Efecto del extracto hidroalcohólico de la raíz de lepidium meyenii (maca roja) sobre lipoperoxidación inducida en células hepáticas de rattus norvegicus var albinus

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(1)Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA. Y. BI. O. Q. UI. M IC. A. ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA. AC I. A. “EFECTO DEL EXTRACTO HIDROALCOHÓLICO DE LA RAÍZ DE Lepidium meyenii (MACA ROJA) SOBRE LIPOPEROXIDACIÓN INDUCIDA EN CÉLULAS. FA. RM. HEPÁTICAS DE Rattus norvegicus var. albinus”. AUTORES:. BI BL IO. TE CA. DE. TESIS I. AGUILAR RAMOS, VIANCA LUZ A. MARCELO LUCIANO, MARIA LORENA.. ASESOR: Dr. Q.F. YBAÑEZ JULCA, ROBERTO. TRUJILLO – PERÚ 2014 1 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(2) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. AGRADECIMIENTOS. Jehová Dios. Gracias por darnos la vida. M IC. A. y por permitir que. UI. podamos compartir junto a nuestra familia. O. Q. momentos bonitos. Y. BI. que quedarán en el recuerdo por siempre.. AC I. A. Gracias Dios. por enseñarnos el camino de la sabiduría y la felicidad,. FA. RM. por ser nuestra. DE. fortaleza y esperanza,. TE CA. por ayudarnos a seguir adelante con éxito permitiendo. BI BL IO. la realización de este trabajo,. pues sin ti no podríamos llegar a ningún lado. Aunque tengamos muchos desafíos no nos preocupamos. Confiamos plenamente en ti Jehová Dios porque tú nos amas. y siempre serás la luz que ilumine nuestro camino.. i2 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(3) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. A los Señores: Genaro Marcelo Sifuentes y María Luciano Pereda, mis padres, los seres más importantes de mi vida que siempre me han apoyado y han estado junto. fortaleza. para. superar los. M IC. han dado. A. a mí en mis logros. Gracias a ellos que me. UI. momentos difíciles y con sus consejos me. Q. han sabido guiar por el buen camino.. BI BL IO. TE CA. DE. FA. RM. AC I. A. Y. BI. O. M. Lorena Marcelo Luciano.. A los Señores: Sixto Aguilar Yauri. y. María Ramos Rojales, mis padres,. a. quienes les doy las gracias por su cariño, guía y apoyo, por su invaluable ayuda que siempre me han proporcionado, pues con ello han contribuido al logro de mis metas. Les estaré siempre agradecida por continuar junto a mí en esta etapa de mi vida.. Vianca L. Aguilar Ramos.. 3ii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(4) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Agradecemos a la Mg. Anabel González Siccha y a la Mg. Carmen Marín Tello, por su. colaboración,. disponibilidad. y. generosidad al compartir su experiencia y conocimientos en la realización de la presente investigación.. BI BL IO. TE CA. DE. FA. RM. AC I. A. Y. BI. O. Q. UI. M IC. A. Las Autoras.. A los Profesionales: Santiago león Florián, Germán Narro Cabezas, Luis Ruiz Gil. Les damos las gracias por su comprensión, amabilidad y apoyo, por contribuir y ayudarnos al desarrollo del presente trabajo. 4iii. Las Autoras.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(5) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Nuestro especial Agradecimiento al:. Dr. Roberto Ybañez Julca Por sus enseñanzas, ideas y conocimientos compartidos,. A. por su apoyo y amistad. UI. BI. O. Un excelente profesional. Q. que lo estudiado en el proyecto.. M IC. que nos permitieron aprender mucho más. Y. a quien apreciamos mucho y le damos las gracias. AC I. A. por sus observaciones, recomendaciones,. RM. sugerencias, correcciones. FA. y orientaciones en la formulación de la tesis,. DE. así como en la revisión y. TE CA. desarrollo de esta investigación.. BI BL IO. Además de sus conocimientos académicos nos brindó su amistad sincera,. nuestro respeto para usted y admiración; estamos seguras que sus consejos y ejemplo ayudará a culminar con éxito nuestra carrera.. Las Autoras 5iv Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(6) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. PRESENTACIÓN. M IC. A. Señores miembros del Jurado Dictaminador:. De conformidad con las Disposiciones Legales y vigentes del Reglamento de. Q. UI. Grados y Títulos de la Facultad de Farmacia y Bioquímica de la Universidad Nacional de. AC I. A. Y. BI. O. Trujillo, sometemos a vuestro elevado criterio el presente informe intitulado:. RM. “EFECTO DEL EXTRACTO HIDROALCOHÓLICO DE LA RAÍZ DE Lepidium meyenii. TE CA. DE. DE Rattus norvegicus var. albinus”. FA. (MACA ROJA) SOBRE LIPOPEROXIDACIÓN INDUCIDA EN CÉLULAS HEPÁTICAS. BI BL IO. Esperamos vuestra aprobación y dejamos a su criterio la calificación del presente informe.. Trujillo, Marzo de 2014. Las Autoras.. 6v Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(7) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. UI. M IC. A. JURADO DICTAMINADOR. Q. Mg. Anabel González Siccha. O. ______________________________. DE. FA. RM. AC I. A. Y. BI. Presidenta. TE CA. Mg. Carmen Marín Tello. BI BL IO. ____________________________ Miembro. Dr. Roberto Ybañez Julca ___________________________ Miembro 7 vi Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(8) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. RESUMEN. En la presente investigación se determinó el efecto del extracto hidroalcohólico de la raíz de Lepidium meyenii (maca roja) sobre lipoperoxidación inducida con acrilamida en células hepáticas de Rattus norvegicus var. albinus. Se realizó una distribución aleatoria en cuatro grupos, con 6. M IC. A. especímenes para el grupo Blanco y 12 especímenes para el grupo Control, así mismo para el Problema I y Problema II. Se les administró por vía oral durante un mes, extracto hidroalcohólico. Q. UI. de la raíz de Lepidium meyenii a dosis de 1g/Kg/día para el grupo Problema I y 2g/kg/día para el. BI. O. Problema II; mientras que el grupo Blanco solo recibió agua y comida ad libitum y el grupo Control. Y. recibió placebo (NaCl 0.9%) . Se indujo a lipoperoxidación, con 4mg/kg/día de acrilamida a todos. AC I. A. los grupos a excepción del grupo Blanco, administrándoles por vía oral durante 28 días a través de. RM. una sonda nasogástrica. El día 14 después de la inducción con acrilamida se sacrificaron la mitad. FA. de los especímenes de todos los grupos a excepción del grupo Blanco, al completar el día 28. DE. después de la inducción se sacrificaron el resto de especímenes de todos los grupos incluyendo el grupo Blanco. En cada sacrificio se extrajeron los hígados, y posterior determinación dela. TE CA. lipoperoxidación según niveles de Malondialdehido (MDA) expresados en nmol/mL, usando el. BI BL IO. método colorimétrico de sustancias reactivas al ácido tiobarbitúrico (TBARS) a 532 nm de longitud de onda. Paralelamente se realizó la determinación de transaminasas (U/L). El Lepidium meyenii (maca roja) presenta efecto antioxidante en dosis de 1g y 2g/kg expresado en la disminución de los niveles de Malondialdehido; siendo más bajos los niveles de MDA y transaminasas en la dosis de 2 g/Kg (P< 0.001).. Palabras Clave: transaminasas.. Lepidium. meyenii,. lipoperoxidación,. acrilamida,. malondialdehido,. 8vii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(9) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ABSTRACT. In the present investigation it was determined the effect of the hydro-alcoholic extract of the root of Lepidium meyenii (red maca) on lipoperoxidation induced by acrylamide in liver cells of Rattus. A. norvegicus var. albinus. We performed a random distribution into four groups, with 6 specimens. M IC. for the White group and 12 specimens for the control group, also for Problem I and Problem II.. UI. Were administered for one month, hydroalcoholic root extract of Lepidium meyenii at doses. O. Q. 1g/Kg/día for Problem I and 2g/kg/día for group Problem II, while the White group only received. Y. BI. food and water ad libitum and the control group received placebo (NaCl 0.9%). To lipid. A. peroxidation was induced with acrylamide 4mg/kg/day all groups except the White group,. AC I. administering orally for 28 days through a nasogastric tube.. On day 14 after induction with. RM. acrylamide half the specimens of all the groups were sacrificed except White group, to complete the. FA. day 28 after the induction of other specimens of all groups including the White group were. DE. sacrificed. At each sacrifice, livers are removed, and subsequent determination levels according. TE CA. lipoperoxidation by malondialdehyde (MDA) expressed in nmol / mL, using the colorimetric method of substances thiobarbituric acid reactive (TBARS) at 532 nm wavelength. Transaminase. BI BL IO. (U/L) was determined in parallel. Lepidium meyenii (red maca) exhibits antioxidant effect at 1 g dose and 2g/kg expressed in decreasing the levels of malondialdehyde; being lower MDA levels and transaminase dose of 2 g / kg (P <0.001).. Keywords: Lepidium meyenii, maca red, lipoperoxidation, acrylamide, antioxidant, malonaldehyde, transaminases.. 9viii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(10) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ÍNDICE. Pág.. AGRADECIMIENTOS ........................................................................................................ i PRESENTACIÓN ................................................................................................................. v JURADO DICTAMINADOR ............................................................................................. vi. M IC. A. RESUMEN ............................................................................................................................ vii. UI. ABSTRACT ......................................................................................................................... viii. O. Q. I. INTRODUCCIÓN ................................................................................................ 1. BI. II. MATERIAL Y MÉTODO ................................................................................... 9. A. Y. 2.1 MATERIAL ........................................................................................ 9. AC I. 2.1.1. Material Biológico ...................................................................................... 9. RM. 2.1.2. Material de Laboratorio .............................................................................. 9. FA. 2.2 METODOS Y TÉCNICAS ............................................................................. 11. DE. 2.2.1 Obtención de la especie vegetal ..................................................................... 11. TE CA. 2.2.2 Preparación del Extracto Hidroalcohólico de Lepidium meyenii ................... 11 2.2.3 Preparación de la Acrilamida ......................................................................... 12. BI BL IO. 2.2.4 Administración ............................................................................................... 12 2.2.5 Animales y Tratamiento ................................................................................. 13 2.2.6 Realización de la Curva de Calibración ......................................................... 17 2.2.7 Análisis Estadístico ........................................................................................ 18. 10 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(11) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. I.. INTRODUCCIÓN. El empleo de las altas temperaturas, en combinación con otros factores externos al alimento, puede dar lugar a la formación de algunos compuestos tóxicos que además de reducir el valor biológico, inciden en la seguridad del mismo. Estas sustancias químicas se denominan contaminantes químicos de procesado. Son compuestos que no estaban presentes en el alimento fresco y cuya. M IC. A. génesis está directamente relacionada con el proceso tecnológico y/o culinario aplicado. Se conocen. UI. una serie de contaminantes químicos de procesado como son las aminas heterocíclicas, los (1) (2) (3). .. BI. O. Q. hidrocarburos aromáticos policícilos, las nitrosaminas, y más recientemente la acrilamida. Y. La acrilamida (AA), C3H5NO, es un polvo cristalino, de color blanco soluble en agua. Es un. AC I. A. intermediario químico usado en la producción y síntesis de poliacrilamidas, las cuales se emplean. RM. para el tratamiento de las aguas municipales de consumo, las de desecho y en la limpieza de aguas. FA. industriales de residuos sólidos antes de su vertido o reutilización, la poliacrilamida empleada en el. DE. tratamiento de aguas no debe contener más de un 0,05% del monómero residual. Así mismo la (AA). TE CA. se usa de forma extensa en los laboratorios moleculares, ya que se emplea como gel de cromatografía. Por otro lado este monómero también está presente en el humo de tabaco por. BI BL IO. calentamiento del material biológico. Además, se ha informado que esta sustancia se encuentra presente en materia vegetal como las papas, zanahorias, rábanos, lechuga, col china, perejil, cebolla, espinaca, arroz, en el azúcar y aceitunas (1) (2) (4).. Investigaciones recientes han puesto de manifiesto valores elevados de acrilamida principalmente en aquellos alimentos que incorporan almidón en su composición y que han sido sometidos a un tratamiento térmico a altas temperaturas. La formación de acrilamida aumenta a partir de 120ºC siendo la temperatura óptima 180ºC. (2) (5) (6). .. 1 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(12) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Según el estudio realizado por la OMS en 5 países: Noruega, Suecia, Suiza, Reino Unido y Estados Unidos, en el año 2002, se determinaron los niveles de acrilamida en diferentes alimentos (papas fritas, papas en ojuelas “Chips”, café, pasteles, galletas dulces, panes arrollados y tostadas). Se halló acrilamida en casi todos los productos alimenticios analizados, de ahí surge la posibilidad de que podría haber acrilamida en otros productos alimenticios no analizados todavía. Los niveles promedio más elevados de acrilamida se encontraron en las papas fritas en rodajas y en bastones. UI. M IC. A. (FAO/OMS, 2002) (2) (4) (7).. O. Q. La exposición a la acrilamida en los productos alimenticios se ha convertido en una preocupación. BI. en todo el mundo debido a la generación de una variedad de alimentos fritos y al horno durante la. AC I. A. Y. cocción (4).. RM. Ha sido demostrado, que la acrilamida causa diversos efectos tóxicos en animales de. FA. experimentación, es genotóxica y cancerígena a roedores de laboratorio, causa mayor incidencia. DE. tumoral en una variedad de sitios. La Agencia Internacional para la Investigación en Cáncer ha. 2A)”. (3) (4) (8) (10). TE CA. clasificado a la acrilamida como un “probable carcinógeno para los seres humanos (GRUPO IARC . Los estudios epidemiológicos en humanos a las exposiciones industriales y. BI BL IO. accidentales indican que el sistema nervioso es el principal sitio de la toxicidad como resultado a tales exposiciones (1) (3) (8).. En el cuerpo humano, la acrilamida se oxida al epóxido glicidamida (2, 3-epoxypro-pionamide) a través de un reacción enzimática que envuelve el citocromo P450 2E1. La (AA) se somete a biotransformación por conjugación con el glutatión. y es, probablemente, la principal vía de. desintoxicación. Tanto la (AA) y la glicidamida puede formar aductos de hemoglobina, pero sólo la glicidamida se ha demostrado que forma aductos con grupos amino del ADN. (9). . Se demostró a. través de estudios que los altos niveles de (AA) pueden causar mutaciones, citotoxicidad, 2 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(13) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. incrementar los niveles de peroxidación lipídica y formación de radicales libres de oxígeno por agotamiento del glutatión reducido (GSH) (2) (10).. Los radicales libres son productos normales del metabolismo aeróbico celular. Entre las diferentes fuentes de ERO en la célula se encuentran: la cadena respiratoria mitocondrial, que emplea aproximadamente el 80-90% del O2, los citocromos P450, la NADPH-oxidasa , la xantina-oxidasa,. (12) (13). M IC. .. UI. la ciclooxigenasa (COX) (11). A. y las enzimas implicadas en las rutas metabólicas del ácido araquidónico, como la lipooxigenasa y. O. Q. Otra de las grandes fuentes de ERO, especialmente en el hígado, son las oxidasas de función mixta. BI. del citocromo P450. Algunas de estas enzimas también son importantes para metabolizar sustratos. A. Y. normalmente presentes en el organismo, como ácidos grasos, colesterol, esteroides y ácidos biliares.. AC I. Las reacciones bioquímicas catalizadas por las moléculas del citocromo P450 emplean O2,. RM. generándose durante estas reacciones cantidades pequeñas de ERO; sin embargo, el grado de. FA. generación de ERO puede variar considerablemente dependiendo del metabolito degradado y de la. DE. molécula del citocromo P450 implicada (14) (15) (16).. TE CA. Las especies reactivas de oxígeno (ROS): hidroxilo (OH●), peróxido de hidrógeno (H2O2), anión. BI BL IO. superóxido (O2‐), y las sustancias reactivas del nitrógeno (RNS): óxido nítrico (NO●) y peroxinitritos (ONOO●) se caracterizan por tener electrones desapareados y son altamente reactivos. Estos radicales libres dañan las macromoléculas (lípidos, proteínas, hidratos de carbono y ácidos nucleicos) y alteran los procesos celulares (funcionalidad de las membranas, producción de enzimas, respiración celular, inducción génica, etc.). Estas sustancias, en condiciones fisiológicas, participan en la respuesta inflamatoria defensiva frente a procesos infecciosos o inflamatorios; pero en circunstancias patológicas, puede aparecer una excesiva proliferación de ROS, este desbalance a favor de una proliferación no compensada se denomina estrés oxidativo (11) (12) (17).. 3 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(14) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. El estrés oxidativo se debe a un desequilibrio entre los mecanismos prooxidantes y antioxidantes que conduce a la lesión celular y que parece implicado en enfermedades tales como ateroesclerosis, Cáncer,. Insuficiencia. Renal. Aguda,. Diabetes. Mellitus,. Alzheimer,. Cirrosis,. Lesiones. Hepatocelulares entre otros (12) (18) (19) (20).. La hepatopatía relacionada con el consumo de acrilamida se debe a los efectos genotóxicos en el. A. hepatocito, probablemente a través de daño oxidativo del ADN inducido por ROS intracelular y el. UI. M IC. agotamiento de GSH (10) (21) (22).. O. Q. La enzima CYP2E1 tiene especial interés para el desarrollo de la hepatopatía, es especialmente. BI. activa en la producción de ERO, ya que es una proteína desacoplada que genera ERO incluso en. A. Y. ausencia de sustrato añadido. La acrilamida es metabolizada por el CYP2E1 y su actividad. RM. AC I. aumenta después del consumo de esta sustancia (10) (15).. FA. El estrés oxidativo induce la necrosis y apoptosis del hepatocito, ambas elevadas en el consumo de. DE. acrilamida con pocos antioxidantes del tipo glutatión (GSH). Las ERO producen un gran daño en la membrana, conduciendo a la degradación oxidativa de los lípidos perturbando su función, a este. TE CA. proceso se le denomina peroxidación lipidica (P.L). Estas alteraciones estructurales contribuyen a la. BI BL IO. rotura de la membrana plasmática y salida del contenido celular, lo que estimula la inflamación. Las enzimas de escape en el hígado son un parámetro indirecto para evaluar la intensidad de la lesión hepática, como los valores séricos de aspartato aminotransferasa (AST) y alanina transferasa (ALT) (14) (15) (16). .. Entre los productos generados durante el proceso oxidativo de los lípidos de membrana destacan el malondialdehido (MDA) y los 4-hidroxialquenales (4-HDA), moléculas que frecuentemente son marcadores de peroxidación lipidica (10) (15).. 4 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(15) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. El estrés oxidativo puede contrarrestarse por la defensa antioxidante del hepatocito, que induce mecanismos tanto enzimáticos como no enzimáticos. Los antioxidantes frenan la reacción de oxidación reduciendo radicales libres y quelando metales, pero a costa de destruirse ellos mismos. Entre las defensas antioxidantes de tipo enzimático están: a) la superóxido-dismutasa (SOD1, SOD2, SOD3), localizándose a nivel mitocondrial. Las tres isoformas dismutan el O2- en H2O2 y O2; b) la catalasa se encuentra en los peroxisomas; su función es eliminar el H2O2 generando H2O y O2;. M IC. A. y c) la glutatión-peroxidasa y glutatión-reductasa, son capaces de descomponer el H2O2 al tiempo. O. Q. UI. que oxidan el glutatión (16) (23).. BI. La ingesta de antioxidantes presente en los alimentos es un factor protector de la salud importante.. A. Y. En la actualidad la medicina natural ha ido cobrando mayor fuerza, precisamente en los países. AC I. industrializados, donde se constata actualmente la tendencia a utilizar productos biológicos. FA. RM. naturales como “Fitofármacos” (24) (25).. DE. Dentro de su flora, el Perú, cuenta con especies vegetales muy variadas, muchas de ellas con. TE CA. propiedades antioxidantes como el perejil, el tomate, fresas, naranjas, brócoli, pimiento, betarraga, maca entre otros alimentos ricos en vitamina C y E (tocoferol) y. otros con presencia de. BI BL IO. carotenoides y flavonoides (24)(25) (26).. Recientemente se han descubierto en algunos alimentos otros antioxidantes no nutrientes: los compuestos fenólicos. Algunas fuentes son los frijoles (isoflavonas), cítricos (flavonoides), cebolla (quercetina), aceitunas (polifenoles). También se han encontrado algunos antioxidantes fenólicos en el vino tinto y te verde (12) (16) (18) (25). Son numerosos los estudios epidemiológicos que relacionan el consumo elevado de alimentos de origen vegetal, ricos en estos compuestos con una menor incidencia de enfermedades relacionadas con procesos de oxidación (25) (26).. 5 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(16) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. La especie vegetal Lepidium meyenii conocida comúnmente como “maca” es una crucífera, de la familia de las brassicaceas que crece tradicionalmente en los andes centrales peruanos. Esta adaptada a condiciones ecológicas muy frías, estas zonas se caracterizan por tener temperatura promedios entre 4 y 7 ºC, alta irradiación solar, heladas frecuentes, vientos fuertes y suelos ácidos (pH < 5) (26) (27).. M IC. A. La maca, es una planta herbácea anual que mide 10-20 cm de alto, su raíz principal es engrosada, no. UI. es un tubérculo, es un hipocólito, presenta de 12 a 20 hojas radicales, enteras o partidas, de porte. O. Q. arrosetada, inflorescencia con tallo de hasta 30 cm, flores típicamente crucíferas, semillas ovoides. BI. de 2 mm de largo, raíz engrosada, tuberosa, en forma de rabanito (napiforme), hasta 8cm de. AC I. A. Y. diámetro (27).. RM. Crece en los Andes Centrales del Perú, especialmente en la Pampa de Junín (Meseta del. (27). . Se han descrito diferentes variedades de maca de acuerdo al color de su hipocólito,. DE. genética. FA. Bombón) entre los 3800 y 4500 m.s.n.m. En la puna, se encuentra la fuente mayor de variabilidad. TE CA. siendo las mas estudiadas las variedades, roja, amarilla y negra; difiriendo entre ellas no solo en. BI BL IO. color de su hipocólito sino también en su constitución fitoquímica y acción biológica (28) (29).. La maca, contiene: entre 12 y 18 % de proteínas, aminoácidos esenciales, bajos niveles de grasa, principalmente constituidos por ácidos grasos insaturados y, alta concentración de ácidos grasos esenciales; varios tipos de minerales entre los que se cuentan el calcio, fosforo, zinc, magnesio, hierro, potasio, sodio, cobre, boro, manganeso y vitaminas A, B1, B2, B12, C, D3, E y P. Es usada como reconstituyente, antirraquítico, antianémico, en problemas de disfunción hormonal, en el tratamiento de síntomas pre y post menopáusicos, como energizante, revitalizador y para combatir la desnutrición y disminuir la fatiga y el estrés. Fitoquímicamente, contiene: alcaloides, taninos,. 6 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(17) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. saponinas y esteroles, glucosinolatos, específicamente, el p-metilbencilisotiocianato, considerado como el responsable del efecto sobre la fertilidad (28) (30).. La maca roja tiene un alto contenido de proteínas y potasio y bajo contenido de azucares solubles, rivoflavina, y hierro en comparación con la maca negra. Aporta una buena cantidad de vitamina C, calcio, zinc y yodo.. La presencia de ciertos aminoácidos (fenilalanina, tirosina e histidina). M IC. A. favorecen su función antiestrés (18) (29).. UI. Entre las propiedades de la maca roja se tiene que combate la osteoporosis, desinflama la próstata,. O. Q. es antioxidante y energizante natural, además ayuda a combatir los problemas de la menopausia (26). BI. (31) (32). A. Y. .. AC I. Por todo lo expuesto anteriormente y con el fin de contribuir en la investigación de esta especie. RM. nativa peruana, el presente trabajo no solo pretende demostrar el efecto antioxidante del extracto. FA. hidroalcohólico de la raíz de Lepidium meyenii, sino aportar con conocimientos que comprueben su. DE. efectividad como droga, realizando ensayos in vivo a fin de que en el transcurso del tiempo pueda. TE CA. garantizar la elaboración de productos fitoterapéuticos de uso seguro y eficaz para el tratamiento de problemas de salud relacionadas con el estrés oxidativo, de tal forma que puedan ser utilizados por. BI BL IO. la población.. Por lo que en el presente trabajo se plantea el siguiente problema: ¿Cuál es el efecto del extracto hidroalcohólico de la raíz de Lepidium meyenii (maca roja) sobre lipoperoxidación inducida en células hepáticas de Rattus norvegicus var. albinus?. 7 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(18) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 1. HIPÓTESIS: La raíz de Lepidium meyenii “maca roja” tiene efecto antioxidante lo cual se expresa en la disminución de malondialdehido en membranas de células hepáticas de Rattus norvegicus var. albinus.. M IC. A. 2. OBJETIVOS:. Q. Determinar el efecto antioxidante del extracto hidroalcohólico de la raíz de Lepidium. O. . UI. 2.1 Objetivo general:. Y. BI. meyenii “maca roja” sobre lipoperoxidación inducida en células hepáticas de Rattus. AC I. A. norvegicus var. albinus.. FA Determinar el efecto del extracto hidroalcohólico de la raíz de Lepidium meyenii en. DE. . RM. 2.2 Objetivos específicos:. TE CA. dosis de 1 y 2 g /kg. sobre lipoperoxidación inducida expresada en niveles de. . BI BL IO. malondialdehido en células hepáticas de Rattus norvegicus var. albinus.. Comparar el efecto de las dosis de 1 y 2g/ kg del extracto hidroalcohólico de la raíz de Lepidium meyenii. sobre lipoperoxidación inducida expresada en niveles de. malondialdehido en células hepáticas de Rattus norvegicus var. albinus.. . Determinar y correlacionar los niveles séricos de transaminasas (GOT y GPT) con la lipoperoxidación inducida expresada según niveles de malondialdehido en células hepáticas de Rattus norvegicus var. albinus. 8. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(19) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. II.. MATERIAL Y MÉTODO. 2.1 MATERIALES: 2.1.1. Material Biológico:. 2.1.1.1 Especie Vegetal: Se emplearon las raíces pulverizadas y liofilizadas de Lepidium meyenii (maca. A. . M IC. roja) obtenidas del Centro de Ventas “CAYENATUR” de la Universidad. UI. Peruana Cayetano Heredia – Lima. Con las siguientes especificaciones: Lote Nº. O. Q. 201011, 3g por sobre y fecha de Vencimiento: octubre de 2014.. Y. Se empleó 42 especímenes de Rattus norvegicus var. albinus, hembras pre-. A. . BI. 2.1.1.2 Animales de Experimentación:. AC I. púberes con una edad promedio de 60 días, con pesos que oscilan entre 180 y. RM. 200 g en aparente buen estado de salud, obtenidas del bioterio del Instituto. Material de Laboratorio:. . TE CA. 2.1.2.1 Fármacos:. DE. 2.1.2. FA. Nacional de Salud – Lima.. Ketamina Amp. 500mg/10ml. BI BL IO. Laboratorio: SANDERSON Lote Nº: 11030821 FV: 10-2017. . Suero Fisiológico Fco. (0.9%). Laboratorio: BRAUN MEDICAL Lote Nº: 10311242 FV: 03-2016. 2.1.2.2 Reactivos: . Acrilamida en polvo q.p Fco. Laboratorio: MERCK Lote Nº: K41948509 FV: 31-01-2015. . Tampón fosfatos 50 mM pH 7.4. . Ácido Tricloroacético 10%. 9 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(20) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Ácido Tiobarbitúrico 0.67%. . N-butanol-piridina (15:1 V/V). . Kit de Transaminasas (GTP y GOT). . Agua Destilada. . Agua Bidestilada. . Malondialdehido (1,1,3 3-tetraetoxipropano). M IC. A. . UI. 2.1.2.3 Material de Vidrio: Pipetas 1mL, 5mL y 10 mL.. . Fiolas 50 mL, 100mL y 500 mL.. . Placas Petri. . Tubos de ensayo. . Vasos de precipitación 50 mL, 250 mL y 1000 mL.. . Probetas100 mL.. . Varillas de vidrio. . Embudo de vidrio. . Frascos de vidrio. . Morteros. TE CA. DE. FA. RM. AC I. A. Y. BI. O. Q. . 2.1.2.4 Equipos:. pHmetro – “Metter Toledo”. . Balanza analítica – “Meter Toledo”.. . Espectrofotómetro – “Genesys 10uV. Thermoelectron”. . Cocina eléctrica – “Colvex”. . Centrifuga refrigerada Universal 320 “Hettich centrifuguen”.. . Refrigeradora “Coldex”. . Equipo para baño maria “Memmert”. . Equipo de Disección. . Cámara de Flujo Laminar (Laboratorio de Genética y Biología Molecular de la. BI BL IO. . Facultad de Ciencias Biológicas).. 10 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(21) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. . Piceta. . Micropipetas y puntas. . Tubos eppendorf 1.5mL.. . Bolsas de hielo.. . Guantes.. . Mascarilla. . Jeringa de tuberculina, 5cc, 10 cc y 20cc. . Jaulas metálicas. . Gaza. . Papel de filtro. . Papel adsorbente. . Tijeras y bisturí. . Calculadora CASIO. Q O BI Y A AC I RM. 2.2 MÉTODOS Y TÉCNICAS:. Obtención de la especie vegetal:. FA. 2.2.1. M IC. Gradillas. UI. . A. 2.1.2.5 Otros:. DE. Las raíces de Lepidium meyenii (maca roja) se obtuvieron como extractos. TE CA. liofilizados, concentrados en presentación de sachets de 3g; adquiridas en un buen estado de conservación, calidad y forma del Centro de Ventas de la Universidad. 2.2.2. BI BL IO. Peruana Cayetano Heredia – Lima.. Preparación del Extracto Hidroalcohólico de Lepidium meyenii (31): Se obtuvieron los hipocólitos de Lepidium meyenii (maca roja) de Carhuamayo, Junín a 4000 metros de altitud, identificados por los Investigadores Botánicos de la Universidad Peruana Cayetano Heredia. Los hipocólitos fueron secados y pulverizados. Para obtener el extracto etanólico se usó el método de Soxhlet, colocando en el balón alcohol de 96º y se sometió a extracción. El producto se deja. 11 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(22) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. en reposo para enfriar y luego se liofiliza. El liofilizado de maca roja es envasado en sachets y expendido por “CAYENATUR”. El extracto alcohólico que se obtiene de este proceso posteriormente es diluido en agua para la administración de los especímenes, transformándose en un extracto hidroalcohólico.. 2.2.2.1 Dosificación:. M IC. A. Las dosis escogidas para la administración fue de 1g /kg de peso/ día para el. UI. grupo Problema I y 2g /kg de peso/día para el grupo Problema II. El liofilizado. O. Q. de Lepidium meyenii (maca roja) obtenidas de “CAYENATUR” fueron disueltas. BI. en 600ml de agua bidestilada a una cocentración de 0.15g/ml (dosis de 1g/kg) y. A. Y. 0.45g/ml (dosis de 2g/kg), se colocó en frascos ámbar para su posterior uso. Preparación de la Acrilamida (10):. FA. 2.2.3. RM. AC I. durante un mes.. DE. La dosis escogida para la acrilamida fue de 4mg/kg de peso/día, para el grupo. TE CA. Control, Problema I y Problema II. La acrilamida se diluyó en 1120ml de agua bidestilada a una concentración de 0.86mg AA/ml, se colocó en un frasco ámbar y. BI BL IO. se agitó con una varilla de vidrio para su posterior uso durante 28 días. Todo el procedimiento se realizó en la cámara de flujo laminar proporcionada por la Facultad de Ciencias Biológicas.. 2.2.4. Administración: La administración de la maca roja y de la acrilamida fue por Vía Oral, se utilizó sondas nasogástricas N° 4.. 12 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(23) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.2.5. Animales y Tratamiento:. 2.2.5.1 Preparación de los especímenes: . Los especímenes seleccionados fueron. colocados en jaulas metálicas, en. condiciones de laboratorio sometidas a las mismas características ambientales de temperatura, e iluminación. Se mantuvo con acceso a comida (purina) y agua ad libitum durante un periodo necesario de adaptación. En estas condiciones se. M IC. A. distribuyó los grupos de estudio. Al término de los tratamientos se anestesió los. UI. animales y fueron sacrificados para obtener muestras de sangre e hígados en. Y A. 2.2.5.2 Distribución de los especímenes:. BI. O. Q. donde se midió los indicadores de daño hepático.. GRUPO I: Blanco. FA. . RM. AC I. Los animales fueron distribuidos en cuatro grupos:. DE. Constituido por 6 especímenes a los cuales se les mantuvo con comida y agua. GRUPO II: Control. BI BL IO. . TE CA. ad libitum durante dos meses, al término de este tiempo fueron sacrificadas.. Constituido por 12 especímenes a los cuales se les administró por vía oral suero salino (0.9%) 1.5 mL/día durante un mes, luego se indujo el estrés oxidativo con Acrilamida 4 mg/ kg de peso/ día por 28 días. El día 14 después de la inducción con AA se sacrificó la mitad de especímenes y se extrajo los hígados para su posterior análisis. El segundo sacrificio de los especímenes restantes se realizó al finalizar los 28 días de inducción.. 13 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(24) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. . GRUPO III: Problema I. Constituido por 12 especímenes a los cuales se les administró 1g/Kg de peso/día de Lepidium meyenii durante un mes, luego se indujo el estrés oxidativo con Acrilamida 4 mg/kg de peso/día por 28 días. El día 14 después de la inducción con AA se sacrificó la mitad de especímenes y se extrajo los hígados para su posterior análisis. El segundo sacrificio de los especímenes restantes se realizó. GRUPO IV: Problema II. O. Q. . UI. M IC. A. al finalizar los 28 días de inducción.. BI. Constituido por 12 especímenes a los cuales se les administró 2g/Kg de peso/día. A. Y. de Lepidium meyenii durante un mes, luego se indujo el estrés oxidativo con. AC I. Acrilamida 4 mg/kg de peso/día por 28 días. El día 14 después de la inducción. RM. con AA se sacrificó la mitad de especímenes y se extrajo los hígados para su. FA. posterior análisis. El segundo sacrificio de los especímenes restantes se realizó. TE CA. DE. al finalizar los 28 días de inducción.. 2.2.5.3 Extracción de las muestras (33). BI BL IO.  Al término de los tratamientos, con una jeringa de 5cc se obtuvo sangre por punción cardiaca (1.5 ml), la muestra de sangre de cada espécimen se colocó en tubos eppendorf que sirvió para la determinación de enzimas hepáticas (GPT y. GOT), luego de este procedimiento, inmediatamente se anestesió a los especímenes, por vía intra-peritoneal, con ketamina a una dosis de 120mg/kg de peso, y rápidamente con la ayuda de un bisturí y tijeras se realizó la extracción de los hígados.. 14 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(25) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.2.5.4 Determinación de enzimas hepáticas (GOT y GPT) (33). . Las muestras de sangre fueron centrifugadas inmediatamente después de su extracción a 10 000 rpm por un lapso de 10 minutos. El suero sobrenadante fue extraído y congelado.. . Una vez reunidas todas las muestras, el suero se descongeló a temperatura. M IC. A. ambiente y se procedió a la cuantificación de transaminasas con un. UI. espectrofotómetro y reactivos específicos para GPT y GOT. Los resultados. BI. O. Q. fueron indicados en UI/L. AC I. A. Y. 2.2.5.5 Homogeneizado de Tejido Hepático (34). RM.  Los hígados fueron suspendidos en solución salina fisiológica 0.9% fría (4ºC) en. FA. un vaso de precipitación hasta completar la extracción de todos los hígados.. DE. Luego se perfundieron los hígados con solución salina fisiológica 0.9% fría. TE CA. (4ºC) con una jeringa 10cc hasta lograr eliminar toda la sangre del tejido hepático, luego se secó en papel adsorbente. Posteriormente, se pesó todo el. BI BL IO. órgano en una balanza analítica y con ayuda de tijeras se tomó sólo 3g de hígado para ser homogeneizado en un mortero con tampón fosfatos 50 mM pH 7,40. Se colocó gaza en un embudo y se vertió el homogeneizado recibiéndose en un tubo de ensayo con la finalidad de poder separar la partículas más groseras. Con los homogeneizados recibidos en cada tubo se realizaron los ensayos peroxidación lipídica.. 15 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(26) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.2.5.6 Determinación de la lipoperoxidación en membranas de células hepáticas por la técnica del ácido Tiobarbitúrico (34). . Fundamento. A. La capacidad de peroxidación lipídica de las membranas celulares se determina. M IC. a través de la cuantificación de los productos de reacción con el ácido. UI. tiobarbitúrico (TBARS) cuyo principal representante es el malondialdehido. O. Q. (MDA). El malondialdehido (MDA) es un producto derivado del metabolismo. BI. del ácido araquidónico, que se produce por hidrólisis del endoperóxido cíclico. AC I. A. Y. PGH2 junto al ácido 12‐hidroxiheptadecatrienoico (34).. RM. La determinación de este metabolito del ácido araquidónico nos indica de modo. FA. indirecto los niveles de peroxidación alcanzados por un tejido (Buege y Aust,. DE. 1978) y, aunque no es un metabolito específico del catabolismo peroxidativo, sí. TE CA. es un buen indicador del funcionalismo de esta vía oxidativa. Presenta también la ventaja de que puede colorearse al reaccionar con el ácido tiobarbitúrico; lo. BI BL IO. que nos permite de forma fácil cuantificar sus niveles en cualquier muestra determinando simplemente su absorbancia espectrofotométrica. (Bird y Draper, 1984). . (34). .. Método (34) Se tomó homogenizado del respectivo órgano, se agregó 50 uL de buffer fosfato 50 mmol/L, a pH 7,4, y 1 mL de ácido tricloroacético (TCA) al 10%. Se centrifugó a 10000 rpm durante 10 minutos a 4°C. Se tomó. 1 mL del. sobrenadante y se adicionó 1 mL de ácido tiobarbitúrico (TBA) al 0,67%. Esta. 16 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(27) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. mezcla se calentó a 92°C durante 30 min y posteriormente se enfrió en baño de hielo. A continuación se añadió N-butanol y piridina (v/v 15:1) para extraer el complejo con el ácido tiobarbitúrico y tras agitar, centrifugar y lavar se leyó la absorbancia del sobrenadante en un espectrofotómetro a 532 nm. Los resultados fueron expresados en nmol MDA/mL (34).. La curva de calibración se realizó con el método de estándar externo con 1,1,3, 3-. O. Q. . UI. M IC. A. 2.2.6 Realización de la Curva de Calibración de MDA (35). BI. tetraetoxipropano de serie (malondialdehido) , obteniéndose el siguiente gráfico y. AC I. A. Y. usando la ecuación resultante para los cálculos de malondialdehido en nmol/mL.. BI BL IO. TE CA. DE. FA. RM. GRÁFICO N°01: Curva de calibración de Malondialdehido (MDA nmol/mL).. 17 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(28) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.2.7. . Análisis Estadístico de los Resultados (36) (37). Los resultados obtenidos de los niveles de MDA y Transaminasas (GPT y GOT) fueron analizados empleando el Análisis de varianza (ANOVA), para determinar la significancia estadística considerando una p < 0.05 y posteriormente se realizó la. M IC. A. Prueba de Duncan que permite la comparación de grupos para determinar si el. Para determinar si existe correlación entre los niveles de MDA y Transaminasas. BI BL IO. TE CA. DE. FA. RM. AC I. A. Y. BI. (GPT y GOT) se realizó la prueba de Pearson.. O. Q. . UI. efecto es real.. 18 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(29) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. III.. RESULTADOS. TABLA Nº 01: Niveles de Malondialdehido (nmol/mL) post inducción de 14 días con acrilamida en membrana hepáticas de Rattus norvegicus var. albinus, Grupos: Blanco, Control, Problema I y. A. Problema II.. C. M.. Tratamientos. 64.927. 3. 21.642. Error. 1.470. 20. 0.074. Total. 66.397. 23. F. P. 294.393. 0.000. Q. gl. BI. O. S.C.. AC I. A. Y. FV. UI. M IC. PRUEBA DE ANOVA. Grupos de Investigación. RM. PRUEBA DE DUNCAN N. Grupos para alfa = 0.05. 6. Problema II. 6. Leyenda:. G4. TE CA. 3.90. 6. 5.83. BI BL IO. Grupo Control. G3. 2.85. 6. Problema I. G2. 1.31. DE. Grupo Blanco. FA. G1. . P< 0.05 Significativo, P< 0.01 Muy Significativo, P< 0.001 Altamente significativo. . Grupo Blanco: agua y comida.. . Grupo Control: AA 4mg/kg/día.. . Problema I: 1g/kg/día de maca roja + AA 4mg/kg/día.. . Problema II: 2g/kg/día de maca roja + AA 4mg/kg/día.. . N: número de Rattus norvegicus var. albinus.. 19 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(30) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. UI 2.85. RM. AC I. A. Y. BI. O. Q. 3.90. M IC. A. 5.83. BI BL IO. TE CA. DE. FA. 1.31. FIGURA 01: Niveles de Malondialdehido (nmol/mL) post inducción de 14 días con acrilamida en membrana hepáticas de Rattus norvegicus var. albinus, Grupos: Blanco, Control, Problema I y Problema II.. 20 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(31) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. TABLA Nº 02: Niveles de Malondialdehido (nmol/mL) post inducción de 28 días con acrilamida en membrana hepáticas de Rattus norvegicus var. albinus, Grupos: Blanco, Control, Problema I y Problema II.. PRUEBA DE ANOVA gl. C. M.. F. Tratamientos. 99.235. 3. 33.078. 1,436.764. Error. 0.460. 20. 0.023. Total. 99.696. 23. P 0.000. UI. M IC. A. S.C.. BI. O. Q. FV. N. Grupos para alfa = 0.05. A. Grupo de Investigación. Y. PRUEBA DE DUNCAN. 6. 1.30767. Problema II. 6. Problema I. 6. Grupo Control. 6. G2. G3. G4. 3.93017. FA. Grupo Blanco. RM. AC I. G1. 4.85800. Leyenda:. TE CA. DE. 6.97233. P< 0.05 Significativo, P< 0.01 Muy Significativo, P< 0.001 Altamente significativo. . Grupo Blanco: agua y comida.. . Grupo Control: AA 4mg/kg/día.. . Problema I: 1g/kg/día de maca roja + AA 4mg/kg/día.. . Problema II: 2g/kg/día de maca roja + AA 4mg/kg/día.. . N: número de Rattus norvegicus var. albinus.. BI BL IO. . 21 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(32) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 6.97. 3.93. AC I. A. Y. BI. O. Q. UI. M IC. A. 4.85. FA. RM. 1.31. Control. Problema I. Problema II. BI BL IO. TE CA. DE. G. Blanco. FIGURA 02: Niveles de Malondialdehido (nmol/mL) post inducción de 28 días con acrilamida en membrana hepáticas de Rattus norvegicus var. albinus, Grupos: Blanco, Control, Problema I y Problema II.. 22 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(33) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. TABLA N° 03: Niveles séricos de GPT (U/L) post inducción de 14 y 28 días con acrilamida en Rattus norvegicus var. albinus, Grupos: Blanco, Control, Problema I y Problema II.. PRUEBA DE ANOVA C. M.. F. P. Tratamientos. 5,662.420. 3. 1,887.473. 2,825.559. 0.000. Error. 13.360. 20. 0.668. Total. 5,675.780. 23. Tratamientos. 11,855.578. 3. 3,951.859. Error. 22.647. 20. 1.132. Total. 11,878.225. 23. 3,490.014. 0.000. Q. UI. M IC. A. gl. AC I. A. Y. BI. GPT (U/L) A los 28 días. S.C.. O. GPT (U/L) A los 14 días. FV. FA. RM. PRUEBA DE DUNCAN. Prueba de DUNCAN para GPT (U/L) A los 14 días. Grupo Blanco Problema II. BI BL IO. Problema I Grupo Control. N. DE. TE CA. Grupo de Investigación. 6. Grupos para alfa = 0.05. G1. G2. G3. G4. 22.30. 6. 36.37. 6. 44.37. 6. 64.77. Prueba de DUNCAN para GPT (U/L) A los 28 días. Grupo de Investigación. N. Grupos para alfa = 0.05 G1. Grupo Blanco. 6. Problema II. 6. Problema I. 6. Grupo Control. 6. G2. G3. G4. 22.3000 41.1333 56.2000 83.0667. 23 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(34) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Leyenda: P< 0.05 Significativo, P< 0.01 Muy Significativo, P< 0.001 Altamente significativo. . Grupo Blanco: agua y comida.. . Grupo Control: AA 4mg/kg/día.. . Problema I: 1g/kg/día de maca roja + AA 4mg/kg/día.. . Problema II: 2g/kg/día de maca roja + AA 4mg/kg/día.. . N: número de Rattus norvegicus var. albinus.. UI. M IC. A. . Y. BI. O. Q. 83.06. A. GPT (U/L) A los 14 días. AC I. GPT (U/L) A los 14 y 28 días. 64.77. 56.20. FA. RM. GPT (U/L) A los 28 días. 44.37. BI BL IO. 22.30. TE CA. DE. 41.13. G. Blanco. Control. 36.37. Problema I. Problema II. FIGURA 03: Niveles séricos de GPT (U/L) post inducción de 14 y 28 días con acrilamida en Rattus norvegicus var. albinus, Grupos: Blanco, Control, Problema I y Problema II.. 24 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(35) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. TABLA N° 04: Niveles séricos de GOT (U/L) post inducción de 14 y 28 días con acrilamida en Rattus norvegicus var. albinus, Grupos: Blanco, Control, Problema I y Problema II. PRUEBA DE ANOVA F. P. 2,880.387. 3. 960.129. 1,566.977. 0.000. Error. 12.255. 20. 0.613. Total. 2,892.642. 23. Tratamientos. 8,889.983. 3. 2,963.328. Error. 8.375. 20. 0.419. Total. 8,898.358. 23. Tratamientos. A. C. M.. 7,076.790. 0.000. O. Q. GOT (U/L) A los 28 días. gl. M IC. GOT (U/L) A los 14 días. S.C.. UI. FV. Y. P< 0.05 Significativo, P< 0.01 Muy Significativo, P< 0.001 Altamente significativo. AC I. A. . BI. Leyenda:. FA. RM. PRUEBA DE DUNCAN. Grupo Blanco Problema II. BI BL IO. Problema I. N. TE CA. Grupo de Investigación. DE. Prueba de DUNCAN para GOT (U/L) A los 14 días. Grupo Control. 6. Grupos para alfa = 0.05 G1. G2. G3. G4. 20.42. 6. 34.75. 6. 40.61. 6. 50.69. Prueba de DUNCAN para GOT (U/L) A los 28 días. Grupo de Investigación. N. Grupos para alfa = 0.05 G1. Grupo Blanco. 6. Problema II. 6. Problema I. 6. Grupo Control. 6. G2. G3. G4. 20.41667 38.61117 53.05550 72.88900. 25 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(36) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Leyenda: P< 0.05 Significativo, P< 0.01 Muy Significativo, P< 0.001 Altamente significativo. . Grupo Blanco: agua y comida.. . Grupo Control: AA 4mg/kg/día.. . Problema I: 1g/kg/día de maca roja + AA 4mg/kg/día.. . Problema II: 2g/kg/día de maca roja + AA 4mg/kg/día.. . N: número de Rattus norvegicus var. albinus.. UI. M IC. A. . GOT (U/L) A los 14 días. AC I. A. GOT (U/L) A los 14 y 28 días. Y. BI. O. Q. 72.88. 53.05. GOT (U/L) A los 28 días. FA. RM. 50.69. 38.61. 34.75. BI BL IO. 20.42. TE CA. DE. 40.61. G. Blanco. Control. Problema I. Problema II. FIGURA 04: Niveles séricos de GOT (U/L) post inducción de 14 y 28 días con acrilamida en Rattus norvegicus var. albinus, Grupos: Blanco, Control, Problema I y Problema II. 26 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(37) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Problema II. Problema I. Control. O. Blanco. Q. UI. M IC. A. GPT (U/L) a los 14 días. r = 0.992. BI. MDA (nmol/mL). A. Y. FIGURA 05: Diagrama de Dispersión que correlaciona los niveles de Malondialdehido (nmol/mL). TE CA. DE. FA. r = 0.981. BI BL IO. GOT (U/L) a los 14 días. RM. AC I. versus los niveles séricos de GPT (U/L) post inducción de 14 días con acrilamida.. Blanco. Problema II. Problema I. Control. MDA (nmol/mL) FIGURA 06: Diagrama de Dispersión que correlaciona los niveles de Malondialdehido (nmol/mL) versus los niveles séricos de GOT (U/L) post inducción de 14 días con acrilamida.. 27 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(38) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Análisis e Interpretación: En las Figuras 05 y 06 se observa una correlación. (0. positiva. < r < 1). El índice indica una dependencia entre las dos variables denominada relación. directa: cuando una de. ellas aumenta, la otra también lo hace. Los valores más bajos. corresponden al Grupo Blanco, y los más altos al Grupo control. Se observa que los. A. resultados después de los 14 días de inducción, el Problema II presenta valores más bajos. DE. FA. RM. AC I. A. Y. r = 0.984. TE CA BI BL IO. GPT (U/L) a los 28 días. BI. O. Q. UI. M IC. respecto al Problema I.. Blanco. Problema II. Problema I. Control. MDA (nmol/mL). FIGURA 07: Diagrama de Dispersión que correlaciona los niveles de Malondialdehido (nmol/mL) versus los niveles séricos de GPT (U/L) post inducción de 28 con acrilamida.. 28 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(39) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Problema I. Control. O. Problema II. Q. Blanco. UI. M IC. A. GOT (U/L) a los 28 días. r = 0.990. A. Y. BI. MDA (nmol/mL). AC I. FIGURA 08: Diagrama de Dispersión que correlaciona los niveles de Malondialdehido (nmol/mL). DE. FA. RM. versus los niveles séricos de GOT (U/L) post inducción de 28 días con acrilamida.. (0. TE CA. Análisis e Interpretación: En las Figuras 07 y 08 se observa una correlación positiva < r < 1). El índice indica una dependencia entre las dos variables denominada relación. BI BL IO. directa: cuando una de ellas aumenta, la otra también lo hace. Los. valores más bajos. corresponden al Grupo Blanco, y los más altos al Grupo control. Se observa que los. resultados después de los 28 días de inducción, el Problema II presenta valores más bajos respecto al Problema I.. 29 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(40) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. IV.. DISCUSIÓN. El Perú es un país con una gran diversidad biológica y actualmente se trata de identificar plantas con propiedades medicinales, siendo una de ellas la maca, que es utilizada en la alimentación del hombre andino. Esta raíz tiene diversos efectos en el organismo, habiéndose estudiado y encontrado una alta capacidad antioxidante que podrían contrarrestar el exceso de radicales libres. La variedad. M IC. A. más estudiada y de uso común es la maca amarilla, pero no existen muchos estudios de la variedad. O. Q. UI. maca roja (26).. BI. Por esto, el presente trabajo de investigación tuvo como objetivo determinar el efecto antioxidante. A. Y. del extracto hidroalcohólico de la raíz de Lepidium meyenii “maca roja” sobre lipoperoxidación. AC I. inducida con acrilamida en células hepáticas de Rattus norvegicus var. albinus, medido a través de. RM. la disminución de los niveles de Malondialdehido y Transaminasas (GPT y GOT).. FA. Se tuvo en cuenta parámetros de uniformidad entre los especímenes realizando la prueba de. DE. homogeneidad respecto al peso corporal de todos los ejemplares, aleatorizándose en grupos;. TE CA. Blanco, Control, Problema I y Problema II, teniendo cierta variación de los pesos de cada espécimen entre180 a 200g. Otras condiciones como la edad (promedio de 60 días), el sexo. BI BL IO. (hembras pre-púberes), alimentación, ambiente y tratamiento se tomaron en cuenta para evitar que los resultados sean afectados. La TABLA N° 01 muestra los niveles de MDA (nmol/mL) post inducción de 14 días con acrilamida en membrana hepáticas de Rattus norvegicus var. albinus. Para ello se realizó la prueba de ANOVA donde se observa un P < 0.001 (0.000). lo cual demuestra una alta significancia estadística;. indicando que son comparables cada grupo investigado. Para determinar diferencias significativas entre grupos se realizó la prueba de Duncan, la cual determina en 4 subgrupos diferentes; en el subgrupo 1 está incluido el grupo Blanco, en el subgrupo 2 está incluido el grupo Problema II, que 30 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(41) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. por el resultado obtenido (2.85 nmol/mL de MDA) se acerca mucho al grupo Blanco (1.31 nmol/mL de MDA) , lo cual significa que la dosis utilizada de maca (2g/kg/día) disminuye significativamente los niveles de MDA, previniendo la lipoperoxidación de células hepáticas hasta niveles casi basales. En el subgrupo 3 encontramos al grupo Problema I y en el subgrupo 4 se encuentra el grupo Control, los cuales varían mucho de los primeros subgrupos, siendo evidente la diferencia de niveles de Malondialdehido. El grupo Control alcanzó los niveles más altos de MDA. M IC. A. ya que sólo recibió acrilamida (4mg/kg/día). Así mismo, el estudio de Muhammad Rashid Khan,. UI. 2011, reporta valores más altos para el grupo que sólo recibió acrilamida pero a una dosis de. O. Q. 6mg/kg/día (10).. BI. La FIGURA Nº 01 también muestra los niveles de malondialdehido a los 14 días, demostrando el. A. Y. efecto antioxidante del Lepidium meyenii (maca roja). Se observan valores disminuidos de MDA. FA. RM. no contaron con ninguna sustancia protectora.. AC I. para los dos problemas comparados con el grupo Control, donde el daño hepático fue mayor ya que. En la TABLA N° 02 se muestran los niveles de MDA post inducción de 28 días con acrilamida en. DE. membrana hepáticas de Rattus norvegicus var. albinus . La Prueba de ANOVA arroja un P < 0.001. TE CA. (0.000) demostrando una alta significancia estadística al igual que en la TABLA N°01. La prueba. BI BL IO. de Duncan corrobora la diferencia estadística entre grupos (Blanco, Control, Problema I y Problema II), separándose en 4 subgrupos: El subgrupo 1 incluye al grupo Blanco, el subgrupo 2 incluye al Problema II, siendo el resultado de éste último (3.93 nmol/mL de MDA) el más cercano al del grupo Blanco (1.31 nmol/mL). Lo cual demuestra que la doble dosis de maca roja para el Problema II (2g/kg/día) sigue siendo más efectiva en la disminución de los niveles de MDA, aún a los 28 días de inducción con acrilamida. Esto es comprobado con el subgrupo 3 donde encontramos al grupo Problema I (1g/kg/día) cuyo resultado promedio de MDA (4.85 nmol/mL) es un poco mayor al del Problema II, pero menor al del Control (6.97 nmol/mL de MDA). Asi mismo se observa tal efecto en la FIGURA N° 02. 31 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(42) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Tras este análisis mediante las pruebas de ANOVA y Duncan se evidencia que a dosis de 2g/kg/día de maca (Problema II) la disminución de MDA es más significativa (P < 0.001) que a dosis de 1g/kg/día de maca (Problema I) después de14 y 28 días de inducción con acrilamida, confirmando el efecto antioxidante del extracto hidroalcohólico de la raíz de Lepidium meyenii (maca roja). Morote Guzman y Yaro Marcelo, 2012, reportan resultados similares al comparar el efecto antioxidante de dos dosis de maca roja (0.5 y2g/kg) en membranas neuronales, siendo la. UI. M IC. A. dosis de 2g/kg más significativa en la disminución de MDA (38).. O. Q. El efecto antioxidante de la maca roja se debe a la presencia de Flavonoides entre los que destacan. BI. el flavonol y la quercetina. Este último es un flavonoide altamente estudiado, tiene el potencial de. A. Y. inhibir el proceso de radicales libres en células, removiendo el O2-, bloqueando la peroxidación. AC I. lipídica, reaccionando con peróxido de lípidos, inhibiendo la formación de OH-, quelando iones. RM. hierro. Según estudios fitoquímicos también encontramos fenoles, el que es atribuido por su. FA. propiedad para quelar metales, inhibir lipooxigenasas y remover radicales libres, así lo indica el. TE CA. DE. estudio realizado por R. Portugal y J. Guillermo, 2003 (28) (39).. C. Gonzales, 2010 refiere que la maca roja contiene una alta concentración de glucosinolatos como. BI BL IO. su principal metabolito secundario. La enzima mirosinasa, presente tanto en el tejido dañado de la planta, como en la microflora del tracto digestivo en el humano, convierte este glucosinolato en un número importante de compuestos químicos incluyendo isotiocianatos biológicamente activos. Los glucosinolatos más abundantes detectados tanto en el hipocótilo fresco como seco y en las hojas de maca fueron el glucosinolato aromático, bencilglucosinolato, el cual posee actividad antioxidante y anticancerígena (G. Gonzales y M. Gasco, 2008) (32) (40).. 32 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(43) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Se ha reportado que la maca también contiene ácidos grasos poli insaturados presentes llamados macaenos y macamidas (alcamidas benciladas). Estos incluyen tres nuevos compuestos: N-bencil octanamida; N-bencil-16 (R, S)-hidroxi-9-oxo-10E, 12E, 14E-octadecatrienamida; y N-bencil-9,16dioxo-10E, 12E, 14-E octadecatrienamida. Así mismo, un derivado bencilado del 1,2-dihidro-Nhidroxipiridina, llamado macaridina. Los esteroles presentes en la maca son: β-sitosterol, campesterol y stigmasterol, así también se encuentran presentes los alcaloides, taninos, saponinas,. M IC. A. gran cantidad de vitaminas E y C, minerales como el cobre, magnesio y Zinc. Todos estos. O. Q. UI. compuestos ayudan a mantener en equilibrio el sistema óxido-reducción (41).. BI. Otra de las formas de corroborar el daño hepático producido por la lipoperoxidación de la y GOT) de Rattus. A. Y. acrilamida, es mediante la cuantificación de transaminasas séricas (GPT. RM. AC I. norvegicus var. albinus.. FA. La TABLA N° 03 muestra los niveles séricos de GPT (U/L) post inducción de 14 y 28 días con. DE. acrilamida en Rattus norvegicus var. albinus. Se realizó la prueba de ANOVA donde se observa, en. TE CA. ambos casos, un P < 0.001 (0.000) lo cual demuestra una alta significancia estadística. Para determinar diferencias significativas entre grupos se realizó la prueba de Duncan, la cual determina. BI BL IO. en 4 subgrupos diferentes tanto a los 14 como a los 28 días. En el subgrupo 1 está incluido el grupo Blanco, en el subgrupo 2 está incluido el Problema II, que por los resultados obtenidos (14 días: 36.37 U/L, 28 días: 41.13 U/L) se acercan mucho a los del grupo Blanco (14 días: 22.30 U/L, 28 días: 22.30 U/L). En el subgrupo 3 encontramos al grupo Problema I donde sus valores son ligeramente más altos que los del Problema II, pero menores que los del Control, siendo éste el subgrupo 4, cuyos valores de GPT son los más elevados tanto a los 14 como a los 28 días de inducción. También observamos que los resultados a los 28 días son más elevados que a los 14 días, esto sucede en todos los grupos, y se debe que a los 28 días hubo mayor tiempo de exposición con la acrilamida por lo tanto el daño hepático es mayor. Tal efecto se ratifica en la FIGURA Nº 03. 33 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.