“Efecto del insecticida Clorpirifos sobre la germinación, el crecimiento y la capacidad antagónica de tres especies de Trichoderma en condiciones de laboratorio”

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(1)Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO. ÁT. IC. A. Y. CO. M. UN IC. MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA. AC IÓ. ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE. N. FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS. EM. AS. DE. IN FO. RM. “Efecto del insecticida Clorpirifos sobre la germinación, el crecimiento y la capacidad antagónica de tres especies de Trichoderma en condiciones de laboratorio” TESIS. SI ST. PARA OBTENER EL TÍTULO PROFESIONAL DE. N. DE. BIÓLOGO - MICROBIÓLOGO. DI. RE. CC. IO. Autor: Br. Ana María de los Angeles Sabogal Vargas Asesor: Ms.C. Juan Hector Wilson Krugg TRUJILLO - PERU. 2015. i Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(2) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AC IÓ. N. AUTORIDADES DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO QUE OTORGAN EL TÍTULO PROFESIONAL DE BIÓLOGO. UN IC. Dr. Orlando Gonzáles Nieves. IC. A. Y. CO. M. RECTOR. ÁT. Dr. Rubén Vera Véliz. EM. AS. DE. IN FO. RM. VICE-RECTOR ACADÉMICO. SI ST. Dr. Weyder Portocarrero Cárdenas. DI. RE. CC. IO. N. DE. VICE-RECTOR DE INVESTIGACIÓN. Dr. Steban Ilich Zerpa SECRETARIO GENERAL. ii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(3) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. UN IC. AC IÓ. N. AUTORIDADES DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO QUE OTORGAN EL TÍTULO PROFESIONAL DE BIÓLOGO. M. Dr. José Mostacero León. IN FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. DECANO DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS. DE. Dr. William Elmer Zelada Estraver. Dra. Bertha Soriano Bernilla. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. AS. SECRETARIO DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS. DIRECTORA DE LA ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE CIENCIAS BIOLÓGICAS. iii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(4) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DEL ASESOR. El que suscribe: Ms. C. Juan Héctor Wilson Krugg, asesor de la presente tesis titulada:. UN IC. antagónica de tres especies de Trichoderma en condiciones de laboratorio”. AC IÓ. N. “Efecto del insecticida Clorpirifos sobre la germinación, el crecimiento y la capacidad. Y. CO. M. CERTIFICA:. IC. A. Que ésta ha sido desarrollada, de acuerdo al reglamento establecido por la. ÁT. Facultad de Ciencias Biológicas de la Universidad Nacional de Trujillo, estando en. RM. conformidad con su correspondiente proyecto, y que el informe ha sido redactado. DE. IN FO. acogiendo las observaciones y sugerencias alcanzadas.. AS. Por lo tanto, autorizo a Ana María de los Angeles Sabogal Vargas, continuar con. SI ST. EM. el trámite del reglamento correspondiente.. DI. RE. CC. IO. N. DE. Trujillo, Octubre de 2015. _____________________________ Ms. C. Juan Héctor Wilson Krugg. iv Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(5) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. PRESENTACIÓN. N. SEÑORES MIEMBROS DEL JURADO DICTAMINADOR:. AC IÓ. En cumplimiento con las disposiciones establecidas en el Reglamento de Grados. UN IC. y Títulos de la Universidad Nacional de Trujillo, pongo a vuestra consideración y criterio, el informe de tesis titulado: “Efecto del insecticida Clorpirifos sobre la. CO. M. germinación, el crecimiento y la capacidad antagónica de tres especies de Trichoderma. Y. en condiciones de laboratorio”, con el propósito de obtener el Título Profesional de. Trujillo, Octubre de 2015. DE. SI ST. EM. AS. DE. IN FO. RM. ÁT. IC. A. Biólogo Microbiólogo.. DI. RE. CC. IO. N. Br. Ana María Sabogal Vargas. v Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(6) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Dra. Manuela Luján Velásquez. IN FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. M. PRESIDENTE. UN IC. --------------------------------------------. AC IÓ. N. MIEMBROS DEL JURADO. --------------------------------------------. DE. Ms. C. Juan Héctor Wilson Krugg. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. AS. SECRETARIO. -----------------------------------------------Ms. C. Eduardo Muñoz Ganoza VOCAL. vi Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(7) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. APROBACIÓN. Los profesores que suscriben, miembros del jurado dictaminador, declaran que. N. el presente informe de tesis ha cumplido con los requisitos formales y fundamentales,. Y. CO. M. UN IC. AC IÓ. siendo aprobado por unanimidad.. A. --------------------------------------------. EM. AS. DE. IN FO. RM. ÁT. PRESIDENTE. IC. Dra. Manuela Luján Velásquez. --------------------------------------------. SECRETARIO. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. Ms. C. Juan Héctor Wilson Krugg. -----------------------------------------------Ms. C. Eduardo Muñoz Ganoza VOCAL. vii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(8) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DEDICATORIA. M. UN IC. AC IÓ. N. A Dios, por su inmenso amor y por ser mi guía en cada momento de mi vida.. DE. IN FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. A mi madre Corina, que a pesar que ya no se encuentra físicamente conmigo, puedo sentir su apoyo y su afecto; porque desde pequeña me enseño que todo se puede lograr si se hace con esfuerzo y dedicación, por su amor y por ser mi mejor ejemplo a seguir como ser humano.. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. AS. A mi mamita Magdalena que me brinda su apoyo incondicional en todo momento, por su confianza, paciencia y consejos, que me enseñó que no todo en la vida es fácil.. DI. RE. A mi familia, por su apoyo en cada momento de mi carrera profesional, por ser mi motor para salir adelante cada día.. viii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(9) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AGRADECIMIENTOS. Agradezco a mi asesor Ms. C. Juan Héctor Wilson Krugg, por el tiempo y el. AC IÓ. N. apoyo brindado en la elaboración y ejecución de este trabajo. Porque gracias a sus. UN IC. consejos y conocimientos me permitieron sortear dificultades.. M. A mis profesores, por los conocimientos brindados a lo largo de los años de. CO. estudios, los que pondré en práctica en el desempeño de las labores que tenga que. IC. A. Y. realizar.. RM. ÁT. A mis amigos Kathy, Walter, Guillermo, Jonathan Estefany, Angie y Junior por. IN FO. ser buenas personas, por haberme brindado su tiempo y apoyo durante mi estancia en el. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. AS. DE. laboratorio de fitopatología.. ix Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(10) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. RESUMEN Se determinó el efecto de diferentes concentraciones del insecticida Clorpirifos sobre la germinación, el crecimiento y la capacidad antagónica de tres especies de Trichoderma. AC IÓ. N. en condiciones de laboratorio. Se trabajó con tres concentraciones de clorpirifos (960, 1200, y 1440 ppm), además del control (0 ppm). El efecto del insecticida sobre el. UN IC. porcentaje de germinación se determinó adicionando 1 mL de cada dilución (doble. M. concentrado) de clorpirifos a frasquitos que contenían 1mL de suspensión de esporas. CO. Trichoderma a una concentración de 105 esporas/mL, incubándose a 25°C por 24. Y. horas; pasado este tiempo, se realizó el recuento de esporas germinadas en cada. IC. A. concentración. Para evaluar el efecto del insecticida sobre el crecimiento, se realizó la. RM. ÁT. técnica del medio envenenado para cada concentración de clorpirifos. La lectura se. IN FO. realizó midiendo el radio de crecimiento micelial a partir del primer día de siembra. Para el efecto del insecticida sobre la capacidad antagónica, se enfrentó a cada especie. DE. de Trichoderma contra Botritys sp, mediante la técnica de cultivo dual. Se encontró que. AS. clorpirifos disminuía hasta un 11.22% la germinación de T.asperellum (TCA 3), a 37.43. EM. % la de T. asperellum (TCA 21) y a un 11.53% en el caso de T. harzianum (TCA. SI ST. 23).,En relación al crecimiento miceliar clorpirifos redujo el crecimiento de T.. DE. asperellum (TCA 3) a un 35.63%, a 47.99 % en el caso de T. asperellum (TCA 21); y a. N. 49.65 % para T. harzianum (TCA 23).En cuanto a la capacidad antagónica, T.. CC. IO. asperellum (TCA 3) presentó un grado de antagonismo 2,mientras que T. asperellum. RE. (TCA 21) y T. harzianum (TCA 23) presentaron un grado de tipo 1. Se concluyó que al. DI. incrementarse la concentración de clorpirifos en el rango de 960 a 1440 ppm disminuye la germinación de T. asperellum (TCA 3 y TCA 21) y T. harzianum (TCA 23) mientras que estas tres concentraciones no tienen un efecto inhibitorio significativo sobre el crecimiento y la capacidad antagónica de las tres especies de Trichoderma evaluadas.. x Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(11) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. ÍNDICE Pág. ii. Asesor ………………………………………………………………………………... iv. N. Autoridades de la Universidad Nacional de Trujillo ………………………………... v. Miembros del jurado ………………………………………………………………..... vi. UN IC. AC IÓ. Presentación …………………………………………………………………..………. vii. Dedicatoria ……………………………………………………………………………. viii. CO. M. Aprobación ……………………………………………………………………………. ix. Y. Agradecimientos …………………………………………………..………………….. IC. A. Resumen ………………………………………………………………………………. RM. ÁT. Índice……………………………………………………………………………………. x xi. 1. MATERIAL Y MÉTODO ………………………………………………….…………... 7. DE. IN FO. INTRODUCCIÓN ………………………………………………………….........…….. AS. 1. Material de estudio …………………………………………….………….……. EM. 2. Procedimiento …………………………………………………………………... 7 7 7. 2.2. 7. SI ST. 2.1 Reactivación de los cultivos de Trichoderma spp…………………………..... DE. Evaluación del efecto de clorpirifos sobre Trichoderma spp………………. N. 2.2.1 Evaluación del efecto de clorpirifos sobre la germinación de esporas. DI. RE. CC. IO. de Trichoderma spp. …………………………………..…………………….. 8. 2.2.1.1 Preparación de las soluciones doble concentradas del insecticida clorpirifos………………………………………….………. 8. 2.2.1.2 Preparación del inóculo de esporas………………………….... 8. 2.2.1.3 Inoculación e incubación para la evaluación de la germinación………………………….………………………….……. 8. xi Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(12) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 2.2.1.4 Lectura ……………………………………………………….. 9. 2.2.2 Evaluación del efecto de clorpirifos sobre el crecimiento de Trichoderma spp. ………………………………………………..………… Preparación. del. medio. de. cultivo. con. diferentes. N. 2.2.2.1. 9. 9. 2.2.2.2 Siembra e Incubación……………………………….…………. 10. UN IC. AC IÓ. concentraciones de clorpirifos …………………………………...….... 10. M. 2.3.1.3 Lectura …………………………………………….………….. CO. 2.2.3 Evaluación del efecto de clorpirifos sobre la capacidad antagónica 11. Y. Trichoderma spp. ……………………………….…………………..………. 12. ÁT. IC. A. 2.3 Análisis de datos ……………………………………………..…………………. RM. RESULTADOS………………………………………………………………………….. 13. IN FO. Fig. 1. Porcentaje promedio de germinación de Trichoderma asperellum (TCA. 24. horas. de. incubación. en. condiciones. de. AS. las. DE. 3) a las concentraciones de 960, 1200 y 1440 ppm de clorpirifos a. Germinación de Trichoderma. 16. asperellum (TCA 3) a diferentes. SI ST. Fig. 2.. EM. laboratorio……………………………………………………............. concentraciones de clorpirifos a las 24 horas de incubación: A. 0 B.. 960. ppm;. C.. 1200. ppm;. D.. 1440. ppm………..…………………………………………………………. IO. N. DE. ppm;. 17. DI. RE. CC. Fig. 3. Porcentaje promedio de crecimiento radial de Trichoderma asperellum (TCA 3) a las concentraciones de 960, 1200 y 1440 ppm de clorpirifos a los cuatro. días de incubación en condiciones de. laboratorio………………………………………………..…………... 18. xii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(13) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Fig. 4.. Crecimiento radial de Trichoderma asperellum (TCA 3) a diferentes concentraciones de clorpirifos a los 4 días de incubación: A. 0 ppm; 19. Fig. 5.. AC IÓ. N. B. 960 ppm; C. 1200 ppm; D. 1440 ppm……….……...………….. Cultivo dual de Botritys sp (Der.) frente a Trichoderma asperellum. UN IC. (TCA 3) (Izq.) a los 7 días de incubación, previamente sometido a. M. crecimiento a diferentes concentraciones de clorpirifos durante. CO. cuatro días: 0 ppm (A), 960 ppm (B),1200 ppm (C) y 1440 ppm 20. Y. (D).………………………………………………………………..…. A. Porcentaje promedio de germinación de Trichoderma asperellum. IC. Fig. 6.. RM. ÁT. (TCA 21) a las concentraciones de 960, 1200 y 1440 ppm de. IN FO. clorpirifos a las 24 horas de incubación en condiciones de laboratorio ……………………………..………………………......... Germinación de Trichoderma asperellum (TCA 21) a diferentes. DE. Fig. 7.. 21. B.. EM. ppm;. AS. concentraciones de clorpirifos, a las 24 horas de incubación: A. 0 960. ppm;. C.. 1200. ppm;. D.. 1440. SI ST. ppm………………………..…………………………………………. 22. DE. Fig. 8. Porcentaje promedio de crecimiento radial de Trichoderma asperellum. RE. CC. IO. N. (TCA 21) a las concentraciones de 960, 1200 y 1440 ppm de. laboratorio. …………………………………………………..………. 23. Crecimiento radial de Trichoderma asperellum (TCA 21) a diferentes. DI. Fig. 9.. clorpirifos a los 4 días de incubación en condiciones de. concentraciones de clorpirifos a los 4 días de incubación: A. 0 ppm; B. 960 ppm; C. 1200 ppm; D. 1440 ppm.............................................. 24. xiii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(14) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Fig. 10.. Cultivo dual de Botritys sp (Der.) frente a Trichoderma asperellum (TCA 21) (Izq.) a los 7 días de incubación, previamente sometido a. 960. ppm. (B),1200. ppm. (C). AC IÓ. N. crecimiento a diferentes concentraciones de clorpirifos: 0 ppm (A), y. 1440. ppm. Porcentaje promedio de germinación de Trichoderma harzianum. M. Fig. 11.. 25. UN IC. (D)……………………………………………………………………. CO. (TCA 23) a las concentraciones de 960, 1200 y 1440 ppm de. Y. clorpirifos a las 24 horas de incubación en condiciones de. ÁT. Germinación de Trichoderma harzianum (TCA 23) a diferentes. RM. Fig. 12.. 26. IC. A. laboratorio……………………………………………………………. ppm;. B.. 960. IN FO. concentraciones de clorpirifos, a las 24 horas de incubación: A. 0 ppm;. C.. 1200. ppm;. D.. 1440. DE. ppm…………………………………………………………..………. 27. AS. Fig. 13. Porcentaje promedio de crecimiento radial de Trichoderma harzianum. EM. (TCA 23 a las concentraciones de 960, 1200 y 1440 ppm de. SI ST. clorpirifos a los 4 días de incubación en condiciones de 28. DE. laboratorio.………………...………………………………….……... Crecimiento de Trichoderma harzianum (TCA 23) a las diferentes concentraciones Clorpirifos a los 4 días de incubación: A. 0 ppm; B. 960. ppm;. C.. 1200. ppm;. D.. 1440. ppm………………..……………………………….….........……….. 29. DI. RE. CC. IO. N. Fig. 14.. Fig. 15.. Cultivo dual de Botritys sp (2) frente a Trichoderma harzianum (TCA 23) (1) a los 7 días de incubación, previamente sometido a crecimiento a diferentes concentraciones de clorpirifos: 0 ppm (A),. xiv Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(15) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 960 ppm (B) ,1200 ppm (C) y 1440 ppm (D)………………………... 30 31. CONCLUSIONES……………………………………………………………….….…... 35. RECOMENDACIONES…………………………………………………..….……….…. 36. N. DISCUSIÓN…………………………………………………………………………….. 37. ANEXOS............................................................................................................................ 44. UN IC. AC IÓ. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS……………………………………..……………. Anexo 1. Cultivos puros de Trichoderma spp. A) T. asperellum - TCA 3 B) T.. CO. M. asperellum - TCA 21 C) T. harzianum – TCA 23.. Y. Anexo 2. DORSAN 48 EC. IC. A. Anexo 3. Cálculos realizados para la determinación de concentraciones. RM. ÁT. utilizadas para DORSAN 48 EC (Clorpirifos).. IN FO. Anexo 4. Porcentaje de germinación de Trichoderma asperellum (TCA 3) en. laboratorio.. DE. diferentes concentraciones de clorpirifos en condiciones de. AS. Anexo 5. Crecimiento radial promedio (cm) de Trichoderma asperellum (TCA. EM. 3) diferentes concentraciones de clorpirifos durante 4 días de. SI ST. evaluación en condiciones de laboratorio.. DE. Anexo 6. Porcentaje de germinación de Trichoderma asperellum (TCA 21) en. laboratorio.. RE. CC. IO. N. diferentes concentraciones de clorpirifos en condiciones de. DI. Anexo 7. Crecimiento radial promedio (cm) de Trichoderma asperellum (TCA 21) diferentes concentraciones de clorpirifos durante 4 días de evaluación en condiciones de laboratorio. Anexo 8. Porcentaje de germinación de Trichoderma harzianum (TCA 23) en. xv Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(16) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. diferentes concentraciones de clorpirifos en condiciones de laboratorio. Anexo 9. Crecimiento radial promedio (cm) de Trichoderma harzianum (TCA. AC IÓ. N. 23) diferentes concentraciones de clorpirifos durante 4 días de evaluación en condiciones de laboratorio.. asperellum. (TCA. 3). frente. a. las. diferentes. M. Trichoerma. UN IC. Anexo 10. Análisis de varianza (ANAVA) del porcentaje de germinación de. CO. concentraciones clorpirifos utilizando el método de comparación de. Y. medias.. (TCA. 3). ÁT. asperellum. frente. a. las. diferentes. RM. Trichoerma. IC. A. Anexo 11. Análisis de varianza (ANAVA) del porcentaje de crecimiento de. IN FO. concentraciones clorpirifos utilizando el método de comparación de medias.. DE. Anexo 12. Análisis de varianza (ANAVA) del porcentaje de germinación de. AS. Trichoerma asperellum (TCA 21) frente a las diferentes. EM. concentraciones clorpirifos utilizando el método de comparación de. SI ST. medias.. DE. Anexo 13. Análisis de varianza (ANAVA) del porcentaje de crecimiento de. concentraciones clorpirifos utilizando el método de comparación de medias.. RE. CC. IO. N. Trichoerma asperellum (TCA 21) frente a las diferentes. DI. Anexo 14. Análisis de varianza (ANAVA) del porcentaje de germinación de Trichoerma harzianum. (TCA 23) frente a las diferentes. concentraciones clorpirifos utilizando el método de comparación de medias.. xvi Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(17) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Anexo 15. Análisis de varianza (ANAVA) del porcentaje de crecimiento de Trichoerma harzianum. (TCA 23) frente a las diferentes. concentraciones clorpirifos utilizando el método de comparación de. AC IÓ. N. medias. Anexo 16. Siembra por puntura de Trichoderma spp.. UN IC. Anexo 17. Caldo papa sacarosa a diferentes concentraciones de Clorpirifos. M. usadas para la evaluación de la germinación de Trichoderma spp.. CO. Anexo 18. Agar Papa Sacarosa más Clorpirifos a diferentes concentraciones. Y. usado para la evaluación del crecimiento de Trichoderma spp.. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. AS. DE. IN FO. RM. ÁT. IC. A. Anexo 19. Cultivo puro de Botritys sp.. xvii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(18) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. INTRODUCCIÓN Las enfermedades producidas por microorganismos fitopatógenos, tales como bacterias, nematodos u hongos, constituyen la mayor causa de pérdida en la producción. AC IÓ. N. agrícola. Entre los principales métodos utilizados para contrarrestar las perdidas en cultivos agrícolas por organismos o plagas causantes de enfermedades está el control. UN IC. químico mediante el uso de pesticidas.1,2 Aunque su uso ha generado beneficios. M. concretos en la producción agrícola a nivel mundial,el empleo inadecuado de los. CO. mismos expresado en terminos de tipos de plaguicida,toxicidad,número de aplicaciones. Y. y sobredosificacion ha producido innumerables efectos indeseados sobre el ecosistema,. IC. A. induciendo a la generación de organismos resistentes, persistencia ambiental de residuos. RM. ÁT. tóxicos, contaminación de suelos y recursos hídricos, lo cual altera el equilibrio. IN FO. ecológico.3,4 Además en los últimos años ha generado diversas controversias debido a. DE. su toxicidad al hombre.2,5. AS. Dentro de los productos químicos que se utilizan están los insecticidas, los. EM. cuales son aplicados directamente a los vegetales. Así, los organofosforados tienen en la. SI ST. actualidad un papel preponderante como plaguicidas fitosanitarios a pesar de su. DE. problemática toxicológica. Sin embargo han demostrado su eficacia frente a pulgones. N. (áfidos), como el pulgón lanígero del manzano (Eriosoma lanigerum), los insectos. RE. CC. IO. minadores, moscas de la fruta (Ceratitis capitata), ácaros, cochinillas, etc.6. DI. Uno de los insecticidas organofosforados de amplio uso es el Clorpirifos; este es. catalogado como un compuesto tóxico para la fauna terrestre y acuática, y para las personas.7 Es un pesticida de amplio espectro efectivo por contacto, ingestión e inhalación y su acción tóxica reside básicamente en la fosforilación de la enzima acetil. 1 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(19) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. colinesterasa en las terminales nerviosas del insecto, también afecta la transmisión de impulsos nerviosos en el cerebro, ocasionando disturbios en las funciones sensoriales,. AC IÓ. N. motoras respiratorias y en el comportamiento.8. Clorpirifos es un insecticida usado frecuentemente y efectivo contra un amplio. UN IC. espectro de insectos plaga de importancia económica en los cultivos tales como frutas. M. cítricas, plátanos, vegetales, papas, café, cacao, té, algodón, trigo, arroz,entres otras.9. CO. Este persiste en suelo por 60-120 días, sin embargo puede permanecer hasta un año. RM. ÁT. IC. agua, pero soluble en muchos solventes orgánicos.10,11. A. Y. dependiendo del clima , la dosis y otras condiciones ambientales. Es poco soluble en. IN FO. Aunque los productos químicos son aún la principal herramienta de control para los fitopatógenos, los agentes biológicos son una manera efectiva para proporcionar un. DE. control más rápido y más seguro; ayudando a la agroindustria a la disminución tanto de. AS. costos en la producción como de la presencia de residuos de pesticidas en los productos. EM. agrícolas y en el medio ambiente. Incluyendo así al control biológico dentro del manejo. DE. SI ST. integrado de plagas y enfermedades.12. N. El control biológico se define como la manipulación directa o indirecta por. CC. IO. parte del hombre de los agentes vivos que de forma natural tienen la capacidad de. RE. control.2 Este busca reducir las poblaciones de la plaga a una proporción que no cause. DI. daño económico, y permite una cantidad poblacional de la plaga que garantiza la supervivencia del agente controlador. Este agente mantiene su propia población y previene que la plaga retorne a grados poblacionales que causan daño.13. 2 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(20) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. En la actualidad, la aplicación de medios biológicos para el control de plagas en la agricultura reviste primordial importancia a escala mundial. Este método constituye un factor importante en los programas de manejo integrado (MIP) en los cultivos, lo. N. cual reduce la contaminación del medio ambiente y contribuye a lograr formas. UN IC. AC IÓ. sostenibles de producción.14. M. Así, el uso de productos biológicos para el control de plagas a nivel agrícola. CO. puede aportar información valiosa, logrando disminuir no sólo pérdidas económicas. Y. elevadas, sino también, el exagerado uso de pesticidas, que pueden provocar impacto. IC. A. adverso a la salud y ambiente.1Dentro de este contexto, las diferentes tácticas de control. RM. ÁT. utilizadas deben armonizar entre sí, por lo que resulta importante evaluar y seleccionar. IN FO. agroquímicos que sean compatibles con los organismos benéficos entre los cuales se. DE. encuentra Trichoderma spp.15,16. AS. Trichoderma spp. ha sido ampliamente estudiado y se ha propuesto como agente. EM. de control biológico contra. fitopatógenos foliares, pero. especialmente contra. SI ST. fitopatógenos nativos del suelo.17,18.Los factores clave que contribuyen al efecto. DE. antagónico de estos organismos son su rápido crecimiento, producción de metabolitos. N. antimicrobianos y sus características fisiológicas. 8,12,19 Es un excelente modelo para ser. CC. IO. estudiado debido a su fácil aislamiento y cultivo, rápido desarrollo en varios sustratos y. RE. por su condición de controlador biológico de una amplia gama de fitopatógenos.20 Los. DI. Géneros de Trichoderma más comunes empleados como contoladores biológicos son T. virens, T. viride y, por encima de todo, T. harzianum.21. 3 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(21) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. El control biológico basado en hongos como Trichoderma, es una estrategia efectiva a largo plazo, ya que es necesaria la adaptación del microorganismo al ambiente y su establecimiento en los ecosistemas, un mecanismo muy diferente al de los. N. productos químicos, que son compuestos inertes. Todos estos aspectos deben tenerse en. UN IC. AC IÓ. cuenta dentro del manejo integrado de enfermedades de plantas.22. M. Las especies pertenecientes al género Trichoderma se caracterizan por ser. CO. hongos saprófitos, que sobreviven en suelos con diferentes cantidades de materia. Y. orgánica, los cuales son capaces de descomponerla y en determinadas condiciones. IC. A. pueden ser anaerobios facultativos, lo que les permite mostrar una mayor plasticidad. IN FO. RM. ÁT. ecológica.16. Los mecanismos por los que las especies del género Trichoderma desplazan a. DE. los organismos fitopatógenos son fundamentalmente de tres tipos: competición directa. AS. por el espacio o por los nutrientes, producción de metabolitos antibióticos, ya sean de. EM. naturaleza volátil o no volátil y parasitismo directo de determinadas especies de. SI ST. Trichoderma sobre el fitopatógeno. Estos tres mecanismos no son excluyentes sino que. N. DE. actúan sinérgicamente en el control de los patógenos.4,23,24. CC. IO. Los individuos del género Trichoderma muestran hiperparasitismo o. RE. micoparasitismo, esta es la capacidad que tienen algunos hongos de parasitar a otros ; y. DI. la exhiben hacia diferentes patógenos de plantas tales como Rhizoctonia solani, Sclerotium rolfsii, y especies de los géneros Pythium, Phytophthora y Armillaria; razón por la cual éste biocontrolador se utiliza como fungicida en aplicaciones foliares,. 4 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(22) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. tratamientos de semillas y de suelo, aunque además se lo emplea como promotor del crecimiento vegetal.25,26. AC IÓ. N. En los últimos años se han realizado un gran número de trabajos sobre la compatibilidad de los plaguicidas y la fauna auxiliar (organismos benéficos).Así Reyes. UN IC. y col. evaluaron la compatibilidad de Trichoderma asperellum Samuels con herbicidas. M. de mayor uso en el cultivo del arroz como fenoxaprop-p-etilo; bispiribac-sodio y 2,4D. CO. sal de amina, demostrando que el primero y el último afectan el crecimiento micelial de. Y. T. asperellum y la esporulación ;mientras que la germinación se inhibe en más de un. IC. A. 50% con 2,4D sal de amina y el herbicida bispiribac-sodio resulta compatible con el. IN FO. RM. ÁT. hongo.27. Así mismo Muiño y col. realizaron estudios de compatibilidad in vitro de. DE. Trichoderma spp. con diferentes plaguicidas químicos de aplicación practica.Tambien. AS. se estudió el efecto del fertilizante inorgánico y los fungicidas zineb,mencozeb y thiram. EM. en tratamientos al suelo en presencia del hongo en el cultivo del tabaco.Los plaguicidas. SI ST. oxicloruro de cobre,metalaxyl,dimetomorf, trifluratin,napropamida y dimeatoato son. DE. compatibles in vitro con el hongo. El benomil se cataloga como tóxico.Y los fungicidas. N. zineb, mancozab y thiram ejercen una toxicidad ligera in vitro,aunque en tratamientos al. RE. CC. IO. suelo se consideran compatibles,asi como el fertilizante inorgánico.13. DI. De la misma manera Franco y Orrego evaluaron la compatibilidad de aislados. nativos de Trichoderma spp. con fungicidas para el tratamiento de semillas, demostrando que el fungicida curasemilla Carboxin+Thiram es compatible con los aislados nativos de Trichoderma spp. , mientras que el Carbendazim+Thiram es el. 5 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(23) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. menos compatible. Además que el Carboxin+Thiram no produce efectos negativos en la esporulación de Trichoderma spp. , mientras que el Tebuconazole presenta efecto. AC IÓ. N. genestático. 16. Debido a que el uso de productos químicos para el control de las enfermedades. UN IC. genera una serie de problemas que amenazan tanto la sostenibilidad y la calidad de las. M. cosechas como la salud de las personas y de los sistemas naturales.5 Y el control. CO. biológico de plagas a nivel agrícola puede aportar información valiosa, logrando. Y. disminuir no sólo pérdidas económicas elevadas, sino también, el exagerado uso de los. IC. A. mismos. Es por ello que se busca integrar dos diferentes tipos de métodos de control que. RM. ÁT. logren erradicar o al menos detener el proceso de infección causado por un. IN FO. fitopatógeno, sin mostrar efecto nocivo sobre el ecosistema. Para esto es fundamental conocer si existe tolerancia o interferencia entre los métodos a utilizar, teniendo en. DE. cuenta que uno de ellos es un producto biológico que podría verse afectado por el. AS. químico. Así la escasa información acerca de la existencia de compatibilidad entre los. EM. productos químicos y Trichoderma spp, ambos aplicados en cultivos agrícolas para el. SI ST. control de plagas; y, esto se deba posiblemente a que se ha señalado que Trichoderma. DE. posee resistencia innata a la mayoría de los agroquímicos.25 Por tal razón,se planteó. N. como objetivo de estudio evaluar el efecto de diferentes concentraciones de clorpirifos. CC. IO. sobre la germinación, el crecimiento y la capacidad antagónica de tres especies de. DI. RE. Trichoderma en condiciones de laboratorio,. 6 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(24) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. MATERIAL Y MÉTODO. N. 1. Material de estudio. AC IÓ. . 3 cultivos puros de Trichoderma spp. proporcionado por el Laboratorio. UN IC. de Fitopatología del Departamento Académico de Microbiología y. M. Parasitología de la Facultad de Ciencias Biológicas Universidad Nacional. CO. de Trujillo.(Anexo 1 ). Y.  Trichoderma asperellum ( TCA 3). IC. A.  Trichoderma asperellum ( TCA 21). . IN FO. RM. ÁT.  Trichoderma harzianum ( TCA 23). Insecticida DORSAN® 48 EC, cuyo principio activo es el Clorpirifos.. AS EM. SI ST. 2. Procedimiento. DE. (Anexo 2 ). DE. 2.1 Reactivación de los cultivos de Trichoderma spp. por. el. DI. RE. CC. IO. N. Los cultivos puros de Trichoderma spp proporcionados. Laboratorio de Fitopatología, fueron sembrados por puntura en frasquitos de vidrio conteniendo Agar Papa Sacarosa inclinado e incubados a temperatura ambiental (aprox. 25 ± 2 ºC), durante 7 días.. 2.2 Evaluación del efecto del insecticida Clorpirifos sobre Trichoderma spp.. 7 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(25) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 2.2.1. Evaluación del efecto de Clorpirifos sobre la germinación de esporas de Trichoderma spp.. 2.2.2 Preparación de las soluciones doble concentradas. AC IÓ. N. 2.2.1.1.. del insecticida Clorpirifos.. UN IC. Se realizaron diferentes diluciones del insecticida en caldo Papa. M. Sacarosa hasta alcanzar las concentraciones de 1920,2400 y 2880. Y. CO. ppm. a partir del producto original(480 g/L).. A. Preparación del inóculo de esporas. IC. 2.2.1.2.. RM. ÁT. El inóculo de esporas se obtuvo agregando 10 mL de agua. IN FO. destilada estéril a cada frasco plano con Agar Papa Sacarosa que contendrá Trichoderma spp. Luego se agito moderadamente con. DE. el fin de liberar las esporas del hongo y la suspensión resultante. AS. se colocó en un matraz estéril, donde se determinaró la. EM. concentración de esporas mediante el recuento en Cámara de. SI ST. Neubauer. Luego esta suspensión se diluyó con agua destilada. 2.2.1.3.. Inoculación e incubación para la evaluación de la germinación.. Se colocó 1 mL de cada dilución del insecticida doble. DI. RE. CC. IO. N. DE. estéril hasta obtener una concentración final de 105 esporas/mL.. concentrado en frasquitos de vidrio estériles, a los cuales se les agregó 1mL de la suspensión de esporas obtenido previamente, con lo cual se obtuvo una dilución o concentración final de 105. 8 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(26) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. esp/mL y concentraciones finales de 960,1200 y 1440 ppm para el insecticida clorpirifos. Se preparó también una suspensión de esporas control (0 ppm), agregando 1 mL de la suspensión de 3. AC IÓ. N. esporas en 1mL de caldo Papa Sacarosa. Se realizaron. repeticiones, incluyendo el control, las cuales se incubaron a. Lectura. CO. 2.2.1.4.. M. UN IC. 25°C durante 24 horas.. Y. Luego del periodo de incubación, se realizó el recuento en. IC. A. microscopio (40 X), de cada frasquito de penicilina. Se contó solo. RM. ÁT. esporas germinadas para cada concentración del insecticida. IN FO. evaluado, incluyendo el control.Los resultados fueron expresados como porcentaje promedio de germinación los cuales se obtuvo. DE. comparando el número de esporas germinadas en los frasquitos. AS. con las diferentes concentraciones del insecticida en relación a las. SI ST. EM. del grupo control.. Evaluación del efecto de Clorpirifos sobre el crecimiento de Trichoderma spp.. DI. RE. CC. IO. N. DE. 2.2.2.. 2.2.2.1.. Preparación del medio de cultivo con diferentes concentraciones de clorpirifos. Se preparó Agar Papa Dextrosa en cuatro matraces conteniendo 100 mL de medio cada uno. El medio de cultivo se esterilizó en autoclave y se dejó enfriar hasta una temperatura aproximada de. 9 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(27) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 50°C. Estando aún fundido el medio, a tres de los matraces se les adicionó el insecticida Clorpirifos en cantidad suficiente para obtener una concentración finalerd3w de 960,1200 y 1440 ppm,. AC IÓ. N. respectivamente. Al medio contenido en el matraz restante no se le agregó el insecticida, a fin de utilizarlo como control. Luego, el. UN IC. medio de cultivo de cada uno de los cuatro matraces se sirvió en. M. placas de Petri estériles (tres placas por cada concentración,. Siembra e Incubación. IC. 2.2.2.2.. A. Y. CO. incluyendo el control).. RM. ÁT. A partir del cultivo puro de Trichoderma spp. se sembró por. Papa Sacarosa. IN FO. puntura en la parte central de las placas Petri conteniendo Agar previamente preparadas en el paso anterior (tres. DE. placas por concentración incluidas las placas del control); las. AS. cuales se incubaron a temperatura ambiente(aprox. 25 ± 2°C). SI ST. EM. hasta que el hongo cubrió toda la superficie de la placa control.. Lectura. A partir del segundo día de siembra, y hasta que el hongo cubra toda la superficie de la placa control, se medio el radio de crecimiento micelial en centímetros (cm.) del hongo en diferentes direcciones, obteniendo un radio promedio de crecimiento por día. DI. RE. CC. IO. N. DE. 2.2.2.3.. por cada concentración del insecticida y el grupo control. Los resultados de crecimiento de Trichoderma spp. se expresaron en centímetros y en porcentaje de crecimiento (%C), teniendo en. 10 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(28) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. cuenta el crecimiento alcanzado por el grupo control (100%), de la siguiente manera:. N. 𝑅𝑎𝑑𝑖𝑜 𝑝𝑟𝑜𝑚𝑒𝑑𝑖𝑜 𝑑𝑒 𝑙𝑎 𝑐𝑜𝑙𝑜𝑛𝑖𝑎 𝑝𝑟𝑜𝑏𝑙𝑒𝑚𝑎 𝑥 100 𝑅𝑎𝑑𝑖𝑜 𝑝𝑟𝑜𝑚𝑒𝑑𝑖𝑜 𝑑𝑒 𝑙𝑎 𝑐𝑜𝑙𝑜𝑛𝑖𝑎 𝑡𝑒𝑠𝑡𝑖𝑔𝑜. 2.2.3.. Evaluación del efecto de Clorpirifos. sobre la capacidad. A. Y. CO. M. antagónica de Trichoderma spp.. UN IC. AC IÓ. %𝐶 =. ÁT. IC. Se realizó empleando la técnica de cultivo dual. Para ello se utilizó. RM. placas Petri con 15 mL de Agar Papa Sacarosa. Se sembró por puntura. IN FO. en un extremo de cada placa Petri a Botritys sp. y se incubó a 25ºc durante tres días. Pasado este tiempo, se sembró en el extremo opuesto a. concentraciones. AS. diferentes. DE. Trichoderma spp., que previamente ha sido sometido a un crecimiento a de. clopirifos. (960,1200. y. 1440. SI ST. EM. ppm).Posteriormente las placas se incubaron a 25 ºC por cinco días. La lectura se realizó cada 24 horas y a los siete días de incubación se evaluó. Grado Antagónico 1: Trichoderma sp. crece completamente sobre la colonia del patógeno y cubre la superficie del medio de cultivo.. DI. RE. CC. IO. N. DE. el grado de antagonismo según la escala de Bell y col.28, donde:. Grado Antagónico 2: Trichoderma sp. crece al menos en las dos terceras partes de la superficie del medio de cultivo.. 11 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(29) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Grado Antagónico 3: Trichoderma sp. y el patógeno cubren aproximadamente la mitad de la superficie del medio de cultivo.. AC IÓ. N. Grado Antagónico 4: El patógeno crece al menos en las dos terceras. UN IC. partes del medio de cultivo limitando el crecimiento de Trichoderma sp.. ÁT. Análisis de datos. IN FO. RM. 2.3.. IC. A. Y. CO. sp. ocupando toda la superficie del medio de cultivo.. M. Grado Antagónico 5: El patógeno crece sobre la colonia de Trichoderma. La determinación del efecto del insecticida Clorpirifos sobre Trichoderma spp. ,. DE. se realizó analizando el porcentaje de germinación y el porcentaje de. AS. crecimiento de Trichoderma spp.,en las diferentes concentraciones del. EM. insecticida, y los datos se procesaron en base a la prueba de Análisis de Varianza. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. Unidireccional (ANOVA), según el paquete estadístico SPSS v. 1. 12 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(30) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. RESULTADOS. En la figura 1 se muestra el porcentaje de germinación de Trichoderma. AC IÓ. N. asperellum (TCA 3) en diferentes concentraciones de clorpirifos, observándose la tendencia decreciente del porcentaje de germinación de T. asperellum (TCA 3). M. UN IC. conforme va aumentando la concentración del insecticida.. IC. A. Y. frente a diferentes concentraciones utilizadas de clorpirifos.. CO. En la figura 2 se muestra la germinación de Trichoderma asperellum (TCA 3). RM. ÁT. En la figura 3 se observa que no existe diferencia significativa en el porcentaje crecimiento de Trichoderma asperellum (TCA 3) frente a las diferentes. IN FO. de. DE. concentraciones de clorpirifos empleadas.. AS. En la figura 4 se muestra el crecimiento radial de Trichoderma asperellum (TCA. SI ST. EM. 3) frente a diferentes concentraciones de clorpirifos.. DE. En la figura 5 se observa el cultivo dual entre Trichoderma asperellum (TCA 3). N. y Botrytis sp. observándose que a todas las concentraciones predomina el grado de. RE. CC. IO. antagonismo 2.. DI. En la figura 6 se puede observar el porcentaje de germinación de Trichoderma. asperellum (TCA 21) observándose la tendencia decreciente del porcentaje de germinación del hongo conforme va aumentando la concentración del insecticida.. 13 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(31) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. En la figura 7 se muestra la germinación de Trichoderma asperellum (TCA 21) frente a diferentes concentraciones de clorpirifos.. AC IÓ. N. En la figura 8 observamos que no existe diferencia significativa en el porcentaje de crecimiento de Trichoderma asperellum (TCA 21) frente a las diferentes. M. UN IC. concentraciones de clorpirifos a las que fue sometido.. CO. En la figura 9 se muestra el crecimiento radial de Trichoderma asperellum (TCA. IC. A. Y. 21) frente diferentes concentraciones de clorpirifos.. RM. ÁT. En la figura 10 se observa el cultivo dual entre Trichoderma asperellum (TCA. IN FO. 21) y Botrytis sp. a diferentes concentraciones de clorpirifos, observándose que a todas. DE. las concentraciones predomina el grado de antagonismo 1.. AS. En la figura 11 se muestra el porcentaje de germinación de Trichoderma. EM. harzianum (TCA 23) en diferentes concentraciones de clorpirifos, observándose la. SI ST. tendencia decreciente del porcentaje de germinación de T. harzianum (TCA 23). N. DE. conforme va aumentando la concentración del insecticida.. CC. IO. En la figura 12 se muestra la germinación de Trichoderma harzianum (TCA 23). DI. RE. frente a diferentes concentraciones utilizadas de clorpirifos.. En la figura 13 se observa que no existe diferencia significativa en el crecimiento de Trichoderma harzianum (TCA 23) a medida que aumenta la concentración de clorpirifos.. 14 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(32) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. En la figura 14 se muestra el crecimiento radial de Trichoderma harzianum (TCA 23) frente a diferentes concentraciones de clorpirifos.. AC IÓ. N. En la figura 15 se observa el cultivo dual entre Trichoderma harzianum (TCA 23) y Botrytis sp. observándose que a todas las concentraciones de clorpirifos a las que. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. AS. DE. IN FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. M. UN IC. fue sometido el controlador predomina el grado den antagonismo 1.. 15 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(33) IC. A. Y. CO. M. UN IC. AC IÓ. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. RM. ÁT. Fig. 1. Porcentaje promedio de germinación de Trichoderma asperellum (TCA 3) a las. IN FO. concentraciones de 960, 1200 y 1440 ppm de clorpirifos a las 24 horas de incubación en condiciones de laboratorio.. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. AS. DE. a : p < 0.05; Existe diferencia significativa. 16 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(34) DE. IN FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. M. UN IC. AC IÓ. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. EM. AS. Fig. 2. Germinación de Trichoderma asperellum (TCA 3) a diferentes concentraciones. SI ST. de clorpirifos, a las 24 horas de incubación: A. 0 ppm; B. 960 ppm; C. 1200 ppm; D.. DI. RE. CC. IO. N. DE. 1440 ppm. 17 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(35) IC. A. Y. CO. M. UN IC. AC IÓ. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. RM. ÁT. Fig. 3. Porcentaje promedio de crecimiento radial de Trichoderma asperellum (TCA 3). IN FO. a las concentraciones de 960, 1200 y 1440 ppm de clorpirifos a los cuatro días de incubación en condiciones de laboratorio.. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. AS. DE. a , b ,c ,d : p > 0,05; no existe diferencia significativa. 18 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(36) SI ST. EM. AS. DE. IN FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. M. UN IC. AC IÓ. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Fig. 4. Crecimiento radial de Trichoderma asperellum (TCA 3) a diferentes. DE. concentraciones de clorpirifos a los 4 días de incubación: A. 0 ppm; B. 960 ppm; C.. DI. RE. CC. IO. N. 1200 ppm; D. 1440 ppm.. 19 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(37) SI ST. EM. AS. DE. IN FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. M. UN IC. AC IÓ. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Fig. 5. Cultivo dual de Botritys sp (Der.) frente a Trichoderma asperellum (TCA 3). DE. (Izq.) a los 7 días de incubación, previamente sometido a crecimiento a diferentes. IO. N. concentraciones de clorpirifos durante cuatro días: 0 ppm (A), 960 ppm (B),1200 ppm. DI. RE. CC. (C) y 1440 ppm (D) .. 20 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(38) IC. A. Y. CO. M. UN IC. AC IÓ. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. RM. ÁT. Fig. 6. Porcentaje promedio de germinación de Trichoderma asperellum (TCA 21) a las. IN FO. concentraciones de 960, 1200 y 1440 ppm de clorpirifos a las 24 horas de incubación en condiciones de laboratorio.. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. AS. DE. a : p< 0.05; Existe diferencia significativa. 21 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(39) DE. IN FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. M. UN IC. AC IÓ. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AS. Fig.7. Germinación de Trichoderma asperellum (TCA 21) a diferentes concentraciones. EM. de clorpirifos, a las 24 horas de incubación: A. 0 ppm; B. 960 ppm; C. 1200 ppm; D.. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. 1440 ppm.. 22 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(40) IC. A. Y. CO. M. UN IC. AC IÓ. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. RM. ÁT. Fig. 8. Porcentaje promedio de crecimiento radial de Trichoderma asperellum (TCA 21). IN FO. a las concentraciones de 960, 1200 y 1440 ppm de clorpirifos a los 4 días de incubación en condiciones de laboratorio.. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. AS. DE. a ,b ,c ,d : p> 0,05; no existe diferencia significativa. 23 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(41) SI ST. EM. AS. DE. IN FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. M. UN IC. AC IÓ. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Fig. 9. Crecimiento radial de Trichoderma. asperellum (TCA 21) a diferentes. DE. concentraciones de clorpirifos a los 4 días de incubación: A. 0 ppm; B. 960 ppm; C.. DI. RE. CC. IO. N. 1200 ppm; D. 1440 ppm.. 24 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(42) SI ST. EM. AS. DE. IN FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. M. UN IC. AC IÓ. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DE. Fig. 10. Cultivo dual de Botritys sp (Der.) frente a Trichoderma asperellum (TCA 21). N. (Izq.) a los 7 días de incubación, previamente sometido a crecimiento a diferentes. DI. RE. CC. IO. concentraciones de clorpirifos: 0 ppm (A), 960 ppm (B),1200 ppm (C) y 1440 ppm (D). 25 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(43) IC. A. Y. CO. M. UN IC. AC IÓ. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. ÁT. Fig. 11. Porcentaje promedio de germinación de Trichoderma harzianum (TCA 23) a. RM. las concentraciones de 960, 1200 y 1440 ppm de clorpirifos a las 24 horas de incubación. IN FO. en condiciones de laboratorio.. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. AS. DE. a : p< 0.05; Existe diferencia significativa. 26 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(44) de Trichoderma harzianum (TCA 23) a diferentes. AS. Fig. 12. Germinación. DE. IN FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. M. UN IC. AC IÓ. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. EM. concentraciones de clorpirifos, a las 24 horas de incubación: A. 0 ppm; B. 960 ppm; C.. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. 1200 ppm; D. 1440 ppm.. 27 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(45) IC. A. Y. CO. M. UN IC. AC IÓ. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. RM. ÁT. Fig. 13. Porcentaje promedio de crecimiento radial de Trichoderma harzianum (TCA 23. IN FO. a las concentraciones de 960, 1200 y 1440 ppm de clorpirifos a los 4 días de incubación en condiciones de laboratorio.. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. AS. DE. a ,b ,c ,d : p> 0,05; no existe diferencia significativa. 28 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(46) EM. AS. DE. IN FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. M. UN IC. AC IÓ. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. SI ST. Fig. 14. Crecimiento de Trichoderma harzianum (TCA 23) a las diferentes concentraciones Clorpirifos a los 4 días de incubación: A. 0 ppm; B. 960 ppm; C. 12000. DI. RE. CC. IO. N. DE. ppm; D. 1440 ppm.. 29 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(47) AS. DE. IN FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. M. UN IC. AC IÓ. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. EM. Fig. 15. Cultivo dual de Botritys sp (2) frente a Trichoderma harzianum (TCA 23) (1) a. SI ST. los 7 días de incubación, previamente sometido a crecimiento a diferentes. DI. RE. CC. IO. N. DE. concentraciones de clorpirifos: 0 ppm (A), 960 ppm (B) ,1200 ppm (C) y 1440 ppm (D).. 30 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(48) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DISCUSIÓN. El efecto de las diferentes concentraciones de clorpirifos sobre la germinación de. AC IÓ. N. Trichoderma tiene una tendencia decreciente. Así, el porcentaje de germinación se ve afectado a medida que aumenta la concentración del químico (Figuras 1,6 y 11); este. UN IC. efecto se puede apreciar desde la concentración de 960 ppm, siendo aún mayor en la. M. concentración de 1200 y 1440 ppm. Así T. asperellum (TCA 3 y TCA 21) y T.. CO. harzianum (TCA 23) presentaron un porcentaje de germinación de 11.22, 37.43 y 49.65. Y. % respectivamente a la concentración más alta de 1440 ppm. Además según el análisis. IC. A. estadístico (Anexo 11,13 y 15), se puede observar que existe diferencia significativa. IN FO. RM. ÁT. entre todas las concentraciones de clopirifos utilizadas (960,1200 y 1440 ppm).. En la literatura no abundan estudios científicos sobre el efecto de los plaguicidas el insecticida. la germinación de Trichoderma, pues la especie T.. AS. clorpirifos-etil afectaba. DE. sobre Trichoderma. Sin embargo Mendoza-Ledezma encontró que. EM. longibrachiatum no presentaba germinación frente a las seis concentraciones usadas. SI ST. (0.41, 0.60, 0.98, 5.10, 5.70 y 7.50%). Caso contrario a lo que sucedió en nuestro. DE. estudio, que si hubo reducción del porcentaje de germinación de las tres especies. N. evaluadas de Trichoderma. Una posible explicación es que muchos químicos como los. CC. IO. insecticidas afectan la conversión de los sustratos complejos y/o a las enzimas dentro de. RE. la espora y eso hace que no ocurra germinación; otra es que no en todas las esporas. DI. ingresa el químico, y debido a esto hay esporas que si germinan.28. Sarkar et al señalan a los insecticidas, quinalfos y dicofol como tóxicos a Trichoderma a la concentración más baja estudiada en la investigación(10 ppm).29 31 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(49) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Además Luina Muiño evaluó también el efecto de otros insecticidas como dimethoato y lamdacialotrina en Trichoderma ,encontrando que el primero causa una mortalidad de 60,5% a la concentración más alta (1000 mg i. a./L); mientras que ,el segundo provoco. N. valores de mortalidad hasta un 100 % in vitro incluso a concentraciones más bajas (100. UN IC. AC IÓ. mg i.a./L). 14. M. En las figuras 4, 9 y 14 se observa que el clorpirifos disminuye el crecimiento de. CO. Trichoderma spp a medida que se incrementa la concentración del insecticida, sin. Y. embargo al realizar el análisis estadístico (Anexo 12, 14 y 16) se encontró que no existe. IC. A. diferencia significativa a las diferentes concentraciones evaluadas (960,1200 y 1440. RM. ÁT. ppm), es decir que, en cualquiera de las concentraciones evaluadas el efecto del. IN FO. clorpirifos sobre el crecimiento de Trichoderma spp es el mismo. Posiblemente esto ocurra cuando el insecticida llega a un punto de saturación en el hongo en el cual ya no. DE. ejerce efecto sobre su desarrollo y por más que ingrese más clorpirifos el efecto será el. AS. mismo. Existen dos posibles explicaciones para esta conducta: la primera indica que los. EM. hongos, como un mecanismo de resistencia, pueden metabolizar los insecticidas y. SI ST. liberar compuestos que pueden ser usados por el hongo como nutrientes secundarios, y. DE. la segunda que en un medio tóxico, el hongo podría estar haciendo un esfuerzo. CC. IO. N. reproductivo, incrementando la producción de esporas.30. RE. Además se sabe que el género Trichoderma tiene una alta capacidad para. DI. degradar diversos compuestos del sustrato donde se desarrolla. Su metabolismo enzimático tiene la capacidad de degradar una amplia variedad de sustratos, que van desde celulosa hasta compuestos inorgánicos como diversos plaguicidas, incluidos herbicidas, organoclorados e insecticidas organofosforados como el clopririfos.31. 32 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..