Tamizaje fitoquímico y efecto antifúngico in vitro del extracto fluido de las hojas de Phthirusa robusta Rusby (suelda con suelda) frente a Candida albicans
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(2) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. DEDICATORIA. A Dios: Por ser mi guía y mi fortaleza, por no dejar que caiga en este largo proceso de formación educativa. Por su protección infinita. Al brindarme la inteligencia y sabiduría en todo lo. IC A. Emprendido.. BI. O. Q. UI M. Nuria. Y. A Mi Familia:. IA. Eduardo y Dora, mis padres; Cristina y Ángeles, mis. AC. hermanas; mi pequeño Luciano y a Manolo mi cuñado,. RM. este trabajo va dedicado para todos ustedes los amo. FA. mucho.. DE. Muchas gracias por apoyarme con su amor, comprensión, apoyo moral y estando conmigo en los momentos alegres. de arena para llegar hasta aquí y lograr ser un gran profesional. Nuria. BI BL. IO. TE. CA. y tristes de mi vida, cada uno de ustedes puso un granito. A los amores de mi vida:. Jorge y Dieguito, gracias a ustedes no he desviado mi camino, me he levantado cuando he caído, y por ustedes es que cada esfuerzo que doy tiene sentido. Los amo demasiado Nuria. ii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(3) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. DEDICATORIA. A Dios, por guiar cada uno de mis pasos y mantener mi camino firme y lleno de bendiciones.. IC A. Leslie. A mis padres, Miguel y Luz, por ser de. responsabilidad. y. UI M. modelos. Q. esfuerzo y adentrar en mí estos. BI. O. valores. Por la confianza depositada. Y. y el apoyo incondicional otorgado en. IA. cada etapa de mi vida.. FA. RM. AC. Leslie. para avanzar día a día hacia mis metas y poder así, guiarlo hacia las suyas. Leslie. BI BL. IO. TE. CA. DE. A mi hermano Miguel, mi más grande motivo. A mi sobrina Luciana, a mi abuela Esther y a mi tía Mary, por ser una fuente de inspiración y fortaleza en mi camino. Leslie. iii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(4) Y. BI. O. Q. UI M. IC A. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. AC. IA. AGRADECIMIENTO.. RM. Le brindamos nuestro profundo y especial agradecimiento a nuestra asesora Marilú. FA. Roxana Soto Vásquez, quien con su paciencia y conocimiento nos ha sabido orientar a lo. BI BL. IO. TE. CA. DE. largo de este camino.. iv Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(5) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. PRESENTACIÓN SEÑORES MIEMBROS DEL JURADO DICTAMINADOR: En cumplimiento con las disposiciones vigentes emanadas del reglamento de Grados y Títulos de la Facultad de Farmacia y Bioquímica de la Universidad Nacional de Trujillo, sometemos a vuestra consideración y elevado criterio, el presente informe de. IC A. investigación titulado:. UI M. “Tamizaje fitoquímico y efecto antifúngico in vitro del extracto fluido de la hojas. O. Q. de Phthirusa robusta Rusby (suelda con suelda) frente a Candida albicans.”. BI. Con el cual pretendo optar el Grado de Bachiller en Farmacia y Bioquímica. Esperando. Y. que el jurado se sirva a calificar este trabajo según su criterio establecido a pesar de la. AC. IA. existencia de alguna deficiencia encontrada durante el desarrollo del presente trabajo. Trujillo, Mayo del 2018. BI BL. IO. TE. CA. DE. FA. RM. de investigación.. LLONTOP LÓPEZ, Nuria Gabriela AUTORA DNI: 72126046. ROJAS ONTANEDA, Leslie Jenifer AUTORA DNI: 76850173. v Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(6) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. UI M. IC A. JURADO DICTAMINADOR. (Presidente). DE. FA. RM. AC. IA. Y. BI. O. Q. Dr. Edmundo Arturo Venegas Casanova. (Miembro). BI BL. IO. TE. CA. Dr. Francisco Moisés Abanto Zamora. Mg. Marilú Roxana Soto Vásquez. (Asesora). vi Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(7) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. RESUMEN El presente trabajo de investigación, tuvo como objetivo realizar el tamizaje fitoquímico, y evaluar el efecto in vitro del extracto fluido de la hojas de Phthirusa robusta Rusby (suelda con suelda) frente a Candida albicans. Se obtuvo el extracto fluido mediante la percolación fraccionada de 1 kg de hojas de Phthirusa robusta Rusby (suelda con suelda) procedente de la ciudad de Tarapoto, provincia de San Martín, región de San Martín. Se llevó a sequedad el extracto fluido y. IC A. se realizó el tamizaje fitoquímico preliminar mediante el método de Martinez y Cuéllar.. UI M. El extracto fluido se fraccionó en extracto clorofórmico, etanólico y acuoso, en los cuales se realizaron los diferentes ensayos fitoquímicos. Finalmente se determinó el efecto. O. Q. antifúngico del extracto fluido de Phthirusa robusta Rusby “suelda con suelda” mediante. BI. el método de difusión en discos – Kirby & Bauer a concentraciones de 0.1 g/ml, 0.2 g/ml,. Y. 0.3 g/ml frente a Candida albicans. En la fracción clorofórmica de hojas de Phthirusa. AC. IA. robusta Rusby se identificaron cualitativamente triterpenos-esteroides, compuestos. RM. grasos. En la fracción etanólica de hojas de Phthirusa robusta Rusby se identificaron cualitativamente azúcares reductores, triterpenos-esteroides, fenoles, taninos, quinonas,. FA. cardenólidos, alcaloides, aminoácidos, flavonoides y antocianidina, y en la fracción. DE. acuosa de hojas de Phthirusa robusta Rusby se identificaron cualitativamente alcaloides,. CA. flavonoides, azúcares reductores, fenoles/taninos. El extracto fluido de hojas de. TE. Phthirusa robusta Rusby “suelda con suelda” presentó a concentraciones de 0.1 g/ml,. IO. 0.2 g/ml y 0.3 g/mL halos de inhibición, con valores promedios de 8.69mm ± 2.1 , 11.38. BI BL. mm ± 0.5, 13.06 mm ± 1.53 respectivamente. El extracto fluido, con diferencias estadísticamente signifitcativas (p<0.05) a concentraciones de 0.2 y 0.3 g/ml, presentaron efecto antifúngico frente a Candida albicans.. PALABRAS CLAVES: Tamizaje fitoquímico,. Phthirusa robusta Rusby, efecto. antifúngico, Candida albicans, in vitro.. vii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(8) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ABSTRACT. The objective of this research work was to carry out phytochemical screening and to evaluate the in vitro effect of Phthirusa robusta Rusby leaf extract (soldered solder) against Candida albicans. The liquid extract was obtained through the fractional percolation of 1 kg of leaves of Phthirusa robusta Rusby (welded with solder) from the city of Tarapoto, province of San Martín, San Martín region. A sequence of the fluid extract was carried out and preliminary. IC A. phytochemical screening was carried out using the Martínez and Cuéllar method. The fluid extract was divided into chloroform, ethanolic and aqueous extracts, in which the. UI M. different phytochemical tests were carried out. Finally, the antifungal effect of the. Q. Phthirusa robusta Rusby fluid extract "solder solder" was determined by the disk diffusion. BI. O. method - Kirby & Bauer at concentrations of 0.1 g / ml, 0.2 g / ml, 0.3 g / ml against. Y. Candida albicans. In the chloroform fraction of leaves of Phthirusa robusta Rusby,. IA. triterpenes-steroids, fatty compounds, were qualitatively identified. In the ethanolic. AC. fraction of leaves of Phthirusa robusta Rusby, reducing sugars, triterpene-steroids,. RM. phenols, tannins, quinones, cardenolides, alkaloids, amino acids, flavonoids and. FA. anthocyanidin were qualitatively identified, and in the leaf fraction of Phthirusa robusta Rusby, alkaloids were qualitatively identified , flavonoids, reducing sugars, phenols /. DE. tannins. The fluid extract of leaves of Phthirusa robusta Rusby "welds with solder". CA. presented a content of 0.1 g / ml, 0.2 g / ml and 0.3 g / ml of halos of inhibition, with. TE. average values of 8.69mm ± 2.1, 11.38 mm ± 0.5 , 13.06 mm ± 1.53 respectively.. IO. The fluid extract, with statistically significant differences (p <0.05) at concentrations of. BI BL. 0.2 and 0.3 g / ml, presenting antifungal effect against Candida albicans.. KEY WORDS: Phytochemical screening, Phthirusa robusta Rusby, antifungal effect, Candida albicans, in vitro.. ÍNDICE. viii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(9) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Pág. DEDICATORIA………………………………………………………………………. i. AGRADECIMIENTO………………………………………………………………. iii. PRESENTACIÓN………………………………………………………………………. iv. JURADO DICTAMINADOR………………………………………………………. v. RESUMEN……………………………………………………………………………. vi. IC A. ABSTRACT……………………………………………………………………………. 1. Q. UI M. I.-INTRODUCCIÓN……………………………………………………………….... vii. 6. Y. BI. O. II.-MATERIAL Y MÉTODO………………………………………………………... 17. RM. AC. IA. III.- RESULTADOS…………………………………………………………………. DE. FA. IV.-DISCUSIÓN………………………………………………………………………… 21. 25. TE. CA. V.-CONCLUSIONES…………………………………………………………………. BI BL. IO. VI.-REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS……………………………………………. ANEXOS…………………………………………………….…………………………. 26. 29. ix Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(10) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. I.- INTRODUCCIÓN. Las infecciones por especies del género Candida han incrementado su incidencia en las tres últimas décadas debido a múltiples factores del huésped y tratamientos o prácticas médicas, constituyendo actualmente una causa importante de morbi-mortalidad, especialmente en las infecciones del torrente circulatorio.1 Candida albicans es un hongo dimórfico que puede ser comensal o un patógeno. IC A. oportunista, con la capacidad de causar una variedad de infecciones, que van desde. UI M. superficiales hasta amenazas para la vida. Los factores predisponentes para infecciones por C. albicans incluye la terapia inmunosupresora, la terapia con antibióticos, el uso de. Q. dispositivos permanentes y catéteres intravenosos, la infección por VIH, la diabetes y la. Y. BI. O. vejez .2. IA. Es un hongo que normalmente cumple una función reguladora y protectora en el intestino,. AC. ya que interviene en la fermentación de los azúcares y ayuda a la eliminación de toxinas. RM. causadas por una digestión insuficiente debido a la falta de enzimas digestivas y poco. FA. ácido en el estómago. El consumo de mucha azúcar aumenta la fermentación por este hongo generando síntomas como abdomen aventado, dolor cólico, retorcijones, agrieras,. CA. DE. gases e indigestion 3.. TE. Cuando la C. albicans crece exageradamente en el intestino ocurre algo trágico: esta. IO. perfora la mucosa intestinal y pasa a la sangre invadiendo cualquier parte del cuerpo, en. BI BL. especial cerebro y sistema endocrino produciendo síntomas muy comunes que reflejan la pérdida de energía y vitalidad como fatiga crónica, sueño durante el día, pereza al levantarse, cansancio todo el tiempo como si no hubiera dormido, sueño que no es reparador, bostezadera, agotamiento físico, sueño cuando se estudia, pereza mental, pereza sexual, entre otros 3. C. albicans es capaz de invadir prácticamente todo sitio en el cuerpo, incluyendo los tejidos profundos y órganos, sitios superficiales tales como piel, uñas y mucosa. Infecciones superficiales, tales como infecciones agudas de pseudomembranosas la cavidad oral o la vagina, son algunas de las más frecuentes 4.. 1 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(11) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. El reconocimiento de receptores celulares en el hospedero por C. albicans es esencial para su supervivencia. La evolución de este microorganismo de comensal a patógeno es el resultado de su habilidad para colonizar células epiteliales en la mucosa y seleccionar adicionalmente otros atributos que promuevan su invasión.2 Después del fenómeno de adherencia, se establecen interacciones entre el hongo y el hospedero que son críticas para el balance entre la enfermedad y la salud. C. albicans es capaz de adoptar diversas formas que indudablemente constituyen un mecanismo de adaptación a su ambiente y la forma micelial es considerada más virulenta que la fase. IC A. levaduriforme. Se postula que la habilidad de C. albicans para formar tubos germinales. UI M. es su mayor factor de virulencia pero no hay estudios que avalen este punto de vista. Muestras obtenidas de tejidos animales y humanos enfermos casi siempre contienen hifas,. O. Q. pseudohifas y levaduras, sin embargo se piensa que el tubo germinal es más adherente a. Y. BI. las superficies de las mucosas.2,3. IA. Actualmente, existe una variedad muy amplia de sustancias bajo la denominación. AC. genérica de antifúngico, que responde a diversas estructuras químicas y mecanismo de. RM. acción. La alternativa de primera línea para uso son los azoles. Según el Formulario. FA. Nacional de Medicamentos Esenciales del Perú, los fármacos indicados para Candidiasis. DE. son Anfotericina B, Clotrimazol, Fluconazol, Itroconazol y Nistatina4,5.. CA. El ergosterol es un componente lipídico de la membrana sobre el cual actúa la mayoría. TE. de los fármacos antifúngicos. Es el esterol que predomina en las células fúngicas y, entre. IO. sus funciones, da fluidez e integridad a la membrana, permite la función apropiada de. BI BL. muchas enzimas unidas a ella y, al favorecer la función de la quitina sintetasa, permite el crecimiento y la división celular. Las levaduras y los hongos filamentosos presentan, generalmente, yemaciones o células hijas, por lo que es preciso que la membrana sea bastante dinámica 5. Los azoles y la amorolfina, actúan en ciertas etapas de la síntesis del ergosterol; inhibiendo específicamente algunas enzimas, por ejemplo, las alilaminas bloquean la escualeno epoxidasa y los azoles bloquean la 14 alfa lanosterol desmetilasa. Estas enzimas son codificadas por una familia de genes que pueden mutar y generar una resistencia secundaria a los antifúngicos 6.. 2 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(12) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Estos fármacos cambiaron la historia de la medicina y se considera que los antifúngicos sistémicos derivados del imidazol y del triazol constituyen el avance más importante de los últimos años, en el tratamiento de las micosis sistémicas oportunistas.6,7 Sin embargo, los azoles no siempre son fungicidas; depende de su tipo. Los imidazoles tienden a ser fungicidas en concentraciones altas, pero en general se acepta que son fungistáticos y que su efecto es limitado, aunque la situación ha cambiado con los nuevos fármacos, porque son más potentes sobre las células. El hecho de ser fungistático se relaciona directamente con la capacidad de desarrollar resistencia secundaria, porque. IC A. siempre quedan poblaciones que no mueren con el fármaco y comienzan a generar. UI M. mecanismos para defenderse de este fármaco.7. O. Q. La toxicidad presenta una diferencia importante entre los dos grupos de azoles, debido a. BI. su selectividad. En consecuencia, los imidazoles son más tóxicos. Por ejemplo, el. Y. ketoconazol inhibe la síntesis de testosterona en concentraciones 100 veces más bajas que. IA. el fluconazol; a su vez, hay menos actividad intrínseca de los triazoles ante Candida. AC. albicans y se necesita CMIs más altas; por eso, muchos de estos fármacos, como el. RM. clotrimazol, se utilizan en formulaciones tópicas y pueden tener un efecto fungicida en el. DE. FA. sitio de infección 7,8.. Es por esta razón que la gente en países como el nuestro, busca nuevas alternativas y. CA. prefiere muchas veces el tratamiento de sus afecciones con plantas medicinales, el uso. TE. de las plantas medicinales se remonta a la época prehistórica en la mayoría de las culturas. IO. conocidas. Gracias a sus infinitos conocimientos tradicionales, esta industria ancestral. BI BL. persiste en el equilibrio del bienestar integral tanto de los pacientes como de los practicantes.8. A pesar del paso del tiempo y el avance de la tecnología médica, las plantas medicinales continúan siendo la panacea “de cabecera” de muchas familias. Esto es posible dado que algunas plantas liberan compuestos llamados metabolitos primarios, los cuales cuentan con glúcidos y lípidos, y metabolitos secundarios. Ambos compuestos concentran extractos que optimizan el funcionamiento de varias partes del cuerpo 8,9.. 3 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(13) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Phthirusa robusta Rusby, es una planta medicinal perteneciente a la familia de Loranthaceae, considerada una planta parásita, en forma de enredadera, la mayor importancia de la familia es que su vida parasítica representa grandes riesgos para los cultivos frutales, principalmente los cítricos, peras y manzanas. Habitan en áreas forestales de regiones tropicales y templadas de todo el mundo 9. Se distribuye ampliamente por toda América tropical. Es recta, con la corteza de color gris. Sus hojas son coriáceas, ovaladas, de 3 a 10 centímetros de longitud. Presenta flores de 4 a 6 milímetros de longitud. Su fruto es oblongo y de color rojo. Sus hojas se utilizan. UI M. IC A. para combatir las úlceras estomacales, las fracturas y las infecciones de la piel 9,10. En un estudio realizado en el 2003 en Caracas, denominada “Actividad bactericida y. O. Q. fungicida de algunas plantas utilizadas en la medicina tradicional venezolana” que tuvo. BI. como autores a Lapenna, E y col, se demostró que la planta Phthirusa sp tuvo un mayor. IA. Y. efecto contra el hongo Candida albicans en un extracto metanólico 10.. AC. Debido a que esta planta es muy poco estudiada y casi no se han encontrado trabajos. RM. científicos y debido a la gran incidencia de infecciones fúngicas por el hongo Candida. FA. albicans es que se busca realizar este estudio en el cual se investiga los extractos,. DE. etanólicos, acuosos y clorofórmicos de Phthirusa robusta Rusby en Candida albicans.. CA. Por lo expuesto se plantea el siguiente problema:. TE. ¿Los fitoconstituyentes del extracto fluido de las hojas de Phthirusa robusta Rusby. BI BL. IO. (Suelda con suelda) presentarán efecto antifúngico frente a Candida Albicans? Postulándose la siguiente hipótesis: Los fitoconstituyentes del extracto fluido de las hojas de Phthirusa robusta Rusby (Suelda con suelda) presentan efecto antifúngico frente a Candida Albicans. 4 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(14) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. OBJETIVOS Objetivo general: Realizar el tamizaje fitoquímico y evaluar el efecto antifúngico in vitro del extracto fluido de hojas de Phthirusa robusta Rusby (Suelda con suelda) frente a Candida albicans. Objetivos específicos: . Determinar los fitoconstituyentes del extracto fluído de las hojas de Phthirusa. Determinar el efecto in vitro del extracto fluído de las hojas de Phthirusa. UI M. . IC A. robusta Rusby (Suelda con suelda).. BI BL. IO. TE. CA. DE. FA. RM. AC. IA. Y. BI. O. Q. robusta Rusby (Suelda con suelda) frente a Candida albicans. 5 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(15) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. II. MATERIAL Y MÉTODO MATERIAL: 1. Material botánico - 1 kg de hojas de Phthirusa robusta Rusby (suelda con suelda), recolectadas. IC A. del distrito Tarapoto, provincia de San Martín, región de San Martín.. UI M. 2. Material biológico:. O. Q. - Cándida albicans ATCC 90028. BI. Proporcionada por el departamento de microbiología y parasitología de la. AC. IA. Y. Facultad de Medicina de la Universidad Nacional de Trujillo. FA. RM. 3. Material farmacológico. DE. - Discos de sensibilidad: Fluconazol 25ug. Materiales de vidrio de uso común en laboratorio. BI BL. IO. . TE. CA. 4. Material de laboratorio. 4.1. Equipos e instrumentos: . Balanza analítica OHAUS. . Baño maría MEMMERT. . Cocina eléctrica. . Estufa MEMMERT. . Micropipeta BIOHIT. . Refrigeradora ELECTROLUX. . Autoclave. . Horno. 6 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(16) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 4.2. Reactivos: Anhídrido acético. . Acetato de sodio. . Ácido clorhídrico. . Ácido sulfúrico. . Alcohol amílico. . Amoníaco. . Carbonato de sodio. . Cloroformo. . Cloruro de sodio. . Cloruro de sodio (10%). . Hidróxido de potasio. . Hidróxido de sodio. . Magnesio metálico. . Ninhidrina. . Tricloruro férrico (5%). . Reactivo de Baljet. . Reactivo Dragendorff. . Reactivo de Fehling. . Reactivo de Liebermann-Burchard. UI M Q O BI Y IA. AC. RM. FA. DE. CA. Reactivo de Mayer. BI BL. IO. . TE. . IC A. . . Reactivo de Wagner Solución de gelatina (1%). 4.3. Solventes: . Diclorometano. Alcohol . Agua. 4.4. Otros . Alcoholímetro. 7 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(17) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. . Algodón hidrófilo. . Mascarillas. . Guantes estériles. . Papel de filtro Whatman Nº 01. . Asa bacteriológica. . Placas petri. . Mechero de Bunsen. IC A. MÉTODO. UI M. 1. Recolección de la muestra:. O. Q. La especie de Phthirusa robusta Rusby se recolectó del distrito de Tarapoto, provincia. BI. de San Martín, región San Martín. Ubicado a una altitud de 250 m.s.n.m. La recolección. Y. de la especie se realizó por el método convencional de herborización, se seleccionó el. AC. IA. material en el campo y verificó sus buenas condiciones.. RM. 2. Identificación y determinación taxonómica de la especie:. FA. Se llevó un ejemplar de la planta al Herbarium Antenor Orrego (HAO) para su. DE. identificación y posterior verificación taxonómica según el sistema filogenético de la. CA. especie. (Código de depósito anexo 1). Selección de la muestra: El material vegetal recolectado fue transportado al. BI BL. . IO. TE. 3. Preparación de la muestra:. laboratorio de Farmacognosia de la Facultad de Farmacia y Bioquímica de la Universidad Nacional de Trujillo, en donde se eliminó las sustancias extrañas presentes en el material vegetal. . Lavado de la droga: Luego de la separación de las sustancias extrañas, se procedió a lavar el material vegetal con agua destilada, seguido de una desinfección utilizando hipoclorito de sodio a una concentración de 200 ppm durante 5 minutos. Posteriormente se realizó un enjuague con suficiente agua destilada estéril, esto fue para retirar los residuos de hipoclorito.. 8 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(18) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. . Secado: Una vez lavado las hojas, se procedió a adecuar la droga en bolsas de papel Kraft con orificios y se colocó en la estufa a una temperatura de 40 °C y se realizó la determinación de peso cada 24 horas hasta valores constantes.. . Pulverización: Una vez secada las hojas se pulverizaron con ayuda de un mortero.. . Tamizaje: El material obtenido de la pulverización, se pasó a través del tamiz Nro 0.75. . Almacenamiento: El polvo de las hojas se guardó en frascos de vidrio de color. IC A. ámbar de boca ancha. 12. UI M. 4. Preparación del extracto fluido:. O. Q. Se pesó 100 g de polvo tamizado de hojas de Phthirusa robusta Rusby, luego se separó. BI. en porciones equivalentes a 50 g, 30 g y 20 g de droga. La primera porción se humectó. Y. con 50 mL de etanol de 70°GL y se dejó reposar 15 min. Transcurrido el tiempo se colocó. AC. IA. en el percolador y se maceró con etanol 70°GL por 48 horas.. RM. Luego se percoló a una velocidad moderada (1 – 3mL/ min) y se recogió 20 mL de. FA. extracto, los cuales se separaron y guardaron en un frasco ámbar. Se siguió recibiendo 5. DE. porciones sucesivas de percolado de 30 mL cada una, se enumeró según el orden que se. CA. recibió.. TE. Se colocó la porción equivalente a 30 g de extracto en un percolador y se maceró con las. IO. porciones de 30 mL del lote anterior por 48 horas. Se percoló hasta obtener 30 mL y se. BI BL. guardó en un frasco ámbar. Luego se percoló a una velocidad moderada (1 – 3mL/ min) y se recogió 30 mL de extracto, los cuales se separaron y guardaron en un frasco ámbar. Se siguió recibiendo 5 porciones sucesivas de percolado de 20 mL cada una, se enumeró según el orden que se recibió. Se humectó por 15 min la tercera porción (20 g) con 20 mL de la primera porción recibida del percolado. Posteriormente se colocó en el percolador y se llevó a macerar por 48 horas con las 4 porciones restantes recibidas del percolado anterior.. 9 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(19) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Luego se percoló a una velocidad moderada (1 – 3mL/ min) y se recogió 50 mL de extracto, los cuales se separaron y guardaron en un frasco ámbar. La cantidad final de extracto fue de 100 mL.13,14 7.5.3. Tamizaje fitoquímico Se llevó a sequedad el extracto y se procedió a realizar el tamizaje fitoquímico preliminar siguiendo el método de Martínez M. y Cuellar A.15. IC A. Fundamento: De acuerdo con este método para la marcha fitoquímica o tamizaje fitoquímico de Martínez M. y Cuellar A., cada muestra fue sometida a la acción extractiva. UI M. de solventes de polaridad creciente: cloroformo, etanol y agua, modificando el pH del. Q. medio con el fin de obtener los metabolitos secundarios de acuerdo a su solubilidad.. BI. O. Luego se separó las fracciones y se realizó la identificación de los fitoconstituyentes. IA. Y. haciendo uso de reactivos de coloración y precipitación 15.. AC. Método y Procedimiento:. RM. En este caso se empleó un esquema general, en el cual se realizó la extracción sucesiva. FA. del material vegetal para la aplicación de técnicas de tamizaje fitoquímico detallado en el. DE. esquema I:. CA. Ensayo de Catequinas: Para ello se tomó I gota de la solución alcohólica, con la. TE. ayuda de un capilar y se aplicó sobre papel filtro. Sobre la mancha se aplicó solución. IO. de carbonato de sodio. La aparición de una mancha verde carmelita a la luz UV, indica. BI BL. un ensayo positivo.. Ensayo de Resinas: Para detectar este tipo de compuesto, se añadió a 2 ml de la solución alcohólica, 10 ml de agua destilada. La aparición de un precipitado indica un ensayo positivo. Ensayo de Fehling: Permite reconocer en un extracto la presencia de azúcares reductores. Para ello, si la alícuota del extracto no se encontrase en agua, debe evaporarse el solvente en baño de agua y el residuo redisolverse en 1 a 2 ml de agua. Se adicionaron 2 ml del reactivo y se calentó en baño de agua 5 a 10 minutos. El ensayo se considera positivo si la solución se colorea de rojo o aparece precipitado rojo.. 10 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(20) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Ensayo de Baljet: Permitie reconocer en un extracto la presencia de compuestos con agrupamiento lactónico, en particular cumarinas, aunque otros compuestos lactónicos pueden dar positivo al ensayo. Para ello, si la alícuota del extracto no se encontrase en alcohol, debe evaporarse el solvente en baño de agua y redisolverse en la menor cantidad de alcohol (1 ml). En estas condiciones se adicionó 1mL del reactivo, considerándose un ensayo positivo la aparición de coloración o precipitado rojo (++ y +++) respectivamente. Ensayo de Liebermann-Burchard: Permite reconocer en un extracto la presencia de. IC A. triterpenos y/o esteroides, por ambos tipos de productos poseer un núcleo del. UI M. androstano, generalmente insaturado en el anillo B y la posición 5-6.. Q. Para ello, el solvente se evaporó en baño de agua y el residuo se redisolvió en 1 ml de. O. cloroformo. Se adicionó 1 ml de anhídrido acético y se mezcló bien. Por la pared del. Y. BI. tubo de ensayo se dejó resbalar II a III gotas de ácido sulfúrico concentrado sin agitar.. AC. IA. Un ensayo positivo se ha de reconocerse por un cambio rápido de coloración: Rosado-azul muy rápido.. -. Verde intenso-visible aunque rápido.. -. Verde oscuro-negro-final de la reacción.. DE. FA. RM. -. CA. Muy pocas veces puede observarse el primer cambio. El tercer cambio generalmente. TE. ocurre cuando el material evaluado tiene cantidades importantes de estos compuestos.. BI BL. IO. Importante: Para realizar este ensayo no hubo agua en el medio de reacción, pues ésta con el ácido sulfúrico reacciona de forma violenta y puede ocurrir un accidente. La reacción de Liebermann-Burchard se emplea también para diferenciar las estructuras esteroidales de los triterpenoides, las primeras producen coloraciones azul o azul verdoso, mientras que para las segundas se observa rojo, rosado o púrpura. Estas coloraciones pueden variar por interferencias producidas por carotenos, xantofilas y esteroides saturados que puedan estar presentes. Ensayo de La Espuma: Permite reconocer en un extracto la presencia de saponinas, tanto del tipo esteroidal como triterpénica. De modo que se diluyó con cinco veces su volumen en agua y se agitó, dicha mezcla, fuertemente durante 5 a 10 minutos.. 11 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(21) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. El ensayo se considera positivo si apareciese espuma en la superficie del líquido de más de 2 mm de altura y persistente por más de 2 minutos. Ensayo del Cloruro Férrico: Permite reconocer la presencia de compuestos fenólicos y/o taninos en un extracto vegetal. Si el extracto de la planta se realiza con alcohol, el ensayo determina tanto fenoles como taninos. A una alícuota del extracto alcohólico se le añadió III gotas de una solución de tricloruro férrico al 5% en solución salina fisiológica. Si el extracto es acuoso, el ensayo determina fundamentalmente taninos. A una alícuota del extracto se añadió acetato de sodio para neutralizar y III gotas de. IC A. una solución de tricloruro férrico al 5% en solución salina fisiológica, un ensayo. UI M. positivo puede dar la siguiente información general:. Desarrollo de una coloración rojo-vino: compuestos fenólicos en general.. -. Desarrollo de una coloración verde intensa: taninos del tipo pirocatecólicos.. -. Desarrollo de una coloración azul, taninos del tipo pirogalotánicos.. IA. Y. BI. O. Q. -. AC. Ensayo de la Ninhidrina: Permite reconocer en los extractos vegetales la presencia. RM. de aminoácidos libres o de aminas en general. Se tomó una alícuota del extracto en. FA. alcohol, o el residuo de la concentración en baño de agua, se mezcló con 2 ml de. DE. solución al 2% de ninhidrina en agua. La mezcla se calentó 5 a 10 minutos en baño de agua. Este ensayo se considera positivo cuando se desarrolle un color azul violáceo.. CA. Ensayo de Borntrager: Permite reconocer en un extracto la presencia de quinonas.. TE. Para ello el solvente se evaporó en baño de agua y el residuo se redisolvió en 1 ml de. IO. cloroformo. Se agregó 1 ml de hidróxido de sodio, hidróxido de potasio o amonio al. BI BL. 5%. Se agitó, mezclando las fases y se dejó en reposo hasta su ulterior separación. Si la fase acuosa alcalina (superior) se coloreara de rosado o rojo, el ensayo se considera positivo. Coloración rosada (++), coloración roja (+++). Ensayo de Kedde: Permite reconocer en un extracto la presencia de glucósidos cardiotónicos. Una alícuota del extracto en etanol se mezcló con 1 ml del reactivo y se dejó reposar durante 5 a 10 minutos. En un ensayo positivo se desarrolla una coloración violácea, persistente durante 1 a 2 horas. Ensayo de Shinoda: Permite reconocer la presencia de flavonoides en un extracto de un vegetal. Se diluyó el extracto con 1 ml de ácido clorhídrico concentrado y un pedacito de cinta de magnesio metálico. Después de la reacción se esperó 5 minutos,. 12 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(22) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. se añadió 1 ml de alcohol amílico, se mezclaron las fases y se dejó reposar hasta que se separen. Si la alícuota del extracto se encontrase en agua, se procede de igual forma, a partir de la adición del ácido clorhídrico concentrado. El ensayo se considera positivo cuando el alcohol amílico se coloree de amarillo, naranja, carmelita o rojo; intensos en todos los casos. Ensayo de Antocianidinas: Permite reconocer en los extractos vegetales la presencia de estructuras de secuencia C6-C3-C6 del grupo de los flavonoides. Se calentaron 2 ml. IC A. del extracto etanólico 10 minutos. Con 1 ml de HClcc., se dejó enfriar y se añadió 1. UI M. ml de agua y 2 ml de alcohol amílico. Se agitó y se dejó separar las dos fases. La aparición de color rojo a marrón en la fase amílica es indicativa de un ensayo positivo.. O. Q. Ensayo de mucílagos: Permite reconocer en los extractos de vegetales la presencia. BI. de esta estructura tipo polisacárido, que forma un coloide hidrófilo de alto índice. Y. de masa que aumenta la densidad del agua donde se extrae. Para ello una alícuota. AC. IA. del extracto en agua se enfría a 0-5 ºC y si la solución tomó una consistencia gelatinosa el ensayo es positivo.. RM. Ensayo de Sudán: Permite reconocer en un extracto la presencia de compuestos. FA. grasos, para ello, a la alícuota de la fracción en el solvente de extracción, se le. DE. añadió 1 ml de una solución diluida en agua del colorante Sudan III o Sudan IV.. CA. Se calentó en baño de agua hasta evaporación del solvente. La presencia de. TE. compuestos grasos se considera positiva si aparecen gotas o una película coloreada de rojo en el seno del líquido o en las paredes del tubo de ensayos. BI BL. IO. respectivamente.. Ensayo de Dragendorff: Permite reconocer en un extracto la presencia de alcaloides, para ello, se evaporó en baño de agua y el residuo redisolvió en 1 ml de ácido clorhídrico al 1%. Con la solución acuosa ácida se realizó el ensayo, se añadió III gotas del reactivo de Dragendorff, si existiera: opalescencia se ha de considerar (+), turbidez definida (++), precipitado (+++). Ensayo de Mayer: Se realiza según la forma descrita anteriormente, hasta obtener una solución ácida.. 13 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(23) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Se añadió luego, una pizca de cloruro de sodio en polvo, se agitó y filtró. Se ha de añadir II o III gotas de la solución reactiva de Mayer, y si observase: opalescencia (+), turbidez definida (++), precipitado coposo (+++). Observación: En el caso de alcaloides cuaternarios y los aminoácidos libres, éstos solo se encuentran en el extracto acuoso y para considerar su presencia la reacción debe ser (++) o (+++), que un resultado (+) puede provenir de una extracción incompleta de bases primarias, secundarias o terciarias.. IC A. Ensayo de Wagner: Se parte al igual que en los casos anteriores de la solución ácida,. UI M. se añadió II o III gotas del reactivo y clasificando los resultados de la misma forma.. O. Q. 7.6. Ensayo microbiológico: 16. Y. BI. Se realizó por el Método de difusión en discos – Kirby & Bauer.. AC. IA. a. Preparación de las cepas.. RM. La cepa de Cándida albicans fue proporcionada por el Laboratorio de Microbiología. FA. de la Facultad de Medicina de la Universidad Nacional de Trujillo.. CA. DE. b. Reactivación de los cultivos de Cándida albicans. A partir de los cultivos puros de Cándida albicans, se sembró al hongo en tubos de. TE. ensayo conteniendo Agar Sabouraud, los mismos que incubaron a 37 ºC por un. BI BL. IO. espacio de 24 a 48 horas. c. Preparación y estandarización de los inóculos de Cándida albicans. A partir de los cultivos reactivados del hongo se prepararon suspensiones en solución salina fisiológica estéril hasta alcanzar la densidad similar a la turbidez del tubo Nº 0.5 del Nefelómetro de McFarland (1.5 x 108 células/mL). d. Siembra en placas. Los cultivos estandarizados de Cándida albicans se sembraron por superficie en las placas Petri conteniendo Agar Mueller Hilton. Una vez realizada la siembra de. 14 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(24) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Cándida albicans se eliminó el excedente y se llevó a secar las placas Petri en estufa por 5 minutos aproximadamente. e. Evaluación del efecto del etanol (solvente) La evaluación del efecto del etanol (solvente) sobre el crecimiento de Cándida albicans se realizó colocando en los discos de papel filtro etanol al 50 %; luego se incubaron dichos discos a 37 º C, luego se incubaron dichos discos a 37ºC por 24 h.. IC A. f. Aplicación de los extracto. UI M. En cada placa sembrada se colocaron los discos de sensibilidad antes preparados. Q. correspondientemente a concentraciones de 10 mg/mL, 20mg/mL y 30 mg/mL del. O. extracto de Phthirusa robusta Rusby, así como los discos de sensibilidad que. Y. BI. contenían Fluconazol.. IA. Cada disco se enumeró de 1 al 4 según volumen respectivo; se dejaron reposar por. AC. 10 minutos a temperatura ambiente y luego se incubaron a 37 ºC por 24 horas. Se. FA. RM. realizaron 5 ensayos.. DE. g. Evaluación del efecto del extracto. CA. La evaluación del efecto antifúngico se realizó midiendo con una regla milimetrada. TE. el halo de inhibición de crecimiento de Cándida albicans; y los resultados se. BI BL. IO. expresaron como diámetro (mm) de halo de inhibición. h. Comparación del efecto del extracto con el de los discos de sensibilidad de Fluconazol.. Se realizó mediante el método de Kirby Bauer, para lo cual se utilizaron discos de sensibilidad de Fluconazol. La medida del diámetro de los halos de inhibición de crecimiento de Cándida albicans, por el contraste con el diámetro de los halos de inhibición de los discos de sensibilidad de Fluconazol.. 15 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(25) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ANÁLISIS ESTADÍSTICO Para la presente investigación se utilizó tablas de resumen de indicadores como desviación estándar y asimismo se usó gráficos adecuados para presentar los resultados de investigación. Para determinar el efecto se utilizó el análisis de varianza para un diseño completamente al azar y considerando un nivel de significancia de 0.05; asimismo se usó. BI BL. IO. TE. CA. DE. FA. RM. AC. IA. Y. BI. O. Q. UI M. IC A. la prueba de Duncan y la prueba de Tukey considerando un nivel de significancia de 0.05.. 16 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(26) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. III. RESULTADOS Tabla 1: Tamizaje fitoquímico del extracto seco de las hojas de Phthirusa robusta Rusby Fracción. Dragendorff. -. +++. +++. Mayer. -. +++. +++. Wagner. -. +++. +++. Lactonas y Cumarinas. Baljet. Aceites y Grasas. Sudán. Triterpenos y Esteroides. Liebermann-Burchard. Compuestos Fenólicos. Tricloruro férrico. Flavonoides. Shinoda. Quinonas. Borntrager. Catequinas. Luz UV. -. Resinas. DE. UI M. IC A. etanólica. Fracción acuosa. Ensayo. Alcaloides. Fracción. Clorofórmic a. Metabolitos. Resina. -. Azúcares Reductores. Fehling. +. +. Espuma. -. -. Ninhidrina. +. Cardenólidos. Kedde. +. Antocianidinas. Antocianidina. Mucílagos. Mucílagos. BI. O. +. RM. AC. IA. Y. +. CA. FA. BI BL. Aminoácidos. IO. TE. Saponinas. Leyenda: Resultado positivo: + Resultado negativo: -. -. Q. -. + +++. +. ++. ++. +++. ++ +. Intensidad: Baja: + Moderada: ++ Alta: +++. 17 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(27) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Tabla 2. Medida de halos de inhibición producidos por exposición del extracto seco de las hojas de Phthirusa robusta Rusby y los discos de sensibilidad de Fluconazol 25 ug, frente a Cándida albicans.. Halo de inhibición (mm) discos de 6 mm de diámetro Control positivo. Control negativo. UI M. IC A. Concentración del extracto seco. 0.1 mg/mL. 0.2 mg/mL. 0.3 mg/mL. 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 X ± D.E.. 10 10 6 10 10 6 11 6 6 10 11 6 10 6 11 10 8.69 ± 2.1. 12 11 11 12 11 11 11 12 11 12 11 12 11 12 11 11 11.38 ± 0.5. 15 13 12 12 12 13 15 12 12 11 14 15 15 12 15 11 13.06 ± 1.53. Fluconazol 25 U.I.. Etanol 70°. 24 20 22 24 24 24 20 22 24 24 24 20 22 24 24 24 22.9 ± 1.63. -. BI Y. IA. AC. RM. FA. DE. CA. TE. IO. BI BL. O. Q. N° de repeticiones. Leyenda: X ± D.E.: Promedio y desviación estándar. - : No hay presencia de halo.. 18 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(28) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. CONCENTRACIÓN DEL EXTRACTO SECO (g/mL) 14.00 13.06 12.00. 11.38. 10.00 8.69. UI M. IC A. 8.00. O. Q. 6.00. Y. BI. 4.00. AC. IA. 2.00. RM. 0.00. 0.2. 0.3. FA. 0.1. DE. Figura 1. Promedio de halo de inhibición del crecimiento de la bacteria Candida. CA. albicans (mm) con diferentes concentraciones del extracto seco de las hojas de. IO. TE. Phthirusa robusta Rusby “Suelda con Suelda”.. BI BL. Tabla 3. Análisis de varianza para determinar el efecto del extracto seco de las hojas de Phthirusa robusta Rusby “Suelda con Suelda” frente a Candida albicans.. Origen de las variaciones Entre grupos Dentro de los grupos Total. SC 155.791667 110.125 265.916667. GL. Valor crítico para PC F P F 2 77.8958333 31.8303065 2.4303E-09 3.20431729 45 2.44722222 47. 19 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(29) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Tabla 4. Prueba de Tukey para determinar las concentraciones del extracto seco de hojas secas de Phthirusa robusta Rusby “Suelda con Suelda”que presentan diferencias significativas frente a Candida albicans. Media 13.06 11.38 8.69. UI M. IC A. Concentración 0.3g/ml 0.2g/ml 0.1g/ml. 1.33 3.4 2.45 16. 0.2g/ml. 0.1g/ml. 1.68. 4.37. RM. 0.3g/ml. AC. IA. Y. BI. O. Q. HSD MULTIPLICADOR MSE n. FA. 0.3g/ml. 2.69. DE. 0.2g/ml. CA. 0.1g/ml. TE. Tabla 5. Prueba de Duncan para determinar el efecto del extracto seco de las. BI BL. IO. hojas de Phthirusa robusta Rusby “Suelda con Suelda” frente a Candida albicans. Concentraciones. ni. Grupos para alfa = 0.05 G1. 10 g/mL. 16. 20 mg/mL. 16. 30 mg/mL. 16. G2. G3. 8.69 11.38 13.06. Leyenda: Ni: número de repeticiones.. 20 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(30) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. IV. DISCUSIÓN En el presente estudio, se realizó el Tamizaje fitoquímico de las hojas de Phthirusa robusta Rusby provenientes del distrito de Tarapoto. Así como, se evaluó el efecto antifúngico in vitro del extracto fluido de las hojas de Phthirusa robusta Rusby frente a Candida Albicans. En la tabla 1 se observa diferentes fitoconstituyentes; en la fracción clorofórmica se identificaron compuestos grasos, mediante el ensayo de Sudán; y mediante la reacción de. IC A. Liebermann-Burchard se identificaron triterpenos y/o esteroides. En la fracción etanólica. UI M. se identificaron azúcares reductores, triterpenos y/o esteroides, quinonas, glucósidos cardiotónicos, alcaloides, aminoácidos, flavonoides y antocianidina. En la fracción. Q. acuosa se identificaron alcaloides flavonoides, taninos, azúcares reductores y estructuras. Y. BI. O. tipo polisacáridos 18.. IA. Los terpenoides o isoprenoides, se derivan de la fusión de unidades de cinco carbonos. AC. llamada isopreno (C5) y se clasifican de acuerdo al número de unidades de isopreno que. RM. los forman. En plantas, los isoprenos básicos para la síntesis de los terpenos son el. FA. isopentenil pirofosfato (IPP) o su isómero dimetilalil pirofosfato (DMAPP) 17.. DE. Los monoterpenos tales como el mentol, que es un antimicrobiano, el citronelal, que es. CA. un repelente de insectos y las piretrinas que funcionan como venenos del sistema nervioso. TE. de los insectos, son componentes químicos con actividad biológica potencial durante la. IO. respuesta de defensa de las plantas que los producen. Los sesquiterpenos tales como la. BI BL. risitina y lubimina ,el capsidiol y el 2,7-dihidroxicadaleno son compuestos con actividad antimicrobiana; mientras que el poligodial inhibe fuertemente la alimentación de diversos insectos herbívoros, el diterpeno atractilósido inhibe la fosforilación oxidativa en mitocondrias, y el casbeno es un agente antifúngico. Los terpenoides volátiles como la turpentina se exponen al aire, se evaporan y forman una masa semicristalina que polimeriza por oxidación para dar lugar a una barrera dura que sella la herida y con frecuencia atrapa insectos y microrganismo patógenos invasores 17,18. Los alcaloides son heterocíclicos que por su similitud química a moléculas que participan en la transmisión de las señales del sistema nervioso, bloquean neuroreceptores, intermediarios de la transducción de la señal neuronal y canales iónicos de vertebrados e. 21 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(31) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. insectos. Mientras que sus efectos inhibitorios del crecimiento de microrganismos patógenos están dados por su capacidad de intercalarse con el DNA, de detener la síntesis de proteínas, inducir la apoptosis e inhibir las enzimas del metabolismo de carbohidratos. La berberina, palmatina y la sanginarina son alcaloides isoquinoléicos tóxicos a insectos y vertebrados, pero también inhiben el crecimiento de bacterias, hongos y virus Estos alcaloides reaccionan con grupos aniónicos y grupos nucleofílicos de aminoácidos o de otras moléculas como receptores y enzimas, inhibiendo su función. Los receptores adrenérgicos, nicotinérgicos, muscarinérgicos y de la serotonina son blancos de unión de. IC A. estos compuestos. Así mismo, inhiben a las enzimas necesarias para la síntesis y el rompimiento del neurotransmisor acetilcolina, impidiendo la transducción de la señal. UI M. neuronal de insectos y vertebrados. La interacción de estos alcaloides con el DNA, las. Q. proteínas y enzimas de la transcripción, tóxicos contra bacterias, hongos, virus, insectos,. BI. O. vertebrados y otras plantas 17.. IA. Y. Flavonoides son una familia muy diversa de compuestos, que se caracterizan por ser. AC. polifenólicos y solubles en agua. Cumplen funciones metabólicas importantes en las. RM. plantas, como por ejemplo son responsables de la resistencia de las plantas a la fotooxidación de la luz ultravioleta del Sol, intervienen en el transporte de la hormona. FA. auxina, y se cree que funcionan como defensa ante el herbivorismo. Además son. DE. considerados antimicrobianos, anticancerígenos, entre otros. Un flavonoide con. CA. importante efecto antifúngico es la pisatina es un isoflavonoide producido por el guisante. TE. en respuesta a la infección por hongos e induce la expresión del gen PDA1 en estos. La. IO. pisatina y el eriodictiol inducen la germinación de las esporas de ciertos hongos.También. BI BL. las furanocumarinas y estilbenos han demostrado tener propiedades antibacterianas, antivirales y antifúngicas 18. Los taninos condensados que son un tipo de flavonoide, son macromoléculas constituidas por unidades de flavonoides llamadas antocianidinas. Los taninos están muy ampliamente distribuidos en las plantas como en el té, donde contribuyen al sabor astringente estos poseen también ciertas propiedades protectoras frente a hongos. Se cree que su actividad se debe a que deja sin actividad las adhesias microbianas, enzimas, etc 19. El efecto antifúngico, del extracto seco de las hojas de Phthirusa robusta Rusby se explicaría por la existencia de constituyentes fitoquímicos con poder antifúngico; la acción mostrada puede estar relacionada al funcionamiento de uno o más metabolites. 22 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(32) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. secundarios, sin embargo, las características de una planta por lo general no provienen de un único principio active de los que está compuesta, sino de la acción conjunta de todos ellos201,21. Para cada medicamento existe lo que se conoce como los puntos de corte, los cuales determinan, según los mm obtenidos o la CMI obtenida, si la cepa es sensible, intermedia o resistente. En el caso del fluconazol se obtuvo un valor promedio de 22.9 ± 1.63, encontrándose según la SCLI dentro de la categoría de sensible (anexo 3) 20.. IC A. En la tabla 2 se presentan los diámetros de los halos de inhibición del extracto seco de. UI M. hojas secas de Phthirusa robusta Rusby frente a Candida albicans, donde se observa que en la concentración de 0.1g/ml existió escasa formación obteniéndose una media de 8.69. O. Q. mm ± 2.1, mientras que en las concentraciones 0.2g/ml y 0.3 g/ml la formación fue más. BI. notoria, siendo los valores de 11 a 15 mm. El valor promedio en la concentración de 0.2g. IA. Y. /ml fue de 11.38 mm ± 0.5 y en la concentración de 0.3g /ml, 13.06 mm ± 1.53.. AC. En la table 3 se realizó el análisis de varianza, obteniéndose una probabilidad menor a. RM. 0.05, por lo que se acepta la hipótesis alterna, concluyendo que, existe relación entre la. FA. concentración empleada del extracto seco de hojas secas de Phthirusa robusta Rusby y. DE. la media del diámetro del halo de inhibición obtenido frente a Candida albicans.. CA. En la tabla 4 y 5 se ejecutó la prueba post Hoc de Tukey y de Duncan, respectivamente,. TE. para determinar las concentraciones del extracto seco de hojas secas de Phthirusa robusta. IO. Rusby “Suelda con Suelda” que presentan diferencias significativas frente a Candida. BI BL. albicans, obteniéndose que existe diferencia significativa entre el efecto del extracto a una concentración de 0.1 g/ml y el efecto a una concentración de 0.2 g/ml a su vez también existe diferencia estadísticamente significativa entre el efecto del extracto a una concentración de 0.2 g/ml y a una concentración de 0.3 g/ml. Respecto a lo evaluado en este trabajo de investigación, la acción antifúngica mostrada se presenta posiblemente por el sinergismo de sus compuestos, es por eso que existe un requerimiento de estudiar el efecto de los metabolitos secundarios uno a uno. Ya que las propiedades de una planta pueden variar de un género a otro, en el caso de Polesna, L; encontró que el género Phthirusa pyrifolia, es importante para tratamientos de fracturas y lesiones musculares, y los estudios modernos centrados en los efectos biológicos como. 23 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(33) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. antifúngico de la lanta son casi completamente faltantes; a diferencia del estudio realizado por Lapenna, E y col, en donde se demostró que la planta Phthirusa sp tuvo un mayor. BI BL. IO. TE. CA. DE. FA. RM. AC. IA. Y. BI. O. Q. UI M. IC A. efecto contra el hongo Candida albicans en un extracto metanólico 10,21.. 24 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(34) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. V. CONCLUSIONES 1) El extracto seco de las hojas de Phthirusa robusta Rusby presentó los siguientes fitoconstituyentes: triterpenos – esteroides, compuestos grasos, azúcares reductores, fenoles, taninos, quinonas, cardenólidos, alcaloides, aminoácidos, flavonoides y antocianidina. 2) El extracto seco de hojas secas de Phthirusa robusta Rusby presenta efecto antifúngico a las concentraciones de 0.1g/mL , 0,2g/mL y 0.3g/mL, frente a Candida albicans con halos de inhibición de 8,69 mm, 11,38 mm y 13,06 mm,. BI BL. IO. TE. CA. DE. FA. RM. AC. IA. Y. BI. O. Q. UI M. IC A. respectivamente.. 25 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(35) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. VI. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS 1.. Mujica, M ; Finquelievich, J; Jewtuchiwicz, C. Prevalencia de Candida albicans y Candida no albicans en diferentes muentras clínicas. Período 1999 – 2000. [Revista Argentina de microbiología]. Argentina, 2004. [Visto el 3 de Julio del 2016]. Disponible. en:. https://www.researchgate.net/profile/Jorge_Finquelievich/publication/23776472 6_Prevalencia_de_Candida_albicans_y_Candida_no_albicans_en_diferentes_m uestras_clnicas._Perodo_1999-2001/links/00b7d533a7347585aa000000.pdf Panizo, M; Reviákina, V. Candida albicans y su efecto patógeno sobre las. IC A. 2.. UI M. mucosas. [Scielo]. Venezuela, 2001. [Visto el 3 de Julio del 2016]. Disponible en: http://www.scielo.org.ve/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1315-. O. Q. 25562001000200011. BI. 3. Segebre, A. Candida Albicans. [EL HERALDO]. Colombia, 2016 [Visto el 3 de. IA. Y. Julio del 2016].. Disponible en: http://revistas.elheraldo.co/miercoles/alejandro-. AC. segebre/candida-albicans-136512. RM. 4. Ramage, G; Vandewalle, K. Characteristics of biofilm formation by Candida Albicans. [Rev Iberoam Micol]. España, 2001. [Visto el 3 de Julio del 2016].. FA. Disponible en: http://reviberoammicol.com/2001-18/163170.pdf. DE. 5. Formulario Nacional de Medicamentos Esenciales. Ministerio de Salud.. CA. Dirección General de Medicamentos, Insumos y Drogas (3ra edición). Perú, 2011.. TE. pp: 234-242. IO. 6. Ciudad, A. Infecciones vaginales por Cándida: Diagnóstico y tratamiento. Vol.. BI BL. 53. N°: 3. [Revista Peruana de Ginecología y Obstetricia].Perú, 2007. pp: 153-166 7. Tapia, C. Mecanismos de acción, reacciones adversas y nuevos antimicóticos. [MEDWAVE]. Chile, 2005. [Visto el 5 de Julio del 2016]. Disponible en: http://www.medwave.cl/link.cgi/Medwave/PuestaDia/Cursos/3548 8. Quiroga, G. Plantas medicinales y sus usos. [ecoosfera]. Chile, 2015. [Visto el 5 de Julio del 2016]. Disponible en: http://ecoosfera.com/2015/01/descubre-unagran-cantidad-de-plantas-medicinales-y-sus-usos/ 9. Hickey M., King C. 100 Families of flowering plants. Estados Unidos: Cmabridge Press, 2008. pp: 230 – 233.. 26 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(36) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 10. Lapenna, E; Medina, E. Actividad bactericida y fungicida de algunas plantas utilizadas en la medicina tradicional venezolana. [Scielo]. Venezuela, 2003. [Visto. el. 3. de. Julio. del. 2016].. Disponible. en:. http://www.scielo.org.ve/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S079804772003000100002 11. Lau, L. Aporte químico del estudio de la Phtyrusa pyrifolia [Revista peruana]. Perú,. 2004.. [Visto. el. 8. de. Enero. del. 2018].. Disponible. en:. file:///C:Users/Usuario/Downloads/consuelda.pdf. IC A. 12. Gobierno Regional La Libertad. CHAVIMOCHIC ¡Agroindustria que crece en la costa norte del Perú! [Actualizado el 2012]. Pag: 2. UI M. 13. Vitery G. Actividad inhibitoria de la Stevia rebaudiana sobre el Lactobacillus. Q. acidophillus y el Streptococcus mutans. [Revisado el 21 de marzo del 2014].. BI. O. Revista Nacional de Odontología Vol. 6. N°:10. [Actualizado el 2010].. Y. 14. NORMAS RAMALES., Drogas crudas y Extractos y tinturas., NRSP., 1992., Pp.,. IA. 309, 311 y 312.. AC. 15. Miranda M, Cuellar A. Mención en Productos Naturales y Terapéuticos. 1ª ed.. RM. Cuba. Editorial Universidad de la Habana. 2002.. FA. 16. Instituto Nacional de Salud. Manual de Procedimientos para la prueba de. DE. sensibilidad antimicrobiana por el método de disco difusión. Serie de Normas. CA. Técnicas N. 30. Lima. 2002. Pp 9-14.. TE. 17. Araujo, J y col (2012). Antimicrobiana de plantas. Disponible en:. IO. http://www.seq.es/seg/0214-3429. BI BL. 18. Rainer, W; Ashley, G. Antibacterial activity of medicinal plants of Northern Perúcan traditional applications provide leads for modern sciencie. [Internet]. México, 2010.. [Visto. el. 8. de. enero. del. 2018].. Disponible. en:. http://www.revbiomed.uady.mx/pdf 19. Sepúlveda, G y col (2003). La participación de los metabolitos secundarios en la defensa de las plantas. Mexico: Redalyc. pp: 355-356 20. Rodero, L; Córdoba, S; Vivot, W; Campo, M; Corfield, P; et al. (2006). Método de difusión con discos para la determinación de sensibilidad a fluconazol en aislamientos de Candida spp. Argentina: Rev. Argent. microbiot. 38(3).. 27 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(37) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 21. Maldonado, I; Fernández, L; Vivot, W; Domecq, P; Davel, G; et al. (2011). Evaluación de tres métodos para la detección de la sensibilidad in vitro de especies. BI BL. IO. TE. CA. DE. FA. RM. AC. IA. Y. BI. O. Q. UI M. IC A. de Candida a los antifúngicos . Argentina: Rev. Argent. microbiot. 43(2).. 28 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(38) Y. BI. O. Q. UI M. IC A. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. BI BL. IO. TE. CA. DE. FA. RM. AC. IA. ANEXO. 29 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(39) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Colocar 25 ml del extracto fluído en una cápsula y evaporar en el baño de agua. ANEXO 2:. El residuo se lava con 10 mL de Cl2CH2. 2m L ENSAYO BALJET. Q. UI. Lavar con 15 mL de etanol. O. 2m L ENSAYO LIEBERMAN - BURCHARD. BI. 2m L DRAGENDORFF, MAYER, WAGNER. FA RM. AC IA. Y. 2m L SUDAN III. Residuo. M. IC. A. Cl2CH2. Disolver en 10 mL de agua. 1mL. 1mL. BI B. LI O. 1mL. 1mL 1mL. TE CA. DE. ETANOL 96o GL. Residuo. 3mL en 3 porciones. 3mL en 3 porciones. 2mL 1mL. 1mL. 1mL 1mL 1mL. 31 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(40) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. UI M. IC A. TABLA 1: Puntos de corte y equivalencia diámetro – CMI para Candida spp. Fuente: Cantón, E; Martin, E; Espinel, A. (2004). Métodos estandarizados poe el. Q. CLSI para el estudio de la sensibilidad a los antifúngicos (Documentos M27-A3,. AC. IA. Y. BI. O. M38-A y M44-A). España: Revista Iberoamericana de Micología.. IO. B. BI BL. A. TE. CA. DE. FA. RM. ANEXO 4: Preparación de la muestra botánica. C. a) Selección de las hojas de Phthirusa robusta Rusby b) Secado de las hojas de Phthirusa robusta Rusby en estufa c) Tamizaje de las hojas de Phthirusa robusta Rusby. 32 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(41) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ANEXO 5: Marcha Fitoquímica preliminar siguiendo el método de Martínez M. y Cuellar A. UI M. IA. Y. BI. O. 1) Fracción Clorofórmica 2) Fracción Etanólica 3) Fracción Acuosa. IC A. 3. 2. Q. 1. B. BI BL. IO. A. TE. CA. DE. FA. RM. AC. 1) Resultados del extracto clorofórmico:. a) Reacción de Liebermann Burchard (+) b) Reacción de Sudán (+). 2) Reacciones químicas del extracto etanólico de las hojas de Phthirusa robusta Rusby. 33 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(42) BI. O. Q. UI M. IC A. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 1 C) Wagner 5) Shinoda. AC. 1 B) Mayer 4) Brontrager. 2) cloruro férrico 6) Resina. BI BL. IO. TE. CA. DE. FA. RM. 1 A) Dragendorff 3) Lactonas. IA. Y. LEYENDA:. 7)Kedde 8)Nihidrina 9)Antocianidinas 10)Saponinas. 34 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(43) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. B. IC A. A. IA. Y. BI. O. Q. UI M. a) Reacción de Fehling (+) b) Liebermann Burchard (+). BI BL. IO. TE. CA. DE. FA. RM. AC. 3) Reacciones químicas del extracto acuoso de las hojas de Phthirusa robusta Rusby. LEYENDA: 1 A) Dragendorff 1 B) Mayer 1 C) Wagner. 35 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
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