Determinación del efecto leishmanicida in vitro de los extractos del tallo de croton alnifolius l (tunga) en leishmania (v) peruviana

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(1)Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA. Y. BI. O. Q. UI. M IC. A. ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA. A. DETERMINACIÓN DEL EFECTO LEISHMANICIDA in vitro DE LOS. AC I. EXTRACTOS DEL TALLO DE Croton alnifolius L. (Tunga) EN. FA. RM. Leishmania (V) peruviana.. DE. AUTORES:. TE CA. CARRANZA VEGA, DHAILY ELAINE.. BI BL IO. HUAYANAY VIERA, JOHSSY AQUILA.. ASESOR:. Q.F. CASANOVA HERRERA, HUGO ENRIQUE. CO-ASESOR: Mbgo. JUDITH ROLDÁN RODRÍGUEZ. TRUJILLO - PERÚ. 2010. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(2) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. A. JURADO DICTAMINADOR. Y. BI. O. Q. UI. M IC. Q.F. GILMER ZARY GIL…………….……………PRESIDENTE. FA. RM. AC I. A. Q.F. LUIS CHAVEZ ABANTO.………………….……...MIEMBRO. BI BL IO. TE CA. DE. Q.F. HUGO CASANOVA HERRERA…………..….…..…MIEMBRO. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(3) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. DEDICATORIAS. A Dios. Por su inmenso amor hacia a mí, por haber iluminado. M IC. A. mi camino y por brindarme fuerza para completar una. O. Q. UI. meta más en mi camino.. Y. BI. A mis padres: Wilson y Elizabeth.. AC I. A. Por su amor, cariño, comprensión y apoyo que siempre me brindan sin condiciones ni medida, porque creyeron en. RM. mí, y por inculcarme el estudio, la responsabilidad, el. FA. respeto, la humildad y las fuerzas de seguir adelante,. DE. porque en gran parte, gracias a ellos veo alcanzada mi. BI BL IO. TE CA. meta.. A mis hermanos: Luisa y Dark. Por su apoyo brindado durante mis estudios, por la compañía y la amistad que me brindan, se que contare con ellos siempre.. Dhaily.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(4) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. A Dios Por ser parte de mi vida, por darme fuerza y valentía cuando no la tengo y por todas las bondades brindadas en. M IC. A. el transcurso de mi vida.. Q. UI. A mis padres: Pompilio y Aquila. en. mis. momentos. más. tristes,. por. su. Y. incondicional. BI. O. Por su gran amor, ternura y comprensión, por su apoyo. A. paciencia y tesón, por nunca fallarme, por ser modelo en mi. FA. RM. AC I. vida, y guiar mi camino siempre por el sendero del bien.. DE. A mis hermanos: Jaqueline y John. TE CA. Por su apoyo y motivación constante, por estar siempre a mi lado, por su cariño y por llenar mi vida de alegría, por. BI BL IO. compartir mis triunfos y tristezas.. Johssy. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(5) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. A. AGRADECIMIENTOS. de. la. vida,. especialmente. UI. correcto. en. los. Q. camino. M IC. A Dios, nuestro padre, por bendecir y enseñarnos el. BI. O. momentos difíciles ayudándonos a superar los obstáculos. A. Y. guiándonos y fortaleciéndonos cada día con su Santo. FA. RM. AC I. Espíritu para si alcanzar nuestras metas trazadas.. DE. A nuestro asesor el Q. F. Hugo Enrique Casanova Herrera su. amistad,. TE CA. por. por. su. paciencia,. orientación. y. BI BL IO. enseñanzas valiosas, lo cual hizo posible la realización de este trabajo de investigación.. Dhaily y Johssy.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(6) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ÍNDICE i. ABSTRACT……….………………………………...…….……….……….. ii. I.. INTRODUCCIÓN…...……………………………………….……... 1. II.. MATERIAL Y MÉTODO...………………………………………... III.. RESULTADOS………….……………………………….....……..... IV.. DISCUSIÓN……………..…………………………………............. V.. CONCLUSIONES………………...……………………………….. VI.. RECOMENDACIONES……………………………………………. 9 14 16. DE. FA. RM. AC I. A. Y. BI. O. Q. UI. M IC. A. RESUMEN………………………………………….……………………... 22. BI BL IO. VIII. ANEXOS. 21. TE CA. VII. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS………………………….…... 20. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(7) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. PRESENTACIÓN. Señores Miembros del Jurado: En cumplimiento con las disposiciones vigentes emanadas del reglamento de Grados y Títulos de la Facultad de Farmacia y Bioquímica de la Universidad Nacional de Trujillo,. M IC. A. sometemos a vuestra consideración y elevado criterio, el presente informe de investigación. Y. BI. O. Q. Croton alnifolius L. (Tunga) en Leishmania (V) peruviana.. UI. tipo II titulado: “Determinación del efecto leishmanicida in vitro de los extractos del tallo de. AC I. A. Esperando que el jurado se sirva a calificar este trabajo según su criterio establecido, a. RM. pesar de la existencia de alguna deficiencia encontrada durante el desarrollo del presente. Trujillo, Marzo del 2010. BI BL IO. TE CA. DE. FA. trabajo de investigación.. Carranza Vega, Dhaily E. Autor. Huayanay Viera, Johssy A. Autor. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(8) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ÍNDICE i. ABSTRACT……….………………………………...…….……….……….. ii. IX.. INTRODUCCIÓN…...……………………………………….……... 1. X.. MATERIAL Y MÉTODO...………………………………………... XI.. RESULTADOS………….……………………………….....……..... 6 19. BI. O. Q. UI. M IC. A. RESUMEN………………………………………….……………………... 21. AC I. A. Y. XII. DISCUSIÓN……………..…………………………………............. RM. XIII. CONCLUSIONES………………...……………………………….. DE. FA. XIV. RECOMENDACIONES……………………………………………. 36. BI BL IO. XVI. ANEXOS. 35. TE CA. XV. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS………………………….…... 34. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(9) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. RESUMEN La finalidad del presente trabajo de investigación fue determinar el efecto leishmanicida in vitro de los extractos del tallo de Croton alnifolius L. (Tunga) en Leishmania (V) peruviana, para lo cual se utilizó tallos de la especie de Croton alnifolius L. “Tunga”, recolectados en las afueras de la provincia de. M IC. A. Santa Cruz, a partir de los cuales se prepararon los extractos necesarios para. UI. obtener las diluciones con DMSO al 0.06 %, 3.6 %, 5.5 % y 8 % las cuales Leishmania (V) peruviana a una. O. Q. fueron enfrentadas con la cepa de. BI. concentración de 1x106 parásitos/mL, siguiendo la metodología descrita por. A. Y. Muñoz. Posteriormente se hicieron las lecturas a las 1, 2, 3, 6, 12 y 24 horas. AC I. después de haber sido realizado el enfrentamiento, observándose el efecto. BI BL IO. TE CA. DE. FA. RM. leishmanicida a partir de la dilución de 3.6 %.. Palabras claves: Croton alnifolius L., Leishmania (V) peruviana, efecto leishmanicida.. i. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(10) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ABSTRACT. The purpose of the present research work was to determine the effect leishmanicida in vitro of the abstracts of the stem of Croton's alnifolius L. (Tunga) in Leishmania (V) peruviana, for which has been used stems of. M IC. A. Croton's alnifolius L. “Tunga”, recollected at the outskirts of the province of. UI. Santa Cruz, To depart from which has been prepared the necessary abstracts. O. Q. to obtain the dilutions with DMSO to the 0,06 %, 3,6 %, 5,5 % and 8 % which. BI. were confronted with Leishmania's (V) peruviana to a concentration of 1x106. A. Y. parasites/mL, following the methodology described by Muñoz. Afterwards has. AC I. been done readings at the 1 2 3 6 12 and 24 hours after having been the. FA. BI BL IO. TE CA. DE. dilution of the 3,6 %.. RM. confrontation and has been saw the leishmanicida effect to depart from. Key words: Croton alnifolius L., Leishmania (V) peruviana, leishmanicida efect.. ii. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(11) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. GLOSARIO. . Berberina: Alcaloide extraído de raíces, rizomas y corteza de algunas plantas, en casos de infección. A. por Leishmania donovani, la berberina disminuye. UI. Q. rápidamente los parámetros hematológicos en. M IC. marcadamente la carga parasitaria y mejora. Y. Carragenanos: Mezcla de varios polisacáridos que se encuentra rellenando los. A. . BI. O. animales infectados, con menos efectos secundarios que la pentamidina.. RM. Endémico: Enfermedad que se presenta sistemáticamente, de manera regular, y. FA. . AC I. huecos en la estructura de celulosa de las paredes celulares de algunas plantas.. . TE CA. demográfico.. DE. sin variaciones apreciables de población afectada dentro de un segmento. Metaciclogénesis: es un proceso que experimentan los promastigotes de. BI BL IO. leishmania en el tracto digestivo del insecto vector y cuya finalidad es transformar los promastigotes en formas altamente infecticas y capaces de sobrevivir en el hospedadero vertebrado, donde es sometido a ataques por la pared del sistema inmune. . Probóscide: (idioma griego pro, "anterior " y baskein, "para comer") es un apéndice alargado y tubular situado en la cabeza de un animal. Su uso más común es para comer y absorber, como es el caso de ciertos invertebrados.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(12) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. I. INTRODUCCIÓN La leishmaniasis es un grupo de enfermedades parasitarias zoonóticas, producidas por diferentes especies de protozoarios hemoflagelados del género Leishmania, que residen de manera obligatoria dentro de macrófagos de los mamíferos que por lo general sirven como reservorios para estos microorganismos patógenos, que pueden transmitirse hacia los seres. M IC. A. humanos por la picadura de alrededor de 30 especies de insectos hembras pertenecientes. UI. al género Phlebotomus para el viejo mundo y Lutzomyia para el nuevo mundo1.. O. Q. Leishmania es un parásito digénico porque realiza parte de su ciclo biológico en el. BI. tubo digestivo del hospedador invertebrado en forma flagelada (promastigote, del gr.. A. Y. mastigos, látigo), y en el vertebrado dentro de las células del sistema reticuloendotelial,. RM. AC I. sobre todo en los macrófagos, en forma aflagelada o amastigote2.. FA. La Organización Mundial de la Salud (OMS) ha identificado a la leishmaniasis como. DE. una de las enfermedades tropicales más importantes. Aproximadamente, de 1,5 a 2. TE CA. millones de nuevos casos son reportados anualmente y alrededor de 350 millones de personas se encuentran en riesgo de contraer la enfermedad3.. BI BL IO. La leishmaniasis. se caracteriza por comprometer la piel, mucosas y vísceras. dependiendo de la especie o subespecie del parásito infectante así como de la distribución de los macrófagos infectados, y en especial de la respuesta inmunitaria del huésped. En orden ascendente de afección sistémica y gravedad clínica potencial, los principales síndromes de leishmaniasis en seres humanos se han clasificado en formas cutáneas, mucocutáneas, cutánea difusa y visceral (Kala azar) 1, 3.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(13) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. La leishmaniasis es una enfermedad de prevalencia alta en muchas regiones tropicales y subtropicales del mundo, tales como el este y sureste de Asia, Oriente Medio, norte y este de África, el sur de Europa (cuenca del Mediterráneo) y América Central y Sudamérica. Es endémica en 88 países en áreas tropicales, 72 de los cuales están en vías de desarrollo. Descrita en 24 países de América, extendiéndose desde el sur de Estados Unidos (Texas). A. hasta el norte de Argentina3.. M IC. En el Perú, afecta a 12 departamentos. Se extiende a través de los Andes y valles. Q. UI. interandinos entre los 600 y 3 000 m. s. n. m. para la leishmaniasis cutánea y a las zonas de. BI. O. Selva alta y baja por debajo de los 2000 m. s. n. m. para la leishmaniasis mucocutánea. La. Y. población en riesgo bordea los 1,2 millones de personas, con aproximadamente 7 a 9 mil. AC I. A. casos por año, de los cuales solo la mitad son confirmados por frotis o cultivo de lesiones4.. RM. La leishmaniasis cutánea andina “Uta”, que se encuentra en la mayoría de los. FA. departamentos del Perú ubicados en los valles occidental e interandinos y ciertos valles de. DE. selva alta; mientras que la leishmaniasis selvática “espundia” en selva baja y ciertos valles. TE CA. de selva alta. Las manifestaciones clínicas son variables y están relacionadas a la cepa de Leishmania infectante, al medio ambiente y a la respuesta inmune del hospedero2, 5.. BI BL IO. Tras un periodo de incubación, que en promedio oscila entre dos semanas a dos meses, se manifiesta en la piel como una lesión papuloeritematosa, generalmente indurada y pruriginosa, que aumenta lentamente de tamaño y que después de varios días puede ulcerarse o formar una placa; posteriormente pueden recubrirse de un líquido amarillento dando lugar a una costra. Algunas lesiones se infectan secundariamente, mientras que en otras también pueden aparecer lesiones satélites. Se localizan más frecuentemente en partes expuestas del cuerpo, especialmente en las extremidades y la cara; evolucionan. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(14) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. crónicamente, y pueden aumentar en extensión y profundidad, diseminarse a distancia o involucionar espontáneamente2. Los dípteros de la subfamilia Phlebotominoe han sido involucrados en la transmisión de leishmaniasis, siendo el género Lutzomyia el principal vector en el continente Americano que tiene importancia en salud pública, pues están considerados como vectores. M IC. A. de agentes patógenos de la leishmaniasis tegumentaria y visceral. Cuando un flebótomo. UI. parasitado ingurgita sangre de un vertebrado, inocula con su saliva los promastigotes. O. Q. presentes en la probóscide. Una vez el parásito en los capilares cutáneos del hospedador. BI. vertebrado, se produce su fagocitosis por el macrófago que lo engloba en una vacuola. A. Y. parasitófora para tratar de eliminarlo mediante una cascada de metabolitos derivados del. AC I. oxígeno, entre los que destaca el óxido nítrico, y la liberación de hidrolasas liposomales;. RM. todas estas moléculas son vertidas en el espacio intravacuolar, pero Leishmania evade esas. FA. reacciones inmunológicas inespecíficas del macrófago para vivir y multiplicarse en su. DE. interior; de la eficacia de la respuesta inmune y la virulencia de este protozoo depende la. TE CA. progresión de la leishmaniasis. Si sobreviven las leishmanias, los macrófagos parasitados. BI BL IO. son ingurgitados por otro flebotomo, en cuyo intestino se liberan los amastigotes que recuperan la forma de promastigotes y, tras varios días, alcanzan la capacidad infectiva (metaciclogénesis) ya en la proximidad de la probóscide quedando así dispuestos para ser inoculados, con lo que se cierra el ciclo2, 5. Múltiples esquemas terapéuticos han sido utilizados en las diferentes localidades contra las diversas formas clínicas de leishmaniasis, la mayoría de las investigaciones coinciden en considerar a los antimoniales pentavalentes como las drogas más efectivas; además de los antimoniales, se han utilizado otros medicamentos sistémicos, tales como:. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(15) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. anfotericina B, miconazol, isoniazida, dapsona, rifampicina, plantas medicinales, sulfametoxazol trimetoprim e interferón gamma. También se han experimentado varias formas de tratamiento local, como: curetaje, rayos láser, criocirugía, termoterapia6. Los antimoniales pentavalentes parecen ser las drogas más efectivas y actúan de varias maneras: 1. Causan disminución de la síntesis de adenosín trifosfato (ATP) y guanosil. A. trifosfato (GTP) a partir de adenosín difosfato (ADP) y guanosil difosfato (GDP), con la. M IC. consiguiente disminución de la síntesis macromolecular y de la viabilidad de las. Q. UI. leishmanias; 2. Inhiben la glucólisis, el ciclo del ácido cítrico y el catabolismo de los ácidos. BI. O. grasos de las amastigotas. Este medicamento ha sido utilizado en diversos esquemas. Y. terapéuticos, con resultados variables según los experimentadores2, 6.. AC I. A. La anfotericina B es ampliamente utilizada en pacientes que no responden bien al. RM. tratamiento con antimoniales pentavalentes, sobre todo en las formas mucocutáneas y. FA. viscerales; no obstante, es un medicamento muy tóxico, ya que además de interferir con la. DE. síntesis del ergosterol, también altera la síntesis del colesterol, afectando no sólo a los. TE CA. parásitos sino también a las células del glomérulo renal del hospedador, por lo que amerita la hospitalización del enfermo. La dosis varía de 0,25 a 1 miligramo por kilo de peso por. BI BL IO. vía endovenosa. Los imidazólicos (ketoconazol e itraconazol) han sido muy ensayados, tanto en forma de monoterapia como combinados con antimoniales pentavalentes, con resultados muy contradictorios. Estas drogas son mejor toleradas que la anterior, ya que su mecanismo de acción es la inhibición de la síntesis del ergosterol en la membrana de los kinetoplastidas. Las dosis más utilizadas son 400 miligramos al día en los adultos y 200 miligramos en los niños6. La aminosidina parece ser una importante opción para el manejo de las diferentes formas clínicas de leishmaniasis. Algunos autores han reportado excelentes resultados en. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(16) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. las formas difusas y viscerales, sobre todo en combinación con antimoniales pentavalentes6. Varios reportes muestran la importancia del alopurinol en combinación con antimoniales, sobre todo para el tratamiento de las formas recidivantes6. Desde la antigüedad se han atribuido efectos curativos a especies de la familia. A. Euphorbiaceae, algunas especies de esta familia son usadas para el tratamiento de. M IC. cáncer, tumores y verrugas desde el tiempo de Hipócrates y son usadas ampliamente en. O. Q. UI. medicina popular por sus múltiples efectos7.. BI. Él género Croton, comprende más de 1500 especies distribuidas en regiones. A. Y. tropicales y subtropicales de todo el mundo, muchas de estas especies son utilizadas por. AC I. la tradición popular para el tratamiento de numerosas enfermedades. Gran número de. RM. poblaciones indígenas, especialmente de Sudamérica utilizan el látex o infusiones de las. FA. hojas o corteza de diferentes especies de Croton para el tratamiento de heridas, dolencias. TE CA. DE. estomacales e inflamación7, 8.. Las plantas de este género, en especial Croton alnifolius L., crecen en terrenos. BI BL IO. arenosos, pendientes o laderas rocosas, secas, quebrada areno-rocosas; ubicadas entre los 2000-2400 m.s.n.m. en los departamentos de Cajamarca, La Libertad, Lima y Arequipa, encontrando en el primer departamento que los pobladores de dicha zona la usaban en el tratamiento empírico contra la leshmaniasis9.. Actualmente, los pobladores de la sierra y tribus selváticas, utilizan plantas con propiedades curativas contra la leishmaniasis, siendo de gran interés su estudio, ya que el. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(17) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. reino vegetal es considerado como fuente de productos naturales con valor medicinal o de precursores útiles para el desarrollo de nuevos productos farmacéuticos10. Si tenemos en cuenta que, durante las dos últimas décadas la leishmaniasis ha ido creciendo con una notable extensión geográfica y un mayor número de casos notificados, creando en muchos países un problema de salud pública nuevo o empeorándolo. En. M IC. A. ausencia de vacuna, la OMS recomienda para la lucha contra la leishmaniasis un. UI. diagnóstico precoz seguido del tratamiento inmediato asociando medidas específicas. BI. O. Q. adaptadas a cada situación epidemiológica para controlar los vectores y reservorios2.. Y. De hecho, la leishmaniasis está incluida en la lista de las diez prioridades de lucha. AC I. A. contra la resistencia a antibióticos por la OMS. Además, parece cada vez más evidente que. RM. el éxito de los fármacos depende también de la variación en la sensibilidad de cada especie. FA. de Leishmania, de variaciones en su farmacocinética, y de variaciones en la interacción. DE. fármaco-respuesta inmune del paciente 11.. TE CA. La terapia clásica de la leishmaniasis presenta tres dificultades fundamentales: 1.. BI BL IO. Escasez y alto costo de las drogas. 2. Elevada toxicidad. 3. Grandes diferencias en la respuesta individual, dependiendo de la especie de parásito involucrada y sobre todo del estado inmunológico del hospedador. Se hace por tanto necesario el estudio de opciones terapéuticas de más fácil aplicación en las áreas endémicas, donde generalmente los pacientes son muy pobres y las instituciones que prestan servicios de salud cuentan con escasos recursos. Ante la ausencia de vacunas efectivas y de un adecuado control del mosquito vector, la lucha contra la leishmaniasis recae en la quimioterapia 6.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(18) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Sin embargo, al estudiar con fines prácticos la situación actual de la quimioterapia empleada en el tratamiento de la leishmaniasis en nuestro medio, es evidente que no ha habido muchos progresos desde que los antimoniales comenzaron a emplearse para el tratamiento desde hace 60 años. Aunado a esto, existe poca expectativa con relación al desarrollo de nuevas drogas por parte de la industria farmacéutica, debido a las limitaciones. A. del mercado potencial surge como una opción la medicina natural y alternativa, las cuales. M IC. revaloran el uso de plantas medicinales con acciones paliativas, preventivas o curativas. Q. UI. sobre algunas afecciones o sintomatologías investigando para ello la especie de Crotón. BI. O. alnifolius L.6, teniendo como precedente que las especies del género Croton poseen. Y. numerosos beneficios terapéuticos, como se señala en un estudio realizado en Croton. AC I. A. celtidifolius donde se puede evidenciar el efecto antioxidante mediante el incremento de la. RM. actividad de Superoxido dismutasa, y el efecto antiinflamatorio de la fracción etil acetato. FA. del extracto de dicha especie en la pleuritis inducida por carragenanos en ratas machos12;. DE. otro estudio, señala el efecto antibacteriano y cicatrizante de varios de los metabolitos. TE CA. secundarios de diferentes plantas del género Euphorbia13, y el efecto vasodilatador de dos nuevos diterpenos aislados de Croton schiedeanus en anillos de rata previamente. BI BL IO. contraídos con cloruro de potasio o fenilefrina14. Teniendo en cuenta los antecedentes en cuanto al uso benéfico de plantas medicinales y los efectos adversos del tratamiento farmacológico de la leishmanias, se realizó el presente trabajo que tuvo como finalidad: . Determinar el efecto leishmanicida in vitro de los extractos del tallo de Croton alnifolius L. (Tunga) en Leishmania (V) peruviana.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(19) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. II. MATERIAL Y MÉTODO 1.. MATERIALES: 1.1. MATERIAL BIOLOGICO:. 1.1.1. Material vegetal: Tallos de la especie de Croton alnifolius L. “Tunga”,. UI. M IC. A. recolectados en las afueras de la provincia de Santa Cruz.. O. Q. 1.1.2. Cepa de Leishmania (V) peruviana: Cepa proporcionada por el Laboratorio. BI. de Parasitología del departamento de Microbiología y Parasitología de la. AC I. A. Y. Facultad de Ciencias Biológicas, de la Universidad Nacional de Trujillo.. FA. DE. 1.2.1. Material de vidrio.. RM. 1.2. MATERIAL DE LABORATORIO. Pyrex. 04. Embudos de separación. Pyrex. 02. Tubos de ensayo con tapa rosca. Pyrex. 20. Pipetas de 10 mL. Pyrex. 12. Varilla de vidrio. Pyrex. 04. BI BL IO. TE CA. Vasos de precipitación de 250 mL. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(20) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 1.2.2. Equipos: Marca. Modelo. Coldex. RN30. Estufa. H.W.Kessel. Thelco. Balanza Analítica. H.W.Kessel. Sartorius. Baño María. H.W.Kessel. Equipo recuperador de solventes. H.W.Kessel. Cocina Eléctrica. Fomelsa. M IC. A. Refrigeradora. Circular Sartorius. AC I. A. Y. BI. O. Q. UI. Bionet. Vanox. AHMT3. FA. RM. Microscopio. TE CA. DE. 1.2.3. Material usado en la preparación del medio de cultivo. . Medio B.H.I.. . BI BL IO. Sangre desfibrinada de conejo. 1.2.4. Medicamentos:. . Estreptomicina amp.. Squibb x 1 g. . Gentamicina amp.. Magma x 80 mg/2 mL. . Penicilina Sódica 1000000 UI. Squibb. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(21) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.. MÉTODO Y PROCEDIMIENTO:. 2.1.. Obtención de los extractos: A partir de 250 g. de tallo seco y molido se procedió a hacer una maceración con hexano por 48 h, luego se realizó un reflujo por 3 h, y se filtró en caliente, este filtrado fue considerado como el extracto hexánico.. A. Al residuo que se obtuvo en el papel de filtro se dejo evaporar totalmente el. M IC. hexano, para luego ser macerado por 48 h, con alcohol etanólico de 96º y. Q. UI. posteriormente se realizó un reflujo por 3 h para ser filtrado en frio, luego se. BI. O. eliminó el solvente para concentrar el extracto, al cual se le añadió agua destilada y. Y. se filtró, el residuo obtenido en el papel de filtro corresponde al extracto etanólico y. FA. 2.2. Obtención de las diluciones:. RM. AC I. A. el filtrado corresponde al extracto acuoso15.. DE. A partir de los extractos obtenidos, se realizaron diluciones teniendo como. TE CA. disolvente al dimetil sulfóxido (DMSO), para el caso del extracto hexánico y. BI BL IO. etanólico, ya que el extracto acuoso no necesita disolvente15.. 2.3. Determinación del efecto leishmanicida in vitro: 2.3.1. Obtención de promastigotas: 2.1.1.1. Cultivo: A partir de un cultivo madre se realizaron sub-cultivos en medio BHI enriquecido con 10 % de sangre de conejo desfibrinado y suplementado con gentamicina16. Se realizaron evaluaciones hasta que el cultivo alcanzó la fase logarítmica a partir del cual se utilizó para el ensayo in vitro16.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(22) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.1.1.2. Preparación de las concentraciones del parásito: Se tomó una alícuota del cultivo y se llevó inmediatamente a la cámara de Neubauer para su respectivo conteo. Se contó los parásitos que se encuentran en la totalidad de los cuadrantes. Para determinar el número de parásitos. M IC. A. presentes de cada mililitro se empleó la siguiente fórmula:. O. Q. UI. N° parásitos/mL = N° células x factor de dilución x factor de conversión de cámara.. BI. Después de conocer el número de parásitos presentes por cada. AC I. A. Y. mililitro se ajustó a la concentración de 1x106 parásitos/mL 16.. RM. 2.1.1.3. Ejecución de la prueba in vitro: Determinación de la prueba in vitro: En una placa de. FA. 2.1.1.3.1 .. DE. poliestireno de 96 pocillos fondo plano, con una micropipeta se. TE CA. introdujo 70 uL de medio conteniendo parásitos a una concentración. BI BL IO. de 1x106 p/mL a cada pocillo, inmediatamente se añadió 40 uL de cada una de las diluciones de los extractos, al mezclarse ambos se obtuvieron. diferentes. concentraciones. que. se. denominaron. concentraciones de enfrentamiento. Luego se flameó la cubierta de las placas para inmediatamente cubrirlas con parafilm. A cada concentración de enfrentamiento probada se realizó por triplicado para disminuir errores en la lectura 15,16. Se realizó dos controles, en el Control 1, para la gentamicina. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(23) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 0.06% se sustituyó la droga con la misma cantidad de antibiótico, el Control 2 para el disolvente DMSO se sustituyó la droga con la misma cantidad de disolvente empleado en la disolución del extracto. Se flameó la cubierta de las placas antes de cubrir las mismas y luego se llevó a estufa de cultivo a 28°C, se realizaron las observaciones 12 y 24 horas de realizado el. A. microscópicas a 1, 2, 3, 6,. Q. UI. M IC. enfrentamiento15, 16.. BI. O. 2.1.1.4. Lecturas: Las lecturas se realizaron colocando muestra de cada. Y. pocillo a la cámara de Neubauer, haciendo uso del microscopio a. ANÁLISIS DE RESULTADOS 17:. FA. 2.4.. RM. AC I. A. diferentes tiempos y teniendo en cuenta la movilidad del parásito17.. DE. Se recogieron los datos en función de la actividad leishmanicida de las diluciones. TE CA. de los extractos del tallo de Croton alnifolius L., realizando las lecturas microscópicas cualitativas y se expresaron los resultados de acuerdo a la siguiente. BI BL IO. tabla:. ++. Buena actividad. +. Poca actividad. -. No actividad. ninguna movilidad (parásitos/mL) movilidad media (parásitos/mL) buena movilidad (parásitos/mL). III. RESULTADOS:. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(24) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Cuadro Nº 1: Determinación preliminar del efecto in vitro de los extractos del tallo de Croton alnifolius L sobre Leishmania (v) peruviana.. EXTRACTO. % 1. 2. 3. 6. 12. 24. -. -. -. -. -. -. -. -. -. -. -. -. -. -. -. -. -. -. ++. ++. ++. ++. ++. ++. ++. ++. ++. ++. ++. ++. 8. 8. A. Y. BI. ++. RM. Gentamicina. FA. CONTROL 1. 8. AC I. Acuoso. 0.06. ++. Q. ++. O. Alcohólico. ++. UI. ++ Croton alnifolius L. A. Hexánico. HORAS. M IC. TRATAMIENTO. ++. -. -. -. -. -. -. -. -. -. -. -. -. -. -. -. -. -. -. -. -. -. -. -. -. -. -. -. -. -. -. -. -. -. -. -. -. -. -. -. -. -. -. -. -. -. -. -. -. -. -. -. -. -. -. TE CA. DE. (160mg/100ml). CONTROL 2. DIMETILSULFOXIDO 36.4. BI BL IO. (DMSO). Leyenda: ++ -. Buena actividad No actividad. ninguna movilidad (parásitos/mL) buena movilidad (parásitos/mL). Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(25) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Cuadro Nº 2: Efecto in vitro del extracto etanólico del tallo de Croton alnifolius L. sobre Leishmania (v) peruviana.. 2. 3. 6. 12. 24. +. +. +. +. -. -. +. +. +. +. -. -. +. +. +. +. -. -. ++. ++. ++. ++. ++. ++. ++. ++. ++. ++. ++. ++. ++. ++. ++. ++. ++. ++. ++. ++. ++. ++. ++. ++. ++. ++. ++. ++. ++. ++. ++. ++. ++. ++. ++. ++. ++. ++. ++. ++. ++. ++. ++. ++. ++. ++. ++. ++. ++. ++. ++. -. -. -. -. -. -. 0.06. -. -. -. -. -. -. -. -. -. -. -. -. -. -. -. -. -. -. -. -. -. -. -. -. -. -. -. -. -. -. Croton alnifolius L. 5.5. AC I. A. Y. ++ ++. FA. RM. ++. 8. TE CA. CONTROL 1. M IC. Q. 3.6. O. 0.06. BI. %. A. 1. UI. HORAS. DE. TRATAMIENTO. BI BL IO. (Gentamicina160mg/100ml). CONTROL 2. 36.4. DIMETILSULFOXIDO. Leyenda: ++. Buena actividad. ninguna movilidad (parásitos/mL). +. Poca actividad. movilidad media (parásitos/mL). -. No actividad. buena movilidad (parásitos/mL). Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(26) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. IV. DISCUSIÓN. Las plantas proveen una gran diversidad química y de bioactividad. Las condiciones geográficas y climáticas de países tropicales como el nuestro, hacen que se presente una. A. alta diversidad de flora que conforma un material potencial, poco explorado. M IC. científicamente; práctico y eficiente en el manejo de problemas epidemiológicos de. UI. diferentes orígenes, además de contribuir al conocimiento fitofarmacológico a través del. O. Q. uso de los recursos naturales y de brindar un respaldo científico del uso tradicional de las. A. Y. BI. plantas por las comunidades humanas18.. tratamiento de leishmaniasis, se están investigando metabolitos. RM. colaterales para el. AC I. Actualmente, en la búsqueda de mejores medicamentos con menos efectos. FA. secundarios de plantas medicinales con efecto leishmanicida entre los cuales se encuentran:. TE CA. DE. alcaloides, flavononoides, terpenos, esteroides y saponinas 19. Para la obtención de los extractos del tallo de Croton alnifolius (L), se usó hexano,. BI BL IO. agua y etanol siendo este ùltimo el que posee actividad leishmanicida, tal como se observa en el Cuadro Nº 1, debido a que el etanol de 96º es un solvente de polaridad intermedia, que llegaría a solubilizar fitoconstituyentes afines; ya que ofrece la capacidad de formar enlaces de hidrogeno y de ceder pares de electrones, y por poseer un extremo lipofílico ayuda a la solvatación de sustratos orgánicos, además su labor se ve facilitada por la secuencia del. procedimiento:. el. aumento. de. temperatura. que contribuye al. desplazamiento de la constante de equilibrio de saturación y aumenta la eficiencia del proceso, tamaño de partícula ya que, así se obtiene una mayor área de contacto con el. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(27) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. solvente y la agitación que hace que nuevas cantidades de solvente, pobre en las sustancias extraíbles, entre en contacto con el sólido y un nuevo punto de equilibrio de saturación sea alcanzado20, 21.. De acuerdo al Cuadro Nº 2, se observa un efecto leishmanicida a partir de la concentración de 3.6 % a todos los tiempos leídos, teniendo en cuenta la inmovilidad del. M IC. A. parásito, ésto debido posiblemente a que a partir de esta concentración se encuentran los. UI. metabolitos secundarios necesarios para obtener el efecto leishmancida; en cuanto a la. O. Q. concentración de 0.06 % se observa que en la primera hora de lectura se estaría. Y. BI. evidenciando la no movilidad del parásito, pero conforme el tiempo avanza, los parásitos. AC I. A. van recuperando su total movilidad a partir de las 12 horas, debido a que la concentración. RM. de metabolitos secundarios no es suficiente para evidenciar un efecto leishmanicida total.. FA. El grupo control con gentamicina al 0.06% se realizó con el propósito de evidenciar. DE. que esta dilución solamente cumple la finalidad de actuar como un agente antimicrobiano. TE CA. más no leishmanicida, tal como lo demuestran los resultados, ya que la movilidad del parasito no se ve modificada. Del mismo modo el solvente utilizado para la dilución de los. BI BL IO. extractos DMSO, a pesar de encontrarse a una concentración de 36.4 % tampoco afecta la movilidad del parásito, por lo cual se infiere que algunos de los principios activos presentes en el extracto etanólico del tallo de Croton alnifolius L. son los que en realidad ejercen el efecto leishmanicida sobre Leishmania (V) peruviana in vitro.. Teniendo en cuenta que la especie de Croton alnifolius presenta metabolitos secundarios, tales como: taninos, flavonoides, esteroides, quinonas, cardenólidos, alcaloides y saponinas, se deduce que los flavonoides, esteroides, alcaloides y saponinas presentes en. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(28) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. las especies Croton alnifolius poseen actividad leishmanicida sobre Leishmania (V) peruviana in vitro2, 22.. La membrana celular de la leishmania, es una bicapa lipídica convencional, pero en su superficie se han identificado una serie de moléculas relacionadas con la capacidad invasiva del parásito; tales como fosfoglucoproteinas, lipofosfoglicanos, fosfolípidos de. M IC. A. glucosilinositol, proteofosfoglicanos 2, 23.. Q. UI. En vista de la constante resistencia a los fármacos leishmanicidas, se están. BI. O. desarrollando estrategias para inhibir la fosfoglucoproteina de Leishmania, según se. Y. menciona en un artículo científico, el cual postula además que se eligieron los dominios. AC I. A. citosólicos de unión a nucleótidos (NBD) como nuevas dianas farmacológicas. Su. RM. purificación posibilitó la selección de inhibidores específicos, entre los que destacan los. FA. flavonoides, y el establecimiento de relaciones estructura-actividad que han permitido el. DE. diseño racional de inhibidores cada vez más potentes. Hay que destacar que existe una. TE CA. correlación total entre la afinidad de estos compuestos por los dominios citosólicos y su capacidad para modular la acumulación intracelular de fármaco y sensibilizar a los. BI BL IO. parásitos resistentes23.. Aunque el mecanismo de acción leishmanicida de los alcaloides no se conoce aún, es claro que existe una asociación con la estructura química y en especial, con la longitud del grupo de sustitución, que podría influir de manera notable en la actividad sobre los parásitos. En los últimos años han surgido inferencias interesantes a partir de análisis de estructura del alcaloides/actividad leishmanicida, se ha establecido que el estado de oxidación y la naturaleza de substitución de los átomos del nitrógeno son aspectos. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(29) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. importantes para la actividad leishmanicida y determinan la bioactividad del alcaloide. La cuaternización de uno o más átomos de nitrógeno resulta en la pérdida de actividad leishmanicida, la suma de un grupo fenólico hidroxilo puede aumentar la actividad, al igual que diferencias en la estequiometria además, se sugiere que la estructura relativamente planar tetracíclica confiere la actividad antiparasitaria de estos compuestos18.. M IC. A. Según la literatura, la berberina, alcaloide ampliamente estudiado, inhibe la. UI. incorporación de adenina, uracilo y timidina en los ácidos nucleicos, y de leucina en las. O. Q. proteínas de los amastigotes de L. donovani. Lo anterior muestra que los compuestos tipo. Y. BI. alcaloide ejercen un efecto inhibitorio sobre los parásitos asociados a profundos cambios. AC I. A. ultraestructurales, o bien sobre la biosíntesis de macromoléculas, fenómenos que probablemente se produzcan también con el extracto etanólico del tallo de Croton alnifolius. FA. RM. (L) sobre Leishmania (V) peruviana in vitro18.. DE. En cuanto a las saponinas, éstas incrementan la permeabilidad de las membranas. TE CA. celulares y muestran una gran actividad leishmanicida contra amastigotes de L. (L). BI BL IO. donovani y L. (L) major 19.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(30) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. V. CONCLUSIONES:. Los resultados obtenidos en el presente trabajo nos llevan a la siguiente conclusión:. A. 1. Se determinó que el extracto etanólico del tallo de Croton alnifolius L. (Tunga). M IC. posee efecto leishmanicida in vitro en Leishmania (V) peruviana a partir de la. BI BL IO. TE CA. DE. FA. RM. AC I. A. Y. BI. O. Q. UI. concentración de 3.6%.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(31) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. VI. RECOMENDACIONES. 1. Realizar futuros estudios para evaluar el posible efecto tòxico del extracto del. A. tallo de Croton alnifolius L.. M IC. 2. Divulgar la información obtenida de este estudio para contribuir a promover la. BI BL IO. TE CA. DE. FA. RM. AC I. A. Y. BI. O. Q. UI. evaluación preliminar de metabolitos secundario en plantas.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(32) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. VII.. 1.. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS:. GOODMAN y GILMAN. Las bases farmacológicas de la terapéutica. 10 ed. Ed. Mc-. ALVAR, J. Las leishmaniasis de la biología al control. Centro Colaborador de la OMS. M IC. 2.. A. Graw Hill. México. 2001. pp: 1116.. UI. para Leishmaniasis. Servicio de Parasitología. Centro Nacional de Microbiología.. Y. ORDEÑANA, R. Optimización de la técnica del ADN Polimórfico Amplificado al. A. 3.. BI. O. Q. Instituto de Salud Carlos III. 2ª ed. Madrid.2001. pp: 17, 18, 23, 24.. RM. ZEGARRA, R.; SÁNCHEZ, L. Leishmaniasis cutánea: Dermatología Peruana 2005;. CÁCERES, O.; CÁCERES P. Incriminación de Lutzomyia spp. como vector de. TE CA. 5.. DE. vol 15: No 1. pp: 62, 63, 64.. FA. 4.. AC I. Azar (RAPD) para la identificación de especies de Leishmania. pp: 11.. 6.. BI BL IO. patógenos de las leishmaniasis en el departamento de Puno. 2005 pp: 4. TORRES, R.; BARROETA, S.: Tratamiento de la Leishmaniasis cutánea localizada con infiltraciones perilesionales de Glucantime y Lidocaína. pp:3, 9, 10. 7.. BITTNER, M, ALARCÓN J. y Col. estudio químico de especies de la familia euphorbiaceae en Chile. Bol. Soc. Chil. Quím. v.46 n.4 Concepción dic. 2001. pp:4.. 8.. GUERRERO, M. Flavonoides del. Género Croton. Rev col. Ciencias Químicas. Farmacéuticas. 33(1), 77-78. Disponible en:; www.farmacia.unal.edu.com.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(33) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 9.. MOSTACERO, J. Taxonomía de las fanerógamas útiles del Perú. Perú: Normas Legales S.A.C. 2002. pp: 400-401.. 10. MUÑOZ, A. Plantas medicinales empleadas en el tratamiento de la leishmaniasis [fecha. de. acceso:. 05/04/2009]. disponible. en:. A. http://sisbib.unmsm.edu.pe/bVrevistas/folia/Vol14_N3/dermofar.htm.. M IC. 11. PÉREZ, J.; CASTANYS F.. Estrategias terapéuticas y bases moleculares de la. UI. resistencia a fármacos frente a la leishmaniasis. Instituto de Parasitología y. BI. O. Q. Biomedicina "López-Neyra" (CSIC). Biojournal.net. pp:2.. A. Y. 12. NARDI, G y Col. Antioxidant and anti-inflammatory effects of products from Croton. AC I. celtidifolius Bailon on carrageenan-induced pleurisy in rats. Phytomedicine 14. 2007.. AMIR, R. Chemistry and biological activity of secondary metabolites in Euphorbia. DE. 13.. FA. RM. pp: 115–122.. TE CA. from Iran. Phytochemistry 67. 2006. 14. GUERRERO, M y col. Vasorelaxant effect of new neo-clerodane diterpenoids isolated. BI BL IO. from Croton schiedeanus. Journal of Ethnopharmacology 94. 2004. pp: 185–189. 15. VALVERDE, J. Determinación in vitro del efecto antileishmaniano de los Fitoconstituyentes de Pernettya prostata. Tesis Universidad Nacional de Trujillo. Perú. 1998. pp: 13, 18. 16. FOURNET, A; ANGELO, A; MUÑOZ, V. Antiprotozoal Activity of Quinoline Alkaloids Isolated From Galipea Longiflora, A Bolivian Plant Used As A Treatment For Cutaneuos Leishmaniasis. Phitotherapy Research. Vol 8. 1994. pp.: 174-178.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(34) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 17. HERNÁNDEZ, J, TENORIO , J y Col. Evaluación de la actividad leishmanicida de los extractos etanólicos de Rollinia rufinervis sobre Leishmania chagasi. Revista de la facultad de química farmacéutica. Vol 12 no 2. 2005. Universidad de Antioquia, Medellin - Colombia. pp: 37-43. [Recibido: abril 4 de 2005 Aceptado: agosto 23 de 2005].. M IC. A. 18. MORENO, A; ROBLES, J y Col. Actividad in vitro de la mezcla de alcaloides de. UI. Ervatamia coronaria (Jacq) Staff. Apocynaceae sobre amastigotes de Leishmania. O. Q. braziliensis. Revista Brasilera de Farmacognosia. Vol.18 no.3. Pontificia Universidad. BI. Javeriana, Facultad de Ciencias Básicas, Departamento de Biología, Bogotá, Colombia.. AC I. A. Y. pp: 15, 65, 68.. RM. 19. BRITO, S; CRESCENTE, O y Col. Eficacia de un ácido kaurénico extraído de la. FA. planta venezolana Wedelia triobata (Asterácea) contra Leishmania (Viannia). Identificación de familias de metabolitos secundarios en Myrica. BI BL IO. 20. SANTIZO, I.. TE CA. – Colombia. pp: 185.. DE. brazilensis. Biomédica, octubre, 2006 Vol. 6 no 1. Instituto nacional de salud. Bogotá. cerífera. Universidad de San Carlos de Guatemala Facultad de Ciencias Químicas y Farmacia Guatemala. Febrero 2004. pp: 13. 21. GARCIA E. DETERMINACION DE Los metabolitos secundarios de la especie Mirabilis jalapa L. “Buenas Tardes”. Trabajo de investigación I. Universidad Nacional de Trujillo. 2007. pp:15. 22. CARRANZA, D; HUAYANAY, J. Determinación de metabolitos secundarios del tallo de Croton alnifolius L. (Tunga) . Universidad Nacional de Trujillo. 2009. pp: 22, 23, 34.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(35) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 23. CASTANYS, S; GAMARRO, F. Estrategias terapéuticas y bases moleculares de la resistencia a fármacos frente a la leishmaniasis. Instituto de Parasitología y Biomedicina "López-Neyra" (CSIC) Parque Tecnológico de Ciencias de la Salud Granada –España.. BI BL IO. TE CA. DE. FA. RM. AC I. A. Y. BI. O. Q. UI. M IC. A. Biojournal. Net. no 5. 2006. pp: 13, 14.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

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