Extracción y caracterización química de aceites esenciales de especies briófitas de la región sur del Ecuador.

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(1)

I

UNIVERSIDAD TÉCNICA PARTICULAR DE LOJA

La Universidad Católica de Loja

AREA BIOLOGICA

TITULO DE BIOQUIMICO FARMACEUTICO

Extracción y caracterización química de aceites esenciales de especies

briofitas de la región sur del Ecuador.

TRABAJO DE TITULACION

AUTOR: Galán Chamba, Kathia Cecilia

DIRECTOR:

Valarezo Valdez, Benito Eduardo, Ph.D.

LOJA

ECUADOR

(2)

Esta versión digital, ha sido acreditada bajo la licencia Creative Commons 4.0, CC BY-NY-SA: Reconocimiento-No comercial-Compartir igual; la cual permite copiar, distribuir y comunicar públicamente la obra, mientras se reconozca la autoría original, no se utilice con fines comerciales y se permiten obras derivadas, siempre que mantenga la misma licencia al ser divulgada. http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/4.0/deed.es

(3)

II

APROBACIÓN DEL DIRECTOR DEL TRABAJO DE TITULACIÓN

Ph.D.

Benito Eduardo Valarezo Valdez

DOCENTE DE TITULACIÓN

De mi consideración:

El presente trabajo de titulación: “Extracción y caracterización química de aceites

esenciales de especies briofitas de la región sur del Ecuador” realizado por Galán Chamba Kathia Cecilia, ha sido orientado y revisado durante su ejecución, por cuanto

se aprueba la presentación del mismo.

Loja, septiembre del 2016

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III

DECLARACION DE AUTORIA Y CESIÓN DE DERECHOS

“Yo, Kathia Cecilia Galán Chamba, declaro ser autora del presente trabajo de titulación:

“Extracción y caracterización química de aceites esenciales de especies briofitas

de la región sur del Ecuador” de la titulación de Bioquímica y Farmacia, siendo Benito Eduardo Valarezo Valdez director del presente trabajo; y eximo expresamente a la

Universidad Técnica Particular de Loja y a sus representantes legales de posibles

reclamos o acciones legales. Además certifico que las ideas, conceptos, procedimientos

y resultados vertidos en el presente trabajo investigativo, son de exclusiva

responsabilidad.

Adicionalmente declaro conocer y aceptar la disposición del Art. 88 del Estatuto

Orgánico de la Universidad Técnica Particular de Loja que en su parte pertinente

textualmente dice: “Forman parte del patrimonio de la Universidad la propiedad

intelectual de investigaciones, trabajos científicos o técnicos y tesis de grado o trabajos

de titulación que se realicen con el apoyo financiero, académico o institucional

(operativo) de la Universidad”.

f) ______________________

Kathia Cecilia Galán Chamba

(5)

IV

DEDICATORIA

Dedico este trabajo principalmente a Dios, por haberme dado la

vida y permitirme el haber llegado hasta este momento tan

importante de mi formación profesional.

A mi madre por haberme dado la vida, por su apoyo, sus consejos,

sus valores, por la motivación constante que me ha permitido ser

una persona de bien, pero más que nada, por su amor.

A mi padre quien con sus consejos ha sabido guiarme para salir

adelante y por su amor incondicional.

A mi esposo por estar conmigo en todo momento, por su paciencia,

por su comprensión y por haber creído en mí.

A mi hijo por ser la razón de mi vida, mis ganas de salir adelante,

mi mayor motivación, mi todo.

A mis hermanos por estar conmigo y apoyarme siempre, los

quiero mucho.

(6)

V

AGRADECIMIENTO

Le agradezco a Dios por haberme acompañado y guiado a lo largo

de mi carrera, por ser mi fortaleza en los momentos de debilidad y

por brindarme una vida llena de aprendizajes, experiencias y

sobre todo de felicidad.

A toda mi familia, por el apoyo brindado a lo largo de mi vida por

estar a mi lado en los momentos difíciles, por su tiempo y esfuerzo

y darme excelentes consejos en mi caminar diario.

Agradezco de manera muy especial al Ph.D. Eduardo Valarezo por

la dedicación y por trasmitir sabiduría para mi formación

profesional, así mismo dejo plasmada mi gratitud al Ing. Angel

Benitez por la colaboración prestada en este proyecto de tesis.

Por ultimo agradezco a cada una de las personas que estuvieron a

mi lado motivándome a seguir adelante a mi esposo, mi hijo,

hermanos, abuelita, amigos (as), que Dios les pague.

(7)

VI

ÍNDICE DE CONTENIDOS

Contenido

APROBACIÓN DEL DIRECTOR DEL TRABAJO DE FIN DE TITULACIÓN ... II

DECLARACION DE AUTORIA Y CESIÓN DE DERECHOS ... III

DEDICATORIA ... IV

AGRADECIMIENTO ... V

ÍNDICE DE CONTENIDOS ... VI

RESUMEN ... 1

ABSTRACT... 2

INTRODUCCIÓN ... 3

CAPITULO I ... 4

MARCO TEORICO ... 4

1.1. Aceites Esenciales. ... 5

1.1.1. Extracción... 5

1.1.2. Clasificación ... 6

1.1.2.1. Composición ... 7

1.1.2.2. Cromatografía de Gases acoplado a espectrometría de masas ... 7

1.1.3. Propiedades ... 8

1.1.4. Usos y Aplicaciones ... 9

1.1.4.1. Farmacológicas ... 9

1.1.4.2. Cosméticas ... 9

1.1.4.3. Aromaterapéuticas ... 9

1.2. Plantas medicinales. ... 10

1.3. Flora Ecuatoriana ... 11

1.3.1. Flora aromática del Ecuador ... 11

1.4. Briófitas ... 11

1.5.1. Breutelia tomentosa (Sw. Ex Brid) A. Jaeder ... 12

1.5.2. Leptoscyphus gibbosus (Taylor) Mitt. ... 13

1.5.3. Rhacocarpus purpurascens (Brid.) Paris ... 14

1.5.4. Syzygiella anomala (Lindenb. & Gottsche) Stephani ... 15

1.4.5. Thuidium peruvianum Mitt. ... 15

CAPITULO II ... 17

MATERIALES Y MÉTODOS ... 17

2.1. Diseño Experimental. ... 18

2.1.1. Recolección de la materia vegetal ... 19

2.1.2. Determinación de la Humedad de la plantas. ... 19

2.1.3. Extracción del aceite esencial. ... 19

2.1.4. Determinación de la composición química ... 21

(8)

VII

RESULTADOS Y ANALISIS ... 26

3.1. Recolección de la materia vegetal ... 27

3.2. Determinación de la Humedad de las especies recolectadas. ... 27

3.3. Rendimiento ... 29

3.4. Composición Química ... 30

3.4.1. Composición química del aceite esencial de Breutelia Tomentosa ... 30

3.4.2. Composición química del aceite esencial Leptoscyphus gibbosus ... 36

3.4.3. Composición química del aceite esencial Rhacocarpus purpurascens ... 41

3.4.4. Composición química del aceite esencial Syzygiella anómala ... 47

3.4.5. Composición química del aceite esencial Thuidium peruvianum ... 52

3.5. Datos espectrales de los compuestos no identificados. ... 57

CONCLUSIONES ... 85

RECOMENDACIONES ... 86

BIBLIOGRAFIA ... 87

ANEXOS... 90

ANEXO I ... 91

DETERMINACIÓN DE HUMEDAD ... 91

ANEXO II ... 92

DETERMINACIÓN DEL PORCENTAJE DE RENDIMIENTO ... 92

ANEXO 3 ... 93

BIBLIOGRAFIA KOVATS ... 93

(9)

VIII

INDICE DE FIGURAS

Figura 1 Representación esquemática de un cromatógrafo de gases ... 8

Figura 2 Muestra botánica de Breutelia tomentosa ... 13

Figura 3. Muestra botánica de Leptoscyphus gibbosus ... 14

Figura 4. Muestra botánica de Rhacocarpus purpurascens ... 14

Figura 5 Muestra botánica de Syzygiella anomala ... 15

Figura 6 Muestra botánica de Thuidium peruvianum ... 16

Figura 7 Esquema del diseño experimental ... 18

Figura 8 Lámpara ULTRA X y desecador ... 19

Figura 9 Proceso de destilación ... 20

Figura 10 Cromatógrafo de gases ... 21

Figura 11 Preparación de muestras ... 22

Figura 12 Condiciones operacionales para GM-EM en la columna DB5-MS ... 23

Figura 13 Condiciones operacionales para GM-EM en la columna HP-INOWAX... 24

Figura 14 . Área de recolección de la especies Breutelia tomentosa, Leptoscyphus gibbosus, Rhacocarpus purpurascens, Syzygiella anomala, Thuidium peruvianum ... 27

Figura 15 Perfil cromatográfico del aceite esencial de Breutelia tomentosa obtenido en la columna DB-5MS ... 31

Figura 16 Perfil cromatográfico del aceite esencial de Breutelia tomentosa obtenido en la columna HP-INNOWAX ... 31

Figura 17 Compuestos mayoritarios en la columna DB5-MS Breutelia tomentosa... 35

Figura 18 Compuestos mayoritarios en la columna HP-INNOWAX de Breutelia tomentosa .... 35

Figura 19 Perfil cromatográfico del aceite esencial de Leptoscyphus gibbosus obtenido en la columna DB-5MS ... 36

Figura 20 Perfil cromatográfico del aceite esencial de Leptoscyphus gibbosus obtenido en la columna HP-INNOWAX ... 37

Figura 21 Compuestos mayoritarios en la columna DB5-MS Leptoscyphus gibbosus ... 40

Figura 22 Compuestos mayoritarios en la columna HP-INNOWAX de Leptoscyphus gibbosus ... 40

Figura 23 Perfil cromatográfico del aceite esencial de Rhacocarpus purpurascens obtenido en la columna DB-5MS ... 41

Figura 24 Perfil cromatográfico del aceite esencial de Rhacocarpus purpurascens obtenido en la columna HP-INNOWAX ... 42

Figura 25 . Compuestos mayoritarios en la columna DB5-MS Rhacocarpus purpurascens .... 45

Figura 26 . Compuestos mayoritarios en la columna HP-INNOWAX Rhacocarpus purpurascens ... 45

Figura 27. Perfil cromatográfico del aceite esencial de Syzygiella anómala obtenido en la columna DB-5MS ... 47

Figura 28 Perfil cromatográfico del aceite esencial de Syzygiella anómala obtenido en la columna HP-INNOWAX ... 47

Figura 29 Compuestos mayoritarios en la columna DB5-MS Syzygiella anomala ... 50

Figura 30 Compuestos mayoritarios en la columna HP-INNOWAX Syzygiella anomala ... 50

Figura 31 Perfil cromatográfico del aceite esencial de Thuidium peruvianum obtenido en la columna DB5-MS ... 52

Figura 32 Perfil cromatográfico del aceite esencial de Thuidium peruvianum obtenido en la columna HP-INNOWAX ... 52

Figura 33 Compuestos mayoritarios en la columna DB5-MS Thuidium peruvianum ... 55

Figura 34 Compuestos mayoritarios en la columna HP-INNOWAX Thuidium peruvianum ... 55

Figura 35. Compuesto no identificado en Breutelia tomentosa en la columna DB5-MS ... 57

Figura 36 Compuesto no identificado en Breutelia tomentosa en la columna DB5-MS ... 58

Figura 37 Compuesto no identificado en Breutelia tomentosa en la columna DB5-MS ... 58

Figura 38 Compuesto no identificado en Breutelia tomentosa en la columna DB5-MS ... 59

Figura 39 Compuesto no identificado en Breutelia tomentosa en la columna HP-INNOWAX .. 60

(10)

IX

Figura 41 Compuesto no identificado en Breutelia tomentosa en la columna HP-INNOWAX .. 61

Figura 42 Compuesto no identificado en Breutelia tomentosa en la columna HP-INNOWAX .. 61

Figura 43 Compuesto no identificado en Breutelia tomentosa en la columna HP-INNOWAX .. 62

Figura 44 Compuesto no identificado en Breutelia tomentosa en la columna HP-INNOWAX .. 62

Figura 45 Compuesto no identificado en Breutelia tomentosa en la columna HP-INNOWAX .. 63

Figura 46 Compuesto no identificado en Breutelia tomentosa en la columna HP-INNOWAX .. 63

Figura 47 Compuesto no identificado en Breutelia tomentosa en la columna HP-INNOWAX .. 64

Figura 48 Compuesto no identificado en Breutelia tomentosa en la columna HP-INNOWAX .. 64

Figura 49 Compuesto no identificado en Breutelia tomentosa en la columna HP-INNOWAX .. 65

Figura 50 Compuesto no identificado en Breutelia tomentosa en la columna HP-INNOWAX .. 65

Figura 51 Compuesto no identificado en Breutelia tomentosa en la columna HP-INNOWAX .. 66

Figura 52 Compuesto no identificado en Breutelia tomentosa en la columna HP-INNOWAX .. 66

Figura 53 Compuesto no identificado en Breutelia tomentosa en la columna HP-INNOWAX .. 67

Figura 54 Compuesto no identificado en Breutelia tomentosa en la columna HP-INNOWAX .. 67

Figura 55 Compuesto no identificado en Breutelia tomentosa en la columna HP-INNOWAX .. 68

Figura 56 Compuesto no identificado en Leptoscyphus gibbosus en la columna DB5-MS ... 69

Figura 57 Compuesto no identificado en Leptoscyphus gibbosus en la columna DB5-MS ... 69

Figura 58 Compuesto no identificado en Leptoscyphus gibbosus en la columna DB5-MS ... 70

Figura 59 Compuesto no identificado en Leptoscyphus gibbosus en la columna HP-INNOWAX ... 70

Figura 60 Compuesto no identificado en Leptoscyphus gibbosus en la columna HP-INNOWAX ... 71

Figura 61 Compuesto no identificado en Leptoscyphus gibbosus en la columna HP-INNOWAX ... 71

Figura 62 Compuesto no identificado en Leptoscyphus gibbosus en la columna HP-INNOWAX ... 72

Figura 63 Compuesto no identificado en Leptoscyphus gibbosus en la columna HP-INNOWAX ... 72

Figura 64 Compuesto no identificado en Leptoscyphus gibbosus en la columna HP-INNOWAX ... 73

Figura 65 Compuesto no identificado en Leptoscyphus gibbosus en la columna HP-INNOWAX ... 73

Figura 66 Compuesto no identificado en Leptoscyphus gibbosus en la columna HP-INNOWAX ... 74

Figura 67 Compuesto no identificado en Leptoscyphus gibbosus en la columna HP-INNOWAX ... 74

Figura 68 Compuesto no identificado en Leptoscyphus gibbosus en la columna HP-INNOWAX ... 75

Figura 69 Compuesto no identificado en Rhacocarpus purpuracens en la columna DB5-MS . 76 Figura 70 Compuesto no identificado en Rhacocarpus purpuracens en la columna HP-INNOWAX ... 76

Figura 71Compuesto no identificado en Rhacocarpus purpuracens en la columna HP-INNOWAX ... 77

Figura 72 Compuesto no identificado en Rhacocarpus purpuracens en la columna HP-INNOWAX ... 77

Figura 73 Compuesto no identificado en Rhacocarpus purpuracens en la columna HP-INNOWAX ... 78

Figura 74 Compuesto no identificado en Syzygiella anomala en la columna DB5-MS ... 78

Figura 75 Compuesto no identificado en Syzygiella anomala en la columna DB5-MS ... 79

Figura 76 Compuesto no identificado en Syzygiella anomala en la columna DB5-MS ... 79

Figura 77 Compuesto no identificado en Syzygiella anomala en la columna HP-INNOWAX .. 80

Figura 78 Compuesto no identificado en Thuidium peruvianum en la columna DB5-MS ... 81

Figura 79 Compuesto no identificado en Thuidium peruvianum en la columna DB5-MS ... 81

Figura 80 Compuesto no identificado en Thuidium peruvianum en la columna DB5-MS ... 82

(11)

X

Figura 82 Compuesto no identificado en Thuidium peruvianum en la columna HP-INNOWAX ... 83

Figura 83 Compuesto no identificado en Thuidium peruvianum en la columna HP-INNOWAX ... 83

(12)

XI

INDICE DE TABLAS

Tabla. 1 Humedad Relativa de Breutelia tomentosa ... 28

Tabla. 2 Humedad Relativa de Leptoscyphus gibbosus ... 28

Tabla. 3 Humedad Relativa de Rhacocarpus purpurascens ... 28

Tabla. 4. Humedad Relativa de Syzygiella anómala ... 28

Tabla. 5 Humedad Relativa de Thuidium peruvianum ... 29

Tabla. 6. Rendimiento de los aceites esenciales ... 30

Tabla. 7 Composición química del aceite esencial de Breutelia tomentosa ... 32

Tabla. 8. Composición química del aceite esencial de Leptoscyphusgibbosus ... 38

Tabla. 9. Composición química de Racocarphus purpuracens ... 43

Tabla. 10. Composición química de Syzygiella anómala ... 48

(13)

1 RESUMEN

Las briofitas son fuente rica de terpenoides y compuestos fenólicos, hasta la fecha solo

el 5% de estas especies se han estudiado químicamente. Se obtuvo aceite esencial de

cinco especies briófitas mediante destilación por arrastre de vapor las mismas que

fueron recolectadas en el páramo arbustivo El Tiro. La composición química de estas

especies se determinó por cromatografía de gases acoplada a espectometría de masas

(CG-MS) los compuestos identificados fueron: En Breutelia Tomentosa 40 compuestos,

Leptoscyphus gibbosus 35 compuestos, Rhacocarpus purpurascens 45 compuestos,

Syzygiella anomala 36 compuestos, Thuidium peruvianum 42 compuestos Los

componentes mayoritarios fueron: Epizonarene (8,68%) en Breutelia Tomentosa;

Cabreuva D oxide (33,77%) en Leptoscyphus gibbosus; α- Cadinol (36,84%) en

Rhacocarpus purpurascens; Silphiperfola-5,7 (14)-diene (25,22%) en Syzygiella anomala y Phytol (21,72%) en Thuidium peruvianum.

(14)

2 ABSTRACT

Bryophytes are rich source of terpenoids and phenolic compounds, to date only 5% of

these species have been studied chemically. Essential oil five bryophytes species was

obtained by distillation by steam the same that were collected in the shrubby moorland

“El Tiro”. The chemical composition of these species are determined by gas chromatography coupled to mass spectrometry (CG-MS). The identified compounds

were: Breutelia Tomentosa 40, Leptoscyphus gibbosus 35, Rhacocarpus purpurascens

45, Syzygiella anomala 36, Thuidium peruvianum 42. The major compounds for each

specie were: Epizonarene (8,68%) in Breutelia Tomentosa, Cabreuva D oxide (33,77%)

in Leptoscyphus gibbosus, α- Cadinol (36,84%) in Rhacocarpus purpurascens,

Silphiperfola-5,7 (14)-diene (25,22%) in Syzygiella anómala and Phytol (21,72%) in

Thuidium peruvianum.

(15)

3

INTRODUCCIÓN

El presente estudio consiste en determinación de la composición química, del aceite

esencial de especies de Briofitos. Se desarrolla en 3 capítulos, el primer capítulo titulado

Marco Teórico trata sobre el estado del arte de este tema, en el segundo capítulo se da

a conocer las técnicas y los materiales utilizados para llevar a cabo la investigación y en

el capítulo 3 se expone y analiza los resultados. Esta investigación contribuye al estudio

de la flora aromática de Región Sur del Ecuador. Con este estudio se aumenta el

conocimiento sobre la existencia de los aceites esenciales sus propiedades y usos para

aplicaciones en las diferentes industrias tales como: Farmacéutica, Cosmética y

Alimenticia, la información es también sustentada en el Catálogo de Plantas Aromáticas.

Una vez conocida la composición química, de los aceites esenciales de la región del Sur

del Ecuador, los mismos pueden ser usados como materia prima para las diferentes

industrias o para la formulación de subproductos.

El objetivo general de este estudio es determinar los componentes químicos presentes

en las cinco especies de Briofitas, y los objetivos específicos son: Extracción del aceite

esencial de Breutelia tomentosa, Leptoscyphus gibbosus, Rachocarpus purpuracens,

Syzygiella anomala, Thuidium peruvianum; determinar la composición química de estos aceites; como también establecer los compuestos mayoritarios y su importancia a nivel

industrial; y el de contribuir al desarrollo de nuevos estudios sobre Briófitas, dichos

objetivos que fueron desarrollados en su totalidad. Para lo cual se inició con la

recolección del material vegetal, luego se le extrajo el aceite esencial mediante arrastre

con vapor, se determinó la composición química utilizando cromatografía de gases

(16)

4 CAPITULO I

(17)

5 1.1. Aceites Esenciales.

Los aceites esenciales (AE o AEs), también denominados esencias o aceites volátiles,

generalmente destilables por arrastre con vapor de agua, que contienen sustancias

responsables del aroma de las plantas y tienen características como su compleja

composición química (Martinez, 2003).

Son obtenidos a partir de diferentes partes de las plantas como flores, yemas, semillas,

hojas, ramas, corteza, hierbas, madera, frutos y raíces. Químicamente están formados

por terpenos, monoterpenos y sesquiterpenos (hidrocarburos, alcoholes, cetonas, que

pueden ser acíclicos, monocíclicos, bicíclicos, tricíclicos), sustancias azufradas y

nitrogenada (D. Acevedo & Navarro, 2013).

Paradójicamente, los terpenos o son inodoros o contribuyen muy poco al aroma global

y simplemente constituyen la «base» diluyente del aceite esencial, proporcionando a

éste su carácter volátil e inflamable y sus propiedades físicas más fácilmente

mensurables (densidad, viscosidad...). Los responsables del aroma de los aceites

esenciales suelen ser sustancias que se encuentran en menor proporción, aunque hay

excepciones. Se trata de compuestos orgánicos con grupos funcionales del tipo: cetona,

éster, alcohol, aldehído, éter. Cada una de estas sustancias en su estado puro, presenta

un aroma característico, que en ocasiones recuerda al de determinadas frutas o a olores

peculiares, pero es el conjunto de todas ellas, cada una en su correcta proporción el que

determina el aroma y en definitiva las propiedades más valiosas de los aceites

esenciales (Ortuño Sanchez, 2006).

1.1.1. Extracción.

Según la variedad del material vegetal, parte de la planta a emplear y estabilidad del

aceite esencial que se pretenda obtener, se emplean diversos procedimientos físicos y

químicos de extracción, donde su correcta aplicación será lo que determine la calidad

del producto final.

Se pueden extraer mediante diferentes métodos como: prensado, destilación con vapor

de agua, extracción con solventes volátiles, enfleurage y con fluidos supercríticos.

La destilación por arrastre con vapor de agua es el proceso más común para extraer

aceites esenciales, en esta técnica se aprovecha la propiedad que tienen las moléculas

de agua en estado de vapor de asociarse con moléculas de aceite. La extracción se

efectúa cuando el vapor de agua entra en contacto con el material vegetal y libera la

esencia, para luego ser condensada. Con el fin de asegurar una mayor superficie de

contacto y exposición de las glándulas de aceite, se requiere picar el material según su

(18)

6

Se utiliza esta técnica a nivel industrial debido a su alto rendimiento, la pureza del aceite

obtenido y porque no requiere tecnología sofisticada, es energéticamente más eficiente,

se tiene un mayor control de la velocidad de destilación, existe la posibilidad de variar la

presión del vapor y a su vez este método satisface mejor las operaciones comerciales

a escala al proveer resultados más constantes y reproducibles (Martinez, 2003).

1.1.2. Clasificación.

Según (Martinez, 2003) los aceites esenciales se clasifican basándose en criterios

como consistencia, origen y naturaleza química de los componentes mayoritarios.

Clasificación por consistencia.

o Las esencias fluidas son líquidos volátiles a temperatura ambiente.

o Los bálsamos son de consistencia más espesa, poco volátiles y propensos a

sufrir reacciones de polimerización.

o Las oleorresinas tienen el aroma de las plantas en forma concentrada y son

típicamente líquidos muy viscosos o sustancias semisólidas.

Clasificación por su origen.

o Los naturales se obtienen directamente de la planta y no sufren modificaciones

físicas ni químicas posteriores, debido a su rendimiento tan bajo son muy

costosos.

o Los artificiales se obtienen a través de procesos de enriquecimiento de la misma

esencia con uno o varios de sus componentes, por ejemplo, la mezcla de

esencias de rosa, geranio y jazmín enriquecida con linalol.

o Los sintéticos como su nombre lo indica son los producidos por procesos de

síntesis química. Estos son más económicos y por lo tanto son mucho más

utilizados como aromatizantes y saborizantes.

Clasificación por su naturaleza química de los componentes mayoritarios.

o Según esto los aceites esenciales ricos en monoterpenos se denominan aceites

esenciales monoterpenoides (p.ej. hierbabuena, albahaca, salvia, etc.).

o Los ricos en sesquiterpenos son los aceites esenciales sesquiterpenoides (p.ej.

copaiba, pino, junípero, etc.).

o Los ricos en fenilpropanos son los aceites esenciales fenilpropanoides (p.ej.

(19)

7 1.1.2.1. Composición.

Entre los componentes de los aceites esenciales, una familia de hidrocarburos, los

terpenos son a menudo mayoritarios llegando a alcanzar elevadas concentraciones del

75% al 90% del peso total en aceites esenciales. Paradójicamente, los terpenos son

inodoros y constituyen la base del aceite esencial, proporcionando a este su carácter

volátil e inflamable y sus propiedades físicas más fácilmente mesurables (Ancasi, 2010).

Son muchos los factores que influyen en la composición de un aceite esencial,

denominada quimiotipo. Entre ellos los más importantes son el origen, la especie y el

órgano de la planta, las condiciones climáticas y de crecimiento (temperatura,

fertilizantes, tierra de cultivo, etc), asi como la destilación y la forma de almacenamiento

del aceite (Zekaria, 2007).

1.1.2.2. Cromatografía de Gases acoplado a espectrometría de masas.

Esta técnica permite el análisis rápido y exacto de gases, vapores líquidos; permite

identificar los componentes individuales de las mezclas gaseosas (Unam, 2007).

En la cromatografía de gases los componentes de una muestra vaporizada se separan

como consecuencia del reparto entre una fase gaseosa y una fase estacionaria

contenida en una columna. Al efectuar una separación cromatográfica de gases, la

muestra se vaporiza y se inyecta en la cabeza de la columna. La elución se lleva a cabo

mediante el flujo de una fase móvil de gas inerte. A diferencia de la mayoría de las otras

técnicas cromatográficas la fase móvil no interactúa con las moléculas de los

compuestos a separar, su única función es transportar los compuestos a través de la

columna.

A menudo la cromatografía de gases se emplea para confirmar de la presencia o

ausencia de un compuesto en una muestra determinada. Esto se lleva a cabo por

comparación del cromatograma de la sustancia pura con el de la muestra, siempre que

las condiciones para la obtención de ambos sean idénticas. Una de las dificultades de

esta comparación es que puede haber diferentes compuestos que presenten el mismo

comportamiento cromatográfico bajo condiciones idénticas, lo que llevaría a

identificaciones errónea (Gutierrez & Droguet, 2002).

Debido a su simplicidad, sensibilidad y efectividad para separar los componentes de

mezclas, la cromatografía de gas es una de las herramientas más importantes en

química. Es ampliamente usada para análisis cuantitativos y cualitativos, para la

(20)

8

como calores de solución y vaporización, presión de vapor y coeficientes de actividad.

En la actualidad la cromatografía de gases es una técnica analítica usada en muchos

laboratorios universitarios, de investigación e industriales, debido a su alta resolución,

sensibilidad y selectividad. Además de las aplicaciones típicamente analíticas, la

cromatografía de gases puede utilizarse a escala preparativa para la obtención de

compuestos de elevada pureza, así como también es posible la obtención de datos

físico-químicos relativos a propiedades superficiales, cinética y termodinámica de

procesos de adsorción, separación, y desarrollo de catalizadores (Montoya & Paez,

2012).

Por otra parte, la espectrometría de masas puede identificar de manera casi inequívoca

cualquier sustancia pura, pero normalmente no es capaz de identificar los componentes

individuales de una mezcla sin separar previamente sus componentes, debido a la

extrema complejidad del espectro obtenido por superposición de los espectros

particulares de cada componente. Por lo tanto, la asociación de las dos técnicas, GC

(“Gas Chromatography”) y MS (“Mass Spectrometry”) da lugar a una técnica combinada

GC-MS que permite la separación e identificación de mezclas complejas (Gutierrez &

Droguet, 2002).

Figura 1 Representación esquemática de un cromatógrafo de gases

Fuente: (M. Acevedo, 2014)

1.1.3. Propiedades.

Los aceites esenciales recién destilados son incoloros o ligeramente amarillos si se

dejan en contacto con el aire se evaporan completamente. Su densidad es inferior a la

del agua, casi siempre dotados de poder rotatorio, tienen índice de refracción elevado.

(21)

9

de alta gradación. Son liposolubles y muy poco solubles en agua, pero son extraídos de

los tejidos vegetales por el vapor de agua (Rodriguez, Alcaraz, & Real, 2012).

Son inflamables, no son tóxicos, aunque pueden provocar alergias en personas

sensibles a determinados terpenoides (Cadby et al., 2002). Son inocuos, mientras la

dosis suministrada no supere los límites de toxicidad.

1.1.4. Usos y Aplicaciones.

Según (Luengo, 2004) las esencias o aceites esenciales son una mezcla compleja de

sustancias aromáticas responsable de las fragancias de las flores. Poseen numerosas

acciones farmacológicas, por lo que constituyen la base de la aromaterapia, pero

además son ampliamente utilizados en perfumería y cosmética, en la industria

farmacéutica y en la industria de la alimentación, licorería y confitería.

1.1.4.1. Farmacológicas.

Por otro lado, algunos aceites esenciales se utilizan en farmacia para la obtención de

diversos principios activos (anetol, eugenol) o como excipientes y aromatizantes en la

preparación de jarabes, suspensiones, elixires y otras formas farmacéuticas. Asimismo,

en la industria de la alimentación, licorería y confitería se suelen utilizar como

aromatizantes.

1.1.4.2. Cosméticas.

En perfumería y cosmética los aceites esenciales son utilizados ampliamente. El empleo

en perfumería es muy importante debido, evidentemente, a las cualidades olfativas de

los aceites esenciales. Ello implica que sean incorporados en un sinnúmero de

composiciones: desde perfumes para aguas de colonia hasta fragancias para

detergentes de ropa. En cuanto a su empleo en cosmética es, asimismo, importante y

se basa en las funciones específicas que algunas esencias presentan sobre la piel,

además del uso como aromatizante en diferentes preparaciones cosméticas

1.1.4.3. Aromaterapéuticas.

En relación directa con los aceites esenciales ha surgido la denominada aromaterapia,

que es una disciplina dentro de la medicina natural que emplea básicamente aceites

esenciales en sus tratamientos. Una aportación muy importante de la aromaterapia ha

sido la profundización y el desarrollo de los tratamientos antiinfecciosos a partir de

aceites esenciales, con los que se obtienen resultados equiparables, en muchos casos,

(22)

10

resistencias. En este sentido, hay que destacar la técnica del aromatograma, que

confirma experimentalmente el poder antibacteriano y fungicida de los aceites

esenciales. Este procedimiento es semejante al antibiograma (sistema empleado para

definir el poder de un antibiótico), pero se sustituyen los antibióticos por aceites

esenciales.

1.2. Plantas medicinales.

El origen que se conoce de las plantas medicinales y que han formado parte importante

de la historia y de la cultura de los pueblos indígenas, se refiere a su uso y aplicación

como remedio de enfermedades, pues constituye un conocimiento que, aun en nuestros

días, se transmite en forma oral de generación en generación. Son plantas medicinales,

todas aquellas que contienen en alguno de sus órganos, principios activos, los cuales,

administrados en dosis suficientes, producen efectos curativos en las enfermedades de

los hombres y de los animales en general (Perez Cosme Irais, 2008).

El doble papel que juegan hoy las plantas medicinales, tanto como fuente de salud como

de ingresos económicos para cultivadores, comerciantes, colectores y manufactureros

de medicinas basadas en plantas, contribuye de una manera importante al proceso de

desarrollo. No obstante, la materia prima requerida no siempre está a disposición; en

algunos casos, especies con valor medicinal se encuentran en poca cantidad y esto

plantea una amenaza tanto para el bienestar humano como para las especies silvestres

(Buitrón, 1999).

Dentro de esta amplia gama de recursos de que se ha echado mano para procurarse

salud y bienestar, la utilización de las plantas con fines curativos, paliativos y

preventivos, ocupa un lugar preponderante. Su importancia es más pronunciada en

comunidades rurales, que dependen, casi exclusivamente, de los recursos vegetales

para curar sus achaques y dolencias(Balslev, Navarrete, Torres, & Marcia, 2008).

Las plantas han sido un recurso fundamental para las comunidades campesinas e

indígenas de nuestro país. Se estima que el 80% de la población ecuatoriana depende

de la medicina tradicional y por consiguiente de las plantas o productos naturales, para

la atención primaria de la salud y bienestar. No obstante, el uso y comercio de plantas

medicinales se mantiene como una práctica activa en los mercados de las ciudades

ecuatorianas y particularmente en las urbes del callejón interandino, en donde se

expenden por lo menos 273 especies de hierbas medicinales, mismas que se emplean

(23)

11 1.3. Flora Ecuatoriana.

La flora ecuatoriana es muy rica y variada debido a la diversidad de los medios

ecológicos. La presencia de los Andes como factor altitudinal, ha dado al territorio

ecuatoriano una fisonomía muy variada. Es por esto que, a pesar de estar situado en

plena zona ecuatorial, nuestro país no es completamente tropical o tórrido sino que

presenta la más amplia variedad de climas según la localización topográfica (Peralta,

2014).

La gran diversidad de la flora ecuatoriana ha sido reconocida y estudiada desde hace

mucho tiempo, pero no fue sino hace ocho años que, con la publicación del monumental

Catálogo de las Plantas Vasculares del Ecuador. Finalmente y de manera similar, la

flora de este país ha sido desde siempre reconocida por ser inmensamente rica en

plantas útiles; pero como ha sucedido con otros aspectos de la flora ecuatoriana, nadie

en realidad conocía qué tan grande era la proporción de especies útiles en relación a la

flora total; menos aún se sabía cuáles eran utilizadas con más de un propósito o quién

poseía la información sobre estos usos (Balslev et al., 2008).

1.3.1. Flora aromática del Ecuador.

En el Ecuador el uso de plantas medicinales está inmerso en la cotidianidad de sus

habitantes. La medicina popular se practica principalmente por habitantes de zonas

rurales, pero también por citadinos de toda clase social. Se pueden encontrar gran

variedad de plantas con usos medicinales que se expenden en mercados de la Sierra,

Costa y Amazonía. Ciertamente la diversidad de plantas y aplicaciones medicinales que

se conocen en el Ecuador es muy alta y representa una gran riqueza cultural y

terapéutica(Balslev et al., 2008).

La flora aromática o plantas aromáticas cuyos principios activos están constituidos, total

o parcialmente, por aceites esenciales, se encuentran distribuidas por todo el planeta.

En el Ecuador existen alrededor de 17.934 especies, de estas, 3118 especies

pertenecientes a 206 familias son comúnmente usadas con fines medicinales; del total

el 75% de las especies son plantas nativas y el 5% de ellas son endémicas, mientras

que el 11% han sido introducidas (Valarezo, 2014).

1.4. Briófitas.

Las Briófitas pertenecen a un ancestral grupo de plantas cuyo pequeño tamaño, y

peculiar ciclo de vida, las han mantenido apartadas del observador habitual. Sin

(24)

12

conjunto con las hepáticas y antocerotes conforman este grupo de plantas (Ardiles,

Cuvertino, & Osorio, 2008).

Las hepáticas son plantas muy pequeñas, de color verde, amarillento,

verde-rojizo o marrón; crecen sobre gran variedad de sustratos: rocas, barrancos, suelo y

sobre los troncos y ramas de los árboles, y aún hay un gran grupo de ellas que crecen

sobre las hojas de otras plantas. Los musgos, al igual que las hepáticas, son plantas

pequeñas, de unos pocos centímetros de altura, el musgo más grande mide más o

menos 70 cm, siendo un gigante, ya que la gran mayoría mide entre 0,5 y 1 cm. La

coloración es muy variada, verdes, verde-amarillentos, amarillos, amarillorojizo, hasta

negro; crecen sobre una gran variedad de sustratos, rocas, barrancos, suelo, troncos y

ramas de árboles, etc (Campos-S, Uribe-M, & Aguirre-C, 2008).

La flora de briófitas de Ecuador es muy diversa. Se han reportado 950 especies de

musgos y unas 700 especies de hepáticas; son casi tantas como las de Colombia pero

con una superficie más de cuatro veces menor. A pesar de eso, la diversidad de briófitas

del Ecuador es poco conocida, debido a que las colecciones provienen de áreas

localizadas. Por ejemplo, de la provincia de Loja, en el sur del Ecuador, se han citado

38 especies de hepáticas, y de la Provincia El Oro solamente dos. En contraste, de la

provincia de Zamora Chinchipe se han registrado 337 especies de hepáticas, de

Pichincha 171 y de Pastaza 153 (León-Yánez et al., 2006).

1.5. Aceites esenciales en briofitas.

La química de las Briófitas es aún poco conocida, y los resultados sobre este tema son

muy dispersos. Hasta la fecha solo el 5% total de las Briófitas se han estudiado

químicamente. A pesar de que los musgos son más numerosos que las hepáticas, en

términos químicos mucha menos atención se les ha dedicado a ellos. Además solo un

número limitado de musgos se ha estudiado con respecto a aceites esenciales.(Pejin,

Vujisic, Sabovljevic, Tesevic, & Vajs, 2011).

La química de briófitas se ha descuidado durante mucho tiempo porque son

morfológicamente muy pequeñas y difícil de recoger una gran cantidad como muestras

puras.

1.5.1. Breutelia tomentosa (Sw. Ex Brid) A. Jaeder.

Plantas pequeñas a robustas, con caulidios erguidos, tomentosos y desinfoliados. Hojas

caulinares imbricadas, de formas variadas, lanceoladas a oblongas, lisas o estriadas.

(25)

13

en sus caracteres vegetativos. Crecen en suelos húmedos, inorgánicos, alcalinos donde

hay bastante luz solar (Willd, 1830).

Reino: Viridiplantae

Filo: Streptophyta

Clase: Bryopsida

Orden: Bartramiales

Familia: Bartramiaceae

Género: Breutelia

Especie: Breutelia tomentosa (Sw. Ex Brid) A. Jaeder

1.5.2. Leptoscyphus gibbosus (Taylor) Mitt.

Esta especie pertenece al grupo de las hepáticas. Leptoscyphus es

un género de musgos hepáticas perteneciente a la familia Lophocoleaceae.

Comprende 72 especies descritas y de estas, solo 37 aceptadas.

Reino: Plantae

Filo: Marchantiophyta

Clase: Jungermanniopsida

Orden: Jungermanniales

Familia: Lophocoleaceae

Género: Leptoscyphus

(26)

14

Especie: Leptoscyphus gibbosus (Taylor) Mitt.

1.5.3. Rhacocarpus purpurascens (Brid.) Paris.

Planta verde brillante, de amarillento a rojizo, mide de 7.5 cm, sus hojas son ovaladas y

lanceoladas, erguida cuando esta seca y se expande cuando esta mojada, células

alargadas, de pared gruesa (Siviero, 2010).

Reino: Plantae

Filo: Bryophyta

Clase: Bryopsida

Orden: Leucodontales

Familia: Hedwigiaceae

Género: Rhacocarpus

Especie: Rhacocarpus purpurascens (Brid.) Paris.

Figura 3. Muestra botánica de Leptoscyphus gibbosus

Fuente: Benítez, A. 2016

Figura 4. Muestra botánica de Rhacocarpus purpurascens

(27)

15

1.5.4. Syzygiella anomala (Lindenb. & Gottsche) Stephani.

Foliosa; muy escasa en forma de tepe alto sobre roca, suelo y base de arbusto; en

ambientes descubiertos y completamente oscuros y húmedos. En bosques y páramos

entre 3.025 y 3.050 msnm (Álvaro, Díaz, & Morales, 2007).

Reino: Plantae

Filo: Marchantiophyta

Clase: Jungermanniopsida

Orden: Jungermanniales

Familia: Jungermanniaceae

Género: Syzygiella

Especie: Syzygiella anomala (Lindenb. & Gottsche) Stephani.

1.4.5. Thuidium peruvianum Mitt.

T. peruvianum se caracteriza por las plantas casi rectas, aplanadas, laxamente ramificadas, con las hojas del tallo terminadas en un pelo hialino, flexuosos, formado

por una a varias células y células foliares unipapilosas. Plantas robustas, en matas

laxas, pardas a pardo-verdosas, 10- 15 cm de longitud.

(28)

16

Reino: Plantae

Filo: Bryophyta

Clase: Bryopsida

Orden: Hypnales

Familia: Thuidiaceae

Género: Thuidium

Especie: Thuidium peruvianum Mitt.

Figura 6 Muestra botánica de Thuidium peruvianum

(29)

17 CAPITULO II

(30)

18 2.1. Diseño Experimental.

La metodología utilizada en la presente investigación se la realizo en el Departamento

de Química, sección Ingeniería de Procesos de la Universidad Técnica Particular de

Loja y la misma se detalla a continuación:

RECOLECCIÓN Especies briofitas

DETERMINACIÓN HUMEDAD

Lámpara Ultra X

EXTRACCIÓN por arrastre de vapor Técnica: Destilación

ENVASADO Y ALMACENAMIENTO

Frascos ámbar

PROPIEDADES QUÍMICAS

Técnica analítica: CG-MS Columnas: DB5-MS, HP-INNOWAX

Figura 7 Esquema del diseño experimental

(31)

19 2.1.1. Recolección de la materia vegetal.

Las especies fueron colectadas en el páramo El Tiro (3°58´59´´S; 79°8´5´´W) en los

páramos del Parque Nacional Podocarpus. Existe una composición de vegetación

herbácea y arbustiva, característica de estos páramos que inician a una altitud atípica,

inferior a 2900 m s.n.m (Becking, 2004).

Existe una alta diversidad y endemismo de platas en estos ecosistemas que diferencian

a estos páramos de los del resto del país (Aguirre, Kvist, & Sánchez T, 2006).

Los páramos al sur del país, en la zona de Loja, empiezan en ocasiones a altitudes tan

bajas como 2.800 m, lo que está determinado tanto por la humedad como por las

características geológicas de los Andes al sur del Ecuador (Josse, Mena, & Medina,

2000).

2.1.2. Determinación de la Humedad de la plantas.

Se emplearon las hojas de cada una de las especies Breutelia tometosa, Leptoscyphus

gibbosus, Rhacocarpus purpurascens, Syzygiella anomala, Thuidium peruvianum, en estado fresco, el volumen utilizado fue entre 1-2 gramos. Se utilizó la lámpara ULTRA

X y el desecador para determinar la humedad (Figura 8).

El método se realizó por triplicado para obtener resultados más confiables. Una vez

finalizado el procedimiento se realizaron los cálculos respectivos para determinar la

Humedad (Anexo I).

2.1.3. Extracción del aceite esencial.

La extraccion del aceite esencial se llevo a cabo mediante la destilacion por arrastre de

vapor empleando un equipo de destilacion que consta de un tanque de acero inoxidable

y una tapa del mismo material. Se coloco agua hasta la rejilla separadora sobre la cual

Figura 8 Lámpara ULTRA X y desecador

(32)

20

va la materia vegetal. Luego se colocan las mangeras de entrada y salida de agua del

enfriador seguido de esto se expuso a una fuente de calor ubicada en la parte inferior

del tanque.

Este equipo está lleno de agua fría al inicio de la operación y el aceite esencial se va

acumulando, debido a su casi inmiscibilidad (baja capacidad para disolverse) en el agua

y a la diferencia de densidad y viscosidad con el agua. Posee un ramal lateral, por el

cual, el agua es desplazada para favorecer la acumulación del aceite. El vapor

condensado acompañante del aceite esencial y que también se obtiene en el florentino,

es llamado “agua floral”. Posee una pequeña concentración de los compuestos químicos

solubles del aceite esencial, lo cual le otorga un ligero aroma, semejante al aceite

obtenido (Figura 9).

El proceso termina cuando el volumen del aceite esencial acumulado en el florentino no

varíe con el tiempo de extracción. A continuación, el aceite es retirado del florentino y

almacenado en un recipiente y en lugar apropiado.

2.1.3.1. Determinación del Rendimiento.

El rendimiento del aceite esencial se mide por el volumen obtenido y por la cantidad de

materia vegetal utilizada para lo cual se emplea la siguiente ecuación: (Anexo II)

%� =��� �� ∗

Figura 9 Proceso de destilación

(33)

21

2.1.4. Determinación de la composición química.

Cada uno de los aceites esenciales de especies briofitas se analizó por cromatografía

de gases acoplada a espectrometría de masas CG-EM con el propósito de identificar

cualitativa y cuantitativamente los compuestos de cada una de las especies vegetales.

2.1.4.1. Análisis por cromatografía de gases acoplada a espectrometria de masas.

Para el análisis quimico se utilizó el cromatografo de gases serie Agilent 6890N

acoplado a un espectrometro de masas Agilent serie 5973 inert; dotado de un sistema

de datos “software MSD-Chemstation D.01.00 SP1” el cual cuenta con un inyector automatico Split/aplitless serie 7683 y un detector de ionización de llama (FID) provisto

de un generador de hidrógeno “Gas Generator 9150 Packard” (Figura 10).

Se utilizaron dos tipos de columnas capilares una no polar DB-5MS y una polar

HP-INNOWAX de 30m 0.25um, recubiertas la columna polar de 5% Fenilmetilpolisiloxano

y la columna polar de Polietilenglicol.

2.1.4.1.1. Preparación de las muestras

A cada muestra de aceite esencial previo a su análisis cromatográfico, se le realizó un

tratamiento para eliminar completamente el agua que posiblemente quedó al momento

de recolectar el aceite en los recipientes ámbar, con la finalidad de evitar problemas que

puedan afectar al sistema cromatográfico.

Para ello se utilizó sulfato de sodio anhidro (Na2SO4) en cantidades suficientes hasta

observar que el aceite no contenga agua. La preparación de las muestras para las

corridas cromatográficas se realizó en viales previamente etiquetados en donde se

Figura 10 Cromatógrafo de gases

(34)

22

colocaron 990 μl de diclorometano de grado HPLC y 10 μl de aceite esencial,

obteniéndose una concentración al 1% (v/v) (Figura 11).

Cabe recalcar que se añadió aproximadamente 3ml de diclorometano al momento de

recolectar el aceite para evitar la pérdida del mismo.

Se realizó la inyección de hidrocarburos (C1Odecano a C25-pentacosano) conocidos

comercialmente como TPH-6RPM de CHEM SERVICE, que fueron inyectados tanto en

la columna DB-5MS como en HP-INOWAX, ya que el tiempo de retención de los

hidrocarburos nos sirve de base para la determinación de los índices de Kovats e

identificación de cada uno de los compuestos, los Hidrocarburos se inyectaron bajo los

mismos parámetros que los aceites.

2.1.4.1.2. Corrida cromatografía en la columna DB-5MS acoplada a espectrometría de masas.

Las muestras de los aceites esenciales y los hidrocarburos fueron trabajadas con las

mismas condiciones operacionales las mismas que se detallan a continuación: (Figura

12).

Figura 11 Preparación de muestras

(35)

23

2.1.4.1.3. Corrida cromatográfica en la columna HP-INNOWAX acoplado a espectrometría de masas.

En la figura 13 se detallan las condiciones en las que fueron inyectados las muestras y

los hidrocarburos en la columna polar HP-INNOWAX.

HORNO: Programacion de

temperatura

Temperatura inicial: 50C

Tiempo inicial: 3 minutos

Rampa: 3C/min

temperatuta final: 230C

INYECTOR

Modo: Split

Radio de partición: 50:1

Temperatura inicial: 250C

Gas: helio

Volumen de inyección: 1ul

COLUMNA

DB-5MS

Temperatura máxima: 350C

Modo: Flujo constante

Flujo inicial: 0.9 mL/min

Presión inicial nominal: 6.49psi

Velocidad promedio: 35cm/seg

Presión de salida: vacío

DETECTOR

Temperatura: 250 C

Gas: Nitrogeno

Figura 12 Condiciones operacionales para GM-EM en la columna DB5-MS

(36)

24

2.1.4.1.4. Identificación cualitativa y cuantitativa de los compuestos químicos de los aceites esenciales.

Una vez a los compuestos se obtuvieron los cromatogramas los mismos que contienen

una serie de picos, obteniendo los compuestos a identificar.

Seguido de esto se procedió a determinar los índices de retención de Kovats de cada

uno de los picos tiempo de retención de los compuestos, para ello se aplicó la siguiente

ecuación:

HORNO: Programacion de

temperatura

Temperatura inicial: 50C

Tiempo inicial: 3 minutos

Rampa: 3C/min

temperatuta final: 230C

INYECTOR

Modo: Split

Radio de partición: 50:1

Temperatura inicial: 250C

Gas: Helio

Volumen de inyección: 1ul

COLUMNA

HP-INNOWAX

Temperatura máxima: 350C

Modo: Flujo constante

Flujo inicial: 0.9 mL/min

Presión inicial nominal: 6.49psi

Velocidad promedio: 35cm/seg

Presión de salida: vacío

DETECTOR

Temperatura: 250 C

Gas: Nitrogeno

Figura 13 Condiciones operacionales para GM-EM en la columna HP-INOWAX

(37)

25

� = + ∗ �� − ��� − �

Donde:

IR: Índice de retención de Kovats

n: Número de átomos de carbono en el n-alcano

tRX: Tiempo de retención del compuesto analizado, que eluye en el centro de n-alcanos

tRn: Tiempo de retención n-alcano que eluye antes del compuesto analizado.

TRN: Tiempo de retención del n-alcano que eluye después del compuesto analizado.

La identificación de cada uno de los compuestos se realizó mediante la comparación de

los Kovats tanto en la columna polar y la columna no polar, dichos kovats fueron

comparados con la datos de Adams, también se utilizó base de datos como el NIST,

Pherobase, Fracis and Taylor, entre otras; de tal modo que la diferencia entre IK y el

(38)

26 CAPITULO III

(39)

27 3.1. Recolección de la materia vegetal.

Las muestras fueron recolectadas en el sector El Tiro, (Figura 14) en la provincia de

Loja, dichas especies de detallan a continuación: Breutelia tomentosa (5.047Kg) con el

número de colección AB-1102; Leptoscyphus gibbosus (6.045Kg) con el número de

colección AB-1105; Rhacocarpus purpurascens (5.455 Kg) con el número de colección

AB-751; Syzygiella anomala (4.09Kg) con el número de colección AB-245; Thuidium

peruvianum (2.264Kg) con el número de colección AB-1106; Hypnum sp. (0.062 Kg). Todas las especies fueron depositadas en el herbario de la HUTPL colección de briofitas

y líquenes.

Se obtuvo aceite esencial de cinco especies excepto de Hypnum sp.

3.2. Determinación de la Humedad de las especies recolectadas.

En las tablas de la 1 a la 5 se detallan los porcentajes de humedad de cinco especies,

de Hypnum sp. No se determinó la humedad debido a que no hubo presencia de aceite esencial.

Figura 14 . Área de recolección de la especies Breutelia tomentosa, Leptoscyphus gibbosus, Rhacocarpus purpurascens, Syzygiella anomala, Thuidium peruvianum

(40)

28

Tabla. 1 Humedad Relativa de Breutelia tomentosa

Repeticiones Humedad relativa (%)

R1 58.01

58.60

R2 58.70 0,55

R3 59.10

R1: repeticiones de la prueba de humedad relativa X̅: Media aritmética correspondiente a las diferentes

recolecciones, :Desviación estándar.

Fuente: La autora

Tabla. 2 Humedad Relativa deLeptoscyphus gibbosus.

Repeticiones Humedad relativa (%)

R1 88,91

88,40

R2 88,19 0,37

R3 88,39

R1: repeticiones de la prueba de humedad relativa : Media aritmética correspondiente a las diferentes

recolecciones, :Desviación estándar.

Fuente: La autora

Tabla. 3 Humedad Relativa de Rhacocarpus purpurascens.

Repeticiones Humedad relativa (%)

R1 81,91

84,10

R2 82,40 3.49

R3 88,20

R1: repeticiones de la prueba de humedad relativa : Media aritmética correspondiente a las diferentes

recolecciones, :Desviación estándar.

Fuente: La autora

Tabla. 4. Humedad Relativa de Syzygiella anómala.

Repeticiones Humedad relativa (%)

R1 82,49

82,09

R2 81,55 0,48

R3 82,25

R1: repeticiones de la prueba de humedad relativa X̅: Media aritmética correspondiente a las diferentes

recolecciones, :Desviación estándar.

(41)

29

Tabla. 5 Humedad Relativa de Thuidium peruvianum.

Repeticiones Humedad relativa (%)

R1 47,80

45,00

R2 44,10 2.47

R3 43,10

R1: repeticiones de la prueba de humedad relativa X̅: Media aritmética correspondiente a las diferentes

recolecciones, :Desviación estándar.

Fuente: La autora

El valor más alto de humedad es para la especie Leptoscyphus gibbosus con un 88.4%

y el porcentaje menor para la especie Thuidium peruvianum con un 45%. Los

porcentajes de todas las especies son altas debido a que estas especies retienen

humedad porque la necesitan para sobrevivir. Las briofitas cumplen un papel importante

en el ecosistema debido a su estructura morfológica para retener cantidades

considerables de agua y mejorar los contenidos de humedad en el suelo (Miryam 2011).

Los musgos forman microambientes con mucha humedad, ya que retienen el agua como

esponjas y la liberan lentamente. Por esto, muchos microorganismos y pequeños

artrópodos dependen de ellas. Son de gran importancia en el ciclo del agua, ya que

almacenan el agua y también previenen la erosión.

Las formas de vida de los briófitos, que dependen del hábitat, determina la capacidad

de almacenamiento de agua. En general, los briófitos pueden ganar o perder agua

rápidamente y no hay control sobre la pérdida de agua por la sencillez de su estructura,

carencia de cutícula en la mayoría y falta de tejidos especializados. Cuando el medio

circundante está seco, los briófitos pierden rápidamente su contenido hídrico y pueden

llegar hasta un 5-10% y pueden sobrevivir secas en un punto donde no permanece fase

líquida en las células, equivalente a un equilibrio de potencial hídrico de -100 o menos,

la mayoría de las plantas vasculares cuando los tejidos vegetativos pierden el 30% de

su contenido hídrico llegan al punto de marchitamiento (Oliver 1991).

3.3. Rendimiento

En la tabla 6 se detalla el rendimiento de aceite esencial de cada una de las especies

(42)

30 Tabla. 6. Rendimiento de los aceites esenciales

Nombre

Peso materia destilada Volumen de aceite

B. tomentosa 1.500 Kg N.P

L. gibbosus. 4.029 Kg N.P

R. purpurascens.

S. anomala. T. peruvianum.

Hypnum sp.

4.029 Kg

4.874 Kg

3.446 Kg

0.062 Kg

N.P

N.P

N.P

N.N

Nombre: especies. N.P: No fue posible medir. N.N: No fue posible recolectar.

Fuente: La autora

Según los datos obtenidos no se pudo determinar el rendimiento del aceite esencial de

las especies Breutelia tomentosa, Leptoscyphus gibbosus, Rhacocarpus purpurascens,

Syzygiella anomala, Thuidium peruvianum debido a que se determinaron pequeñas cantidades de aceite imposibles de recolectar, pero las mismas que fueron suficientes

para realizar el proceso de cromatografía de gases. Mientras que de la especie Hypnum

sp no se consiguió aceite esencial.

La variación en el rendimiento de aceites esenciales es influenciada por factores tales

como el origen, especie y órgano de la planta, condiciones climáticas y de crecimiento

(temperatura, fertilizantes, tierra de cultivo), así como el método de extracción y la forma

de almacenamiento del aceite (Pumaylle et al., 2012).

Según (Rodas, 2012) un menor rendimiento en la producción del aceite esencial se da

cuando se cultiva a una mayor altitud. Esto resulta importante ya que las especies

estudiadas crecen con mayor facilidad en lugares altos como los páramos.

3.4. Composición Química

3.4.1. Composición química del aceite esencial de Breutelia Tomentosa.

En la figura 15 se muestra el perfil cromatográfico obtenido de la columna no polar

DB5-MS, mientras que en la figura 16 se indica el cromatograma de la columna polar

(43)

31

Figura 15 Perfil cromatográfico del aceite esencial de Breutelia tomentosa obtenido en la columna DB-5MS

Fuente: Investigación Experimental

Figura 16 Perfil cromatográfico del aceite esencial de Breutelia tomentosa obtenido en la columna HP-INNOWAX

Fuente: Investigación Experimental

En la Tabla 7, se detallan los compuestos químicos que se identificaron en el aceite

esencial de Breutelia tomentosa en las columnas DB-5ms y HP-INNOWAX; los mismos

que están dispuestos de acuerdo al orden de elución en la columna DB-5ms, resaltando

los compuestos con mayores áreas, también se indican los IR reportados en la literatura.

Int

en

si

da

d

re

la

ti

va

m/z

Int

en

si

da

d

re

la

ti

va

(44)

32 Tabla. 7 Composición química del aceite esencial de Breutelia tomentosa

COMPUESTOS

DB5 – MS HPINOWAX - MS

IR cal IR ref

% de Cantidad Relativaa

IR cal IR ref

% de Cantidad Relativaa

BT1 BT1

1 4-Octen-3-one 940 948c 0,16 ……. ……. …….

2 Isolongifolene, 9,10-dehydro- 1356 1361b 1,38 ……. ……. …….

3 Isocomene α 1376 1387b 0,54 ……. ……. …….

4 Elemene > 1383 1389b 1,62 1584 1597p 5,72

5 trans-α-Bergamotene 1427 1432b 1,98 ……. ……. …….

6 cis-Thujopsene 1443 1429b 6,15 ……. ……. …….

7 Germacrene-D 1459 1480d 3,60 ……. ……. …….

8 Selinene > 1478 1489b 5,66 1666 1681q 4,43

9 Selinene α> 1485 1498b 6,69 1711 1722r 2,25

10 Valencene 1508 1496b 5,51 1767 1751s 6,14

11 Epizonarene 1526 1530e 8,68 ……. ……. …….

12 -Selinene 1552 1530f

0,85 1714 1697t

2,08

13 Zierone 1568 1575b 3,35 ……. ……. …….

14 Geranyl isovalerate 1579 1582g 6,80 ……. ……. …….

15 Turmerone ar dihydro 1606 1595b 3,11 ……. ……. …….

16 Khusimone 1617 1606h 3,77 ……. ……. …….

17 Selina-3,11-dien-6α-ol 1638 1644b 3,08 ……. ……. …….

18 α-Cadinol 1648 1653i 3,12 2230 2225u 2,12

19 Cyclotetradecane 1671 1669j 3,71 ……. ……. …….

20 No identificado 1618 ……. 1,90 ……. ……. …….

21 Heptadecene-1 1685 1696k 1,72 ……. ……. …….

22 Hexadecanal 1716 1792l 2,53 2133 2135v 1,76

23 No identificado 1780 ……. 1,76 ……. ……. …….

24 No identificado 1818 ……. 1,21 ……. ……. …….

25 Hexahydrofarnesyl acetone 1841 1847m 3,32 2125 2131w 6,94

(45)

33

27 Hexadecanol-1 1883 1880n 3,57 2385 2364x 7,25

28 Rimuene 1913 1896b 2,14 ……. ……. …….

29 Phytol 2107 2103o 3,04 2615 2611y 3,85

30 Nonanal ……. ……. ……. 1394 1400z 1,23

31 Decanal ……. ……. ……. 1498 1483ba

2,13

32 α-Bergamotene ……. ……. ……. 1579 1572bb 2,08

33 No identificado ……. ……. ……. 1604 ……. 1,07

34 α-Cedrene ……. ……. ……. 1616 1600bc 3,97

35 No identificado ……. ……. ……. ……. ……. 2,01

36 α-Zingiberene ……. ……. ……. 1628 1681bd 3,44

37 No identificado ……. ……. ……. ……. ……. 1,03

38 -Muurolene ……. ……. ……. 1721 1725be 5,23

39 (Z,E)-α-Farnesene ……. ……. ……. 1727 1737bf 2,12

40 No identificado ……. ……. ……. 1745 ……. 1,17

41 δ- Cadinene ……. ……. ……. 1749 1746bg 3,13

42 L-calamenene ……. ……. ……. 1825 1840bh 2,56

43 Geraniol butyrate ……. ……. ……. 1882 1901bi 6,34

44 Tetradecanal ……. ……. ……. 1921 1933bj 1,41

45 No identificado ……. ……. ……. 1977 ……. 2,43

46 No identificado ……. ……. ……. 1992 ……. 1,63

47 No identificado ……. ……. ……. 2011 ……. 2,39

48 Pentadecanal- ……. ……. ……. 2027 2041bj 3,68

49 Nerolidol ……. ……. ……. 2047 2042bk 1,50

50 No identificado ……. ……. ……. 2052 …… 1,38

51 No identificado ……. ……. ……. 2179 …… 1,77

52 α-Muurolol ……. ……. ……. 2198 2180i 2,08

53 No identificado ……. ……. ……. 2204 …… 1,58

54 No identificado ……. ……. ……. 2239 …… 1,02

55 No identificado ……. ……. ……. 2247 ……. 1,70

Figure

Figura  6 Muestra botánica de Thuidium peruvianum  Fuente: La autora

Figura 6

Muestra botánica de Thuidium peruvianum Fuente: La autora p.28
Figura    15  Perfil  cromatográfico  del  aceite  esencial  de  Breutelia  tomentosa  obtenido  en  la  columna DB-5MS

Figura 15

Perfil cromatográfico del aceite esencial de Breutelia tomentosa obtenido en la columna DB-5MS p.43
Figura    16  Perfil  cromatográfico  del  aceite  esencial  de  Breutelia  tomentosa  obtenido  en  la  columna HP-INNOWAX

Figura 16

Perfil cromatográfico del aceite esencial de Breutelia tomentosa obtenido en la columna HP-INNOWAX p.43
Figura  20 Perfil cromatográfico del aceite esencial de Leptoscyphus gibbosus obtenido en la  columna HP-INNOWAX

Figura 20

Perfil cromatográfico del aceite esencial de Leptoscyphus gibbosus obtenido en la columna HP-INNOWAX p.49
Figura  24 Perfil cromatográfico del aceite esencial de Rhacocarpus purpurascens obtenido en  la columna HP-INNOWAX

Figura 24

Perfil cromatográfico del aceite esencial de Rhacocarpus purpurascens obtenido en la columna HP-INNOWAX p.54
Figura  35. Compuesto no identificado en Breutelia tomentosa en la columna DB5-MS  Fuente: La autora  238 (1,91); 218 (2,62); 204 (2,01); 182 (4,47), 165 (3,81); 154 (6,86); 137 (9,63); 123  (15,52); 111  (18,10); 110  (18,37);  109  (33,47);  97  (33,01);

Figura 35.

Compuesto no identificado en Breutelia tomentosa en la columna DB5-MS Fuente: La autora 238 (1,91); 218 (2,62); 204 (2,01); 182 (4,47), 165 (3,81); 154 (6,86); 137 (9,63); 123 (15,52); 111 (18,10); 110 (18,37); 109 (33,47); 97 (33,01); p.69
Figura  40. Compuesto no identificado en Breutelia tomentosa en la columna HP-INNOWAX  Fuente: La autora  3 0 4 0 5 0 6 0 7 0 8 0 9 0 1 0 0 1 1 0 1 2 0 1 3 0 1 4 0 1 5 0 1 6 0 1 7 0 1 8 0 1 9 0 2 0 0 2 1 001 0 0 02 0 0 03 0 0 04 0 0 05 0 0 06 0 0 07 0 0 08

Figura 40.

Compuesto no identificado en Breutelia tomentosa en la columna HP-INNOWAX Fuente: La autora 3 0 4 0 5 0 6 0 7 0 8 0 9 0 1 0 0 1 1 0 1 2 0 1 3 0 1 4 0 1 5 0 1 6 0 1 7 0 1 8 0 1 9 0 2 0 0 2 1 001 0 0 02 0 0 03 0 0 04 0 0 05 0 0 06 0 0 07 0 0 08 p.72
Figura  42 Compuesto no identificado en Breutelia tomentosa en la columna HP-INNOWAX  Fuente: La autora 3 0 4 0 5 0 6 0 7 0 8 0 9 0 1 0 0 1 1 0 1 2 0 1 3 0 1 4 0 1 5 0 1 6 0 1 7 0 1 8 0 1 9 0 2 0 0 2 1 001000200030004000500060007000800090001000011000120001

Figura 42

Compuesto no identificado en Breutelia tomentosa en la columna HP-INNOWAX Fuente: La autora 3 0 4 0 5 0 6 0 7 0 8 0 9 0 1 0 0 1 1 0 1 2 0 1 3 0 1 4 0 1 5 0 1 6 0 1 7 0 1 8 0 1 9 0 2 0 0 2 1 001000200030004000500060007000800090001000011000120001 p.73
Figura  43 Compuesto no identificado en Breutelia tomentosa en la columna HP-INNOWAX  Fuente: La autora 220 (1.58); 208 (2.42); 198 (1.82);  189 (1.28); 180 (5.98); 165 (2.72); 152 (5.27); 137  (8.76);  123  (19.28);  110  (25.36);  109  (29.94);  97  (34.

Figura 43

Compuesto no identificado en Breutelia tomentosa en la columna HP-INNOWAX Fuente: La autora 220 (1.58); 208 (2.42); 198 (1.82); 189 (1.28); 180 (5.98); 165 (2.72); 152 (5.27); 137 (8.76); 123 (19.28); 110 (25.36); 109 (29.94); 97 (34. p.74
Figura  44 Compuesto no identificado en Breutelia tomentosa en la columna HP-INNOWAX  Fuente: La autora  3 0 4 0 5 0 6 0 7 0 8 0 9 0 1 0 0 1 1 0 1 2 0 1 3 0 1 4 0 1 5 0 1 6 0 1 7 0 1 8 0 1 9 0 2 0 0 2 1 0 2 2 0 2 3 002 00 04 00 06 00 08 00 01 00 001 20 001

Figura 44

Compuesto no identificado en Breutelia tomentosa en la columna HP-INNOWAX Fuente: La autora 3 0 4 0 5 0 6 0 7 0 8 0 9 0 1 0 0 1 1 0 1 2 0 1 3 0 1 4 0 1 5 0 1 6 0 1 7 0 1 8 0 1 9 0 2 0 0 2 1 0 2 2 0 2 3 002 00 04 00 06 00 08 00 01 00 001 20 001 p.74
Figura  45 Compuesto no identificado en Breutelia tomentosa en la columna HP-INNOWAX  Fuente: La autora

Figura 45

Compuesto no identificado en Breutelia tomentosa en la columna HP-INNOWAX Fuente: La autora p.75
Figura  47 Compuesto no identificado en Breutelia tomentosa en la columna HP-INNOWAX  Fuente: La autora

Figura 47

Compuesto no identificado en Breutelia tomentosa en la columna HP-INNOWAX Fuente: La autora p.76
Figura  48 Compuesto no identificado en Breutelia tomentosa en la columna HP-INNOWAX  Fuente: La autora  4 0 6 0 8 0 1 0 0 1 2 0 1 4 0 1 6 0 1 8 0 2 0 0 2 2 0 2 4 0 2 6 002 0 0 04 0 0 06 0 0 08 0 0 01 0 0 0 01 2 0 0 01 4 0 0 01 6 0 0 01 8 0 0 02 0 0 0 02 2

Figura 48

Compuesto no identificado en Breutelia tomentosa en la columna HP-INNOWAX Fuente: La autora 4 0 6 0 8 0 1 0 0 1 2 0 1 4 0 1 6 0 1 8 0 2 0 0 2 2 0 2 4 0 2 6 002 0 0 04 0 0 06 0 0 08 0 0 01 0 0 0 01 2 0 0 01 4 0 0 01 6 0 0 01 8 0 0 02 0 0 0 02 2 p.76
Figura  49 Compuesto no identificado en Breutelia tomentosa en la columna HP-INNOWAX  Fuente: La autora  256 (1.47); 236 (5.55); 218 (10.10); 208 (5.97); 198 (3.32); 180 (9.27); 165 (5.67); 152  (7.43); 137 (13.44); 125 (39.49); 124 (85.96); 111 (41.78); 1

Figura 49

Compuesto no identificado en Breutelia tomentosa en la columna HP-INNOWAX Fuente: La autora 256 (1.47); 236 (5.55); 218 (10.10); 208 (5.97); 198 (3.32); 180 (9.27); 165 (5.67); 152 (7.43); 137 (13.44); 125 (39.49); 124 (85.96); 111 (41.78); 1 p.77
Figura  51 Compuesto no identificado en Breutelia tomentosa en la columna HP-INNOWAX  Fuente: La autora

Figura 51

Compuesto no identificado en Breutelia tomentosa en la columna HP-INNOWAX Fuente: La autora p.78
Figura  53 Compuesto no identificado en Breutelia tomentosa en la columna HP-INNOWAX  Fuente: La autora  272 (1.52); 257 (3.39); 243 (1.88); 232 (2.11); 218 (4.15); 202 (3.74); 187 (9.43);  175  (5.54); 161 (8.71); 147 (15.09); 133 (16.54); 129 (47.69); 12

Figura 53

Compuesto no identificado en Breutelia tomentosa en la columna HP-INNOWAX Fuente: La autora 272 (1.52); 257 (3.39); 243 (1.88); 232 (2.11); 218 (4.15); 202 (3.74); 187 (9.43); 175 (5.54); 161 (8.71); 147 (15.09); 133 (16.54); 129 (47.69); 12 p.79
Figura  54 Compuesto no identificado en Breutelia tomentosa en la columna HP-INNOWAX  Fuente: La autora  4 0 6 0 8 0 1 0 0 1 2 0 1 4 0 1 6 0 1 8 0 2 0 0 2 2 0 2 4 0 2 6 001 0 0 02 0 0 03 0 0 04 0 0 05 0 0 06 0 0 07 0 0 08 0 0 09 0 0 01 0 0 0 0m/z - - >A

Figura 54

Compuesto no identificado en Breutelia tomentosa en la columna HP-INNOWAX Fuente: La autora 4 0 6 0 8 0 1 0 0 1 2 0 1 4 0 1 6 0 1 8 0 2 0 0 2 2 0 2 4 0 2 6 001 0 0 02 0 0 03 0 0 04 0 0 05 0 0 06 0 0 07 0 0 08 0 0 09 0 0 01 0 0 0 0m/z - - >A p.79
Figura  55 Compuesto no identificado en Breutelia tomentosa en la columna HP-INNOWAX  Fuente: La autora

Figura 55

Compuesto no identificado en Breutelia tomentosa en la columna HP-INNOWAX Fuente: La autora p.80
Figura  62 Compuesto no identificado en Leptoscyphus gibbosus en la columna HP-INNOWAX  Fuente: La autora  234 (2.72); 204 (73.08); 189 (100.00), 175 (10.76); 161 (64.78); 149 (42.94); 135 (26.95);  133 (33.60); 125 (43.77), 123 (36.53); 122 (31.36); 121 (

Figura 62

Compuesto no identificado en Leptoscyphus gibbosus en la columna HP-INNOWAX Fuente: La autora 234 (2.72); 204 (73.08); 189 (100.00), 175 (10.76); 161 (64.78); 149 (42.94); 135 (26.95); 133 (33.60); 125 (43.77), 123 (36.53); 122 (31.36); 121 ( p.84
Figura  63 Compuesto no identificado en Leptoscyphus gibbosus en la columna HP-INNOWAX  Fuente: La autora 30 4 0 5 0 6 0 7 0 8 0 9 0 1 0 0 1 1 0 1 2 0 1 3 0 1 4 0 1 5 0 1 6 0 1 7 0 1 8 0 1 9 0 2 0 0 2 1 0 2 2 0 2 3 00500100015002000250030003500400045005000

Figura 63

Compuesto no identificado en Leptoscyphus gibbosus en la columna HP-INNOWAX Fuente: La autora 30 4 0 5 0 6 0 7 0 8 0 9 0 1 0 0 1 1 0 1 2 0 1 3 0 1 4 0 1 5 0 1 6 0 1 7 0 1 8 0 1 9 0 2 0 0 2 1 0 2 2 0 2 3 00500100015002000250030003500400045005000 p.84
Figura  64 Compuesto no identificado en Leptoscyphus gibbosus en la columna HP-INNOWAX  Fuente: La autora

Figura 64

Compuesto no identificado en Leptoscyphus gibbosus en la columna HP-INNOWAX Fuente: La autora p.85
Figura  65 Compuesto no identificado en Leptoscyphus gibbosus en la columna HP-INNOWAX  Fuente: La autora 3 0 4 0 5 0 6 0 7 0 8 0 9 0 1 0 0 1 1 0 1 2 0 1 3 0 1 4 0 1 5 0 1 6 0 1 7 0 1 8 0 1 9 0050010001500200025003000350040004500500055006000650070007500800

Figura 65

Compuesto no identificado en Leptoscyphus gibbosus en la columna HP-INNOWAX Fuente: La autora 3 0 4 0 5 0 6 0 7 0 8 0 9 0 1 0 0 1 1 0 1 2 0 1 3 0 1 4 0 1 5 0 1 6 0 1 7 0 1 8 0 1 9 0050010001500200025003000350040004500500055006000650070007500800 p.85
Figura  66 Compuesto no identificado en Leptoscyphus gibbosus en la columna HP-INNOWAX  Fuente: La autora

Figura 66

Compuesto no identificado en Leptoscyphus gibbosus en la columna HP-INNOWAX Fuente: La autora p.86
Figura  71Compuesto no identificado en Rhacocarpus purpuracens en la columna HP- HP-INNOWAX  Fuente: La autora  308 (0.53); 222 (8.32); 204 (9.83); 179 (4.88); 161 (11.98); 135 (11.17); 119 (63.29); 109  (42.44);  107  (21.99);  96  (38.55);  95  (100.00);

Figura 71Compuesto

no identificado en Rhacocarpus purpuracens en la columna HP- HP-INNOWAX Fuente: La autora 308 (0.53); 222 (8.32); 204 (9.83); 179 (4.88); 161 (11.98); 135 (11.17); 119 (63.29); 109 (42.44); 107 (21.99); 96 (38.55); 95 (100.00); p.89
Figura  72 Compuesto no identificado en Rhacocarpus purpuracens en la columna HP- HP-INNOWAX  Fuente: La autora  4 0 6 0 8 0 1 0 0 1 2 0 1 4 0 1 6 0 1 8 0 2 0 0 2 2 0 2 4 0 2 6 0 2 8 0 3 0 0050001000015000200002500030000350004000045000500005500060000650007

Figura 72

Compuesto no identificado en Rhacocarpus purpuracens en la columna HP- HP-INNOWAX Fuente: La autora 4 0 6 0 8 0 1 0 0 1 2 0 1 4 0 1 6 0 1 8 0 2 0 0 2 2 0 2 4 0 2 6 0 2 8 0 3 0 0050001000015000200002500030000350004000045000500005500060000650007 p.89
Figura  74 Compuesto no identificado en Syzygiella anomala  en la columna DB5-MS  Fuente: La autora  4 0 6 0 8 0 1 0 0 1 2 0 1 4 0 1 6 0 1 8 0 2 0 0 2 2 0 2 4 0 2 6 002 0 0 0 04 0 0 0 06 0 0 0 08 0 0 0 01 0 0 0 0 01 2 0 0 0 01 4 0 0 0 01 6 0 0 0 01 8 0 0 0

Figura 74

Compuesto no identificado en Syzygiella anomala en la columna DB5-MS Fuente: La autora 4 0 6 0 8 0 1 0 0 1 2 0 1 4 0 1 6 0 1 8 0 2 0 0 2 2 0 2 4 0 2 6 002 0 0 0 04 0 0 0 06 0 0 0 08 0 0 0 01 0 0 0 0 01 2 0 0 0 01 4 0 0 0 01 6 0 0 0 01 8 0 0 0 p.90
Figura  76 Compuesto no identificado en Syzygiella anomala  en la columna DB5-MS  Fuente: La autora 3 0 4 0 5 0 6 0 7 0 8 0 9 0 1 0 0 1 1 0 1 2 0 1 3 0 1 4 0 1 5 0 1 6 0 1 7 0 1 8 0 1 9 0 2 0 0 2 1 005 0 0 01 0 0 0 01 5 0 0 02 0 0 0 02 5 0 0 03 0 0 0 03 5

Figura 76

Compuesto no identificado en Syzygiella anomala en la columna DB5-MS Fuente: La autora 3 0 4 0 5 0 6 0 7 0 8 0 9 0 1 0 0 1 1 0 1 2 0 1 3 0 1 4 0 1 5 0 1 6 0 1 7 0 1 8 0 1 9 0 2 0 0 2 1 005 0 0 01 0 0 0 01 5 0 0 02 0 0 0 02 5 0 0 03 0 0 0 03 5 p.91
Figura  79 Compuesto no identificado en Thuidium peruvianum  en la columna DB5-MS  Fuente: La autora 3 0 4 0 5 0 6 0 7 0 8 0 9 0 1 0 0 1 1 0 1 2 0 1 3 0 1 4 0 1 5 0 1 6 0 1 7 0 1 8 0 1 9 0 2 0 0 2 1 0050010001500200025003000350040004500500055006000m/z- - &

Figura 79

Compuesto no identificado en Thuidium peruvianum en la columna DB5-MS Fuente: La autora 3 0 4 0 5 0 6 0 7 0 8 0 9 0 1 0 0 1 1 0 1 2 0 1 3 0 1 4 0 1 5 0 1 6 0 1 7 0 1 8 0 1 9 0 2 0 0 2 1 0050010001500200025003000350040004500500055006000m/z- - & p.93
Figura  80 Compuesto no identificado en Thuidium peruvianum  en la columna DB5-MS  Fuente: La autora

Figura 80

Compuesto no identificado en Thuidium peruvianum en la columna DB5-MS Fuente: La autora p.94
Figura  84 Compuesto no identificado en Thuidium peruvianum  en la columna HP-INNOWAX  Fuente: La autora  218 (34.41); 203 (10.44); 189 (9.50); 176 (11.05); 161 (11.51); 150 (36.24); 147 (29.33);  133 (24.19); 119 (41.93); 108 (26.96); 107 (41.75); 106 (48

Figura 84

Compuesto no identificado en Thuidium peruvianum en la columna HP-INNOWAX Fuente: La autora 218 (34.41); 203 (10.44); 189 (9.50); 176 (11.05); 161 (11.51); 150 (36.24); 147 (29.33); 133 (24.19); 119 (41.93); 108 (26.96); 107 (41.75); 106 (48 p.96