DE LA NICLOSAMIDA E N MEDULA OSEA

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LUGAR DONDE SE LLEVARA A

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CAROL I NA CARSOL I O MATA

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BlOLOGlA EXPERIMENTAL UU.EE.AA. TERMINAOAS 20 HRS.

INSTITUTO DE INVESTIG B I OMED I CAS.

U.

N .A M.

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10 DE MARZO DE

1987

C I ONES

10 DE SEPTIEMBRE DE

19%

CRISTINA CORTINAS DE NAVA JEFE DEL LABORATORIO DE MUTA- GENOS AMBIENTALES

I.I.B. U. N A. .M.

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DE LA NICLOSAMIDA E N MEDULA OSEA

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Y SANGRE PEAIFERICA.

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RATON 1 8

I NTRODUCC I ON:

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Buscando comodidad, salud

y

una mejor calidad de vida,

el

hombre moderno ha desarrollado una gran cantidad de nuevos

pro

ductos quimicos. Consecuentemente está cada vez expuesto

a

una cantidad más alta de los mismos en su medio ambiente, (Cortinas de Nava et al.

1980:A).

La investigación en los

Ú l t i m s

aiíos ha demostrado claranente l a presencia de mutágenos anbienta-

les entre tos agentes químicos, tanto artificiales como natura- les, a - l o s que nos exponemos constantemente. Estos mutágenos pueden encontrarse por ejemplo entre aditivos alimenticios, fármacos, cosméticos, al imentos, conservadsres, productos de limpieza, desechos industriales, smog, etc. (de Serres,

1978).

Debido a esta situación, el posible daño genético por e - fecto de esta exposición ha sido motivo de intensos estudios en la actualidad. A pesar de que durante mucho tiempo este da-

?io

pasó desapercibido, diversos estudios han relacionado la a-

cumulacián a largo plazo de cambios genéticos Ó mutaciones, con el desarrollo de cáncer (carcinogénesis), de alteraciones en el desarrollo (teratogénesis) Ó de alteraciones en el mate-

rial hereditario, (Kalter,

1971).

Más

recientemente-se ha en- contrado una alta correlación entre actividad carcionógénica

RE SUMEN:

La prueba de micronúcleos es una prueba corta y senc'

l'la para e l a n á l i s i s genotóxico de los agentes qufmtcos en

general.

En e l presente estudio se analizaron l a s frecuencias

de micronúcleos producidos por ? a Niclosamida en Médula

Osea y en Sangre P e r i f é r i c a de ratón. Se administró l a N i -

closamida en tres dosis ( 3 0 , ₁₅₀ y 300 mg/kg de peso), du-

rante

7

d í a s , por v í a o r a l .

No

se observó una respuesta

s i g n i f i c a t i v a con este esquema da tratami nto. Estos re-

sultados sugieren que l a Niclosamida t a l vez no l l e g a a

l a médula en cantidad a c t i v a s u f i c i e n t e , que su eFecto no

e s v i s i b l e en esta prueba Ó bien que no es mutagénica en

l a medula Ósea del ratón.

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L

agentes qufmicos previamente consi deradx i nocuos. Se espera que el descubrimiento de actividad mJtagénica a través de prg gramas de análisis de agentes queímicos nos pueda alertar no sólo acerca de su potencial mutagénico, sino de su posible ca1 c i nogen i ci dad tamb i én

.

Pero este análisis constituye un gran problema debido

a

la considerable cantidad d e nuevos agentes químicos que hay que probar. Además hay muchas sustancias que son

ya

do uso tan co- mún

y

amplia distribución, que no se consideran peligrosos

y

en realidad nunca fueron analizados suficientemente. Algunos pasaron a través de pruebas toxicológicas tradicionales

y

o-

tros simplemente nunca ]han sido probados. E l doscubrimiento de "supermutágenos" Ó sustancias que pueden produci r

al

tos niveles de mutaciones al tiempo que bajos niveles do toxicidad, hizo que aumentaran las dudas respecto a la seguridad del uso de sustancias comunes, (de Serres,

1978).

-

Sin embargo, debido a l a magnitud d: l a tarea de análisis, hay agentes qufmicos que han sido considerados dar importancia secundaria. Este es el caso de muchos de los medicanentos an- parasitarios, cuyo uso es ya

muy

limitado en países más desarrg

llados que el nuestro, debid3 al bajo Índice de enfermedades infecciosas del aparato digestivo. A causa de este reducido IOC

L.

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.

I

efectos genotóxicos, ya que rara vez la misma persona

es

ex-

puesta a tratamientos crónicos o repetidos.

En cambio, en nuestro país la salud es actualmente un gran problema, siendo una de las principales causas de esta situación l a falta de higiene a consecuencia de los bajos niveles de vida

y

educación. Debido

a

esto las enfermeda- des parasitarias del aparato digestivo son muy frecuentes, por lo que los medicamentos para controlarlas son abundan-

temente utilizados. Además no es raro que una persona lle- que a recibir tratamientos repetidos a causa de reinfesta-- ciones sucesivas o por recurrir a l a automedicación.

I

Uno de los medicamentos antiparasitarios de elección en México es

la

Niclosarnida, fármaco antihemftico utilizado

--

principalmente contra tenias (céstodos), (Katzung,

1984).

-

Asimismo es consumida en otros paises con problemas similares como Kenia (Hall,

1981),

Sudáfrica (Van Schalkwyk,

1981),

etc.

-

Los

estudios epidemiológicos para detectar el daño

ge-

nético producido

por

agentes químicos en humanos son el gene-

ral

muy costosos

y

a

largo plazo. - E s por esto que se han de- sarrollado diversas pruebas biológicas más rápidas

y

baratas

y

que además no presentan el problema ético de l a investigación en humanos.

Los

resultados de estas pruebas no son totalmente extrs polables al hombre, pero nos permiten tener cierta idea del

riez

7

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más

teniendo en cuenta

la

importancia de la rapidez, de manera

que se pueda alertar y proteger a

la

población contra u n posi-

ble riesgo cuanto antes, su implementación y desarrollo es

vi-

tal, (Cortinas de Nava,

1980:s).

Para el presennte análisis se utilizó la prueba de micron$

cleos en médula Ósea de

ratón,

que detecta rompimientos cromos4

micos

y alteraciones en el aparato mitótico. Esta es una de las

pruebas

más

rápidas

y

sencillas que se pueden realizar

-in

~ k e ,

raconocida y utilizada a nivel mundial (Heddle et al.,

1983).

Por otro lado se aplicó también la preba de micronúcleos en

sac

gre periférica de

ratón,

de desarrollo

más

reciente, (MacGregor,

1980).

I

OBJETIVOS:

Anal izar los efectos genotóxicos de la Niclosamida

en médu1,a Ósea y

sangre periférica de ratón, con un

tratamiento de tipo subcrónico.

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2.- En la prueba dr anomalías morfológicas dz

la

cabeza de los espermatozoides de

ratón,

se observó una ligera tend- cia positiva a los

5

días de tratamiento por vía oral. (Resul- tados no pub1 icados).

-

3.-

En linfocitos humanos cultivados

y&rg

con Sg'(fraS ciÓn microsomal di3 hígado de rata), se obtuvo una respuesta po- sitiva cuando se analizaron aberraciones, mas no en el análisis de Intercambio de Cromátidas Hermanas.

Los

resultados

I n _

vivo

--

fueron ambiguos.(Ostrosky-Wegman, 1986).

&.-En la prueba de micronúcleos en médula Ósea usando el protocolo clásico de Schmid (Schmid, 1976), los resultados fuer

ron negativos.

Los

tratamientos se dieron oralmente a las O

y

24 hrs, sacrificando a biferentes intervalos entre las 12

y

las

96

hrs. Las dosis usadas fueron : una aproximación de la tera-

péutica para humanos,

5

y

10 veces más, en tres diferentes gru- pos. La droga control fue la Ciclofosfamida.

Los

resultados fue-

ron negativos para la

-

Niclosamida

y

positivos para

l a

Ciclofosf2

_l

mida. (Jiménez, 1984). I

Existía l a posibilidad de que los resultad3s nrgativos en la prueba de micronÚcleos fueran debidos a un esquema inadecua- do de tratamiento para detectar un mutágeno como la Niclosamida. Por esto se propuso un esquema de tratamiento de tipo subcróni- co durante

7

días, usando las mismas dosis que en el experimento anterior. Este tipo de esquema ya ha sido usado para detectar my

tágenos débiles Ó mezclas complejas en agua Ó aire. Además el

estudio en médula Ósea fue complementado aplicando también el sistema de sangre periférica de ratón.

GENERAL1

DADES:

1.-

LA

PRUEBA DE MICRONUCLEOS:

Esta prueba fue desarrollada por Schmid

y

colaboradores

(Schmid,

1976)

y por Heddle (Heddle,

1973),

como una alterna-

tiva para los estudios citogenéticos

in

vivo.Esta prueba está

recomendada como parte de

un

"paquete mfnimo" para probar nus

vos productos farmacéuticos

por el

Comi

ttee for Proprietory

Medicinal Products (CPMP) dz la Comunidad Económica Europea

en

1980,

(Hart

y

Engberg-Pedersen,

1983).

Los micronúcleos se originan de cromatina que por difere2

tes razones se ha retrasado en la anafase,

y

no queda incluida

en el núcleo principal.

El

retraso puede ser debido a un rompi-

miento cromosómico

Ó

al mal funcionamiento del aparato mitótico.

Al

ser expulsado el núcleo durante el desarrollo de los eritro-

citos, los micronúcleos permanecen en la célula

por

razones de2

conocidas. Incluso no se sabe

s i

todos ellos escapan a la expul

siÓn

Ó

no,

(Schmid,

1976).

Los eritrocitos inmaduros retienen

la habilidad de teñirse diferencialmente de un color azulado

por

aproximadamente dos días después de la expulsión del núcleo,

ya que conservan todavía

A R N

en el citoplasma, (MacGregor,

1986).

Los eritrocitos que se encuentran en esta etapa se conocen como

!

eritrocitos policromáticos

Ó

reticulocitos, a diferencia de los

eritrocitos maduros

Ó

normacitos, que se tiñen de un color rojo-

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Los micronÚcleos se pueden ver como cuerpos opacos teñi- dos de azul Ó violeta oscuro. La descripción

y

diferenciación con artefactos fue hecha por Schmid (Schmid, 1976). Un aumento en la frecuencia de eritrocitos policromáticos con micronúcleos

indica que la sustancia probada indujo un daño Ó retraso en los cromosom3s en la división mi tótica anterior, (MacGregor et a l i.

1986) e

t i 1 izando médu para analizar,

más estas céiu lular, lo cual

----

in vivo.

Las principales ventajas de esta prueba son que ya sea u- a Ósea Ó sangre, se tiene material en abundancia

muy fácil de identificar

y

de gran rapidez. Adr- as son

el

producto de una reciente división ce- garantiza su exposición a l a Isustancia probada

Por otro lado las limitaciones de la prueba son la escasa información que nos da acerca del daño cromosómi'co especifico,

y

que no detecta agentes que produzcan mutaciones génicas. TaE

-

bién requiere que la sutancia llegue en suficiente concentra-- ciÓn a las células blanco, en forma activa

y

que no sea especf- fica para algún otro tejido. (Jirnénez, 1984).

1

TABLA 2

SISTEMAS BlOLOGlCOS DONDE SE HAN ANALIZADO LOS MICRONUCLEOS

*

1.- PLANTAS

Allium c e p Allium sativum Tradescantia Vicia faba

---

--

---

---I

-----I

---

---

2.- CELULAS E N CULTIVO

Linfocitos

y

fibroblaktos en mamfferos. Linfocitos

y

lfneas celulares humanas.

3.

-

MAM I FEROS

a

j

Células germinales: Espermáti das

b )

Células somáticas:

Células hepáticas en fetos

y

adultos Sangre (iinfocitos

y

eritrocitos)

Médula Ósea (linfocitos

y

eritrocitos)

-

4.-

HUMANOS

-

I N VIVO

--

Médula Ósea

Sangre (linfocitos

y

eritrocitos)

La agencia para la protección del ambiente de los Esta- d x Unidos de América (EPA), nombró un grupo de expertos con el fin de evaluar la utilidad de los sistemas existenetes pa-

ra drtectar agentes mutagénicos (Gene-Tox Program) (Heddle et al.. 1983), cuyos resultados han sido ya publicados. E l grupo que evaluó

la

prueba de micronúcleos reportó que más de

150

compuestos han sido prohados en micronúcleos con diferentes grados de rigor, por lo que ellos establecen ciertos criterios para l a utilización del sistema. La prueba de micronúcleos fue capaz de detectar el 50% de

los

agentes carcinógenos, sin em- bargo, el comité sugiere que si es a prueba se usara con el protocolo recomendado, tal vez pud era detectar hasta el 70%

de los mutágenos conocidos.

I

2.- CARACTERISTICAS GENERALES DE LA NICLOSAMIOA:

-

La niclosamida, introducida al mercado en 1960, ha sido por muchos años el medicamento de elección para el tratamiento de la mayor parte de las infecciones por tenias. Es l a Niclo- sarnida N-(2'-cloro-4'-ni trofenil)-5 clorosalicilamida (ver

f i -

gura A). La Nictosamida aparentemente no es absorbida en el si2 tema gastrointestinal. E l medicamento inalterado no ha sido re- cuperado de sangre u orina, (Katzung, 1984). Esta afirmación es contradicha por los resultados obtenidos en la prueba de Ames con orinas de ratones tratados oralmente con Niclosamida

(Cortinas de Nava, et al. 1983).

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FIGURA A: NICLOSAMIDA

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La Niclosamida es un polvo anarillo inodoro e insÍpido;

p.f. 227-23OOC; muy insoluble en agua, soluble en etanol

1/50,

en éter

1/350,

en CHC13

1/400

y

soluble en acetona. (Goodman

y

Gilmans,

1980).

No

se

han observado anormal

idades hematológicas, renales

Ó

hepáticas después de la administración oral en animales

y

en

el hmbre. Los escólex y segmentos de los céstodos, pero no los

huevecillos, mueren rápidamente en contacto con la Niclosamida.

Esto se puede deber a la inhibición de la fosforilación oxida-

tiva

Ó

a la propiedad estimulatoria de su ATPasa.

Junto con la

muerte del p a k i t o , el escólex es liberado de la pared intestL

nal

.

I

La Niclosamida tiene mucho más pocos y menos intensos efes

tos colaterales

que

la quinacrjna

ó-

la oleorresina y es iguai-

mente

Ó

más efectiva. (Kat-zung,

1984).

3.-

CARACTERISTICAS GENERALES DE

LA

CICLOFOSFAMIDA:

La Ciclofosfamida se sintetizó cuando se intentaba modifi-

car la estructura de la mecloretamina, con objeto de lograr una

mayor selectividad para los teji,dos neoplásicos, fin con el que

se administra actualmente para diversos padecimientos, (linfomas

y

leucemias, hemoblastosis, neuroblastomas, enfermedad de Hodg-

E s un polvo de peso molecular 261.1 de color blanco. Es SO-

luble en agua, ligeramente soluble en alcohol, benceno, etilgli- col

y

tetracloruto de carbono; es poco soluble en éter.

I

La Ciclofosfamida es una mostaza nitrogenada (ver Figura

B),

y

como tal es un agente alquilante capaz de formar uniones cova-

lentes con sustancias nucieofÍi icas como grupos fosfatos, amino,

_I

sulfihidrilo, etc. Es capaz de alquilar al ADN, siendo particu- I

larmente sensible el nitrógeno

7

de l a guanina. Requiere de ac- tivación metaból ica para ser terapéuticamente activa.

Su actividad carcinogénica, teratogénica

y

mutagénica es

me

I

diada aparentemente por sus metabol itos, que también pueden in- teractuar con el ADN. Hanpel en 1969 (Hampel, 1969), dmnstró que cuando la Ciclofosfamida se activa es capaz de producir a- berraciones cromosómicas estructurales en linfocitos humanos

b

--

vitro. También puede producir intercambio de cromátidas hermanas

y

aberraciones cromosómicas en humanos

y

mamíferos experimentales

--

in vivo

.

I

I

-

La Ciclofosfamida ha sido utilizada para la producción de micronúcleos

y

se han publicado alrededor de 15 trabajos, d m d e se usa como un control positivo, o con3 una droga modelo para evaluar el sistema. Salamone et al. (1980), utilizan la ciclo- fosfamida para establecer el protocolo Óptimo para l a prueba de micronúcleos,. (Jiménez, 1984).

MATERIAL Y METODOS:

r

ANIMALES: Se utilizaron ratones machos de 10 semanas de edad, de la cepa CD-1, provenientes del.bioterio del Instituto de 1 1

1 . vestigaciones Biomédicas, donde también fueron mantenidos

durante el experimento.

COMPUESTOS:

-

Niclosamida provista por Sica, S.A. Lote M-6906.

-

Ciclofosfamida; Genoxal (Lab. Shering).

-

Goma arábiga (Sigma).

-

Suero fetal bovino (Microlab).

-

Giemsa (Merck).

I

-

Metanol, Etanol (Baker).

Todas las soluciones se prepararon inmediatamente antes de la administración. E l vehiculo para todos los compuestos fué una solución de goma arábiga-etanol al 2/15% (P/V).

DOSIS

-

Niclosamida: 30, 150

y

300 mg/kg de peso. La dosis de

30

mg/kg es aproximadamente la dosis terapéutica.

-

Ciclofosfamida: 10 .ng/kg de peso. Control positivo.

GRUPOS: Se formaron

5

grupos, con

4

animales cada uno:

1

.-

Control (Vehfculo solo). 2.- Niclosamida 30 mg/kg.

3.-

Niclosamida 150 mg/kg.

.

4.-

Niclosamida 300 .ng/kg.

5.-

Ciclofosfanida 10 mg/kg.

MUESTRE0 Y PREPARACION DE LAMINILLAS:

Se tomaron muestras de sangre todos los días, desde el día O (inicio del tratamiento) al dfa

8

(sacrificio), por medio de un pequeño corte en la cola-del animal a Las lamini llas se prepa-

raron por medio del

una gota de suero fetal de bovino. Se dejaron secar un día

y

se fijaron

5

min en metanol, siendo después teñidas con Giemsa al

5%

durante 20 min. Se lavaron en agua corriente

y

se dejaron

se

car.

frotis de una gota de sangre disuelta en

Las muestras de médula se tomaron 24 hrs después del Último tratamiento, previo sacrificio del animal, mzdiante l a técnica

reportada por Schmid,

1976:

1.- lnnediatamente despuis de sacrificar al animal, se ext- jeron los fémures

y

se lim?iaron con una ga-sa hasta quedar libres

de músculos.

2.- S e cortó el extremo proximal del fémur, a manera que la cavidad del hueso quedara visible.

"

y

filtrado por millipore 0.45 u.

4.-

A s í insertada l a jeringa, se sumerfió el hueso en

5

ml

de suero fetal bovino contenido en un tubo de centrífuga

y

se resuspendió suavenente, absorbiendo

y

expulsando con el émbolo.

5.-

Se centrifugó a 1,000 rpm durante

5

min.

6.-

Se retiró el sobrenadante con pipeta Pasteur. En el caso de sedimentos abundantes se resuspendió en una gota de sue-

I

ro, Ó bien se resuspendió tal como quedaba muy cuidadosamente _I

con una pipeta Pasteur.

7.-

Se puso una pequeña gota de esta suspensión al final de un portaobjetos

y

se realizó un frotis muy suavemente con un cubreobjetos. La preparación se secó al aire.(Jiménez, 1984).

La técnica de tinción fue la misma que la usada para san- gre.

1

ANAL I S I S ESTAD I ST I CO:

A pesar de su Frecuente uso, no hay todavía una metodolo- gía de análisis estadístico aceptada generalmente

para

los da- tos de la prueba de Micronúcleos. Varios autores han propuesto

hasta tres distribuciones para el número de células micronucleg I

das por animal, (Margo1 in and Risko, 1986).- Específicamente, mackey

y

MacGregor(1979) argumentan por una distribución bino- mial negativa, Hart

y

Enberg-Pedersen (1983) optaron por la bi-

nomial,

y

Salamone

y

Heddle (1983) concluyeron que l a distribu-

go Hart

y

Enberg-Pedersen (1983) señalaron que

las

distribucio- nes Binomial

y

de Poisson son prácticamente iguales cuando se analizan muchas células por animal ( 1,000 Ó

más), y

l a propor- ción de. eritrocitos micronucleados es pequeña, (Margolin

y

Ris- ko, -1986).

, En el caso del presente análisis se reúnen las caracterfs-

ticas citadas anteriormente, de manera que se realizaron dos

-

pruebas en base a estas distribuciones. Ambas pruebas se practj caron con p=0.5

y

p=O.Ol.

Una tercera prueba realizada fue la descrita por Mackey

y

1

MagGregor (1979), en base a l a distribución binomial negativa. Se utilizaron las tablas de Kastenbaum

y

Bowman para este an&

.

. I 1

c

RESULTADOS:

-

Los

resultados del análisis en médula Ósea se muestran en. la tabla

3

y

la figura 1. Podemos observar que no hubo un aumento significativo de micronúcieos en eritrocitos poiicrg máticos en los grupos tratados con

30 y

150 mg/kg de Niclosg mida, con respecto al nivel dr micronúcleos del grupo control.

E l aumento aparente que se observa en el grupo tratado con 300 mg/kg de Niclosamida no resultó significativo estadísticamen-

te, en ninguna de las tres pruebas realizadas. Además el an& lisis de varianza indicó que n3 hay diferencia significativa entre los tratamientos.

Por otro lado encontramos un aumento dz micronkleos en eritrocitos policromáticos en el grupo que recibió 10 mg/kg de Ciclofosfamida, que s f fue significativo estadfsiticamente en las tres pruebas. Esto nos garantiza que el sistema funcig

nó

correctamente

.

Para saber si los resultados negativos en

los

grupos tra-

tados con Niclosamida no se debieron a un efecto tóxico debido a lo prolongado

eritrocitos policromáticos

y

normocitos. Esta relación nos permite saber si hubo una disminución en la tasa de reproduc- ción celular de la médula, Ó si ésta fue invadida por normoci-

tos sanguíneos. En ambos casos el porcentaje de eritrocitos po- licromáticos disminuye con respecto al control.

-

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I.

La relación POL/NOR (eri troci tos pol icromáticos/normoci tos) aceptada generalmente es de 1:1, con una desviación standard de

-

+

-.2 (Hart

y

Engberg-Pedersen, 1983).

bla

3

muestran que no hubo una variación significativa de esta relación en los grupos tratados, incluyendo el de l a Ciclofosfa- mida. Esto nos indica que

el

tratamiento, a pesar de ser rela- vamente largo, no afectó la tasa de reproducción celular de l a médula Ósea.

número de células en una laminilla, fue difícil alcanzar el nÚ- mero de eri troci tos pol icromáticos necesarios para el análisis,

(500 por laminilla). Esto sugiere que el efecto en la médula

y

la

farmacocinética del compuesto varÍan considerablemente en- tre los individuos.

Los

resultados de l a ta-

Sin embargo hubo casos en los que a pesar del gran

En l a f lación dosis

La tab1

gura 2 podemos observar que no se encontró una re-

respuesta para los grupos tratados con Niclosamida.

4

y

l a

figura

3

resumen 105 resulatados obtenidos

en el análisis de micronúcleos en sangre periférica,

los

cuales

coinciden con los de l a médula Ósea.

dicÓ que el aumento de micronúcleos en el grupo de 150 mg/kg de Niclosamida no fue significativo.

mg/kg el número de micronúcleos incluso disminuyó. E l análisis de varianza mostró que no hay diferencia entre los tratamientos.

E l análisis estadístico

in

En los grupos de 30

y

300

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incremento de micronúcleos si fue significativo en las pruebas apl i cadas.

E l porcentaje de eritrocitos policromáticos en sangre tam- bién fue medido

y

no se encontró ninguna variación significativa, cayendo en todos

los

casos entre

los

valores nDrmales reportados

(MacGregDr et al. 1980).

I

La figura

4

muestra que tanpoco en el caso de sangre perif4 rica se encontró una relación dosis respuesta en

los

tratamientos con Niclosamida.

L . . ,

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DI

SCUS

I ON:

Es claro, por los resultados previos en el análisis de

orL

nas en la prueba de Ames (Cortinas de Nava et al. 1983),

y

de anomalías morfológicas de la cabeza del espermatozoide de ratón

(Vega et al.), que

la

Niclosamida es, no tan

sólo

absorbida, sino tanbién metabolizada

.-

in vivo

-

en el ratón. La mutagenicidad se observó en orinas de ratones que recibieron Niclosarnida oral- mznte por

7

días, desde dosis de alrededar de 17 mg/kg diarios

(con B-glucuronidasa)

y

de 170 mg/kg diarios (sin B-glucuronida- sa).

-

Para la prueba de anomal fas morfológicas del espermatozoide,

I

el efecto se registró desde 100 a 120 rng/kg de Niclosamida oral diarios, por

5

dfas.

Entonces

Ó mayores, l a prueba de micronúleos resultó negativa?. Para po- der contestarla, n=cesitarfamas sabe'r más acerca de

cómo

es me- tabolizada la Niclosamida.

l a pregunta sería ¿Por qué, uti 1 izando dosis

simi

lares

-

La Niclosamida es una sustancia lipofflica, muy poco soluble en agua; por

lo

tanto requiere de ser metabolizada para ser excrs tada. En base a su estructura, puede suponerse que el enlace ami- da puede ser susceptible

dr

hidrólisis por amidasas presentes en

diversos tejidos, tanto en las fracciones solubles como en las m i

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conjugarse con ácido glucurónico, sulfatos, glutation, etc. (Vega et al.). La mutagenicidad de las orinas en la prueba de Ames fue aumentada al añadir B-glucuronidasa (Cortinas de Na va et al., 1983), lo cual sugiere un elevado nivel de conjuga ciÓn de alguno de los mrtabolitos con ácido glucurónico. Pro- bablemente se trata de l a 2-cloro-p-nitroanilina, cuyos radi- cales (N02, NH2

y

Cl), forman parte dr muchos compuestos mut2 génicos

y

carcinogénicos.

I

Por otro lado las orinas de ratones que recibieron dosis

más altas de Niclosamida (* 170 mg/kg por día), fueron mutagé- nicas incluso sin B-glucuronidasa, En el ensayo con B-glucuro- nidasa resultaron hasta tóxicas para las bacterias, (Cortinas de Nava et al., 1983). Estos datos sugieren que los mctaboli- tos activos en forma n3 conjugada aumentan conforme aumenta l a d3sis. rebasando la capacidad dr1 sistema de conjugación.

I

Sin embargo, en el presente estudio, a d x i s aún más altas I

I

n3 se encontró ni mutagenicidad ni toxicidad en la médula Ósea, ya que no aumentaron los micronúcleos

y

la relación POL/NOR taE poco se alteró. Asimismo, no se encontró respuesta en sangre, cosa que ya esperábamx después dz analizar la médula. Este en- sayo había sido realizado para analizar l a cinétfca de l a res- puesta, en caso de haber sido positiva.

Las razones por las que l a prueba de tiva pueden ser varias. La primera es que

4 +- ' 1 '

plemente no podemos ver, porque

n 3

es ni clastogénico

ni

afecta

el aparato mitótico. En la prueba de Ames las cepas en que se dg

tectó la mutagenicidad fueron la

TA

98

y la

TA

1538,

que d-

o t e o

tan corrimie,ntos génicos. Este

tipo

de mutacióh, por ejemplo, no

puede ser detectada

por

la prueba de micronúcleos.

CONCLUSIONES:

-

A

pesar de

los resultados negativos en este estudio, exis-

ten numerosas pruebas dr la mutagenicidad de la Niclosamida, ta?

to

i n

vitro

como

--

in

---I

vivo

incluso

en

humanos (Ostrosky-Wegman et

al.,

1986),

por

lo

cual el posible riesgo que su uso implica n3

deba ser subestimado. Sin embargo, para conocer exactamente sus

efectos

y su mecanismo de acción,

más

estudios requieren de ser

real izados.

La prueba de micronúcleos

en

sangre periférica puede ser

una herramienta

Úti

1

para la evaluación de mutágenos débiles

altas d x i s , no llegó la molécula mutagénica a la médula Ósea en

cantidades suficientes,

Ó

llegó en forma conjugada y

por lo tan-

to'

inactiva. Otra posibilidad es que el mecanism3 de acción por

el que la molécula activa afecta la morfología del espermatozoi-

de, nD tenga efecto en la reproducción de

los eritroblastos, ya

sea porque son mznos sensibles

Ó

porque la molécula activa no puz

I

I

de penetrar

a

través de la membrana celular

Ó

nuclear.

Por otro

llegando al sitio de acción, pero que tenga un efecto que

s i m -

I

lado también existe la posibilidad de que el agente activo esté

I

I

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c:

c:

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(cuyos tratamientos requieren de tiempos

más

prolongados), corn3 complemento del análisis en médula Ósea. Es importante el hecho de que en la sangre periférica los micronÚcleos se van acumulan- do conforme pasa el tiempo, ya que el bazo de ratón no elimina a los eritrocitos micronucleados. En canbio en l a médula Ósea a veces hay un pico en la respuesta, que no detectamos debido al momento del muestreo,

lo

cual puede suceder aún en un trata- miento

d-

tipo subcrónico como el presente.

. .

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