Efecto Inhibitorio In Vitro Del Extracto Etanólico De Caesalpinia Spinosa Taya Sobre Cepas De Enterococcus Faecalis
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(2) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. RESUMEN. CA. El objetivo del presente estudio de tipo experimental fue determinar el efecto. MA TI. inhibidor in vitro del extracto etanólico de vainas de Caesalpinia spinosa (Taya) frente a cepas de Enterococcus faecalis. Se realizó la prueba de susceptibilidad, utilizando el método de difusión en discos. Las cepas de E. faecalis fueron sembradas. FO R. en placas que contenían medio de cultivo Mueller Hinton, se colocaron discos con las diferentes concentraciones del extracto etanólico de Taya. Las placas se incubaron a. IN. 37 0C midiéndose los halos con una regla vernier después de 24 horas; todos los. MA S. E. discos presentaron halo de inhibición, y los tamaños de estos aumentaron en relación directamente proporcional a las concentraciones utilizadas. Se empleó también el. TE. Método de dilución en tubos, ensayando concentraciones de 60%, 40%, 20% y 10% del extracto etanólico de vainas de C. spinosa; a los cuales se le agregó el inóculo de. SI S. E. faecalis. Se llevo a estufa a 37ºC por 24 horas, luego se sembró en placas con. DE. Agar Mueller Hinton para determinar las Unidades Formadoras de Colonias (UFC). Después de 48 horas se realizó el conteo de UFC. Todas las concentraciones. A. presentaron efecto inhibitorio del crecimiento de E. faecalis. La concentración. IN. mínima inhibitoria hallada fue la del 40 %.. OF. IC. Se concluye que el extracto etanólico de vainas de Caesalpinia spinosa “taya” posee actividad inhibitoria in vitro sobre el crecimiento de cepas de Enterococcus faecalis. Palabras clave: Caesalpinia spinosa, Enterococcus faecalis, Concentración Mínima Inhibitoria, Unidades Formadoras de Colonia. 2 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.
(3) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. ABSTRACT. CA. The aim of this experimental study was to determine the inhibitory effect in. MA TI. vitro of the etanolic extract pods Caesalpinia spinosa (Taya) against strains of Enterococcus faecalis. The susceptibility test was made, using the method of dissemination in discs. The strains of E. faecalis were sown in plates. FO R. containing culture medium Mueller Hinton, and placed discs with different. IN. concentrations of the ethanolic extract of Taya. These were incubated at 370C measured halos with a vernier rule after 24 hours; all discs presented halo of. MA S. E. inhibition, and sizes of these increased in relation directly proportional to the concentrations used. Employment is also the method of dilution in tubes,. TE. tested concentrations of 60 %, 40 %, 20% and 10% of the ethanolic extract of pods of C. spinosa; which was added the inoculum of E. faecalis.. SI S. The minimum inhibitory concentration found was 40 %.. DE. The conclusion of this study is that the ethanolic extract from pods of Caesalpinia spinosa "taya" has in vitro inhibitory activity on the growth of. A. strains of Enterococcus faecalis.. IC. IN. Key Words: Caesalpinia spinosa, Enterococcus faecalis, Minimum. OF. Inhibitory Concentration, Colony Forming Units. 3 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.
(4) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. I.. INTRODUCCIÓN. CA. Durante el tratamiento de conductos radiculares el objetivo de la preparación. MA TI. biomecánica es limpiar y modelar adecuadamente el conducto radicular antes de la obturación. Sin embargo, en muchos casos donde se realiza una necropulpectomía los conductos radiculares muestran bacterias aún después de una meticulosa. IN. FO R. preparación quirúrgica de conductos radiculares.1. Estos microorganismos conducen al fracaso del tratamiento endodóntico, así,. MA S. E. muestras de dientes obturados con frecuencia presentan bacterias facultativas Grampositivas que incluyen Enterococos, Estreptococos y Lactobacilos, presentándose una. TE. periodontitis apical persistente. 2. SI S. Baumgartner y cols.19923, quienes estudiaron las bacterias que se aislaban en los. DE. 5mm apicales de dientes con lesión periapical. Encontraron más de 50 especies de bacterias de las cuales 34, el 68%, eran anaerobias estrictas. Las especies aisladas. A. más frecuentemente fueron: Actinomyces spp., Lactobacillus spp., Bacteriodes no. IC. IN. pigmentados, Veillonella spp., Enterococcus faecalis, Fusobacterium nucleatum y. OF. Streptococcus mutans.. Diversos estudios han revelado que la microbiota de los dientes con fallas en el tratamiento endodóntico difieren de la microbiota encontrada normalmente en los conductos de dientes no tratados. 4-7 La microbiota que se encuentra en los dientes con 4. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.
(5) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. fracaso en el tratamiento endodóntico es predominantemente anaerobia facultativa y Gram positiva, siendo el Enterococcus faecalis la especie que se aísla con mayor. MA TI. CA. frecuencia.8. El Enterococcus faecalis es una bacteria en forma de coco dispuesta en cadenas o pares, Gram positiva, anaerobia facultativa, no esporulada e inmóvil y que ha sido. FO R. identificada como una causa frecuente de infección del sistema de conductos. IN. radiculares en dientes con fracaso en el tratamiento endodóntico. La temperatura óptima de crecimiento in vitro de este microorganismo es de 35ºC, no obstante, se ha. MA S. E. observado crecimiento entre 10ºC y 45ºC.9. TE. Una característica notable de esta especie es su capacidad para sobrevivir y crecer en microambientes que pudieran ser tóxicos para otras bacterias, entre estos en presencia. SI S. de Hidróxido de Calcio.10 Su erradicación del conducto radicular es difícil utilizando. DE. preparaciones químicomecánicas e irrigantes como desinfectantes, así como pastas y. A. sustancias antibacterianas.11. IC. IN. E. faecalis posee una pared celular con antígenos del grupo D, el cual es un ácido. OF. lipoteicoico que se encuentra asociado con la membrana citoplasmática de la bacteria y que contiene residuos de glicerol. Además, posee gran cantidad de mureina y ácido teicoico.12. 5 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.
(6) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. También se han realizado otras investigaciones dirigidas a aclarar el papel que juegan los factores de virulencia de E. faecalis, en la colonización por parte de esta bacteria. CA. en un medio tan pobre en nutrientes, como el conducto radicular medicado. La. MA TI. adhesión a la superficie de la dentina constituye un paso esencial que determina el potencial patógeno de este microorganismo, en el conducto radicular medicado.13, 14 Puesto que la dentina contiene colágeno y otras proteínas, se sugiere que las proteasas. FO R. sintetizadas por E. faecalis, así como la proteína de unión al colágeno (Ace) pudieran. MA S. E. la bacteria colonice el conducto radicular.15. IN. participar o por lo menos influir en la adhesión bacteriana, y por lo tanto permitir que. En los dientes con pulpa mortificada o necrótica, el contenido microbiano tóxico de. TE. la cavidad pulpar determina la opción por sustancias antisépticas. La medicación intraconducto será entonces un auxiliar valioso en la desinfección del sistema de. SI S. conductos radiculares, sobre todo en lugares inaccesibles a la instrumentación, como. DE. las ramificaciones del conducto principal y túbulos dentinarios. 16. A. La elección de una medicación intraconducto entre sesiones requiere de las mismas. IC. IN. consideraciones que la aplicación de cualquier fármaco en otra región del organismo. OF. humano. Por lo tanto es necesario considerar. Cantidad, localización y tiempo de aplicación.16. Una variedad de agentes antimicrobianos han sido evaluados por su habilidad para eliminar el E. faecalis del sistema del conducto radicular. Esto incluye preparaciones 6 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.
(7) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. entre. citas,. tales. como. Hidróxido. de. calcio,. Paramonoclorofenol,. Paramonoclorofenol Alcanforado y combinaciones de antibiótico-esteroideas, así. CA. como irrigantes tales como hipoclorito de sodio, digluconato de clorhexidina, Acetato. MA TI. de clorhexidina y componentes iodino.17. En un estudio in vivo e in vitro realizado por Spangberg et al se evaluó el efecto. FO R. sobre la irritación tisular (permeabilidad capilar) y la citotoxicidad de varios. IN. medicamentos: PCMF alcanforado, fenol alcanforado, cresatina, formocresol e yoduro de potasio yodado; y concluyeron que el PMCF alcanforado es el antiséptico. E. más tóxico e irritante, seguido de la cresatina; y el menos tóxico fue el yoduro de. TE. MA S. potasio yodado.18. Soekanto et al. , evaluaron la toxicidad de varios medicamentos (fenol, PMCF, fenol. SI S. alcanforado, PMCF alcanforado, alcanfor) sobre células pulpares de ratas a distintas. DE. concentraciones, y concluyeron que todos los medicamentos mostraron citotoxicidad, incluyendo al alcanfor solo, el cual se pensaba que era un vehículo que reducía la. A. toxicidad del fenol y PMCF, sin embargo, según este estudio el alcanfor por sí mismo. OF. IC. éstos.19. IN. mostró citotoxicidad y su adición al fenol y al PMCF incrementó la toxicidad de. Llamas et al, evaluaron en ratas el efecto in vitro del PMCF y el PMCF alcanforado sobre los macrófagos y demostraron que estos compuestos disminuyeron significativamente la capacidad de adhesión de macrófagos al sustrato. Tomando en 7. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.
(8) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. cuenta que la adhesión es el primer paso de la fagocitosis por parte de macrófagos además de la presentación del antígeno, tanto el PMCF como el PMCF alcanforado. CA. pueden inhibir la función del macrófago y modular las respuestas inflamatorias e. MA TI. inmune en los tejidos periapicales. Por lo tanto, cuando son usados intraconducto, pueden retardar los procesos reparativos. Quizá estos medicamentos sólo deban ser. FO R. usados en tratamientos de conductos de dientes con pulpas necróticas.20. IN. Todo esto indica la necesidad de un retorno a lo natural, con el objeto de encontrar nuevos principios biológicamente activos, para disminuir los efectos tóxicos del uso. MA S. E. de estas sustancias.21. TE. Paralelo al desarrollo tecnológico de la industria farmacéutica se ha desplegado un importante interés por parte de los investigadores en estudiar sustancias naturales que. DE. SI S. posean algunas propiedades farmacológicas con efecto antimicrobiano.22. Las plantas medicinales han sido utilizadas desde épocas primitivas en el tratamiento. A. de enfermedades. Durante mucho tiempo los fármacos naturales y sobre todo las. IC. IN. plantas medicinales, fueron el principal e incluso el único recurso del que disponían. OF. los médicos. Esto hizo que se profundizara en el conocimiento de especies vegetales con propiedades medicinales y que se ampliara la investigación a cerca de los productos que de ellas se extraen.23. 8 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.
(9) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. Nuestro país está considerado entre los 12 países de mayor diversidad biológica de la tierra, conocidos como países megadiversos tanto por el número de especies y de. MA TI. CA. recursos genéticos como por la variedad de ecosistemas.24. El uso de plantas es de gran importancia en la medicina tradicional. El conocimiento científico de ciertas especies es desconocido y es necesario que aprendamos a. FO R. investigar los recursos naturales. Este conocimiento permitirá determinar los. IN. principios activos de las plantas medicinales y estudiar su actividad en el organismo. MA S. atribuye a diversas especies vegetales.24. E. para después aislarlos, obtenerlos y avalar los usos que la medicina popular le. TE. En nuestro medio algunas plantas medicinales en el área de salud dental están siendo utilizadas en diversas formulaciones farmacéuticas, así tenemos: enjuagues bucales,. DE. SI S. colutorios, soluciones tópicas y pasta dental .24. La Caesalpinia spinosa (Taya) es una planta producida en varias zonas del país. En. A. el Perú, se encuentra en los valles interandinos secos entre 1000 y 3100 msnm, los. IC. IN. departamentos de mayor producción son Cajamarca (41%), Ayacucho (16%), La. OF. Libertad (13%), Huánuco (13%), también se reporta su presencia en Huancavelica, Apurímac. 25. 9 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.
(10) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. En Perú, numerosos estudios han reportado la presencia de taninos, flavonoides, gomas, alcaloides y proteínas en la Taya, que se pueden hallar tanto en la vaina como. MA TI. CA. en la semilla.26. Esta planta muy utilizada en la actualidad en la industria por sus altas concentraciones de tanino y ácido gálico, es conocida además por su alto poder. FO R. astringente por coagular las albúminas de las mucosas y de los tejidos, creando una. IN. capa aislante y protectora que reduce la irritación y el dolor; por tal motivo son usados externamente para detener pequeñas hemorragias locales; en inflamaciones de. MA S. E. la cavidad bucal, catarros, bronquitis, quemaduras, hemorroides, e internamente contra la diarrea, enfriamiento intestinal, afecciones vesiculares, y como. TE. contraveneno en caso de intoxicación por alcaloides vegetales.27. SI S. Los taninos tienen la propiedad de formar complejos con macromoléculas,. DE. particularmente con las proteínas; así forman enlaces puentes de hidrógeno, y una unión covalente, colocándose entre las fibras de colágeno de la piel, empleándolos en. A. medicina en tratamientos de excoriaciones y quemaduras de la piel donde las. IN. proteínas forman una capa protectora antiséptica bajo la cual se regeneran los. OF. IC. tejidos.28. En caso de la Caesalpinia spinosa "taya"; solo el extracto obtenido de la cáscara de. la Caesalpinia spinosa, tenía efecto inhibitorio mas no la pepa, que mostró un efecto. 10 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.
(11) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. inhibitorio nulo. Siendo este un aporte significativo para aquellas fórmulas. CA. tradicionales que utilizan el fruto completo de la taya.29. MA TI. La utilización de solventes orgánicos (como alcohol y acetona) tienen la ventaja de preservar mejor los extractos e inhibir el crecimiento de bacterias, hongos y otros, además de desnaturalizar las enzimas que pueden degradar los compuestos. FO R. biológicamente activos. En el caso de los extractos usando como solvente agua, estos. IN. dan muestras viscosas y gelatinosas las cuales se hicieron difíciles de procesar (dados estos factores, no podrían difundirse adecuadamente en el agar, y los resultados. MA S. E. obtenidos serían inconcluyentes).29. idea. representativa. del. TE. El uso de cepas bacterianas tanto Gram positivas como Gram negativas permitió una efecto. inhibitorio. sobre. dichos. microorganismos.. SI S. Demostrándose un efecto preferencial por las Gram positivas, debiéndose aún probar. DE. su efecto en un mayor número de cepas bacterianas.29. A. En la evaluación del extracto de taya usando el fruto (vaina) completo, se observó. IC. IN. actividad inhibitoria sobre cepas Gram positivas. Los componentes del fruto. OF. relacionados con dicha actividad corresponden exclusivamente a la cáscara de la vaina, donde la pepa no muestra actividad inhibitoria.29. Así mismo, en varios trabajos de investigación se concluye que la cáscara (vaina) de Caesalpinia spinosa demuestra una buena acción inhibitoria sobre Staphylococcus 11 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.
(12) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. aureus y Bacillus subtilis. 30,31 Mediante técnica de difusión en disco. Los extractos fueron preparados usando como solvente alcohol-acetona (1:1). Se observó actividad. CA. inhibitoria sobre cepas Gram positivas para el extracto de la vaina de tara más no. MA TI. para el de la semilla. No se determinó la concentración mínima inhibitoria.29. De igual manera en un estudio publicado en Journal of Ethnopharmacology,. FO R. manifiesta que la taya también presenta actividad antibacteriana contra Bacillus. IN. cereus, Staphylococcus epidermidis, Bacteroides fragilis.32. MA S. E. En otro estudio se hizo el ensayo antimicrobiano sobre extractos etanólicos al 80% de nueve plantas obtenidos por maceración durante 5 días, una de las muestras. TE. ensayadas fue la C. spinosa (vainas); se utilizaron cinco cepas Gram positivas y tres Gram negativas usando el método de microdilución del caldo de cultivo (broth. SI S. microdilution). Los resultados son poco relevantes para la muestra mencionada a 33. , sin. DE. excepción del ensayo contra E. faecalis donde el CMI fue de 0.5 mg / ml. embargo no se menciona las diferentes concentraciones a las que fue comparada la. IC. IN. A. acción del extracto etanólico de C. spinosa.. OF. Teniendo en cuenta las propiedades curativas, y el amplio y variado efecto antibacteriano que presenta la Caesalpinia spinosa, nace el interés de determinar su efecto antimicrobiano frente a uno de los agentes etiológicos con mayor capacidad de supervivencia durante los procedimientos endodónticos, el Enterococcus faecalis.. 12 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.
(13) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. Es así que con el presente estudio se propone determinar el efecto in vitro y la concentración mínima inhibitoria que presenta el extracto etanólico de vainas de. CA. Caesalpinia spinosa “taya” sobre el crecimiento de E. faecalis, ya que es muy poca la. MA TI. información a la acción in vitro de este agente y en nuestro medio no existen trabajos similares en donde se demuestre el efecto antibacteriano de esta sustancia.. FO R. De obtener el efecto inhibitorio del extracto etanólico de vainas de C. spinosa (taya). IN. sobre el crecimiento de cepas de Enterococcus faecalis se abrirá una puerta de posibilidades en la terapéutica de piezas dentarias con necrosis pulpar, que reducirá. MA S. E. los fracasos endodónticos ocasionados por infecciones persistentes y que evitará la exposición local y sistémica a sustancias tóxicas, ya que esta solución podría. TE. constituirse en una alternativa de origen natural para la medicación intraconducto.. SI S. 1.1. Enunciado del problema:. ¿Existe efecto inhibitorio in vitro del extracto etanólico de vainas de Caesalpinia. A. DE. spinosa (Taya) sobre el Enterococcus faecalis ATCC 29212?. IN. 1.2. Hipótesis:. presenta efecto. IC. El extracto etanólico de vainas de Caesalpinia spinosa. OF. inhibitorio in vitro sobre cepas de Enterococcus faecalis ATCC 29212.. 13 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.
(14) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. 1.3. Objetivos: 1.3.1. Objetivos Generales: Conocer el efecto inhibitorio in vitro del extracto etanólico de vainas de. CA. . MA TI. Caesalpinia spinosa (Taya) sobre cepas de Enterococcus faecalis ATCC 29212.. . FO R. 1.3.2. Objetivos Específicos:. Determinar cualitativamente el efecto inhibitorio in vitro del extracto. IN. etanólico de vainas Caesalpinia spinosa al 10%, 20%, 40% y 60% sobre el crecimiento del Enterococcus faecalis ATCC 29212.. E. Determinar cuantitativamente el efecto inhibitorio in vitro del extracto. MA S. . etanólico de vainas Caesalpinia spinosa al 10%, 20%, 40% y 60%. TE. sobre el crecimiento del Enterococcus faecalis ATCC 29212. Determinar la concentración mínima inhibitoria del extracto etanólico de. SI S. vainas de Caesalpinia spinosa (Taya) sobre el crecimiento de cepas de. OF. IC. IN. A. DE. Enterococcus faecalis.. 14 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.
(15) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. II. MATERIAL Y MÉTODOS. 2.1.1. CA. MATERIAL DE ESTUDIO: Material biológico:. MA TI. 2.1. Cepa de Enterococcus faecalis ATCC 29212, procedente de Microbiologics Laboratory, obtenida en el Instituto Nacional. IN. 2.1.2. Material botánico:. E. de Caesalpinia spinosa “taya” o “tara”, vainas. MA S. Las vainas. FO R. de Salud, Lima- Perú.. secas, recolectadas en la distrito de Otuzco. En el laboratorio. TE. se seleccionó las vainas que no tenían daño alguno en su. SI S. cubierta; quedando aptas para su procesamiento.. MÉTODOS Y TÉCNICAS:. DE. 2.2. 2.2.1. Tipo de Investigación: El presente trabajo presenta un diseño. A. experimental, “in vitro”, prospectivo y transversal.. OF. IC. IN. 2.2.2. Muestra: La muestra estará constituida por cepas de Enterococcus Microbiologics. faecalis. ATCC. Laboratorio,. 29212.. adquiridos. Proveniente en. el. del. Instituto. Nacional de Salud, Lima- Perú. La cepa se enfrentó a cuatro concentraciones (10%, 20%, 40% y 60%) del extracto etanólico de vainas de Caesalpinia spinosa “Taya”. 15. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.
(16) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. VARIABLES Y ESCALAS DE MEDICIÓN:. Variable. Indicador. Extracto etanólico de. Concentración de. Caesalpinia spinosa. Caesalpinia spinosa al Cuantitativa. Variable independiente. 10%, 20%, 40% y. Escala. Ordinal. FO R. MA TI. Tipo. CA. 2.3. Efecto inhibitorio In Vitro. Escala de Duraffourd. sobre cepas. MA S. E. IN. 60%.. Variable dependiente. Razón. Cuantitativa. Ordinal. Diámetro de halo inhibitorio. TE. Enterococcus faecalis.. Cualitativa. DE. SI S. Unidades Formadoras de Colonias.. A. 2.4 Definición de términos operacionales:. Extracto etanólico de vainas Caesalpinia spinosa (Taya): Extracto. OF. IC. IN. . cuyo solvente es etanol y que contiene los principios activos de la planta Caesalpinia spinosa preparado a las concentraciones del 10%,. 20%, 40%, 60%.. 16 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.
(17) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. . Efecto inhibitorio in vitro: Capacidad para detener la reproducción o muerte de una bacteria. Se determinara cualitativamente según la. . Escala. de. Duraffourd:. Escala. MA TI. CA. escala de Duraffourd y cuantitativamente según CIM.. utilizada. para. determinar. FO R. cualitativamente el efecto inhibitorio in vitro, según diámetro de halos. IN. de inhibición. Nula (-), para un diámetro inferior a 8 mm.. . Sensibilidad límite (sensible = +) para un diámetro. MA S. E. . comprendido entre 8 a 14mm Medio (muy sensible =++) para un diámetro entre 14 y 20mm. . Finalmente para un diámetro superior a 20 mm el. TE. . DE. SI S. microorganismo es sumamente sensible (+++). Concentración inhibitoria mínima: Concentración mínima de una. IN. A. sustancia que impide el crecimiento bacteriano in vitro.Se considera. OF. IC. CIM aquella en la que se presenta un crecimiento < de 30 UFC. 17 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.
(18) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. 2.5 Diseño Procedimental:. CA. 2.5.1. Preparación del inóculo:. MA TI. Cada cepa se diluyó en Tioglicolato estéril hasta que se obtuvo una turbidez semejante al tubo 1 del Nefelómetro de Mc Farland, el cual contenía. FO R. 1 x 108 UFC. IN. 2.5.2. Obtención del extracto etanólico de vainas de Caesalpinia spinosa34: Se preparó extracto etanólico de vainas de Caesalpinia spinosa (Taya),. MA S. E. para lo cual se seguirá el siguiente procedimiento:. TE. Se obtuvieron un kilogramo de vainas secas de “Taya” teniendo en cuenta su tamaño, color y estado.. SI S. A continuación, se pusieron a secar al horno a una temperatura de 40ºC. DE. por un periodo de 36 h. con la finalidad de eliminar de forma eficiente la humedad.. A. Luego, se procedió a moler las muestras secas utilizando un mortero,. IC. IN. hasta obtener un pulverizado homogéneo, de esta muestra solo se tomó. OF. 50 gr de la muestra molida y se colocaron en un frasco oscuro de vidrio con 500 mL de etanol comercial de 70º (C2 H5 OH), y fue llevado a. maceración por 10 días. Después se filtró el macerado utilizando papel Whatman Nº 4 en un matraz estéril, la solución obtenida fue de 330 ml esta se distribuyó en 3 18. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.
(19) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. vasos de precipitación de 10 ml y en un vaso de 300 ml y se llevó una estufa a 40º C hasta la evaporación total del alcohol, obteniendo 0.85. CA. gramos de polvo seco de extracto de taya por cada 10 ml de la muestra. estériles.. FO R. 2.5.4. Estandarización de la solución Stock 35:. MA TI. después de 12 días de evaporación. El extracto se recibió en viales. IN. Se pesó 0.9693 g de extracto seco en un vial estéril y luego se agregó 0.65 ml. de etanol, para obtener la Solución Stock cuya concentración. MA S. E. final fue del 60 %.. Luego de obtenida la Solución Stock se procedió a preparar las. TE. concentraciones al 10%, 20%, 40% y 60%.. SI S. 2.5.5. Determinación de la concentración mínima inhibitoria (CMI) in. DE. vitro de Caesalpinia spinosa.. A. Se determinó la concentración mínima inhibitoria (CMI) mediante la. IC. IN. técnica de dilución en tubos, se colocó 0.5 ml de extracto etanólico de. OF. Caesalpinia spinosa al 10%, 20%, 40% y 60% en tubos diferentes, a este se agregó 0.2 ml de la cepa preparada en Tioglicolato. Se realizó 10 repeticiones por cada concentración y 10 más para el tubo control. Luego, los 50 tubos de ensayo fueron colocados en la Jarra Has Pack, incubados en la estufa a 37º C por 24 horas. 19. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.
(20) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. Posteriormente se tomó 0.1 ml. de la dilución de cada uno de los tubos. CA. placas, y se sembró en placas petri que contenían medio de cultivo Mueller. MA TI. Hinton, se usó el asa de Driglasky para dispersar la muestra, todo el procedimiento se llevó a cabo dentro del diámetro de 10 cm. de la llama de un mechero.Dichas placas fueron colocadas dentro de la Jarra Has Pack, llevadas. FO R. a la estufa a 37°C por 48 horas.. IN. Finalmente se observó el crecimiento bacteriano y se realizó el conteo de las. 2.5.6.. Determinación. del. efecto. antibacteriano. (prueba. de. TE. susceptibilidad):. MA S. E. Unidades Formadoras de Colonias (UFC).. SI S. Para la prueba de susceptibilidad, se prepararon 4 diluciones a las. DE. concentraciones del 10%, 20%, 40%, 60% de extracto etanólico de Caesalpinia spinosa. Dichas diluciones se conservarán a 4 ºC para el estudio. IC. IN. A. microbiológico en frascos ámbar.. OF. Para esta prueba se utilizó el método de Difusión en Discos. Se prepararon. discos de papel filtro estériles, los cuales fueron cargados con 50 µl de cada concentración del extracto etanólico.. 20 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.
(21) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. Luego con una aguja estéril estos fueron colocados sobre placas petri que contenían cultivos de Enterococcus faecalis ATCC 29212 en medio Mueller. CA. Hinton. Se hicieron 16 repeticiones por cada concentración. MA TI. Todo el procedimiento se llevó a cabo dentro del diámetro de 10 cm. de la llama de un mechero. Posteriormente las placas se incubaron a 37°C en microanaerobiosis haciendo uso de la Jarra de Has Pack.. FO R. La lectura se llevó a cabo a las 24 horas. Se midieron los halos de inhibición. IN. de cada una de las concentraciones, incluyendo el área del disco de papel de filtro, con un calibrador vernier o pié de rey.. E. Al hacer la lectura, se clasificó los diámetros de los halos de inhibición. OF. IC. IN. A. DE. SI S. TE. MA S. teniendo en cuenta a escala de Duraffourd.36. 21 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.
(22) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. 3. ANÁLISIS. ESTADÍSTICO. E. INTERPRETACIÓN. DE. LA. INFORMACIÓN. MA TI. frecuencias de una entrada con sus valores absolutos.. CA. Para analizar la información se construyeron cuadros de distribución de. Para establecer si la distribución de los promedios de halos de inhibición. FO R. difieren entre si según la concentración del extracto etanólico de taya en la efectividad antibacteriana tipo cuantitativa, se utilizó la prueba de Análisis de. IN. varianza .En los casos que hubo distribución significativa se aplicó la prueba. E. de comparaciones múltiples o Prueba de Duncan.. MA S. Para establecer si la distribución de los halos de inhibición difieren entre si según la concentración del extracto etanólico de Taya. en la efectividad. TE. antibacteriana tipo cualitativa, se utilizó la prueba Chi cuadrado.. SI S. Ambas con una significancia al 5 %. Con la información recolectada se construyó una base de datos que serán. DE. procesados de manera automatizada con el soporte del paquete estadístico. OF. IC. IN. A. SPSS - 15.0.. 22 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.
(23) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. III.. RESULTADOS. cuyo propósito fue de. CA. En el presente estudio de tipo experimental “in vitro”,. MA TI. determinar el efecto inhibitorio del extracto etanólico de vainas de Caesalpinia spinosa Taya sobre Enterococcus faecalis ATCC29212, y para la cual se utilizaron 4 concentraciones 10%, 20%, 40% y 60%, y un grupo control, se hallaron los. FO R. siguientes resultados:. Después de realizada la prueba de susceptibilidad y de haber medido los halos de. IN. inhibición, se clasificó los diámetrosde acuerdo a la escala de Duraffourd38. MA S. . E. obteniendo que:. De las 16 repeticiones al 10%, 15 presentaron eficacia límite y 1 efecto. TE. medio. De las 16 repeticiones al 20%, 14 presentaron efecto límite y dos efecto medio, de las 16 repeticiones al 40% todas presentaron efecto medio ,. SI S. y de las 16 repeticiones al 60% 15 presentaron efecto medio y 1 efecto alto en. . DE. la inhibición de Enterococcus faecalis ATCC 29212. Los promedios de los diámetros de halo de inhibición de crecimiento del. IN. A. Enterococcus faecalis al 10% fue de 12.9mm, al 20% de 13.5mm, al 40% de 16.16 y al 60% de 17.31. IC. . OF. El promedio de unidades formadoras de colonias obtenida a las 4 diferentes diluciones fueron: al 10% -35 UFC, al 20% -30 UFC promedio, al 40%- 3 UFC promedio, y al 60% -0UFC.. 23 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.
(24) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. Tabla No1: Efecto inhibitorio in vitro cualitativo del extracto etanólico de vainas Caesalpinia spinosa al 10%, 20%, 40% y 60% sobre el crecimiento. CONCENTRACIÓN. MA TI. CA. del E. faecalis ATCC 29212, según escala de Duraffourd.. ESCALAS DE DURAFFOURD. TOTAL. Muy sensible. 10%. 15. 1. 20%. 14. 2. 16. 40%. 0. 16. 16. 60%. 0. 16. 16. TOTAL. 29. 35. 64. 16. MA S. E. IN. FO R. Sensible. Fuente: Datos obtenidos por el grupo investigador, año2011. SI S. TE. Sensible = + de 8 - 14mm Muy sensible = ++ para un diámetro entre 14 y 20mm. En la tabla No 1, se observa el efecto inhibitorio in vitro cualitativamente del. DE. extracto etanólico de vainas Caesalpinia spinosa al 10%, 20%, 40% y 60% sobre el. OF. IC. IN. A. crecimiento del Enterococcus faecalis ATCC 29212, según las pautas de Duraffourd,. 24 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.
(25) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. Tabla No2: Efecto inhibitorio in vitro cuantitativo del extracto etanólico de vainas Caesalpinia spinosa al 10%, 20%, 40% y 60% sobre el crecimiento del. CA. E. faecalis ATCC 29212, según diámetro de halo inhibitorio y mediante el. 208.074 155.672 363.743. 3 60 63. Cuadrados medios 69.358 2.595. F. P. 26.732 0.000. IN. Tratamiento Error Total. Gl. FO R. Fuente de variación Suma de cuadrados. MA TI. Análisis de Varianza. MA S. E. Fuente: Datos obtenidos por el grupo investigador, año2011. En la tabla Nº 2, se muestra el análisis de varianza, y se obtuvo como resultado. TE. que existe una diferencia estadística altamente significativa del diámetro del. SI S. halo de inhibición del crecimiento del Enterococcus faecalis de acuerdo a la. OF. IC. IN. A. DE. concentración del extracto etanólico de Caesalpinia spinosa aplicada.. 25 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.
(26) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. Tabla No3: Efecto inhibitorio in vitro cuantitativo del extracto etanólico de vainas Caesalpinia spinosa al 10%, 20%, 40% y 60% sobre el crecimiento. CA. del E. faecalis ATCC 29212, según diámetro de halo inhibitorio y mediante. Concentraciones. ni. MA TI. la Prueba de Duncan. Grupos alfa=0.05. 16. 12.94. 20%. 16. 13.56. 40%. 16. 60%. 16. 3. IN. 10%. 2. FO R. 1. E. 16.16. MA S. 17.31. TE. Fuente: Datos obtenidos por el grupo investigador, año2011. SI S. En la tabla Nº 3, se muestran los promedios del diámetro de halo de inhibición de crecimiento del Enterococcus faecalis después de aplicar la técnica de. DE. difusión en discos. Se realizó la Prueba de Duncan, que comparó cada uno de los. A. promedios de los halos, demostrando que no existe diferencia significativa entre. IN. los diámetros promedios de los halos inhibitorios del extracto etanólico al 10 % y. IC. al 20%; pero existe diferencia significativa entre el este grupo homogéneo y el de. OF. 40% y 60%. También existe diferencia significativa entre el tamaño de halo inhibitorio formado al 40% de. concentración. de extracto etanólico de C.. spinosa y el grupo del 60 % (p=0.05).. 26 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.
(27) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. TE. MA S. E. IN. FO R. MA TI. CA. Gráfico Nº 1: Efecto inhibitorio in vitro cuantitativo del extracto etanólico de vainas de Caesalpinia spinosa a diferentes concentraciones sobre E. faecalis ATCC29212. SI S. Fuente: Datos obtenidos por el grupo investigador, año2011. En el Gráfico Nº 1, se aprecia que conforme aumenta la concentración del. DE. extracto etanólico de Caesalpinia spinosa aumenta el diámetro de halo de. OF. IC. IN. A. inhibición, es decir aumenta el efecto inhibitorio. 27 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.
(28) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. Tabla No4: Efecto inhibitorio in vitro cuantitativo del extracto etanólico de vainas Caesalpinia spinosa al 10%, 20%, 40% y 60% sobre el crecimiento del. MA TI. CA. E. faecalis ATCC 29212, según UFC y mediante el Análisis de Varianza.. Fuente de variación Suma de cuadrados Gl Cuadrados medios F Tratamiento 9,778.100 3 3,259.367 1,783.240 36. Total. 9,843.900. 39. 1.828. FO R. 65.800. IN. Error. P 0.000. E. Fuente: Datos obtenidos por el grupo investigador, año 2011. MA S. En la tabla Nº 4, se muestra el análisis de varianza, el cual determina que existe una diferencia estadística altamente significativa en el crecimiento de UFC de. TE. Enterococcus faecalis de acuerdo a la concentración del extracto etanólico de. OF. IC. IN. A. DE. SI S. Caesalpinia spinosa aplicada. (p = 0.000).. 28 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.
(29) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. Tabla No5: Efecto inhibitorio in vitro cuantitativo del extracto etanólico de vainas Caesalpinia spinosa al 10%, 20%, 40% y 60% sobre el crecimiento de. E. IN. FO R. MA TI. CA. E. faecalis ATCC 29212, según UFC y mediante la Prueba de Duncan. MA S. Fuente: Datos obtenidos por el grupo investigador, año 2011. TE. En la tabla Nº 5, se muestran los promedios de UFC de Enterococcus faecalis después de la aplicación del extracto etanólico de C. spinosa. a diferentes. OF. IC. IN. A. DE. SI S. concentraciones, se realizó la Prueba de significancia de Duncan.. 29 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.
(30) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. Gráfico Nº 2: Efecto inhibitorio in vitro cuantitativo de UFC de Enterococcus faecalis ATCC29212 en función a cada una de las cuatro. SI S. TE. MA S. E. IN. FO R. MA TI. CA. concentraciones del extracto etanólico de Caesalpinia spinosa.. DE. Fuente: Datos obtenidos por el grupo investigador. IN. A. En el gráfico Nº 2, se muestra que conforme se aumenta la concentración del. IC. extracto etanólico de Caesalpinia spinosa el número de unidades formadoras de. OF. colonias promedio de Enterococcus faecalis disminuye, es decir el efecto inhibitorio aumenta.. 30 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.
(31) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. Tabla No 6: Determinación de la concentración mínima inhibitoria del. CA. extracto etanólico de vainas de Caesalpinia spinosa sobre cepas de. MA TI. Enterococcus faecalis ATCC 29212.. UNIDADES FORMADORES DE COLONIAS Enterococcus faecalis. FO R. CONCENTRACION DE EXTRACTO ETANÓLICO DE Caesalpinia spinosa. DE. 3. 109. 109. 109. 10%. 34. 35. 20%. 30. 6. 7. 8. 9. 10. PROMEDIO. 109. 109. 109. 109. 109. 109. 109. 109 UFC. 35. 35. 35. 36. 36. 35. 35. 35 UFC. SI S. 34. 29. 30. 29. 32. 28. 30. 32. 30. 31. 30 UFC. 3. 0. 0. 6. 5. 5. 4. 0. 3. 3 UFC. 0. 0. 0. 0. 0. 0. 0. 0. 0. 0 UFC. 4. IN. A. 40%. 5. DE. CONTROL. 4. MA S. 2. TE. 1. E. IN. NÚMERO DE REPETICIONES. 0. IC. 60%. OF. Fuente: Datos obtenidos por el grupo investigador, año 2011.. En la tabla Nº 6 se muestra las UFC registradas en las 10 repeticiones por cada concentración de extracto etanólico de Caesalpinia spinosa y el promedio de estas por concentración. La dilución al 40% presentó menos de 30 UFC constituyendo la CMI mientras que en la del 60% no se encontró UFC. 31. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.
(32) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. IV.. DISCUSIÓN. etanólico de Caesalpinia spinosa a cuatro diferentes. MA TI. vitro del extracto. CA. El presente estudio de tipo experimental, demostró el efecto inhibitorio in. concentraciones 10%, 20%, 40% y 60% frente a cepas de Enterococcus faecalis; si. FO R. bien existe un trabajo que demuestra la actividad de Caesalpinia spinosa frente a Enterococcus faecalis, donde se menciona que la CMI fue de 0.5 mg / ml. 33. , no se. IN. detalla cómo fue determinado este, ni el parámetro de concentraciones a partir de las. E. cuales se determinó este valor.. MA S. Es así que para determinar las concentraciones finales a aplicar, se realizó una prueba piloto en donde se incluye la CMI. mencionada anteriormente como. TE. referencia, elaborando así concentraciones al 0.25mg/ml, 0.5 mg/ml, 0.75 mg/ml y 1. SI S. mg/ml y comparando su efecto con la del extracto etanólico al 40% de concentración, mediante la prueba de susceptibilidad se determinó después de 24 horas que la única. DE. concentración que presentó efecto inhibitorio fue la concentración de extracto. A. etanólico al 40%.. se utilizaron concentraciones de extracto. IN. En función a este resultado. IC. etanólico de Caesalpinia spinosa proporcionales cercanas mayores y menores, tales. OF. como 10 %, 20%, 40% y 60%. Determinando a partir de estas concentraciones finales la CMI. La concentración mínima inhibitoria obtenida fue la de 40 %, ya que el número de UFC a partir de esta concentración fue menor a 30.38 Sin embargo todas. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/ 32.
(33) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. las concentraciones tuvieron efecto inhibitorio comparado con el control en donde se observó un crecimiento de UFC de aproximadamente 109 UFC/ml. (Tabla 5). CA. Los promedios de diámetros de halos de inhibición obtenidos después de. MA TI. aplicada la prueba de susceptibilidad de difusión en discos, demostró que existe diferencia altamente significativa del efecto inhibitorio entre los grupos formados. (Tabla 2), así mismo al comparar el efecto inhibitorio de las 4 concentraciones a. FO R. través de la prueba de Duncan obtenemos que no existe diferencia significativa entre. MA S. E. de Caesalpinia spinosa. (Tabla 3). IN. el efecto inhibitorio producido al 10% y 20 % de concentración del extracto etanólico. Sin embargo al aplicar la prueba de Duncan para comparar el crecimiento de. TE. UFC a las diluciones de 10%,20%,30% y 40% se determinó que cada una de estas presenta un efecto inhibitorio diferente altamente significativo en el crecimiento de. DE. SI S. UFC de Enterococcus faecalis (p=0.05). (Tabla 4).. Malpartida, realizó un estudio experimental donde compara el efecto del. A. aceite esencial de Minthostachis mollis (muña), Paramonoclorofenol alcanforado y. IC. IN. Gluconato de clorhexidina al 2 % frente a cepas de E. faecalis, en dónde los. OF. diámetros de halo de inhibición oscilaron entre 13.8 y 15.02mm, 17.6 y 19.42mm y 23.41 y 23.64 respectivamente.38 En el presente estudio al aplicar el extracto etanólico de Caesalpinia spinosa. se obtuvo de halos de inhibición promedios entre 12.9 y 17.3mm (Tabla 3), lo que. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/ 33.
(34) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. nos estaría indicando que este extracto etanólico presenta un efecto inhibitorio mayor al del. aceite esencial de Minthostathis mollis y un efecto similar al del. CA. Paramonoclorofenol alcanforado, 19. MA TI. Azaña , en el 2010, realizó otro estudio en donde determina efectividad antibacteriana in vitro del aceite esencial de Minthostachys mollis griseb (muña) sobre bacterias prevalentes en patologías periapicales crónicas de origen endodóntico, entre ellas el. FO R. E. faecalis; en el que se aplicó la prueba de sensibilidad o susceptibilidad bacteriana. IN. y en donde el aceite esencial de muña al 100 % presentó un promedio de diámetro del halo inhibitorio de 9 mm , al 50% presentó halo promedio de 7.0 mm y al 25% un. MA S. E. halo inhibitorio promedio de 5 mm , el paramonoclorofenol que fue un Control + un promedio de halo inhibitorio de 12mm.. TE. Sin embargo los promedios de halos inhibitorios obtenidos al aplicar el extracto etanólico de Taya sobre E. faecalis fueron de 12.9 mm al 10%, 13.6mm al 20%,. SI S. 16.1mm al 40% y de 17.3mm al 60% (tabla3); promedios mayores a los formados por. DE. el aceite esencial de muña y al formado por el paramonoclorofenol. Así mismo al comparar cualitativamente los resultados, según la escala de. A. DURAFFOURD el esencial de muña al 100% causó sensibilidad límite sobre E.. IC. IN. faecalis; el extracto etanólico de Caesalpinia spinosa causó sensibilidad límite al. OF. 10% y 20%, pero al aumentar la concentración causó sensibilidad media y alta sobre las cepas de E. faecalis. (TABLA 1) Estos resultados podrían deberse a que son especies vegetales diferentes y. tienen un perfil fitoquímico distinto; así también, a que la obtención de principios. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/ 34.
(35) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. activos se llevó a cabo bajo procesos distintos. El mayor efecto inhibitorio de la Caesalpinia spinosa podría deberse a que al utilizar un solvente orgánico (etanol) se. CA. preserva mejor los compuestos biológicamente activos.25. MA TI. Así también, estudios hasta ahora realizados demuestran que la “taya” contiene taninos, flavonoides, y gomas, de allí su efecto antimicrobicida27. La vaina posee la mayor concentración de taninos que oscila entre 40% y 60%. Las vainas de. FO R. Caesalpinia spinosa contienen hasta 25 % de ácido gálico, que es uno de los mayores. IN. constituyentes de los taninos.26. Probablemente los taninos serían los fitoconstituyentes con mayor propiedad. E. antibacteriana, al precipitar las proteínas (enzimas), implicadas en las diversas rutas. MA S. microbianas26.. TE. Lock de Ugaz37, en su investigación demuestra que los fenoles y flavonoides, constituyentes también de Caesalpinia spinosa, tienen propiedades antiinflamatorias,. SI S. antibacterianas, y antifúngicas, cuya acción provoca lesiones en la membrana. DE. citoplasmática, ocasionando una disfunción en la composición interna de las células. OF. IC. IN. A. bacterianas.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/ 35.
(36) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. 1.. MA TI. CA. V. CONCLUSIONES. El extracto etanólico de Caesalpinia spinosa (Taya) presenta efecto inhibitorio in vitro sobre cepas de Enterococcus faecalis ATCC 29212 a las. IN. 2.. FO R. 24 horas de su aplicación.. El extracto etanólico de vainas de Caesalpinia spinosa (Taya) presenta. MA S. E. efecto inhibitorio in vitro cualitativo límite para las concentraciones del 10% y 20% y efecto inhibitorio medio para las concentraciones del 40% y 60% ,. TE. sobre cepas de Enterococcus faecalis ATCC 29212 ,según la escala de. El efecto inhibitorio in vitro cuantitativo del extracto etanólico de vainas de. DE. 3.. SI S. Duraffourd.. Caesalpinia spinosa sobre el E. faecalis ATCC29212 a las concentraciones. A. de 10%, 20%, 30% Y 60% fue directamente proporcional al diámetro de los. OF. IC. IN. halos de inhibición, y a la formación de UFC.. 4.. La concentración inhibitoria mínima in vitro fue de 40 % para el extracto. etanólico de vainas de Caesalpinia spinosa frente a las cepas de Enterococcus faecalis ATCC 29212.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/ 36.
(37) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. MA TI. CA. VI. RECOMENDACIONES. 1. Realizar estudios comparativos in vitro del efecto del extracto etanólico de. FO R. Caesalpinia spinosa con medicamentos intraconducto .. IN. 2. Ejecutar estudios experimentales in vitro con Caesalpinia spinosa frente a. E. patógenos de la cavidad bucal, para ampliar el espectro de actividad. MA S. antimicrobiana de esta.. TE. 3. Obtener otros tipos de extractos de Caesalpinia spinosa para comparar con el. SI S. extracto etanólico, y determinar la eficacia antibacteriana.. DE. 4. Realizar pruebas in vivo para valorar la efectividad y la toxicidad que pueden. A. proporcionar los componentes activos de Caesalpinia spinosa, así como la. IN. dosis terapéutica y la concentración óptima para ser utilizado como. OF. IC. medicamento intraconducto en tratamientos endodónticos.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/ 37.
(38) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. IV. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS. Byström A, Süngvist G. The antibacterial action of sodium hypoclorite and. CA. 1.. MA TI. EDTA in 60 cases of odontology therapy. INT ENDOD J. 1985; 18(1):35-40. En: “Efecto inhibidor del aceite esencial de Minthostachysmollis en. FO R. comparación al paramonoclorofenol alcanforado y gluconato de clorhexidina al 2 % frente a cepas de Enterococcus faecalis”. Malpartida Quispe F. Rev. E. IN. del COP de Región Lima. Setiembre 2010; 15 (32): 9-12.. MA S. 2. Kvist T, Molander A, Dahlén G, Reit C. Microbiological evaluation of one and two visit endodontic treatment of teeth with apical periodontitis:. 20. enero. 2011],. Disponible. en:. SI S. [citado. TE. Arandomized, clinical trial. J Endod. [en línea] 2004; 30 (8): 572-576.. DE. http://www.jendodon.com/article/S0099-2399(05)60238-5/fulltext. 3. Baumgartner JC, Cuenin PR. Efficacy of Several Concentrations of Sodium. IN. A. Hypochlorite for Root Canal Irrigation. J endodon 1992; 18(12): 605 – 612.. IC. En “Evaluación in Vitro de la eficacia antibacteriana del Hipoclorito de. OF. Sodio al 1%, 2.5% y 5.25% a diferentes Temperaturas frente a cepas de Enterococcus faecalis (ATCC 29212)”. Barrantes Valdivia, Gonzalo Miguel. [tesis para optar. el título de cirujano dentista].2009. Escuela de. Estomatología. Universidad Nacional de Trujillo. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/ 38.
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(48) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. CA. Tabla Nº 1: Efecto inhibitorio in vitro del extracto etanólico de vainas de Caesalpinia spinosa (Taya) sobre cepas de Enterococcus faecalis ATCC 29212, según el método de difusión en discos.. CONCENTRACIONES DE EXTRACTO ETANÓLICO DE Caesalpinia spinosa 60% T5 18. Control F3 0. 19. 0. 19. 0. 16 15.5 15 15.5 16 16 15 19 17 17.5 17 18 16. 19 20 20 20 21.5 13 14 14 16 16 16 14 17.5. 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0. 16.1. 17.3. 0. 20%. 40%. 1. 16. 15. 15. 2. 14. 14. 15. 3. 13.5. 13.5. 15. 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16. 13 13 13 13 11.5 14 13.5 13 13 12 12 11.5 11. 13.5 13 13 13 12.5 14.5 14 14 14 13.5 13.5 13 13. E. MA S TE. SI S. DE. 12.9. 13.6. IN. A. Prom (mm.). IN. 10%. FO R. N/C. MA TI. DIÁMETRO DEL HALO DE INHIBICIÓN (mm). OF. IC. Fuente: Datos obtenidos por el grupo investigador, año2011. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/ 48.
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(50) IN. FO R. MA TI. CA. Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. IN. A. DE. SI S. TE. MA S. E. Secado y selección de Caesalpinia spinosa. OF. IC. Vainas de Caesalpinia spinosa Taya seleccionada- Material estéril necesario para procesamiento. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/ 50.
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(52) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. MA S. E. IN. FO R. MA TI. CA. Aplicación de 500 ml de alcohol de 70º a los 50gr de polvo de Taya contenido en botella ámbar; la solución obtenida estéril se dejó macerar por 10 días en un lugar oscuro y a temperatura ambiente.. OF. IC. IN. A. DE. SI S. TE. Filtrado después de 10 días de maceración. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/ 52.
(53) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. MA S. E. IN. FO R. MA TI. CA. Obtención de 330 ml de macerado de Caesalpinia spinosa, este se colocó en la estufa a 37 º c para la evaporación de alcohol .. REALIZACIÓN DE PRUEBA PILOTO. OF. IC. IN. A. DE. SI S. TE. Después de 12 días de evaporación, se obtuvo el extracto etanólico de Caesalpinia spinosa. Obteniendo 62 ml al 40 % de concentración y 2.5 gr de extracto al 100 % de concentración. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/ 53.
(54) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. FO R. MA TI. CA. Se tomaron microlitros del extracto obtenido y se disolvieron en agua destilada hasta llegar a las 4 concentraciones requeridas.. IC. IN. A. DE. SI S. TE. MA S. E. IN. Se obtuvieron las 4 concentraciones de extracto etanólico de vainas Caesalpinia spinosa 0.25mg/ml, 0.5 mg/ml, 0.75mg/ml, 1 mg/ml. OF. Se aplicaron las 4 concentraciones más un control que fue el solvente (agua destilada) y en el centro un papel filtro con extracto etanólico al 40 % se hicieron dos repeticiones. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/ 54.
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