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Efecto antimicrobiano in vitro del extracto hidroalcohólico del rizoma de Curcuma longa (Guisador), sobre Staphylococcus aureus y Candida albicans

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Academic year: 2020

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(1)Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE MEDICINA. fo r. m. át ica. yC. om un. ica ció. n. ESCUELA ACADEMICO – PROFESIONAL DE MEDICINA. In. “Efecto antimicrobiano in vitro del extracto hidroalcohólico del rizoma de. albicans”. em. as. de. Curcuma longa (Guisador), sobre Staphylococcus aureus y Candida. MEDICINA. de. Si. st. PROYECTO DE TESIS PARA OPTAR EL GRADO DE BACHILLER EN. Di re cc. ió. n. AUTOR: FLORES ROJAS ARIADNA JIMENA ASESORAS: Dra. ELVA MEJÍA DELGADO. Mg. Q. F. MARILU ROXANA SOTO VASQUEZ. TRUJILLO – PERÚ 2017 1 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(2) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. DEDICATORIA A Dios por guiarme en este largo camino y darme las fuerzas necesarias para lograr cada. ica ció. n. una de mis metas. A mis padres, Evelyn y Carlos, porque me han. om un. ayudado a crecer como persona y luchar por lo que quiero, gracias por enseñarme valores. yC. que me llevaron a alcanzar esta meta. Los. át ica. quiero mucho.. de. In. fo r. m. A mis hermanos Karla y José, especialmente a Karla, por ser un ejemplo, un apoyo, una amiga, por simplemente estar en los. as. momentos más importantes de mi vida.. em. A mi Teresita bonita, mi segunda madre, por darme. de. me fue necesario.. Si. st. ánimos, consejos y cariño en momentos en los cuales. n. A Hernan, mi compañero de vida; por estar. Di re cc. ió. a mi lado, por su apoyo, su paciencia, por ayudarme a ver fácil lo difícil.. 2 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(3) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. AGRADECIMIENTOS A mi madrinita Elvita por el cariño,. ica ció. n. orientación, paciencia, apoyo y por facilitarme los. om un. medios en la realización de esta investigación.. yC. A la Dra. Marilú Soto por su ayuda en el Laboratorio de Farmacognosia de la Facultad de. m. A Irmita, mi hermana por su ayuda en la. át ica. Farmacia.. fo r. recolección de la muestra, gracias por hacer este. de. In. trabajo posible.. as. .. em. A mi querida alma mater, por 6 años de constante. Si. st. aprendizaje y enseñarme lo maravillosa que es. de. esta profesión.. ió. n. A Delcarmen, Andrea y todos mis amigos de la. Di re cc. facultad de Medicina por su constante apoyo, sus sonrisas, su motivación, por los buenos momentos compartidos, por su compañía y por alentarme en los mementos difíciles, siempre los llevaré presente.. 3 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(4) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. INDICE. ica ció. n. RESUMEN ……………………………………………………………………. 5. om un. ABSTRACT ………………………………………………………………......... 6. yC. INTRODUCCIÓN ……………………………………………………………… 7. át ica. MATERIAL Y MÉTODOS ………………………………………………......... 13. m. RESULTADOS ………………………………………………………………… 25. In. fo r. DISCUSIÓN …………………………………………………………………… 30 36. de. CONCLUSIONES …………………………………………………………. em. as. RECOMENDACIONES ……………………………………………………..... 37. Si. st. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS ………………………………………… 38. Di re cc. ió. n. de. ANEXOS ………………………………………………………………………. 44. 4 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(5) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. RESUMEN “Efecto antimicrobiano in vitro del extracto hidroalcohólico del rizoma de. ica ció. n. Curcuma longa (Guisador), sobre Staphylococcus aureus y Candida albicans”. OBJETIVO: Evaluar la actividad antimicrobiana in vitro del extracto hidroalcohólico. om un. del rizoma de Curcuma longa, sobre a Staphylococcus aureus y Candida albicans.. yC. MATERIAL Y MÉTODO: Se realizó por maceración a partir del polvo antes obtenido con etanol / agua (70:30) y luego a presión reducida en rotavapor, obteniéndose el. át ica. extracto hidroalcohólico de cúrcuma. El efecto antimicrobiano sobre Staphylococcus. m. aureus y Candida albicans se determinó hallando la concentración inhibitoria minina. In. fo r. CIM por conteo de UFC, utilizándose concentraciones de 25,50, 75 y 100% del extracto. de. hidroalcohólico, además de fármacos controles (Vancomicina y Fluconazol).. as. RESULTADOS: Se evidenció que a todas las concentraciones del extracto. em. hidroalcohólico tuvo efecto antimicrobiano, para Staphylococcus aureus el CIM fue de. Si. st. 10 mg/mL, mientras que para Candida albicans fue de 2,5 mg/mL. Además en el caso de. de. la bacteria a mayor concentración utilizada mayor es el efecto antibacteriano. Se presentó. ió. n. mayor efecto antimicrobiano sobre Candida albicans que sobre Staphylococcus aureus.. Di re cc. CONCLUSIÓN: El extracto hidroalcohólico del rizoma de Curcuma longa, presenta actividad antimicrobiana in vitro sobre a Staphylococcus aureus y Candida albicans. Palabras Claves: Curcuma longa, extracto hidroalcohólico, Staphylococcus aureus, Candida albicans.. 5 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(6) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ABSTRACT "In vitro antimicrobial effect of the hydroalcoholic extract of Curcuma longa rhizome (Guisador), on Staphylococcus aureus and Candida albicans". ica ció. n. OBJECTIVE: To evaluate the in vitro antimicrobial activity of the hydroalcoholic extract of the Curcuma longa rhizome, on Staphylococcus aureus and Candida albicans.. om un. MATERIAL AND METHOD: It was made by maceration from the powder previously obtained with ethanol / water (70:30) and then under reduced pressure in a rotavapor,. yC. obtaining the hydroalcoholic extract of turmeric. The antimicrobial effect on. át ica. Staphylococcus aureus and Candida albicans was determined by finding the inhibitory. m. concentration minima CIM by counting CFU, using concentrations of 25,50, 75 and. fo r. 100% of the hydroalcoholic extract, in addition to control drugs (Vancomycin and. de. In. Fluconazole).. as. RESULTS: It was evidenced that at all concentrations of the hydroalcoholic extract had. em. antimicrobial effect, for Staphylococcus aureus the MIC was 10 mg / mL, while for. st. Candida albicans it was 2.5 mg / mL. In addition, in the case of the bacteria at the highest. de. Si. concentration used, the antibacterial effect is greater. There was a greater antimicrobial. ió. n. effect on Candida albicans than on Staphylococcus aureus.. Di re cc. CONCLUSION: The hydroalcoholic extract of the Curcuma longa rhizome shows in vitro antimicrobial activity on Staphylococcus aureus and Candida albicans. Key Words: Curcuma longa, hydroalcoholic extract, Staphylococcus aureus, Candida albicans.. 6 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(7) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. I. 1.1. INTRODUCCION. ANTECEDENTES El mal uso y abuso de fármacos sintéticos, se observa cada vez más, tanto en países industrializados como en vías de desarrollo, trayendo consigo la resistencia a dichos. ica ció. n. fármacos. Esta se torna un problema de salud creciente y complejo que obliga a los científicos a buscar nuevas sustancias antimicrobianas. De aquí que la utilización de. om un. plantas medicinales como materia prima para la producción de extractos o para el aislamiento de las sustancias naturales puras, representa un sector de franca. yC. expansión1,2. át ica. Hoy en día se busca alternativas de tratamiento en la medicina natural, teniendo en. m. cuenta que los productos naturales han servido como una fuente importante de. fo r. medicamentos durante siglos, y aproximadamente la mitad de los fármacos utilizados. In. en la actualidad son derivados de productos naturales3.. de. La especie Curcuma longa L. es una planta monocotiledónea, herbácea, perenne y. em. as. tropical perteneciente a la familia Zingiberaceae, originaria del sur de Asia y cultivada principalmente en Bangladés, China, India, Pakistán y Sri Lanka; siendo la. Si. st. India su principal exportador 4. de. En la parte selva de nuestro país tenemos también la Curcuma longa cultivada en San. ió. n. Martín, Huánuco, Madre de Dios, Cusco, Ucayali5.. Di re cc. Ha sido cultivada desde hace más de cinco mil años por sus múltiples usos y beneficios, entre los cuales se puede citar su uso en la industria de alimentos como especia saborizante, colorante y conservante. También tiene una larga historia de usos terapéuticos, dentro de las cuales destacan sus propiedades antibacterianas, antifúngicas, antivirales y antioxidante 6,7,8,9,10.. 7 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(8) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. El rizoma de cúrcuma ha sido objeto de muchas investigaciones, preparándose extractos, etanólicos, metanólicos y con distintos solventes para analizar sus actividades biológicas y de esta manera encontrar sus principios activos con el fin de optimizar su actividad y de explicar su mecanismo de acción11.. ica ció. n. Entre los componentes del extracto están: carbohidratos (4.7-8.2%), aceites esenciales (2.44.0%), ácidos grasos (1.7-3.3%), curcuminoides (curcumina,. om un. demetoxicurcumina y bisdemetoxicurcumina), cuyo contenido aproximado es de un 2%, aunque puede rondar entre 2.5-5.0% del peso seco, y otros polipéptidos como la. yC. turmerina (0. 1 % del extracto seco) 12.. át ica. Las infecciones por hongos han aumentado significativamente, lo que contribuye a la causa de morbilidad y mortalidad. Dentro de ellos el género Cándida corresponde. .. In. 13,14. fo r. m. a cerca de 80% de las infecciones fúngicas documentadas en los hospitales de 3ado. de. Este hongo es una levadura que coloniza la flora normal del cuerpo humano, como. em. as. por ejemplo piel, boca, intestino y vagina. Normalmente estos microorganismos se. st. tornan patogénicos cuando ocurren alteraciones en los mecanismos de defensas del. Si. huésped, por compromiso de las barreras anatómicas por procedimientos invasivos y. de. cuando la flora bacteriana competidora es eliminada debido al uso prolongado de. ió. n. antibióticos. Curcuma longa representa un alternativa de tratamiento natural para. Di re cc. este hongo, que posee una amplia gama de actividades farmacológicas donde la actividad antifúngica se ha evaluado en diversos experimentos.15 Mozioglu y col (2008). En su estudio, aislaron los componentes de la Curcuma longa, siendo la curcumina la fracción más importante, que es responsable de su actividad biológica. Así mismo evaluaron la actividad antibacteriana y antifúngica del extracto etanólico del rizoma de Curcuma longa, presentándose una gran actividad. 8 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(9) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. antibacteriana contra Staphylococcus aureus y Enterococcus faecalis. Al mismo tiempo se presentó una débil actividad antibacteriana contra Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli y antifúngica contra Candida albicans en función de la extracción etanólico de la cúrcuma. De igual manera con las especies del. ica ció. n. Mycobacterium no se presentó actividad antibacteriana16.. Martins y col (2009) Evaluaron la actividad antifúngica de la curcumina contra 23. om un. cepas de hongos y su efecto inhibidor in vitro sobre la adhesión de las especies de Candida a las células epiteliales bucales (CEB) humanas. Resultando que. yC. Paracoccidioides brasiliensis fue el hongo más susceptible a la curcumina, mientras. át ica. que el crecimiento de Aspergillus no se vio afectado. Por otro lado la curcumina fue. m. mucho más eficiente que el fluconazol en la inhibición de la adhesión de las especies. fo r. de Candida a CEB humanas, particularmente aquellas cepas aisladas de la mucosa. In. bucal de los pacientes de SIDA. Concluyendo que la curcumina es un antifúngico. de. más potente que el fluconazol frente a P. brasilienses, el agente causal de la. as. paracoccidioidomicosis, y que inhibe de manera eficiente la adherencia de las. st. em. especies de Candida al CEB humanas en pacientes con SIDA17.. Si. Okigbo y col (2009) Investigaron el efecto inhibitorio antimicrobiano de los extractos. de. acuosos y etanólicos de 3 plantas: Zingiber officinale Rosc, Curcuma longa L. y. ió. n. Dioscorea bulbifera L. frente a 3 patógenos humanos: Escherichia coli,. Di re cc. Staphylococcus aureus y Candida albicans. Demostrándose que el extracto etanólico es más potente que el extracto acuoso. La concentración mínima inhibitoria (CMI) del extracto de etanólico varió entre 0.5 - 1.0 mg/mL en Escherichia coli, Staphylococcus aureus y Candida albicans. Para el extracto acuoso, la CMI fue de 1,0 mg / mL en E. coli y osciló entre 0.5-1.0 mg / mL en S. aureus y C. albicans. Staphylococcus aureus fue más susceptible al extracto. En total, la concentración de. 9 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(10) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 1,5 mg/mL dio la inhibición máxima a los tres microorganismos de ensayo. El tamizaje fitoquímico (cualitativo) de detección de las plantas reveló la presencia de compuestos químicos biológicamente activos tales como taninos, fenoles, saponinas, alcaloides, flavonoides y esteroides / triterpenos18.. ica ció. n. Sunilson y col (2009). Investigaron la actividad antimicrobiana de los extractos metanólicos del rizoma Zingiber officinale, Curcuma longa y Alpinia galanga, contra. Salmonella. enteriditis,. Clostridium. perfringens,. om un. las bacterias transmitidas por los alimentos comunes tales como: Escherichia coli, Staphylococcus. aureus,. yC. Campylobacter jejuni, Bacillus cereus y hongos como Saccharomyces cerevisiae,. át ica. Hansenula anomala, Mucor mucedo, Candida albicans. Concluyendo que todos los. m. extractos mostraron importantes propiedades antibacterianas y antifúngicas. Siendo. In. mayor que Alpinia galanga19.. fo r. Zingiber officinale y Curcuma longa las que poseían actividad considerablemente. de. Sangvanich y col (2010). Determinaron la actividad antifúngica y antibacteriana del. em. as. extracto acuoso de Curcuma longa; hallando que a una concentración de 47 y 94. st. mg/0.3 cm2 de disco se evidencia actividad antifúngica contra: Turicicum. Si. exserohilum, Fusarium oxysporum, Cassiicola colectrotrichum y Candida albicans.. de. Mientras que la concentración inhibitoria mínima de la actividad antibacteriana fue. ió. n. de 0.002, 0.005, 0.011, 0.09, y 0.046mg /mL para Pseudomonas aeruginosa,. Di re cc. Staphylococcus aureus, Bacillus subtilis, Escherichia coli 20. Pratap y col (2011) Evaluaron la actividad antimicrobiana del contenido de aceite volátil y curcuminoides totales extraídos del rizoma de la Curcuma longa, contra las bacterias: Pseudomona aeruginosa, Staphylococcus aureus y Proteus mirabilis. Dos especies de hongos fueron seleccionadas: Aspergillus Níger y Candida albicans. Como droga estándar para la actividad antibacteriana se utilizó Kanamicina y. 10 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(11) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Fluconazol como estándar para la actividad antifúngica. Concluyendo que los curcuminoides totales mostraron una elevada actividad antibacteriana así como también antifúngica en comparación con el aceite volátil extraído de la cúrcuma 21.. n. JUSTIFICACION. ica ció. 1.2. En las últimas décadas la creciente incidencia de infecciones tanto de origen. om un. comunitario como nosocomiales ha fomentado el abuso en el uso de fármacos, trayendo consigo consecuencias graves como la resistencia a dichos medicamentos;. yC. este problema de salud obliga a buscar nuevas fuentes de tratamiento, encontrándose. át ica. en la medicina natural buenas alternativas. De esta manera se ha ido incrementando. m. la investigación de agentes naturales con propiedades farmacológicas.. fo r. De acuerdo con lo anterior, se decide realizar el presente estudio pretendiendo. In. demostrar el efecto antimicrobiano in vitro del extracto hidroalcohólico de Curcuma. de. longa (Guisador) sobre dos microorganismos: la bacteria Staphylococcus aureus y el. em. as. hongo Candida albicans, los cuales han adquirido resistencia a los fármacos de uso. st. común y ocasionan infecciones de elevada morbilidad y mortalidad, sobre todo en. PROBLEMA. de. 1.3. Si. pacientes inmunocomprometidos. ió. n. ¿Presentará actividad antimicrobiana in vitro el extracto hidroalcohólico del rizoma. Di re cc. de Curcuma longa (Guisador), sobre Staphylococcus aureus y Candida albicans?. 1.4. HIPOTESIS H1: El extracto hidroalcohólico del rizoma de Curcuma longa, si presenta actividad antimicrobiana in vitro sobre a Staphylococcus aureus y Candida albicans.. 11 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(12) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. H0: El extracto hidroalcohólico del rizoma de Curcuma longa, no presenta actividad antimicrobiana in vitro sobre a Staphylococcus aureus y Candida albicans. 1.5. OBJETIVOS  Objetivo General. ica ció. n. Evaluar la actividad antimicrobiana in vitro del extracto hidroalcohólico del rizoma de Curcuma longa, sobre a Staphylococcus aureus y Candida. om un. albicans.. . yC.  Objetivos Específicos. át ica. Determinar la Concentración Inhibitoria Mínima (CMI) del. m. extracto hidroalcohólico del rizoma de Curcuma longa, sobre. fo r. Staphylococcus aureus. . In. Determinar la Concentración Inhibitoria Mínima (CMI) del. de. extracto hidroalcohólico del rizoma de Curcuma longa, sobre. as. Candida albicans.. em. . st. Comparar el efecto antibacteriano in vitro del extracto. Di re cc. ió. n. de. Si. hidroalcohólico del rizoma de Curcuma longa y Vancomicina. . sobre Staphylococcus aureus. Comparar. el. efecto. antifúngico. in. vitro. del. extracto. hidroalcohólico del rizoma de Curcuma longa y Fluconazol sobre Candida albicans.. 12 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(13) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. II. MATERIAL Y MÉTODO. 2.1 Material. ica ció. n. 2.1.1 Tipo de estudio. om un. Esta investigación consiste en un estudio prospectivo, trasversal y experimental.. 2.1.2 Definición de la población muestral. yC. La población muestral estuvo constituida por las cepas de Staphylococcus aureus y. át ica. Candida albicans,, las cuales fueron brindadas por el Laboratorio de Microbiología y. fo r. m. Parasitología de la Facultad de Medicina de la Universidad Nacional de Trujillo.. In. 2.1.3 Diseño estadístico del muestreo . de. Unidad de Análisis. em. as. La población estuvo conformada por 02 microorganismos tipificados:. st. Staphylococcus aureus y Candida albicans, los mismos que fueron expuestos. Si. a las 4 concentraciones del extracto hidroalcohólico de Curcuma longa y al. ió. n. de. fármaco control para cada microorganismo.. Di re cc. . Unidad de muestreo. La unidad de muestreo estuvo compuesta por el número de unidades formadoras de colonias (UFC) producto del efecto antimicrobiano del extracto hidroalcohólico de Curcuma longa sobre Staphylococcus aureus y Candida albicans.. 13 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(14) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. . Tamaño muestral Para el cálculo del tamaño se empleó la fórmula estadística para hallar el número de repeticiones necesarias que validen el diseño experimental. Se aplicó la siguiente fórmula. 𝛼 2 ∗ (𝑍 2 + 𝑍 𝛽)2 ∗ 𝑆 2 𝑋1 − 𝑋2. om un. 𝑛=. ica ció. n. estadística:. Dónde:. yC. n= número de repeticiones para cada concentración de. át ica. extracto hidroalcohólico de Curcuma longa y fármacos controles.. fo r. m. Zα/2= 1.96 para α = 0.05. In. Zβ = 0.842 para β = 0.20. de. S: Desviación estándar de la susceptibilidad bacteriana.. as. X1 – X2: Diferencia a detectar en la susceptibilidad. em. bacteriana. entre. 2. concentraciones. de. extracto. Si. st. hidroalcohólico de Curcuma longa. Di re cc. ió. n. de. Se asume: S= 0.8 (X1 – X2), por no haber estudios similares. Reemplazando se obtiene: n= 2 x (1.96 + 0.842)2 x 0.82 n= 10 repeticiones /grupo Por lo tanto, se realizó 10 repeticiones por cada concentración de extracto hidroalcohólico y fármaco control por cada microorganismo estudiado. Esto se distribuyó de la siguiente manera:. 14 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(15) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. -. GRUPO A1: 10 repeticiones de extracto hidroalcohólico de Curcuma longa al 25 % para Staphylococcus aureus.. -. GRUPO A2: 10 repeticiones de extracto hidroalcohólico de Curcuma longa al 50 % para Staphylococcus aureus. GRUPO A3: 10 repeticiones de extracto hidroalcohólico. ica ció. n. -. de Curcuma longa al 75 % para Staphylococcus aureus. GRUPO A4: 10 repeticiones de extracto hidroalcohólico. om un. -. de Curcuma longa al 100 % para Staphylococcus aureus. GRUPO A5: 10 repeticiones utilizando Vancomicina. yC. -. át ica. para Staphylococcus aureus.. GRUPO B1: 10 repeticiones de extracto hidroalcohólico. m. -. fo r. de Curcuma longa al 25 % para Candida albicans GRUPO B2: 10 repeticiones de extracto hidroalcohólico. In. -. as. GRUPO B3: 10 repeticiones de extracto hidroalcohólico. em. -. de. de Curcuma longa al 50 % para Candida albicans. st. de Curcuma longa al 75 % para Candida albicans. -. GRUPO B4: 10 repeticiones de extracto hidroalcohólico de Curcuma longa al 100 % para Candida albicans GRUPO B5: 10 repeticiones utilizando Fluconazol para. Di re cc. ió. n. de. Si. -. 2.1.4. Candida albicans. Criterios de control. Todos aquellos cultivos en los que haya algún error en el procedimiento de su manipulación serán excluidos del experimento.. 15 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(16) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.1.5 Operacionalización de las variables Tipo de Variable Variable. Dimensiones. Indicador. Según. su Según. Concentración. hidroalcohólico. del. Curcuma. extracto. hidroalcohólico Extracto. longa. del rizoma de. Cualitativa. Curcuma longa. m. át ica. “Guisador”.. Independiente Ordinal. yC. hidroalcohólico (Guisador). función. om un. de. medición. ica ció. Extracto. su. n. naturaleza. Escala de. In. fo r. Efecto. sobre inhibitoria mínima. Efecto. Concentración. Cuantitativa Dependiente. De razón. UFC. de. in inhibitoria. n. antifúngico. ió. sobre mínima. Di re cc. vitro. De razón. Si. st. aureus. em. Staphylococcus. Cuantitativa Dependiente. as. vitro. de. antibacteriano in Concentración. Candida albicans. 2.1.6 Definición operacional de las variables . Extracto hidroalcohólico de Curcuma longa (Guisador). 16 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(17) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Producto que se obtuvo mediante el método de extracción por maceración con etanol/agua (70:30), además de ser preparado a 4 concentraciones distintas (25%, 50%, 75% y 100%). . Efecto antibacteriano in vitro sobre Staphylococcus aureus. ica ció. n. Constituido por el cambio en la pared y membrana celular de la bacteria Staphylococcus aureus, causado por agentes químicos externos produciendo una. om un. inhibición en el crecimiento del mismo. Se determinó mediante el conteo de las Unidades Formadoras de Colonias (UFC). La menor concentración donde no haya. Efecto antifúngico in vitro sobre Candida albicans. át ica. . yC. crecimiento, es decir no se observen UFC se consideró como CIM.22. m. Constituido por el cambio en la membrana celular del hongo Candida albicans.. fo r. Se determinó mediante el conteo de las Unidades Formadoras de Colonias (UFC). In. el CIM que es la menor concentración que inhibe el crecimiento y cuando las UFC. em. as. de. son cero se considera bactericida o fungicida.22. st. 2.2 Procedimientos y método. Diseño Procedimental. Si. 2.2.1. Di re cc. ió. n. de. 2.2.1.1. Procedimiento para la recolección de los extractos vegetales. . Recolección e Identificación de Curcuma longa Los rizomas de la Curcuma longa, fueron obtenidos de un mercado de la Región de San Martin, en una cantidad de 5 kg, asegurándose que su procedencia sea de la misma empresa proveedora. Luego el fruto fue trasladado a nuestra ciudad. para. ser. procesado. en. el. Laboratorio. de. Farmacognosia y Farmacobotánica de la Facultad de. 17 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(18) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Farmacia y Bioquímica de la Universidad Nacional de Trujillo. Además se realizó su identificación taxonómica en el Herbario Truxillense.. n. Molienda de la muestra vegetal.. ica ció. . En el Laboratorio de Farmacognosia y Farmacobotánica de. om un. la Facultad de Farmacia y Bioquímica de la Universidad Nacional de Trujillo, la materia prima seleccionada se. yC. procedió a lavar los rizomas con agua corriente a chorro y. át ica. luego se desinfecto con hipoclorito de sodio al 0.5 %.. m. Posteriormente se cortó en trocitos lo suficientemente. fo r. pequeños y seco a temperatura ambiente. Luego se realizó la. In. molienda y tamizaje para así obtener un polvo ligeramente. de. grueso que fue envasado en recipientes adecuados y. em. as. conservados en un lugar seco y fresco.. st. . Di re cc. ió. n. de. Si. Obtención del extracto Hidroalcohólico. El extracto hidroalcohólico se obtuvo por maceración a partir del polvo antes obtenido con etanol / agua (70:30), durante 7 días. Para la extracción fueron macerados 475 gramos de materia prima “Guisador”, en 1500 mL de etanol / agua (70:30), durante 7 días. Luego se filtró, obteniéndose el extracto hidroalcohólico.. 18 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(19) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. La concentración del extracto se realizó por eliminación del disolvente a presión reducida en un rotavapor, a una temperatura de 60º C y a una presión de 690 mmHg por espacio de 2 horas aproximadamente, posteriormente se dejó. ica ció. n. secar a temperatura ambiente por espacio de 3 a 5 días aproximadamente.. Preparación de las diferentes concentraciones de. om un. . Extracto hidroalcohólico de Curcuma longa. yC. Se tomaron del extracto hidroalcohólico puro obtenido al. át ica. 100%, volúmenes de 2.5, 5, 7.5 y 10 mL, se colocarán en una. m. fiola de 10 mL. Luego se completó con etanol al 70%,. fo r. obteniéndose las concentraciones de 25%, 50%, 75% y 100. In. % respectivamente. Las muestras fueron protegidas de la luz,. as. de. envolviéndolas en papel de aluminio. Volumen del Extracto. Volumen de. Concentración (%). 7.5 mL. 10 mL. 25 %. 5 mL. 5 mL. 10 mL. 50 %. 7.5 mL. 2.5 mL. 10 mL. 75 %. 10 mL. 0 mL. 10 mL. 100%. em. Volumen final etanol al 70 %. Si. st. hidroalcohólico. Di re cc. ió. n. de. 2.5 mL. 22.2.1.2. Procedimiento de los ensayos de la actividad antibacteriana.. 19 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(20) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. . Obtención y preparación de la cepa Las cepas de Staphylococcus aureus y Candida albicans fueron brindadas por el laboratorio de la Sección de. ica ció. n. Microbiología de la Facultad de Medicina de la Universidad Nacional de Trujillo. microorganismos. se. transfirieron. con. om un. Los. el. asa. bacteriológica a tubos de ensayo con tapa rosca que. yC. contienen agar soya tripticasa para Staphylococcus aureus y. át ica. tubos con agar Sabouraud para Candida albicans y se. m. incubaron a 37 ºC por 24 horas para ejercer la reactivación. fo r. de las bacterias y hongos (colonias jóvenes).. In. A las 24 horas se extrajo una muestra de los tubos y se. de. preparó una suspensión con caldo Mueller Hinton para. em. as. Staphylococcus y caldo glucosado para Candida albicans a. st. partir de las colonias jóvenes preparadas, hasta alcanzar una. Di re cc. ió. n. de. Si. turbidez semejante de la escala 0.5 de Mac. Farland (1.5 x 108 UFC/mL), esta comparación se llevó acabo visualmente utilizando un fondo blanco con líneas negras usadas como contraste. Los tubos que contenían los microorganismos, fueron girados hasta obtener una muestra homogénea de las mezclas antes de proceder al sembrado. Luego, con un hisopo estéril, el cual fue embebido en el tubo cultivado preparado y a una distancia de 10 cm de altura de la llama de un mechero, se sembró en placas Peri. 20 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(21) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. conteniendo Agar Mueller Hinton para Staphylococcus y Agar Sabouraud para. Candida albicans, hisopando. uniformemente sobre toda la superficie del agar y girando cada placa 30 grados por un aproximado de 8-10 veces. Las. ica ció. n. placas sembradas fueron colocadas dentro de una estufa a 37 °C durante 24 horas.. Determinación de la Concentración Inhibitoria Mínima. om un. . (CIM). yC. Se determinó la concentración inhibitoria mínima (CIM). át ica. mediante la técnica de dilución en tubos con las cepas de. m. Staphylococcus aureus y Candida albicans, con las 4. In. longa.. fo r. concentraciones de extracto hidroalcohólico de Curcuma. de. Las cepas se dividieron en grupos, según cada concentración. em. as. del extracto hidroalcohólico de Curcuma longa (25, 50, 75 y. st. 100 %), además de los 2 fármacos se utilizaron controles para. Di re cc. ió. n. de. Si. cada cepa (Vancomicina y Fluconazol), por lo que se necesitaron 5 tubos de ensayo para cada cepa. Para la cepa de Staphylococcus aureus, en el primer grupo de tubos se colocó 0.45 mL de caldo de Muller Hinton al cual se adicionó 0.45 mL de la concentración del extracto hidroalcohólico de Curcuma longa al 100% y 0.1 mL de la bacteria. En el segundo grupo de tubos se colocó 0.45 mL de caldo de Muller Hinton al cual se adicionó 0.45 mL de la. 21 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(22) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. concentración del extracto hidroalcohólico de Curcuma longa al 75% y 0.1 mL de la bacteria. En el tercer grupo de tubos se colocó 0.45 mL de caldo de Muller Hinton al cual se adicionó 0.45 mL de la. longa al 50% y 0.1 mL de la bacteria.. ica ció. n. concentración del extracto hidroalcohólico de Curcuma. om un. En el cuarto grupo de tubos se colocó 0.45 mL de caldo de Muller Hinton al cual se adicionó 0.45 mL de la. yC. concentración del extracto hidroalcohólico de Curcuma. át ica. longa al 25% y 0.1 mL de la bacteria.. m. En el quinto grupo de tubos se colocó 0.45 mL de caldo de. fo r. Muller Hinton al cual se adiciono 0.45 mL de Vancomicina. In. y 0.1 mL de la bacteria.. de. El mismo procedimiento se realizó para Candida albicans. em. as. pero utilizando caldo glucosado en las mismas cantidades y. st. Fluconazol como grupo control.. Si. Luego se incubaron todos los tubos de ensayo en la estufa a. de acuerdo a la concentración utilizada. Posteriormente se. Di re cc. ió. n. de. 37 °C por 24-48 horas, observándose la turbidez que estuvo. sembró 0.1 mL de solución de cada uno de los tubos en placas Petri. con. agar. Muller. Hinton. y agar. Sabouraud. respectivamente, utilizando el asa de Driglasky para dispersar la muestra. Dichas placas fueron colocadas en estufa por 24 h a 37 °C. Finalmente se observó el crecimiento bacteriano/fúngico y se realizó el conteo de las Unidades. 22 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(23) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Formadoras de Colonias (UFC) usando un contador de colonias y cuando fue mayor de 300 se utilizó la siguiente formula: UFC= N/4 * A *D. ica ció. n. Dónde: N: número de colonias contadas en un cm2. om un. A: área del círculo D: dilución. yC. La menor concentración donde no haya crecimiento, es decir. m. át ica. no se observen UFC se consideró como CIM.. fo r. 2.3 Aspectos Éticos. In. Debido a que es un estudio experimental in vitro que no implicó el trabajo con. de. humanos ni animales, no hay incumplimiento de normas éticas. Sin embargo, en este. as. trabajo se respetó el principio ético adoptado en el capítulo 6 del código de ética del. st. em. Colegio Médico del Perú titulado: “Del trabajo de investigación”, específicamente el. Si. Art 48, donde habla de la veracidad en la publicación de los resultados obtenidos en el. de. estudio. Asimismo, se tuvieron en cuenta los principios de bioseguridad. Di re cc. ió. n. correspondiente a trabajos in vitro. 23. 23 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(24) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.4 Análisis e interpretación de la información Para el análisis se procedió a utilizar instrumentos de la estadística descriptiva como la media y desviación estándar, para luego estos datos presentarlos en tablas estadísticas.. ica ció. n. En cuanto a la determinación del efecto antimicrobiano de los dos microorganismos se realizó mediante la prueba de análisis ANOVA donde se compararon todos los. om un. resultados obtenidos; y la segunda es la prueba de Duncan para determinar pares de grupos en los que la diferencias es significativa, ambas pruebas se consideraron. Di re cc. ió. n. de. Si. st. em. as. de. In. fo r. m. át ica. yC. significativas si p<0.05.. 24 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(25) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. III. RESULTADOS TABLA N° 1: Concentración Mínima Inhibitoria para las UFC del Extracto Hidroalcohólico. de. Cúrcuma. longa. sobre. Staphylococcus. aureus. a. las. ica ció. n. concentraciones de 25%, 50%, 75%, 100% y Vancomicina. Fuente: Datos obtenidos por el investigador, 2017 n. Promedio. Desviación. om un. Grupo de Tratamiento. 8.8. 50%. 10. 7.9. 75%. 10. 100%. 10. Control (Vancomicina). 5.04 3.13. fo r. m. 7.7. 3.68. yC. 10. át ica. 25%. de. Estándar. 2.66. 0.0. 0.00. In. 3.2. as. 10. em. En esta Tabla 1, se muestra el promedio de las UFC de Staphylococcus aureus tratado. Si. st. con extracto hidroalcohólico de Cúrcuma longa a las distintas concentraciones (25%,. de. 50%, 75% y 100%) y el fármaco control Vancomicina. Donde a mayor concentración del. ió. Di re cc. la CIM.. n. extracto utilizado se presentó menor cantidad de UFC, siendo la concentración al 100%. 25 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(26) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. TABLA N° 2: Análisis de Varianza del Efecto Antimicrobiano del Extracto Hidroalcohólico de Curcuma longa y Vancomicina sobre Staphylococcus aureus a las. Fuente: Datos obtenidos por el investigador, 2017. FV SC GL CM F. 11.16. 502.2. 45. Total. 1072.48. 49. 0.00. át ica. Error. 12.78. ica ció. 142.57. om un. 4. yC. Tratamiento 570.28. P. n. concentraciones de 25%, 50%, 75%, 100%.. fo r. m. En la tabla N° 2 se aprecia el análisis de varianza, lo cual muestra que si existe diferencia. In. altamente significativa entre grupos de investigación sobre Staphylococcus aureus dado. Di re cc. ió. n. de. Si. st. em. as. de. que el valor de P es menor a 0.05 (p= 0.000).. TABLA N° 3: Comparación de las UFC del Extracto Hidroalcohólico de Curcuma longa y Vancomicina sobre Staphylococcus aureus a las concentraciones de 25%, 50%, 75%, 100%. 26 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(27) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Tratamientos. ni. Grupos para alpha = 0.05 G1. 10. 25 %. 10. 50 %. 10. 75 %. 10. 100 %. 10. G3. 0. ica ció. n. Vancomicina. G2. 8.8. om un. 7.9. yC. 7.7. át ica. 3.2. m. Fuente: Datos obtenidos por el investigador, 2017. In. fo r. En esta tabla N° 3 se presenta la prueba de DUNCAN para determinar grupos. de. significativos a las distintas concentraciones del extracto hidroalcohólico de Cúrcuma. as. longa y el fármaco control Vancomicina sobre Staphylococcus aureus, por lo que nos. em. muestra que existen 3 grupos con diferencia significativa en relación al efecto. st. antibacteriano. Un primer grupo constituido por la concentración al 25%, 50% y 75% un. de. Si. segundo grupo conformado por las concentraciones de 100%, y un tercer grupo solo por. n. el fármaco control. Estos grupos son estadísticamente diferentes entre sí, a un nivel de. Di re cc. ió. significancia de 0,05.. 27 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(28) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. GRÁFICO N° 1: Concentración Mínima Inhibitoria para las UFC del Extracto Hidroalcohólico de Curcuma longa según grupos de tratamientos (25%, 50%, 75%,. Di re cc. ió. n. El. de. Si. st. em. as. de. In. fo r. m. át ica. yC. om un. ica ció. Promedio del número de UFC de Staphylococcus aureus. n. 100% y vancomicina) sobre Staphylococcus aureus.. 28 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(29) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Concentraciones del extracto hidroalcohólico de Curcuma longa y fármaco control. El gráfico N° 1 indica que el mayor efecto antibacteriano sobre Staphylococcus aureus. ica ció. n. corresponde al fármaco control Vancomicina, seguido del extracto hidroalcohólico de Cúrcuma longa a la concentración de 100%, luego la de 75%, después la de 50% y. yC. om un. finalmente a la de 25% con un menor efecto.. át ica. TABLA N° 4: Concentración Mínima Inhibitoria para las UFC del Extracto Hidroalcohólico de Curcuma longa sobre Candida albicans a las concentraciones de. fo r. m. 25%, 50%, 75%, 100% y fluconazol.. n. 25%. 10. Desviación Estándar. 0.0. 0.00. 10. 0.0. 0.00. 10. 0.0. 0.00. 10. 0.0. 0.00. 10. 2.6. 2.41. de. as st. em. 50%. ió. n. de. Si. 75% 100%. Promedio. In. Grupo de Tratamiento. Di re cc. Control (Fluconazol). Fuente: Datos obtenidos por el investigador, 2017. En la Tabla 4. Promedio de la medición del conteo de las UFC de Candida albicans tratado con extracto hidroalcohólico de Cúrcuma longa a las distintas concentraciones y 29 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(30) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. el fármaco control Fluconazol. Donde todas las concentraciones presentaron efecto fungicida inhibiendo totalmente el crecimiento de las UFC, siendo la CIM de 2,5 mg/mL, del cuadro también se puede hallar la concentración fungicida mínima (CFM) siendo 2,5% lo significa que a esta concentración las cepas de C. albicans son inhibidas al 99.9. át ica. IV. DISCUSION. yC. om un. hubo crecimiento del hongo, con un promedio de 2.6 UFC por placa.. ica ció. n. %, dada que la CIM y la CFM son iguales. A diferencia del fármaco control donde si. m. En esta investigación, como se esperaba, el extracto hidroalcohólico del rizoma de. In. fo r. Curcuma longa (Guisador), presentó efecto antimicrobiano contra los microorganismos. de. estudiados: Staphylococcus aureus y Candida albicans.. as. Son muchas las propiedades atribuidas al extracto de Curcuma longa, siendo objeto de. em. múltiples investigaciones, buscando encontrar sus principios activos con el fin de. Si. st. optimizar su actividad y de explicar su mecanismo de acción.. de. Entre los componentes del extracto están: almidón (30-50%), proteínas (6-11%),. (1.7-3.3%). Di re cc. grasos. ió. n. carbohidratos (4.7-8.2%), fibras y cenizas (2-7%), aceites esenciales (2.44.0%), ácidos y pigmentos. curcuminoides (2.5-5.0%) como curcumina,. demetoxicurcumina y bisdemetoxicurcumina24,25. Los componentes más importantes del extracto de Curcuma son los pigmentos curcuminoides, que según los estudios realizados por Mozioğlu et al (2008), Gonzáles et al (2016) y Rodas et al (2016) se encuentran en una concentración de 2-5%, 2,5% y 3-5% respectivamente 16,26,27.. 30 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(31) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. De los 3 pigmentos curcuminoides ya conocidos, según el estudio de Lawhavinit et al, se encuentran en la siguiente proporción: 86.5% de curcumina, 13.4% demethoxycurcumina y Bisdemetoxicurcumina al 0,1% et. al,. donde. encontró. 28.. 94%. Resultados que coinciden con el trabajo de Correa de. curcumina,. 6%. demethoxycurcumina. y. ica ció. n. Bisdemetoxicurcumina al 0,3% 29. Recientemente se ha descubierto un cuarto pigamento curcuminoide llamado ciclocurcumina26.. om un. La curcumina (diferuloilmetano) es el principal polifenol curcuminoide encontrado en la. yC. cúrcuma y el principal responsable de las propiedades medicinales y farmacológicas de la misma. Su efecto antibacteriano está relacionado con la presencia de grupos fenólicos. át ica. en la estructura de los curcuminoides. Según lo que ha sido indicado, los fenoles son. citoplasmáticos,. inactivando. irreversiblemente. fo r. constituyentes. m. bactericidas a bajas concentraciones y causan daño a las membranas con pérdida de los las. oxidasas. y. de. In. deshidrogenasas de la membrana y produciendo desnaturalización de las proteínas,. as. originando la muerte bacteriana 30.. em. Más específicamente en los estudios de Rai et al (2008) y Kaur et al (2010) la curcumina. Si. st. actúa en la proteína FtsZ (proteína del citoesqueleto de las bacterias) de 2 maneras: La. de. primera interrumpiendo estabilidad y el ensamblaje de los protofilamentos FtsZ como un. n. factor crucial para la citocinesis bacteriana; y la segunda, a través de la inhibición de la. Di re cc. ió. dinámica de ensamblaje de FtsZ en el anillo Z suprimiendo la proliferación de células bacterianas31,32. El efecto antifúngico se debe a que el rizoma de la cúrcuma posee actividad proteolítica (con cinética tiempo dependiente), atribuido a la presencia de proteasas con alto contenido de alanina y glutamato, así como los péptidos sintéticos N-Cbz-Ile-Pro y N-Cbz-Phe-Leu.. 31 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(32) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Esta cúrcuma proteasa es tipo cisteína, actúa contra el componente proteico de las paredes celulares de los hongos patógenos 33,34. Además la curcumina tiende a la regulación baja de la desaturasa (ERG3) que conduce a. n. una reducción significativa del ergosterol de la célula fúngica. La reducción en la. ica ció. producción de ergosterol resulta en acumulaciones de precursores biosintéticos de ergosterol que conduce a la muerte celular mediante la generación de ROS, inhibe el. om un. desarrollo de hifas al dirigirse a TUP1 35.. yC. En el presente estudio, evaluando primero la actividad antimicrobiana contra. át ica. Staphylococcus aureus, el extracto hidroalcohólico del rizoma de Curcuma longa presentó efecto con las cuatro concentraciones en estudio; siendo los promedios de UFC:. fo r. m. al 25% de 8.8, al 50% de 7.9, al 75% de 7.7 y al 100% de 3.2, con una CIM de 10 mg/mL;. In. pero no superando al grupo control donde se obtuvo un efecto bactericida para. de. Vancomicina (Tabla 1). Del experimento se evidenció como la actividad antibacteriana. em. as. aumentaba conforme mayor era la concentración del extracto.. st. Desde 1974 con la investigación de Lutomski et al, se obtienen resultados que demuestran. Si. la actividad antibacteriana in vitro del extracto alcohólico de cúrcuma contra. de. microorganismos presentes en colecistitis, donde se observa una inhibición considerable. ió. n. de Staphylococcus, Streptococcus y Bacillus con una CIM de 0.5-5.0 mg/mL. Sin. Di re cc. embargo, bacterias Gram-negativas, algunas levaduras y mohos no fueron susceptibles al tratamiento con altas concentraciones del extracto 36. Segun los estudios Gul et al (2000) y Falco et al (2010), el extracto alcohólico del rizoma de la cúrcuma, inhibe el crecimiento in vitro de algunas bacterias Gram positivas tales como Staphylococcus aureus, a una CIM de 2,5 mg/mL en el caso del primero y 0,75 mg/ml en el segundo 37,38 32. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(33) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Esto es comparable con los resultados obtenidos por Ungphaiboon et al (2005) y Okigbo (2009) et al, donde investigan el efecto del extracto de etanol de cúrcuma sobre Staphylococcus aureus y Candida albicans; obteniendo en el primer estudio una CIM 0,128mg/mL en la bacteria y 0,256 mg/mL en el hongo; mientras que en el segundo. ica ció. n. trabajo la CIM varió entre 0.5-1.0 mg /mL para ambos patógenos 8,39.. om un. Según la bibliografía son varios los autores que afirman que los extractos etanólicos mostraron mejores propiedades antimicrobianas que los extractos acuosos o. yC. metanolicos8,28,37. Como en el trabajo de Kim et al, donde el extracto etanólico de C.. át ica. longa demostró una mayor actividad antibacteriana que el extracto de metanol o el extracto acuoso. Dado que el extracto etanólico era más activo que los otros extractos, el. fo r. m. estudio examinó si este podía restablecer la actividad antibacteriana de las β-lactámicos. In. y alterar la invasión de MRSA de fibroblastos de la mucosa humana (HMF), con un CIM. de. de 0,125-2 mg / mL 40.. em. as. Asi mismo el trabajo de Lawhavinit et al, al comparar el efecto del extracto etanólico y. st. metanólico de la cúrcuma contra 24 bacterias patógenas mostraron la mayor actividad. Si. antimicrobiana para el extracto etanólico con un valor de CIM de 3.91 a 125 µg/mL , 28. . Estas diferencias pueden. de. siendo 31,35 µg/mL la CIM para Staphylococcus aureus. ió. n. explicarse por el efecto sinérgico entre los diferentes componentes químicos de los. Di re cc. extractos y/o por la presencia de otros componentes que incluso pueden ser activos a bajas concentraciones.. Inclusive se ha visto efecto antibacteriano en cepas de Staphylococcus aureus resistentes a meticilina. Comprobado por los estudios de Chakraborty et al, en el cual demostró que el extracto de etanol tiene mejor actividad antibacteriana en comparación con extracto. 33 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(34) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. metanólico sobre Staphylococcus aureus resistente a la meticilina con un CIM de 12.44 0.09 µ g/mL. 41. . Y Gunes et al, demostraron que la curcumina tuvo actividades. antibacterianas contra bacterias Gram negativas y Gram positivas, dentro de estas últimas se incluyen: Staphylococcus aureus sensible a la meticilina (MSSA) y Staphylococcus. ica ció. n. aureus resistente a la meticilina (MRSA) con una MIC de 219 µg/mL y 217 µg/mL. om un. respectivamente 42.. Por otro lado, la actividad antifúngica de este extracto contra Candida albicans se. yC. presentó en todas las concentraciones, evidenciándose un efecto fungicida (0 UFC),. át ica. siendo la concentración más baja 25% con un CIM de 2,5 mg/mL, superando al grupo. m. control con fluconazol, que tuvieron un promedio de 2.6 UFC (Tabla 4).. In. fo r. Al contrario del estudio de Tsao et al, donde se demostró la actividad anti-Candida de la. de. curcumina contra 38 cepas diferentes de Candida, incluidas algunas cepas resistentes a. as. fluconazol y aislados clínicos de C. albicans, C. glabrata, C. krusei, C. tropicalis y C.. em. guilliermondii. Los valores CIM para cepas sensibles y resistentes fueron 250-650 y 250-. st. 500 μg / mL, respectivamente 43.. de. Si. Y el estudio de Neelofar et al, que evalúa la actividad antifúngica de la curcumina contra. n. 14 cepas de Candida (10 clínicas y 4 estándar). Curcumina muestra propiedades. Di re cc. ió. antifúngicas contra todas las cepas de Candida probadas, con concentraciones inhibitorias mínimas (CIM) que varían de 250 a 2000 µg/mL. Para C. albicans la CIM fue de 250 µg/mL, se observa una reducción del 70% en el contenido de ergosterol. Sin embargo este compuesto es menos eficaz que fluconazol 43. Como se evidencia en la mayoría de las investigaciones el fluconazol, fármaco control de elección, tiene más actividad que el extracto, al contrario que en este estudio donde el. 34 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(35) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. crecimiento de C. Albicans fue restringido más por el extracto que por el fluconazol. Esto es comparable con el estudio de Martins et al, en el cual Candida albicans fue la más susceptible a la curcumina entre las especies de Candida estudiadas con una CIM 62 mg/L. La curcumina fue capaz de inhibir la adhesión de candida a células epiteliales. ica ció. n. bucales humanas (BEC) de pacientes con VIH, siendo más potente que el fluconazol; el efecto curcumina en todos los aislados clínicos fue 2.5-6.0 veces mayor que el. om un. fluconazol17. Se podría explicar debido a la resistencia al fármaco, teniendo en cuenta que la cepa de C. albicans fue aislada de la mucosa oral de un portador de VIH.. yC. Debido a la creciente resistencia a los azoles, se propone la combinación de curcumina. át ica. con agentes fungicidas existentes ya que puede proporcionar un efecto más significativo 45. . La. m. contra las infecciones fúngicas sistémicas como la candidemia y la candidiasis. fo r. fuerte actividad antifúngica del rizoma de C. longa y su bajo efecto secundario fueron las. In. principales razones para investigar su probable efecto sinérgico con los fungicidas. de. existentes. La actividad sinérgica de la curcumina con cinco fármacos azólicos y dos. em. as. polienos, que incluyen voriconazol, itraconazol, ketoconazol, miconazol, fluconazol,. st. anfotericina B y nistatina, mostró una reducción de 10-35 veces en los valores MIC de. Si. los fungicidas frente a 21 aislados clínicos de C. albicans. . La actividad sinérgica de la. de. curcumina con anfotericina B y fluconazol podría estar asociada con la acumulación de. Di re cc. ió. n. ROS que se suprimirá al agregar un antioxidante 35.. Por último del experimento se evidenció que el extracto es más efectivo contra Candida albicans que contra Staphylococcus aureus. Resultados que se comparan con las investigación de de Sunilson et al (2009), pero al contrario de Okigbo et al (2000), Mizoglu et al (2008) y Sangvanich et al (2010) donde Staphylococcus aureus fue más susceptible al extracto, mientras que Candida albicans fue menos inhibido. 16,19,39. . Una. 35 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(36) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. explicación dichos resultado serían las diferencias en el contenido de curcumina para la Curcuma longa de diferentes regiones geográficas y podría deberse a la hibridación con otras especies de Curcuma, lo que podría ser un hecho importante para elegir la planta con mayor contenido de curcumina.. ica ció. n. Según los resultados obtenidos con Curcuma longa, se crea posibilidades en el campo de la investigación clínica y farmacológica, constituyendo así una alternativa natural,. om un. eficiente y de bajo costo, para el tratamiento de las múltiples infecciones que se producen. yC. por Staphylococcus aureus y Candida albicans.. fo r. m. át ica. V. CONCLUSIONES. de. In.  El extracto hidroalcohólico del rizoma de Curcuma longa, presenta actividad. as. antimicrobiana in vitro sobre a Staphylococcus aureus y Candida albicans.. em.  La Concentración Inhibitoria Mínima (CMI) del extracto hidroalcohólico del rizoma. st. de Curcuma longa, sobre Staphylococcus aureus fue de 10 mg/mL.. Si.  La Concentración Inhibitoria Mínima (CMI) del extracto hidroalcohólico del rizoma. de. de Curcuma longa, sobre Candida albicans fue de 2,5 mg/mL.. ió. n.  El efecto antibacteriano in vitro del extracto hidroalcohólico del rizoma de Curcuma. Di re cc. longa sobre Staphylococcus aureus fue significativamente menor que con Vancomicina..  El efecto antifúngico in vitro del extracto hidroalcohólico del rizoma de Curcuma longa sobre Candida albicans fue significativamente mejor que con Fluconazol.. 36 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(37) át ica. yC. om un. ica ció. n. Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. In. fo r. m. VI. RECOMENDACIONES. de.  Se recomienda realizar el análisis tanto cuantitativo como cualitativo de la. as. composición química del extracto hidroalcohólico de Curcuma longa, aislando. em. principios activos de la planta.. Si. st.  Se recomienda realizar otros tipos de extractos de Curcuma longa para comparar con. de. el extracto hidroalcohólico y determinar la efectividad de estos.. ió. n.  Se recomienda realizar estudios in vivo para valorar la efectividad y toxicidad de. Di re cc. Curcuma longa, obteniendo así dosis terapéuticas.  Se recomienda realizar trabajos de investigación con menores concentraciones de extracto hidroalcohólico de Curcuma longa.. 37 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

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TABLA  N°  1:  Concentración  Mínima  Inhibitoria  para  las  UFC  del  Extracto  Hidroalcohólico  de  Cúrcuma  longa  sobre  Staphylococcus  aureus  a  las  concentraciones de 25%, 50%, 75%, 100% y Vancomicina
TABLA  N°  2:  Análisis  de  Varianza  del  Efecto  Antimicrobiano  del  Extracto  Hidroalcohólico de Curcuma longa y Vancomicina sobre Staphylococcus aureus a las  concentraciones de 25%, 50%, 75%, 100%
GRÁFICO  N°  1:  Concentración  Mínima  Inhibitoria  para  las  UFC  del  Extracto  Hidroalcohólico de Curcuma longa según grupos de tratamientos (25%, 50%, 75%,  100% y vancomicina) sobre Staphylococcus aureus
TABLA  N°  4:  Concentración  Mínima  Inhibitoria  para  las  UFC  del  Extracto  Hidroalcohólico de Curcuma longa sobre Candida albicans a las concentraciones de  25%, 50%, 75%, 100% y fluconazol
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