Efecto citotóxico y genotóxico de concentraciones de Ibuprofeno sobre el Ciclo celular y Nucleolar de células meristemáticas de Allium cepa “cebolla”

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(1)Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO ESCUELA DE POSTGRADO PROGRAMA DOCTORAL. PO. SG. RA DO. CIENCIAS AMBIENTALES. DE. Efecto citotóxico y genotóxico de concentraciones de. TE CA. Ibuprofeno sobre el Ciclo celular y Nucleolar de células. TESIS. Para optar el Grado Académico de. DOCTOR EN CIENCIAS AMBIENTALES. BI B. LI O. meristemáticas de Allium cepa “cebolla”.. AUTOR:. Msc. DANILO GASTAÑADUI ROSAS. ASESOR:. Dr. FREDDY ROGGER MEJÍA COICO. Trujillo- Perú 2015. N° de registro:…………… i. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(2) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. RA DO. DIRECTIVOS DE LA ESCUELA DE POSTGRADO DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO. Dr. Federico Gonzales Veintimilla. SG. DIRECTOR. PO. Dra. Lydia Edita Sánchez Arce. TE CA. DE. PROFESORA SECRETARIA DE LA ESCUELA DE POSTGRADO. Dr. Cesar Augusto Jara Campos. BI B. LI O. DIRECTOR DE LA SECCIÓN DE POSTGRADO EN CS. BIOLÓGICAS. ii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(3) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. PRESENTACIÓN SEÑORES MIEMBROS DEL JURADO Dando cumplimiento a las disposiciones legales vigentes contenidas en el. RA DO. Reglamento de Grados y Títulos de la Escuela de Post Grado de la Universidad Nacional de Trujillo, someto a vuestra ilustre consideración el presente informe de Tesis intitulado: “Efecto citotóxico y genotóxico de concentraciones de Ibuprofeno sobre el Ciclo celular y Nucleolar de células meristemáticas de Allium cepa “cebolla”. PO. SG. ”, con el propósito de obtener el Grado Académico de Doctor en Ciencias Ambientales.. Expreso a ustedes mi sincero agradecimiento por la revisión del presente. DANILO GASTAÑADUI ROSAS. BI B. LI O. TE CA. DE. informe.. iii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(4) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. RA DO. MIEMBROS DEL JURADO DICTAMINADOR. ____________________________. Dr. JOSE MOSTACERO LEON. DE. PO. SG. PRESIDENTE. ____________________________. TE CA. Dra. ROSA RAMIREZ VARGAS. BI B. LI O. SECRETARIA. ____________________________ Dr. FREDDY ROGGER MEJÍA COICO VOCAL. iv Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(5) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. DEDICATORIA Al gran “YO SOY” Dios del universo, Padre y señor mío que por su Gracia y misericordia me brindo. RA DO. Sabiduría, inteligencia y salvación.. A la memoria eterna de mis. SG. padres Abimael y Leonila.. PO. A mi esposa, mi Leonor por su comprensión,. Amis hijos: Dania, Cesilia, Paul, Ruth, Eli, Sarita y Rocio. Por su cariño, amor y oraciones.. BI B. LI O. TE CA. DE. modestia, apoyo y amor invalorable. A mis hermanos: Esperanza, Segundo, Dolores, Eleazar, Gilmer,. Fausta, Alfonso, Por su apoyo.. v Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(6) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. AGRADECIMIENTO. RA DO. Al Dr. Freddy Mejía Coico, por el asesoramiento en la planificación, ejecución y culminación de la presente tesis.. BI B. LI O. TE CA. DE. PO. SG. Al personal técnico del departamento de Ciencia Biológicas por su apoyo invalorable.. vi Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(7) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. INDICE Pag. DIRECTIVOS DE LA ESCUELA DE POSTGRADO ............................................ ii. RA DO. PRESENTACIÓN .................................................................................................... iii MIEMBROS DEL JURADO DICTAMINADOR .................................................... iv DEDICATORIA ........................................................................................................ v. SG. AGRADECIMIENTOS ............................................................................................. vi. PO. RESÚMEN ................................................................................................................ ix ABSTRACT............................................................................................................... x INTRODUCCIÓN ....................................................................................... 01. II.. MATERIAL Y MÉTODOS ........................................................................ 07 2.1.. TE CA. DE. I.. Material .............................................................................................. l07. 2.1.1. Material Biológico07 Métodos .............................................................................................. 08. LI O. 2.2.. 2.2.1. Obtención de las raicillas de A. cepa .......................................... 08. BI B. 2.2.2. Exposición de las raicillas ............................................................. 10 2.2.3. Obtención de preparados citológicos ............................................ 12 2.2.5. Análisis estadístico........................................................................ 15. III.. III. RESULTADOS ..................................................................................... 16. vii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(8) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. DISCUSIÓN ................................................................................................ 26. V.. CONCLUSIONES ....................................................................................... 31. VI.. PROPUESTA .............................................................................................. 32. VII.. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS ........................................................ 34. RA DO. IV.. BI B. LI O. TE CA. DE. PO. SG. ANEXOS ................................................................................................. 40. viii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(9) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. RESUMEN La mejora de la calidad de vida y el restablecimiento de la salud, es una de las principales preocupaciones, no sólo de los gobiernos, sino y sobre todo de los investigadores quienes constantemente analizan y descubren nuevos recursos médicos. RA DO. así como tratan de advertir sobre el uso y abuso de muchos fármacos que muchas veces indicados para mejorar la salud resultan en verdaderos agentes que las complican. Es así que esta investigación se orientó a evaluar el efecto citotóxico y genotóxico del. SG. “Ibuprofeno” ampliamente prescrito como antiinflamatorio y de gran consumo en nuestro país. Se realizaron 03 repeticiones del experimento entre Octubre del 2013 a. PO. Diciembre del 2014. En cada repetición se utilizaron diferentes concentraciones y tiempos de exposición de éste, fármaco ante las raíces de Allium cepa (concentraciones:. DE. 0.0, 200, 400 y 800 mg/ L de “ibuprofeno” y 6, 12 y 24 horas de exposición). Obtenida las raicillas, fijadas, coloreadas, preparadas y analizadas microscópicamente a través de. TE CA. las técnicas habituales para este tipo de estudios se obtuvieron resultados que muestran que el Ibuprofeno a la concentración de 800 mg/L y a un tiempo de exposición de 24 horas, correspondiente al T12, presenta efecto citotóxico ocasionando una disminución. LI O. del índice mitótico, alcanzando valores de 7.8 % % y un aumento en el índice Profásico, alcanzando valores de 85.6 %; así como una disminución del índice Metafásico 7.9%,. BI B. Anafásico 4.6% y Telofásico 1.9%; de igual manera el T12 genera un promedio por campo de 16 Puentes Anafásico, 6 Metafases anormales, 9 Micronúcleos y 4 Polinúcleos; lo que indicaría un efecto genotóxico en células meristemáticas de Allium cepa. Palabras Clave: Allium cepa, Ibuprofeno, Índice mitótico, citotóxico, genotóxico.. ix Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(10) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ABSTRACT The improvement of quality of life and the restablishment of health is one of the primary concerns, not only of governments, but also and above all that of the. RA DO. researchers who constantly analize and discover new medical resourses such as those that warn of the use and abuse of many pharmacies which often promote purported "medicines" which negatively affect rather than improve health. For this reason, this. SG. research was focused on evaluating the cytotoxic and genotoxic effects of "Ibuprofen," often prescribed as antinflammatory and consumed in large quantities in the author's. PO. home country of Peru. Three repetitions of the experiment were conducted between October 2013 to December 2014. In each replication. Roots of Allium cepa in. DE. concentrations of 0.0, 200, 400, and 800 mg/Lconcentrations were exposed to differenent concentrations of "Ibuprofen" for exposure periods of 6, 12, and 24 hours.. TE CA. Obtaining the rootlets, fixing the slides, staining specimens, preparation and microscopic were done using typical methods for this type of research. Results demonstrated that Ibuprofen at a concentration of 800 mg/L with a 24 hour exposure. LI O. period, sample type T12, has cytotoxic effects resulting in a reduction of the mitotic index of up to 16.52%, up to a 92.23% increase in the prophasic index, and reductions. BI B. in the metaphasic index (by 15.98%), anaphasic index (by 12.43%), and telephasic index (by 11.33%). Likewise the T12 generates an average per field of 16 anaphase bridge, 6 aberrant metaphases, 9 Micronucleus and 4 Polinúcleos; which would indicate a genotoxic effect on meristem cells of Allium cepa.. Key words: Allium cepa, Ibuprofeno, Mitotic index, cytotoxic, genotoxic. x Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(11) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. I.. INTRODUCCIÓN. No cabe duda que actualmente, el afrontar los más diversos problemas de salud, se constituyen en uno de los problemas principales que tiene que resolver los gobiernos. RA DO. nacionales, regionales y locales; los que en su afán de paliar un tanto la problemática no solamente asignan recursos económicos, profesionales y técnicos; sino que también manifiestan sumo interés por apoyar las investigaciones tendientes a conseguir los mayores recursos para mejorar la salud, previniendo y curando las más diversas. SG. enfermedades de la población. (Bergman et al., 1996; Abou-Eisha et al., 1999).. También se conoce que las enfermedades que sufren los pobladores son de las. PO. más diversas índole como infecciosas, degenerativas, psicológicas, neurológicas, psicosociales, carenciales, etc.; para muchas de las cuales el hombre a través de la. DE. historia ha encontrado algunos medicamentos para tratar de solucionarlos. En este sentido es muy conocido el desarrollo y progreso de la investigación de los antibióticos, de los metabolitos secundarios y de la puesta en valor de recursos nutracépticos ricos en. TE CA. proteínas, vitaminas, sales minerales, etc. que han permitido mejorar con gran ventaja muchas enfermedades comunes, frecuentes y recurrentes que sufre el hombre (Gupta y Sharma, 1981; Jelliffe, 1985).. LI O. Por otro lado también se sabe que muchos problemas de salud de deben a la. toxicidad que tienen muchos productos presentes en nuestro entorno y que alteran de. BI B. una u otra forma los procesos fisiológicos, bioquímicos y genéticos de nuestro organismo, provocando serias dolencias y/o enfermedades (Parry et al., 2002). Es el caso de muchas sustancias químicas que actúan provocando alteraciones tanto a nivel celular como genético, como es el caso de muchos productos que provocan creciente citotoxicidad y genotoxicidad celular por mutágenos químicos, los cuales al actuar sobre el ADN, generan puntuales mutaciones en la secuencia nucleotídica o grandes aberraciones cromosómicas (Dubinin, 1981). 1 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(12) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Es así, que la citotoxicidad y genotoxicidad como líneas de investigación de la citogenética se encarga de averiguar y proporcionar explicación a diferentes alteraciones que puede sufrir la célula o el material genético por acción de agentes biológicas, físicos y químicos como es el caso de los fármacos, los cuales en su mayoría aparte de acumularse causan efectos irreversibles que perjudican la salud humana (Thompson et. RA DO. al., 2002).. Para afrontar esta problemática, actualmente se cuenta con las pruebas de citotoxicidad para determinar la proporción de células que mueren, después de un. SG. proceso como la exposición a compuestos de diferente naturaleza. Existen varias pruebas para medir el daño en el material genético (ADN), entre las que se encuentran. PO. las pruebas citogenéticas como la cuantificación de Alteraciones Cromosómicas (ac) y el Intercambio de Cromatidas Hermanas (ich), que han sido fuente de referencia por su alto grado de resolución, y que se pueden visualizar y analizar con la prueba Allium test. TE CA. DE. (Freyre, 2009). También es necesario conocer que los antiinflamatorios no esteroideos (AINEs) son sustancias químicas con efecto antiinflamatorio, analgésico y antipirético por lo que reducen los síntomas de la inflamación, alivian el dolor y la fiebre respectivamente. El término no-esteroideo se refiere a que los efectos clínicos son similares a los de los. LI O. corticoides pero no las acompañan las consecuencias secundarias que caracterizan a los esteroides. Como analgésicos se caracterizan por no pertenecer a la clase de los. BI B. narcóticos y actúan bloqueando la síntesis de prostaglandinas; tienen una amplia gama de indicaciones, por lo que son uno de los grupos de medicamentos más prescritos en la atención médica al ser genéricos. Uno de los AINEs de mayor consumo es el Ibuprofeno, el cual es usado muchas veces de modo indiscriminado por la población debido a su frecuente prescripción médica y a que son adquiridos de forma libre en las farmacias (Silva y Henríquez 2003).. 2 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(13) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. En éste contexto, el “Ibuprofeno” fue descubierto por Stewart Adams y luego desarrollado por la División de Investigación de Boots Group durante los años 60 fue patentado en 1961; posteriormente en 1969 y 1974 éste fármaco es recién lanzado por el Reino Unido y Estados unidos respectivamente para tratar la artritis reumatoide (Guzmán, 2008). En la actualidad es utilizado frecuentemente como antipirético y para aliviar síntomas del dolor de cabeza, (cefalea), dolor dental (odontalgia), dolor muscular. RA DO. (mialgia), molestias de la menstruación (dismenorreas), dolor neurálgico de carácter leve y dolor post quirúrgicos, en ocasiones por sus propiedades antiinflamatorias es. SG. usado para tratar el acné (Amesquita, 2009).. Actualmente, el consumo de AINEs en los países industrializados continúa con. PO. una tendencia ascendente y “excesiva”, como ya han alertado varios informes de la ONU en los últimos años. Ya sea para combatir el dolor de cabeza, los dolores musculares, la artritis, entre otros;. los calmantes se han convertido en fármacos. DE. imprescindibles en nuestro día a día. Hasta ahora, los estudios clínicos habían concluido que su consumo excesivo aumenta los riesgos de sufrir enfermedades cardiovasculares, pero como suelen indicar los prospectos, lo hacen en un porcentaje totalmente. TE CA. insignificante. Sin embargo, la última investigación ha elevado a un tercio las posibilidades de sufrir problemas cardiacos si se consumen con frecuencia (Herrera et. LI O. al., 2009).. Afortunadamente la investigación financiada por el Consejo de Investigación. BI B. Médica del Reino Unido y publicada en la revista The Lancet, da a conocer que por más de cinco años y analizando más de 600 ensayos clínicos y los historiales médicos de unos 350.000 pacientes con dolores crónicos causados por el consumo de AINEs alertan sobre la necesidad de reducir su prescripción a casos en los que solo sean absolutamente necesarios y recomiendan buscar tratamientos alternativos cuando sea posible (Amésquita, 2009; Herrera et al., 2009).. 3 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(14) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Frente a esta problemática, los ensayos citotóxicos y genotóxico, constituyen una herramienta previa fundamental en la valoración de los riesgos que puede acarrear un determinado fármaco antes de su consumo o puesta en venta; toda vez que conociendo que el ciclo el ciclo celular es el proceso por el cual la celula crece y duplica todas sus estructuras, incluyendo la información genetica, para finalmente dividirse y dar origen a dos celulas hijas identicas que repiten el proceso (Hemant y Rojas, 2005;. RA DO. Díaz, 2011 ).. También hay que tener en cuenta que el ciclo celular no siempre termina en la. SG. división celular ya que su regulación genética condiciona a cada una de las fases que lo conforman. Esto exige una transcripción y síntesis de proteínas específicas. Estas. PO. proteínas determinan el inicio del ciclo celular, la replicación, la finalización del período S, el paso de G2 hacia la mitosis y el flujo de cada fase de esta última. De esta manera el ciclo puede ser afectado por sustancias antimitóticas, citotóxicas y. DE. genotóxicas, tales como los compuestos fenólicos; que alteren su normal desarrollo e induzcan la aparición de figuras mitóticas anormales e incluso ocasionen daños a nivel. TE CA. cromosómico (Fistejo, 1985).. Por otro lado, también hay que considerar que para que exista crecimiento en cualquier tipo de tejido es necesario que las células atraviesen por una serie de eventos. LI O. moleculares englobados en el ciclo celular. En este proceso intervienen una serie de genes que regulan positivamente el ciclo, como los que codifican a las proteínas del. BI B. sistema de ciclinas y kinasas dependientes de ciclinas (CDK) las cuales hacen posible la formación de complejos moleculares como el denominado MPF (factor promotor de anafase) quien cumplirá un rol importante cuando las células pasen desde la metafase hacia la anafase de permitir que las células puedan salir de la mitosis e ingresar a un nuevo ciclo células (Aller y De la Torre, 1992).. No obstante el ciclo no termina en división celular ya que su regulación genética condiciona a cada una de las fases que lo conforman. Esto exige una transcripción y 4 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(15) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. síntesis de proteínas específicas, las cuales determinan el inicio del ciclo celular, la replicación la finalización del periodo S el paso de G2 hacia la mitosis y el flujo de cada fase de esta última. De esta manera el ciclo puede ser afectado por sustancias antimitóticas, citotóxicas y genotóxicas, tales como los compuestos fenólicos que. RA DO. alteren e incluso ocasionan daño a nivel cromosómico (Karp, 2006).. En este proceso, también hay que conocer que los organismos biológicos tienen la capacidad de expresar las alteraciones más sutiles que operan durante cierto tiempo mediante respuestas individuales (reacciones fisiológicas, etológicas, morfológicas,. SG. bioquímicas (Fiskesjo y Dutka, 1996). ; como es el caso de las plantas superiores cuyos meristemos proliferan siguiendo una cinética en equilibrio dinámico, lo que. PO. puede evaluarse a través de una serie de indicadores tales como: la población de células en división celular, la duración del ciclo celular, el índice mitótico, el índice de fases. DE. mitótico, entre otros (López y Fernádez, 1965).. TE CA. En este contexto, las pruebas con plantas vasculares, entre las que se cuenta a Allium cepa (Fiskesjo, 1988), han demostrado potencialidad diagnostica significativa. La determinación de dichos efectos se realiza a partir de la observación del crecimiento, el flujo del ciclo celular y las mutaciones cromosómicas del ápice radical de la cebolla (Allium cepa). Es decir, las plantas vasculares son ampliamente reconocidas como. LI O. excelentes modelos genéticos para evaluar y detectar compuestos con potencial citotóxicos y genotóxico. En tal sentido. Allium cepa es usada ampliamente para. BI B. estudiar los mecanismos regulatorios que puedan afectar el ciclo celular como alteraciones cromosómicas y mitóticas (Leme y Marín-Morales, 2009).. Es así que desde 1938, el uso de Allium cepa se introdujo como un sistema de prueba biológico para evaluar los efectos citogenéticos de la colchicina; constituyéndose en un material biológico de amplio uso en pruebas de laboratorio, debido al crecimiento rápido de sus raíces y a la respuesta de su material genético a la presencia de citotóxicos potenciales en los líquidos de prueba. Es por ello que, al 5 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(16) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ensayar el efecto de algunos agentes físicos y químicos que puedan causar daño a nivel de su ciclo celular, se podría pensar que dichos agentes tendrían el potencial de generar un efecto tóxico en los procesos de división celular de otro tipo de células eucariotas,. RA DO. esto debido a la universalidad del código genético (Gonzales y Beltrán, 1997).. Ahora bien, en nuestro medio, sólo existen trabajos referentes a Acetoaminofeno o Paracetamol referidos con la hepatoxicidad del fármaco administrado por vía oral. Por lo que al no existir estudios sobre el uso del “Ibuprofeno” y conociendo de su venta libre y amplio uso y muchas veces sin prescripción médica y ofertado como analgésico,. SG. antipirético y antiinflamatorio se creyó conveniente orientar esta investigación a fin de. PO. evaluar el efecto citotóxico y genotóxico de este fármaco.. La investigación específicamente tratará de determinar dichos efectos utilizando diferentes concentraciones del fármaco y a tiempos diferentes sobre el ciclo celular y. BI B. LI O. TE CA. DE. nucleolar en células meristemáticas de ápices radicales de Allium cepa “cebolla”. 6 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(17) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. II. MATERIAL Y MÉTODOS. 2.1.. Material. RA DO. 2.1.1. Material biológico. El material utilizado en esta investigación lo constituyeron bulbos de Allium cepa, var. roja arequipeña en buen estado fitosanitario, adquiridos en los Mercados: “La Unión”, “La Hermelinda” y “Mayorista” de la ciudad de Trujillo (Fig. 1), los que. SG. trasladados al Laboratorio de Botánica, Ubicado en el 2do piso del Pabellón de Ciencias Biológicas “Pabellón Antonio Samanamud” de la Universidad Nacional de Trujillo, fueron convenientemente seleccionados para uniformizar forma tamaño y peso. En este. BI B. LI O. TE CA. DE. PO. trabajo se utilizaron 108 bulbos de aproximadamente de 90 gramos cada uno.. FIGURA 1: Bulbos de Allium cepa “cebolla” en excelente estado de conservación fitosanitaria, obtenidos del mercado “La Hermelinda”.. 7 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(18) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Igualmente ésta investigación necesitó de 100 unidades Ibuprofeno de 400 miligramos cada una y adquiridos en las farmacias trujillanas.. También se utilizaron 36 vasos de vidrio de más o menos 200 mililitros de capacidad, agua destilada, probetas de 200 mililitros, pipetas de 10 mililitros, navajas. RA DO. “guillette”, “palillos mondadientes”, láminas porta y cubre objetos, frascos de penicilina en cantidad suficiente para las tres repeticiones a las que requirió el experimento.. Para el proceso de fijación de los meristemos radicales de Allium cepa se usó. SG. carnoy, preparado en la proporción de 3: 1 (alcohol etílico de 96º y ácido acético glacial q.p.).. 2.2.. Métodos. DE. PO. Como colorante se empleó Orceína acética.. TE CA. 2.2.1. Obtención de raicillas de Allium cepa. Se extrajeron las catáfilas y raicillas secas a los bulbos de cebolla, en la parte ecuatorial de los mismos, se introdujo 3 ó 4 “palitos mondadientes” distribuidos. LI O. equidistantemente para suspender los bulbos en vasos con agua destilada, de tal manera que los discos germinativos de los bulbos de la cebolla establezcan contacto con el agua (por 72 horas), para estimular en principio, el enraizamiento) recambiando a diario el. BI B. agua destilada en cada vaso, para obtener al final raicillas de 2 – 3 cm de longitud aproximadamente (Fig. 2).. 8 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(19) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. B. PO. SG. RA DO. A. TE CA. DE. C. E. F. BI B. LI O. D D. FIGURA 2: A) Colocación de mondadientes en los bulbos de Allium cepa “cebolla”; B) Cambio diario de agua de los bulbos; C) pre-diseño de Allium cepa “cebolla”, esperando la obtención de raicillas, D) y E) Monitoreo diario del crecimiento de raicillas F) Raicillas listas para la aplicación de los tratamientos.. 9 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(20) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.2.2. Exposición de las raicillas. Para evaluar el efecto citotóxico y genotóxico. de las concentraciones de. Ibuprofeno sobre el ciclo celular y nucleolar de células meristemáticas de Allium cepa, se expusieron las raicillas de “cebolla” al fármaco; previamente triturado, pesado y diluido (Fig. 3); hasta alcanzar las concentraciones de 0,0 mg/L, 200 mg/L, 400 mg/L y. RA DO. 800 mg/L, en tiempos de exposición de 6, 12 y 24 horas respectivamente (Fig. 4), según. SG. se indica en la Tabla Nº 1.. D. E. BI B. LI O. C. TE CA. DE. PO. A. FIGURA 3: A) Blíster del fármaco Ibuprofeno; B) Trituración del fármaco Ibuprofeno para su posterior uso; C) Pesado del fármaco triturado para la posterior dilución; D) y E) Dilución del fármaco Ibuprofeno en agua destilada según los tratamiento establecidos. 10 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(21) SG. RA DO. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. DE. PO. FIGURA 4: DISEÑO EXPERIMENTAL: Evaluación del efecto de las concentraciones de Ibuprofeno a 200 mg/ L; 400 mg/ L, y 800 mg/ L durante 6, 12 y 24 horas sobre el ciclo celular y nucleolar de Allium cepa “cebolla”.. Tabla 1: Diferentes tiempos de exposición al fármaco Ibuprofeno en concentraciones de 0.00. TE CA. mg/L, 200 mg/L, 400 mg/L y 800 mg/L a tiempos de 6, 12 y 24.. TRATAMIENTOS. Concentración (mg/L). T1 T2 T3 T4 T5 T6 T7 T8 T9 T10 T11 T12. 0.0 200 400 800 0.0 200 400 800 0.0 200 400 800. BI B. LI O. T. Tiempo exposición (horas) 6 6 6 6 12 12 12 12 24 24 24 24. 11 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(22) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.2.3.. Obtención de los preparados citológicos. Finalizados los tiempos de exposición de las raicillas de Allium cepa a la solución de Ibuprofeno, se procedió a realizar los cortes de los ápices radicales de la “cebolla” para trasladarlos inmediatamente a los “frasquitos” de penicilina con el fijador. RA DO. carnoy, para luego proceder a la coloración con Orceína acética 2% y HCL 1N en proporción 9:1 respectivamente, durante 90 minutos siguiendo la técnica descrita por (Tijo y Levan., 1950) (Fig. 5).. Posteriormente mediante una pinza se procedió a extraer los ápices coloreados. SG. para colocarlos sobre láminas portaobjetos empapadas en una pequeña gota de colorante para luego colocarles una laminillas cubreobjetos y se procedió a realizar la técnica de. PO. “Squash” o aplastamiento la cual se fundamenta en ejercer una presión uniforme con la yema del pulgar sobre la laminilla cubreobjetos, evitando la formación de burbujas y. BI B. LI O. TE CA. DE. utilizando una base amortiguadora de papel de filtro Whatman Nº 1.. 12 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(23) BI B. LI O. TE CA. DE. PO. SG. RA DO. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.2.4.. Recuento celular 13. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(24) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Los preparados citológicos así obtenidos fueron observados, analizados e interpretados a través de la ayuda de un microscopio compuesto binocular Olympus CX21 (Fig.6). Las muestras fueron observadas, analizadas e interpretadas a 400 aumentos en. registrando el número de células en interfase y mitosis.. RA DO. un donde se llevó a cabo el recuento de aproximadamente 2000 células por lámina,. Se aplicó fórmulas para el índice mitótico e índice de fases. El índice mitótico se determinó sumando los diferentes estados morfológicos de la mitosis multiplicados por. SG. 100 y divididos entre el número total de células meristemáticas.. Los índices de fases (profase, metafase, anafase, telofase) se calcularon. PO. multiplicando el número de células de cada fase por, 100 y dividiéndolos con el total de células en mitosis.. DE. Por otro lado se determinó la presencia de aberraciones cromosómicas si las. BI B. LI O. TE CA. hubiese en cada uno de los tratamientos (Fig.7).. FIGURA 6:. Observación de preparados citológicos al microscopio compuesto contando aproximadamente un total de 2000 células meristemáticas por cada uno de los diferentes tratamientos ensayados.. 14 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(25) SG. RA DO. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Análisis estadístico. DE. 2.2.5.. PO. FIGURA 7: El tratamiento 12 correspondiente a la concentración de 800 mg/L y a un tiempo de exposición de 24 horas del fármaco Ibuprofeno ocasiona una disminución del índice mitótico y un aumento de aberraciones cromosómicas. TE CA. El experimento detallado pormenorizadamente en los diferentes métodos y descritos en los párrafos anteriores se hizo en tres (03) repeticiones, las mismas que fueron realizadas, entre octubre del 2013 y diciembre del 2014, con una periodicidad de 05 meses entre repetición y repetición.. LI O. Según el proyecto se consideraron hasta 06 repeticiones, pero dado los hallazgos. en las tres repeticiones ejecutadas, en las que los valores se mantenían más o menos. BI B. constantes repetición tras repetición, ya no fue necesario realizar las 06 repeticiones consideradas.. Los datos obtenidos se expresaron en porcentaje, analizándolos estadísticamente. utilizando el programa Statgraphics Centurión versión de prueba 5.1.para windows.. 15 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(26) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. VIII.. RESULTADOS. En el presente trabajo, se determinó el efecto citotóxico y genotóxico del. RA DO. fármaco Ibuprofeno a concentraciones de 0.0 mg/L, 200 mg/L, 400 mg/L, y 800 mg/L durante 6, 12 y 24 horas respectivamente sobre el ciclo celular en meristemos. SG. radiculares de Allium cepa “cebolla”, donde se obtuvo los siguientes resultados:. En la tabla 1, se observan los Promedios, en porcentajes, del Índice Mitótico e. PO. Índice de Fases; en el cual se aprecia una considerable disminución del IM a la concentración de 800 mg/L, durante un tiempo de exposición de 24 horas,. DE. correspondiente al tratamiento 12 (T12); de igual manera la presente tabla muestra un aumento notable del Índice Profásico así como una reducción abrupta de los demás. TE CA. índice de fases ( Metafásico, Anafásico y Telofásico), correspondientes al mismo. BI B. LI O. tratamiento (T12).. 16 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(27) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Tabla 2: Promedios en porcentajes del Índice Mitótico e Índice de Fases (Índice Profásico, Metafásico, Anafásico y Telofásico) en células meristemáticas de raíces de Allium cepa, tratados con el fármaco Ibuprofeno a distintas concentraciones y tiempos.. PROFASE %. METAFASE %. ANAFASE %. TELOFASE %. INDICE MITÓTICO %. 61.9 70.7 72.7 73.6 70.7 67.7 72.9 75.0 72.5 76.4 83.5 85.6. 13.4 12.6 10.7 10.9 13.6 10.9 8.3 7.7 12.5 8.1 8.7 7.9. 6.4 6.2 5.5 6.5 6.9 12.7 11.3 9.1 6.5 9.9 5.3 4.6. 18.2 10.6 11.1 9.0 8.8 8.7 7.6 8.1 8.5 5.6 2.5 1.9. 14.4 11.5 10.9 10.3 12.6 9.7 9.4 9.4 11.4 8.9 8.4 7.8. SG. PO. DE. 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12. RA DO. INDICE DE FASES TRATAMIENTOS. En la Tabla 2; se puede apreciar claramente un Análisis de Varianza (ANOVA). TE CA. para el Índice Mitótico; el mismo que nos muestra la presencia de diferencias significativas entre los tratamientos; cabe resaltar que dichos resultados fueron corroborados por la Prueba de Tukey en la Tabla 3, indicando como mejor tratamiento. BI B. LI O. al T12, con una disminución del índice mitótico de 11.43% (T9 control) a 7.86%.(T12).. 17 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(28) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Tabla 3. Análisis de Varianza (ANOVA) de los promedios para el Índice Mitótico, en células meristemáticas de raíces de Allium cepa, tratados con el fármaco Ibuprofeno a distintas concentraciones y tiempos.. Suma de Cuadrados. Gl. Cuadrado Medio. 116.114. 11. 10.5558. 8.89333. 24. 0.370556. 125.007. 35. Valor-P. 28.49. 0. PO. SG. Entre grupos Intra grupos Total (Corr.). Razón-F. RA DO. Fuente. DE. Tabla 4. Prueba de Tukey, para el Índice mitótico en células meristemáticas de raíces de Allium cepa.. Casos. Media. 12 11 10 8 7 6 4 3 9 2 5 1. 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3. 7.86667 8.36667 8.93333 9.33333 9.36667 9.73333 10.2333 10.9 11.4333 11.5333 12.6333 14.3667. BI B. LI O. TE CA. TRATAMIENTOS. Grupos Homogéneos X XX XX XXX XXX XX XX XX X X X X. (P≤0,05). X indica una diferencia significativa.. 18 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(29) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. En las tablas siguientes 4,6,8,10; se aprecia en detalle la existencia de diferencias significativas entre los tratamientos a través de un Análisis de Varianza (ANOVA) tanto para el Índice Profásico (Tabla 4), Índice Metafásico (Tabla 6), Índice Anafásico (Tabla. RA DO. 8) e Índice Telofásico (Tabla 10).. Las Tablas 5,7,9 y 11; nos muestra el tratamiento ideal para cada una de los Índices de fases mencionados anteriormente a través de la prueba Tukey, indicando al. SG. tratamiento T12, como aquel que causa unmayor efecto citotócico, ya que en este se puede apreciar un cambio abrupto en cuanto a los valores en porcentajes de cada uno de. PO. los índices, con un aumento de 72.5% ( T9 control) a 85.6% (T12) en el Índice Profásico (Tabla 5), Así como con una disminución notable de 12.5% ( T9 control) a 7.9% (T12). DE. en el Índice Metafásico; de 6.5% ( T9 control) a 4.6% (T12) en el Índice Anafásico así. TE CA. como de 8.5% ( T9 control) a 1.9% (T12) en el Índice Telofásico.. LI O. Tabla 5. Análisis de Varianza (ANOVA) para el Índice Profásico, en células meristemáticas de raíces de Allium cepa, tratados con el fármaco Ibuprofeno a distintas concentraciones y tiempos.. Fuente. BI B. Entre grupos Intra grupos Total (Corr.). Suma de Cuadrados. Gl. Cuadrado Medio. Razón-F. Valor-P. 1263.82. 11. 114.893. 16.84. 0. 163.747. 24. 6.82278. 1427.57. 35. 19 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(30) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Tabla 6. Prueba de Tukey, para el Índice Profásico en células meristemáticas de raíces de Allium cepa.. Media. 1 6 5 2 9 3 7 4 8 10 11 12. 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3. 61.9667 67.7667 70.7 70.7 72.4667 72.7333 72.9 73.6333 75.0333 76.4 83.5 84.7667. Grupos Homogéneos X X XX XX XX XX XX XX XX X X X. RA DO. Casos. PO. SG. TRATAMIENTOS. DE. (P≤0,05). X indica una diferencia significativa.. TE CA. Tabla 7. Análisis de Varianza (ANOVA) para el Índice Metafásico, en células meristemáticas de raíces de Allium cepa, tratados con el fármaco Ibuprofeno a distintas concentraciones y tiempos. Suma de Cuadrados. Gl. Cuadrado Medio. Razón-F. Valor-P. 167.547. 11. 15.2315. 8.83. 0. 41.4133. 24. 1.72556. 208.96. 35. Fuente. BI B. LI O. Entre grupos Intra grupos Total (Corr.). 20 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(31) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Tabla 8. Prueba de Tukey, para el Índice Metafásico en células meristemáticas de raíces de Allium cepa.. Casos. Media. 8 12 10 7 11 3 6 4 9 2 1 5. 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3. 7.7 7.83333 8.1 8.26667 8.7 10.6667 10.9 10.9 12.5 12.6 13.4667 13.5667. Grupos Homogéneos X X X X XX XX XX XX XX XX X X. SG. RA DO. TRATAMIENTOS. PO. (P≤0,05). X indica una diferencia significativa.. TE CA. DE. Tabla 9. Análisis de Varianza (ANOVA) para el Índice Anafásico, en células meristemáticas de raíces de Allium cepa, tratados con el fármaco Ibuprofeno a distintas concentraciones y tiempos. Fuente. Gl. Cuadrado Medio. Razón-F. Valor-P. 218.476. 11. 19.8615. 22.51. 0. 21.18. 24. 0.8825. 239.656. 35. BI B. LI O. Entre grupos Intra grupos Total (Corr.). Suma de Cuadrados. 21 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(32) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Tabla 10. Prueba de Tukey, para el Índice Anafásico en células meristemáticas de raíces de Allium cepa. Casos. Media. 12 11 3 2 1 4 9 5 8 10 7 6. 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3. 4.56667 5.33333 5.46667 6.13333 6.4 6.43333 6.56667 6.9 9.13333 9.9 11.2667 12.7333. Grupos Homogéneos X XX XX XX X X X X X XX XX X. SG. RA DO. TRATAMIENTOS. PO. (P≤0,05). X indica una diferencia significativa.. TE CA. DE. Tabla 11. Análisis de Varianza (ANOVA) para el Índice Telofásico, en células meristemáticas de raíces de Allium cepa, tratados con el fármaco Ibuprofeno a distintas concentraciones y tiempos. Fuente. Gl. Cuadrado Medio. Razón-F. Valor-P. 585.597. 11. 53.2361. 3.77. 0.0032. 339.133. 24. 14.1306. 924.73. 35. BI B. LI O. Entre grupos Intra grupos Total (Corr.). Suma de Cuadrados. 22 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(33) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Tabla 12. Prueba de Tukey, para el Índice Telofásico en células meristemáticas de raíces de Allium cepa.. Casos. Media. 12 11 10 7 8 9 6 5 4 2 3 1. 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3. 1.9 2.5 5.56667 7.56667 8.13333 8.5 8.66667 8.83333 9.03333 10.5667 11.1 18.2333. Grupos Homogéneos X XX XXX XXX XXX XX XX XX X X X X. PO. SG. RA DO. TRATAMIENTOS. TE CA. DE. (P≤0,05). X indica una diferencia significativa.. En la tabla 13, se observan cuantitativamente la frecuencia en que se presentan Aberraciones Cromosomicas (Puentes Anafásicos, Metafase Anormal) y Aberraciones. LI O. Nucleolares (Micronúcleos y Cel. Con tres núcleos) encontradas en células meristemáticas de raíces de Allium cepa, tratadas con el fármaco Ibuprofenio en las. BI B. concentraciones antes establecidas; mostrada de una forma mas detallada en la Figura 8, donde se puede apreciar dichas aberraciones en casi todos los tratamientos en los que contine el fármaco; siendo más notorio en el T12 (Fig. 9).. 23 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(34) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Tabla 13: Promedios de Aberraciones Cromosomicas ( Puentes Anafásicos, Metafase Anormal) y Aberraciones Nucleolares (Micronúcleos y Cel. Con tres núcleos) encontradas en células meristemáticas de raíces de Allium cepa, tratados con el fármaco Ibuprofeno a distintas concentraciones y tiempos.. ABERRACIONES CROMOSOMICAS Y NUCLEOLARES TRATAMIENTOS. MICRO NUCLEOS. CEL. CON TRES NUCLEOS. 0 3 3 8 0 12 13 14 0 13 14 16. 0 2 3 3 0 5 8 8 0 11 4 6. 0 0 0 0 0 0 0 0 0 3 5 9. 0 1 1 0 0 0 5 7 0 2 3 4. PO. SG. RA DO. METAFASE ANORMAL. BI B. LI O. TE CA. DE. 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12. PUENTES ANAFASICOS. FIGURA 8: Promedios de Aberraciones Cromosómicas ( Puentes Anafásicos, Metafase Anormal, Micronúcleos y Cel. Con tres núcleos) encontradas en células meristemáticas de raíces de Allium cepa, tratados con el fármaco Ibuprofeno a distintas concentraciones y tiempos.. 24 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(35) BI B. LI O. TE CA. DE. PO. SG. RA DO. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. FIGURA 9: Aberraciones Cromosomicas ( Puentes Anafásicos, Metafase Anormal) y Aberraciones Nucleolares (Micronúcleos y Cel. Con tres núcleos) encontradas en células meristemáticas de raíces de Allium cepa correspondiente al Tratamiento 12.. 25 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(36) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. IX.. DISCUSIÓN. Los resultados obtenidos en los diferentes tratamientos con el Ibuprofeno, indica una variación en el índice mitótico que varió de 14.4 %, en el control (T1) hasta 10.3%(T4) después de 6 horas; igualmente desde 12.6 %, en el Control (T5), hasta. RA DO. 9.4% (T7) después de 12 horas de exposición y desde 11.4 %, Control (T9), hasta 7.8% (T12) al cabo de 24 horas (Tabla 1). Indicando en todo momento una disminución notable del Índice Mitótico (Im), y a su vez. dejando entrever la existencia de. PO. SG. diferencias significativas; según el Análisis de Varianza (ANOVA) (Tabla 2).. Lo anteriormente anunciado estaría confirmando que a diferentes concentraciones. DE. y tiempos de exposición al Ibuprofeno se generan distintas respuestas celulares; las que según la prueba de TUKEY (Tabla 3) el tratamiento 12 es aquel capaz de reducir. TE CA. notablemente el Índice Mitótico a un valor de 7.9%; esto se deba a que a esta cantidad el fármaco Ibuprofeno contiene suficiente sustancias químicas capaz de generar un efecto oxidativo, el mismo que afectaría la formación del complejo CdK1-ciclina B; que. LI O. a su vez forma el Factor Promotor de la Metafase de la Mitosis (FPM); lo que a su vez genera consecuencias de alteraciones en la maquinaria molecular que controla el paso. BI B. de la célula de Interfase a mitosis por efecto del Ibuprofeno en análisis. Consecuentemente esto estaría conllevando a alteraciones de los índices de fases en células meristemáticas de A. cepa. (López y Fernádez, 1965); disminuyendo de este. modo el número de células en división; con similares resultados a los obtenidos con ensayos con extractos etanólicos de Glycine max “soja” (Shimotohno et al., 2003; Fernandes et al., 2007; León et al., 2008).. 26 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(37) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Los resultados expuestos en la Tabla 1, también nos permiten aseverar que el Índice profásico (IP) se incrementa notablemente,a medida que aumenta el tiempo de exposición de 6 a 12 y 24 horas respectivamente, en comparación a sus respectivos controles, lo que a su vez muestra diferencias significativas entre los tratamiento tal. RA DO. como se aprecia en la Tabla 4; y confirmado mediante la prueba de TUKEY (Tabla 5) donde el tratamiento T12, correspondiente a la concentración 800 mg/L y a 24 horas de. SG. exposición alcanzo un valor máximo de 84.7%, con respecto al control.. De igual manera lo informado en el párrafo anterior ratificaría en principio el. PO. efecto oxidativo de los compuestos presentes en dicho fármaco. (Ibuprofeno) que. estarían afectando la formación del complejo Ciclina B- cdk1, responsable de activar a. DE. las proteínas del mantenimiento estructural cromosómico conocidas como condensinas, encargadas de llevar a cabo la polimerización de microtúbulos para la formación del. TE CA. huso mitótico, que de no formarse sería casi imposible la transición normal de las células desde la profase hacía la metafase (Giménez et al., 1977; Lodish et al., 2002; Paniagua et al; 2002). Esta aseveración concuerda por lo descrito por diversos. LI O. investigadores; quienes afirman que el tránsito de profase a metafase requiere de factores de transcripción y de traducción, esenciales para la realización de este proceso. BI B. (Jiménez y Merchant, 2003).. La disminución del índice metafásico (IMet) cuyos resultados se muestran en la. Tabla 1, se dá en todos los tratamientos por las diferencias significativas que se dan entre ellas (Tabla 6); o como cuando se aprecia en la Tabla 7 con el tratamiento T 12 de mejor rendimiento, el mismo que alcanzo valores de hasta 7.83%, esto se debería a la. 27 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(38) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. inhibición del FPM, disminuyendo el ensamblaje del huso mitótico y dejando de inducir la polimerización de microtúbulos que se elaboran perpendicularmente al eje mayor del cromosoma y que se anclan por una de sus extremidades en el cinetocoro; logrando alcanzar un menor número de células durante la metafase con respecto a los controles. RA DO. (Golias et al., 2004); tal como lo experimentaron autores Jiménez y Merchant. (2003), quienes afirmaron durante sus ensayos que en la metafase los cromosomas están sujetos por el centrómero a los microtúbulos del huso acromático, de tal forma que si este no se organiza los cromosomas pierden orientación y no migraran a los polos; a su vez estos. SG. mecanismos vienen siendo monitoreados usando una serie de inhibidores que mantienen. PO. los cromosomas en una fase determinada de la mitosis.. DE. Los índices Anafásicos (IA) y telofásicos (IT) (Tabla 1) de los tratamientos expuestos al fármaco Ibuprofeno también disminuyeron con respecto a sus controles en. TE CA. 6, 12 y 24 horas; tanto para el índice Anafásico (IA) e Índice Telofásico (IT) con diferencias significativas notables apreciadas en las Tablas 8 y 10 respectivamente; en las que se observa el mejor tratamiento para ambas es el T12 (Tablas 9 y 11), con una disminución tal que alcanzó los 4.5% en su Índice Anafásico y un 1.9% en su Índice. LI O. Telofásico. Dicha disminución, estaría ocurriendo debido a que el aumento del número de células en profase genera una disminución en metafase y por ende una disminución. BI B. en anafase. Además la disminución del IA, se originaría debido a que la acción oxidativa de los compuestos presentes en el líquido de ensayo estarían inhibiendo la actividad catalítica de las cohesinas, las cuales a su vez se encargan de llevar a cabo el proceso de segregación de cromátidas hermanas; no permitiendo entonces (García et al.,. 2013).. 28 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(39) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. De igual manera se puede apreciar tanto en la tabla 13, como en las figuaras 8 y 9 la presencia notable de aberraciones, tanto a nivel de cromosoma (Aberraciones cromosomicas) como a nivel de nucleo celular (Aberraciones Celulares) por lo que se. RA DO. podría afirmar que el fármaco Ibuprofeno presenta un efecto genotóxico en las células meristemáticas de Allium cepa “cebolla”; cabe mencionar que Las aberraciones cromosómicas y Nucleolares se caracterizan por los cambios cromosomales que pueden sufrir las estructuras genéticas o el total de los cromosomas y pueden generarse. PO. SG. espontáneamente tanto por agentes químicos como físicos (Morais y Marin, 2009).. El análisis de los cambios genéticos (cromosómicas) de las células de la cebolla. DE. (Tabla 13) confirmó totalmente los resultados observados del estudio sobre el IM (Tabla 1): a medida que aumenta la concentración del farmaco, se encuentran con mayor. TE CA. frecuencia y severidad eventos de malformación o aberración cromosómicas; tal es asi que en el T12 se puede apreciar claramente por campo, un promedio de 16 Puentes Anafásico, 6 Metafases anormales, 9 Micronúcleos y 4 Polinúcleos (Cel.con tres núcleos) (Fig. 9). Cabe mencionar que Las Aberraciones cromosómicas ACs pueden ser. LI O. inducidas por varios factores como el rompimiento del ADN o la inhibición de la. BI B. síntesis y replicación del ADN alterado (Freyre et al., 2009).. Por lo anunciado dichas anormalidades apreciadas en las células meristemáticas. de Allium cepa se debe a que este fármaco causa una segregación anormal de los cromosomas, generado por la acción de agentes aneugénicos. En términos generales, la presencia de ACs como Puentes Anafásicos indican acciones clastogénicas, mientras que las ACs metafase Anormales, nos muestran efectos aneugénicos de este fármaco.. 29 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(40) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Por otra las alteraciones morfológicas manifestadas principalmente como núcleos lobulados, núcleos desplazados, polinúcleos y micronúcleos; nos estarían indicando que este fármaco presenta agentes químicos capaces de interferir en la interfase nuclear. BI B. LI O. TE CA. DE. PO. SG. RA DO. generando estas alteraciones (Herrero et al., 2012).. 30 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(41) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. X.. CONCLUSIONES. El fármaco Ibuprofeno a la concentración de 800 mg/ L y a 24 horas de exposición, ocasiona una disminución del índice mitótico, hasta de un 7.8 % y un aumento en el índice profásico, de 85.6 % en meristemos radiculares de Allium. cepa var. roja. RA DO. arequipeña con respecto al resto de tratamientos.. El Ibuprofeno a 800 mg/L de concentración y a 24 horas de exposición, ocasiona una disminución del índice metafásico. de hasta 7.9%, del anafásico de 4.6% y. telofásico de 1.9%, en meristemos radiculares de Allium. cepa var. roja arequipeña con. SG. respecto al resto de tratamientos.. El fármaco Ibuprofeno a la concentración de 800 mg/ L y a 24 horas de exposición. PO. genera un promedio por campo de 16 Puentes Anafásico, 6 Metafases anormales, 9 Micronúcleos y 4 Polinúcleos; lo que indicaría un efecto genotóxico en células. BI B. LI O. TE CA. DE. meristemáticas de Allium. cepa var. roja arequipeña.. 31 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(42) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. VI. PROPUESTA.. La comprobación de los daños colaterales que ocasionan en las personas muchos fármacos amplia y frecuentemente usados debido a que son prescritos por la práctica de la medicina ha determinado que se tenga particular interés en investigar los efectos que tiene muchos fármacos en la salud humana, cuyos daños pueden ser mayores a los. RA DO. beneficios para los cuales están indicados.. En tal sentido hoy en día se ha advertido muchos problemas de salud entorno a la creciente citotoxicidad y genotoxicidad celular por mutágenos químicos, los cuales. SG. pueden provocar daños irreversibles a las células y al material genético como es el caso de muchos fármacos, los cuales en su mayoría a parte de acumularse pueden causar. PO. efectos irreversibles, perjudicando a la salud humana.. DE. Las pruebas de citotoxicidad y genotoxicidad actualmente realizadas por muchos investigadores para determinar la proporción de células que mueren después de un proceso de exposición a estos compuestos permiten advertir que su uso indiscriminado. TE CA. debe ser evaluado para continuar con su uso; toda vez que los daños pueden superar a los beneficios.. LI O. En este contexto la investigación debe iniciar de manera urgente la evaluación de los efectos citotoxicos y genotoxicos colaterales que pueden tener muchos fármacos y sobre todo los resultantes de síntesis químicas como los antiinflamatorios no. BI B. esteroideos (AINEs): Ibuprofeno, paracetamol, metamizol, etc., que vienen siendo frecuente y a veces hasta obligatoriamente prescritos en los centros asistenciales de salud, sobretodo donde se atienden los ciudadanos denominados “asegurados” que. laboran generalmente en las instituciones públicas del Estado y que irremediablemente sólo hacen uso de ésta medicación, por falta de recursos económicos para tener una atención más especializada y con mejor medicación.. 32 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(43) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Por lo tanto, las instituciones públicas y privadas comprometidas con la salud humana y responsables por lo que estos fármacos pueden estar ocasionando daño a la salud del hombre, deben comprometerse responsable y prioritariamente con la investigación seria que los efectos que estas drogas podrían estar ocasionando al hombre, y así determinar su uso racional bajo prescripción médica pero con la. RA DO. seguridad de que la población obtiene beneficios de salud que superan a los daños ocasionados por estos medicamentos. Claro está que se sabe que no hay ningún medicamento que sólo cure y no tenga efectos colaterales adversos. Pero la. SG. investigación debe asegurarnos que estos daños negativos deben ser cada vez menores.. Muy bien se haría que la práctica médica incluya, por lo menos, como. PO. complemento a muchos recursos de la medicina tradicional y particularmente de las plantas medicinales, comprobadas por su mayor eficacia y menos daños colaterales para. DE. el ser humano y que paralelamente deben ser investigadas al igual que los fármacos. TE CA. sintéticos.. Los resultados de la presente investigación, si bien es cierto tiene carácter preliminar, sin embargo los resultados permiten alertar que el sobre uso indiscriminado y abundante que se está haciendo de muchos fármacos, como el ibuprofeno podrían. LI O. estar ocasionado daños a nivel celular y del material genético con el consiguiente perjuicio de la salud y que muy bien se haría en ahondar las investigaciones, las que deben incluir además ensayos clínicos y así determinar en suma el daño real que. BI B. podrían hacer éstos fármacos en las personas, ya que esta investigación sólo reporta los daños que ocasiona ésta fármaco en las raicillas de la “cebolla” .. 33 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(44) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. IV.. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS. Abou-Eisha A, Creus A, Marcos R.1999. Genotoxic evaluation of the antimicrobial drug, trimethoprim, in cultured human lymphocytes. Mutat Res 440:157-162. Amesquita, C.M.L. (2009). Genotoxicidad de tres concentraciones de Acetominofeno R. células de médula óseas de Mesocricetu auratus. Tesis para. RA DO. Paracetamol. optar el Grado de Doctor en Ciencias Biomédicas. Universidad nacional de Trujillo.- Perú.. Aller, A., De la Torre, E. (1992). The envolvement of discrte genome regions in post-. SG. mitotic chromosome de condensation in GL Timing in Allium cepa L.. PO. meristemáticas cells”. Journal of cell science. 103: 1047-1051 pp. Bergman K, Müller L, Teigen S. 1996. The genotoxicity and carcinogenicity of. DE. paracetamol: a regulatory (re)view. Mutat Res 349:263-588.. TE CA. Busson, M. (1986 ). Update on ibuprofen: review article. Int Med Res; 14:2 53-62 pp. Davies, E., Avery, G. (1971). Ibuprofen: a review of its pharmacological properties and therapeutic efficacy in rheumatic disorders. Drugs; 2:5 416-46 pp.. LI O. Díaz, R. (2011). Efecto protector del extracto etanólico de Glycine max sobre la citotoxicidad y genotoxicidad del Dicromato de potasio en meristemos. BI B. radicales de Allium cepa. Tesis para optar el Título de biólogo. Facultad de Ciencias Biológicas de la Universidad Nacional de Trujillo.. Diez, J., Planelles, M., Moreno, F., Molina, A. (2000). Evaluación de la eficacia antipirética y seguridad de dos formulaciones pediátricas de ibuprofeno. An Esp Pediatr; 53(5): 436-40 pp. Dubinin, N. Genética General. (1981). Tomo I y II. Edit MIR, Moscú. Rusia. 43 pp. 34. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(45) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Farré, M., Roset, P., Pascual, J., Abanades, S., Menoyo, E., Álvarez, Y. (2005). Estudio de biodisponibilidad en magnitud y velocidad de comprimidos de ibuprofeno. Reumatol Clin; 1(3): 155-60 pp. Fernandes, T., Mazzeo, D., Marin, M. (2007). Mechanism of micronuclei formation in. RA DO. polyploidizated cells of Allium cepaexposed to triXuralin herbicide. Pesticide Biochem & Physiol; 88: 252-259.. Fiskesjo, G. (1988). The allium test. An alternative in environmental studies: The. SG. relative toxicity of metal ions. Mutation Research. 197(2), 243-260 pp.. PO. Fiskesjo, G., Dutka, B. (1996). Toxicological monitoring of drinking waters in developing countries. Proceedings of WaterTox Workshop Ottawa: Burlington. DE. National Water Research Institute. 89-153 pp.. Fistejo, G. (1985). The Allium sp. test as Standard in enviromental Monitoring;. TE CA. Hereditas; 102: 99-102 pp.. Freyre, S., Estrada, M., Bolaños, H. (2009). Estudio preliminar de la citotoxicidad y la genotoxicidad de un extracto de origen vegetal conocido como palmo rosado. LI O. en células meristemáticas de Allium cepa. Revista Memorias. 5 (12), 12-17pp.. BI B. García, J., Casado, G., García, J. (2013). Una visión global y actual de los edulcorantes. Aspectos de regulación. Nutr Hosp; 28(Supl. 4):17-31.. Giménez, G., De la Torre, C., Lopez, J. (1977). Cell division in higher plants. Golias, C., Charalabopoulos, A., Charalabopoulos, K. (2004). Cell Proliferation and Cell Cycle Control: a mini review. Int J Clin Pract; 58(12): 1134-1141.. 35 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(46) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Gonzales,. L.,. Beltrán,. R.. (1997).. Efecto. citotóxicos. del. herbicida. 2,4. Diclorofenoxiacetico sobre meristemos de Allium cepa y Vicia faba. REBIOL; 17(1 y 2): 15-21pp. Goodman, A., Goodman, L., Gilman, A. (2003). Las bases farmacológicas de la. RA DO. terapéutica. 10ª ed. México DF: Editorial McGraw-Hill; 554-57 pp.. Gupta P, Sharma T. 1981. Nonrandom distribution of aberrations and identification with C and G bandings of the position of breakage points on muntjac chromosome. SG. induced by mitomycin C, bromodeoxyuridine and hydroxylamine. Mutat Res. PO. 81:63-74.. Guzmán, A. (2008). Estudio del potencial genotóxico del E-5842, un fármaco. DE. experimental antipsicótico con afinidad por el receptor Sigma y del mecanismo de inducción de eritrocitos micronucleados en ratones mediante hipotermia.. TE CA. Tesis para Optar el Grado de Doctor en Genética. Universidad Autónoma de Barcelona – España.. Halpern, S., Fitzpatrick, R., Volans, G. (1993). Ibuprofen toxicity. A review of adverse. LI O. reactions and overdose. Adverse Drug React Toxicol Rev Summer; 12:2 10728 pp.. BI B. Hemant, S., Rojas, C. (2005). Prevention of Acetaminophen – Induced Mitodepresion with Myrobalan (Frut of terminalia chebulia) in Allium cepa Model Iranian. J Pharmacol & Therap. IJPT; 4: 100-104 pp.. Herrera, E., Jiménez, R., Sánchez, I., Fraga, C. (2009). Aspects of antioxidant foods and supplements in health and disease. Nutr Rev. 67: 140 – 144 pp.. 36 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(47) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Herrero, J., Pérez, P., Fernández, L., Carvajal, A., Peropadre, M. (2012) .Toxicological evaluation of three contaminants of emerging concern by use of the Allium cepa test. Mutation Research/Genetic Toxicology and Environmental Mutagenesis; 743: 20-24.. RA DO. Jelliffe D. 1985. Nutrición infantil en países en desarrollo. 2a ed. Ed. Limusa, S.A. de C.V. México D.F. pp: 95-126.. Jiménez, L., Merchant, H. (2003). Biología Celular y Molecular. México: Edit. Pearson. SG. Ecuación.. Karp, G. (2006). Biología celular y Molecular. Conceptos y experimentos. Cuarta. PO. edición impreso en México. 422 pp.. DE. Leme, D., Marín-Morales, M. (2009). Allium cepa test in environmental monitoring: a review on its application. Mutation Research; 682(1), 71-81 pp.. TE CA. León, J., Prieto, Z., Quijano, C., Fernández, R. (2008), Efecto genotóxico del dicromato de potasio en eritrocitos de sangre periférica de Oreochromis niloticus (tilapia). Rev Peru Med Exp Salud Pública; 25(1): 51-58.. LI O. Lodish, H., Berk, A., Zipursky, L., Matsudaira, P. (2002). Biología Celular y Molecular.. BI B. 4ta ed. España: Edit. Panamericana.. López, J., Fernádez, E. (1965). Mitotic partial index and phase indices. Experientia, 21: 591-592 pp.. Magazzini, L., Pammolli, F., Riccaboni, M. (2004). Dynamic competition in pharmaceuticals. Patent expiry, generis penetration, and industry structure. Eur J Health Econ; 5(2): 175-82 pp.. 37 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.