Efecto del extracto etanólico de Cúrcuma longa L sobre Streptococcus mutans ATCC 25175

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(1)Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE ESTOMATOLOGÍA ESCUELA PROFESIONAL DE ESTOMATOLOGÍA. T N U Efecto del extracto etanólico de Cúrcuma longa L. sobre Streptococcus mutans ATCC 25175A I G O L PARA OPTAR TÍTULO PROFESIONAL DE O T A CIRUJANO DENTISTA M O T S E AUTORA: DEChirinos Zare, Anali Angélica D A T TESIS. FA. L U C. ASESOR:. Dr. Guardia Méndez, Gustavo. COASESORA: Dra. Mejía Delgado, Elva TRUJILLO – PERÚ. 2019. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(2) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. DEDICATORIA. A Dios Padre Celestial, por brindarme su amor infinito, fortaleciendo mi corazón e iluminando mi mente, dándome la salud y fuerzas necesarias para luchar día tras día superando obstáculos y dificultades en busca de mi objetivo, permitiéndome llegar a este escalón de mi vida y así poder cumplir uno de mis sueños más anhelados.. O L O. A I G. -. T N U. A la mujer, la cual es motivo de mi esfuerzo y superación en la vida, mi Madre:. María AT OPorMtus cuidados, tu amor y apoyo constante en. FA. AD. DE. T S E. LT. CU. estos. años. de. vida;. por. escucharme,. comprenderme y aceptarme tal como soy; por tu ejemplo y los sabios consejos que me brindas, los cuales fueron el motivo de mi lucha constante. durante. mi. vida. universitaria,. permitiéndome alcanzar el anhelo de ser profesional; por creer siempre en mí.. A mi querido Padre: Wilfredo. Con gran respeto y amor, por sus sabios consejos, su cariño y apoyo; por su comprensión,. esfuerzo. constante. y. sacrificio, sin lo cual no hubiera podido hacer realidad uno de mis más grandes sueños, el ser profesional. I Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(3) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. DEDICATORIA. A la memoria de mi hermana: Carla Quien fue mi principal cimiento, por haber contribuido con sus conocimientos y experiencia en mi formación académica y laboral, sentó en mí las bases de responsabilidad y deseos de superación, en ella tengo el espejo en el cual me quiero reflejar pues sus virtudes infinitas y su gran corazón me llevaron a. O L O. admirarla cada día más.. A I G. -. T N U. AT OM. AD. T L U. C A F. DE. T S E. A mi querida niña: Camila. Quién con su afecto y cariño me ha brindado la mejor de las motivaciones para no rendirme y persistir en mi objetivo, y así poder llegar a ser un ejemplo para ella; quien a su corta edad me ha enseñado a encontrar el lado dulce de la vida; por su sincero y puro amor hacia mí.. II Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(4) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. AGRADECIMIENTO. A mi Dios Padre Celestial, porque tu amor y bondad no tienen fin, por darme las fuerzas necesarias e iluminar mi camino en busca de mi objetivo. A mis padres María y Wilfredo; por ser mi fortaleza, mi raíz, mi razón de ser mejor; mi amor y gratitud eterna.. T N U. A mi asesor de Tesis Dr. Gustavo Guardia Méndez, por haberme brindado la oportunidad de recurrir. -. a su capacidad y conocimiento científico, así como también haberme tenido toda la paciencia. A I G. necesaria para guiarme durante el desarrollo de la tesis.. O L O. A mi co-asesora de Tesis Dra. Elva Mejía Delgado, por su generosidad, enseñanzas,. AT OM. conocimientos compartidos y guiar mis ideas para la elaboración de este trabajo. A mis Maestros de la Escuela de Estomatología, a quienes les debo gran parte de mis. T S E. conocimientos, gracias a su paciencia y sus enseñanzas; finalmente un eterno agradecimiento a esta Prestigiosa universidad la cual me abrió sus puertas, preparándome para un futuro. DE. competitivo y formándome como persona de bien.. D A T. A Ronny por ser un gran amigo y soporte, brindándome su ayuda en momentos de tensión; así. FA. L U C. como compartiendo consejos y conocimientos.. A Jefferson, por brindarme su apoyo incondicional y por creer en mí.. A Willian, por haber participado de cada momento durante y después de mi vida universitaria, por sacarme una sonrisa ante las dificultades.. A todas aquellas personas que directa o indirectamente me ayudaron a que este gran esfuerzo se volviera realidad.. III Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(5) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ÍNDICE. DEDICATORIA……………………………………………………………...……I AGRADECIMIENTO………………………………………………………...…III INDICE…………………………………………………………..………………IV. T N U. RESUMEN………………………………………………………………....……V. -. ABSTRACT…………………………………………………..……………..…VI. O L O. A I G. AT M II. MATERIAL Y MÉTODOS………………………..……………………….20 O T S E III. RESULTADOS…………………………………………………………….39 DE IV. DISCUSIÓN……………………………………..…………………………48 D A T L V. U CONCLUSIONES…………………………………………………………51 C A F VI. RECOMENDACIONES…………………………………………………..52 I.. INTRODUCCIÓN…………………………………………………………...1. VII.. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS………………………..…………..53. VIII.. ANEXOS…………………………………...………………………………65. IV Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(6) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. RESUMEN El presente estudio es de tipo básico, experimental y de régimen libre; el cual tuvo como objetivo evaluar el efecto antibacteriano in vitro del extracto etanólico de rizomas de Cúrcuma longa (Cúrcuma) sobre el crecimiento de Streptococcus mutans ATCC 25175. La prueba de. T N U modificado de pozos en agar; en concentraciones de 5%, 25%, 50%, 75% y 100% del extracto etanólico de rizomas de Cúrcuma A longa. Se I G obtuvo halos de inhibición sensibles en las concentraciones de 75% y O L 100%. O T A Para determinar la Concentración Mínima Inhibitoria, se empleó el M O método de dilución en tubos, ensayando las mismas concentraciones y T EseSsembró en placas con Agar Mueller Hinton – su control; cada cultivo Sangre para determinar DE las Unidades Formadoras de Colonias (UFC). D A Los resultados evidenciaron que la concentración al 100% del extracto T L CUetanólico de rizomas de Cúrcuma longa obtuvo el mayor halo de Susceptibilidad. FA. bacteriana. se. determinó. utilizando. el. método. inhibición (39.63mm) y la concentración mínima inhibitoria fue al 75%.. Por lo tanto, se concluye que el extracto etanólico de rizomas de Cúrcuma longa (Cúrcuma) posee efecto antibacteriano al 75 y 100%.. Palabras clave: extracto etanólico de rizomas de Cúrcuma longa (Cúrcuma), Streptococcus mutans, efecto antibacteriano.. V Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(7) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ABSTRACT The present study is of a basic, experimental and free regime type; which aimed to evaluate the in vitro antibacterial effect of the ethanol extract of Rhizomes of Turmeric longa (Turmeric) on the growth of Streptococcus. T N U and 100% of the ethanol extract of rhizomes of Turmeric longa.-Sensitive inhibition halos were obtained at concentrations of 75% and A100%. I G O To determine the Minimum Inhibitory Concentration, the tube dilution L O and their control; each method was used, testing the same concentrations T A Agar to determine the Colony culture was plated with Mueller Hinton-Blood M O T Forming Units (CFU). S E The results showed that the 100% concentration of the ethanol extract of E D Rhizomes of D Turmeric longa obtained the highest halo of inhibition Aand the minimum inhibitory concentration was 75%. T (39.63mm) L U C Therefore, it is concluded that the ethanol extract of rhizomes of Turmeric A F longa (Turmeric) has 75 and 100% antibacterial effect. mutans ATCC 25175. The bacterial Susceptibility test was determined using. the modified method of agar wells; in concentrations of 5%, 25%, 50%, 75%. Keywords: ethanolic extract of Rhizomes of Turmeric longa (Turmeric), Streptococcus mutans, antibacterial effect.. VI Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(8) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. I.. INTRODUCCIÓN. A través de la historia han surgido diversas teorías que tratan de explicar el origen de la caries. A finales del siglo XVII, el pionero fue Anton Van Leeuwenhoek (1632-1723), quien sugirió la posible relación entre microorganismos y caries dental. 1. T N U se debía a las modificaciones en la dieta de las personas - y que específicamente eran los azúcares los causantes de dichaA caries . I G O A principios del siglo XIX, Parmly en el año 1819 observó que la caries L O comenzaba en los lugares que se producíaT estancamiento de los alimentos A en dirección a la pulpa. y que la lesión progresaba hacia el interior M O Tsu teoría sobre la fermentación y la Robertson en 1835, formuló S E putrefacción de los E restos de alimentos retenidos sobre los dientes. DDayton Miller en 1882 propuso la “Teoría QuimioPosteriormente w. D A T en la cual expresa que la caries se desarrolla como resultado parasitaria”, L U de la capacidad de las bacterias de producir ácidos a partir de hidratos de C FAcarbono provenientes de la dieta. Reiteradas evidencias experimentales El cirujano francés Pierre Fauchard (1678-1761) afirma que la caries dental. 2. sustentaron de manera definitiva los postulados de Miller respecto a la etiología infecciosa múltiple. Más tarde James L. Williams y Green V. Black demostraron la importancia de la placa gelatinosa en la iniciación de la caries3.. 1 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(9) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. En 1924, Clarke aisló ciertos microorganismos a partir de caries de dentina a los que llamó estreptococos mutantes, debido a que con la coloración Gram se observaban de forma más ovalada que redondeada, que es la forma típica de los estreptococos, por lo que él consideró que estas bacterias eran mutantes a este género4. Walter Joseph Loesche, en 1976, postuló la “Hipótesis de Placa. T N U dentobacteriana es la responsable de las enfermedades orales (caries dental y enfermedad periodontal) sin ser relevantes aspectos como A I bacterias específicas o sus niveles de virulencia, una G mezcla heterogénea O L de microorganismos son los causantes de dichas patologías. Al mismo O tiempo propone la “Hipótesis de la Placa ATEspecífica”, establece que, de M en la placa dentobacteriana, sólo toda la población bacteriana presente O T o involucradas activamente en las S unas cuantas son las responsables E enfermedades. En 1994, DE Philip D. Marsh propone la “Hipótesis de la Placa Ecológica”, la D caries dental y la enfermedad periodontal son el resultado de A Tdel balance de los microorganismos residentes de la biopelícula, la pérdida L U a los fenómenos de “estrés” en el ecosistema oral, lo que resulta en debido C FAel enriquecimiento de sólo algunos patógenos orales o microorganismos Inespecífica”, afirma que la acumulación y actividad global de la placa. relacionados a la enfermedad2. En 2013, el grupo de investigación dirigido por Alex Mira Obrador, han desarrollado la “hipótesis tejido-dependiente de la Caries Dental”, afirmando que la caries dental es un proceso de etiología polimicrobiana variable, donde las bacterias productoras de ácidos son el vehículo que penetra el esmalte dental para permitir que otros. 2 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(10) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. microorganismos que degradan la dentina puedan expandirse en la lesión en formación. Por otra parte, dos estudios prominentes de metagenómica publicados en 2010 y 2014, sugieren que la cavidad oral sana tiene un grupo mucho más diverso y enriquecido de especies de hongos que lo que previamente se pensaba y así mismo existe evidencia sobre que también podrían estar involucrados a enfermedades, como caries dental4.. T N U microflora, -. La caries es una enfermedad infecciosa y transmisible de los dientes, de origen. multifactorial,. donde. interactúan:. la. dieta,. la. A I principal característica es la desintegración de los tejidos G calcificados del O diente . Para lograr esta desintegración, losLmicroorganismos deben O T metabolizar los carbohidratos fermentables A provenientes de la dieta M ingerida y como resultado de estaO metabolización se obtendrán ácidos que T dental generando la mencionada S actuarán sobre la superficie E desintegración de tejidos DE . D La caries se ha considerado como la enfermedad de mayor peso en la A Tde la morbilidad bucal a nivel mundial . En la actualidad, su L historia U C distribución y severidad varían de una región a otra y su aparición se asocia A F en gran medida con factores socioculturales, económicos, y del (Streptococcus Mutans y Lactobacillus) y el huésped (diente y la saliva). Su. 5. 6. 5. comportamiento7. Aunque su prevalencia ha disminuido en los países industrializados, afecta entre el 60% y 90% tanto de la población infantil como de la adulta8.. 3 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(11) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. La palabra caries, etimológicamente se deriva del latín Caries, que implica Putrefacción. Según la clasificación Internacional de Enfermedades le corresponde el Código K025. La Organización Mundial de la Salud (OMS) ha definido la caries dental como un proceso localizado de origen multifactorial que se inicia después de la erupción dentaria, determinando el reblandecimiento del tejido duro. T N atiende oportunamente, afecta la salud general y la calidad de vida U - de los individuos de todas las edades . A I G La Organización Mundial de la Salud (OMS) estima que cinco mil millones O L de personas en el mundo tienen cariesOdental. Esta enfermedad T A bucodental, en términos de dolor, deterioro funcional y disminución de la M O calidad de vida, es considerable y costosa. Se estima que el tratamiento T S requerido representa entre E 5% y 10 % del gasto sanitario de los países industrializados, por DEencima de los recursos de muchos países en D desarrollo A . T L Según U el Ministerio de Salud la caries dental afecta al 95% de peruanos C FAdebido a la falta de buenos hábitos de higiene y a la inadecuada del diente y que evoluciona hasta la formación de una cavidad. Si no se. 9. 10. alimentación que se basa en hidratos de carbono, harinas y dulces, sobre todo entre los niños11. La caries se considera un proceso, que resulta del desbalance del equilibrio fisiológico entre los minerales que componen la estructura dentaria y los productos bacterianos presentes en el biofilm de la placa supragingival12.. 4 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(12) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Durante años se ha puesto especial interés en determinar la función ejercida por la placa bacteriana dental en el inicio de la lesión cariosa en lugares específicos del diente13. La placa dental ha sido definida como: una masa blanda, translúcida y muy adherente que se acumula sobre la superficie de los dientes, formada casi exclusivamente por bacterias y sus subproductos14.. T N U enzimáticamente activa, que se adhiere firmemente a la superficie dentaria y que por su actividad bioquímicamente metabólica ha sido propuesta como A I el agente etiológico principal en el desarrollo de la caries” G . O L La cavidad bucal contiene una de las más O variadas y concentradas T A Se estima que en ella habitan poblaciones microbianas del organismo. M O entre 200 y 300 especies y que en 1 mm de biofilm dental, que pesa 1mg, T S se encuentran 10 microorganismos . E E D Dentro del biofilm existen microorganismos con potencial cariogénico, D A aquellos capaces de fermentar carbohidratos y producir ácidos, T L provocando U dos efectos:(a) efecto directo sobre el diente, generando C FAdesmineralización de los tejidos inorgánicos de esmalte y la dentina;(b) La OMS define a la placa dental como “Una entidad bacteriana proliferante,. 15. 3. 8. 5. efecto indirecto, que activa las metaloproteinasas propias de la dentina, las cuales provocan la destrucción de la matriz orgánica del diente .La suma de ambos efectos lleva a la cavitación del esmalte, y a la formación de la lesión de caries14,15.. 5 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(13) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Las primeras bacterias adheridas a la película salival proveen el sustrato para que otros microorganismos también se adhieran a ella. A medida que el biofilm madura las especies que forman parte de ella cambian, dependiendo de la presencia o ausencia de oxígeno (potencial redox), nutrientes y productos metabólicos. De esta forma, el daño que la placa dental produzca se relacionará con las bacterias que la conforman13,16.. T N Uson embargo, la cavidad bucal es selectiva y no todos los microorganismos capaces de establecerse en nichos ecológicos. La mayor parte de los A I microorganismos de la cavidad oral son cocos y bacilos G Gram positivos y O L Gram negativos, anaerobios estrictos, anaerobios facultativos y aerobios . O T A Estos estreptococos tienen su hábitat principal en la cavidad oral y están M O claramente implicados en la colonización de superficies duras y blandas de T S la misma. Su significación E patógena más importante va ligada a la formación de placas, DE gingivitis, periodontitis y a otros procesos D(abscesos periapicales y periodontales y pulpitis). Bajo la odontológicos A T de viridans se agrupa un amplio número de estreptococos . L denominación U C FASu principal hábitat es la superficie dentaria del hombre, pero también Son numerosos los microorganismos que se instalan en la boca, sin. 15. 17. pueden ser identificados en las fauces. Su presencia en placa bacteriana se ve favorecida por el alto nivel de sacarosa de la dieta 18. Cabe mencionar que dentro de los microorganismos considerados cariogénicos Streptococcus. encontramos sobrinus(S.. Streptococcus sobrinus),. mutans. Lactobacillus. (S.. mutans),. acidophilus. (L.. 6 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(14) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. acidophilus); este último se encuentra en un pequeño porcentaje del biofilm dental y posee una baja capacidad de adherencia a la película salival, S. mutans, en cambio, se encuentra en un alto porcentaje, por lo que se consideró como causante de esta enfermedad, dado que cumplía con los postulados de Koch, que se aplicaban para establecer las enfermedades infecciosas1,19.. T N caries, esta relación no es única. Se pueden detectar lesiones de U - caries incluso con ausencia aparente de esta especie, así como se ha encontrado A I colonización de S. mutans sin evidencia detectable de Gdesmineralización O L de los dientes . O T A en parejas y cadenas cortas o Son cocos gram positivos que se asocian M O largas, de aproximadamente 0.5mm-7.5mm de diámetro, dependiendo del T S medio de cultivo. Desde E el punto de vista estructural, pueden distinguirse el núcleo, el citoplasma, DE la membrana citoplasmática y la pared de D mureína . A T L SonU aerobios, aunque pueden desarrollarse en condiciones anaerobias, a C FAveces incluso mejor que en aerobiosis. En cualquier caso, su crecimiento A pesar de que S. mutans está fuertemente asociado en el desarrollo de la. 20. 21. al aire se ve favorecido por una atmósfera del 5-10% de CO2. Su temperatura óptima de desarrollo es de 36 ± 1°C y en relación con las condiciones de cultivo son muy variables, desde los más exigentes, hasta los que incluso se desarrollan en condiciones hostiles22.. 7 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(15) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. A diferencia del resto de los Estreptococos orales, S. mutans es capaz de fermentar diversos azúcares, particularmente el manitol y sorbitol. Si la cantidad de hidratos de carbonos disponibles es limitada, los productos de la fermentación son formato, acetato y etanol. En medios ricos en carbohidratos se genera ácido láctico, el que más se ha asociado con el origen de caries. Esta propiedad es conocida como acidogénica. La. T N entre 7.0 a 5.0, excede a la de los estreptococos orales en la mayoría U de las ocasiones, produciendo cambios en la ecología de la microbiota bucal; A y de otras I estos incluyen el aumento en la proporción de S. mutans G O bacterias acidógenas y acidúricas o tolerancia L al ácido. Esta microbiota Olo que se aumenta el tiempo T cariogénica reduce el pH a niveles bajos, con A M de la ingestión de carbohidratos, de recuperación del pH neutro, luego O T pH en la placa dental bajo 5.4, lo cual manteniendo los valores de 12 S E favorece la desmineralización del esmalte y la producción de caries . DE A partir de la D fermentación de hidratos de carbono, principalmente de la A TS. mutans, puede sintetizar polisacáridos extra celulares (EPS) sacarosa, L Uglucanos (dextrán y leván) y fructanos, que promueven la adherencia como C FAselectiva y la acumulación de un amplio número de estreptococos velocidad con que S. mutans produce ácidos, testeada en rangos de pH. 23. cariogénicos en los dientes, además de aumentar la porosidad y dimensión de la matriz de la placa dental, permitiendo mayor difusión del sustrato a través de la superficie del esmalte, produciendo descenso de los valores de pH en capas más profundas de la placa, favoreciendo un incremento en el desarrollo de caries. Adicionalmente, también sintetiza polisacáridos. 8 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(16) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. intracelulares (IPS) de reserva que pueden ser degradados por dextranasas, fructanasas, y glucógeno fosforilasas, los cuales utilizan cuando no disponen de alimentos24. Sus cualidades para adherirse a la película adquirida radican en dos mecanismos: (a) adherencia sacarosa dependiente, sintetiza polisacáridos extracelulares a partir de hidratos de carbono, los cuales actúan como. T N U adhesión de esta especie a componentes salivales de la película adquirida del esmalte . A I G Por lo tanto, S. mutans sintetiza su propia sustancia adhesiva que actuará O L para unir las bacterias entre sí y a la superficie Odel diente . T Aen la boca del hombre, puede El principal hospedador del S. mutans M O T que van desde 18 a 40°C, coloniza desarrollarse en temperaturas S E especialmente las superficies duras de la cavidad oral (esmalte o cemento); E D se han obtenido también aislamientos a partir de heces humanas. El D A Streptococcus mutans induce lesiones cariosas tanto de superficies lisas, T L fosas Uy fisuras, como en zonas interproximales y cemento radicular . C FAPor tanto, al ser el S. mutans un microorganismo importante del biofilm, adhesivos. extracelulares;. (b). adherencia. sacarosa. independiente,. 23. 25. 17. debe tenerse especial cuidado al realizarse cirugías dentales u otro procedimiento dental donde se lesione mucosa y haya contacto con sangre, pues el microorganismo puede vehiculizarse en sangre y en casos especiales como en pacientes inmunocomprometidos o con previo daño valvular cardíaco podría causar una endocarditis bacteriana 26.. 9 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(17) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. En la práctica de la medicina moderna es alarmante la generación de resistencia de los microorganismos a distintos antibióticos en las terapias de las enfermedades bucales, esto crea la necesidad de encontrar nuevos compuestos que puedan actuar de forma directa sobre la actividad antimicrobiana o inhibiendo los mecanismos de resistencia de los microorganismos, principalmente aquellos con importancia clínica. Las. T N U. plantas medicinales representan una fuente muy importante para encontrar esta clase de compuestos27.. -. A I tradicional son usadas con el mismo fin, paraG el tratamiento de O L enfermedades y estas no forman parte del sistema sanitario principal. O Medicamentos herbarios, estos son todos AT los medicamentos, brebajes M activos formados de plantas u hechos de plantas, rizomas o compuestos O T S otro material herbario . E E En la ConferenciaD Internacional sobre Medicina Tradicional para los Países D celebrada en febrero de 2013, la Directora General de de Asia Sudoriental, A TDra. Margaret Chan, declaró que “los remedios a base de plantas, L la OMS, U C los tratamientos tradicionales y los practicantes de las medicinas A F tradicionales representan la principal fuente de atención sanitaria y, a Los términos medicina complementaria, medicina alternativa o medicina. 28. veces, la única. Esta forma de atención está próxima a los hogares y es accesible y asequible. Además, es culturalmente aceptada y confían en ella muchísimas personas29.. 10 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(18) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. El uso de la medicina tradicional es una práctica común alrededor del mundo; de acuerdo con estadísticas de la organización mundial de la salud (OMS), el 80% de la población de los países en desarrollo recurre a distintos tipos de está, ya sea por costumbre, cultura o porque no encuentran otras alternativas. En los países ricos, en gran parte de las poblaciones las personas recurren a diferentes y diversos tipos de remedios. T N U A nivel internacional se ha comprobado que el uso de medicina tradicional se está haciendo cada vez más habitual, pues el porcentaje de la población A I que emplea la medicina tradicional es de 48% en Australia, G 75% en Francia, O L 70% en Canadá, 42% en EE UU, 38% en Bélgica y 40% en china, pues O utilizan productos de la medicina tradicional ATpara recuperar sus niveles de M salud . O T S A nivel nacional en el Perú, E una investigación realizada en un nosocomio de la ciudad de Lima DEseñalo que alrededor del 70% de los pacientes usó D alguna vez y otra investigación en nosocomios medicina tradicional A Tde provincia evaluó que el 40,4% de las personas usuarias saben L estatales U C alguna terapia de medicina alternativa y el 33% la ha utilizado alguna vez. A F naturales ya que piensan que «natural» es sinónimo de inofensivo 30.. 29. En el departamento de la libertad la medicina tradicional es usada y conocida por los antecedentes ancestrales de sus pobladores ya que la mayoría de sus distritos como Alto Moche son habitados por migrantes de la sierra liberteña quienes arrastran las costumbres con el uso de diversas plantas medicinales31.. 11 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(19) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Dentro de la gran variedad de plantas medicinales que encontramos en nuestro país, tenemos la especie Cúrcuma longa Linn (Cúrcuma), familia de la Zingiberaceae, posee innumerables estudios fármaco-toxicológicos a nivel internacional, pero aún las bases de datos y sistemas informativos están poco documentadas al respecto32. La Cúrcuma ha sido comercializada desde tiempos muy antiguos, por lo. T N U de origen sea el sudeste asiático, concretamente la zona meridional Vietnam y de las Indias orientales donde ha sido cosechada desde hace A I 5000 años . G O L Necesita temperaturas de entre 20 y 30 °C yO una considerable pluviosidad T para prosperar, sobre todo para los sieteAa diez meses de cultivo. Necesita M O altos niveles de luz para crecer, por lo que se encuentra en campos T S abiertos. Crece mejor enE suelos francos, fértiles y bien drenados con pH E ligeramente ácidoD (5 a 6) . D A El género Cúrcuma consiste en alrededor de 110 especies, distribuidas en T L la región U tropical y pacífica de Asia, pero se ha expandido a Latinoamérica C FAdonde es apreciado por su uso en el arte culinario y medicinal. Se ha que es difícil conocer su origen con exactitud. Probablemente el centro de. 33. 34. naturalizado en la Amazonía creciendo semi-silvestre en selva alta y baja respectivamente35. La Cúrcuma fue descrita por Carl Linnaeus, su clasificación taxonómica es la siguiente: Reino Plantae, División Magnoliophyta, Clase Liliopsida, Subclase Commelínidas, Orden Zingiberales, Familia Zingiberaceae,. 12 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(20) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. género cúrcuma, especie cúrcuma longa, Nombre Binomial Cúrcuma Longa Linnaeus36,37. La Cúrcuma es conocida también vulgarmente como: azafrán de la India, rizoma de cúrcuma, raíz de cúrcuma, turmeric, azafrán cimarrón; yuquilla (Cuba), turmérico, jengibrillo (Puerto Rico), palillo cholón, palillo chuncho, guisador, azafrán (Perú)38.. T N Utallos perenne, relacionada con la familia del jengibre. La planta tiene trepadores que alcanzan una altura de 60 a 100 cm. Los rizomas A tienen un I Gy una carne de color color amarillo marrón, una piel externa algo escamosa O L amarillo anaranjado brillante, con extremidades O blancas jóvenes, y un olor T A de rizomas son de 2-5 cm de picante cuando se aplastan. Estas ramas M O largo, en forma de dedo, cilíndrico, comprimido, recto o torcido, con el T S espesor de 1.8 cm. El rizoma E principal es de unos 3 cm de espesor y 5 cm de largo. La cúrcuma DEfresca tiene carne de color naranja brillante, mientras Dseco es de color amarillo limón a amarillo naranja . que el rizoma A T L La U planta de cúrcuma está constituida por: proteínas (6,3%), grasa (5,1%), C FAminerales (3,5%), hidratos de carbono (69,4%), humedad (13,1%), aceite La Cúrcuma es una planta tropical anual, robusta, erecta con rizoma. 39. esencial (1,5-5%). Mientras que los rizomas o el tallo subterráneo contienen curcuminoides (2,5-6%), además los pigmentos polifenólicos y los aceites esenciales40,41. El rizoma de la Cúrcuma fue adoptado como producto medicinal por el Comité de Productos Medicinales Herbales (Committeon Herbal Medicinal. 13 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(21) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Productos-HMPC) el 12 de noviembre de 2009. Esta planta ha sido aplicada para la protección y curación de afecciones cutáneas, hepáticas, frente a úlceras, alteraciones digestivas y contra parásitos intestinales, como remedio de venenos y de picaduras de serpientes y frente a distintas dolencias42. Como se mencionó, dentro de los principios activos de la cúrcuma se. T N U y (18%) -. encuentran curcuminoides (2-6%) y está formado por la curcumina (80%), es. un. compuesto. fenólico,. demetoxicurcumina. A I proteínas y resinas. El componente activo mejor estudiado G es la curcumina O L (curcuminoide), responsable de las propiedades medicinales y O farmacológicas, y del color amarillo vibrante AT . M O Desde 1974 se conoce la actividad antibacteriana “In Vitro” del extracto T S alcohólico de Cúrcuma, de Ela curcumina y de sus aceites esenciales contra las bacterias Gram-positivas DE (Lutomski et al., 1974). Apisariyakal et al, en D las propiedades antifúngicas del uso tópico del aceite de 1995, observaron A Ten un experimento realizado en cobayas, y en condiciones “In L Cúrcuma, U C Vitro” sobre varios aislados patológicos . Además, Kiuchi et al. (1993) A F estudiaron satisfactoriamente el efecto de la ciclocurcumina de la Cúrcuma bisdemetoxicurcumina (2%); así como aceites esenciales, azucares. 43. 44. como un agente antiparasitario. Posteriormente, se ha comprobado que la curcumina inhibe la transactivación de la proteína Tat segregada por el HIV1, la cual podría estar implicada en la patogénesis del SIDA (Mazumdar et al., 1995). En la medicina china los extractos de Cúrcuma se aplican a nivel tópico directamente sobre la piel para la cicatrización de las heridas. Se ha. 14 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(22) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. demostrado que tanto la Cúrcuma como la curcumina son muy efectivas en la prevención y curación del cáncer de piel, la aplicación de la Cúrcuma en el tracto gastrointestinal consigue un efecto beneficioso tanto a nivel físico como funcional. Recientemente, Kawamori et al. (1999) han comprobado que la curcumina ejerce su efecto quimioprotector tanto al inicio como en la promoción y en la progresión del cáncer de colon en ratas, aumentando la. T N un compuesto antiinflamatorio en modelos de inflamación aguda, subaguda U y crónica en ratones y ratas, aunque no tiene fuertes efectos analgésicos Agástrica, ni tiene I ni antipiréticos, tampoco produce una significativa irritación G O efectos en el sistema nervioso central (Srimal y Dharvan, 1973, 1985) . L O T Por ello, se han realizado trabajos de investigación en donde se demostró A Mejerce la Cúrcuma longa frente al S. la fuerte acción antimicrobiana que O T S mutans. E E Mandroli PS. y D Bhat K. en el año 2013, investigaron el potencial Dde la curcumina contra cepas estándar de bacterias antibacteriano A T Las cepas bacterianas de S. mutans (ATCC 35668), L endodónticas. U C Actinomyces viscosus (ATCC 10048), Lactobacillus casei (ATCC 334), A F Porphyromonas gingivalis (ATCC 33277), Prevotella intermedia (ATCC apoptosis de las células tumorales. Se ha demostrado que la Cúrcuma es. 44,45. 25611), Enterococcus faecalis (ATCC 29212), las cuales se reactivaron colocando placas en un medio de cultivo agar sangre. La curcumina tiene actividad antibacteriana contra todos los organismos de prueba, excepto E. faecalisya que no hubo acciones contra E. faecalis. Por lo tanto, podemos concluir que la curcumina tiene el potencial para convertirse en. 15 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(23) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. medicamento. para. el. tratamiento. de. diversas. enfermedades. endodónticas46. Najah AM y Neama YH. en el año 2015, evaluaron el efecto inhibitorio de la curcumina en S. mutans y S. pyogenes en crecimiento; en comparación con el antibiótico Ciprofloxacina utilizando el método de difusión de pozo.. T N U ciprofloxacina. La actividad antimicrobiana de la curcumina en S.-mutans y S. Pyogenes. La curcumina puede ser útil para controlarA las biopelículas I G dentales y, posteriormente, la formación de caries O dentales . L O Keerthika S, Bennis MB, Sivaswamy V.T en el año 2017 evaluaron la Aetanólico de curcumina contra actividad antimicrobiana del extracto M O Candida albicans y S. mutansTmediante el método de difusión en agarS E pozo. La curcumina, un producto activo de la Cúrcuma tiene un amplio E D espectro de acciones biológicas. La curcumina se diluyó con etanol y con D A solución salina tamponada con fosfato. Se probó la actividad antimicrobiana T L usando U un método de difusión en un pocillo de agar. Se observó un C FAcrecimiento confluente en Candida albicans y no se observó crecimiento en Los resultados mostraron que la curcumina inhibió significativamente la. actividad de S. mutans y S. pyogenes en crecimiento a comparación de la. 47. S. mutans, lo que indica que la curcumina fue eficaz contra S. mutans y no tiene actividad antimicrobiana contra Candida albicans48. Gokul G y Geetha RV. en el año 2017, tuvieron como objetivo encontrar el efecto del extracto de Cúrcuma sobre la formación de biofilm por S. mutans.. 16 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(24) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Al agregar 100 ug / ml de extracto de curcumina en las placas de cultivo de S. mutans, se mostró un 78,35% de inhibición de la formación de biofilm. A partir del resultado, es evidente que la curcumina tiene un efecto inhibidor muy bueno sobre el crecimiento de S. mutans. Se concluye la acción inhibitoria de la curcumina sobre S. mutans mediante la prevención de la formación de biofilm49.. T N esencial de Cúrcuma longa sobre las propiedades cariogénicas U - de S. mutans. Se probaron los efectos inhibitorios del aceite esencial de Cúrcuma A I sobre el crecimiento y la producción de ácido del S. Gmutans. El aceite O L esencial de Cúrcuma inhibió la formación de biopelículas de S. mutans en O T concentraciones superiores a 0,5 mg / A ml. Estos resultados sugieren que M cariogénicas de S. mutans . Cúrcuma puede inhibir las propiedades O T S De las evidencias anteriores E ya mencionadas y debido a la gran E biodiversidad deDplantas medicinales existentes como alternativas Dse ha llevado a cabo investigar dentro del campo terapéuticas, A T diversos extractos de plantas que contengan actividades L Odontológico U C antibacterianas que ayuden al control, disminución e incidencia de una de A F las enfermedades orales con mayor prevalencia en el mundo, como es la Lee KH, et al. en el año 2011, evaluaron los efectos inhibitorios del aceite. 50. caries dental, la cual es originada por el microorganismo S. mutans. La presente investigación buscó difundir las propiedades bactericidas de la Cúrcuma longa L. contra agentes patógenos, como es el S. mutans y a su vez aportando al conocimiento científico para investigaciones futuras, así. 17 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(25) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. como la realización de estudios in vivo, ya que en el Perú no se han realizado investigaciones similares. Así pues, conforme a lo ya citado anteriormente, el propósito del presente estudio fue determinar el efecto antibacteriano “In Vitro” del extracto etanólico de rizomas de Cúrcuma longa L. “CÚRCUMA” sobre el crecimiento de Streptococcus mutans ATCC 25175.. 1.1 . PROBLEMA. O L O. A I G. -. T N U. ¿El extracto etanólico de Cúrcuma Longa L. tiene efecto antibacteriano sobre Streptococcus mutans ATCC 25175?. 1.2 . HIPÓTESIS. AT OM. T S E. El extracto etanólico de Cúrcuma longa si tiene efecto antibacteriano. E D concentración utilizada. D A T L U C. sobre Streptococcus mutans ATCC 25175, el cual varía de acuerdo a la. FA. 18 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(26) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 1.3 . OBJETIVOS. 1.3.1. Objetivo General: Evaluar el efecto antibacteriano “In vitro” del extracto etanólico de rizomas de Cúrcuma longa “Cúrcuma” sobre el crecimiento de Streptococcus mutans ATCC 25175.. 1.3.2. Objetivos Específicos:. A I G. -. T N U.  Determinar la suceptibilidad antibacteriana “In vitro” del. O L extracto etanólico de rizomas de Cúrcuma longa “Cúrcuma”, en O T concentraciones de 5 %, 25 A %, 50%, 75% y 100 % mediante el M método modificado deO pozos en agar y escala de Duraffourd. T S  Determinar la concentración mínima inhibitoria (CMI) in vitro del E extracto etanólico DE de rizomas de Cúrcuma longa “Cúrcuma” D el crecimiento de Streptococcus mutans ATCC 25175, sobre A LTmediante la turbidez y espectrofotometría, en concentraciones crecimiento de Streptococcus mutans ATCC 25175 frente al. U C FA. de 5 %, 25 %, 50%, 75% y 100 %.  Determinar la concentración mínima bactericida (CMB) in vitro del extracto etanólico de rizomas de Cúrcuma longa “Cúrcuma” sobre el crecimiento de Streptococcus mutans ATCC 25175, mediante el conteo de Unidades formadoras de colonias, en concentraciones de 5%, 25%, 50%, 75% y 100 %.. 19 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(27) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. II.. MATERIAL Y MÉTODOS. 1. TIPO Y AREA DE ESTUDIO: La presente investigación según su orientación es básica y según su diseño de contrastación, experimental “in vitro”.. T N La población en estudio estuvo conformada por el conjunto de U placas petri que contenían cada una de las distintas concentraciones (5%, 25%, ACúrcuma Longa I 50%, 75% y 100%) del extracto etanólico de rizomas de G O con siembra adecuada de la cepa de Streptococcus mutans ATCC L O 25175 (3x10 UFC), en el laboratorio deT Microbiología de la Facultad de A M De Trujillo en el año 2019. Medicina de la Universidad Nacional O T S 2.1. Criterios de Inclusión E - Placas Petri con DEsiembra adecuada de Streptococcus mutans previo D con el extracto etanólico de rizomas de Cúrcuma Longa enfrentamiento A T enL distintas concentraciones. CU. 2. DEFINICIÓN DE LA POBLACION MUESTRAL:. 8. FA. - Placas Petri empleadas para determinar la Concentración Mínima. Bactericida (CMB) que presentaron inhibición o no del crecimiento bacteriano (presencia o ausencia de halos de inhibición con diámetro mayor de 8mm). - Placas Petri empleadas para la determinación de la Concentración Mínima Inhibitoria (CMI), que no presenten crecimiento bacteriano ni contaminación por otros microbios.. 20 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(28) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.2. Criterios de Exclusión - Placas Petri que después del proceso de incubación se encontraron contaminadas por otros microorganismos (hongos o bacterias).. 3. CONSIDERACIONES ÉTICAS: Se consideró la manipulación y desecho de las muestras sobre todo de. T N U la Bioseguridad en Laboratorios de Microbiología y Medicina durante ejecución del trabajo. A I Este trabajo contó a su vez con la autorización delG Comité Permanente O L de Investigación de la Facultad de Estomatología de la Universidad O Nacional de Trujillo (Anexo 1) y se siguió ATlos principios de la Declaración MMundial, adoptada por la 18 Médica de Helsinki de la Asociación Médica O T Mundial (Helsinki 1964) S y revisada por la 64 Asamblea General de E Fortaleza – Brasil E D2013. D A T ESTADÍSTICO DE MUESTREO: 4. DISEÑO L U C 4.1 UNIDAD DE ANÁLISIS A F la cepa ATCC 25175 de Streptococcus mutans de acuerdo al manual de. a. a. La unidad de análisis para determinar la susceptibilidad bacteriana estuvo constituida por el diámetro del halo de inhibición. Para determinar la CMB y CMI, la unidad de análisis estuvo constituida por las Unidades formadoras de colonias.. 21 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(29) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 4.2 UNIDAD DE MUESTREO La unidad de muestreo estuvo constituida por el registro del conjunto de colonias formadas en las placas Petri que cumplan los criterios de selección. 4.3 MARCO MUESTRAL. T N U. El marco muestral fue el registro del conjunto de colonias formadas en las placas Petri. 4.4 TAMAÑO DE LA MUESTRA. O L O. A I G. -. Para establecer el tamaño de la muestra se hizo uso de la fórmula. AT OM. de comparación de grupos:. Donde:. DE. T S E. n: Número de repeticiones a efectuar en cada investigación.. D A T. Z α/2: 1.96, para una confianza de 95 % o un α= 0,05. FA. LZ β U C. :. 1-. 0.84, para una potencia de prueba de 80 % o un β= 0,20 2:. Diferencia mínima entre los promedios de cualquier pareja de. grupos para rechazar la igualdad. S= (. 1-. 2);. Valor asumido por no haber estudios similares.. Reemplazando en las fórmulas, se tiene:. 22 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(30) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. n = (1.96+0.84)2 2 ( (. 1-. 1-. 2 2). = (2.8)2 x 2 = 16. 2 2). n= 16 repeticiones Luego: La muestra estuvo conformada por 16 Placas Petri para cada grupo. 4.5 DISEÑO DE CONTRASTACIÓN. T N U del investigador en el fenómeno Aque se analiza. I G O Experimental L O. En función de. En función de la interferencia. Tipo. comparación entre. de. Poblaciones.. Estudio Comparativo. AT OM. 100 g de polvo del rizoma de Cúrcuma. D A T. DE. T S E. longa + etanol al. L U C. 70°. FA. Concentración de 5% (50 mg/mL). Concentración de 25% (250 mg/mL). Concentración de 50% (500mg/mL). Concentración de 75% (750 mg/mL). Concentración de 100% (1000 mg/mL). 23 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(31) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Grupos PLACAS PETRI ANTES DEL. PLACAS PETRI DESPUÉS. EXPERIMENTO. DEL EXPERIMENTO. O. 5%. O. 25%. O. O. D A T. FA. L U C. DE. O. O. O. O1 O2. OO L O. AT OM. 50%. T S E. A I G. -. T N U. 3. 75%. O4. 100%. O5. Control +. O6. Control -. O7. 24 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(32) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Donde: O: Placas petri con Cepas de Streptococcus mutans en Agar Mueller Hinton, antes de iniciar el tratamiento. O1, O2, O3, O4, O5, O6, O7: Placas petri con Cepas de Streptococcus mutans después de haber sido sometidas a los distintos tratamientos. T N - O Efecto antibacteriano del extracto etanólico de rizomas de U Cúrcuma longa al 5%. A - O Efecto antibacteriano del extracto etanólicoI de rizomas de G O Cúrcuma longa al 25%. L O etanólico de rizomas de - O Efecto antibacteriano del extracto T A Cúrcuma longa al 50%. M O T del extracto etanólico de rizomas de - O Efecto antibacteriano S E Cúrcuma longa al 75%. E D - O Efecto antibacteriano del extracto etanólico de rizomas de D A Cúrcuma longa al 100%. T L - O Control Positivo: Bencilpenicilina Sódica U por 48 horas: 1:. 2:. 3:. 4:. 5:. C A F -. 6:. O7: Control negativo: Cepas de Streptococcus mutans sin someterse a algún tratamiento.. 25 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(33) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 5. PROCEDIMIENTO E INSTRUMENTO DE RECOLECCIÓN DE DATOS: 5.1. RECOLECCIÓN DE LA MUESTRA 1 kg de rizomas de Cúrcuma longa, las cuales fueron recolectadas del caserío de Miraflores, distrito de Santo Tomás de Cutervo, provincia de Cutervo perteneciente al departamento de Cajamarca.. T N U. 5.2. IDENTIFICACIÓN Y DETERMINACIÓN TAXONOMICA DE LA ESPECIE. -. Un ejemplar completo de ambas especies fue llevado al Herbarium. A I G. Truxillense de la Universidad Nacional de Trujillo para su. O L O. identificación y posterior verificación taxonómica.. AT M Los ejemplares recolectados fueron transportados al laboratorio de O T Farmacognosia de la Facultad de Farmacia y Bioquímica de la S E Universidad Nacional de Trujillo. E D 5.3.1.D Selección: A LTUna vez recolectados los rizomas, estas fueron seleccionadas. 5.3. PREPARACIÓN DE LA MUESTRA VEGETAL. U C FA. teniendo en cuenta que estén en buenas condiciones, que no tengan ataques de hongos51.. 5.3.2. Lavado y desinfección: El lavado de los rizomas se realizó con abundante agua, procediendo después a una desinfección con hipoclorito de sodio a una concentración de 80 ppm51.. 26 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(34) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 5.3.3. Secado y molienda:. Para el secado se procedió a cortar en rodajas de 2-4 mm de espesor y se colocó sobre papel kraft. Luego se llevaron a una estufa de convección forzada (40C). Una vez secados los rizomas, estos se procedió a moler con ayuda de un molino hasta polvo.. T N U20. El polvo obtenido se pasó a través de un tamiz de malla N° A I 5.3.5. Almacenamiento: G O L El polvo obtenido se guardado en un O frasco de vidrio de color T ámbar de boca ancha. A M O 5.3.6. Preparación delTextracto etanólico ES E g de polvo del rizoma de Cúrcuma longa. Luego se Se pesó 100 D colocó en un frasco de vidrio de color ámbar y se añadó etanol D A al 70º Gay Lussac (GL) cantidad suficiente hasta cubrir la T L muestra por sobre 2 cm de altura. Se mezcló bien, teniendo en 5.3.4. Tamizaje:. U C FA. cuenta que la mezcla debe ocupar como máximo las ¾ partes del recipiente. Se tapó el frasco y se maceró por 7 días, agitándose 15 minutos, dos veces al día. Transcurrido el tiempo de maceración, se filtró cada macerado, usando una bomba de vacío, con papel de filtro Whatman N° 1. Al líquido filtrado se le denominó extracto etanólico51,52. A continuación, el extracto etanólico se concentró en un rotavapor hasta obtener el extracto blando. Estos se llevaron a secar a la estufa a 40 ºC. Al producto resultante se le denominó. 27 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(35) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. extracto seco. Finalmente, a partir del extracto seco obtenido, se prepararon las concentraciones de 5% (50 mg/ml), 25% (250 mg/ml), 50% (500 mg/ml), 75% (750 mg/ml) y 100% (1000 mg/ml). Los extractos se guardaron en frascos de vidrio ámbar y estuvieron. en. refrigeración. (4-8°C). hasta. su. posterior. utilización51,52.. T N U. 5.4. PREPARACIÓN DEL INÓCULO DE Streptococcus mutans 5.4.1.. Obtención de la cepa. A I G. -. La cepa de Streptococcus mutans fue obtenida del laboratorio Gen. O L perteneciente a la Facultad de Ciencias Médicas de la Universidad O T Nacional de Trujillo. A M O 5.4.2. Preparación de la cepa T S Ecultivadas en tubos de ensayo con tapa rosca en Las cepas fueron E D medio Agar soya tripticasa-sangre, se incubaron bajo condiciones de D microanaerobiosis a 37ºC por 48 horas para obtener colonias A T Ljóvenes. Lab y reactivada en la Sección de Microbiología y Parasitología,. U Los tubos fueron girados entre las manos durante 30 segundos, para C FA una distribución adecuada de los microorganismos. 5.4.3.. Sembrado. Usando un hisopo estéril, el cual fue embebido en el tubo del cultivo preparado, conservando una distancia de 10 cm de la llama de un mechero, se sembró en placas Petri conteniendo Agar Tripticasa soya- sangre para Streptococcus mutans, hisopando uniformemente. 28 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(36) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. sobre toda la superficie del agar y girando cada placa 30° unas 5 veces aproximadamente.. 5.5 Determinar el efecto inhibitorio (Prueba de Susceptibilidad). Luego de realizar el sembrado, se llevó a cabo la prueba de susceptibilidad utilizando el método modificado de pozos en agar.. T N buscando obtener un pozo de 6mm de diámetro, con bordes Ucontó uniformes y hasta el fondo de la caja de Petri (cada placa Petri con 4 pozos equidistantes). Haciendo uso de un hisopo estéril se Adel agar Mueller I procedió a inocular masivamente sobre la superficie G O Hinton- Sangre la suspensión bacteriana y los controles (turbidez L equivalente al patrón 0.5 McFarland), O y se esperó 15 minutos para T permitir la absorción de este en A la superficie del medio. Se evaluó un extracto por cada placa M petri, un pozo por concentración del O Tinoculó 10µL de la dilución del extracto a mismo; en cada pozo se S probar y como grupo E control positivo a Bencilpenicilina Sódica; E negativo con etanol al 96%. Posteriormente las además un control D placas D se incubaron a 37°C durante 24 horas. Finalmente se realizó A de la susceptibilidad antimicrobiana, por observación y la lectura T ULmedición de los halos de inhibición en mm alrededor de cada pozo, Con una pipeta tipo Pasteur estéril se perforó el medio de cultivo. C A F. debiendo medir el área con una regla milimetrada. Se tuvo en cuenta la escala de Duraffourd53.. 5.6 Determinar la concentración mínima inhibitoria (CMI). Para concentración mínima inhibitoria se realizó el método de diluciones en tubos. Se utilizaron 6 tubos de ensayo para el microorganismo, de los cuales: cinco tuvieron las concentraciones. 29 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(37) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. de 0.8ml del extracto etanólico (etanol 70%) de Cúrcuma longa al 5%(50mg/ml), 25%(250mg/ml) 50%(500mg/ml), 75%(750mg/ml) y 100%(1000mg/ml) respectivamente. Después se inoculó 0.2ml de la bacteria en concentraciones semejantes al tubo 0.5 de la escala de Mac Farland, que posee una concentración bacteriana de 1.5x108 bacterias por ml. en cada uno de los tubos correspondientes. Para uniformizarlos, se agitaron. El sexto tubo correspondió al control con Bencilpenicilina Sódica, se añadió 0,8 ml de Bencilpenicilina Sódica. T N U. y 0.2 ml de la bacteria. Además, se tuvo un tubo de la bacteria sola. sin tratamiento (control negativo). Luego se colocaron los tubos en la estufa a 37°C por 24 horas.. -. A I la CMI por absorbancia y transmitancia mediante G el uso del O espectrofotómetro a un rango de longitud L de onda 550 nm. O T A M Etanólico de Cúrcuma longa Efecto Bactericida del Extracto O TStreptococcus mutans sobre el crecimiento de S E Se determinó el efecto bactericida sembrando la muestra de cada E uno de losD tubos de ensayo, de donde se tomó 0,1ml. de las D con una jeringa de tuberculina estéril, se sembró en suspensiones A T con Agar Mueller Hinton – sangre previamente preparadas, placas L U haciendo uso del asa de Driglasky se procedió a esparcir de forma Se procedió a observar la turbidez y se realizó la determinación de. C A F. homogénea la muestra en toda la placa y se repitió 16 veces este procedimiento por cada concentración. Luego se incubaron todas las placas sembradas en estufa a 37ºC por 24 horas en una jarra de Gaspak en condiciones de microanaerobiosis con 5 a 10% de CO2. Después a las 24 horas se realizó el conteo de UFC/ml. de cada una de las placas (16 placas para cada dilusión). La placa en la que no se observan bacterias, será la concentración que tenga efecto bactericida54.. 30 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(38) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Se utilizó las siguientes ecuaciones para calcular las UFC/ml y UFC/g: UFC/ml= NCx100 FD. UFC/g= NCx100x1.5 FDx0.5. T N U por gramo, NC es el número de unidades formadoras de colonia contabilizadas en placa y FD es el Factor de Dilución (1/10000) . A I Los resultados obtenidos fueron registrados en G fichas de recolección O de datos para su análisis. L O T Este procedimiento se realizó con cada una de las diferentes A concentraciones del extracto etanólico de cúrcuma longa. M Ofueron registrados en las fichas de T Los resultados obtenidos recolección de datos ES(Anexos 3, 4, 5, 6, 7 y 8) para su posterior análisis. DE D A TCONTROLES L 5.7. U Donde, UFC/ml es la cantidad de unidades formadoras de colonia. por mililitro, UFC/g es la cantidad de unidades formadoras de colonia 55. C A F. Para determinar la concentración mínima bactericida: Se utilizó como control positivo, Bencilpenicilina Sódica. Para determinar la concentración mínima inhibitoria: Se utilizó como control positivo, Bencilpenicilina Sódica; y como control negativo, la suspensión estándar de Streptococcus mutans.. 31 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(39) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 5.8. INSTRUMENTO Para la prueba de susceptibilidad bacteriana, se midieron los halos de inhibición de forma visual directa en el que se empleó una regla milimetrada. Para la CMI y CMB, el conteo de las UFC también se realizó de forma visual directa con un contador de colonias, que es un aparato con fondo cuadriculado y lupa, donde el resultado fue anotado en la hoja de protocolo de datos.. A I G. -. T N U. 6. VARIABLES DE ESTUDIO Y ESCALAS DE MEDICIÓN 6.1. IDENTIFICACIÓN DE VARIABLES. AT OM. O L O. VARIABLES. T S E. DIMENCIONES. D A T. DE. ESCALA TIPO DE INDICADORES. DE VARIABLE MEDICIÓN. Concentraciones. 75%. del extracto. 50%. etanólico de. 25%. rizomas de. 5%. Cúrcuma Longa.. 100%. Extracto. L U C. INDEPENDIENTE. FA. etanólico de rizomas de. Cualitativa. Nominal. Cuantitativa. Razón. Cúrcuma Longa.. Efecto DEPENDIENTE. Escala de Susceptibilidad:. antibacteriano. Durafford:. 32 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(40) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. sobre. Halo de. -Nula: (-). crecimiento de. Inhibición según. diámetro < 8mm. Streptococcus. el diámetro (mm). -Sensible: (+). mutans. diámetro de 8mm a 14mm -Muy Sensible: (++) diámetro de 14mm a 20mm -Sumamente. A I G. Sensible: (+++). O L O. -. T N U. diámetro>20mm Concentración. AT OM. Mínima. Inhibitoria. T S E. Nº UFC/ml. Concentración. D A T. FA. DE. Mínima. Bactericida. L U C. 33 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(41) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 6.2. DEFINICIÓN DE VARIABLE 6.2.1 Variable Independiente. Extracto etanólico de Rizomas de Cúrcuma Longa  Definición Conceptual: Mezcla integrada por los principios activos de los rizomas de. T N técnica de maceración; haciendo uso del alcohol como U mejor agente extractor y conservante de la eficacia terapéutica de las A I plantas. G O L  Definición Operacional: O T Extracto cuyo solvente es el etanol, el cual contiene los principios A M Longa. La preparación del activos de los rizomas de Cúrcuma O T extracto de rizomasS de cúrcuma longa se utilizará en diferentes E5 %, 25 %, 50%, 75% y 100 %. concentraciones al DE D A T 6.2.2. Variable Dedependiente L U Cúrcuma longa, en donde el solvente es el etanol mediante la. C A F. Efecto antibacteriano sobre el crecimiento de Streptococcus mutans . Definición Conceptual: Se denomina efecto antibacteriano al efecto que produce un agente capaz de eliminar o inhibir el crecimiento y proliferación de un microorganismo, sin dañar el huésped u organismo que los porta 56.. 34 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(42) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Cepa estándar de Streptococcus mutans con nomenclatura 25175, es una bacteria gran positiva, con capacidad cariogénica57,58.. . Definición Operacional: Fue evaluado mediante la determinación de la Concentración. T N U así como mediante el método de susceptibilidad bacteriana, en el que se la determina el diámetro del halo de inhibición. A I G O L O Susceptibilidad bacteriana T A M  Definición Conceptual: O T S E concentración al agente antibiótico necesario Se refiere a la mínima para producir DEuna disminución del tamaño original del inoculo D en un porcentaje mayor o igual al 99.9% . bacteriano A T L  Definición Operacional: CU Mínima (CMI) Inhibitoria y Concentración Mínima Bactericida (CMB);. 59. FA. Se. interpretó. como. la. mínima. concentración. del. Efecto. antibacteriano del extracto etanólico de rizomas de Cúrcuma longa en el que el diámetro del halo de inhibición sea mayor a 8 mm. Se tuvo en cuenta la escala de Duraffourd para su valoración respectiva.. 35 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(43) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. La. escala. de. Duraffourd. es. utilizada. para. determinar. cualitativamente el efecto inhibitorio in vitro, según diámetro de inhibición53. • Nula (-): para un diámetro inferior a 8 mm. • Sensibilidad límite (sensible = +): para un diámetro comprendido entre 8 a 14 mm.. T N • Sumamente sensible (+++): para un diámetro superior a 20 U mm. A I Concentración mínima inhibitoria (CMI) G O L  Definición Conceptual: O T Es la menor concentración deAantibiótico capaz de inhibir el M O crecimiento de 10 bacterias en 1 ml de medio de cultivo, tras 18 a T 24 horas de incubación. ES Se clasifica la sensibilidad de un germen E frente a un D antibiótico en función de sus respectivas CMI . D A T  L Definición Operacional: CU • Medio (muy sensible = ++): para un diámetro entre 14 y 20 mm.. 5. 56. FA. Es interpretada como la mínima concentración del extracto etanólico de rizomas de Cúrcuma longa al que inhiba el crecimiento de Streptococcus mutans ATCC 25175 después de su incubación. Utilizando el espectrofotómetro, el cual proyectó un haz de luz monocromática (longitud de onda 550nm) a través de una muestra y mide la cantidad de luz que es absorbida por dicha muestra, así. 36 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.