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Efecto antibacteriano in vitro del colutorio a base de matricaria chamomilla (manzanilla) sobre el fusobacterium nucleatum ATCC 25586

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Academic year: 2020

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(1)Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE POSTGRADO. PO. SG. RA DO. MAESTRIA EN ESTOMATOLOGÍA. DE. “EFECTO ANTIBACTERIANO IN VITRO DEL COLUTORIO A BASE DE Matricaria chamomilla (MANZANILLA) SOBRE EL Fusobacterium. G IT AL. nucleatum ATCC 25586”.. DI. TESIS PARA OPTAR EL TÍTULO PROFESIONAL DE:. ASESOR:. Br. EDITH ESTHER DELGADO ASMAT. TE. AUTORA:. CA. MAESTRA EN ESTOMATOLOGIA. Dr. MARCO REATEGUI NAVARRO. BI. BL I. O. COASESORES. Dra. ELVA MEJIA DELGADO Dra. MARILU SOTO TRUJILLO – PERÚ 2015. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(2) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. RA DO. MIEMBROS DEL JURADO. Dr. Armando Antonio Aguirre Aguilar. DE. PO. SG. PRESIDENTE. G IT AL. Dra. Teresa Etelvina Ríos Caro. CA. DI. SECRETARIA. MIEMBRO. BI. BL I. O. TE. Dr. Marco Antonio Reátegui Navarro. ii. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(3) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. DEDICATORIA. SG. RA DO. En esta etapa de mi vida me siento contenta conmigo misma, ya que he logrado culminar etapas importantes que ayudan a mi formación académica y profesional; etapas en el cual muchos han sido parte de esos momentos; empezando por Dios; que me concedió la gran dicha de la vida.. G IT AL. DE. PO. Gracias papá, porque sé que estos años de Sacrificio no serán en vano, eres mi ejemplo de empeño , amor y de gran perseverancia en todo tipo de trabajo gracias por tus palabras, consejos que siempre me han sabido conducir por el camino correcto.. O. TE. CA. DI. A mi mamá, no solo por su gran amor maternal sino porque también siempre ha sido mi amiga, confidente, y pieza importante en todos mis logros.. BI. BL I. A mis hermanos, que a pesar de sus éxitos y obstáculos, me han enseñado a nunca darme por vencida y ser mejor cada día.. iii. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(4) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. AGRADECIMIENTOS. RA DO. Agradecer de manera muy especial a la Dra. Teresa Rios Caro, por su paciencia, humildad y su gran apoyo. Además de sus consejos y enseñanzas; por ser un modelo de. SG. gran ser humano y profesional.. PO. Asimismo, a mis coasesores a la Dra. Elva Mejía por su apoyo en la parte experimental de mi tesis; sobre todo por sus sabios consejos y amistad. De igual manera, a la Dra.. DE. Marilú Soto por sus importantes colaboraciones para la ejecución la tesis.. G IT AL. A cada una de las personas que me transmitieron ánimos, por su amistad y de alguna manera su apoyo, gracias por su amistad incondicional, gracias por estar siempre. DI. conmigo en las buenas y en las malas, y sobre todo en los logros de cada uno de. CA. nosotros.. TE. Y agradecer especialmente a Dios una vez más por ser mi gran apoyo para cumplir esta. O. importante meta y a mi familia por transmitirme su fuerza y por no dejarme vencer ante. BI. BL I. ningún obstáculo.. iv. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(5) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. RESUMEN. El presente estudio de investigación tuvo como propósito determinar el efecto antibacteriano in vitro del colutorio a base de Matricaria chamomilla (Manzanilla). RA DO. frente a Fusobacterium nucleatum ATCC 25586.. SG. El estudio se desarrolló en los ambientes del laboratorio de Farmaconogsia de la Universidad Nacional de Trujillo y en los laboratorios de microbiología de la Facultad. PO. de Medicina de la Universidad Nacional de Trujillo. La muestra estuvo constituida por. DE. 16 discos de difusión, divididos en 5 grupos; es decir, un grupo con muestras de Clorhexidina, tres grupos de manzanilla con sus respectivas dosis cada uno 0.8%, 1,6%. G IT AL. y 2,4% y un grupo con agua destilada. La efectividad de dicho colutorio frente a Fusobacterium nucleatum ATCC 25586 se determinó a través de la sensibilidad bacteriana mediante la difusión de discos, determinándose los halos inhibitorios de. CA. DI. acuerdo a la Escala de Duraffourd.. TE. Los resultados obtenidos de la presente investigación nos permiten concluir que el. O. colutorio a base de Matricaria chamomilla (Manzanilla) presenta efecto antibacteriano. BI. BL I. frente a Fusobacterium nucleatum ATCC 25586.. Palabras clave: Matricaria chamomilla, Fusobacterium nucleatum, escala durafourd.. v. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(6) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ABSTRACT. This research study was to determine the in vitro antibacterial mouthwash based. RA DO. Matricaria chamomilla (chamomile) Fusobacterium nucleatum against ATCC 25586.. SG. The study was conducted in laboratory environments Farmaconogsia of the National University of Trujillo and microbiology laboratories of the Faculty of Medicine of the. PO. National University of Trujillo. The sample consisted of 16 discs broadcast, divided into. DE. 5 groups; that is, a group with Chlorhexidine samples, chamomile three groups with their respective doses each 0.8%, 1.6% and 2.4% and a group with distilled water. The. G IT AL. effectiveness of such mouthwash Fusobacterium nucleatum ATCC against 25586 was determined through bacterial sensitivity through diffusion disc, determining the. DI. inhibitory halos through Duraffourd scale.. CA. The results of this study allow us to conclude that the mouthwash based Matricaria. TE. chamomilla (chamomile) has antibacterial effect against Fusobacterium nucleatum. BL I. O. ATCC 25586.. BI. Keywords: Matricaria chamomilla, Fusobacterium nucleatum, durafourd scale.. vi. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(7) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. INDICE. RA DO. I.- INTRODUCCIÓN ...................................................................................................... 1. SG. II.- DISEÑO METODOLÓGICO... ............................................................................. 10. PO. III.- RESULTADOS ..................................................................................................... 31. DE. IV.- DISCUSIÓN .......................................................................................................... 34. G IT AL. V.- CONCLUSIONES .................................................................................................. 38. DI. VI.- RECOMENDACIONES ...................................................................................... 39. CA. VII.- REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS .............................................................. 40. BI. BL I. O. TE. ANEXO .......................................................................................................................... 44. vii. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(8) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. I.. INTRODUCCIÓN. Actualmente la utilización de productos naturales para el control de la placa bacteriana permite su uso frecuente con un mínimo de contraindicaciones. Tenemos una serie de. RA DO. investigaciones con respecto al uso de la medicina natural. En odontología existen estudios que se realizan con el objetivo de demostrar su efectividad frente a las bacterias. SG. que más destacan en la cavidad oral.. PO. La placa bacteriana es una película pegajosa e incolora que se forma y deposita constantemente sobre todas las superficies de la boca (dientes, encías, aparatos de. G IT AL. DE. ortodoncia, prótesis)1,2.. La placa bacteriana es la principal causante de la caries y de la enfermedad periodontal, siendo ambas las principales causantes de la pérdida dentaria. La placa dental está. DI. formada por masas invisibles de microorganismos dañinos que se encuentran en la boca. CA. y se pegan a los dientes 3,4.. TE. La formación de la placa bacteriana es el resultado de una serie de procesos complejos. O. que involucran una variedad de bacterias y componentes de la cavidad bucal del. BL I. hospedero. Estos procesos comprenden en primer lugar la formación de la película. BI. adquirida sobre la superficie del diente; seguido de la colonización por microorganismos específicos adheridos sobre la película adquirida; y finalmente la formación de la matriz de la placa1,2.. Su mineralización da lugar a lo que conocemos como sarro, una capa dura sobre nuestros dientes que además de antiestética puede llevarnos a la pérdida de los dientes. 1. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(9) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. El sarro es el que provoca y mantiene la inflamación gingival (encías), responsable en una gran parte del desarrollo de la gingivitis y la periodontitis. La dureza del calculo o sarro dental va a depender no solo de la cantidad de placa bacteriana sino también de la cantidad de secreción de la glándulas salivales; por ello la mayor cantidad de. RA DO. acumulación de cálculo se halla preferentemente cerca a los conductos secretores de las glándulas salivales mayores como la cara lingual de los dientes anteroinferiores y la. SG. cara vestibular de los primeros molares superiores1.. PO. La placa bacteriana es una compleja masa blanquecina organizada por microorganismos en diversas etapas de desarrollo con capacidades de proliferar de acuerdo a las. G IT AL. DE. condiciones medioambientales2.. Así como existe una placa cariogénica, hay también una placa periodontopática que se diferencía muy bien de los microorganismos que conforman normalmente la flora. CA. DI. bucal2.. TE. Existen más de 500 especies microbianas en la cavidad oral, pero sólo un grupo de complejos bacterianos son los principales responsables del inicio y progresión de una. BL I. O. lesión cariosa o periodontal1,2.. BI. Las medidas con las que se puede prevenir su colonización o desorganizar esos complejos bacterianos son principalmente mecánicas y químicas2,3.. Ciertamente la limpieza mecánica con el cepillado y la limpieza interdental remueven temporalmente la placa bacteriana, pero existen suficientes evidencias científicas sobre. 2. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(10) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. el verdadero valor terapéutico de ciertos agentes químicos para el control de la placa bacteriana que se adhiere supragingivalmente. Y el uso de sistemas profesionales de liberación controlada convierte a estos agentes químicos en auxiliares importantes para. RA DO. el control de los complejos microbianos que se desarrollan por debajo de la encía2.. El dentífrico y el enjuague bucal son a la fecha los medios idóneos para incorporar agentes químicos con diversas capacidades antisépticas e incluso terapéuticas durante la. SG. limpieza dental en casa. La acción terapéutica de un agente químico suministrado a. PO. través de un enjuague no sólo debe reportarse por la disminución significativa de bacterias de la placa, sino que debe demostrar también que al disminuir a ciertos. DE. patógenos se eliminan signos de inflamación gingival. La sustantividad que poseen. G IT AL. ciertos agentes químicos, es la que permite una acción prolongada al paso de las horas después del uso del enjuague3,4.. DI. Por esta razón, un colutorio usado dos veces al día debe permanecer en la boca al menos. TE. CA. unos treinta segundos y no comer, beber o fumar durante los próximos treinta minutos.. La película formada opera como barrera de protección proporcionando lubricación a las. BL I. O. superficies e impidiendo la desecación del tejido. Además, posee moléculas que funcionan como sitios de unión para la adherencia de microorganismos y enzimas de. BI. origen salival, como lizosimas, amilasas y peroxidasas, que favorecen la colonización bacteriana sobre la superficie de la película5,6.. 3. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(11) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. La película adquirida del esmalte se forma en menos de dos horas en una superficie dental limpia, denominándose "cutícula temprana" o película temprana, esta carece de bacterias4,-6.. RA DO. Algunas enzimas presentes en esta película, como las glucosiltransferasas, contribuyen a facilitar la adhesión de los microorganismos a la superficie dental6.. SG. Son variados los mecanismos que intervienen en la colonización inicial de las. PO. superficies dentarias por las bacterias y en su desarrollo y multiplicación posterior,. DE. dentro de la placa6.. G IT AL. Las bacterias, una vez establecidas comienzan a multiplicarse hasta aproximadamente las 48 horas de la formación de la película adquirida, momento en el que finaliza esta. DI. etapa1,7.. CA. Los métodos más eficaces, que disponemos en la actualidad, para la remoción mecánica de la placa dental son el cepillado dental y la utilización de elementos accesorios como. BL I. O. TE. el hilo dental, pastas dentales, enjuagatorios bucales, entre otros 4,8.. Los enjuagues bucales poseen una combinación de aceites esenciales como el timol,. BI. mentol o eucalipto, que penetran por las paredes celulares de las bacterias de la boca e inhiben la acción de las enzimas. De esta forma la placa bacteriana se ve reducida, y como su uso es posterior al cepillado, complementa la acción de éste, penetrando el líquido por sitios donde las cerdas del cepillo no pueden llegar8.. 4. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(12) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. En cuanto al término medicina natural, naturopatía o medicina naturopática, es usado generalmente para designar una práctica o terapia de intención preventiva o curativa, que se ha originado al margen del desarrollo moderno de la medicina y la farmacología. Se emplea para cualquier medicina alternativa o complementaria que utiliza remedios. RA DO. tradicionales o no industriales 9,10.. Matricaria chamomilla es la denominación botánica que da la comúnmente conocida. SG. como manzanilla, es una hierba aromática anual de la familia de las compuestas. PO. (Asteráceas) de hasta 60 cm de altura. Tallos largos erectos. Hojas divididas con lóbulos dentados. Flores en capítulos de hasta 2’5 cm de diámetro; lígulas blancas, que cuelgan amarillos, pentalobulados. DE. a medida que maduran; flósculos. un. receptáculo. G IT AL. cónico9, 11,12.. en. Las investigaciones modernas han demostrado que usada externamente esta planta. DI. posee propiedades que la hacen efectiva para reducir inflamaciones y tratar problemas. CA. como la caspa, el eccema, y las hemorroides. También se puede emplear en gárgaras. TE. para dolores de garganta y gingivitis (inflamación de las encías)13.. BL I. O. Matricaria chamomilla se industrializa en tres formas: flores secas, en bruto o en bolsitas filtrantes (de uso popular o para infusiones); en aceite esencial (en la industria. BI. farmacéutica, perfumera y en la industria alimentaria) y en extracto absoluto (en farmacia)14,15.. La manzanilla posee propiedades antimicrobianas y fungicidas. Se sabe que inhibe el crecimiento de las bacterias conocidas como estafilococos y estreptococos14.. 5. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(13) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. La propiedad antibacteriana de la manzanilla es atribuida principalmente al bisabolol que forma parte de su composición química, sin embargo tanto los flavonoides, cumarinas y los sesquiterpenos en general, presentes en la manzanilla, muestran. RA DO. también actividad antimicrobiana9,16-18.. La lista de usos médicos de esta planta es muy larga, es efectiva contra el insomnio, la ansiedad, depresiones menopáusicas, pérdida del apetito, diarrea, cólicos, trastornos de. SG. tipo nervioso de mujeres y niños; en aquéllas, sobre todo, cuando sufren las molestias. PO. de sus períodos menstruales18.. DE. En uso externo actúa como antiinflamatorio, cicatrizante de piel y mucosas, antiséptica. G IT AL. y antineurálgica. A la manzanilla se le atribuyen un sin número de cualidades curativas pero no existen estudios completos que las verifiquen científicamente. Entre las cualidades de esta planta están: Es un antiinflamatorio. Ayuda a aliviar los procesos de. DI. inflamación tanto tomándola o usándola externamente; se le utiliza para hacer gárgaras. TE. CA. cuando hay problemas de garganta y de encías; ayuda con la cicatrización9,19,20.. Es importante recalcar que a pesar de su gran número de usos, la manzanilla está. BL I. O. contraindicada en personas alérgicas a las Asteráceas (compuestas); también no se encuentra información (informes) acerca de efectos teratogénicos en el feto, daños en la. BI. madre gestante y tampoco interacciones con otros fármacos21.. En el ámbito odontológico se ha desplegado un gran interés por parte de los investigadores en estudiar sustancias naturales en diversas plantas que poseen propiedades antimicrobianas; con el propósito de incluirlos en programas preventivos y. 6. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(14) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. curativos con el fin de ayudar en el control de las infecciones que se producen en la cavidad bucal22.. Cárcamo V. en Chile en 201123 demostró que el colutorio de extracto de Matricaria. evidenciándose en el recuento bacteriano del enjuague utilizado.. RA DO. chamomilla; evidencia una disminución significativa de la carga bacteriana,. SG. Fidler P. y col en Murcia en 199624, en su estudio realizado en 164 pacientes con. PO. cáncer, encontraron que, después de aplicar enjuagatorio con manzanilla, no se observo. DE. incidencia de estomatitis después de la quimioterapia. G IT AL. Carl W. y Emrich LS en Murcia en 199125, realizaron un estudio en 98 pacientes con cáncer que iban a recibir radioterapia y quimioterapia para prevenir la mucositis. Se realizaron enjuagatorios de 100 ml distribuidos en 3 sesiones al día. Se encontró que el. DI. enjuagatorio de manzanilla disminuyo la severidad de la mucositis y otro grupo de. CA. pacientes no manifestaron presencia de mucositis.. TE. Gaete F. y Oliva M en Chile en 201226, realizaron un estudio en 30 sujetos con. BL I. O. enfermedad gingival entre 19 y 25 años. Se dividieron en 3 grupos y se realizaron enjuagatorios a base de Matricaria chamomilla,. Clorhexidina (0,12%) y Placebo.. BI. Demostrando que el colutorio de Manzanilla es efectivo en la reducción de la inflamación gingival comparada con Placebo y Clorhexidina.. Carcamo O, Oliva M. y Gonzalez C. en Chile en 201127, realizaron un estudio en 18 funcionarios de la Facultad de Odontología de la Universidad del Desarrollo en Chile.. 7. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(15) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Demostrando efectividad con el colutorio de Matricaria chamomilla en la disminución del recuento bacteriano frente a Clorhexidina al 0,12% y suero fisiológico.. Considerando que el mantenimiento de la salud de la cavidad oral es vital para evitar. RA DO. complicaciones y teniendo en cuenta que la Matricaria chamomilla es una planta medicinal en la que no ha evidenciado efectos adversos se propone la realización de la presente investigación con la finalidad de contribuir al mantenimiento del equilibrio. PO. SG. homeostático de la cavidad bucal.. Este proyecto radica en la elaboración de colutorios a base de productos biocompatibles. DE. siendo el principio activo los extractos de plantas cultivadas en nuestro litoral, para. G IT AL. comprobar su efectividad frente a bacterias periodontopatogenas, ya que en nuestra población, la caries y enfermedad periodontal son las dos enfermedades más prevalentes en los niños y adolescentes, ambas causadas por la presencia de placa bacteriana. DI. producto de una mala higiene oral. En Perú según un reporte de la Organización. CA. Panamericana de la Salud, la prevalencia de gingivitis es de 85% en la población en. TE. general28. Con todos estos elementos, surge la necesidad de poder desarrollar un sistema de liberación de drogas a partir de materias primas impliquen un. bajo costo, fácil aplicación y con. BL I. O. chamomilla (Manzanilla), que. como la Matricaria. características adecuadas para la función destinada; que sea clínicamente útil como un. BI. agente antimicrobiano tópico para el tratamiento de la periodontitis sin tener los efectos secundarios y altos costos de los medicamentos que se tienen en el mercado, y que puedan ser incluirlos en programas preventivos para el control de la placa bacteriana.. 8. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(16) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. El propósito del presente estudio fué determinar el efecto antibacteriano in vitro del colutorio a base de Matricaria chamomilla (Manzanilla) frente. a Fusobacterium. nucleatum ATCC 25586.. RA DO. 1. Formulación del Problema.. ¿Cuál es el efecto antibacteriano in vitro del colutorio a base de Matricaria. SG. Chamomilla (manzanilla) sobre el Fusobacterium nucleatum ATCC 25586?. PO. 2. Hipótesis. El colutorio a base de Matricaria chamomilla (manzanilla) posee efecto. 3. Objetivos. 3.1. General.. G IT AL. DE. antibacteriano in vitro sobre el Fusobacterium nucleatum ATCC 25586.. DI. - Determinar el efecto antibacteriano in vitro del colutorio a base de. CA. Matricaria chamomilla sobre el Fusobacterium nucleatum ATCC 25586.. TE. 3.2. Específicos.. BL I. O. - Determinar el efecto antibacteriano in vitro del colutorio a base de. Matricaria chamomilla (manzanilla) sobre el Fusobacterium nucleatum. BI. ATCC 25586, según concentraciones.. - Determinar el tipo de metabolitos secundarios del colutorio a base de Matricaria chamomilla.. 9. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(17) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. II. DISEÑO METODOLÓGICO:. 1. Material de estudio. 1.1. Tipo de investigación Según la evolución. Según la. Según la. en que se capta la. del fenómeno. comparación de. interferencia del. información. estudiado. poblaciones. investigador en el. RA DO. Según el período. Longitudinal. Comparativo. Experimental. PO. Prospectivo. SG. estudio. 1.2 Área de estudio.. DE. La presente investigación se realizó en el Laboratorio de. G IT AL. Microbiología de la Facultad de Medicina Humana de la Universidad Nacional de Trujillo, Trujillo - Perú.. DI. 1.3 Definición de la población muestral.. CA. 1.3.1 Características generales: Conjunto de tubos de ensayo conteniendo la macrodilución de. BI. BL I. O. TE. caldo cerebro – corazón del microorganismo de prueba: Fusobacterium nucleatum ATCC 25586 y la concentración del colutorio a base de Matricaria chamomilla correspondiente. Conjunto de placas petri con la macrodilución en. agar soya. tripticasa del microorganismo de prueba: Fusobacterium nucleatum ATCC 25586 y la concentración del colutorio a base de Matricaria. chamomilla correspondiente.. 10. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(18) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Conjunto. de. placas. petri. en. medio. Müller. Hinton. del. microorganismo de prueba: Fusobacterium nucleatum ATCC 25586 y la concentración del colutorio a base de Matricaria chamomilla. RA DO. correspondiente.. 1.3.1.1 Criterios de inclusión:.  Tubo de ensayo conteniendo la macrodilución de caldo cerebro. SG. corazón de la cepa de Fusobacterium nucleatum ATCC 25586 y el. PO. colutorio a base de Matricaria chamomilla a la concentración. DE. correspondiente.. G IT AL.  Placa petri con la macrodilución en agar soya tripticasa del microorganismo de prueba: Fusobacterium nucleatum ATCC 25586. DI. y el colutorio a base de Matricaria chamomilla correspondiente.. CA.  Placa petri en medio Müller Hinton del microorganismo de. TE. prueba: Fusobacterium nucleatum ATCC 25586 y la concentración. BI. BL I. O. del colutorio a base de Matricaria chamomilla correspondiente.. 1.3.1.2 Criterios de exclusión:  Tubo de ensayo con la macrodilución que presento algún tipo de daño o rajadura en su estructura durante el proceso de incubación.. 11. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(19) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación.  Tubo de ensayo con la macrodilución cuyo resultado en el proceso de incubación pueda ser dudoso.  Placa Petri con la macrodilución que presentó algún tipo de daño o rajadura en su estructura durante el proceso de incubación.. RA DO.  Placa petri con la macrodilución cuyo resultado en el proceso. 1.3.1.3 Criterios de eliminación:. Tubo de ensayo con la macrodilución que sufrió. PO. . SG. de incubación pueda ser dudoso.. los. DE. deterioro, daño o rajadura durante la conservación y. . G IT AL. procedimientos que no permitieron su medición posterior.. Placa Petri con la macrodilución que sufrió deterioro,. daño o rajadura durante la conservación y los procedimientos. CA. DI. que no permitieron su medición posterior.. TE. 1.3.2 Diseño estadístico de muestreo:. BI. BL I. O. 1.3.2.1 Unidad de Análisis: Cada uno de los tubos de ensayo conteniendo la macrodilución en caldo de. tioglicolato de. la cepa de. Fusobacterium nucleatum ATCC 25586.. Cada uno de las placas petri con la macrodilución de caldo de tioglicolato de. 12. la cepa de Fusobacterium nucleatum. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(20) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. y el colutorio a base de Matricaria. ATCC 25586. chamomilla a la concentración correspondiente.. Cada uno de las placas petri en medio Müller Hinton de la. colutorio. a. base. de. y el. RA DO. cepa de Fusobacterium nucleatum ATCC 25586 Matricaria. a. la. SG. concentración correspondiente.. chamomilla. PO. 1.3.2.2 Unidad de muestreo:. Cada uno de los tubos de ensayo conteniendo la. DE. macrodilución de caldo tioglicolato de. la cepa de. G IT AL. Fusobacterium nucleatum ATCC 25586 y el colutorio a base de Matricaria chamomilla a la concentración. DI. correspondiente.. CA. Cada uno de las placas petri con la macrodilución de caldo. BI. BL I. O. TE. tioglicolato de la cepa de Fusobacterium nucleatum ATCC 25586 y el colutorio a base de Matricaria chamomilla a la. concentración correspondiente.. Cada uno de las placas petri en medio Müller Hinton de la cepa de Fusobacterium nucleatum ATCC. 25586 y el. colutorio a base de Matricaria chamomilla a la concentración correspondiente.. 13. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(21) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 1.3.2.3 Tamaño muestral. El. tamaño muestral se determinó usando la fórmula que. SG. RA DO. corresponde a comparación de medias29.. Donde: =. Número placas por grupo. PO. n. Zα/2 = 1.96 Valor Z al 5% de error tipo I. DE. Zβ = 1.282 Valor Z al 10% de error tipo II µ1=17.70 mm Susceptibilidad promedio del colutorio a una. G IT AL. concentración del 0.80%, estimada mediante un estudio piloto.. DI. µ2=18.80 mm Susceptibilidad promedio del colutorio a una. estudio piloto.. σ = 0.95mm Desviación estándar de la susceptibilidad del colutorio a una concentración del 0.80%, estimada mediante un estudio piloto. Reemplazando se tiene:. BI. BL I. O. TE. CA. concentración del 2.40%, estimada mediante un. n= 16 placas/grupo La muestra estará conformada por 16 placas por grupo.. 14. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(22) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 1.3.3 Método de selección La selección de la muestra se realizará a través de un método no probabilístico por conveniencia.. RA DO. 1.4 Consideraciones Éticas.. Con respecto a las consideraciones éticas, por realizarse el. SG. trabajo de investigación in vitro, no hay incumplimiento de normas éticas. Sin embargo en el presente trabajo se respetará. PO. el principio ético adoptado en el capítulo 6 del código de ética del Colegio Médico del Perú titulado: “Del trabajo de. DE. investigación”, específicamente el capítulo 6 Art. 48°, donde. G IT AL. habla de la veracidad en la publicación de los resultados obtenidos en el estudio y observación rigurosa de las normas. DI. de bioseguridad.30. TE. CA. 2. Métodos, Técnicas e Instrumento de recolección de datos.. O. 2.1 Método. BI. BL I. Observación.. 15. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(23) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.2. Descripción del procedimiento.. A.. De la aprobación del proyecto: El primer paso para la realización del presente estudio de investigación. RA DO. será la obtención del permiso para la ejecución, mediante la aprobación del proyecto por el Comité Permanente de Investigación Científica de la. PO. correspondiente Resolución Decanal.. SG. Escuela de post grado de la Universidad Nacional de Trujillo con la. B. De la autorización para la ejecución:. DE. Una vez aprobado el proyecto se procedió a solicitar el permiso para. G IT AL. poder trabajar en el Laboratorio de Investigación de la Sección de Microbiología, Facultad de Medicina de la Universidad Nacional de. DI. Trujillo.. CA. C. De la recolección y selección de la Matricaria chamomilla:. TE. La especie objeto de estudio Matricaria Chamomilla (manzanilla) fue. O. recolectada en la provincia de Otuzco, en el mes de octubre, período de. BI. BL I. floración de la planta.. Una vez realizada la recolección de Matricaria chamomilla (manzanilla) se procedió a hacer la selección de las flores con el objetivo de realizar una separación de las partes deterioradas y evitar la mezcla con otra especie.. 16. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(24) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. D. De la identificación taxonómica de la Matricaria chamomilla:. Un ejemplar completo de la planta se llevó al Herbarium Truxillense de la Universidad Nacional de Trujillo (HUT) para su identificación y. especie.. SG. E. De la desecación de la Matricaria chamomilla:. RA DO. posterior verificación taxonómica según el sistema filogenético de la. PO. - DESECACIÓN Para evitar cualquier tipo de alteración que pudiera afectar a la. DE. composición de la planta, fue convenientemente desecada. Las flores seleccionadas se colocaron sobre papel kraft y se llevó a secar. De la molienda y tamización de la Matricaria chamomilla:. DI. F.. G IT AL. a temperatura ambiente y bajo sombra.. CA. Una vez desecado las flores de Matricaria chamomilla (“Manzanilla”), se procedió a desmenuzar manualmente y se pasó a través de un set de hasta obtener el. tamaño de partículas adecuadas; luego se. TE. tamices. O. almacenó adecuadamente en frascos de vidrio ámbar en un lugar. BI. BL I. desprovisto de humedad y luz directa, hasta su posterior utilización.. G. De. la. preparación. del. extracto. fluido de la Matricaria. chamomilla:. Se pesó 1000 g de flores de Matricaria chamomilla (Manzanilla) y separó en fracciones de 500 g, 300g, y 200 g. Se humectó 500 g. de. 17. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(25) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. manzanilla con cantidad suficiente de menstruo (alcohol de 30º GL.) en. un percolador de vidrio se agregó las flores de Matricaria. chamomilla humectada y se maceró por 48 horas. Pasado las 48 horas, se percoló y se recibió 200 ml, los cuales se. RA DO. separaron y se guardaron en un frasco ámbar. Se seguió recibiendo 5 porciones sucesivas de percolado de 300 ml. cada una enumerándola. SG. según el orden que se recibe. Luego se humectó la segunda porción de 300 g de flores de Matricaria chamomilla con cantidad suficiente de. PO. menstruo, se dejó macerar por 48h. Pasado las 48 horas, se percoló y. DE. se recibió 300 ml, los cuales se separaron y se guardaron en el frasco ámbar donde se almacenó los 200 mL de la primera fracción, se. G IT AL. sigue recibiendo 5 porciones sucesivas de percolado de 200 mL cada una enumerándola según el orden que se recibe. Luego se humectó la tercera fracción de 200 g de flores de Matricaria. DI. chamomilla con cantidad suficiente de menstruo, se dejó. macerar. CA. por 48 horas.. TE. Pasado las 48 horas, se percoló y se recibió 500 mL, lo cual se reunió. O. a las fracciones anteriores para hacer un volumen de 1000 mL del. BL I. extracto fluido.31. BI. H.. Identificación de metabolitos secundarios en el extracto fluido de. Matricaria chamomilla (Manzanilla). Para la identificación cualitativa de la presencia de metabolitos secundarios (Manzanilla),. en. el. extracto. fluido. de. Matricaria. chamomilla. se utilizó el método descrito por Miranda  Cuellar,. modificado.32. 18. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(26) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. . Ensayo de catequinas: Para ello se tomó 1 gota de la solución del extracto, con la ayuda de un capilar y se aplicó sobre papel filtro. Sobre la mancha se aplicó solución de carbonato de sodio. La aparición de una mancha verde. RA DO. carmelita a la luz UV, ha de indicar un ensayo positivo. . Ensayo de Baljet: Permitió reconocer en un extracto la presencia de compuestos con agrupamiento lactónico, en particular cumarinas, aunque otros compuestos lactónicos pueden dar positivo al ensayo.. SG. Se tomó 1 gota del extracto y se adicionó 1mL del reactivo, considerándose un ensayo positivo la aparición de coloración o precipitado rojo (++ y +++). . PO. respectivamente.. DE. Ensayo de Liebermann-Burchard: Permitió reconocer en un extracto la presencia de triterpenos y/o esteroides, por ambos tipos de productos poseer. posición 5-6.. G IT AL. un núcleo del androstano, generalmente insaturado en el anillo B y la. Para ello, el solvente deberá evaporarse en baño de agua y el residuo redisolverse en 1 mL de cloroformo. Se adicionó 1mL de anhídrido acético. DI. y se mezcló bien. Por la pared del tubo de ensayo se dejó resbalar II a III. CA. gotas de ácido sulfúrico concentrado sin agitar. Un ensayo positivo se reconoció por un cambio rápido de coloración: Rosado-azul muy rápido.. . Verde intenso-visible aunque rápido.. . Verde oscuro-negro-final de la reacción.. Ensayo de la espuma: Permitió reconocer en un extracto la presencia de. BL I. . O. TE. . BI. saponinas, tanto del tipo esteroidal como triterpénica. De modo que si la alícuota se encontrase en alcohol, se diluiyó con cinco veces su volumen en agua y se agitó, dicha mezcla, fuertemente durante 5 a 10 min. El ensayo se consideró positivo si apareciese espuma en la superficie del líquido de más de 2mm de altura y persistente por más de 2 min.. 19. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(27) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. . Ensayo del cloruro férrico: Permitió reconocer la presencia de compuestos fenólicos y/o taninos en un extracto vegetal. Si el extracto de la planta se realizara con alcohol, el ensayo determinará tanto fenoles como taninos. A una alícuota del extracto alcohólico se le añadió III gotas de una solución de tricloruro férrico al 5% en solución salina fisiológica. A una alícuota del. RA DO. extracto se añadió acetato de sodio para neutralizar y III gotas de una solución de tricloruro férrico al 5% en solución salina fisiológica, un ensayo positivo puede dar la siguiente información general: . Desarrollo de una coloración rojo-vino: compuestos fenólicos en. . SG. general.. Desarrollo de una coloración verde intensa: taninos del tipo. . PO. pirocatecólicos.. DE. Desarrollo de una coloración azul, taninos del tipo pirogalotánicos.. . Ensayo de Borntrager: Permitió reconocer en un extracto la presencia de. G IT AL. quinonas. Para ello el solvente del extracto se llevó a evaporar en baño de agua y el residuo se redisolvió en 1mL de cloroformo. Se agregó 1mL de hidróxido de sodio, hidróxido de potasio o amonio al 5%. Se agitó, mezclando las fases y se dejó en reposo hasta su ulterior separación. Si la. DI. fase acuosa alcalina (superior) se coloreara de rosado o rojo, el ensayo se. CA. considerará positivo. Coloración rosada (++), coloración roja (+++). . TE. Ensayo de Kedde: Permitió reconocer en un extracto la presencia de glucósidos cardiotónicos. Una alícuota del extracto se mezclará con 1mL del. O. reactivo Kedde y se dejó reposar durante 5 a 10 min. Se consideró un. BL I. ensayo positivo la formación de una coloración violácea, persistente durante. BI. 1 a 2 h..  Ensayo de Shinoda: Permitió reconocer la presencia de flavonoides en un extracto de un vegetal. Si la alícuota del extracto se encontrase en alcohol, se diluyó con 1mL de ácido clorhídrico concentrado y un pedacito de cinta de magnesio metálico. Después de la reacción se esperó 5min, se añadió 1mL. 20. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(28) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. de alcohol amílico, se mezclan las fases y se dejó reposar hasta que se separen. El ensayo se consideró positivo cuando el alcohol amílico se coloree de amarillo, naranja, carmelita o rojo; intensos en todos los casos. . RA DO. Ensayo de antocianidinas: Permitió reconocer en los extractos vegetales la presencia de estructuras de secuencia C6-C3-C6 del grupo de los flavonoides. Se calentó 2 mL del extracto por 10 min. con 1 mL de HClcc., se dejó enfriar y se añadió 1 mL de agua y 2 mL de alcohol amílico. Se agitó y se. PO. amílica será indicativa de un ensayo positivo.. SG. dejó separar las dos fases. La aparición de color rojo a marrón en la fase. . Ensayo de Dragendorff: Permitió reconocer en un extracto la presencia de. DE. alcaloides, para ello se llevó a sequedad 1mL del extracto en baño de agua y el residuo se redisolvió en 1 mL de ácido clorhídrico al 1%. Con la solución. G IT AL. acuosa ácida se realizó el ensayo, se añadió III gotas del reactivo de Dragendorff, si existiera: opalescencia se ha de considerar (+), turbidez definida (++), precipitado de color anaranjado (+++). . DI. Ensayo de Mayer: Se realizó según la forma descrita anteriormente, hasta. CA. obtener una solución ácida. Se añadió luego, una pizca de cloruro de sodio en polvo, se agitó y filtró. Luego se añadió III gotas de la solución reactiva. TE. de Mayer, y si existiera: opalescencia se ha de considerar (+), turbidez definida (++), precipitado blanco coposo (+++). Ensayo de Wagner: Se partió al igual que en los casos anteriores de la. O. . BL I. solución ácida, se añadió III gotas del reactivo y se considerará opalescencia. BI. (+), turbidez definida (++), precipitado marrón (+++).. . Ensayo de Gelatina. Se llevó a evaporar 2 mL del extracto hasta sequedad y luego se reconstituyó con 1 mL de agua destilada. Se agregó gotas de gelatina al 1%, la formación de precipitado blanco indicó presencia de taninos.. 21. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(29) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. H.. Formulación. del colutorio a base de. Matricaria. chamomilla. (Manzanilla)33,34. Para la formulación del colutorio se procedió de acuerdo a lo establecido. RA DO. por Muñoz (2000). Dentro de la formulación se consideró las materias primas más importantes: un tensioactivo o detergente (lauril éter sulfato de. SG. sodio), sustancias humectantes (sorbitol y glicerina), un edulcorante (sacarina sódica), y el principio activo (extracto fluido de manzanilla). Las. PO. concentraciones utilizadas de cada materia prima están dentro de los rangos. DE. sugeridos por la bibliografía (Muñoz, 2000). Se elaboraron tres formulaciones, una con 0.8%, 1.6%, 2.4% de extracto fluido de manzanilla.. G IT AL. En las Tablas 1,2 y 3 se presentan las fórmulas para una presentación de 80 mL.. DI. Tabla 1. Fórmula de colutorio a base de Matricaria chamomilla (Manzanilla) al 0.8 % Porcentaje 3,75% 18,38% 5,63% 0,04% 6,25% 0.8 % 33,88%. Cantidad 3g 14.7 g 4.5 g 0.032 g 5 mL 0.64 mL c.s.p. 80 Ml. BL I. O. TE. CA. Sustancia Emal 70 (Lauril éter sulfato de sodio) Glicerina Sorbitol Sacarina sódica Alcohol 96º Extracto fluido de manzanilla Agua destilada. BI. Tabla 2. Fórmula de colutorio a base de Matricaria chamomilla (Manzanilla) al 1.6 % Sustancia Emal 70 (Lauril éter sulfato de sodio) Glicerina Sorbitol Sacarina sódica Alcohol 96º Extracto fluido de manzanilla Agua destilada. 22. Porcentaje 3,75% 18,38% 5,63% 0,04% 6,25% 1.6 % 33,88%. Cantidad 3g 14.7 g 4.5 g 0.032 g 5 mL 1.28 mL c.s.p. 80 mL. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(30) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Tabla 3. Fórmula de colutorio a base de Matricaria chamomilla (Manzanilla) al 2.4 % Cantidad 3g 14.7 g 4.5 g 0.032 g 5 mL 1.92 mL c.s.p. 80 mL. RA DO. Porcentaje 3,75% 18,38% 5,63% 0,04% 6,25% 2.4 % 33,88%. SG. Sustancia Emal 70 (Lauril éter sulfato de sodio) Glicerina Sorbitol Sacarina sódica Alcohol 96º Extracto fluido de manzanilla Agua destilada. PO. I. Elaboración del colutorio a base de Matricaria chamomilla (Manzanilla)32-35. a pesar y medir todos los ingredientes de la. DE. En primer lugar se procedió. G IT AL. fórmula de cada colutorio. Seguidamente se mezcló el lauril éter sulfato de sodio junto con la glicerina, el sorbitol en un agitador magnético a 800 rpm durante 10 minutos y, poco a poco, se añadió las ¾ partes del disolvente (agua).. DI. En este punto se adicionaron la sacarina sódica, se agitó durante cinco minutos. CA. hasta su completa disolución. Así se fue completando la formulación con el. TE. resto del disolvente hasta alcanzar el volumen total especificado en la fórmula. Posteriormente, se procedió al envasado y etiquetado del colutorio en un frasco. BL I. O. de vidrio, dejándolo reposar por 24 horas para que desaparezca la espuma formada durante el proceso de manufactura. Finalmente, se determinó el efecto. BI. antibacteriano de los colutorios preparados.. J. Obtención de la cepa. En el presente estudio se utilizó un cultivo liofilizado de la cepa de Fusobacterium nucleatum ATCC 25586, la cual fue obtenida a través de. 23. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(31) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. la Escuela de Estomatología de la Universidad Privada Antenor Orrego, la cual se realizó la compra de dicha cepa al laboratorio GenLab de Estados Unidos. La cepa en estudio fue transportada y conservada en el. RA DO. medio que la expide el laboratorio hasta su correspondiente activación.. K. De la preparación del inóculo:. SG. Cada cepa se diluyó en caldo tioglicolato estéril hasta que se obtenga una. Del cultivo de la cepa:. DE. I.. PO. turbidez semejante al tubo 1 del Nefelómetro de Mc Farland.. Las cepas estándar de Fusobacterium nucleatum ATCC 25586, fueron. G IT AL. cultivadas en medios enriquecidos correspondientes e incubados a 37 °C. DI. por 24 – 72 horas.. CA. El cultivo de las cepas se realizó en el Laboratorio de Investigación de la Universidad Nacional de Trujillo, por la investigadora principal, bajo la. O. TE. supervisión de la coasesora Dra. Microbiólogo.. Del efecto antibacteriano: Se determinó a través de:. BI. BL I. J.. - Sensibilidad o resistencia Bacteriana. De. la. determinación. de. sensibilidad. o. resistencia. antibacteriana. Se determinó a través de:. 24. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(32) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. - Difusión de discos antibacterianos Difusión de discos antibacterianos. Se preparó las placas petri con medio Müller Hinton, sobre las cuales se sembraron la bacteria de Fusobacterium nucleatum. RA DO. ATCC 25586, en camada con hisopos estériles embebido en el. cultivo.. SG. Luego se prepararon discos de papel de filtro estériles, los cuales. PO. fueron sumergidos dentro del colutorio a base de Matricaria chamomilla por un periodo de una hora, luego con una aguja. DE. estéril éstos se colocaron sobre los cultivos de Fusobacterium. G IT AL. nucleatum ATCC 25586 en las placas petri previamente preparadas; utilizando 16 placas Petri para cada concentración experimental; las placas se mantuvieron en la misma posición. DI. por un periodo de 5 minutos, luego de este tiempo las placas se. CA. volteó de posición y se incubaron en una cámara de anaerobios utilizando la jarra de gas-pack, en microanaerobiosis a una. BI. BL I. O. TE. temperatura de 37º C durante 24 horas. Todo el procedimiento fue llevado a cabo dentro del diámetro de 10 cm de la llama de un mechero.. La lectura se llevó a cabo a las 24 horas mediante la inspección visual de cada placa. Se efectuó tomando el registro en milímetro de los halos de inhibición del crecimiento de Fusobacterium nucleatum ATCC 25586.. 25. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(33) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Escala de Duraffourd: Escala utilizada para determinar cualitativamente el efecto inhibitorio in vitro, según diámetro de. RA DO. inhibición.. . Nula (-): para un diámetro inferior a 8 mm.. . Sensibilidad límite (sensible = +): para un diámetro. Medio (muy sensible = ++): para un diámetro entre 14. PO. . SG. comprendido entre 8 a 14 mm.. y 20 mm.. Sumamente sensible. DE. . (+++): para un diámetro. G IT AL. superior a 20 mm.. DI. 1.3. Instrumento de Recolección de Datos.. CA. Para efectos de la investigación, el investigador elaboró una ficha. TE. (Anexo Nº1). El instrumento contiene: Promedio de halos de. BI. BL I. O. inhibición expresada en milímetros (mm).. 26. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(34) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.4. Variables:. TIPO. Efectivo No Efectivo. Fusobacterium nucleatum. Nula Poco sensible Sensible Sumamente sensible. Independiente. Nominal. Categórica. Dependiente. Ordinal. DE. G IT AL. Positivos Negativos. Cualitativa. DI. Ensayo de catequinas Ensayo de Baljet Ensayo de Lieberman n-Burchard Ensayo de la espuma Ensayo del cloruro férrico Ensayo de Borntrager Ensayo de Kedde Ensayo de Shinoda Ensayo de antocianidi nas Ensayo de Dragendorf f Ensayo de Mayer Ensayo de Wagner Ensayo de Gelatina. CA. Tipo de Metabolitos. Escala de Duraffourd. SEGÚN SU FUNCIÓN. PO. Efecto antibacteriano Matricaria chamomilla. ESCALA DE MEDICIÓN. SEGÚN SU NATURALEZA. RA DO. INDICADOR. SG. INDICE. VARIABLES. Nominal. BI. BL I. O. TE. Cualitativa. 27. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(35) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. K.. DEFINICION Y OPERACONALIZACION DE VARIABLES. 2.5 EFECTO ANTIBACTERIANO DE MATRICARIA CHAMOMILLA: 2.5.1 Definición Conceptual:. RA DO. Es la capacidad que refleja una sustancia en la destrucción de las. SG. bacterias o que inhibe su crecimiento o replicación14.. 2.5.2 Definición Operacional:. PO. Para el presente estudio el efecto antibacteriano se determinará a. DE. través de la sensibilidad o resistencia bacteriana a través de la difusión de discos antibacterianos, en donde determinará el. G IT AL. diámetro de inhibición obtenido a través de Escala de Duraffourd:. Nula (-): para un diámetro inferior a 8 mm.. . Sensibilidad límite (sensible = +): para un diámetro. DI. . CA. comprendido entre 8 a 14 mm.. Medio (muy sensible = ++): para un diámetro entre 14 y 20 mm.. . Sumamente sensible. (+++): para un diámetro. superior a 20 mm.. BI. BL I. O. TE. . 2.6 FUSOBACTERIUM NUCLEATUM: 2.6.1 Definición Conceptual: Es un componente importante cuantitativamente y es una de las primeras especies Gram-negativas que se establecen en los. 28. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(36) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. biofilm de la placa. Es una de las especies centrales importantes para las interacciones entre las bacterias Gram+ positivas y las especies Gram- negativas que son propensos a ser importante en la colonización de biopelículas. El F. nucleatum tiene propiedades. coagregación. además. que. le. de. permite. tener. propiedades. de. RA DO. peridontopatógenas,. transportar. bacterias. SG. periodontopatogénicas24.. otras. PO. 2.6.2 Definición Operacional:. Se hace uso de una cepa estandarizada ATCC para determinar su. G IT AL. DE. suceptibilidad previa activación.. TIPOS DE METABOLITOS: 2.7.1. Definición Conceptual:. DI. Capacidad de las plantas y los hongos para producir. TE. CA. sustancias que no son esenciales para su supervivencia.. BI. BL I. O. 2.7.2. Definición Operacional: Para determinar la presencia de los diferentes metabolitos de la Matricaria chamomilla se utilizará el método descrito por Miranda  Cuellar, modificado32, estableciéndose como positivo ó negativo después de aplicada la prueba de ensayo.. 29. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(37) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 3. Análisis estadístico de la información:. Los datos fueron procesados empleando el programa estadístico IBM SPSS Statistics 22 en entorno Windows. Los resultados. fueron. presentados en. RA DO. cuadros con medias y desviaciones estándar. Para una mejor visualización de los resultados se emplearon gráficos de cajas elaborados en MINITAB 16.. SG. El efecto antibacteriano in vitro del colutorio a base de Matricaria chamomilla. PO. (Manzanilla) sobre el Fusobacterium nucleatum ATCC 25586 entre las tres dosis fue comparada empleando el análisis de varianza (ANVA) y pruebas de. DE. comparaciones múltiples de Duncan. La significancia estadística fue. BI. BL I. O. TE. CA. DI. G IT AL. considerada al 5%.. 30. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(38) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. III. RESULTADOS. El presente estudio tuvo como objetivo determinar la efectividad in vitro del colutorio a base de Matricaria chamomilla (Manzanilla) frente Fusobacterium nucleatum ATCC. RA DO. 25586. La muestra estuvo constituida por 16 placas por grupo, y fueron distribuidas de la siguiente manera: tres grupos de colutorio a base de manzanilla con sus dosis. SG. respectivas (0,8% 1,6% 2,4%), un grupo con Clorhexidina y un grupo con agua;. PO. obteniéndose los siguientes resultados:. DE. El colutorio a base de Matricaria chamomilla en sus concentraciones de 0.8%, 1,6%. inhibición respectivamente.. G IT AL. 2,4% tuvieron una efectividad de 17.3 ± 0.48, 17.6 ± 0.73 y 18.1 ± 0.93 de halo de. DI. El colutorio a base de Matricaria chamomilla en sus diferentes concentraciones (0.8%,. CA. 1.6% y 2.4%), presentó diferentes metabolitos como: compuestos fenólicos,. BI. BL I. O. TE. flavonoides, antosiadinas, lactonas y cumarinas, tritepenos, saponinas, catequinas.. 31. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(39) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Tabla 1: Efectividad del colutorio a base de Matricaria chamomilla sobre el Fusobacterium nucleatum ATCC 25586 con el Control Positivo y Control Negativo. 17.3. 17.6. 18.1. Mediana Moda Mínimo Máximo D. Estándar ANVA: Test F P Prueba de Duncan Test de Dunett: (-) Test de Dunett: (+). 17.0 17.0 17.0 18.0 0.48. 17.0 17.0 17.0 19.0 0.73. c b c. C B C. 18.0 18.0 17.0 20.0 0.93 2622.336 0.000 D B C. Control positivo. 0.0. 13.2. 0.0 0.0 0.0 0.0 0.00. 13.0 13.0 13.0 14.0 0.40. a a a. B B B. G IT AL. DE. PO. SG. Media. Control negativo. RA DO. Concentración del colutorio 0.80% 1.60% 2.40%. BI. BL I. O. TE. CA. DI. Grafico 1. 32. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(40) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Tabla 2: Metabolitos Secundarios Del Colutorio A Base De Matricaria Chamomilla ENSAYO. RESULTADO. COLORACIÓN. Ensayo de Cloruro férrico. ++. VERDE. Flavonoides. Ensayo de Shinoda. ++. AMARILLO. ++. MARRÓN. SG. -. -. DI. TE. Tritepenos y esteroides. BL I. O. Quinonas. ------. Catequinas. Antimicrobianas Tonicidad al corazón. -----Antihipertensivos Antitumorales. -. ------. -. ------. ++. VERDE. Antioxidante. -. ------. -. ------. Laxtante Astringente Cicatrizante Antibacteriano. Ensayo de Wagner Ensayo de la espuma. Presencia de espuma en la superficie de más de 2mm de altura. ++. BI. Zaponinas. Antibacteriano Antifungico Antioxidante Analgésico Antipirético Antibacteriano Sedante Antiinflamatorios Anticancerígenos Antioxidante. CA. Alcaloides. Taminos. ROJO. G IT AL. Licósidos cardiotónicos. ++. PO. Lactonas y cumarinas. Ensayo de antocianidinas Ensayo de Baljet Ensayo de Kedde 1.- Ensayo de Dragendorff 2.- Ensayo de Mayer 3.- Ensayo de Wagner Ensayo de LiebermannBurchard Ensayo de Borntrager. DE. Antociadinas. PROPIEDADES. RA DO. METABOLITO SECUNDARIO Compuestos Fenólicos. Ensayo de. +++. catequinas. 33. FLUORESENCIA VERDE. antibacteriano antiparasitario. antiinflamatorias. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(41) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. IV.. DISCUSIÓN. La presencia de biofilm dental es el principal factor de riesgo para desencadenar las enfermedades dentales. más prevalentes existentes en la cavidad bucal, caries y. RA DO. enfermedad periodontal. A pesar que existen actualmente colutorios que han tenido un impacto en el control del biofilm dental, la ciencia sigue buscando una alternativa para que el costo – beneficio sea favorable5. En el mercado, existen colutorios y/o enjuagues. SG. bucales de todo tipo y para todo tipo de tratamiento de acuerdo a su acción y su función;. PO. entre ellos tenemos para dientes y/o encías sensibles, contra halitosis, anticaries y/o. DE. antibacteriano y antisépticos.. G IT AL. La investigación sobre la acción de las plantas medicinales es una constante actualmente, existen plantas medicinales cuya composición química pueden llegar a tener hasta 300 compuestos químicos diferentes que actúan en sinergia perfecta para. DI. contrarrestar cualquier efecto no deseado. Entre estas se encuentra la Matricaria. CA. chamomilla cuyas propiedades estudiadas han mostrado su capacidad antibacteriana,. TE. analgésica, sedante, antinflamtoria, cicatrizante, entre otros9-12.. BL I. O. La inflamación y la destrucción de los tejidos periodontales son consideradas como el resultado de la respuesta de un huésped susceptible a un patógeno gramnegativo. BI. presente en la biopelícula microbiana que contiene la cavidad bucal. El Fusubacterium nucleatum está relacionado directamente a la inflamación gingival moderada y con presencia de sarro subgingival, provocando como consecuencia la lenta destrucción tisular8-24.. 34. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(42) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. En la presente investigación, se encontró que el colutorio a base de Matricaria chamomilla presentó efecto antibacteriano in vitro frente al Fusobacterium nucleatum ATCC 25586; al respeto Gaete26 indica el uso de Matricaria chamomilla como enjuagatorio al 0.8%, en tanto Cárcamo23, Fidler24, Carl25 evidencian resultados de que demuestran la disminución del sangrado al sondaje, carga. RA DO. ensayos clínicos. bacteriana y profundidad de bolsa. Esto se podría deber a los principios activos de la manzanilla, que presentan metabolitos secundarios como son los compuesto fenólicos,. los. cuales. presentan. actividad. antibacteriana,. antiinflamatoria. y. PO. catequinas,. SG. flavonoides, antociadinas, lactonas y cumarinas, tritepenos y esteroides, saponinas y. DE. cicatrizantes9,28-30.. G IT AL. El efecto bactericida de la Matricaria chamomilla pudo ser comprobada a través de los diferentes ensayos que se realizó para determinar las propiedades de los metabolitos. Estos compuestos forman la familia más amplia de fenoles naturales. Su actividad. DI. frente a los microorganismos probablemente se deba a que forman complejos con las. CA. proteínas solubles y extracelulares y con las células de la pared bacteriana31.. TE. Al colutorio a base de Matricaria chamomilla utilizado en este estudio se le añadieron. BL I. O. disolventes no acuosos de uso farmacéutico, entre ellos al alcohol, que es volátil y ayuda a la conservación del preparado; glicerina, es siruposo miscible con alcohol,. BI. humectante y por su amplio poder disolvente actúa como edulcorante; el Emal 70 (Lauril éter sulfato de sodio) es una sustancia tensio activa que presenta. alta. compatibilidad con la piel. Su capacidad humectante y emulsionante, hacen que sea una de las materias primas más usadas en las formulaciones de colutorios. La función de esta sustancia es la de proporcionar una agradable sensación en la boca durante su uso31.. 35. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(43) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. El sabor de los colutorios. es una de las características más apreciadas por el. consumidor. Como edulcorante se emplea la sacarina sódica. Asimismo; el sorbitol es un humectante que ayuda a retener la humedad31. Estos disolventes por sus mismas propiedades no presentan actividad química, por lo que el efecto antibacteriano es. RA DO. atribuido a la Matricaria chamomilla.. El porcentaje de Matricaria chamomilla empleado en el colutorio estudiado fue de. SG. 0.8% 1,6% y 2,4% ; de acuerdo a la Farmacopea Europea, toda droga no heroica, es. PO. decir, que aquella droga que no contiene alcaloides su porcentaje de efectividad será. DE. igual para todos debido a que son drogas vegetales32.. G IT AL. Los resultados de este estudio nos pueden servir para comenzar a entender las razones del extenso uso de los extractos fluidos en el campo de la medicina y la estomatología. Al mismo tiempo podemos acercarnos cada vez más a la utilización de las plantas. DI. medicinales, que contienen extracto fluido, como terapia complementaria a las. TE. CA. convencionales.. Con respecto a la parte microbiológica, la sensibilidad bacteriana frente al colutorio a. BL I. O. base de Matricaria chamomilla, fue mayor que el control positivo medido con la. BI. escala de Duraffort (muy sensible 18 mm) en todas sus concentraciones.. Este estudio nos revela que el colutorio a base de Matricaria chamomilla tiene un amplio espectro de efectividad antibacteriana in vitro frente a Fusobacterium nucleatum. ATCC 25586, lo cual se asemeja a resultados de estudios anteriores, las que han mostrado. reducción de la inflamación gingival, profundidad la sondaje. 36. y carga. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(44) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. bacteriana; así mismo existen reportes sobre su uso en pacientes con tratamiento de quimioterapia o radioterapia demostrando que puede ayudar a evitar la presencia de mucositis durante dicho tratamiento.. RA DO. Del análisis de los resultados se puede concluir que el extracto fluido de Matricaria chamomilla como colutorio a diferentes concentraciones es efectiva para el control de la inhibición del crecimiento de Fusubacterium nucleatum por lo que se acepta la hipótesis. BI. BL I. O. TE. CA. DI. G IT AL. DE. PO. SG. planteada.. 37. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(45) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. CONCLUSIONES. 1.- El colutorio a base de Matricaria chamomilla. tiene efecto antibacteriano in vitro. RA DO. V.. sobre el Fusobacterium nucleatum ATCC 25586.. SG. 2.- El colutorio a base de Matricaria chamomilla tiene un efecto muy sensible frente a. PO. Fusobacterium nucleatum en sus tres concentraciones 0.8%, 1.6%, 2.4%.. DE. 3.- Existe presencia de metabolitos secundarios en el colutorio a base de Matricaria. BI. BL I. O. TE. CA. DI. G IT AL. chamomilla, siendo las catequinas de mayor predominio.. 38. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(46) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. . RECOMENDACIONES. RA DO. VI.. Realizar investigaciones in vivo (ensayo clínicos) para determinar si el efecto antibacteriano del extracto fluido de Matricaria chamomilla tiene efectividad en las. BI. BL I. O. TE. CA. DI. G IT AL. DE. PO. SG. condiciones del medio bucal.. 39. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(47) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. VII. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICA.. 1. Lindhe J. Periodontología Clínica e Implantología Odontológica. 5ta ed. Buenos. RA DO. Aires: Panamericana; 2009. 2. López A, Romero G. Conceptos básicos de odontoestomatología para el médico de atención primaria. Barcelona: Masson; 2001.. SG. 3. Manau C. El Manual de la Odontología. Barcelona: MASSON; 2002.. PO. 4. Junco M, Baca P. Odontología preventiva y Comunitaria. 3ra ed. Barcelona: MASSON; 2005.. DE. 5. Newman M. Periodontología Clínica. 10ma ed. México D.F.: Mc Graw- Hill. G IT AL. Interamericana; 2010.. 6. Liebana J. Microbiología Oral. 2da. ed. Madrid: Mc Graw-Hill Interamericana; 2002.. DI. 7. Cawson RA, Odell EW. Medicina y Patología Oral. 8va ed. Barcelona:. CA. ELSEIVER: 2009.. TE. 8. Sociedad Española de Periodoncia y Oseointegración. Manual de Higiene Bucal. Madrid: Médica Panamericana; 2009.. BL I. O. 9. Agapito T, Sung I. Fitomedicina. 1100 plantas medicinales. Lima: Isabel. 10. Mittman P. Randomized Double-Blind Study of Freeze-Dried Urtica dioica in. BI. the Treatment of Allergic Rhinitis. Planta Medica 1990; 56:44-46.. 11. Vanaclocha B, Cañigaral S. Fitoterapia – Vademécum. 4ta ed. Barcelona: ELSEIVER; 2003.. 12. Berdonces JL. Gran enciclopedia de las plantas medicinales. Barcelona: Océano.. 40. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

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