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Extracción y cuantificación de amigdalina por método kjeldahl, en almendras de prunus persica (durazno), comercializados en el mercado mayorista “La Hermelinda” de la ciudad de Trujillo, región La Libertad periodo 2016

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(1)Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA. BI. O Q. UI. M. IC. A. ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA. IA. Y. “EXTRACCIÓN Y CUANTIFICACIÓN DE AMIGDALINA. (DURAZNO),. COMERCIALIZADOS. FA R. Persica. M. AC. POR MÉTODO KJELDAHL, EN ALMENDRAS DE Prunus EN. EL. DE. MERCADO MAYORISTA “LA HERMELINDA” DE LA. CA. CIUDAD DE TRUJILLO, REGIÓN LA LIBERTAD - PERIODO. BI. BL. IO TE. 2016”. TESIS I: AUTOR:. Morillo Horna, Juan Manuel ASESOR: Dr. Edmundo Venegas Casanova. TRUJILLO – PERÚ 2016. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(2) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. DEDICATORIA. BL. IO TE. CA. DE. FA R. M. AC. IA. Y. BI. O Q. UI. M. IC. A. A mis preciosos padres, Azucena y Manuel, por todo el amor que recibí, por todos aquellos planes juntos, por cada segundo que pasamos y fue lo mejor de mi vida, y aunque infinito sea el tiempo y el universo, por siempre esperare a volver a estar juntos, los amo con todo mi ser y por siempre los amare.. BI. A mis amadas hermanas, Carmen, Tatiana, Edith y María, por todo aquello que nos tocó vivir juntos, días llenos de dicha y felicidad, mi promesa por siempre será y por siempre estaré a su lado.. i Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(3) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. AGRADECIMIENTO. A mi amado abuelito Juan Morillo Agreda, gracias por todo el amor, gracias por darme un. BI. BL. IO TE. CA. DE. FA R. M. AC. IA. Y. BI. O Q. UI. M. IC. A. motivo para ser mejor cada día.. ii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(4) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. JURADO EVALUADOR. …………………………………………………… Dr. RAFAEL JARA AGUILAR. BI. O Q. UI. M. IC. A. PRESIDENTE. Y. …………………………………….………………... AC. IA. Dr. EDMUNDO VENEGAS CASANOVA. DE. FA R. M. MIEMBRO. IO TE. CA. ………………………………………………………. MIEMBRO. BI. BL. MsC. RUBEN JESUS ARO DÍAZ. iii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(5) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Presentación Señores Miembros del Jurado: De conformidad con las disposiciones del reglamento interno referente a Grados y Títulos de la Facultad de Farmacia y Bioquímica de la Universidad Nacional de Trujillo, me es grato someter a vuestra consideración y elevado criterio el presente informe de tesis I: “EXTRACCIÓN Y CUANTIFICACIÓN DE AMIGDALINA POR MÉTODO ALMENDRAS. DE. Prunus. Persica. (DURAZNO),. A. EN. IC. KJELDAHL,. UI. M. COMERCIALIZADOS EN EL MERCADO MAYORISTA “LA HERMELINDA” DE. O Q. LA CIUDAD DE TRUJILLO, REGIÓN LA LIBERTAD - PERIODO 2016”.. Y. BI. Es propicia la oportunidad para manifestar mi más sincero reconocimiento y gratitud a. AC. IA. la plana docente y administrativa que con su capacidad y buena voluntad han contribuido. M. decididamente en mi formación profesional.. FA R. Dejo a vuestra criterio señores miembros del jurado la calificación del presente trabajo de. CA. DE. investigación científica.. BI. BL. IO TE. Trujillo, Junio del 2016. ………………………………………………… Morillo Horna Juan Manuel. iv Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(6) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA ESCUELA PROFESIONAL DE FARMACIAY BIOQUÍMICA Siendo las…….horas del día…. de Junio del ……,y estando con forme a lo dispuesto por la facultad de Farmacia y Bioquímica de la Universidad Nacional de Trujillo, los miembros del jurado de sustentación de la escuela profesional de Farmacia y Bioquímica, con formado por: PRESIDENTE: Dr. RAFAEL JARA AGUILAR ASESOR: Dr. EDMUNDO VENEGAS CASANOVA MIEMBRO: MsC. RUBEN JESUS ARO DÍAZ. IC. A. Se reunieron para evaluar la sustentación del informe de tesis titulado:. BI. O Q. UI. M. EXTRACCIÓN Y CUANTIFICACIÓN DE AMIGDALINA POR MÉTODO KJELDAHL, EN ALMENDRAS DE Prunus Persica (DURAZNO), COMERCIALIZADOS EN EL MERCADO MAYORISTA “LA HERMELINDA” DE LA CIUDAD DE TRUJILLO, REGIÓN LA LIBERTAD - PERIODO 2016.. AC. IA. Y. Presentado por: MORILLO HORNA JUAN MANUEL. BI. BL. IO TE. CA. DE. FA R. M. Código del estudiante: 021100406 Asesorado por: Dr. EDMUNDO VENEGAS CASANOVA Luego de la presentación del autor y las deliberaciones, el Jurado de Sustentación acordó:……………..Por…………….la tesis, con el calificativo de……., quedando expedito para optar el Título Profesional de Bachiller en Farmacia y Bioquímica. Los miembros del Jurado de Sustentación firman a continuación, dando fe de las conclusiones del Acta:. ……………………………………... ………………………………………………. Dr. RAFAEL JARA AGUILAR. Dr. EDMUNDO VENEGAS CASANOVA. PRESIDENTE. ASESOR. ………………………………………. MsC. RUBEN JESUS ARO DÍAZ MIEMBRO. v Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(7) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. RESUMEN Amigdalina es un diglucósido cianogénico, presente en grandes concentraciones en almendras de Prunus persica que podría tener aplicaciones en el tratamiento del cáncer, al poseer un mecanismo de acción innovador y menos tóxico, lo convierten en una molécula de interés, por ello se decide cuantificarla en variedades comerciales,. IC. A. procedentes de la zona local.. UI. M. El presente estudio es de tipo descriptivo, y tiene por objetivo encontrar la concentración variedades. O Q. de amigdalina presente en almendras de Prunus Pérsica (durazno). BI. comerciales, obtenidas de campos de cultivo del distrito de Usquil, Provincia de Otuzco. IA. Y. en el departamento de La Libertad en el otoño del 2016, las cuales fueron adquiridas en. AC. el Mercado de Abastos Mayorista “La Hermelinda”, se realizó una extracción acuosa a. FA R. M. temperatura constante de 90°C y durante 15 minutos, estas condiciones son óptimas para. DE. un máximo rendimiento de extracción, luego de lo cual se realiza la determinación. CA. cuantitativa mediante el semimicro análisis Kjeldahl, esto fue posible gracias a la. IO TE. molécula de cianuro presente en la molécula de amigdalina, la concentración de amigdalina promedio en las muestras de almendras de durazno fue de 11.58 mg/g, el. BI. BL. proceso de extracción fue de tendencia lineal en referencia al tiempo.. Palabras clave: Amigdalina; Prunus Pérsica; Cianuro; Kjeldahl.. vi Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(8) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ABSTRACT Amygdalin is a cyanogenic diglucoside, present in high concentrations in almonds Prunus persica that could have applications in the treatment of cancer, possessing an innovative and less toxic mechanism of action, make a molecule of interest, so it was decided to quantify in commercial varieties, from the local area.. A. This study is descriptive, and aims to find the concentration of Amygdalin present in. M. IC. almonds from Prunus persica (peach) commercial varieties obtained from fields of Usquil. UI. District, Province of Otuzco in the department of La Libertad in the autumn of 2016,. BI. O Q. which were acquired in the Market Wholesaler "La Hermelinda" an aqueous extraction. Y. at a constant temperature of 90 ° C for 15 minutes was performed, these conditions are. AC. IA. optimal for maximum yield extraction, then what which the quantitative determination. M. by the semi-micro Kjeldahl analysis is done, this was possible thanks to the molecule of. FA R. cyanide present in the molecule of tonsillar, Amygdalin average concentration in samples. DE. peach almond was 11.58 mg / g, the process extraction was linear trend in reference to. IO TE. CA. time.. BI. BL. Keywords: Amygdalin; Prunus Persica; Cyanide; Kjeldahl.. vii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(9) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ÍNDICE I. INTRODUCCIÓN ............................................................................. 1 II.. MARCO TEÓRICO ....................................................................... 6. 2.1. JUSTIFICACIÓN........................................................................ 11 2.2. PROBLEMA ................................................................................ 12 2.3. HIPÓTESIS ................................................................................. 12 2.4. OBJETIVOS ................................................................................ 12. IC. A. III. MATERIAL Y MÉTODO ............................................................ 13. M. 3.1. MATERIAL ................................................................................. 13. O Q. UI. 3.2. MÉTODO .................................................................................... 15 RESULTADOS ............................................................................. 19. V.. DISCUSIÓN .................................................................................. 21. VI.. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES ........................... 24. IA. Y. BI. IV.. AC. 6.1. CONCLUSIONES ....................................................................... 24. M. 6.2. RECOMENDACIONES ............................................................. 24. FA R. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS .................................................. 25. BI. BL. IO TE. CA. DE. ANEXOS ................................................................................................. 28. viii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(10) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. I.. INTRODUCCIÓN. «Cáncer» es un término genérico que designa un amplio grupo de enfermedades que pueden afectar a cualquier parte del organismo; también se habla de «tumores malignos» o «neoplasias malignas». Una característica del cáncer es la multiplicación rápida de células. A. anormales que se extienden más allá de sus límites habituales y pueden invadir partes. M IC. adyacentes del cuerpo o propagarse a otros órganos, proceso conocido como metástasis (1).. Q. UI. El cáncer comienza en una célula, y la transformación de una célula normal en tumoral es un. BI. O. proceso multifásico y suele consistir en la progresión de una lesión precancerosa a un tumor. Y. maligno. Estas alteraciones son el resultado de la interacción entre los factores genéticos del. AC I. A. paciente y tres categorías de agentes externos, a saber (Físicos, Químicos y Biológicos) (1).. RM. El envejecimiento es otro factor fundamental en la aparición del cáncer. La incidencia de esta. FA. enfermedad aumenta muchísimo con la edad, muy probablemente porque se van acumulando. DE. factores de riesgo de determinados tipos de cáncer. La acumulación general de factores de. TE CA. riesgo se combina con la tendencia que tienen los mecanismos de reparación celular a perder. BI BL IO. eficacia con la edad (1).. Según la OMS, el cáncer es la principal causa de muerte a escala mundial. Se le atribuyen 8,2 millones de defunciones ocurridas en todo el mundo en 2012, es una de las principales causas de morbilidad y mortalidad en todo el mundo; en 2012 hubo unos 14 millones de nuevos casos y 8,2 millones de muertes relacionadas con el cáncer, se prevé que el número de nuevos casos aumente en aproximadamente un 70% en los próximos 20 años (1) (2).. 1 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(11) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. La Vigilancia Epidemiológica de Cáncer (VEC) se inició en el Perú el año 2006, como una propuesta de la Dirección General de Epidemiología en coordinación con el Instituto Nacional de Enfermedades Neoplásicas (INEN). Para el período comprendido entre enero y diciembre del año 2012, se realizó el registro de 12 359 casos de cáncer; de los cuales, 3931 fueron diagnosticados el año 2012 (31,8%). Los casos notificados procedían de 43 unidades. A. notificantes a nivel nacional. Dichos datos no incluyen aún los del Instituto Nacional de. M IC. Enfermedades Neoplásicas, institución que somete los casos a diversos controles de calidad. Y. BI. O. Q. UI. antes de su registro en la VEC (3).. AC I. A. Los tipos de cáncer más frecuentes a nivel global fueron los de cérvix (15,5%), estómago. RM. (12,8%) y mama (11,7%). En el sexo masculino, los tipos de cáncer más frecuentes fueron. FA. los de estómago (16,9%), próstata (16,1%) y piel (15.0%); mientras que, en el sexo femenino. DE. los más frecuentes fueron los de cérvix (25,1%), mama (14,8%) y estómago (8,5%). BI BL IO. TE CA. respectivamente (3).. La edad promedio al momento del diagnóstico fue de 59,1 ± 18,1 años; el 61,4% de los casos correspondieron al sexo femenino y el 38,6% al sexo masculino (Razón mujer/varón de 1,6:1). La mayor frecuencia de casos en el sexo masculino se agrupó entre los 65 y 79 años de edad (49,1%); mientras que, en el sexo femenino la mayor frecuencia se agrupó entre los 45 y 69 años de edad (51,8%) (3).. 2 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(12) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. La detección del cáncer se realiza predominantemente mediante presentación clínica con síntomas lo que evidencia un diagnóstico tardío. La cobertura de las técnicas de detección y tamizaje es aún mediocre en Perú. Cuatro de cada cinco cánceres son diagnosticados con técnicas microscópicas (Histología, citología o hematología de lámina) que constituyen el. M IC. A. gold estándar para el diagnóstico (3).. UI. Según la OMS para el año 2030 se producirán un total de 11,5 millones de defunciones por. O. Q. cáncer. Una alta proporción de estos tumores serán resistentes a los agentes antineoplásicos. Y. BI. actuales, por ello, en los últimos años se ha realizado una intensa labor investigadora en la. AC I. A. búsqueda de nuevas dianas para el tratamiento de tumores. Una de las dianas que está. RM. ofreciendo más posibilidades es el mecanismo de la apoptosis. La apoptosis se produce en. FA. condiciones fisiológicas como un mecanismo regulador del crecimiento de tejidos, en. DE. equilibrio con la proliferación celular. Su desregulación podría ayudar a explicar la. BI BL IO. TE CA. patogénesis de algunos tumores malignos (2).. La resistencia a los antineoplásicos puede ser natural o adquirida. La resistencia natural hace referencia a la baja respuesta inicial de un tumor a un determinado fármaco, mientras que la adquirida se refiere a la falta de respuesta que surge tras un tratamiento inicial con éxito. Existen tres características tumorales que parecen determinar la resistencia a la quimioterapia: la cinética de crecimiento, la aparición de mutaciones espontáneas y la bioquímica (2).. 3 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(13) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Cinética de crecimiento de la masa tumoral: La mayoría de los quimioterápicos actúan sobre las células en división, de manera que cuanto menor sea la fracción en crecimiento, es decir, el porcentaje de células con actividad proliferativa, menor será el número de células presumiblemente sensibles al tratamiento. Por ello, las células que se encuentran fuera del ciclo celular, en la llamada fase G0, serán. A. refractarias a la mayoría de quimioterápicos. En los tumores sólidos, el crecimiento se. M IC. enlentece de forma exponencial, aumentando el número de células en fase G0 según progresa. Q. UI. el tumor. Una importante consecuencia de este tipo de crecimiento es que, en el momento. BI. O. del diagnóstico, la mayoría de los pacientes presentan tumores con una baja fracción de. AC I. A. Y. crecimiento y, por tanto, con baja sensibilidad a la mayoría de los quimioterápicos (2).. RM. Aparición de mutaciones espontáneas:. FA. A través de cambios citogenéticos aleatorios, algunas células tumorales mutan volviéndose. DE. resistentes a ciertos fármacos, sin haber tenido contacto previo con ellos.. TE CA. Esta capacidad de resistencia se transmite a las células descendientes, de tal forma que la población celular de un tumor en crecimiento no es homogénea, coexistiendo clones celulares. BI BL IO. sensibles y resistentes al tratamiento. El número de células resistentes en un tumor en el momento del diagnóstico, se relaciona directamente con su tamaño y su tasa intrínseca de mutación (2).. Alteración de mecanismos bioquímicos: Pueden aparecer resistencias a quimioterápicos por diferentes razones bioquímicas que incluyen la incapacidad de que en la célula tumoral se transforme el profármaco a su forma activa, la capacidad de la célula tumoral de inactivar el fármaco (modificación del. 4 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(14) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. metabolismo intracelular del fármaco), la disminución de la captación del fármaco por parte de la célula tumoral (modificación de barreras fisiológicas, vascularización tumoral alterada…), el aumento de la expulsión del fármaco a través de la membrana celular (bombas de eflujo), cambios en los niveles o en la estructura de la diana intracelular, o el aumento de. A. la tasa de reparación del ADN dañado (2).. M IC. Actualmente, se están utilizando diferentes estrategias para aumentar la respuesta a los. Q. UI. antineoplásicos. Entre ellas se encuentra la detección precoz del tumor ya que si el tumor es. BI. O. de menor tamaño tendrá un mayor porcentaje de células en división y por tanto sensibles al. Y. tratamiento. En este sentido, también resulta eficaz la reducción de la masa tumoral mediante. AC I. A. cirugía y/o radioterapia, ya que esta reducción aumenta la fracción de células en crecimiento. RM. y produce una mayor susceptibilidad a los fármacos. Es especialmente importante la. FA. eliminación de las masas tumorales necróticas a las que, por baja vascularización, no puede. DE. llegar suficiente cantidad de fármaco. Para evitar las resistencias debidas a alteraciones. TE CA. bioquímicas se intenta favorecer el acceso del fármaco al tumor desarrollándose sistemas de vectorización. Mediante esta estrategia se persigue una localización selectiva del fármaco a. BI BL IO. nivel de la célula tumoral reduciéndose, de forma paralela, la toxicidad asociada a estos fármacos. Se han desarrollados novedosos sistemas que permiten la vectorización pasiva o activa del fármaco a nivel de las masas o incluso el interior de las células tumorales, evitando en muchos casos, los mecanismos naturales de internalización de ese fármaco en la célula. La asociación de quimioterápicos es un recurso también muy utilizado, que ofrece dos ventajas: la suma o potenciación de efectos citotóxicos (se asocian moléculas con diferente mecanismo de acción), y la disminución de la probabilidad de aparición de resistencias (se asocian fármacos con diferentes mecanismos de resistencias) (2).. 5 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(15) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. II.. MARCO TEÓRICO. La amigdalina (D-mandelo-β-gentiobiósido) es un diglucósido cianogénico que es abundante en las semillas de la familia de la prunasina, plantas como las almendras, albaricoques, cerezas duraznos y otras plantas rosáceas (4).. A. La amigdalina es químicamente una combinación de glucosa, benzaldehído y cianuro,. M IC. (Anexo N° 01), el cual es liberado por una enzima, la β-glucosidasa, esta enzima no ha sido. UI. encontrada en tejidos de mamífero, pero la microflora intestinal humana parece poseer. BI. O. Q. enzimas similares capaces de efectuar la liberación de cianuro contenido en la amigdalina,. Y. causando intoxicación, tras el consumo por los animales incluidos los humanos, se puede. AC I. A. generar cianuro de hidrógeno por la acción de las enzimas de la microflora intestinal sobre. RM. los glucósidos cianogénicos consumidos intactos, la ingestión vía oral es cuarenta veces más. FA. tóxica que la vía intravenosa, y la toxicidad aguda del cianuro en humanos puede ocurrir a. TE CA. DE. dosis entre 0.5 - 3.5 mg/Kg de peso corporal (5)(6).. BI BL IO. Las semillas de la especie Rosaceae contiene cantidades relativamente altas (Rango de 0.1 a 17.5 mg/g) de amigdalina en comparación a las semillas de las especies no Rosaceae (Rango de 0.01 a 0.2 mg/g). Otros estudios reportan que los granos de almendras amargas contienen concentraciones significativas de amigdalina que oscila entre 33006.60 – 53998.30 mg/Kg (6)(7). Las almendras amargas contienen altos niveles de amigdalina (3.5%) y el desarrollo de un característico aroma de cianuro con la humedad, se debe tener presente que la región de cultivo tiene un efecto estadísticamente significativo sobre la concentración de amigdalina. 6 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(16) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. en variedades comerciales. La amargura de las almendras se puede determinar por el contenido de la amigdalina, la amigdalina es un diglucósido que se encuentra sólo en los núcleos de almendras, mientras que el monoglucósido (prunasina) se encuentra en raíces, hojas y granos (7). Una característica importante de las plantas cianogénicas es la capacidad de generar cianuro. M IC. A. de hidrógeno tóxico, aunque los glucósidos cianogénicos no son tóxicos cuando están. UI. intactos, se convierten en tóxicos cuando enzimas vegetales (β-glucosidasa y liasas) se ponen. O. Q. en contacto con los glucósidos cianogénicos en las plantas como resultado de daño en los. BI. tejidos después de la contusión o masticar. Resultados de la actividad enzimática es la. A. Y. escisión del resto de carbohidrato del diglucósido cianogénico para producir. FA. RM. hidrógeno (HCN), un aldehído o cetona (6).. AC I. correspondientes cianohidrinas que se descomponen para la liberación de más cianuro de. DE. El proceso de degradación enzimática de la amigdalina se divide en tres pasos: 1° Hidrólisis. TE CA. inicial de la amigdalina en prunasina y glucosa a través de la acción de β-glucosidasa amigdalina hidrolasa, 2° la prunasina se hidroliza posteriormente en mandelonitrilo y glucosa. BI BL IO. por prunasina hidrolasa y finalmente el 3° paso obtención de benzaldehído y cianuro de hidrógeno por Liasa-β-mandelonitrilo (6)(7).. Varios alimentos económicamente importantes son altamente cianogénicos, tales como yuca, habas, almendras, sorgo y lino, el consumo de plantas cianogénicas tales como la raíz de yuca, almendra de albaricoque o granos se ha reportado que causa problemas de salud tanto aguda y subaguda (dependiendo de la dosis), tales como dolor de cabeza, nausea, vómitos,. 7 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(17) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. calambres abdominales, mareos, debilidad, confusión mental, convulsiones, paro cardiaco, coma y en casos extremos la muerte (6). Con el fin de prevenir la toxicidad del cianuro, los procedimientos de procesamiento, tales como pelado, trituración, molienda, rallado, remojo, fermentación y secado se han utilizado durante siglos para reducir la potencial toxicidad antes de su consumo, el objetivo de estos. M IC. A. procedimientos es reducir la toxicidad, ya sea a través de la perdida de glucósidos solubles. O. Q. la pérdida de HCN a la atmosfera antes de su consumo (6).. UI. en agua o la producción máxima de HCN por acción de enzimas vegetales o microbianas y. Y. BI. Desde la década de los 80, la amigdalina se ha definido como un nuevo medicamento contra. AC I. A. el cáncer en el norte de Europa, México y Asia, aunque ha habido controversia sobre los. RM. efectos anticancerígenos de la amigdalina por la toxicidad del cianuro y mecanismos. FA. anticancerígenos poco claros, más investigadores científicos se están interesando en la. DE. amigdalina como un medicamento contra el cáncer y un número creciente de informes que. TE CA. han sido publicados, demuestran los efectos anticancerígenos de la amigdalina; lo cierto es que en el transcurso del tiempo aparecen nuevos informes sobre la capacidad de la amigdalina. BI BL IO. de asesinar selectivamente las células cancerosas en el sitio del tumor sin toxicidad sistémica, que es un problema frecuente cuando se utilizan agentes quimioterápicos (4)(8). Por citar algunos informes científicos se menciona el uso in vitro de la amigdalina como un profármaco en este estudio la amigdalina se activó específicamente en el sitio del tumor, (esto evitaría la toxicidad sistémica asociado a la quimioterapia), con este fin se conjugo la βglucosidasa a un anticuerpo monoclonal asociado a tumor, se comprobó la citotoxicidad posterior a la activación de la amigdalina sobre las células de cáncer de vejiga, se mejoró el efecto citotóxico por 36 veces, y el efecto tóxico fue dosis dependiente; Por otro lado también. 8 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(18) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. existe avances en entender el mecanismo de acción de la amigdalina, conociéndose que la amigdalina inhibe los genes relacionados con el ciclo celular en células de cáncer de colon humano, en un estudio se demuestra que la amigdalina regula hacia una baja expresión, especialmente de los genes pertenecientes a la categoría del ciclo celular, también se puede mencionar un estudio donde la amigdalina induce la apoptosis mediante la regulación de las. A. expresiones de Bax (aumentando su expresión) y Bcl-2 (sufrió una baja en su expresión) y. M IC. aumento de la actividad de la caspasa 3 en células humanas de cáncer de próstata, el mismo. Q. UI. mecanismo fue hallado en otro estudio donde se indujo apoptosis en células de la línea celular. BI. O. de cáncer cervical humano (9)(10)(11)(12).. A. Y. Otras investigaciones incluso han tratado de dar respuesta a informes que desacreditan el uso. AC I. de amigdalina como posible tratamiento en neoplasias, ejemplo de ello se menciona un. RM. estudio donde se indujo la apoptosis por extracto de semillas de durazno en células humanas. FA. de leucemia promielocítica, para ello en su informe menciona que dichos resultados. DE. controvertidos fueron reportados debido a que no fue considerada la conversión de la. TE CA. amigdalina a su isómero neoamigdalina, la cual carece de efecto antineoplásico, para evitar. BI BL IO. esta epimerización, existen estudios, mediante los cuales la mayor parte del extracto es de la forma D-activa, en dichos estudios puede observarse inducción de apoptosis, cambio en la morfología nuclear y la fragmentación del DNA intranucleosomal (13)(14)(15). La apoptosis, o muerte celular programada, es un modo específico de muerte, que se caracteriza por cambios morfológicos tales como condensación de la cromatina, la fragmentación del núcleo, la retracción citoplasmática y la emisión. de “cuerpos. apoptóticos”, manteniendo aparentemente intactos los orgánulos celulares (2).. 9 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(19) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. De hecho, la apoptosis regula un mecanismo de muerte celular que implica la participación activa de la célula afectada en la ejecución de su propio programa de muerte, este mecanismo implicaría la vía extrínseca (señales extracelulares), los cuales actúan sobre un receptor TNF, FasL, activando la Caspasa 8, y esto junto a la vía intrínseca (Factores de crecimiento, estrés oxidativo) inducirían el cambio de Pro-Caspasa 9 a Caspasa 9 y esté a su vez activaría la Pro-. M IC. A. Caspasa 3 a Caspasa 3, que finalmente induciría la apoptosis (2).. UI. En los diversos estudios realizados, las muestras a estudiar contienen no solo amigdalina,. O. Q. sino también emulsina, que es una enzima que hidroliza la amigdalina (esta reacción es en. Y. BI. presencia de agua). Esta reacción de hidrolisis ha sido un problema importante asociado con. AC I. A. la extracción acuosa, se menciona un estudio donde con el fin de evitar estos problemas. RM. técnicos, la emulsina se inactivo por extracción a una temperatura constante de 90 °C, y. FA. además con el fin de suprimir la epimerización (la cual ocurre en agua hirviendo) de Da que. DE. amigdalina a neoamigdalina (L-mandelonitrilo-β-D-gentiobiosido), debido. TE CA. neoamigdalina no tiene actividad antitumoral, en este estudio, se estableció un método para extraer la mayor parte de la amigdalina utilizando solamente agua como agente de extracción,. BI BL IO. sin aditivos tales como el ácido (contrario a las preparaciones tradicionales orientales donde se usa una solución ácida como extrayente, lo cual puede generar problemas asociados a la seguridad, al surgir cambios en los principales componentes generados mediante hidrolisis ácida) además de asegurar las condiciones óptimas para suprimir la epimerización de la Damigdalina. Tales condiciones incluyen la inactivación completa de la emulsina por encima de 90°C, además de suprimir la epimerización al reducir el tiempo de extracción a menos de 8 minutos, en este estudio se informó que la eficacia de la extracción por encima de 90°C era comparable a la eficacia de extracción usando metanol, la cual está libre del efecto de la. 10 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(20) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. emulsina, consideraron de vital importancia el hecho de mezclar el polvo de semillas en el disolvente de extracción después que la temperatura alcanzo los 90°C (8). Queda claro que por vía oral la amigdalina administrada se degrada en prunasina por las enzimas digestivas después de pasar a través de la saliva y las fases gastrointestinales, y la prunasina se degrada en mandelonitrilo por â-glucosidasa, luego es hidroxilado a través de la. M IC. A. pared del intestino delgado produciendo hydroximandelonitrilo, además se debe considerar. UI. el hecho que la hidrolisis de la amigdalina ocurre lentamente en un medio alcalino siendo. O. Q. completa en 10 minutos a 20°C esto explicaría el retraso en la aparición de los síntomas,. BI. intervalo de tiempo necesario para el tránsito desde el estómago hasta el medio alcalino del. A. Y. duodeno; por tanto si se desea continuar en la investigación de esta sustancia la mejor opción. AC I. sería la vía intradérmica, pero como se sabe esta vía exige condiciones especiales a las. RM. sustancias que han de ser administradas, se presenta el primer obstáculo que es el de aislar y. FA. cuantificar la amigdalina, de tal forma que pueda ser administrado por vías parenterales en. TE CA. DE. posteriores estudios que puedan continuar la línea de investigación (16)(17).. BI BL IO. 2.1. JUSTIFICACIÓN. Debido al creciente interés que genera la amigdalina presente en almendras de Prunus Pérsica (durazno), como posible tratamiento antineoplásico, y a la escaza investigación en nuestro medio sobre este tema, motiva la planificación y ejecución del presente proyecto de investigación con el fin que sirva de referente a futuros estudios.. 11 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(21) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.2. PROBLEMA ¿ Cuál es la concentración de amigdalina presente en Almendras de Prunus Pérsica (durazno), Comercializados en el Mercado Mayorista “La Hermelinda”. M IC. A. de la Ciudad de Trujillo, Región La Libertad - Periodo 2016?. UI. 2.3. HIPÓTESIS. BI. O. Q. Implícita. A. Y. 2.4. OBJETIVOS. AC I. Objetivos generales. RM.  Determinar la concentración de amigdalina presente en Almendras de Prunus. DE. FA. Pérsica (durazno), Comercializados en el Mercado Mayorista “La. TE CA. Hermelinda” de la Ciudad de Trujillo, Región La Libertad - Periodo 2016 Objetivos específicos. BI BL IO.  Realizar la extracción de amigdalina de almendras de Prunus Pérsica (durazno) mediante un método de bajo costo y que asegura la integridad de dicha sustancia.. 12 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(22) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. III.. MATERIAL Y MÉTODO. 3.1. MATERIAL MATERIAL BOTÁNICO.  50 g de Almendras de Prunus Pérsica(durazno). A. MATERIAL DE LABORATORIO. M IC. Material de Vidrio. UI.  01 Balón de fondo redondo (300 mL). AC I RM.  1 Bureta. A.  01 Matraz Erlenmeyer (250 ml ). Y.  03Fiolascon tapa (10 ml)  03 Pipetas (1,5, 10 ml ). O. BI.  02 Vasos de precipitación (200, 1000 ml ). Q.  03 Balones Kjeldahl. FA. Equipos. DE.  Equipo destilador de Kjeldahl. TE CA.  Equipo de baño maria  Balanza analítica. BI BL IO. Reactivos y Solventes  100 mL Ácido sulfúrico (H2SO4: δ: 1.89g/mL; %: 98%p/p)  Mezcla catalizadora  Hidróxido de Sodio 40%  Ácido Clorhídrico: (0.095 N)  Ácido Bórico 4%  2 L Agua bidestilada. 13 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(23) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación.  Rojo de metilo (0.1%)  Fenolftaleína (1 %) Otros  01 Pliegue de Papel filtro Wattman # 1  01 mortero de pilón.. BI BL IO. TE CA. DE. FA. RM. AC I. A. Y. BI. O. Q. UI. M IC. A.  02 cocinas eléctricas. 14 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(24) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 3.2. MÉTODO Recolección Las muestras de granos crudos de almendras de Prunus Pérsica (durazno) variedades comerciales, se obtendrán de los campos de cultivo del distrito de Usquil, Provincia de Otuzco en el departamento de La Libertad en el otoño del. M IC. A. 2016, y serán adquiridas en el Mercado de Abastos Mayorista “La Hermelinda”,. UI. (10 Kg) se recogerán en bolsas de tela y se enviaran directamente al laboratorio. O. Q. (7).. Y. BI. Selección de Pelado de Almendras. AC I. A. Se procederá a la selección de la materia vegetal con el objetivo de realizar una. RM. separación de las muestras deterioradas y se seleccionaran aquellas que. FA. muestren un estado de conservación homogéneo.. DE. Inmediatamente del proceso de selección se utilizarán los núcleos de almendra. TE CA. (aproximadamente 150 g) para hacer una muestra compuesta, la cual se pondrá. BI BL IO. a secar a temperatura ambiente por un espacio de 2 días (7). Molienda y Tamización La muestra será aplastada con un mortero de madera, y se pesara 50 gramos de dicha muestra. Extracción de la Amigdalina En un baño de agua; se añadirá 250 ml de agua bidestilada a un matraz de fondo redondo y se estabilizara la temperatura a un valor constante de 90°C, cuando. 15 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(25) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. se estabilice la temperatura, se añadirá 50 g del polvo al matraz de fondo redondo, de donde se extraen 3 muestras de 10 ml, a intervalos de tiempo de 5 min, hasta completar los 15 minutos. Repetir todo el procedimiento anterior dos veces más, de tal forma que por cada intervalo de tiempo de 5 minutos se tengan 3 extracciones (8).. M IC. A. Determinación Cuantitativa de Amigdalina por el Método: KJELDAHL. Q. UI. FUNDAMENTO DEL MÉTODO. BI. O. Se basa en la transformación del nitrógeno orgánico en nitrógeno amoniacal,. A. su posterior. destilación previa dilución y. AC I. sustancias catalizadoras,. Y. por acción de ácido sulfúrico en caliente y ayudado por la presencia de. RM. alcalinización mediante un exceso de Hidróxido de sodio, recibiendo el. FA. amoniaco liberado y destilado en una cantidad exactamente medida y en exceso. DE. de un ácido valorado (Ácido Bórico), y determinando la cantidad de sales de. TE CA. amonio formadas mediante esta reacción, mediante la titulación con una. BI BL IO. solución valorada de HCL. PROCEDIMIENTO. PRIMERA PARTE: Disgregación de la Materia Orgánica. 1. En tres balones Kjeldahl colocamos respectivamente los 10 mL de los 3 extractos examen del paso anterior, 10 g de mezcla catalizadora y 30 mL de ácido sulfúrico concentrado.. 16 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(26) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2. El balón con su contenido se coloca en forma inclinada y en seguida calentar sobre rejilla hasta que la sustancia se haya carbonizado por completo. 3. logrado esto quitar la rejilla y calentar a fuego directo teniendo. A. cuidado en primer lugar que la llama no sea tan fuerte y en. M IC. segundo lugar agitar de vez en cuando.. Q. UI. 4. El final es hasta obtener un líquido incoloro o ligeramente verde. BI. O. esmeralda.. AC I. A. Y. SEGUNDA PARTE: Destilación del Amoniaco. RM. 1. Terminada la primera parte, dejar enfriar y el contenido del balón Kjeldahl. FA. pasarlo a un balón de fondo redondo de 500 mL.. DE. 2. Diluir con 100 mL de agua destilada y colocaren el equipo 20 mL de NaOH. TE CA. solución al 50% hasta reacción ligeramente alcalina, utilizando fenolftaleina como indicador.. BI BL IO. 3. Para realizar la destilación debemos tener el equipo listo. Por separado en un matraz erlenmeyer colocar el ácido Bórico al 4% valorado en exceso (30 mL).. 4. Agregar III gotas de rojo de metilo al matraz mencionado anteriormente, sumergir en el matraz el extremo del refrigerante procurando que esté sumergido en el ácido. 5. Agregar al balón (gota a gota), el exceso de NaOH al 50 % (20 mL). Adaptarlo enseguida al dispositivo destilatorio y proceder luego a la destilación, son suficientes que se destilen 150 mL, aunque sea preferible comprobar el final. 17 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(27) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. de esta parte colocando en el extremo del refrigerante un papel rojo tornasol, el cual no debe virar al azul, lo que nos indica la no destilación de amoniaco.. TERCERA PARTE: Titulación 1. El destilado obtenido se titula valorándolo con solución de HCL 0.095 N,. A. dejando caer gota a gota la solución titulante, hasta viraje del indicador del. M IC. amarillo al rojo.. Q. UI. 2. Los mililitros de HCL, serán proporcionales a las sales de amonio formadas. BI. O. en el paso anterior, y este a su vez proporcional a la amigdalina de la cual fue. BI BL IO. TE CA. DE. FA. RM. AC I. A. Y. desprendido el átomo de nitrógeno en forma de cianuro.. 18 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(28) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. IV.. RESULTADOS. Amigdalina (mg/g). UI. Gasto HCL (ml). Promedio (mg/g). 0.3. 0.4. 0.3. 10. 0.3. 0.5. 0.6. 15. 0.6. 0.8. 6.52. 8.69. 6.52. 7.24. 6.52. 10.86. 13.04. 10.14. 13.04. 17.38. 21.73. 17.38. FA. RM. AC I. A. Y. 5. BI. O. Q. Tiempo (min). M IC. A. Tabla 1. Miligramos de amigdalina extraída por gramo de muestra en función del tiempo de extracción y a temperatura constante de 90°C.. TE CA. DE. 1. BI BL IO. Promedio de Amigdalina = 11.58 mg/g. 19 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(29) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 20. A. 18. M IC. y = 1.014x + 1.4467 R² = 0.9425. UI. 14. Q. 12. O. 10. BI. 8 6. Y. Amigdalina (mg/g). 16. 2 0 2. 4. 6. RM. 0. AC I. A. 4. 8. 10. 12. 14. 16. FA. Tiempo de extracción (min) Lineal (Promedio (mg/g)). TE CA. DE. Promedio (mg/g). BI BL IO. Gráfico 1. Evolución del proceso de extracción a temperatura constante de 90°C, en función del tiempo.. 20 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(30) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. V.. DISCUSIÓN. De los resultados obtenidos, se puede observar en la Tabla N° 01 que al determinar la concentración de amigdalina presente en Almendras de Prunus Pérsica (durazno), Comercializados en el Mercado Mayorista “La Hermelinda” de la Ciudad de Trujillo, Región La Libertad - Periodo 2016, la concentración promedio de amigdalina contenida en muestra de. M IC. A. almendra es de 11.58 mg/g, esto se encuentra dentro del rango que ofrece un estudio realizado en. UI. Reino Unido, donde este rango se encontraba entre 0.1 a 17.5mg/g, aunque es inferior a otros. O. Q. estudios cuya metodología fue similar a la aquí empleada, y que arrojaron concentraciones con. BI. rangos entre 24.80 - 50.65 mg/g y 33 - 53mg/g, respectivamente, esto puede deberse a la variedad. A. Y. de durazno usado durante el estudio, a la estación a la cual fue recogida la muestra y al campo de. AC I. cultivo, debido a que la gran variedad en riqueza de suelos, esto influye directamente en el. FA. RM. contenido de nitrógeno por tanto concentración de amigdalina (6)(7)(8).. DE. El método usado en el presente trabajo es un método modificado y adaptado de otros estudios. TE CA. realizados en países de Europa, debido a la escasa metodología hallada en nuestro medio, el método consistió en 3 etapas importantes: recolección y selección de la muestra, extracción. BI BL IO. de amigdalina de la muestra y cuantificación de amigdalina, la etapa de extracción basa su metodología en un trabajo en el. cual se consideraban condiciones especiales como. temperatura constante de 90 °C y por un tiempo no mayor de 10 minutos, y como solvente agua, difiriendo de otras metodologías donde se usaban alcohol o mezclas hidro alcohólicas, ya que con estas condiciones se evita la epimerización de la D-amigdalina en neoamigdalina, y también se evitaría la hidrolisis de la amigdalina, por tanto este método se considera el de mayor rendimiento y el más efectivo para extraer la amigdalina en su forma intacta, las muestras de amigdalina contienen emulsina que es una enzima que hidroliza la amigdalina,. 21 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(31) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. pero al hacer la extracción en agua hirviendo está enzima no tiene influencia sobre la amigdalina, aunque a altas temperaturas existe el problema de la epimerización de amigdalina a neoamigdalina, por ello la temperatura ideal a la cual se demostró el mayor rendimiento es a 90°C (18). Para realizar la cuantificación de la amigdalina en el extracto se utilizó en método Kjeldahl,. M IC. A. esto fue posible gracias a la molécula de cianuro presente en la estructura de la amigdalina. UI. en proporción de 1:1, al liberarse esta molécula se forman sales de amonio, gracias al proceso. O. Q. de digestión del método Kjeldahl, luego este extracto se hace reaccionar con NaOH, y debido. BI. a la acción de los álcalis cáusticos de NaOH sobre las soluciones de sales de amonio hace. A. Y. que, con el calentamiento, se desprenda el amoniaco gaseoso (Anexo N° 2), en este instante. AC I. la fenolftaleína torna color rojo, debido a que el amoniaco desprendido al disolverse en agua. DE. FA. levemente la mezcla de reacción (19).. RM. forma un álcali NH4OH y para acelerar el desprendimiento del amoniaco, se puede calentar. TE CA. Mientras tanto en el otro extremo del equipo de destilación, se adapta la solución de ácido bórico, el cual es un ácido monobásico muy débil en disolución, esto lo convertiría en una. BI BL IO. base fuerte, su ionización en disolución regularmente diluida libera un H + y el ion H4BO4-, el cual es tetraédrico (Anexo N°2), en esta solución quedara atrapado el amoniaco liberado de la reacción entre el NH4+ y el NaOH, formando sales de borato, se necesitan pocas de estas moléculas de sales de borato, para hacer virar el indicador rojo de metilo del rojo al amarillo, una solución 0.1N de H3BO3 tiene un grado de disociación bajo de 0.01 % similar al del ácido cianihídrico (0.007%), pero diferente al del HCL, el cual es del 91%, (20)(21). Al acidificar la solución acuosa, donde se encuentran las sales de borato, mediante el HCL 0.095 N, se precipita el ácido ortobórico (H3BO3), también llamado ácido bórico en forma. 22 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(32) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. de cristales blancos y blandos, esto libera el amonio formando cloruro de amonio y virando el indicador de amarillo a rojo, indicando el final de la reacción (Anexo N° 2) (20). Del gráfico N° 01, se observa que el proceso de extracción es de tendencia lineal directa, porqué el grado de extracción está en función del tiempo, aunque en trabajos precedentes se pudo observar que el tiempo máximo de extracción debe ser máximo de 10 minutos, ya que. M IC. A. en ese instante se alcanza el pico máximo de extracción y a partir de ahí el pico cae,. UI. generando problemas de epimerización, otro factor de importancia es mantener la. BI BL IO. TE CA. DE. FA. RM. AC I. A. Y. BI. O. Q. temperatura constante a 90°C, para evitar la hidrolisis.. 23 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(33) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. VI.. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES. 6.1. CONCLUSIONES 1. La concentración de amigdalina en muestra de almendra de Prunus Pérsica (durazno), es de 11.58 mg/g, para muestras obtenidas en el distrito de Usquil,. M IC. A. Provincia de Otuzco en el departamento de La Libertad en el otoño del 2016.. UI. 2. Las condiciones óptimas para realizar un extracto acuoso, de máxima eficacia es a. O. Q. temperatura constante de 90 °C y menos de 15 minutos.. Y. BI. 6.2. RECOMENDACIONES. AC I. A. 1. Con el fin de mejorar el proceso de extracción se recomienda reducir el tamaño de. RM. partícula, rayando las almendras en lugar de machacar con el mortero, debido a la. FA. consistencia oleosa de las almendras estos formaran grumos y tenderán a aglutinarse.. DE. 2. Al momento de pipetear para obtener los extractos, utilizar pipetas de grueso calibre. TE CA. ya que los grumos formados obstruyen las pipetas generando pérdida de tiempo al. BI BL IO. obtener los extractos.. 24 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(34) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS. 1. Organización Mundial de la Salud (OMS). Organización Mundial de la Salud. [Online].; 2014 [cited 2016 Febrero 17]. Available from: http://www.who.int/mediacentre/factsheets/fs297/es/ 2. Martín C, Torres A. Nuevas estrategias en terapia antitumoral basadas en la inducción de apoptosis.. Real Acad. Farm. 2013 Abril; 79(2): p. 213-228.. M IC. A. 3. Ministerio de Salud - Perú. dge.gob.pe/Boletines. [Online].; 2012 [cited 2016 Enero 06]; 21 (52) 880-882. Available from: http://www.dge.gob.pe/boletines/2012/52.pdf. BI. O. Q. UI. 4. Li Xb, Liu CH, Zhang R, Huang Xt, Li Yy, Han L, et al. Determination and Pharmacokinetics of Amygdalin in Rats by LC–MS-MS. Journal of Chromatographic Science. [Online].; 2013 June [cited 2015 December 24]; 52 (6): 476-481. Available from: http://chromsci.oxfordjournals.org/content/52/6/476.full. A. Y. 5. Ramos J. Cianuro. In Toxicologia. 4th ed. Bogota: Manual Moderno; 2000. p. 308.. FA. RM. AC I. 6. Bolarinwa I, Orfila C, Morgan M. Amygdalin content of seeds, kernels and food products commercially-available in the UK. Food Chemistry. [Online].; 2014 June [cited 2015 December 27]; 152. 133-139. Available from: http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0308814613016245. TE CA. DE. 7. Lee J, Zhang G, Wood E, Castillo C, Mitchell A. Quantification of Amygdalin in Nonbitter, Semibitter, and Bitter Almonds (Prunus dulcis) by UHPLC-(ESI)QqQ MS/MS. Journal of Agricultural and Food Chemistry. [Online].; 2013 July [cited 2015 December 26]; 61 (32) 7754−7759. Available from: http://pubs.acs.org/doi/abs/10.1021/jf402295u. BI BL IO. 8. Kwon HJ, Lee JH, Hong SP. Improvement of the Extraction Efficiency of D-Amygdalin from Armeniacae Semen Powder through Inactivating Emulsin and Suppressing the Epimerization of D-Amygdalin. Archives of Pharmacal Research. [Online].; 2010 February [cited 2015 December 25]; 33 (1): 8-86. Available from: http://link.springer.com/article/10.1007%2Fs12272-010-2229-3 9. Syrigos K, Rowlinson-Busza G, Epenetos A. In Vitro Cytotoxicity Following Specific Activation of Amygdalin by B-Glucosidase Conjugated to a Bladder Cancer-Associated Monoclonal Antibody. Int. J. Cancer. [Online].; 1998 December [cited 2015 December 29]; 78 (6) 712-719. Available from: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/9833764 10. Park HJ, Yoon SH, Han LS, Zheng LT, Jung KH, Uhm YK, et al. Amygdalin inhibits genes related to cell cycle in SNU-C4 human colon cancer cells. World Journal of. 25 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(35) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Gastroenterology. [Online].; 2005 September [cited 2015 December 30]; 11 (33) 51565161. Available from: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/16127745 11. Chang H, Shin M, Yang H, Lee J, Kim Y, Lee M, et al. Amygdalin Induces Apoptosis through Regulation of Bax and Bcl-2 Expressions in Human DU145 and LNCaP Prostate Cancer Cells. Biological and Pharmaceutical Bulletin. [Online].; 2006 August [cited 2015 December 30]; 29 (8) 1597-1602. Available from: https://www.jstage.jst.go.jp/article/bpb/29/8/29_8_1597/_article. M IC. A. 12. Yu C, Jinshu M, Fang W, Jie H, Ai C, Chengguo W, et al. Amygdalin induces apoptosis in human cervical cancer cell line HeLa cells. Immunopharmacology and Immunotoxicology. [Online].; 2013 February [cited 2015 December 30]; 35 (1) 43-51. Available from: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/23137229. Y. BI. O. Q. UI. 13. Hee-Young K, Seon-Pyo H, Dong-Hoon H, Hee KJ. Apoptosis induction of persicae semen extract in human promyelocytic leukemia (hl-60) cells. Archives of Pharmacal Research. [Online].; 2003 February [cited 2016 February 03]; 26 (2) 157-161. Available from: http://link.springer.com/article/10.1007%2FBF02976663. RM. AC I. A. 14. Moertel C, Fleming T, Rubin J, Kvols LK, Sarna G, Koch R. A Clinical Trial of Amygdalin (Laetrile) in the Treatment of Human Cancer. The New England Journal of Medicine. [Online].; January 1982 [cited 2016 February 03]; 306 (4) 201-206. Available from: http://www.nejm.org/doi/pdf/10.1056/NEJM198201283060403. TE CA. DE. FA. 15. Milazzo S, Lejeune S, Ernst E. Laetrile for cancer: a systematic review of the clinical evidence. Supportive Care in Cancer. [Online].; 2007 June [cited 2015 January 07]; 15 (6) 583-595. Available from: http://link.springer.com/article/10.1007%2Fs00520-006-01689. BI BL IO. 16. Sayre JW, Kaymakcalan S. Cyanide Poisoning from Apricot Seeds among Children in Central Turkey. The New England Journal of Medicine.. [Online].; 1964 May [cited 2016 February 03]; 270 (21) 1113-1115. Available from: http://www.nejm.org/doi/pdf/10.1056/NEJM196405212702109 17. Shim S, Kwon H. Metabolites of amygdalin under simulated human digestive fluids. International Journal of Food Sciences and Nutrition. [Online].; 2010 June [cited 2016 January 06]; 61 (8) 770-779. Available from: http://www.tandfonline.com/doi/abs/10.3109/09637481003796314?journalCode=iijf20 18. Koo JY, Hwang EY, Sonhae C, Lee JH, Lee YM, Hong SP. Quantitative determination of amygdalin epimers from armeniacae semen by liquid chromatography. Journal of Chromatography. 2004 October; 814: pp. 69-73. 19. Alexéiev V. Semimicroanálisis Químico Cualitativo. Moscú: Editorial MIR; 1975. pp: 144. 26 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(36) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 20. Mortimer. Química. México: Grupo Editorial Iberoamericana; 1983. pp: 588. BI BL IO. TE CA. DE. FA. RM. AC I. A. Y. BI. O. Q. UI. M IC. A. 21. Yaroslávtsev A. Colección de Problemas y Ejercicios de Química Analítica. Moscú.: Editorial MIR.; 1981. pp: 238.. 27 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(37) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ANEXOS. FA. RM. AC I. A. Y. BI. O. Q. UI. M IC. A. Anexo 1. Estructura molecular de la amigdalina (8). DE. Anexo 2. Reacciones Químicas (19)(20)(21). NH+4 + OH-. NH3. + H2O. TE CA. H+(ac) + H4BO4-(ac). H3BO3 (ac) + H2O. NH4 H2BO3 + H3BO3 + NH3. BI BL IO. NH3 + HBO3 HCL + NH4H2BO3. CLNH4 + H3BO4. (BASE: AMARILLO). (ÁCIDO: ROJO). 28 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(38) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Anexo 3. Cálculos Estequiométricos Concentración de amigdalina según mililitros de HCL 0.095 N gastados en la titulación. 1) Con un gasto de 0.3 mL. # Eq  g Amigdalina  # Eq  g HCL WAmigdalina  N HCL xVHCL xP.E Amigdalina g 3 WAmigdalina  0.095 mol L x 0.3 x10 Lx 457.43 mol. BI. O. Q. UI. M IC. A.  13.04mg............10mL  x.......................250mL  326mg..........50 g  y........................1g  y  6.52mg Amigdalina / g muestra. AC I. WAmigdalina  N HCL xVHCL xP.E Amigdalina. A. Y. 2) Con un gasto de 0.4 mL # Eq  g Amigdalina  # Eq  g HCL. TE CA. DE. FA.  17.38mg............10mL  x.......................250mL  434.56mg..........50 g  y........................1g  y  8.69mg Amigdalina / g muestra. RM. g 3 WAmigdalina  0.095 mol L x 0.4 x10 Lx 457.43 mol. BI BL IO. 3) Con un gasto de 0.5 mL. # Eq  g Amigdalina  # Eq  g HCL WAmigdalina  N HCL xVHCL xP.E Amigdalina g 3 WAmigdalina  0.095 mol L x 0.5 x10 Lx 457.43 mol.  21.7mg............10mL  x.......................250mL  543.19mg..........50 g  y........................1g  y  10.86mg Amigdalina / g muestra. 29 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(39) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 4) Con un gasto de 0.6 mL. # Eq  g Amigdalina  # Eq  g HCL WAmigdalina  N HCL xVHCL xP.E Amigdalina g 3 WAmigdalina  0.095 mol L x 0.6 x10 Lx 457.43 mol. UI. M IC. A.  26.07mg............10mL  x.......................250mL  651.84mg..........50 g  y........................1g  y  13.04mg Amigdalina / g muestra. Q. 5) Con un gasto de 0.8 mL. WAmigdalina  N HCL xVHCL xP.E Amigdalina. AC I RM. TE CA. DE. FA.  34.7mg............10mL  x.......................250mL  869.1mg..........50 g  y........................1g  y  17.38mg Amigdalina / g muestra. A. g 3 WAmigdalina  0.095 mol L x 0.8 x10 Lx 457.43 mol. Y. BI. O. # Eq  g Amigdalina  # Eq  g HCL. 6) Con un gasto de 1 mL. BI BL IO. # Eq  g Amigdalina  # Eq  g HCL WAmigdalina  N HCL xVHCL xP.E Amigdalina g 3 WAmigdalina  0.095 mol L x1x10 Lx 457.43 mol.  43.46mg............10mL  x.......................250mL  1086.40mg..........50 g  y........................1g  y  21.73mg Amigdalina / g muestra. 30 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

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