Efecto antibacteriano in vitro del aceite esencial de Origanum vulgare “orégano” sobre Streptococcus Pyogenes

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(1)Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO ESCUELA PROFESIONAL DE MEDICINA. ED. IC. TESIS. IN. A. -U. NT. FACULTAD DE MEDICINA. DE. M. Efecto antibacteriano in vitro del aceite esencial de Origanum vulgare “orégano” sobre Streptococcus Pyogenes.. AD. PARA OPTAR EL TÍTULO PROFESIONAL DE:. CU. LT. MÉDICO CIRUJANO. AUTOR: Delgado Nicolás, Héctor Diego INTEGRANTES:. FA. ALIAGA VERA, Amalia ALTAMIRANO VALLEJO, Enma ARGOMEDO LLAPO, Juan Carlos CANCHACHI ALFARO, Hector CONTRERAS VELASQUEZ, Meliza. ASESORA: Dra. Mejía Delgado, Elva Manuela. Castañeda, Ana María CO-ASESORA:Flores GAMBOA GRADOS, Ana Iris Dra. Soto Vásquez, Marilú Roxana GARCÍA COSTANTINO, David. TRUJILLO- PERÚ DOCENTE: 2018 Dra. ROSA A. SALCEDO DÁVALOS. TRUJILLO- PERÚ 2010. LEÓN YNTI, Wiecer LUJAN PARDO, Ricardo. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(2) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. DEDICATORIA. A Dios, por haberme dado la fuerza necesaria durante. NT. estos 6 años para seguir adelante y superar mis obstáculos. -U. A mis padres, por haber guiado mi camino y ser mí soporte, por enseñarme a diferenciar entre lo bueno y lo malo e. IC. IN. A. inculcarme los cimientos necesarios para seguir adelante. A mis hermanas, porque son mi referente y ejemplo a seguir. razones por las que sigo esforzándome. DE. M. ED. desde pequeño y porque hoy en día son una de las principales. A todos esas grandes personas que he conocido en mi preciada. AD. facultad y con las que he compartido grandes momentos,. FA. CU. LT. gracias por su confianza y comprensión. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(3) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. AGRADECIMIENTOS. A la Dra. Elva Mejía Delgado, mi asesora de tesis, por brindarme su apoyo desinteresado,. NT. orientación y ayuda durante la realización de la presente investigación.. -U. Al personal técnico del Laboratorio de Microbiología de la Facultad de Medicina de la UNT,. A. especialmente a la Sra. Tania Mendoza por su gran apoyo y servicio durante la ejecución de la. ED. IC. IN. investigación.. A la Dra. Marilú Soto Vásquez, por su apoyo en el Laboratorio de Farmacognosia-. FA. CU. LT. AD. DE. M. Farmacobotánica de la Facultad de Farmacia y Bioquímica de la UNT. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(4) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. ÍNDICE INTRODUCCIÓN… ............................................................................... 1. I.. 1.1. Antecedentes… ...................................................................................... 1 1.2. Justificación ........................................................................................... 5. NT. 1.3. Problema… ............................................................................................ 5. -U. 1.4. Hipótesis ................................................................................................. 5 1.5. Objetivos… ............................................................................................ 5 MATERIAL Y MÉTODOS.....................................................................6. A. II.. IN. 2.1. Material de estudios: ............................................................................. 6. IC. 2.2. Métodos y Técnicas ............................................................................... 8. ED. 2.3. Instrumento de Recolección de Datos… ............................................. 13. M. 2.4. Operacionalización de variables. ......................................................... 14. DE. 2.5. Definición conceptual de variables… .................................................. 14 2.6. Análisis estadístico e interpretación de la información ..................... 15. AD. 2.7. Aspectos éticos… ................................................................................... 15. RESULTADOS ........................................................................................ 18. CU. III.. LT. 2.8. Diseño Experimental… ......................................................................... 17. ANÁLISIS Y DISCUSIÓN… ................................................................. 26. V.. CONCLUSIONES ................................................................................... 29. FA. IV.. VI.. RECOMENDACIONES ......................................................................... 30. VII.. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS .................................................. 31. VIII. ANEXOS .................................................................................................. 36. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(5) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. RESUMEN OBJETIVO: Evaluar el efecto antibacteriano in vitro del aceite esencial de Origanum vulgare (AEOV) sobre Streptococcus pyogenes. MATERIAL Y METODOS: Estudio de tipo experimental del efecto antibacteriano de las. NT. concentraciones al 25%, 50%, 75% y 100% del AEOV sobre Streptococcus. -U. pyogenes; se utilizó como control positivo Penicilina G Benzatina y como control negativo Tween80. Se empleó el método de Kirby Bauer y la concentración mínima. A. inhibitoria (CIM) para evaluar la actividad antibacteriana. Se utilizó el cálculo de. IN. la desviación de estándar, se evaluó los coeficientes de variación y la prueba de. IC. comparaciones múltiples utilizando subconjuntos homogéneos; todas con un nivel. ED. de significancia del 0,05 (P< 0,05). RESULTADOS: La susceptibilidad de. M. Streptococcus pyogenes frente al AEOV fue de 15.17mm, 15.33mm, 16.08mm y. DE. 18.75mm al 25%, 50%, 75% y 100% respectivamente y la CIM de AEOV fue la de 25% (230.81mg/mL). Asimismo, las cepas de Streptococcus pyogenes mostraron. AD. “sensibilidad media” a los grupos de AEOV de 75% y 100% en un 100% y a los. LT. grupos de AEOV de 25% y 50% en un 83% y 92% respectivamente.. CU. CONCLUSION: Existe efecto antibacteriano del AEOV sobre Streptococcus pyogenes aislada de hisopado faríngeo.. FA. PALABRAS CLAVE: Efecto antibacteriano, Origanum vulgare, Streptococcus pyogenes.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(6) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. ABSTRACT OBJECTIVE: To evaluate the in vitro antibacterial effect of the essential oil of Origanum vulgare (EOOV) on Streptococcus pyogenes. MATERIAL AND METHODS: Experimental study of the antibacterial effect of the concentrations at. NT. 25%, 50%, 75% and 100% of the EOOV on Streptococcus pyogenes; Penicillin G. -U. Benzathine is used as a positive control and Tween80 as a negative control. The Kirby Bauer method and the minimum inhibitory concentration (MIC) were used. A. to evaluate the antibacterial activity. The calculation of the standard deviation was. IN. used, the coefficients of variation were evaluated and the multiple comparisons test. IC. was used using homogeneous subsets; all with a level of significance of 0.05 (P. ED. <0.05). RESULTS: The susceptibility of Streptococcus pyogenes to EOOV was. M. 15.17mm, 15.33mm, 16.08mm and 18.75mm at 25%, 50%, 75% and 100%. DE. respectively and the MIC of EOOV was 25% (230.81mg / mL). Likewise, strains of Streptococcus pyogenes showed "average sensitivity" to the AEOV groups of. AD. 75% and 100% in 100% and to the EOOV groups of 25% and 50% in 83% and 92%. LT. respectively. CONCLUSION: There is an antibacterial effect of EOOV on. CU. Streptococcus pyogenes isolated from pharyngeal swab.. FA. KEY WORDS: Antibacterial effect, Origanum vulgare, Streptococcus pyogenes. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(7) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. I. INTRODUCCIÓN 1.1 ANTECEDENTES El Estreptococo ß-hemolítico del grupo A (EGA) o Streptococcus pyogenes, es uno de los patógenos más frecuentes en la edad pediátrica y responsable de producir. NT. enfermedades tales como la faringoamigdalitis aguda (FAA), una infección de la orofaringe o nasofaringe que constituye una de las principales causas de consulta. -U. médica en la atención ambulatoria, en aproximadamente 1/3 parte de los casos1,2.. A. La mayor incidencia de esta enfermedad suele ser en las estaciones de invierno y. IN. primavera y el mecanismo de transmisión suele producirse por vía respiratoria a. IC. través de las pequeñas gotas de saliva que se expelen al toser, estornudar o. ED. simplemente hablar desde una persona infectada a un huésped susceptible y tocando. M. las llagas de las infecciones por EGA en la piel3.. DE. El 25-40% de las amigdalitis infantiles y el 10-25% de las formas adultas son de origen estreptocócico. Aproximadamente el EGA es responsable del 30-40% de las. AD. FAA que se observan en niños de 3-13 años, del 5-10% en niños entre los 2 y 3 años y solo el 3-7% en menores de 2 años; además, aunque ocurran, las FAA por. CU. meses4,5.. LT. EGA son muy raras en niños menores de 2 años, e insólitas en los menores de 18. FA. Asimismo, la FAA por EGA produce 2 tipos de complicaciones: Supurativas y no supurativas; las primeras por diseminación de EGA a estructuras adyacentes a la faringe (flemón y absceso periamigdalino, absceso retrofaríngeo, otitis media aguda, sinusitis, mastoiditis, adenitis cervical supurativa), y las segundas, como secuelas de la respuesta inmunológica (fiebre reumática aguda y la glomerulonefritis postestreptocócica)1,6. 1 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(8) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. Se recomienda administrar el tratamiento antibacteriano durante 10 días. Basado en su estrecho espectro de actividad, la infrecuencia de reacciones adversas, y el costo modesto, la penicilina (penicilina G benzatina IM en dosis única en personas con peso mayor a 25 kg 1.200.000 UI, mientras que por debajo de ese peso la dosis es. NT. de 600.000 UI) o la amoxicilina (VO 500 mg/12 h) es el fármaco de elección preferido para aquellos no alérgicos a estos agentes. Si hay alergia confirmada a la. -U. penicilina se aconseja utilizar una cefalosporina de primera generación (para. A. aquellos que no son anafilácticamente sensibles) durante 10 días, clindamicina o. IN. claritromicina durante 10 días o azitromicina durante 5 días7,8.. IC. Pese a que los estreptococos causantes de FAA mantienen hasta la fecha. ED. sensibilidad a las penicilinas y a otros antibióticos β-lactámicos (No se ha descrito. M. ninguna cepa resistente a la penicilina) se sabe que la prevalencia de alergia a. DE. betalactámicos auto-reportada en niños varía entre 1,7 y 5,2% de los cuales la amoxicilina como etiología representa el 1.4 %, otras penicilinas el 1.2 % y la. AD. cefalosporinas el 0.7 %; esto es debido a que al metabolizarse la penicilina se liberan determinantes alergénicos como el benzilpeniciloil, que constituye la causa. LT. principal de la mayor parte de reacciones alérgicas tales como las de tipo I o. CU. inmediatas (en menos de 1 h: urticaria y anafilaxia), de tipo II o citotóxicas y tipo. FA. III o por inmunocomplejos (mediadas por anticuerpos: anemia hemolítica y enfermedad del suero, y de tipo IV (entre las 24 a 48 h, inducidas por linfocitos T: exantema maculo- papular)3,9.. Por las razones antes mencionadas además de la baja inmunidad en las células huésped y la capacidad de las bacterias para desarrollar biofilms asociados a la resistencia a los medicamentos han llevado a los investigadores a explorar nuevas. 2 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(9) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. alternativas contra las cepas de EGA. En este sentido, los aceites esenciales de plantas y sus principales constituyentes químicos son candidatos potenciales como agentes antibacterianos. Se ha descrito que varios tipos de aceites esenciales (canela, clavo, pimiento, orégano, romero, etc) y sus principales constituyentes. NT. químicos poseen una amplia gama de potenciales inhibidores bacterianos10. El Origanum vulgare "Orégano" es una planta muy versátil y aunque se ha conocido. -U. durante mucho tiempo como una hierba culinaria en gastronomía y en la. A. preservación e inhibición del crecimiento de varias bacterias y hongos patógenas. IN. transmitidas por los alimentos, también ha demostrado su uso en medicina popular. IC. en el tratamiento de trastornos respiratorios, dispepsia, menstruación dolorosa,. ED. artritis reumatoide, escrofulosis y trastornos del tracto urinario. Recientemente se. M. le ha reconocido por su potencial papel terapéutico como diaforético, carminativo,. DE. antiespasmódico, antiséptico, antioxidante y otras propiedades. 11,12,13 Se ha demostrado que el aceite esencial de orégano se obtiene principalmente de. AD. las hojas y que el nivel de insolación, la naturaleza de los componentes del suelo, el régimen de lluvias y vientos determinan algunas variantes o quimiotipos en su. LT. composición química: El quimiotipo A que es rico en compuestos terpénicos. CU. (monoterpenos y sesquiterpenos que representan el 45 y 27%, respectivamente); el. FA. quimiotipo B, cuyo principal componente es el carvacrol (40%) seguido de pcimeno (13%) y γ-terpineno (11%) y timol (11%); y el quimiotipo C que posee altos niveles de timol (56%, seguido de p-cimeno (9%) y γ - terpineno(5%)13,14. El aceite esencial de Origanum vulgare presentan actividad contra bacterias Gram negativas como Salmonella typhimurium, Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Yersinia enterocolitica y Enterobacter cloacae; y Gram positivas como. 3 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(10) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis, Listeria monocytogenes y Bacillus subtilis; además también exhiben propiedades antifungicas frente a los patógenos humanos Malassezia, Trichophyton rubrum y beigelii Trichosporon y hay evidencia que tienen efecto antirretroviral contra adenovirus y poliovirus10,12.. NT. La actividad antibacterial de Origanum vulgare ha sido comprobada en diversos estudios: Siroli y col. (2015) encontraron que el aceite esencial de orégano mostró. -U. mayor actividad antimicrobiana contra L. monocytogenes en comparación con E.. A. coli. De hecho, la concentración inhibitoria mínima de L. monocytogenes osciló. IN. entre 125 y 200 mg/l, mientras que la de E. coli varió entre 250 y 350 mg/l15.. IC. Boskovic M y col (2015) trabajaron con plantas de orégano y tomillo, encontrando. ED. que ambos aceites esenciales exhibieron excelente actividad antibacteriana contra. M. Escherichia coli, Salmonella spp y S. Enteritidis; además, aunque generalmente. DE. estos aceites son más afectivos frente a las bacterias Gram positivas, en este estudio ambos mostraron actividad moderadamente fuerte contra S. aureus con un valor de. MRSA16.. AD. CIM obtenido de 640 μg/mL y una actividad antibacteriana más fuerte contra el. LT. Magi G, Marini E y Facinelli B (2015), demostraron que los aceites esenciales de. CU. tomillo y orégano poseen la mayor actividad antimicrobiana contra estreptococos. FA. del grupo A resistentes a la eritromicina con una concentración mínima inhibitoria que oscila entre 256 y 512 μg/mL. Además encontraron que el monoterpeno fenólico carvacrol, principal componente de estos aceites podría servir potencialmente como una nueva herramienta terapéutica17.. 4 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(11) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. 1.2 JUSTIFICACION En los últimos años, el número de infecciones causadas por Streptococcus pyogenes así como sus complicaciones han aumentado en la población en general, afectando principalmente a niños; además en algunos casos la hipersensibilidad generada por. NT. la penicilina G Benzatina, fármaco de elección, así como la aparición de cepas resistentes a los antibióticos alternativos comúnmente utilizados, han complicado. -U. el tratamiento y motivan la búsqueda de nuevas alternativas que permitan disminuir. A. el daño causado por los microorganismos con amplio impacto epidemiológico.. IN. Con la presente investigación, se pretende analizar las propiedades antimicrobianas. IC. in vitro del aceite esencial de Origanum vulgare sobre las cepas de Streptococcus. ED. pyogenes, asimismo, se intenta encontrar una alternativa terapéutica que amplié las. M. posibilidades de combatirlo y que sea de fácil acceso a la población, disminuyendo. 1.3 PROBLEMA. DE. también los efectos adversos de los medicamentos empleados comúnmente.. AD. ¿Tiene efecto antibacteriano “in vitro” el aceite esencial de Origanum vulgare. LT. “orégano” sobre Streptococcus pyogenes?. CU. 1.4 HIPOTESIS. El aceite esencial de Origanum vulgare posee efecto antibacteriano “in vitro” sobre. FA. Streptococcus pyogenes. 1.5 OBJETIVOS 1.5.1. Objetivo General Evaluar el efecto antibacteriano in vitro del aceite esencial de Origanum vulgare (orégano) sobre Streptococcus pyogenes. 1.5.2. Objetivos específicos:. 5 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(12) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT.  Determinar la concentración mínima inhibitoria in vitro del aceite esencial de Origanum vulgare “orégano” sobre Streptococcus pyogenes utilizando el método de macro dilución en caldo.  Comparar el diámetro in vitro del halo inhibitorio generado por el aceite esencial. NT. de Origanum vulgare “orégano” al 25%, 50%, 75% y 100% frente a Streptococcus pyogenes mediante la técnica de Kirby Bauer. IN. A. vulgare “orégano” frente Streptococcus pyogenes. -U.  Determinar la susceptibilidad bacteriana del aceite esencial de Origanum. IC. II. MATERIAL Y MÉTODOS. M. 2.1.1. TIPO DE ESTUDIO. ED. 2.1. MATERIAL DE ESTUDIO. Investigación de tipo aplicada y régimen libre.. -. Según el periodo que capta la información: Prospectivo. -. Según la evolución del fenómeno estudiado: Transversal. -. Según la interferencia del investigador en el fenómeno que se analiza:. AD. DE. -. LT. Experimental. CU. 2.1.2. POBLACION Y MUESTRA. FA. 2.1.2.1. CARACTERÍSTICAS GENERALES Se trabajó con cepas de Streptococcus pyogenes expuestas a aceite esencial de Origanum vulgare (oregano) en concentraciones de 25%, 50%, 75% y 100%. 2.1.2.2.CRITERIOS DE SELECCIÓN DE MUESTRA CRITERIOS DE INCLUSIÓN . Placas con Agar Sangre con macro dilución de Streptococcus. 6 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(13) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. pyogenes y la concentración de aceite esencial de Origanum vulgare correspondiente CRITERIOS DE EXCLUSIÓN . Placas con la macrodilución que presente algún tipo de deterioro o. . NT. daño en su estructura durante el proceso de incubación. Placas con la macrodilución cuyo resultado en el proceso de. -U. incubación sea dudoso.. A. CRITERIOS DE ELIMINACIÓN . IN. Placas Petri con la macrodilución que sufra deterioro o daño. ED. medición posterior.. IC. durante la conservación y los procedimientos, que no permitan su. M. 2.1.3. DISEÑO ESTADÍSTICO DE MUESTREO. DE. Se calculó el número de ensayos con el programa estadístico Minitab 17, obteniendo como tamaño de muestra 11 repeticiones como mínimo para cada. AD. nivel. La muestra total estará constituida por 44 unidades de muestreo para los. GRUPO 1: 11 repeticiones utilizando aceite esencial de Origanum. CU. -. LT. 4 grupos experimentales y 22 para los 2 grupos controles:. vulgare (Orégano) a una concentración de 25%. FA. -. -. GRUPO 2: 11 repeticiones utilizando aceite esencial de Origanum vulgare (Orégano) a una concentración de 50% GRUPO 3: 11 repeticiones utilizando aceite esencial de Origanum vulgare (Orégano) a una concentración de 75%. -. GRUPO 4: 11 repeticiones utilizando aceite esencial de Origanum vulgare (Orégano) a una concentración de 100%. 7 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(14) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. -. GRUPO 5: 11 repeticiones utilizando discos de Penicilina G Benzatina 1.2M UI. -. GRUPO 6: 11 repeticiones utilizando discos con Tween 80.. 2.2.1. DE LA APROBACION DEL PROYECTO. NT. 2.2. METODOS Y TECNICAS. -U. Para la realización del presente estudio de investigación se obtuvo el permiso. A. para la ejecución, mediante la aprobación del proyecto por el Comité. IN. Permanente de Investigación Científica de la Facultad de Medicina de la. IC. Universidad Nacional de Trujillo y la correspondiente Resolución de Decanato.. ED. 2.2.2. DE LA AUTORIZACIÓN PARA LA EJECUCIÓN. M. Una vez aprobado el proyecto se solicitó el permiso para poder trabajar en el. DE. Laboratorio de Microbiología de la Facultad de Medicina de la Universidad Nacional de Trujillo.. AD. 2.2.3. DE LA CERTIFICACIÓN DEL EXAMINADOR La presente investigación se desarrolló por el investigador principal, bajo la. LT. supervisión de su asesora.. CU. El investigador se certificó por su asesora experta en el tema, para lo cual realizó. FA. la lectura de 11 placas Petri para el conteo de las UFC mediante la inspección visual de cada placa y también repitió la medición con un vernier los halos de inhibición en milímetros entre el investigador y asesora.. 2.2.4. ACEITE ESENCIAL DE Origanum vulgare (ORÉGANO) PARA EL ESTUDIO. 8 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(15) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. 2.2.4.1. Recolección de Origanum vulgare (Orégano) Las especies vegetales de Origanum vulgare (10kg) se recolectaron del departamento de La Libertad, provincia de Otuzco, ubicada a 3350 msnm, los cuales fueron observados a temperatura ambiente, sin desecar hasta el momento. 2.2.4.2. Identificación de Origanum vulgare (Orégano). NT. de la extracción del aceite esencial.. -U. Un ejemplar completo fue llevado al Herbarium Truxillensis de la Universidad. IN. según el sistema filogenético de la especie.. A. Nacional de Trujillo para su identificación y posterior verificación taxonómica. IC. 2.2.4.3. Preparación de la muestra vegetal. ED. Obtenida la muestra necesaria de Origanum vulgare, fue transportada al. M. laboratorio de Farmacognosia de la Facultad de Farmacia y Bioquímica de la. DE. Universidad Nacional de Trujillo, donde se realizó la selección y se eliminó las hojas que no se mostraron aptas para su procesamiento. Luego, se lavó el. AD. material vegetal con agua destilada, seguido de desinfección, utilizando hipoclorito de sodio al 0.5 %. Posteriormente se realizó un enjuague con agua. LT. destilada estéril, para retirar los residuos de hipoclorito18.. CU. 2.2.4.4. Obtención del aceite esencial de Origanum vulgare19. FA. La extracción se efectuó mediante el método por arrastre de vapor de agua (convencional). Técnica simple y económica para obtener el aceite esencial de este tipo de planta. Se depositó 500 g de hojas de Origanum vulgare, previamente desecadas, en un balón de fondo redondo de 1000 mL de capacidad. Se llenó con agua el balón destilador, previa instalación del conducto refrigerante; el extremo superior de este balón se conectó a un condensador que permita la circulación de agua a través del mismo.. 9 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(16) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. Posteriormente, se llevó a ebullición el balón destilador por un tiempo de tres horas, periodo en el que se obtiene un líquido inmiscible conteniendo vapor de agua condensada y el aceite vegetal. La separación de la mezcla aceite/agua se realizó tomando en cuenta sus propiedades de inmiscibilidad y diferencia de. NT. densidades utilizando una pera de separación de vidrio; además se deshidrató las impurezas de agua en el aceite esencial con Na2SO4 anhidro.. A. y se conservó a temperatura de refrigeración a 4°C.. -U. Finalmente, el aceite esencial obtenido se recolectó en frascos de color ámbar. IN. 2.2.5. PREPARACIÓN DE LAS CONCENTRACIONES DE ACEITE. IC. ESENCIAL:. Tween 80. DE. aceite esencial. Volumen de Volumen Concentración. M. Volumen de. ED. Se prepararon según el siguiente cuadro:. final. (%). 3.75 mL. 5 mL. 25. 2.50 mL. 2.50 mL. 5 mL. 50. 3.75 mL. 1.25 mL. 5 mL. 75. -. 3 mL. 100. LT. AD. 1.25 mL. FA. CU. 3 mL. 2.2.6. RENDIMIENTO DEL ACEITE DE Origanum vulgare:. El rendimiento del aceite fue de 0.5 ml por cada 100g de hoja seca (0.5%), obteniéndose una densidad de 0.92324 g/mL. Las concentraciones al transformarse en mg/mL se obtienen sus respectivas equivalencias:. 10 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(17) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. Concentración (%). 230.81 mg/mL.. 25 %. 461.62 mg/mL.. 50 %. 692.43 mg/mL.. 75 %. 923.24 mg/mL.. 100 %. -U. NT. Densidad del aceite (mg/mL). 2.2.7. CEPAS BACTERIANAS PARA EL ESTUDIO. IN. A. Se trabajó con cepas de Streptococcus pyogenes, obtenidas por hisopado. IC. faríngeo de pacientes sintomáticos con faringoadmigdalitis, en el laboratorio de. ED. Microbiología de la Facultad de Medicina de la Universidad Nacional de Trujillo.. M. 2.2.8. CRECIMIENTO DE CEPAS BACTERIANAS. DE. Streptococcus pyogenes: creció a 37°C en Agar sangre con 5% de sangre de conejo y en condiciones de microanaerobiosis.. AD. 2.2.9. ESTANDARIZACIÓN DE Streptococcus Pyogenes. LT. Se confirmará la cepa de Streptococcus Pyogenes mediante la determinación. CU. de β-hemolisis, coloración Gram, cultivo tioglicolato, sensibilidad a la bacitracina y prueba de la catalasa. Para estandarizar las cepas bacterianas se. FA. utilizó un tubo de ensayo conteniendo el medio agar Soya tripticasa, hasta obtener una turbidez semejante al tubo N°0.5 del Nefelómetro de Mc Farland (suspensión experimental) que corresponde a 1,5x108 UFC/mL. Los cultivos se incubaron a 37°C por el lapso de 24 a 48 horas y fueron girados entre las manos durante 30 segundos antes de proceder al sembrado para distribuir los microorganismos uniformemente.. 11 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(18) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. 2.2.10. DETERMINACIÓN DE LA CONCENTRACIÓN INHIBITORIA MÍNIMA (CIM) 20,21,22 1° Se preparó 6 tubos de ensayo; 4 tubos a los cuales se añadió 0.8 mL de cada concentración de aceite esencial de 25, 50, 75 y 100% en cada uno, un quinto. NT. tubo corresponde al control positivo con 0,8 mL de Penicilina G Benzatina y un sexto tubo corresponde al control negativo con 0,8 mL de Tween 80; además. -U. a los seis tubos se le añadió 0,2 mL de la cepa.. A. 2° Posteriormente, los tubos se mezclaron suavemente hasta uniformizarlos y. IN. se incubarán a 37° C durante 24 horas. Luego, se determinó las cuentas viables. IC. sembrando 0,1 mL de solución de cada uno de los tubos en 11 placas con Agar. ED. Sangre con 5% de sangre de conejo por cada concentración y grupos controles,. M. utilizando el asa de drigalsky para dispersar la muestra.. DE. 3° Dichas placas se cultivaron en la estufa a 37ºC por el lapso de 24 horas, luego se observó el crecimiento del microorganismo mediante el conteo de. AD. Unidades Formadoras de Colonias (UFC), considerándose como CIM a la menor concentración en la cual no se observaron UFC.. LT. 4º Todo el procedimiento se llevó a cabo dentro del diámetro de 10 cm de la. CU. llama de un mechero bunsen y fueron 11 placas Petri por concentración.. FA. 2.2.11. DETERMINACIÓN. DE. EFECTO. ANTIBACTERIANO. (PRUEBA DE SUSCEPTIBILIDAD) 20,21,22. Para la prueba de susceptibilidad se utilizó el método de Difusión en discos Kirby-Bauer. 1° Con un hisopo estéril, el cual fue embebido en el tubo del cultivo preparado y a una distancia de 10 cm de la llama de un mechero, se sembró en placas Petri. 12 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(19) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. con Agar Sangre las cepas de Streptococcus pyogenes, hisopando de forma uniforme sobre toda la superficie. 2° Se preparó discos de papel filtro estériles y se sumergió 12 discos por cada concentración de aceite esencial. Posteriormente con la aguja estéril se. NT. colocaron los discos sobre los cultivos de Streptococcus pyogenes en las placas Petri preparadas previamente. Hubo 2 grupos controles: un grupo control. -U. positivo con 12 discos de penicilina G Benzatina y un control negativo con 12. A. discos de Tween 80. Se colocaron 4 discos por placa de agar. Posteriormente. IN. las placas se incubaron a 37°C durante 24 horas.. IC. 4° Finalmente la lectura de resultados se llevó a las 24 horas. Se medirán los. ED. halos de inhibición, incluyendo el área del disco de papel de filtro con una regla. M. milimetrada, procediéndose de igual manera con ambos controles. La lectura. DE. de los halos de inhibición producidos se midió en milímetros tomando en. AD. cuenta la escala de Duraffourd.. 2.3. INSTRUMENTOS DE RECOLECCIÓN DE DATOS. LT. Se llenaron los datos obtenidos en las fichas elaboradas (ANEXO Nº1 Y N°2). CU. El instrumento contiene:. FA. 1. El conteo de las Unidades Formadoras de Colonias (UFC) 2. Medida de halos de inhibición expresada en milímetros (mm).. 2.4. OPERACIONALIZACIÓN DE VARIABLES. 13 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(20) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. VARIABLE. DIMENSIONES. Aceite esencial. Cantidad de. de Origanum. aceite en ml.. TIPO DE. DEFINICIÓN. ESCALA. VARIABLE. OPERACIONAL E. DE. INDICADORES. MEDICION. Administración de aceite. NOMINAL. Cualitativa. esencial de Origanum vulgare en. (Variable. concentraciones de 25,. independiente). 50,75 y 100%; control. Inhibitoria. (Variable. Mínima. dependiente). Sensibilidad. Unidades Formadoras de. -U. antibacteriano. Cuantitativa. DE RAZON. Colonias (UFC) por ml. Cuantitativa. A. Concentración. Escala de Duraffourd:. IN. Efecto. NT. vulgare. Diámetro en mm. ED. IC. Bacteriana. DE RAZON. 2.5. DEFINICIÓN CONCEPTUAL DE VARIABLES:. M. Aceite esencial de Origanum vulgare:. DE. Mezcla compleja de líquidos que presentan alta volatilidad, obtenido a partir de. mediterráneo14. AD. hojas del orégano; planta perteneciente a la familia lamiaceae y originaria del. LT. Efecto antibacteriano “in vitro” frente a Streptococcus pyogenes:. CU. Interacción entre el aceite esencial de Origanum vulgare sobre Streptococcus. FA. pyogenes. Se tomó como concentración efectiva, al tener como resultados 0 UFC. Y para determinar la sensibilidad bacteriana, se utilizó la Escala de Duraffourd, escala utilizada para determinar cualitativamente el efecto inhibitorio in vitro, según. diámetro de inhibición. -. Nula (-) para un diámetro inferior a 8 mm.. -. Sensibilidad límite (sensible = +) para un diámetro comprendido entre 8 a 14 mm.. 14 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(21) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. -. Medio (muy sensible = ++) para un diámetro entre 14 y 20 mm.. -. Sumamente sensible (+++) para un diámetro superior a 20 mm.. Sensibilidad de Streptococcus pyogenes a Penicilina: Se consideró según el diámetro de inhibición25: Sensible para un diámetro superior a 24 mm. -. Medio y resistente: Hasta la fecha, no se ha descrito ninguna cepa de S.. -U. NT. -. ESTADÍSTICO. E. INTERPRETACIÓN. DE. LA. IC. 2.6. ANALISIS. IN. A. pyogenes con resistencia a penicilina. ED. INFORMACIÓN:. Para el análisis de los halos de inhibición y de las Unidades Formadoras de Colonias. M. (UFC), se calculó la desviación de estándar y se evaluó los coeficientes de variación. DE. para contrastar el supuesto de la normalidad. Se aplicó la prueba de ANOVA con un nivel de significancia de p < 0,05 para determinar si existe diferencia. AD. significativa entre las medias de los diámetros de halos de los tratamientos y grupos. LT. controles. Al hallarse significancia, se realizó la prueba de comparaciones múltiples. CU. de Duncan; en la cual se determinará qué tratamiento es el óptimo.. FA. Una vez obtenidos los datos, estos serán introducidos en los programas IBM SPSS Statistics 22 para aplicar las pruebas estadísticas.. 2.7. ASPECTOS ETICOS: - Constancia de Asesoría. (ANEXO N°3) - Constancia de Co-Asesoría. (ANEXO N°4). 15 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(22) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. - Constancia de aprobación para ejecución del proyecto por el Comité Permanente de Investigación de la Escuela Académico Profesional de Medicina de la Universidad Nacional de Trujillo. (ANEXO N°5) - Constancia de preparación del aceite esencial de Origanum vulgare “Orégano” en. NT. el laboratorio de Farmacognosia de la Facultad de Farmacia y Bioquímica de la Universidad Nacional de Trujillo. (ANEXO N°6). -U. - Acta de consentimiento informado para las pruebas de hisopado faríngeo.. A. (ANEXO N°7). IN. - Para la ejecución de esta investigación, el personal investigador tomó todas las. IC. medidas estándares de bioseguridad establecida por el Ministerio Nacional de Salud. ED. (MINSA) antes, durante y después de cada procedimiento microbiológico.. M. - Asimismo se tomó en cuenta el principio de precaución en conformidad con el. DE. Principio 15 de la Declaración de Río sobre el Medio Ambiente y el Desarrollo26 y el Protocolo de Cartagena sobre Seguridad de la Biotecnología del Convenio sobre. FA. CU. LT. AD. la Diversidad Biológica27, considerando los riesgos para la salud humana.. 16 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(23) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. FA. CU. LT. AD. DE. M. ED. IC. IN. A. -U. NT. 2.8. DISEÑO EXPERIMENTAL: Aceite esencial de O. vulgare (AEOV). 17 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(24) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. III. RESULTADOS A) DETERMINACIÓN. DE. LA. CONCENTRACIÓN. MÍNIMA. INHIBITORIA (CIM) La TABLA N°01 muestra que la efectividad en los cuatro grupos de. NT. concentración de AEOV así como en el grupo de penicilina fue de 100% debido a que no se observó crecimiento de UFC en ninguna de las 12 repeticiones de. A. -U. los 5 grupos mencionados.. IN. B) DETERMINACIÓN DE LOS HALOS DE INHIBICIÓN. IC. En el GRAFICO N°01 se usó la media aritmética para obtener los promedios. ED. de cada grupo: El mayor promedio de diámetro de inhibición de los grupos de. M. investigación corresponden al grupo control positivo (Penicilina G) y al grupo. DE. de AEOV del 100% y el menor promedio de diámetro al grupo de Tween80.. AD. En la TABLA N°02 se describe los análisis de desviación estándar de cada grupo: La desviación estándar en la concentración del AEOV al 25% fue 0.72,. LT. al 50% fue 0.65, al 75% fue 0.67 y al 100% fue 0.75. En el grupo de Penicilina. FA. CU. G la desviación estándar fue 0.79 y en el grupo Tween80 fue 0.. En la TABLA N°03 se utilizó el análisis de varianza (ANOVA), obteniéndose como resultado que sí existe diferencia significativa entre las medias de los diámetros de halos de los grupos de investigación dado que el valor de P de la tabla de ANOVA es menor que 0.05. (p = 0.000).. 18 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(25) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. En la TABLA N°04 se usó la prueba de DUNCAN para determinar que grupos son estadísticamente diferentes entre sí. Se encontraron 5 grupos estadísticamente significativos y diferentes entre sí; sin embargo no existe diferencia significativa entre el grupo con concentración de AEOV de 25% y. NT. el grupo con concentración de AEOV de 50%.. -U. En la TABLA N°05 se muestra el efecto inhibitorio in vitro según diámetro de. A. inhibición por grupos de investigación teniendo en cuenta la escala cualitativa. IN. de Duraffourd: Se clasifico como “sumamente sensible” al grupo de penicilina. IC. en un 100%, “sensibilidad media” a los grupos de AEOV con concentraciones. ED. de 75% y 100% en un 100% y a los grupos de AEOV con concentraciones de. M. 25% y 50% en un 83% y 92% respectivamente, “sensibilidad límite” a los grupos de AEOV con concentraciones de 25% y 50% en un 17% y 8% y. FA. CU. LT. AD. DE. “sensibilidad nula” al grupo de Tween 80 en un 100%.. 19 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(26) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. TABLA Nº01: EFECTO DEL ACEITE ESENCIAL DE Origanum vulgare SOBRE Streptococcus pyogenes (CIM). Placas con UFC. % Efectividad. NT. GRUPO DE TRATAMIENTO. 0. Concentración del Aceite. 50%. 0. 100. esencial de Orégano. 75%. 0. 100. A IN 0. 100. Control (+). Penicilina G. 0. 100. Control (-). ED. IC. 100%. 100. -U. 25%. 12. 0. M. Tween80. FA. CU. LT. AD. DE. FUENTE: Datos obtenidos por el investigador, año 2018. 20 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(27) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. GRÁFICO Nº01: COMPARACIÓN DEL PROMEDIO DEL DIAMETRO DE INHIBICIÓN (DURAFFOURD) EN mm/ml ENTRE LOS GRUPOS DE INVESTIGACION SOBRE Streptococcus pyogenes 30. NT. 25. -U. 15. A. Diámetro. 20. IC. IN. 10. 0 15.17. 15.33. 75%. 100%. M. 50%. DE. mm. 25%. ED. 5. 16.08 18.75 Concentración. Penicilina G 24.08. Tween80 6. FA. CU. LT. AD. FUENTE: Datos obtenidos por el investigador, año 2018. 21 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(28) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. TABLA N°02: RESUMEN DESCRIPTIVO DEL EFECTO INHIBITORIO in vitro SEGÚN DIÁMETRO DE INHIBICIÓN POR GRUPOS DE INVESTIGACIÓN SOBRE Streptococcus pyogenes GRUPOS DE. DESV. N. PROMEDIO. NT. ESTÁNDAR 12. 15.17. Aceite esencial de Orégano 50%. 12. 15.33. Aceite esencial de Orégano 75%. 12. 16.08. 0.67. Aceite esencial de Orégano 100%. 12. 18.75. 0.75. Penicilina G. 12. 24.08. 0.79. Tween80. 12. 6. 0. 0.72 0.65. M. ED. IC. IN. -U. Aceite esencial de Orégano 25%. A. TRATAMIENTO. FA. CU. LT. AD. DE. FUENTE: Datos obtenidos por el investigador, año 2018. 22 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(29) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. TABLA N°03: ANALISIS DE VARIANZA PARA DETERMINAR DIFERENCIAS SIGNIFICATIVAS EN LOS DIAMETROS DE LOS HALOS DE INHIBICIÓN (EN mm) ENTRE LOS 6 GRUPOS DE. CM. F. Tratamientos 2087.903. 5. 417.581. 969.8645. Error. 28.417. 66. 0.431. Total. 2116.319. 71. P. 0.0000. A. -U. GL. IN. SC. IC. F de V. NT. INVESTIGACION SOBRE Streptococcus pyogenes. FA. CU. LT. AD. DE. M. ED. FUENTE: Datos obtenidos por el investigador, año 2018. 23 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(30) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. TABLA N°04: PRUEBA DE DUNCAN PARA DETERMINAR GRUPOS SIGNIFICATIVOS EN LOS DIAMETROS DE LOS HALOS DE INHIBICIÓN (EN mm) ENTRE LOS 6 GRUPOS DE INVESTIGACION SOBRE Streptococcus pyogenes. 1. Tween80. 12. 6. Aceite esencial de Orégano 25%. 12. Aceite esencial de Orégano 50%. 12. Aceite esencial de Orégano 75%. 12. Aceite esencial de Orégano 100%. 12. 3. 4. 5. A. 15.2. ED. IC. IN. 15.3. 12. 16.1 18.8 24.1. DE. M. Penicilina G. 2. -U. n. NT. Subconjunto para α= 0.05 GRUPOS DE TRATAMIENTO. FA. CU. LT. AD. FUENTE: Datos obtenidos por el investigador, año 2018. 24 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(31) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. TABLA N°05: RESUMEN DESCRIPTIVO DEL EFECTO INHIBITORIO in vitro SEGÚN DIÁMETROS DE LOS HALOS DE INHIBICIÓN (EN mm) POR GRUPOS DE INVESTIGACION SOBRE Streptococcus pyogenes GRUPO DE INVESTIGACION 50%. 75%. 100%. SENSIBILIDAD %. ni. %. ni. %. ni. %. ni. %. 0. 0. 0. 0. 0. 0. 0. 0. 0. 12. 100. 2. 17. 1. 8. 0. 0. 0. 0. 0. 10. 83. 11. 12 100 12 100. 0. 0. 0. 0. 0. 0. 0. 12. 100. 0. 0. 12. 100. 12. 100. Sensibilidad. 0. 0. 0. 0. Sensibilidad. 0. DE. Sumamente sensible. 92. M. media. ED. IC. límite. IN. Sensibilidad. 0. 0. 0. 0. 12 100 12 100 12 100 12 100. LT. AD. TOTAL. ni. A. nula. %. -U. ni. Penicilina Tween80. NT. 25%. FA. CU. FUENTE: Datos obtenidos por el investigador, año 2018. 25 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(32) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. IV. DISCUSION En los últimos 15 años, a pesar de su excelente eficacia in vitro, la tasa de falla de la penicilina ha aumentado dramáticamente desde 7% a casi 40% en algunas regiones del mundo28. Los estudios han demostrado que las dosis recomendadas de. NT. penicilina V oral o penicilina G Benzatina (IM) no lograron erradicar el EGA en la faringitis de inicio agudo en el 35% de los pacientes tratados con penicilina V oral. -U. y el 37% de los tratados con penicilina IM, esto puede ser explicado por: 1). A. Persistencia intracelular de S. pyogenes por proteínas F1, debido a la escasa. IN. penetración de la penicilina en los tejidos amigdalinos, incluidas las células. IC. epiteliales de las amígdalas; 2) Protección de S. pyogenes por bacterias productoras. ED. de β-lactamasa (S. aureus , Haemophilus spp., M. catarrhalis y anaerobios) que. M. son comúnmente parte de la microbiota oral y 3) Congregación entre M. catarrhalis y S. pyogenes, que puede mejorar la colonización de EGA facilitando. DE. su adherencia a las células epiteliales humanas28,29. Es por tal motivo que, con el fin. AD. de determinar nuevas estrategias terapéuticas, ha aumentado el interés en el uso de aceites esenciales como el AEOV y de sus agentes antimicrobianos naturales tales. LT. como los compuestos fenólicos timol y carvacrol10.. CU. El presente estudio evaluó el efecto antibacteriano in vitro del AEOV sobre. FA. Streptococcus pyogenes. Mediante la prueba de crecimiento de UFC (TABLA Nº01), se observó que en las 4 concentraciones de AEOV no hubo crecimiento bacteriano por lo que la concentración mínima inhibitoria (CIM) fue el grupo de menor concentración al 25% (230.81 mg/mL.). Chaftar et al30 evaluaron la CIM de AEOV en diferentes cepas bacterianas, obteniendo que la CIM para bacterias Gram negativas (K. pneumoniae, S. typhimurium, E. coli, P. aeruginosa y L.. 26 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(33) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. pneumophila) varía entre un rango de 0.12 a 0.30 mg/mL y que la CIM para bacterias Gram positivas (B. megaterium, S. epidermidis, S. xylosus, S. haemolyticus, S. saprophyticus, L. monoytogenes) varía entre un rango de 0.30 a 0.13 mg/mL. Además, en otro estudio realizado por Wijesundara y Rupasinghe31 se. NT. encontró que la CIM de AEOV sobre cepas de Streptococcus pyogenes aisladas clínicamente fue de 0.5 mg/mL; por lo que ambas investigaciones demostrarían la. -U. gran capacidad antibacteriana del AEOV incluso a concentraciones mucho menores. A. del 25%. Asimismo; Magi, Marini y Facinelli17 trabajaron con cepas de. IN. Streptococcus pyogenes aisladas clínicamente y demostraron que la CIM de. IC. carvacrol puro (0.064 a 0.256 mg/mL), principal componente del AEOV, era mucho. ED. menor que la CIM del AEOV (0.256 a 0.512 mg/mL), lo que demostraría el poder. M. antibacteriano de este componente.. DE. En cuanto a la composición fitoquímica del AEOV, Leyva et al32 realizaron una revisión sistémica de diversos estudios que evalúan el porcentaje de cada principio. AD. activo del AEOV en diferentes partes del mundo (Argentina, Brasil, Chile, China, Colombia, Grecia, Iran, Italia, España, Serbia, Algeria, entre otros), encontrando. LT. que los componentes que más se repiten en mayor porcentaje fueron carvacrol,. CU. timol, p-cimeno y terpinenos casi en la misma proporción; además reconocen que. FA. los constituyentes y la concentración de los compuestos del AEOV generalmente varían debido a una gran diversidad de factores tales como subespecie, plagas, condiciones del suelo, temporada de cosecha, ubicación geográfica, condiciones climáticas y de crecimiento, método de secado del orégano, técnica de extracción y la parte anatómica de la planta utilizada para la extracción. En el Perú, Tellez y Nolazco33 analizaron químicamente el AEOV cultivado en la ciudad de Tacna. 27 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(34) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. mediante cromatografía de gases, acoplada a espectrometría de masas, la cual encontró como principales componentes del aceite al terpinen-4-ol (26,56 %), timol (18,80 %) y carvacrol (2,24 %). Por otra parte, la investigación mostró que el AEOV al 75% y 100%, según la escala. NT. de Duraffourd, tuvo una sensibilidad media (con un halo de inhibición de 16.1 mm y 18.8 mm respectivamente) (GRAFICO N°01 y TABLA Nº05); esto es explicado. -U. por Kumara et al34 quienes afirmaron que el efecto antibacteriano del AEOV se. A. debe a la acción de sus componentes principales tales como el timol que ocasiona. IN. una perturbación de las fracciones lipídicas de las membranas plasmáticas. IC. bacterianas y el carvacrol que influye en las membranas celulares al alterar la. ED. composición de los ácidos grasos, inducir la fuga y la pérdida de ATP de células. M. bacterianas además de que también puede inhibir la síntesis de flagelina. Chavez et. DE. al35 afirman que los compuestos fenólicos (carvacrol y timol) y los terpenos presentes en el AEOV alteran la membrana celular, lo que resulta en la inhibición. AD. de las propiedades funcionales celulares (producción de energía mediante alteraciones de la cadena respiratoria y transporte de membrana mediante cambios. LT. en su topología) y, finalmente, provocan la fuga del contenido celular interno y la. CU. muerte celular; siendo las bacterias Gram positivas más susceptibles a las. FA. propiedades antibacterianas que las bacterias Gram negativas. Finalmente, al aplicar la prueba de DUNCAN (TABLA Nº04) se determinó que la concentración más efectiva contra Streptococcus pyogenes fue la del 100%, con lo que queda demostrado el efecto antibacteriano del AEOV en todas las concentraciones utilizadas y su utilización debería ser considerado como una nueva alternativa terapéutica en el tratamiento de faringoamigdalitis aguda bacteriana.. 28 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(35) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. V. CONCLUSIONES.  La concentración mínima inhibitoria del aceite esencial de Origanum vulgare (orégano) fue 25% (230.81 mg/mL) frente a Streptococcus pyogenes.. NT.  El diámetro in vitro del halo inhibitorio generado por el AEOV sobre Streptococcus pyogenes al 25% fue 15.17 ± 0.72 mm, al 50% fue 15.33 ± 0.66. -U. mm, al 75% fue 16.08 ± 0.67 mm y al 100% fue 18.75 ± 0.75 mm.. A.  Las cepas de Streptococcus pyogenes utilizadas en el presente estudio mostraron. IN. “sensibilidad media” a los grupos de AEOV con concentraciones de 75% y. IC. 100% en un 100% y a los grupos de AEOV con concentraciones de 25% y 50%. ED. en un 83% y 92% respectivamente, “sensibilidad límite” a los grupos de AEOV. FA. CU. LT. AD. DE. M. con concentraciones de 25% y 50% en un 17% y 8%.. 29 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(36) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. VI. RECOMENDACIONES.  Realizar estudios con AEOV a concentraciones mucho menores al 25%.  Se recomienda aislar los principios activos de Origanum vulgare responsables.  Incrementar investigaciones. experimentales. NT. de su actividad antimicrobiana. para demostrar. -U. antibacteriano del AEOV sobre otras bacterias.. el efecto. A.  Realizar estudios para evaluar el efecto antibacteriano de Origanum vulgare en. FA. CU. LT. AD. DE. M. ED. IC. IN. modelos animales mediante diferentes vías de administración.. 30 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(37) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. VII. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS 1. Espadas D, Flor EM, Borrás R, Poujois S, Muñoz JI. Infección por estreptococo pyogenes en la edad pediátrica: desde faringoamigdalitis aguda a infecciones invasivas. An Pediatr (Barc). 2017: 1-7. NT. 2. Ubillús G, Patiño L, Maza G, Vicuña R, Pregúntegui I, Reyes P et al. Indicación de antibióticos en niños con faringoamigdalitis aguda y test positivo para. -U. estreptococo beta hemolítico del grupo A atendidos en el Instituto Nacional de. A. Salud del Niño, Lima–Perú. Horizonte Médico. 2013; 13(2): 40-45.. IN. 3. Cots JM, Alós JI, Bárcena M, Boleda X, Cañada JL, Gómez N et al.. IC. Recomendaciones para el manejo de la faringoamigdalitis aguda del adulto.. ED. Enferm Infecc Microbiol Clin. 2016; 34(9):585–594. M. 4. Piñeiro R, Hijano F, Álves F, Fernández A, Silva JC, Pérez C et al. Documento. DE. de consenso sobre el diagnóstico y tratamiento de la faringoamigdalitis aguda. An Pediatr (Barc). 2011; 75(5): 342.e1-342.e13. AD. 5. Couloigner V, Graber M. Amigdalitis y sus complicaciones. EMC – Otorrinolaringología. 2014; 43(2): 1-14.. LT. 6. Restrepo MA, Múnera MI, Ramírez BS, Acuña CP. Infección y colonización. CU. faríngea asintomática de niños por Streptococcus pyogenes. Iatreia.2012; 25 (3):. FA. 203-209. 7. González J, Gonzáles IM, Ramiro MT, Quinteiro MT et al. Actualización de un protocolo de actuación para el diagnóstico y tratamiento de la faringoamigdalitis estreptocócica. RqR Enfermería Comunitaria. 2014; 2(4): 31-42. 8. Shulman ST, Bisno AL, Clegg HW, Gerber MA, Kaplan EL, Lee G et al. Clinical Practice Guideline for the Diagnosis and Management of Group A. 31 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(38) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. Streptococcal Pharyngitis: 2012 Update by the Infectious Diseases Society of America. Clinical Infectious Diseases 2012; 55(10):e86–102. 9. Parisi C. Alergia a Betalactámicos en pediatría, puesta al día y realidad en nuestro medio. IntraMed Journal, 2014; 3(1): 1-7. NT. 10. Bassolé I, Juliani H. Essential Oils in Combination and Their Antimicrobial Properties. Molecules. 2012; 17(1): 3989-4006.. -U. 11. García E, Castro FF, Gutiérrez JA, García S. Revisión de la producción,. A. composición fitoquímica y propiedades nutracéuticas del orégano mexicano.. IN. Revista Mexicana de Ciencias Agrícolas. 2012; 3(2): 339-353. IC. 12. Sayeed M, Degaga B, Azam T. Antimicrobial activity of essential oils extracted. ED. from medicinal plants against the pathogenic microorganisms: a review. Issues. M. in Biological Sciences and Pharmaceutical Research. 2014; 2(1): 1-7. DE. 13. Teixeira B, Marques A, Ramos C, Serrano C, Matos O, Neng NR et al. Chemical composition and bioactivity of different oregano (Origanum vulgare) extracts. 2707-2714.. AD. and essential oil. Journal of the Science of Food and Agriculture. 2013; 93(11):. LT. 14. Acevedo D, Navarro M, Monroy L. Composición Química del Aceite Escencial. CU. de Hojas de Orégano (Origanum vulgare). Información tecnológica. 2013;. FA. 24(4): 43-48.. 15. Siroli L, Patrignani F, Montanari C, Tabanelli G, Bargossi E, Gardini F et al. Characterization of oregano (Origanum vulgare) essential oil and definition of its antimicrobial activity against Listeria monocytogenes and Escherichia coli in vitro system and on foodstuff surfaces. African Journal of Microbiology Research. 2014 8(29): 2746-2753.. 32 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(39) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. 16. Boskovic M, Zdravkovic N, Ivanovic J, Janjic J, Djordjevic J, Starcevic M et al. Antimicrobial activity of Thyme (Tymus vulgaris) and Oregano (Origanum vulgare) essential oils against some food-borne microorganisms. Procedia Food Science. 2015; 6(1): 18 – 21. NT. 17. Magi G, Marini E, Facinelli B. Antimicrobial activity of essential oils and carvacrol, and synergy of carvacrol and erythromycin, against clinical,. -U. erythromycin-resistant Group A Streptococci. Frontiers in microbiology. 2015;. A. 6(165): 1-7. IN. 18. Miranda M. Métodos de Análisis de Drogas y Extractos. Instituto de Farmacia y. IC. Alimentos. Universidad Habana de Cuba. 2002.. ED. 19. Albarracín G., Gallo S. Comparación de dos métodos de extracción de aceite. M. esencial utilizando Piper aduncum (cordoncillo) procedente de la zona cafetera.. DE. Universidad Nacional de Colombia de Manizales Ingeniería Química. 2003. 20. NCCLS-National Committee for Clinical Laboratory Standards 2004. Method. AD. for dilution antimicrobial susceptibility tests for bacterial that grow aerobically, 7ma ed., Approved Standard M7-A6. Wayne, Pennsylvania.. LT. 21. NCCLS-National Committee for Clinical Laboratory Standards 2004.. CU. Performance standards for antimicrobial disk susceptibility tests, 7th ed.,. FA. Approved Standard M2-A8, Wayne, Pennsylvania.. 22. Koneman E, Allen S, Dowell V, Janda W, Sommers H, Winn W. Konemam Diagnóstico Microbiológico. 3a ed. Buenos aires: Editorial Médica Panamericana; 2008.. 33 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(40) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. 23. Shibata H, Kondo K, Katsuyama R, Alkyl G. Intensifiers of β -Lactam Susceptibility in Methicillin-Resistant Staphylococcus aureus. Antimicrob Agents Chemother 2005; 49(2): 549-555. 24. Duraffourd C, D’hervicourt, Lapraz J. Cuaderno de fitoterapia Clínica.. NT. Barcelona: Masson, 1987. 25. Clinical an Laboratory Standards Institute. Performance Standards for. -U. antimicrobial susceptibility testing. 25th. Ed. Wayne: CLSI; 2015. A. 26. Declaración de Rio sobre el Medio Ambiente y el Desarrollo. Rio de Janeiro. IN. Rio; 3-14 de junio de 1992. Rio de Janeiro: Departamento de Asuntos. IC. Económicos y Sociales. División del Desarrollo Sostenible. Organización. ED. Mundial de la Salud. 1992.. M. 27. Protocolo de Cartagena sobre Seguridad de la Biotecnología del Convenio sobre. DE. la Diversidad Biológica. Nairobi; mayo de 1992 Montreal: Secretaría del Convenio sobre la Diversidad Biológica. 2000.. AD. 28. Brook I. Treatment Challenges of Group A Beta-hemolytic Streptococcal. LT. Pharyngo-Tonsillitis. International Archives of Otorhinolaryngology. 2017; 21(3):286-296.. CU. 29. Bonofiglio L, et al. Susceptibility to β-lactams in β-hemolytic streptococci. Rev. FA. Argent Microbiol. 2018: 1-5.. 30. Chaftar N, Girardot M, Labanowski J, Ghrairi T, Hani K, Frère J, Imbert C. Comparative evaluation of the antimicrobial activity of 19 essential oils. Adv Exp Med Biol. 2015: 1-15. 34 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(41) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. 31. Wijesundara NM, Rupasinghe HP. Essential oils from Origanum vulgare and Salvia officinalis exhibit antibacterial and anti-biofilm activities against Streptococcus pyogenes. Microbial Pathogenesis. 2018; 117(1): 118-127 32. Leyva N, Gutiérrez EP, Vázquez G, Heredia JB. Essential Oils of Oregano:. NT. Biological activity beyond their antimicrobial properties. Molecules. 2017; 22 (989): 1-24.. -U. 33. Tellez L y Nolazco D. Estudio de la composición química del aceite esencial de. A. orégano (Origanum vulgare spp.) de Tacna. Ingeniería Industrial. 2017; 1(35),. IN. 195-205.. IC. 34. Kumara M, Sayeed M, Rani U. Antimicrobial Properties of Plant Essential Oils. ED. against Human Pathogens and Their Mode of Action: An Updated. M. Review. Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine. 2016: 1-21. DE. 35. Chávez ML, Rodríguez R, Aguilar CN. Chapter 11 - Essential Oils: A Natural Alternative to Combat Antibiotics Resistance. En: Antibiotic Resistance.. FA. CU. LT. AD. Editor(s): Kateryna Kon, Mahendra Rai,. Academic Press. 2016: 227-237.. 35 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(42) ED. IC. IN. A. -U. NT. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. FA. CU. LT. AD. DE. M. VIII. ANEXOS. 36 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(43) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. ANEXO Nº01: Diámetros de halos de inhibición en mm en función a cuatro concentraciones de aceite esencial de Origanum vulgare sobre Streptococcus pyogenes. Control: Penicilina (Control positivo) y Tween80 (control negativo). MEDICIÓN DE LOS HALOS DE INHIBICIÓN Control. NT. Origanum vulgare. Control (-). (+). 75%. mm. mm. 1. 14. 15. 2. 15. 14. IC. 3. 16. 15. 4. 15. 5. 16. 6. 15. 7. G. mm. mm. mm. 16. 20. 24. 6. 16. 19. 23. 6. 15. 19. 24. 6. 16. 18. 25. 6. 16. 16. 20. 23. 6. 16. 15. 18. 24. 6. 15. 16. 18. 24. 6. 15. 16. 17. 19. 25. 6. 9. 16. 15. 16. 18. 25. 6. 10. 15. 15. 16. 18. 23. 6. 11. 15. 16. 17. 19. 24. 6. 12. 16. 16. 17. 19. 25. 6. PROMEDIO. 15.17. 15.33. 16.08. 18.75. 24.08. 6.00. ED. M DE. 15. LT. 14. FA. CU. 8. IN. mm. Tween80. AD. Repeticiones. 100%. A. Numero de. 50%. -U. Penicilina. 25%. FUENTE: Datos obtenidos por el investigador, año 2018. 37 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(44) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. ANEXO N° 02: Número de UFC en cuatro concentraciones del aceite esencial de Origanum vulgare sobre Streptococcus pyogenes. Control: Penicilina (Control positivo) y Tween80 (control negativo). CONCENTRACION MINIMA INHIBITORIA (CIM) Control. NT. Origanum vulgare. (+). Control (-). 50%. -U. Penicilina. 25%. Numero de. 75%. Tween80. UFC/ml. UFC/ml. UFC/ml. UFC/ml. 1. 0. 0. 0. 0. 0. 10⁶. 2. 0. 0. 0. 0. 0. 10⁶. 3. 0. 0. 0. 0. 0. 10⁶. 4. 0. 0. 0. 0. 0. 10⁶. 5. 0. 0. 0. 0. 0. 10⁶. 0. 0. 0. 0. 0. 10⁶. 0. 0. 0. 0. 0. 10⁶. 0. 0. 0. 0. 0. 10⁶. 9. 0. 0. 0. 0. 0. 10⁶. 10. 0. 0. 0. 0. 0. 10⁶. 11. 0. 0. 0. 0. 0. 10⁶. 12. 0. 0. 0. 0. 0. 10⁶. PROMEDIO. 0. 0. 0. 0. 0. 10⁶. DE. AD. 7. CU. 8. LT. 6. IC. IN. UFC/ml. M. UFC/ml. ED. G. FA. A. Repeticiones. 100%. FUENTE: Datos obtenidos por el investigador, año 2018. 38 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(45) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. ANEXO N° 03: Constancia de Asesoría UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE MEDICINA. -U. CONSTANCIA DE ASESORÍA. NT. ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE MEDICINA. Yo, Elva Manuela Mejía Delgado, profesora principal a tiempo completo del. IN. A. Departamento Académico de Ciencias Básicas de la Facultad de Medicina de la. ED. IC. Universidad Nacional de Trujillo.. M. CERTIFICO. DE. Ser asesora de la tesis titulada: “EFECTO ANTIBACTERIANO in vitro DEL ACEITE ESENCIAL DE Origanum vulgare (orégano) SOBRE Streptococcus. AD. pyogenes”, perteneciente al estudiante de Pregrado: Héctor Diego Delgado. LT. Nicolás, identificado con DNI: 74610655, código de matrícula: 1011800313; de la. CU. facultad de Medicina de la Universidad Nacional de Trujillo.. FA. Se expide la presente para los fines correspondientes. Trujillo, 13 de Julio del 2017. Elva Manuela Mejía Delgado Código Docente: 3147 ASESORA. 39 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(46) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. ANEXO N° 04: Constancia de Co-Asesoría UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE MEDICINA. -U. CONSTANCIA DE CO-ASESORÍA. NT. ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE MEDICINA. Yo, Marilú Roxana Soto Vásquez, docente auxiliar a dedicación exclusiva del. IN. A. Departamento Académico de Farmacotecnia de la Facultad de Farmacia y. ED. IC. Bioquímica de la Universidad Nacional de Trujillo.. M. CERTIFICO. DE. Ser Co-asesora de la tesis titulada: “EFECTO ANTIBACTERIANO in vitro DEL ACEITE ESENCIAL DE Origanum vulgare (orégano) SOBRE Streptococcus. AD. pyogenes”, perteneciente al estudiante de Pregrado: Héctor Diego Delgado. LT. Nicolás, identificado con DNI: 74610655, código de matrícula: 1011800313; de la. CU. facultad de Medicina de la Universidad Nacional de Trujillo.. FA. Se expide la presente para los fines correspondientes. Trujillo, 13 de Julio del 2017. Marilú Roxana Soto Vásquez Código Docente: 5727 CO-ASESORA. 40 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(47) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. FA. CU. LT. AD. DE. M. ED. IC. IN. A. -U. NT. ANEXO N° 05: Constancia de Aprobación para ejecución del proyecto. 41 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(48) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. FA. CU. LT. AD. DE. M. ED. IC. IN. A. -U. NT. ANEXO N° 06: Constancia de preparación del aceite esencial. 42 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.