÁT.  Determinar cuál de las bacterias empleadas (Staphylococcus aureus y. RM. Pseudomonas aeruginosa) es significativamente más sensible frente al. DI R. EC CI. O. N. DE. SI ST. EM. AS. DE. IN FO. aceite esencial de Eucalyptus globulus.. 10 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(23) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. MATERIAL Y MÉTODOS. . Cultivo. UN IC AC IÓ. N. MATERIAL BIÓLOGICO. de Staphylococcus aureus y Pseudomonas aeruginosa. proporcionado. por. el. Laboratorio. Referencial. de. Trujillo,. IC A. Aceite esencial de Eucaliptus globulus.. RM. ÁT. . Y. CO. M. Departamento de La Libertad, en el mes de Julio del 2013.. IN FO. PROCEDIMIENTO. AS. DE. A. Obtención del aceite esencial de Eucalyptus globulus.. EM. 1. Obtención de hojas de Eucalyptus globulus.. SI ST. Se recolectó 8 Kg de. hojas de eucalipto del distrito de. DE. Tayabamba, provincia de Pataz y se colocó en cajas de cartón para. DI R. EC CI. O. N. su transporte al laboratorio de Química Física de la Facultad de Ingeniería Química de la Universidad Nacional de Trujillo.. 2. Extracción del aceite esencial de Eucalyptus globulus.. 2.1. Selección Se seleccionaron hojas de eucalipto sin presencia de. 11 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(24) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. magulladuras, cortes o demás lesiones.. 2.2. Lavado. UN IC AC IÓ. N. Se realizó con agua corriente, con el propósito de eliminar. restos de partículas extrañas, suciedad y restos de tierra que pudieran. haber. estado. adheridos. a. las. hojas. y. Y. CO. M. posteriormente se enjuagó con agua destilada.. IC A. 2.3. Cortado. ÁT. El corte se realizó de forma manual y en cuadrados de 1cm. RM. de lado aproximadamente12 para aumentar el área de. DE. IN FO. contacto con el vapor de agua.. AS. 2.4. Extracción del aceite por Arrastre con vapor de agua. mediante el proceso de. EM. El aceite esencial se obtuvo. SI ST. destilación utilizando un equipo de extracción por arrastre. Se colocó 200g de hojas cortadas de E. globulus en un balón de destilación de 3 bocas esmerilado de 1000 mL de. DI R. EC CI. O. N. DE. con vapor12 (Anexo 2).. capacidad el cual se conectó a otro balón de 1000 mL de capacidad en el que se generó el vapor de agua que luego circuló a través de la muestra. El vapor que entró en contacto con las hojas arrastró el aceite esencial que luego fue depositado en el embudo de separación el cual permitió la separación del aceite obtenido. 12. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(25) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. El tiempo de extracción fue de 115 min aproximadamente, contándose desde el instante en el que cayó la primera gota. UN IC AC IÓ. N. en el embudo de separación12.. 2.5. Envasado. El aceite colectado se guardó en frascos de color ambar.. CO. M. Debido a que son inestables fotoquímicamente. Luego se. IC A. Y. deshidrató con Carbonato de sodio anhidro (Na2CO3).. ÁT. 2.6. Almacenamiento. RM. Se conservó en refrigeración a 4°C hasta el momento de su. DE. IN FO. uso.. EM. AS. B. Estudio Físico del aceite esencial. SI ST. Constantes Físicas:. Se utilizó un densímetro digital Densymeter DMA 35 – Aton Paar de fácil uso, gran precisión y confiabilidad. Este densímetro midió la densidad y temperatura de la muestra; (0.9 g/ml a 20°C). DI R. EC CI. O. N. DE.  Densidad:.  Índice de Refracción: Mediante refractómetro de círculo Carl Zeis se obtuvo el valor del índice de refracción: 1.469 13 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(26) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. C. Preparación de las diferentes concentraciones de aceite esencial El aceite puro obtenido fue considerado como tratamiento al 100%, a. UN IC AC IÓ. N. partir del cual se realizó diluciones para obtener las concentraciones de 25, 50, 75 y 100% de aceite de E. globulus; utilizando como solvente etanol absoluto, pues no afecta el crecimiento bacteriano61.. CO. M. Se tuvo en cuenta que las nuevas concentraciones de aceite no se. IC A. Y. expusieran a la luz51.. RM. ÁT. D. Preparación de los inóculos bacterianos. IN FO. 1. Reactivación de los Cultivo bacterianos. DE. Cada cultivo bacteriano fue reactivado en Caldo Infusión Cerebro-. AS. Corazón (BHI) por 18 horas a 37 °C. Luego sembrados en agar con la. EM. nutritivo e incubados durante 18 – 24 horas a 37°C,. SI ST. finalidad de obtener colonias aisladas74, 75.. Las colonias de S. aureus y P. aeruginosa fueron suspendidas en. DI R. EC CI. O. N. DE. 2. Estandarización de los inóculos bacterianos. Solución Salina Fisiológica (SSF) estéril hasta lograr una turbidez equivalente al patrón 0,5 de la escala de Mc Farland obteniéndose así una suspensión de 1.5x108 UFC/ml. Se realizó el recuento en placa mediante la siembra en superficie de las suspensiones, para comprobar las concentraciones bacterianas76.. 14 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(27) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. E. Prueba de sensibilidad La actividad antibacteriana del aceite de eucalipto se determinó. UN IC AC IÓ. N. siguiendo el método de difusión en agar. Se sirvió 25mL de agar Müller-Hinton en placas Petri con la finalidad de lograr un grosor de 4mm. de agar, luego para evitar exceso de humedad sobre la. CO. M. superficie, se las colocó entreabiertas en la estufa.. Y. Dentro de los 15 minutos siguientes al ajuste de la turbidez del. IC A. inóculo, se agregó sobre el agar 0.1ml de suspensión bacteriana y con. ÁT. la ayuda del asa de Drigalski se sembró de forma uniforme y se dejó. RM. reposar por unos 15 min77. Luego se formó hoyos de 4mm de. IN FO. diámetro por 4mm de profundidad en el agar.. DE. Se agregó 50ul de aceite esencial a concentraciones de 25, 50, 75 y. AS. 100% en los hoyos respectivos.. EM. Se evaluaron placas control, utilizando antibióticos Vancomicina y. SI ST. Ciprofloxacina, como controles positivos para S. aureus y P. aeruginosa respectivamente75 y como control negativo se utilizó el. preparación de las concentraciones de aceite, no afectan el crecimiento de las bacterias en estudio. Luego se incubó a 37°C por 18 a 24 horas78.. DI R. EC CI. O. N. DE. etanol, para verificar que al usar etanol como solvente en la. F. Lectura Cumplido el tiempo de incubación se observó la presencia de halos de inhibición de crecimiento bacteriano los cuales se midieron para 15 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(28) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. posteriormente ser comparados77. El experimento se realizó por. N. triplicado y 4 repeticiones.. UN IC AC IÓ. G. Análisis de Datos. Los datos obtenidos fueron sometidos a al test de KolmogorovSmirnov para determinar la distribución. normal de los valores. CO. M. (Normal: p>0.05 y No Normal: p<0.05). Como los valores siguieron. Y. una distribución normal fueron analizados con la prueba de Anova,. IC A. para determinar diferencia significativa entre tratamientos, luego se. ÁT. aplicó prueba de comparaciones múltiples paramétrica de Tukey con. RM. un intervalo de confianza del 95% para determinar diferencia. IN FO. significativa entre concentraciones de aceite y entre cultivos de. DE. bacterias la prueba Anova; para lo cual se utilizó el programa. DI R. EC CI. O. N. DE. SI ST. EM. AS. estadístico SPSS Statistics 20.0, Microsoft Office Excel 2013.. 16 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(29) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. RESULTADOS. UN IC AC IÓ. N. En la figura 1 se presentan los halos de sensibilidad (mm) de Staphylococcus aureus por la acción de diferentes concentraciones (25, 50, 75 y 100%) del aceite de Eucalyptus globulus y del grupo control “Vancomicina”, se observa la de. diferencia. significativa. entre. estos. grupos,. siendo. la. M. existencia. CO. concentraciones de 75 y 100% del aceite, las de mayor efecto en relación a la. IC A. Y. Vancomicina (p < 0.05).. ÁT. En la figura 2 se presentan los halos de sensibilidad (mm) de Pseudomonas. RM. aeruginosa por la acción de diferentes concentraciones (25, 50, 75 y 100%) del. IN FO. aceite de Eucalyptus globulus y del grupo control “Ciprofloxacina”, se observa la. DE. existencia de diferencia significativa entre estos grupos, siendo la concentración. AS. 100% del aceite, la de mayor efecto en relación a la Ciprofloxacina (p < 0.05).. EM. En la figura 3 se presenta la comparación de halos de sensibilidad (mm) entre. SI ST. Staphylococcus aureus y Pseudomonas aeruginosa a concentraciones (25, 50, 75. DE. y 100%) del aceite de Eucalyptus globulus, observándose que existe diferencia. DI R. EC CI. O. N. significativa entre ambas especies, con un p < 0.05 a todas las concentraciones.. 17 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(30) N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. CI Ó IC A CO. M UN. 25. 25%. Y. 20. A. 50%. ÁT IC. 15. 75%. d. RM. c. FO. 10 b. Vancomicina. e. Etanol. IN. a. 100%. DE. 5. AS. Sensibilidad(mm) de Staphylococcus aureus. 30. 25%. ST EM. 0 50%. 75%. f 100%. Vancomicina. Etanol. SI. Concentraciones del aceite esencial de Eucalyptus globulus. IO. N. DE. Letras diferentes presentan diferencia significativa entre grupos (p < 0.05). CC. Fig. 1. Sensibilidad (mm) de Staphylococcus aureus frente a diferentes concentraciones (25, 50, 75 y 100%) del aceite de. DI. RE. Eucalyptus globulus y de los grupos control “Vancomicina y etanol”.. 18 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(31) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. CI Ó M UN. IC A. 25. CO. 20. Y. 25% 50%. A. 15. ÁT IC. 75%. d. c. Ciprofloxacina Etanol. FO. b. a. IN. 5. 100%. c. RM. 10. DE. Sensibilidad (mm) de Pseudomonas aeruginosa. N. 30. 50%. 75%. e 100%. Ciprofloxacina. Etanol. ST EM. 25%. AS. 0. SI. Concentración del aceite esencial de Eucalyptus globulus. IO. N. DE. Letras diferentes presentan diferencia significativa entre grupos (p < 0.05). CC. Fig. 2. Sensibilidad (mm) de Pseudomonas aeruginosa frente a diferentes concentraciones (25, 50, 75 y 100%) del aceite. DI. RE. de Eucalyptus globulus y de los grupos control “Ciprofloxacina y etanol”.. 19 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(32) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. CI Ó M UN. IC A. 25. CO. 20. 10 b. a. b. b. RM. a b. 5. a. ÁT IC. a. A. Y. 15. IN. FO. Halo de inhibición de crecimineto (mm). N. 30. DE. 0. 50%. 75%. 100%. AS. 25%. ST EM. Aceite de Eucalyptus globulus. Pseudomonas aeruginosa. SI. Staphylococcus aureus. IO. N. DE. Letras diferentes presentan diferencia significativa entre grupos (p < 0.05). CC. Fig. 3. Comparación de la sensibilidad (mm) entre Staphylococcus aureus y Pseudomonas aeruginosa frente a. DI. RE. concentraciones (25, 50, 75 y 100%) del aceite de Eucalyptus globulus.. 20 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(33) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DISCUSIÓN Con la finalidad de buscar alternativas naturales para el control de bacterias. UN IC AC IÓ. N. patógenas las investigaciones actuales se han orientado a evaluar la actividad. antimicrobiana de los aceites esenciales de diferentes plantas, los resultados de aquellas investigaciones han sido favorables, tal es el caso del aceite esencial de 53-56, 61. , fungicida39-43,. M. Eucalyptus globulus cuya actividad antibacteriana18,. 48. acaricida51, a. IC A. Y. sido comprobada frente a diferentes especies patógenas.. CO. antihemíntico45, insecticida y repelente46, larvicida, pupicida47,. ÁT. En esta investigación se evaluó la sensibilidad de dos especies bacterianas. RM. patógenos oportunistas, que por su amplia distribución y ubicuidad son agentes. IN FO. causantes de enfermedades, Staphylococcus aureus y Pseudomonas aeruginosa,. DE. frente a diferentes concentraciones del aceite esencial de Eucalyptus globulus.. AS. Los resultados en esta investigación, revelan que S. aureus y P. aeruginosa. EM. presentan sensibilidad estadísticamente significativa (p < 0.05) frente al aceite. SI ST. esencial de E. globulus, es decir el aceite presenta actividad antibacteriana por lo. DE. tanto inhibe el crecimiento de ambas bacterias, el grado de sensibilidad depende. O. N. de la concentración usada del aceite esencial.. EC CI. En la Fig. 1, se observa que S. aureus es sensible frente a las concentraciones de. DI R. 25 y 50% del aceite de E. globulus, pues se observa la formación de halos de sensibilidad de 14.0 y 16.5mm respectivamente; pero el diámetro de estos halos, es menor en comparación con el halo de sensibilidad formado por el antibiótico Vancomicina (control) que fue de 17.4 mm, aunque producen sensibilidad en la bacteria, no son concentraciones eficaces. 21. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(34) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. El halo de sensibilidad formado por la concentración de 75% del aceite, fue de 23 mm, respecto al halo de sensibilidad formado por Vancomicina que fue de 17 mm; presenta P < 0.05, esto se interpreta que el halo de sensibilidad formado el. UN IC AC IÓ. N. aceite al 75% es significativamente mayor al formado por el control. Siendo esta concentración eficazmente sensible para S. aureus. El mismo resultado presentó la. concentración de 100%, pues el diámetro del halo formado fue de 26 mm, siendo. CO. M. mucho mayor con respecto a su control, por lo que resultó con p < 0.05, lo cual. Y. indica la existencia de diferencia significativa entre el halo de sensibilidad. IC A. formado por el aceite al 100% y el formado por Vancomicina. Siendo esta. RM. ÁT. concentración eficazmente sensible para S. aureus.. IN FO. La mayor zona de inhibición de S. aureus se obtuvo con la concentración de 100% de aceite esencial de E. globulus y el más bajo con la concentración de 25% del. DE. aceite.. EM. AS. Una inhibición más significativa se observó con una concentración de aceite. SI ST. esencial más alta. A concentraciones bajas, se observó un efecto inhibidor muy limitado en el crecimiento de microorganismos, en comparación con los controles.. DE. Este resultado permite asegurar que S. aureus es significativamente más sensible a. O. N. las concentraciones de 75 y 100% del aceite esencial de E. globulus que al. DI R. EC CI. antibiótico Vancomicina. En la Fig. 2, P. aeruginosa presenta menor sensibilidad frente al aceite de E. globulus, para las concentraciones de 25 y 50%, pues los halos formados 11.0 y 17.0 mm respectivamente; presentan menor diámetro, en comparación con el halo de sensibilidad formado por el antibiótico Ciprofloxacina (control) que fue de. 22 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(35) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 20.6mm, aunque producen sensibilidad en la bacteria, no son concentraciones eficaces en relación al antibiótico.. N. El halo de sensibilidad formado por la concentración de 75% del aceite respecto. UN IC AC IÓ. al halo de sensibilidad formado por Ciprofloxacina que presenta P > 0.05, esto se interpreta que el halo de sensibilidad formado el aceite al 75% no es significativamente mayor al formado por el control. Por lo cual, esta. CO. M. concentración no es eficazmente sensible para P. aeruginosa. Sin embargo la. Y. concentración de 100%, formó diámetro de 25.4mm, mucho mayor con respecto a. IC A. su control (20.6mm), por lo que resultó con p < 0.05, lo cual indica la existencia. RM. ÁT. de diferencia significativa entre el halo de sensibilidad formado el aceite al 100%. sensible para P. aeruginosa.. IN FO. y el formado por la Ciprofloxacina. Siendo esta concentración eficazmente. DE. La mayor zona de inhibición de P. aeruginosa se obtuvo con la concentración de. aceite.. Este. resultado. permite. asegurar. que. P.. aeruginosa. es. SI ST. del. EM. AS. 100% de aceite esencial de E. globulus y el más bajo con la concentración de 25%. significativamente más sensible a la concentración de 100% del aceite esencial. N. DE. de E. globulus que al antibiótico Ciprofloxacina.. EC CI. O. En la Fig. 3, se compara los promedios de los halos de sensibilidad de S. aureus y. DI R. P.aeruginosa frente a cada concentración (25, 50, 75 y 100%) del aceite esencial de E. globulus, existiendo diferencia significativa entre ambas bacterias, es decir una de las bacterias presenta mayor sensibilidad frente al aceite esencial, resultando que S. aureus es más sensible al aceite concentraciones de 25, 75 y 100%. de E. globulus. a las. pero P. aeruginosa,. presenta mayor. sensibilidad frente a la concentración de 50% . 23 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(36) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Los resultados obtenidos de esta investigación son similares a los mostrados por otros trabajos con respecto a la actividad antimicrobiana de aceite esencial de E. globulus. Bachir R en su investigación encontró que el aceite esencial de E.. N. frente S. aureus pero solo frente a la. UN IC AC IÓ. globulus tiene efecto antibacteriano. concentración del 100%61 mientras que en esta investigación S. aureus presentó sensibilidad significativa frente a la concentración de 75 y 100%, esto puede. CO. M. deberse a la cepa bacteriana utilizada y al lugar de procedencia de donde fue. Y. obtenido el aceite, por lo que el aceite esencial de E. globulus procedente del. IC A. distrito de Tayabamba puede tener mayor capacidad antibacteriana.. ÁT. En otros trabajos se obtuvo un efecto antibacteriano sobre Pseudomonas79-87,. IN FO. RM. eficacia frente H. influenzae y Stenotrophomonas maltophilla39, frente a S. pneumoniae, S. pyogenes82, usando el aceite esencial de E. globulus.. DE. Investigadores señalan que existe una relación entre las estructuras químicas de. EM. AS. los más abundantes en el aceite esencial y la actividad antimicrobiana.. SI ST. Considerando la gran variedad de compuestos químicos presentes en lo aceites esenciales, es muy probable que su actividad antibacteriana, no sea atribuible a un. DE. mecanismo específico, sino a la acción combinada de varios de ellos, en el caso de. O. N. E. globulus la actividad antibacteriana se debe a componentes tales como 1,8-. EC CI. cineol, citronelal, citroneol, acetato de citronililo, p-cimeno, eucamalol, limoneno,. DI R. linalol, B-pineno, terpineno, a-terpinol, alloocimene y aromadendrene88 siendo componente principal el monoterpene 1,3,3-trimethyl-2-oxabicyclo[2.2.2]octane89 comúnmente llamado 1,8- cineol90. Aunque no se conoce con exactitud el mecanismo de acción de los componentes del aceite, se sabe que los sitios de acción en la célula bacteriana incluya la 24. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(37) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. membrana celular, pared celular, enzimas metabólicas, síntesis de proteínas y el sistema genético, todos ellos estratégicos para la supervivencia de los microorganismos y cualquier acción sobre ellos puede inactivar a la célula. UN IC AC IÓ. N. bacteriana91.. El resultado de la comparación de los halos de sensibilidad entre S. aureus y P. aeruginosa es similar al obtenido en otras investigaciones, donde informaron que. CO. M. los aceites esenciales son en general ligeramente más activos frente a bacterias. Y. Grampositivas que frente a las Gramnegativas92-102. Estos microorganismos. IC A. difieren en varios aspectos de otros con respecto a la estructura de sus paredes. RM. ÁT. celulares, principalmente con respecto a la presencia de lipoproteínas y. IN FO. lipopolisacáridos en bacterias gram-negativas que forman una barrera para los compuestos hidrófobos103, 104. Los aceites esenciales se introducen a través de los. DE. lípidos de la membrana celular y mitocondrial, alterando su estructura y. AS. haciéndolas más permeables105, 106. Como consecuencia tiene lugar una fuga de. EM. iones y de otros contenidos celulares, de forma más o menos intensa, que puede. SI ST. llevar a la muerte celular107. En su mayoría las gram-negativas sean más. DE. resistentes a los aceites esenciales que las bacterias Gram-positivas108.. O. N. De acuerdo a los resultados obtenidos y basándose en otros trabajos científicos. EC CI. relacionados a esta investigación, se puede afirmar que S. aureus presentó mayor. DI R. sensibilidad frente al aceite esencial de E. globulus que P. aeruginosa y que este efecto sería debido a los componentes propios del aceite así como a la estructura y constitución de las membranas celulares de las bacterias en estudio. También se evidencia que S. aureus y P. aeruginosa no son sensibles al control negativo, etanol absoluto, ya que no se observó la formación de halos, lo que 25. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(38) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. indica que el uso de etanol absoluto como solvente en la preparación de las concentraciones de 25, 50, 75 y 100% del aceite esencial de E. globulus, no. DI R. EC CI. O. N. DE. SI ST. EM. AS. DE. IN FO. RM. ÁT. IC A. Y. CO. M. UN IC AC IÓ. N. produjo ningún efecto ni alteró el crecimiento de las bacterias en estudio.. 26 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(39) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. CONCLUSIONES. UN IC AC IÓ. N.  Staphylococcus aureus y Pseudomonas aeruginosa son sensibles frente. a las diferentes concentraciones del aceite esencial de Eucalyptus. M. globulus.. CO.  La concentración del 75% del aceite esencial de Eucalyptus globulus es. IC A. Y. significativamente más eficaz en relación a la Vancomicina contra. RM. ÁT. Staphylococcus aureus.. IN FO.  La concentración del 100% del aceite esencial de Eucalyptus globulus es significativamente eficaz en relación a la Ciprofloxacina,. contra. AS. DE. Pseudomonas aeruginosa.. EM.  Staphylococcus aureus es más sensible frente a las diferentes. SI ST. concentraciones del aceite esencial de Eucalytus globulus que. DI R. EC CI. O. N. DE. Pseudomonas aeruginosa.. 27 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(40) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS. N. 1. Owlia P, Saderi H, Rasooli I, Sefidkon F. Antimicrobial characteristics of. UN IC AC IÓ. some herbal oils on Pseudomonas aeruginosa with special reference to their chemical compositions. Indian J Pharmacol Res. 2009; 8(2): 107–114.. 2. Concepción L, Aurora R, Ortega J, Fernando B. Componentes químicos y. CO. M. su relación con las actividades biológicas de algunos extractos vegetales.. Y. Rev. Química viva 2010; 9(2): 86-96.. IC A. 3. Borboa-Flores J, Rueda-Puente E, Acedo-Félix E, Ponce J, Cruz-Villegas. RM. ÁT. M, García-Hernández J et al. Evaluación de la actividad antibacteriana in. IN FO. vitro de aceites esenciales contra Clavibacter michiganensis subespecie michiganensis. Tropical and Subtropical Agroecosystems 2010; 12: 539-. DE. 547.. AS. 4. Alzamora L, Morales L, Armas L, Fernández G. Medicina Tradicional en el. EM. Perú: Actividad Antimicrobiana in vitro de los Aceites Esenciales extraídos. SI ST. de algunas plantas aromáticas. Anales de la Facultad de Medicina 2001;. DE. 62(2): 156-161.. N. 5. Cowan M. plant products as antimicrobial agents. Clinical Microbiology. EC CI. O. Reviews 1999; 12(4): 564-582.. DI R. 6. Ponce A, Roula S, Del Valle C, Moreira M. Antimicrobial and antioxidant activies of edible coating enriched with natural plant extracts: in vitro and vivo studies. Postharvest Biology and Technology 2008; 49: 294-300. 7. Burt S. Essential oils: their antibacterial properties and potential applications in foods. Int J Food Microbiol. 2004 Aug 1; 94(3): 223-53. 28 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

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