Efecto in vitro de Trichoderma viride, Trichoderma atroviride y Trichoderma harzianum nativas sobre la germinación y crecimiento de Pochonia chlamydosporia

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(1)Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO. AC I. Ó. N. FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS. ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE MICROBIOLOGÍA Y. DE. IN. FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. M UN. IC. PARASITOLOGÍA. Efecto in vitro de Trichoderma viride, Trichoderma atroviride y Trichoderma nativas sobre. y crecimiento de. Pochonia. TESIS. PARA OBTENER EL TÍTULO DE: BIÓLOGO – MICROBIÓLOGO. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI. ST. chlamydosporia.. la germinación. EM AS. harzianum. AUTOR: Br. CERNA CHÁVEZ, LEISY MARGOT TRUJILLO – PERÚ. 2012. 9 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(2) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AUTORIDADES DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE. M UN. IC. AC I. Ó. N. TRUJILLO. Dr. Orlando Velásquez Benites. ÁT. IC. A. Y. CO. Rector de la Universidad Nacional de Trujillo. RM. Dra. Vilma Méndez Gil. DE. IN. FO. Vice – Rector Académico de la Universidad Nacional de Trujillo. EM AS. Dra. Flor Marleny Luna Victoria Mori. Dr. Regné Cortez Lara Secretario General de la Universidad Nacional de Trujillo. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI. ST. Vice – Rector Administrativo de la Universidad Nacional de Trujillo. i.. 10 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(3) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AUTORIDADES DE LA FACULTAD DE CIENCIAS. M UN. IC. AC I. Ó. N. BIOLOGICAS. CO. Dr. Hermes Escalante Añorga. IN. FO. RM. ÁT. IC. A. Y. Decano de la Facultad de Ciencias Biológicas. DE. Dr. César Jara Campos. Ms.C Pedro Alvarado Salinas Director de la Escuela Académico Profesional de Microbiología y Parasitología. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI. ST. EM AS. Secretario de la Facultad de Ciencias Biológicas. ii.. 11 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(4) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. PRESENTACIÓN. AC I. Ó. N. SEÑORES MIEMBROS DEL JURADO:. En cumplimiento con las disposiciones reglamentarias de la escuela académico la. M UN. IC. profesional de Microbiología y Parasitología de la Facultad de Ciencias Biológicas de. Universidad Nacional de Trujillo, pongo a vuestra consideración y claro discernimiento el. CO. informe de tesis titulado: Efecto in vitro de Trichoderma viride, Trichoderma. chlamydosporia,. realizado en el laboratorio de Fitopatología del. IC. de Pochonia. A. Y. atroviride y Trichoderma harzianum nativas sobre la germinación y crecimiento. RM. ÁT. departamento de Microbiología y Parasitología en la Universidad Nacional de Trujillo (Av.. FO. Juan Pablo II s/n)- Trujillo - La Libertad.. IN. Esperando que vuestro criterio sea de comprensión por errores u omisiones cometidos. EM AS. Biólogo- Microbiólogo.. DE. en la elaboración del presente trabajo, me someto a vuestro dictamen para optar el titulo de. Br. Cerna Chávez, Leisy Margot. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI. ST. Trujillo, Septiembre del 2012. iii.. 12 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(5) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DEL ASESOR. Ó. N. El que suscribe, Ms.C Juan Héctor Wilson Krugg, asesor de la presente tesis titulada:. AC I. Efecto in vitro de Trichoderma viride, Trichoderma atroviride y Trichoderma harzianum. CO. M UN. IC. nativas sobre la germinación y crecimiento de Pochonia chlamydosporia.. Declara que ésta investigación ha sido ejecutada de conformidad con su. RM. ÁT. IC. A. Y. correspondiente proyecto y con las debidas orientaciones brindadas al tesista.. FO. Respecto al informe, éste ha sido revisado y acoge las observaciones y sugerencias. IN. pertinentes, por lo que autorizo a la Bachiller CERNA CHAVEZ LEISY MARGOT,. M.Cs. Juan Héctor Wilson Krugg. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI. ST. EM AS. DE. continuar con los procedimientos según sus fines.. iv.. 13 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(6) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. CO. M UN. IC. AC I. Ó. N. MIEMBROS DEL JURADO. IC. A. Y. Ms.C. Gerardo Alayo Espinoza. DE. IN. FO. RM. ÁT. PRESIDENTE. SECRETARIO. Ms.C Juan Héctor Wilson Krugg VOCAL. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI. ST. EM AS. Ms.C. Eduardo Muñoz Ganoza. v.. 14 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(7) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. APROBACIÓN. Ó. N. Los profesores que suscriben, Miembros del Jurado Examinador, declaran que la. AC I. presente tesis ha cumplido con los requerimientos formales y fundamentales, siendo. Y. CO. M UN. IC. APROBADO POR UNANIMIDAD.. IC. A. Ms.C. Gerardo Alayo Espinoza. DE. IN. FO. RM. ÁT. PRESIDENTE. SECRETARIO. Ms.C Juan Héctor Wilson Krugg VOCAL. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI. ST. EM AS. Ms.C. Eduardo Muñoz Ganoza. vi.. 15 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(8) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DEDICATORIA. Ó. N. A DIOS, nuestro señor, el ser supremo. AC I. que nunca me abandono y me ayudo a. IC. superar cada reto difícil durante toda. M UN. mi carrera,. CO. A mis amados padres, WILFREDO y TERESA, por su inmenso amor,. A. Y. comprensión, paciencia y por creer. ÁT. IC. siempre en mi, por su apoyo que. GRACIAS. IN. FO. RM. me dieron y siempre me darán.. DE. A mis queridos hermanos (Cinthia, Bryan. EM AS. y Adny) por darme su apoyo constante. y sobretodo por su paciencia para conmigo. ST. y por su valiosa compañía a lo largo de. DE. SI. mis años de carrera. GRACIAS. N. A esa persona tan especial que siempre. IO. ha estado a mi lado apoyándome y. CC. acompañando en los buenos y malos. DI. RE. momentos durante toda mi carrera, GRACIAS. I.V.G.P. vii. 16 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(9) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AGRADECIMIENTO. Ó. N. Quiero agradecer en forma muy especial, profunda y sinceramente a mi asesor, Ms.C. AC I. Juan Hector Wilson Krugg, por su apoyo inmenso y desinteresado hacia mi persona,. M UN. IC. su amistad incondicional, por haberme brindado su tiempo, haberme escuchado y por todos sus consejos que siempre me dió, por ser un gran apoyo como amigo y. CO. asesor, además por contribuir inmensamente con sus conocimientos y enseñanzas a la. ÁT. IC. A. Y. realización de este proyecto.. RM. Agradezco también a todas aquellas personas que me apoyaron en la realización de. FO. este proyecto,y de manera especial al profesor Miguel Muñoz y a todos mis. DE. IN. compañeros tesistas que compartimos juntos horas de trabajo, a todos por apoyarme. EM AS. incondicionalmente MUCHAS GRACIAS. A toda mi familia, por su amor, sus consejos, sus risas, que son mi mayor fortaleza. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI. ST. y mi mayor tesoro, los amo. viii.. 17 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(10) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. RESUMEN. N. Se determinó efecto “in vitro” de T. viride, T. atroviride y T. harzianum nativos. AC I. Ó. sobre la germinación y crecimiento de P. chlamydosporia. Para ello se empleó la. técnica de cultivo dual, que consistió en enfrentar a T. viride, T. atroviride y T.. M UN. IC. harzianum con P. chlamydosporia en Agar (PDA) y se evaluó microscópicamente las diferentes formas de micoparasitismo. También se determinó el porcentaje de. CO. germinación conidial de P. chlamydosporia frente a las conidias de T. viride, T. atroviride y T. harzianum nativas, enfrentándose para esto, una suspensión de P. de 103con/ml en un frasco como control. Y. chlamydosporia. y en el otro. una. IC. A. suspensión de T. viride, T. atroviride y T. harzianum con un ml de P. chlamydosporia. ÁT. a una concentración de 103con/ml respectivamente cada uno; realizándose la lectura a. RM. las 24 horas de incubación. Se encontró además que T. viride, T. atroviride no. FO. presentan efecto antagonista sobre el crecimiento in vitro de P. chlamydosporia,. IN. mientras que T. harzianum tiene efecto antagónico tipo uno sobre el crecimiento in. DE. vitro de P. chlamydosporia observándose microscópicamente enrollamiento, adherencia, deformación de la hifa, fragmentación, penetración, vacuolización y. EM AS. estrangulamiento. En relación a la germinación, P. chlamydosporia disminuye la germinación de sus conidias en presencia de T. viride, T. atroviride y T. harzianum. ST. nativas; hasta en un 65%; 57.5% y 46.6% respectivamente en comparación al control,. SI. presentando un porcentaje de inhibición estadísticamente diferente. Se concluye que. DE. T. harzianum nativa tiene un efecto antagónico tipo 1 sobre el crecimiento de P. chlamydosporia y que T. viride, T. atroviride disminuyen la germinación de P.. IO. N. chlamydosporia.. DI. RE. CC. . Palabras clave: Antagonismo, cultivo dual, microcultivo, inhibición.. ix. 18 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(11) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. INDICE. N. Pagina. AC I. Ó. AUTORIDADES DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO…….….....i. M UN. IC. AUTORIDADES DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS……………. ... ii. CO. PRESENTACIÓN………………………………………………………………….. ….. iii. A. Y. DEL ASESOR………………………………………………………………………..... . iv. ÁT. IC. MIEMBROS DEL JURADO …………………………………………………………... v. RM. APROBACIÓN ……………………………………………………………………….... vi. IN. FO. AGRADECIMIENTO………………………………………………………………….. vii. DE. DEDICATORIA ……………………………………………………………………….viii. EM AS. RESUMEN……………………………………………………………………….............ix. ST. INDICE……………………………………………………………………….... ……… x. DE. SI. I. INTRODUCCCIÓN………………………………………………………………….. 1. IO. N. II. MATERIAL Y MÉTODOS ………………………………………………………… 5. DI. RE. CC. 1. Material Biológico ……………………………………………………………….. 5 2. Procedimiento …………………………………………………………………… 6 2.1. Determinación y obtención de cultivo joven de T.……………………. 7. viride, T. atroviride, T. harzianum y P. chlamydosporia. 19 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(12) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 2.2. Evaluación del efecto “in vitro” de T. viride T.,………………………. 8. N. atroviride, T.arzianum sobre la germinación y. IC. AC I. Ó. el crecimiento de P.chlamydosporia.. M UN. 3. Evaluación del antagonismo a nivel microscópico………………………. 9. Y. IC. A. T. viride , T. atroviride y T. harzianum sobre. CO. 4. Evaluación del efecto de los cultivos nativos de... ………………………..10. ÁT. la germinación P. chlamydosporia.. FO. RM. a. Propagación de T. viride T. atroviride …………………………………10. DE. IN. y T harzianum y P. chlamydosporia. EM AS. b. Estandarización de los inóculos de T. viride,......................................... 11. ST. T. atroviride y T. harzianum y P. chlamydosporia. SI. c. Efecto de T. viride T. atroviride y T. harzianum ………………………11. N. DE. sobre la germinación conidial de P. chlamydosporia. DI. RE. CC. IO. 5. Análisis de datos……………………………………………………………12. ix.. 20 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(13) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. III.RESULTADOS……………………………………………………………………. 13. Ó. N. IV. DISCUSIÓN………………………………………………………………………....17. AC I. V. CONCLUSIÓNES………………………………………………………………… 22. M UN. IC. VI. RECOMENDACIONES…………………………………………………………… 23. CO. VII. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS ……………………………………………. 24. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI. ST. EM AS. DE. IN. FO. RM. ÁT. IC. A. Y. ANEXOS. xii. 21 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(14) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. I.. INTRODUCCIÓN. Ó. N. Uno de los principales problemas que enfrenta la agricultura es la presencia de. AC I. plagas, y enfermedades vegetales provocadas por diversos microorganismos; tales. M UN. IC. como bacterias, algas, virus, nematodos, hongos, etc1; es por ello que se busca la utilización de todo un conjunto de métodos integrados de control dentro de los cuales. CO. se hallan controles culturales, físicos, químicos y biológicos, etc.; usando el más. IC. A. Y. adecuado según sea en problema a tratar 2.. RM. ÁT. Actualmente en contraste con el control de enfermedades de las plantas. FO. mediante el uso de pesticidas, se ha incrementado el uso del control biológico para. IN. controlar patógenos que habitan en el suelo. Este control abarca el fortalecimiento. DE. del control natural, la introducción de especies no nativas y el uso de plaguicidas. EM AS. derivados de distintos organismos 3. En este tipo de control se aprovecha las características alimenticias de un organismo, en contra de otro, el cual les servirá de. ST. alimento. El control puede darse intercepas (individuos de un mismo género y. DE. SI. especie con algunas modificaciones genéticas) o interespecies (individuos de. N. diferentes especies). Los organismos más comúnmente utilizados en la práctica para. IO. prevenir, repeler, eliminar o bien reducir el daño causado por las plagas son bacterias,. DI. RE. CC. insectos, virus, parasitoides, hongos, etc 4, 5, 6, 7, 8.. Entre los microorganismos de naturaleza fúngica de más amplio uso contra especies de invertebrados plaga en la agricultura se encuentran hongos como. 1 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(15) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Beauveria bassiana y B. brongniartii, Lecanicillium lecanii, L. longisporum y. N. L.muscarium, Pochonia chlamydosporia, Paecilomyces lilacinus, P. fumosoroseus,. IC. AC I. Ó. Metarhizium anisopliae, Nomuraea rileyi 9,10,11 .. M UN. El control biológico mediante organismos antagónicos representa una valiosa. 12. . Para el control de enfermedades fúngicas. se encuentra. Y. fitopatógenos11,. CO. herramienta no química para la protección de los cultivos contra hongos. IC. A. Trichoderma spp., que es un hongo imperfecto, cosmopolita y típico habitante del. ÁT. suelo cuyas colonias presentan un crecimiento rápido, siendo al comienzo el micelio. RM. de color blanco y de aspecto algodonoso para posteriormente tornarse de color verde. FO. oscuro o verde limón y de aspecto pulverulento, lo que es característico de este. DE. IN. hongo. Existen diversas especies de Trichoderma sp., como T. viride, T. harzianum, T. aureoviride, T. virens, T. atroviride, T. hamatum, T. koningii; de las cuales la. EM AS. primera es la más estudiada entre numerosos agentes de control biológico, por sus. SI. ST. características de antagonismo en condiciones naturales13, 14, 15.. DE. Diversas especies de Trichoderma spp. son utilizadas en la agricultura,. IO. N. industria textil 15 y en la fabricación de biopesticidas, bioprotectores, bioestimulantes, 16. .Son conocidos por sus. CC. biofertilizantes, etc. para una amplia variedad de plantas. DI. RE. actividades antagónicas y algunas cepas son comercializadas como agentes de biocontrol, por su facilidad para ser aisladas, cultivadas; por su crecimiento rápido en un gran número de sustratos y por no infectar a plantas superiores 16, 17.. 2 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(16) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Las especies de Trichoderma son de importancia pues actúan como 18, 19,20. , Fusarium sp.. 21, 22. ,. N. hiperparásitos de fitopatógenos como Botrytis cinerea. 19. 21. . Presentan acción micoparásita (siendo el principal mecanismo de. IC. Sclerotinia sp. y. AC I. Ó. Pythium sp. 20, Phytophthora capsici 21, Alternaria solani 20, Rhizoctonia solani. M UN. acción de este hongo) y de antibiosis; en el primer caso por producir enzimas. CO. hidrolíticas que ocasionan cambios estructurales a nivel celular, tales como vacuolización, granulación, desintegración del citoplasma y lisis celular, encontrados. Y. 17,. . Mientas que en la antibiosis interfieren. IC. A. en los organismos con los que interactúa. ÁT. con el crecimiento de otro microorganismo mediante la producción de metabolitos. FO. RM. tóxicos .Asimismo son promotores del crecimiento vegetal e indicador de resistencia.. DE. IN. Por otro lado tradicionalmente se han usado diferentes alternativas de control dirigidas a reducir y/o eliminar las poblaciones de nematodos. 23.. Durante muchos. EM AS. años, se ha empleado para su control una amplia gama de nematicidas químicos,. ST. muchos de los cuales son biocidas de impacto negativo sobre los organismos 22. . Sin embargo para su control también se emplean. SI. benéficos presentes en el suelo. DE. diversos agentes microbianos para el control de nematodos principalmente los que. IO. N. son formadores de agallas, teniendo entre ellas a Pochonia chlamydosporia23 quien. CC. ha demostrado ser uno de los organismos más promisorios, al ejercer un control. DI. RE. efectivo sobre poblaciones de Meloidogyne spp.. 23,24. , en sistemas de cultivos. hortícolas, lo que posibilita conformar una metodología para su uso como agente de control biológico junto a otras tácticas, a fin de lograr un control más efectivo de este importante organismo fitopatógeno causante de daños intensivos a las hortalizas 25. 3. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(17) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. P. chlamydosporia, presenta colonias de rápido crecimiento,. conidióforos. N. usualmente postrados y pequeñas hifas diferenciadas, algunas veces erectas, fiálides. . En la descripción original de P. chlamydosporia hecha por Goddard en 1913, se. IC. 26. AC I. Ó. verticiladas o solitarias, conidios de forma subglobosa, elipsoidal a bacilar en el agar. M UN. señala como característica más distintiva de la especie la formación de. CO. clamidosporas, las cuales son más abundantes en el micelio viejo que adquiere una coloración crema a ocrácea, mientras que, el estado verticilado ocurre más. ÁT. IC. A. Y. abundantemente sobre micelio joven, cerca del margen de la colonia 27.. RM. P. chlamydosporia parasita huevos de nematodos formadores de agallas y. FO. quistes, formando apresorios que se adhieren a la cubierta del huevo. 26. .La forma y. IN. número de apresorios y la extensión de su crecimiento sobre la superficie del huevo. DE. están determinados por el nematodo hospedante26,. 25. .Posteriormente, se produce la. EM AS. penetración de la cubierta del huevo y digestión del contenido del mismo 28.De. ST. acuerdo a la estructura y composición química de la capa externa de los huevos,. SI. Pochonia debe contar con un grupo de enzimas que le permitan la degradación de. DE. cada una de las láminas que aparecen como barreras, para llegar finalmente al interior. IO. N. del huevo e infectarlo 25. Por tanto, la penetración es el resultado de la acción conjunta. CC. de la presión física y una actividad enzimática de tipo hidrolítica específica. DI. RE. correspondiente a enzimas como esterasas, proteasas de tipo serina, quitinasas y lipasas; que pueden jugar un papel importante en el proceso de infección, 25, 26, 27.. 4 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(18) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. En un suelo de cultivo podemos encontrar diversos organismos fitopatógenos, plantas. N. como hongos y nematodos causantes de enfermedades que afectan a. AC I. Ó. cultivadas por el hombre; dichas enfermedades de las plantas han provocado que los. IC. agricultores sufran pérdidas económicas, por eso viene siendo necesario controlar. M UN. eficazmente a los organismos que las causan utilizando un método de control que sea. CO. eficaz y que a la vez conserve el medio ambiente, para lo cual se considera adecuado. IC. A. Y. el control biológico 27.. ÁT. Dentro de este contexto, para el control de los hongos fitopatógenos se emplea. RM. a diversas especies de Trichoderma sp., que es un hongo antagonista, mientras que. FO. para el control de las diversas especies de fitonematodos se emplea a otra especie de. DE. IN. hongo como es el caso de Pochonia chlamydosporia. Sin embargo, debido a que ambos hongos se aplican al suelo, ya que es allí donde se encuentran los organismos. EM AS. fitopatógenos que deben controlar, y como Trichoderma sp. es un hongo. ST. micoparásito se hace necesario determinar si Trichoderma sp. se comporta como. SI. micoparásito de P. chlamydosporia ya que si hay interferencia entre ellos la acción de. DE. uno afectaría la actividad del otro en cambio si fueran compatibles, esto contribuiría a. DI. RE. CC. IO. N. que cada uno sea efectivo en su accionar22,24,25.. Por tal razón, el presente trabajo tuvo como objetivo conocer el efecto “in. vitro” de Trichoderma viride, Trichoderma atroviride y Trichoderma harzianum nativas sobre la germinación y el crecimiento de Pochonia chlamydosporia.. 5 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(19) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. MATERIAL Y MÉTODOS. N. II.. IC. AC I. Ó. 1. MATERIAL BIOLÓGICO. M UN. Cultivo nativo de Trichoderma viride, procedente de Virú.. CO. Cultivo nativo de Trichoderma atroviride, procedente de Cascas.. Y. Cultivo nativo de Trichoderma harzianum procedente de Cascas.. IC. A. Cultivos nativo de Pochonia chlamydosporia, proporcionadas por. ÁT. el Laboratorio de Fitopatología del Departamento Académico de. RM. Microbiología y Parasitología, Facultad de Ciencias Biológicas de. EM AS. 2. MÉTODOS. DE. IN. FO. la Universidad Nacional de Trujillo. ST. A. Obtención de cultivo joven de Trichoderma viride, Trichoderma.. DE. SI. atroviride, Trichoderma. harzianum y Pochonia chlamydosporia28:. DI. RE. CC. IO. N. A partir de los cultivos puros de Trichoderma viride, Trichoderma atroviride, Trichoderma harzianum se sembró en tubos de ensayo conteniendo Agar Papa Dextrosa (PDA), y se incubo a temperatura de 25 ºC durante siete días, obteniéndose así un cultivo joven de Trichoderma. viride,. Trichoderma. atroviride. y. Trichoderma. 6 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(20) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. harzianum, procediéndose de igual manera para obtener el cultivo. AC I. Ó. N. joven de Pochonia chlamydosporia.. IC. B. Evaluación de la actividad antagónica de T. viride , T. atroviride y. CO. M UN. T. harzianum sobre P. chlamydosporia. A. Y. a.Cultivo dual. ÁT. IC. En una placa de Petri que contenía Agar Papa Dextrosa (PDA), se. en. crecimiento. de. cultivo. joven. de. Pochonia. FO. micelio. RM. sembró por puntura a 2cm equidistantes del borde de la placa,. IN. chlamydosporia y dos días después el micelio del cultivo joven de. DE. Trichoderma viride de tal manera que queden enfrentados,. EM AS. procurando que entre ambos hongos la distancia promedio sea de 4. ST. cm; las placas se incubaron a temperatura de 25ºC, procediéndose de misma forma para el caso de Trichoderma atroviride y. SI. la. DI. RE. CC. IO. N. DE. Trichoderma harzianum realizándose lecturas cada 24 horas21.. Al término de este tiempo se evaluaron macroscópicamente, teniendo en cuenta el tipo de antagonismo según la escala de Bell et al (1982)29, donde:. 7 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(21) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Antagonismo tipo 1: Trichoderma spp. crece completamente sobre la. N. colonia del patógeno y cubre la superficie del medio de cultivo.. AC I. Ó. Antagonismo tipo 2: Trichoderma spp. crece al menos sobre las dos. IC. terceras partes de la superficie del medio de cultivo.. M UN. Antagonismo tipo 3: Trichoderma spp. y el patógeno cubren. CO. aproximadamente la mitad de la superficie del medio.. Y. Antagonismo tipo 4: El patógeno crece al menos en las dos terceras. IC. A. partes del medio de cultivo limitando el crecimiento de Trichoderma. ÁT. spp.. RM. Antagonismo tipo 5: El patógeno crece sobre la colonia de. DE. IN. FO. Trichoderma spp. ocupando toda la superficie del medio de cultivo.. Los aislamientos de Trichoderma spp. que presentaron antagonismo. EM AS. 1 ó 2 se consideraron como altamente antagonistas, realizándose. SI. ST. cada ensayo por cuadruplicado.. DI. RE. CC. IO. N. DE. C. Evaluación del antagonismo a nivel microscópico. Se empleó la técnica del microcultivo de Ridell descrita por Paul16, que consistió en colocar dentro de una placa de Petri varillas de vidrio en forma de “V” como soportes y sobre ellos, un portaobjeto estéril sobre el cual se dispuso de dos bloques de Agar Papa Dextrosa (PDA),para el establecimiento de los hongos involucrados T. viride, T. 8. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(22) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. atroviride, T. harzianum y P. chlamydosporia, con ayuda de un asa se. N. sembró por puntura micelio de cada hongo respectivamente en dos. AC I. Ó. bloques de PDA; dispuestos en dos puntos cardinales (norte: patógeno. M UN. IC. y sur: antagonista).. CO. Después de la siembra de micelio, se colocaron encima de los bloques. Y. un cubreobjetos estéril; con la finalidad de mantener la humedad en la. IC. A. placa de Petri, se adicionó agua destilada estéril. Cuando el bloque de. ÁT. agar estuvo cubierto con el crecimiento de ambos organismos, el. RM. cubreobjetos se retiró de la placa de Petri, luego se colocó en un. FO. portaobjetos limpio y provisto de una gota de azul de lactofenol. El. DE. IN. siguiente paso consistió en retirar el bloque de agar del portaobjetos original y después colocar una gota de azul de lactofenol y un. ST. EM AS. cubreobjetos nuevo y limpio.. SI. Una vez eliminado el exceso de colorante, las preparaciones se. en observar el enrollamiento, estrangulamiento, fragmentación del micelio de P. chlamydosporia causados por las hifas de las especies evaluadas de Trichoderma.. DI. RE. CC. IO. N. DE. sellaron y se evaluaron microscópicamente. La evaluación consistió. 9 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(23) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. D. Evaluación del efecto de los cultivos nativos de T. viride, T. y. T.. harzianum. sobre. la. germinación. de. P.. N. atroviride. IC. AC I. Ó. chlamydosporia.. M UN. a. Propagación de T. viride, T. atroviride, T. harzianum y P.. CO. chlamydosporia.. Y. A partir del cultivo puro de T. viride se sembró en frascos planos. IC. A. de vidrio conteniendo Agar Papa Dextrosa (PDA), y se incubó a. ÁT. temperatura de 25ºC durante siete días. Se procedió igualmente. FO. RM. con los otros cultivos nativos de T. atroviride, T. harzianum y para. IN. P. chlamydosporia.. DE. b. Estandarización de los inóculos de T. viride, T. atroviride, T.. EM AS. harzianum y P. chlamydosporia.. SI. ST. Transcurrido los siete días de incubación, se agregó a los frascos. DI. RE. CC. IO. N. DE. planos de vidrio una solución de Tween 80 al 0.1% con el fin de obtener una suspensión de conidias, cuya concentración fue determinada. mediante. recuento. en cámara. de Neubauer.. Posteriormente se hicieron las diluciones necesarias y en el caso de T. viride,. T. atroviride y T. harzianum, la suspensión se. estandarizó a una concentración de 50 conidias/gota mientras que. 10 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(24) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. en el caso de P. chlamydosporia, ésta se estandarizó a 50. AC I. Ó. N. conidias/gota22.. M UN. germinación conidial de P. chlamydosporia.. IC. c. Efecto de T. viride, T. atroviride y T. harzianum sobre la. CO. Se prepararon dos frascos de penicilina, y en el primero se colocó. Y. un mL de P. chlamydosporia, que sirvió como control y en el otro. IC. A. frasco un mL de T. viride, T. atroviride o T. harzianum con un mL. ÁT. de P. chlamydosporia.. RM. Los dos frascos de penicilina con las suspensiones problema y. FO. testigo se incubaron por 24 horas a temperatura ambiente,. DE. IN. realizándose cuatro repeticiones por cada tratamiento.. EM AS. 3. ANÁLISIS DE DATOS. ST. Los datos se analizaron según la escala de Bell et al (1982)29 para. SI. determinar el tipo de antagonismo de T. viride, T. atroviride y T. harzianum. DE. sobre las colonias de P. chlamydosporia.. DI. RE. CC. IO. N. En relación a la germinación de conidias de P. chlamydosporia frente a T.. viride, T. atroviride y T. harzianum se obtuvo el porcentaje de germinación y se aplicó el Anava según el paquete estadístico SPSS v. 15 determinar si existía diferencia significativa entre los. para. porcentajes de. germinación de P. chlamydosporia tanto en el grupo control como en los grupos problemas. 11 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(25) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. III.. RESULTADOS. N. Luego de evaluar el Porcentaje de la germinación conidial de P. chlamydosporia. AC I. Ó. frente a T. viride, T. atroviride y T. harzianum nativas a las 24 horas de evaluación,. T. harzianum fue el que más inhibió notablemente la germinación. IC. se encontró que. CO. M UN. conidial de P. chlamydosporia en un 46.6%.. A. Y. Al enfrentar a T viride , T. atroviride y T. harzianum nativas frente a P.. ÁT. IC. chlamydosporia, cada cultivo por separado, se encontró que solo T. harzianum fue. RM. la única especie nativa capaz de reducir el crecimiento de P. chlamydosporia. DE. IN. FO. presentando tipo1.. EM AS. Con respecto al micoparasitismo, la figura 3, muestran a nivel microscópico el efcto antagónico de la especie nativa de T. harzianum frente a P. chlamydosporia. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI. ST. .Observándose : adherencia , enrrollamiento, penetración, vacuolización.. 12 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(26) Ó AC I. 120. IC. 100. 80. 65.00. CO. 57.50. M UN. 100. a. IC. A. 40. 46.6. Y. 60. a. a. ÁT. 20. RM. 0. P. ch. T. v vs. P.ch. T. at vs P. ch. a. T. h vs. P. ch. EM AS. DE. IN. FO. % de geminación conidial de P. chlamydosporia. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. ST. Figura 1 .Porcentaje de la germinación conidial de P. chlamydosporia frente a. SI. T. viride, T. atroviride y T. harzianum nativas a las 24 horas de. a: p < 0.05 : Existe diferencia significativa. DI. RE. CC. IO. N. DE. evaluación.. 13 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(27) P. ch. AC I. T. h. Y. CO. M UN. IC. P. ch. Ó. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. B.. RM. ÁT. IC. A. A. a. T. at. IN. P. ch. C.. D.. DE. SI. ST. EM AS. DE. T. v. FO. P. ch. DI. RE. CC. IO. N. Figura 2. Cultivo. dual de: A. P. chlamydosporia B. T. harzianum vs P.. chlamydosporia, donde se observa antagonismo clase 1, C. T. viride. vs. P. chlamydosporia, D. T. atroviride vs P. chlamydosporia, nótese que en C y D no se observa antagonismo.. 14 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(28) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Ó. N. enr. M UN. IC. AC I. adh. ad dd dd dd. Y. CO. enr. B .. RM. ÁT. IC. A. A .. FO. vac. ad. DE. IN. vac. C .. D .. IO. N. DE. SI. vac c. ST. EM AS. fg. DI. RE. CC. Figura 3. Micoparasitismo de Trichoderma harzianum sobre Pochonia chlamydosporia: A. Adherencia (ad.), B. Enrollamiento (enr.), C. Vacuolización (vac.), D. Fragmentación (fr.).. 15 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(29) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. IV.. DISCUSIÓN. N. En la figura 1 se observa el porcentaje de germinación conidial “in vitro” de P.. AC I. Ó. chlamydosporia, frente a T. viride , T. atroviride y T. harzianum, donde se aprecia. IC. que P. chlamydosporia disminuye la germinación de sus conidias en presencia de T.. M UN. viride , T. atroviride y T. harzianum nativa hasta en un 65%; 57.5% y 46.6%. CO. respectivamente en comparación al control, encontrándose que existe una diferencia. Y. significativa entre los porcentajes de germinación de cada uno de los tratamientos. RM. ÁT. IC. A. evaluados, incluido el control30.. FO. Esta disminución de la germinación probablemente se deba a que T. viride, T. metabolito, que inhibe la. DE. IN. atroviride y T. harzianum produzcan algún tipo de. germinación de P. chlamydosporia, así como inhiben la germinación de esporas de. EM AS. Fusarium oxysporum, F. culmorum, F. moniliforme, Botrytis cinerea y Rhizoctonia. ST. solani, entonces esto puede deberse a que la especies nativas de. durante la antibiosis; uno de los. SI. posiblemente hayan excretado metabolitos. Trichoderma. DE. metabolitos producido por algunas especies de Trichoderma spp., más conocido y. IO. N. estudiado es el 6 – pentil – alfa- pyroma (6 PAP), debido a su potente actividad. CC. antifúngica. La habilidad para producirlo es muy variada entre las diferentes. DI. RE. especies, aún entre cepas de la misma especie, su toxicidad está relacionada con su actividad hidrofóbica de adsorberse dentro de las membranas celulares, formando una capa hidrorepelente sobre la pared celular, que impide la absorción de agua por la célula del hongo 31. 16. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(30) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Dennis y Webster32, relacionaron la actividad antibiótica de Trichoderma spp. con. N. compuestos no volátiles, como la trichodermina y otros metabolitos peptídicos. En. AC I. Ó. investigaciones posteriores Michel et al, reportan que Trichoderma sp., produce dos. IC. antibióticos más como son la : gliotoxina y viridina; Oliver y Germain mencionan a como productor de numerosos antibióticos como son:. M UN. Trichoderma rifai. CO. alameticina, dermadina, pachibasin, suzukacilina, trichodermina, trichotecenos y. Y. trichorzianina (metabolitos antifúngicos mayormente solubles localizadas sobre las. el poder antagónico de Trichoderma sp... ÁT. cuatro meses); incrementándose así. IC. A. esporas, la cual puede mantener su actividad antifúngica por un promedio de tres a. RM. Posteriormente, Dennis y Webster32, detectaron que la actividad antibiótica de. FO. algunos aislamientos se debía también a la producción de compuestos volátiles, los. DE. IN. cuales tienen un efecto esencialmente fungistático, debilitando al patógeno haciéndolo más sensible a los antibióticos no volátiles, lo que se conoce como un. EM AS. “hiperparasitismo” de origen enzimático , lo cual podría explicar la disminución de. ST. la germinación de las conidias de P. chlamydosporia, frente a T. viride , T. atroviride. N. DE. SI. y T. harzianum (Figura 1). 33. CC. IO. Stefanova et al.34, informaron la presencia de metabolitos no volátiles con. RE. actividad antifúngica en cuatro aislamientos de Trichoderma y concluyeron que los. DI. mismos reducen el crecimiento micelial de Phytophthora nicotianae y R. solani. Plantean además, que al parecer estos causan a nivel celular: vacuolización, granulación, coagulación, desintegración y lisis. Algunas de las enzimas no solo. 17 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(31) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. intervienen en el proceso de penetración y lisis, sino que actúan también como. N. antibióticos, tal es el caso de la enzima endoquitinasa (Ech42) que causa hidrólisis en. AC I. Ó. las paredes de B. cinerea, y además inhibe la germinación de conidios y el. M UN. IC. crecimiento de tubos germinativos de varios hongos35.. CO. Al evaluar el efecto antagónico de T. harzianum nativas sobre el crecimiento de P.. A. Y. chlamydosporia, se encontró un antagonismo tipo 1, como se observa en la (figura 2). ÁT. IC. encontrándose que T. harzianum coloniza toda el área de crecimiento de P.. RM. chlamydosporia. Con respecto al crecimiento micelial entre el cultivo dual de la T.. FO. harzianum nativa sobre P. chlamydosporia se observó antagonismo tipo 1 (Figura 2). IN. según la escala de Bell et al (1982)29, debido a que el 6PAP presente en T. harzianum. DE. tiene efecto inhibitorio sobre P. chlamydosporia al igual que estudios realizados de. EM AS. T. harzianum sobre Fusarium oxysporum, sin embargo las especie nativas de T. viride , T. atroviride no se observo este efecto antagónico sobre P. chlamydosporia,. SI. ST. esto podría deberse a que cada hongo fitopatógeno responde de manea diferente al 6. DE. PAP, aún en cepas de la mismo género lo que concuerda con lo expresado por. N. Dennis y Webster32 en (1971) y Worasatit et al (1994), quienes indican que la Trichoderma es muy. CC. IO. producción de enzimas y otros metabolitos por cepas de. RE. variable ;lo que indicaría que P. chlamydosporia respondió de manera diferente al. DI. 6PAP producido por cada especie nativa de Trichoderma, T.minutisporum (Tmcf-1) no presentó ningún efecto antagonico sobre Fusarium oxysporum porque no produjo el 6PAP36.. 18 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(32) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Según Infante et al.37 las especies de Trichoderma presentan una forma de. N. antagonismo conocida como micoparasitismo, en el cuál las hifas de este hongo. AC I. Ó. crecen quimiotrópicamente hacia el hospedante, adhiriéndose a las hifas del mismo,. IC. enrollándose en ellas , fragmentádolas e incluso penetrándolas en ocasiones (como se. CO. M UN. observa en la (figura 3) .. A. Y. El micoparasitismo como es un proceso complejo que para su estudio se ha. ÁT. IC. separado en cuatro etapas dependiendo el desarrollo de cada etapa de los hongos. RM. involucrados, de la acción biotrófica o necrotrófica del antagonista y de las. FO. condiciones ambientales. Chet y Benhamou, 38, explican detalladamente cada una de. IN. estas etapas, para el caso de las especies de Trichoderma. En primer lugar,. DE. Trichoderma localiza al patógeno y comienza a crecer por tropismo hacia el otro. EM AS. hongo a parasitar39, 40, 41,42. Esta detección a distancia se debe, enzimas, que actúan como un complejo con acción sinérgica líticas, como la quitinasa y ß-1,3-glucanasa. SI. ST. que va a degradar la pared celular42hongos. Esta exoquitinasa (quitinasa y ß-1,3-. DE. glucanasa) provoca la liberación de algunos oligómeros de la pared del hongo diana,. N. induciendo la expresión de endoquitinasas del micoparásito (Trichoderma) que, al. CC. IO. ser liberadas, difunden y hacen que Trichoderma comience el ataque al hongo diana. DI. RE. antes de que se haya producido el contacto físico 43,44.. 19 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(33) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Después del contacto físico microscópicamente se observa que Trichoderma. N. puede enroscarse alrededor de su presa y formar apresorios, que le permiten penetrar. AC I. Ó. posteriormente en el interior de las hifas del patógeno. La unión parece estar mediada. 45. . Una vez en contacto,. M UN. celular de Trichoderma y lectinas del hongo diana42,. IC. por la interacción entre carbohidratos (generalmente galactosa o fructosa) de la pared. CO. Trichoderma produce varias enzimas que degradan la pared celular del hongo y. Y. antibióticos, como los peptaiboles46, 47,48, abren poros en la pared celular del hongo. IC. A. parasitado. Finalmente, Trichoderma entra al interior del micelio hospedador y. ÁT. digiere el contenido intracelular del hongo, fase que va acompañada de algunos. 45,44, 49. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI. ST. EM AS. DE. IN. (Figura 3).. , tal como se observó en el presente trabajo. FO. de las hifas del hospedador. RM. cambios morfológicos como vacuolización, pérdida de citoplasma y desintegración. 20 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(34) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. CONCLUSIONES. Trichoderma viride, Trichoderma atroviride. y Trichoderma harzianum. nativas. AC I. Ó. disminuyen la germinación in vitro de conidias de Pochonia chlamydosporia.. N. V.. M UN. IC. Trichoderma viride y Trichoderma atroviride nativas no presentan antagonismo. CO. sobre el crecimiento in vitro de Pochonia chlamydosporia.. Y. Trichoderma harzianum nativa tiene efecto antagónico tipo uno sobre el crecimiento. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI. ST. EM AS. DE. IN. FO. RM. ÁT. IC. A. in vitro de Pochonia chlamydosporia.. 21 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(35) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. N. VI. RECOMENDACIONES. AC I. Ó. Realizar un estudio en campo para determinar si las variables no controladas en. IC. laboratorio influyen en el micoparasitismo de Trichoderma harzianum nativa sobre. M UN. Pochonia chlamydosporia.. CO. Evaluar la competencia entre otras especies nativas de Trichoderma sp. y Pochonia. Trichoderma viride nativa de Virú y. Trichoderma atroviride. IC. Se recomienda a las cepas nativas de. ÁT. A. Y. chlamydosporia.. RM. nativa de Cascas, se aplicaran juntas a Pochonia. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI. ST. EM AS. DE. IN. FO. chlamydosporia en campo para el Manejo Integrado de Plagas (MIP).. 22 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(36) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. VII. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS. 1. Agrios G. Fitopatología. 2ª ed. México: Ed. Uteha; 1995.. AC I. Ó. N. 2. Carballo, M. y Guaharay, F. (Eds.): “Control Biológico de Plagas Agrícolas“.. IC. Serie Técnica, Manual Técnico Centro Agronómico Tropical de Investigación. M UN. y Enseñanza, 53: 224, 2004.. CO. 3. Sandoval I, López M. Antagonismo de Trichoderma harzianum A-34 hacia Macrophomina phaceoli y otros patógenos fúngicos del fríjol. Fitosanidad,. A. Y. 2002; 4(3-4):69-72.. ÁT. IC. 4. Harman G, Howell C, Viterbo A, Chet I, Lorito M. Trichoderma species -. RM. Opportunistic, avirulent plant symbionts. Nature Review 2004; 2: 43-56.. FO. 5. Fernández LO. Microorganismos antagonistas para el control fitosanitario.. IN. Manejo Integrado de Plagas. 2001; 62: 96-100.. DE. 6. Guigón C. y González P. Selección de Cepas Nativas de Trichoderma spp con. EM AS. actividad antagónica sobre Phytophthora capsici. Leonian y Promotoras de. ST. crecimiento en el cultivo de Chile (Capsicum annuum L). Rev. Mexicana de. SI. Fitopatología. México. 2004; 22: 117-124.. DE. 7. Baker KF, Cook RJ. Biological Control of plant pathogens. The American. IO. N. Phytopathological Society. USA1982. pp. 28-43.. DI. RE. CC. 8. Rey M, Delgado J, Rincón A, Limon C, Benítez T. Mejora de cepas de Trichoderma para su empleo como biofungicidas. Rev Iberoam Micol 2000; 17: 31-36.. 23 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

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(43) CO. M UN. IC. AC I. Ó. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI. ST. EM AS. DE. IN. FO. RM. ÁT. IC. A. Y. ANEXOS. 30 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(44) EM AS. DE. IN. FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. M UN. IC. AC I. Ó. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. B. CC. IO. N. DE. SI. ST. A. DI. RE. Anexo 1. Observación macroscópica de cultivo dual de Trichoderma harzianum vs Pochonia chlamydosporia. A. vista anterior B. vista posterior. 31 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(45) A. B. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI. ST. EM AS. DE. IN. FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. M UN. IC. AC I. Ó. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 32 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(46) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Anexo 2. Observación macroscópica de Trichoderma harzianum:. CC. IO. N. DE. SI. ST. EM AS. DE. IN. FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. M UN. IC. AC I. Ó. N. A. reactivación, B. propagación.. A. B. DI. RE. .. 33 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(47) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Anexo 3. Observación macroscópica de cultivo dual de Trichoderma. Ó. N. viride vs Pochonia chlamydosporia. A. vista anterior B.. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI. ST. EM AS. DE. IN. FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. M UN. IC. AC I. vista posterior. A. B 34. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(48) AC I. Ó. Anexo 4. Observación macroscópica de Trichoderma viride:. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. ST. EM AS. DE. IN. FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. M UN. IC. A. reactivación , B. propagación .. A. B. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI. .. 35 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(49) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Anexo 5. Observación macroscópica de cultivo dual de Trichoderma. Ó. N. atroviride vs Pochonia chlamydosporia A. vista anterior. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI. ST. EM AS. DE. IN. FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. M UN. IC. AC I. B. vista posterior. 36 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(50) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. B. AC I. Ó. N. A. M UN. IC. Anexo 6. Observación macroscópica de Trichoderma atroviride. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI. ST. EM AS. DE. IN. FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. A. reactivación, B. propagación.. 37 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(51) EM AS. DE. IN. FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. M UN. IC. AC I. Ó. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Anexo 7. Observación macroscópica de reactivación de Pochonia. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI. ST. chlamydosporia. 38 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(52) A. B. SI. ST. EM AS. DE. IN. FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. M UN. IC. AC I. Ó. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. A. reactivación, B .propagación.. DI. RE. CC. IO. N. DE. Anexo 8. Observación macroscópica de Pochonia chlamydosporia:. 39 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..