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Efecto del sulfato de cobre pentahidratado y el fosfito de cobre sobre la germinación, crecimiento, esporulación y viabilidad de Colletotrichum gloeosporioides en condiciones de laboratorio

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Academic year: 2020

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(1)Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE. CI. AS. BI. O. LO. G. IC. AS. MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA. CA. DE. CI EN. Efecto del sulfato de cobre pentahidratado y el fosfito de cobre sobre la germinación, crecimiento, esporulación y viabilidad de Colletotrichum gloeosporioides en condiciones de laboratorio.. BI. BL. IO. TE. TESIS PARA OPTAR EL TÍTULO PROFESIONAL DE BIÓLOGO-MICROBIÓLOGO AUTOR: Br. NORMA CORDOVA GONZALEZ ASESOR: MBLGO. Ms.C. JUAN HECTOR WILSON KRUGG. TRUJILLO-PERÚ 2018. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(2) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AS. AUTORIDADES DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO. IC. Dr. Orlando Gonzáles Nieves.. BI. O. LO. G. RECTOR DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO. AS. Dr. Rubén Vera Véliz.. CI EN. CI. VICERRECTOR ACADÉMICO DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO. DE. Dr. Weyder Portocarrero Cárdenas.. BI. BL. IO. TE. CA. VICERRECTOR DE INVESTIGACIÓN DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO. Dr. Esteban Ilich Zerpa.. SECRETARIO GENERAL DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(3) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Dr. Freddy Rogger Mejía Coico.. AS. BI. O. LO. G. DECANO DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS. IC. AS. AUTORIDADES DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS. CI. Dr. William Zelada Estraver.. TE. CA. DE. CI EN. SECRETARIO DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS. Dra. Bertha Soriano Bernilla. BI. BL. IO. DIRECTORA DE LA ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(4) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DEL ASESOR El que suscribe, Ms.C. Juan Héctor Wilson Krugg, asesor de la tesis titulada:. AS. “Efecto del sulfato de cobre pentahidratado y el fosfito de cobre sobre la. IC. germinación, crecimiento, esporulación y viabilidad de Colletotrichum. LO. G. gloeosporioides en condiciones de laboratorio.”. O. CERTIFICA:. BI. Que la investigación ha sido ejecutada de acuerdo al reglamento. AS. establecido por la Facultad de Ciencias Biológicas de la Universidad Nacional de Trujillo, estando en conformidad con su correspondiente proyecto, y que el. CI. informe ha sido redactado acogiendo las observaciones y sugerencias. CI EN. alcanzadas.. Por tanto, autorizo al Bachiller NORMA CORDOVA GONZALEZ, continuar. CA. DE. con los procedimientos según sus fines.. BI. BL. IO. TE. Trujillo, Agosto 2018.. _____________________________ Ms.C. Juan Héctor Wilson Krugg ASESOR. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(5) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. PRESENTACIÓN SEÑORES MIEMBROS DEL JURADO: En cumplimiento con las disposiciones establecidas en el Reglamento de Grados. AS. y Títulos de la Universidad Nacional de Trujillo, pongo a vuestra consideración y. IC. elevado criterio la presente Tesis titulada: “Efecto del sulfato de cobre. pentahidratado y el fosfito de cobre sobre la germinación, crecimiento,. G. esporulación y viabilidad de Colletotrichum gloeosporioides en condiciones de. LO. laboratorio.” con el objetivo de obtener el Título Profesional de Biólogo-. Trujillo, Agosto 2018.. BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI EN. CI. AS. BI. O. Microbiólogo.. _____________________________ Br. Norma Córdova González. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(6) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. IC. AS. MIEMBROS DEL JURADO. ____________________________. LO. G. Dra. Manuela Luján Velásquez.. AS. BI. O. Presidente. CI. ____________________________. CI EN. Ms.C. Juan Wilson Krugg.. ____________________________ Dr. Eduardo Muñoz Ganoza. Vocal. BI. BL. IO. TE. CA. DE. Secretario. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(7) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. APROBACIÓN. Los profesores que suscriben, miembros del Jurado Examinador, declaran. AS. que el presente Informe de Tesis ha cumplido con los requisitos formales y. O. LO. G. IC. fundamentales, siendo APROBADO por UNANIMIDAD.. BI. ____________________________. AS. Dra. Manuela Luján Velásquez.. CI EN. CI. Presidente. DE. ____________________________. Secretario. BI. BL. IO. TE. CA. Ms.C. Juan Wilson Krugg.. ____________________________ Dr. Eduardo Muñoz Ganoza. Vocal. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(8) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AS. DEDICATORIA. G. incondicional en mi desarrollo profesional y aventuras. IC. Para Carlos, Liliana, Alexandra y Bryan por su apoyo. BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI EN. CI. AS. BI. O. LO. científicas.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(9) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AGRADECIMIENTOS. A mi asesor y gran amigo el Ms.C. Juan Wilson Krugg, profesor del. AS. Departamento de Microbiología y Parasitología de la Facultad de Ciencias. IC. Biológicas de la Universidad Nacional de Trujillo, porque con paciencia ha. sabido orientarme en esta investigación y otros proyectos, preparándome. BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI EN. CI. AS. BI. O. LO. G. para asumir desafíos futuros.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(10) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. RESUMEN Se evaluó el efecto de las concentraciones de 257, 494 y 741ppm de sulfato de cobre pentahidratado y de 572, 858 y 1430ppm de fosfito de cobre sobre la. AS. germinación, crecimiento, esporulación y viabilidad de Colletotrichum gloeosporioides. La germinación se evaluó enfrentando 2mL de cada. IC. concentración de químicos con 2 mL de una suspensión de 105 esporas/mL. de. G. C. gloeosporioides, incubándose a 25°C por 24 horas; realizándose la lectura en. LO. cámara de Neubauer. Para evaluar el efecto sobre el crecimiento se empleó la. O. técnica del medio envenenado para cada concentración, la lectura se hizo. BI. midiendo el radio de crecimiento micelial. Para evaluar la esporulación se colocó 1cm2 de la colonia obtenida en medio envenenado en 9 mL de tween 80 al 0.1%,. AS. realizándose el recuento de esporas en la cámara de Neubauer. La viabilidad se. CI. evaluó colocando 1 cm2 de la colonia obtenida en el medio envenenado en un tubo conteniendo 9 mL de tween80 al 0.1% realizándose el mismo. CI EN. procedimiento que para germinación. El menor número de esporas germinadas se encontró en la concentración de 741ppm de sulfato de cobre pentahidratado y 1430ppm de fosfito de cobre con 812,500 y 562,500 esporas respectivamente,. DE. mientras que la menor esporulación se presentó en la concentración de 0ppm de sulfato de cobre pentahidratado y fosfito de cobre con 2,625, 500 esporas y. CA. 3,250, 500 esporas respectivamente; además se obtuvo que la menor viabilidad. TE. se presentó en la concentración de 741ppm de sulfato de cobre pentahidratado y 1430ppm de fosfito de cobre con 29.52% y 25.00% esporas viables. Se concluye. IO. que el sulfato de cobre pentahidratado en concentraciones en el rango de 257 a. BL. 741ppm, disminuye la germinación y la viabilidad de esporas, pero no inhibe significativamente el crecimiento radial de C. gloeosporioides; mientras que el. BI. fosfito de cobre en el rango de 572 a 1430ppm disminuye la germinación, esporulación y viabilidad de esporas no obstante estimula el crecimiento radial no existiendo diferencia significativa entre ellas.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(11) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. CONTENIDO AUTORIDADES DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO .................................................... i AUTORIDADES DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS ...................................................... ii DEL ASESOR ................................................................................................................................ iii. AS. PRESENTACIÓN ...........................................................................................................................iv. IC. MIEMBROS DEL JURADO ............................................................................................................ v APROBACIÓN ..............................................................................................................................vi. G. DEDICATORIA ............................................................................................................................ vii. LO. AGRADECIMIENTOS ................................................................................................................. viii. O. RESUMEN ................................................................................................................................... ix. BI. INTRODUCCIÓN .......................................................................................................................... 1 MATERIAL Y MÉTODO ................................................................................................................ 6. AS. 1. MATERIAL: ............................................................................................................................. .6 2. MÉTODO: .................................................................................................................................6. CI. 2.1. Recolección de muestras vegetales, aislamiento e identificación de Colletotrichum. CI EN. gloeosporioides…………………………………………………………………………..................................... 6 2.2. Obtención del cultivo monospórico ....................................................................................7 2.3. Evaluación del efecto fungicida del sulfato de cobre pentahidratado y el fosfito de cobre sobre la germinación de Colletotrichum gloeosporioides .........................................7. DE. 2.4. Evaluación del efecto fungicida del sulfato de cobre y el fosfito de cobre sobre el crecimiento lineal de Colletotrichum gloeosporioides........................................................ 9. CA. 2.5. Evaluación del efecto fungicida del sulfato de cobre y el fosfito de cobre sobre la esporulación de Colletotrichum gloeosporioides................................................................10. TE. 2.6. Evaluación del efecto fungicida del sulfato de cobre y el fosfito de cobre sobre la. IO. viabilidad de Colletotrichum gloeosporioides.....................................................................10 2.7. Análisis de resultados…...................................................................................................... 11. BL. RESULTADOS ............................................................................................................................. 12. BI. DISCUSIÓN ................................................................................................................................ 24. CONCLUSIONES ......................................................................................................................... 32 REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS .................................................................................................33 ANEXOS ..................................................................................................................................... 38. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(12) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. INTRODUCCIÓN La antracnosis es una enfermedad que se caracteriza por la aparición de lesiones limitadas necróticas, a menudo hundidas en hojas, tallos, flores y frutos. Es especialmente. por. especies. del. género. Colletotrichum1,. AS. causada por hongos como Diplocarpon, Sphaceloma, Gnomonia pero reportado. IC. recientemente como el décimo grupo más importante de hongos fitopatógenos. G. en el mundo2. Este género incluye varias especies de gran importancia, causantes. LO. de enfermedades en una amplia variedad de plantas, siendo los árboles frutales. O. los mayormente afectados, tanto en cultivos de alto valor como palto, mango,. BI. cítricos y fresa, como en cultivos básicos como el banano3-6.. AS. Como patógenos de plantas, las especies de Colletotrichum se describen. CI. principalmente como causantes de antracnosis, aunque también ocasionan otras enfermedades como podredumbre roja de la caña de azúcar, enfermedad de la. CI EN. baya de café, pudrición de la corona de fresa y plátano y mancha marrón de frijol chino. Asimismo, Colletotrichum en su estado perfecto puede causar epidemias graves de enfermedades en el campo, como la enfermedad de la mancha de la. DE. hoja de Glomerella en la manzana (Malus domestica) y la enfermedad de la baya. CA. de café en el café Arábica (Coffea arabica )3. Colletotrichum gloeosporioides es un hongo fitopatógeno cosmopolita, no. TE. habitante del suelo y necrótrofo. Morfológicamente está conformado por hifas. IO. septadas y de paredes lisas, de donde nacen conidióforos simples, los cuales. BL. sostienen conidias elípticas solas o en par de 25 por 4-6 μm de diámetro. Tanto. las esporas como las hifas son hialinas, por lo que presenta un aspecto. BI. algodonoso color blanco sobre medios de cultivo, formando masas conidiales color naranja y acervulos sumergidos o semisumergidos color negros en su etapa adulta7.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(13) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Su distribución es principalmente tropical y subtropical, aunque hay algunas especies que afectan los cultivos de clima templado; sin embargo, la antracnosis aparece dondequiera que se cultiven sus hospedantes, aunque es más grave en áreas con climas que varían de cálidos a frescos y húmedos. El hongo inverna en. AS. forma de micelio o esporas en tallos, hojas, semillas y frutos enfermos de las plantas. Los conidios germinan solo en presencia de agua formando apresorios. IC. en la superficie de la planta, los cuales mediante la producción de enzimas logran. G. penetrar el tejido vegetal sano. Luego el micelio crece intracelularmente,. LO. entrando en una fase biotrófica con tejidos infectados que permanecen asintomáticos externamente y que pueden ser cortos. Posteriormente entra en. O. una fase necrotrófica que da como resultado una muerte significativa de las. BI. células vegetales y la aparición de lesiones patógenas. Finalmente, el micelio. AS. produce acérvulos por debajo de la cutícula de la planta, la cual al romperse libera los conidios que pueden ser transportados por gotas de lluvia, viento o. CI EN. CI. insectos para una vez más iniciar infecciones 1,6,9,10.. Las infecciones son producidas generalmente en el campo debido a un mal control fitosanitario o el uso de semillas enfermas que al ser sembradas mueren. DE. antes de que emerjan de la superficie del suelo pues el hongo puede destruir a uno o ambos cotiledones. En caso de que la planta logre emerger, las esporas se. CA. diseminan y el micelio se desarrolla hacia el tallo de la plántula. Ya en el tallo, el. TE. hongo produce manchas pequeñas, superficiales y café rojizas que más tarde se extienden, alargan y finalmente hunden en el tallo. Cuando hay suficiente. IO. humedad, las lesiones son tan abundantes que pueden cubrir y debilitar al tallo. BL. hasta un punto en el que ya le es imposible sostener la copa de la planta. El hongo ataca también los pecíolos y las nervaduras del envés de las hojas, en las que. BI. produce grandes lesiones de un color que va del rojo ladrillo al color púrpura, las cuales posteriormente cambian de un color café oscuro hasta uno casi negro1.. La interacción huésped-hongo dentro del género Colletotrichum es variable, debido a que algunas especies como: C. graminícola y C. trifolii son capaces de. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(14) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. infectar hospedadores únicos, mientras que especies como C. gloeosporioides, C. lindemuthianum, C. coccodes o C. fructicola son capaces de infectar múltiples hospederos. C. gloeosporioides es la especie más reportada como patógeno en campo y postcosecha en áreas tropicales y subtropicales, causando antracnosis. AS. en muchos cultivos frutales económicamente importantes8,9,11.. IC. Actualmente, el control químico es uno de los métodos más utilizado para tratar. G. enfermedades fúngicas en cultivos de interés económico, debido al bajo costo. LO. con relación a los beneficios obtenidos, la disponibilidad de productos, facilidad de la aplicación y la efectividad alcanzada; siendo los fungicidas foliares los de. O. mayor uso para controlar enfermedades en campo puesto que los hongos. BI. fitopatógenos son los mayores causantes de la disminución del rendimiento y la. AS. calidad en cultivos, asimismo pueden ser productores micotoxinas haciendo que. CI. el fruto sea nocivo para los consumidores12.. CI EN. Los fungicidas difieren en su modo de acción, pudiendo ser de amplio rango o dirigirse a un grupo específico logrando influir en los procesos vitales de los hongos como la respiración, la biosíntesis de esteroles, la división celular, entre. DE. otros. Sin embargo, además del efecto deseado sobre los hongos fitopatógenos, el uso reiterado de un fungicida puede aumentar la severidad de la enfermedad. CA. ya que una cepa resistente que esté presente en una población de patógenos, puede ser seleccionada diferencialmente mediante la reiterada aplicación de. TE. fungicidas especialmente inhibidores de sitios únicos sin la integración con otros. IO. métodos de control no químicos complementarios; esta capacidad es heredable, ocasionando que la futura progenie puede desarrollarse en presencia del. BL. fungicida particular. Curiosamente, a menudo no se produce una pérdida. BI. significativa de capacidad adquirida en las poblaciones resistentes 13-16.. Los reportes en la última década indican que la aplicación de benzimidazol, propineb, azoxistrobina, tebuconazol y miclobutanil no tienen el efecto esperado debido a la resistencia adquirida por varias especies del género Colletotrichum frente estos. Asimismo, se encontró que este género también es resistente a los. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(15) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. nuevos fungicidas Boscalid, fluxapyroroxad y fluopyram 17-20. Sin embargo, desde la década de 1990, los benzimidazoles, incluidos el carbendazim y el tiofanatometilo, han sido los fungicidas más utilizados para el control de la antracnosis; seguido por el prochloraz, hidróxido de cobre, difenoconazol, mancozeb y. AS. asociaciones de famoxadona + cymoxanil, fludioxonil + cyprodinil 21-23.. IC. Hoy en día entre los fungicidas usados para el control de antracnosis. G. encontramos al PHYTON -27® cuyo principio activo es sulfato de cobre. LO. pentahidratado el cual es un “fungicida, bactericida” de amplio espectro que se aplica al suelo o al follaje para el control de hongos y bacterias. El producto es. O. absorbido por la planta y transportado por la corriente de savia, permitiendo que. BI. las moléculas de cobre sean absorbidas y transportadas vía sistémica a través de. CI. proporción de 4 Lts/cil24.. AS. los tejidos de la planta; aplicándose aspersiones de una solución preparada en la. CI EN. Otro de los compuestos químicos usados para el control de antracnosis es el fosfito de cobre el cual es un inductor de defensas, que favorece la producción de fitoalexinas estimulando el fortalecimiento de tejidos, fundamentalmente, en. DE. el tronco y raíz; además tiene efecto fungicida frente enfermedades que en sus primeras fases de infección colonizan estructuras vegetales que se ubican en. CA. partes inferiores de la planta; generalmente se formula como un líquido, lo que aumenta su movilidad en el suelo y el tejido vegetal, se absorbe fácilmente y se. TE. transmite a través de la xilema y el floema a todas las áreas de la planta. Su. IO. aplicación es de varios modos, tales como fertiirrigación, pulverización foliar, pulverización de tronco, inyección de tronco, pintura de tronco, en surco y. BI. BL. empapamiento de suelo25,26. Debido a la importancia de Colletotrichum gloeosporioides como fitopatógeno de palto en La Libertad es necesario evaluar la eficacia de los fungicidas empleados para el control de la antracnosis, registrándose de esta manera si las dosis del sulfato de cobre pentahidratado y fosfito de cobre usadas en campo actualmente son las adecuadas dado que, el uso reiterado de un agroquímico. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(16) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. genera poblaciones de patógenas dominantes, induce a la resistencia, así como también elimina hongos antagonistas nativos. Teniendo en cuenta que la respuesta frente a los químicos varía de acuerdo a la dosis y el tiempo de uso, asimismo al no haber reportes sobre la susceptibilidad de C. gloeosporioides al. AS. sulfato de cobre y al fosfito de cobre la presente investigación tiene como objetivo determinar el efecto del sulfato de cobre pentahidratado en. IC. concentraciones de 741ppm, 494ppm y 247ppm y el fosfito de cobre en. G. concentraciones de 1480ppm, 858ppm y 572ppm sobre la germinación, el. BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI EN. CI. AS. BI. O. LO. crecimiento, la esporulación y la viabilidad de Colletotrichum gloeosporioides.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(17) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. MATERIAL Y MÉTODO 1. MATERIAL: •. Cultivo de Colletotrichum gloeosporioides aislado a partir de. AS. tejidos de frutos de palto con síntomas de antracnosis proveniente de Virú, Trujillo, Perú.. Sulfato de cobre pentahidratado con el nombre comercial de. IC. •. LO. Fosfito de cobre con el nombre comercial de “FOSFITO DE COBRE”. O. •. G. “PHYTON -27®”. Recolección de muestras vegetales, aislamiento e identificación. AS. 2.1.. BI. 2. MÉTODO:. de Colletotrichum gloeosporioides.. CI. A partir de plantas de Persea americana “palto” var. Hass, se. CI EN. realizó la recolección de frutos con síntomas de antracnosis; los cuáles fueron envueltos en papel, colocados dentro de una caja de cartón y posteriormente trasladados al Laboratorio de. DE. Fitopatología de la Facultad de Ciencias Biológicas de la. CA. Universidad Nacional de Trujillo.. BI. BL. IO. TE. Para el aislamiento del patógeno se procedió limpiar el fruto con abundante agua, luego fue puesto en papel toalla eliminando el exceso de agua, se realizaron pequeños cortes de la piel del fruto, a partir del borde de la lesión. Luego, se colocaron los cortes en Hipoclorito de sodio al 2% durante 3 minutos, pasado este tiempo y en condiciones de esterilidad se realizaron tres lavados de las muestras vegetales con agua destilada estéril. Finalmente fue sembrado en placas con Agar Papa Sacarosa (APS) e incubado a 25°C por 7 días.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(18) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Para. la. identificación. morfológica. de. Colletotrichum. gloeosporioides, de las colonias que se formaron en las placas se resembro en tubos con APS a fin de obtener cultivos puros en donde se observaron las características culturales; luego se. AS. realizaron microcultivos para observar las características microscópicas e identificar al hongo según las claves taxonómicas. G. Obtención del cultivo monospórico. LO. 2.2.. IC. de Barnett H.L & Hunter Barry B27.. Se sembró C. gloeosporioides por superficie en 02 frasco planos de. O. vidrio conteniendo Agar Sabouraud inclinado las que fueron. BI. incubados a 25°C durante 7 días. Posteriormente se cosecharon las. AS. esporas con 10 mL de tween80 al 0.1% y se estandarizó a una concentración de 5x102 esporas/mL mediante recuento en cámara de. CI EN. CI. Neubauer.. En 05 placas de Petri conteniendo Agar Sabouraud, se sembró por superficie la concentración de 5x102 esporas/mL de C. gloeosporioides. DE. y posteriormente se incubaron a 25°C por 3 días. Finalmente, a partir de una colonia desarrollada se procedió a resembrar en 05 tubos de. CA. vidrio conteniendo Agar Sabouraud inclinado incubándose a 25°C por. TE. 7 días.. BI. BL. IO. 2.3.. Evaluación. del. efecto. fungicida. del sulfato de cobre. pentahidratado y el fosfito de cobre sobre la germinación de Colletotrichum gloeosporioides a.. Preparación de las soluciones doble concentradas del sulfato de cobre pentahidratado y el fosfito de cobre Se prepararon diferentes diluciones del sulfato de cobre pentahidratado en agua destilada estéril hasta alcanzar las concentraciones de 741ppm, 494ppm y 247ppm, a partir del producto comercial; del mismo modo se procedió con el. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(19) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. fosfito de cobre hasta alcanzar las concentraciones de 1480ppm, 858ppm y 572ppm respectivamente. b. Preparación del inóculo de esporas. AS. A partir de un cultivo monospórico de C. gloeosporioides se propagó una suspensión de conidias en un frasco plano de. IC. vidrio conteniendo Agar Sabouraud inclinado el cual fue. G. incubado a 25°C por 7 días; posteriormente se obtuvo el. LO. inóculo de esporas agregando 10mL de tween80 al 0.1% al frasco plano de vidrio, el cual fue recolectado en un matraz. O. estéril para luego ser determinada la concentración inicial de. BI. esporas mediante recuento en cámara de Neubauer. Así. AS. mismo se diluyó la concentración inicial de esporas en. CI EN. esp/mL.. CI. tween80 al 0.1% hasta obtener una concentración de 1 x 105. c. Inoculación e incubación Se colocó 2mL de cada dilución de sulfato de cobre. DE. pentahidratado doble concentrado en frascos de vidrio estériles de 20 mL de capacidad, a los cuales se les agregó 2mL. CA. de la suspensión de esporas de C. gloeosporioides obtenida. BI. BL. IO. TE. previamente, con lo cual se obtuvo una dilución de 5x104 esp/mL y concentraciones finales del sulfato de cobre pentahidratado de 741ppm, 494ppm y 247ppm; del mismo modo se procedió con el fosfito de cobre obteniéndose concentraciones finales de 1480ppm, 858ppm y 572ppm, mientras que para la suspensión de esporas control se agregó 2mL de la suspensión de esporas obtenida anteriormente en 2mL de tween80 al 0.1%. Luego, los frasquitos conteniendo los inóculos fueron incubados por 24 horas, cumplido el periodo de incubación se agregó 01 gotas de azul de Lactofenol a cada frasco de penicilina con inóculo para luego ser refrigerado.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(20) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. d. Lectura de los resultados Se contabilizó mediante cámara de Neubauer las esporas germinadas, considerándose como tal aquella cuya longitud del tubo germinativo era mayor que el diámetro mayor de la. sobre. el. crecimiento. lineal. gloeosporioides a.. Preparación del medio de cultivo. de. Colletotrichum. G. cobre. IC. Evaluación del efecto fungicida del sulfato de cobre y el fosfito de. LO. 2.4.. AS. espora.. O. Se preparó agar Sabouraud en siete matraces; a tres de los. BI. cuales se les incorporó sulfato de cobre pentahidratado en. AS. cantidad suficiente para obtener una concentración final de 741ppm, 494ppm y 247ppm, respectivamente, a los. CI. siguientes 3 matraces se les incorporó fosfito de cobre en. CI EN. cantidad suficiente para obtener la concentración final 1480ppm, 858ppm y 572ppm respectivamente.. DE. Al séptimo matraz no se le agrego fungicida a fin de utilizarlo como control. Finalmente, se sirvió cada concentración de. CA. medio de cultivo envenenado en grupos de 05 placas Petri estériles. De la misma forma se realizó con el medio de cultivo. BI. BL. IO. TE. sin químicos, el cual fue empleado como control.. b.. Siembra e incubación. A partir del cultivo puro de C. gloeosporioides se sembró por puntura en las placas Petri con agar Sabouraud más el sulfato de cobre pentahidratado a diferentes concentraciones; de igual manera se procedió con las placas Petri con agar Sabouraud más el fosfito de cobre a diferentes concentraciones y el grupo control. Finalmente se incubó a 25°C por 7 días.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(21) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. c.. Lectura de resultados A partir del segundo día de siembra hasta el séptimo día, se midió el radio de crecimiento (mm) de la colonia en cuatro direcciones, obteniéndose un radio promedio de crecimiento. AS. por día por cada concentración del sulfato de cobre pentahidratado, el fosfito de cobre y el grupo control. Los. IC. resultados de crecimiento de C. gloeosporioides fueron. G. expresados en milímetros (mm) y en porcentaje de. LO. crecimiento (%C), teniendo en cuenta el crecimiento alcanzado por el grupo control (100%), de la siguiente. 2.5.. Evaluación. del. AS. 𝑹𝑹𝑹𝑹𝑹𝑹𝑹𝑹𝑹𝑹 𝑷𝑷𝑷𝑷𝑷𝑷𝑷𝑷𝑷𝑷𝑷𝑷𝑷𝑷𝑷𝑷 𝑫𝑫𝑫𝑫 𝑳𝑳𝑳𝑳 𝑪𝑪𝑪𝑪𝑪𝑪𝑪𝑪𝑪𝑪𝑪𝑪𝑪𝑪 𝑷𝑷𝑷𝑷𝑷𝑷𝑷𝑷𝑷𝑷𝑷𝑷𝑷𝑷𝑷𝑷 𝑹𝑹𝑹𝑹𝑹𝑹𝑹𝑹𝑹𝑹 𝑷𝑷𝑷𝑷𝑷𝑷𝑷𝑷𝑷𝑷𝑷𝑷𝑷𝑷𝑷𝑷 𝑫𝑫𝑫𝑫 𝑳𝑳𝑳𝑳 𝑪𝑪𝑪𝑪𝑪𝑪𝑪𝑪𝑪𝑪𝑪𝑪𝑪𝑪 𝑻𝑻𝑻𝑻𝑻𝑻𝑻𝑻𝑻𝑻𝑻𝑻𝑻𝑻. CI. %C=. BI. O. manera:. efecto. fungicida. X 100. del sulfato de cobre. CI EN. pentahidratado y el fosfito de cobre sobre la esporulación de Colletotrichum gloeosporioides A partir de los cultivos obtenidos en el punto 2.4 se cortó un. DE. cuadrado de 1cmx1cm el cual fue incorporado en un tubo conteniendo 9mL de tween80 al 0.1%, seguidamente se hicieron. CA. diluciones seriadas en tween80 al 0.1% hasta 10-3. Por último, con. IO. TE. ayuda de la cámara de Neubauer se realizó el conteo de esporas a. BI. BL. 2.6.. fin de determinar la concentración conida/mL de suspensión. Evaluación. del. efecto. fungicida. del sulfato de cobre. pentahidratado y el fosfito de cobre sobre la viabilidad de la espora de Colletotrichum gloeosporioides A partir de los cultivos obtenidos en el punto 2.4 se cortó un cuadrado de 1cmx1cm el cual fue incorporado en un frasco conteniendo 9mL de tween80 0.1% estéril y para posteriormente ser agitado vigorosamente. Se incubó por 24 horas a 25°C, una vez. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(22) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. cumplido el tiempo con ayuda de la cámara de Neubauer se realizó el conteo de esporas viables a fin de determinar la concentración espora viable/mL de suspensión. Análisis de resultados. AS. 2.7.. Se analizaron los resultados obtenidos mediante una prueba. IC. ANAVA, empleando el programa estadístico SPSS V.22 a fin de. BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI EN. CI. AS. BI. O. LO. concentraciones evaluadas de cada fungicida. G. determinar si existía diferencia significativa entre las medias de las. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(23) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. RESULTADOS En la Fig. 1 nos muestra que el mayor número de las esporas germinadas/mL de C. gloeosporioides se presenta en 0 ppm de sulfato de cobre pentahidratado con. AS. 4,875,000 esporas, mientras que el menor número se encontró en la. IC. concentración de 741ppm con 812,500 esporas.. G. En la Fig. 2 se observa que hay diferencia significativa en el crecimiento radial. LO. promedio de Colletotrichum gloeosporioides en las concentraciones de 0, 247,. O. 494 y 741ppm de sulfato de cobre pentahidratado; presentándose en la Fig. 3 el. BI. crecimiento macroscópico y microscópico de C. gloeosporioides a estas. AS. concentraciones.. CI. En la Fig. 4 encontramos que la mayor esporulación de C. gloeosporioides se presentó en la concentración de 741ppm de sulfato de cobre pentahidratado con. CI EN. 10,375,000 esporas, mientras que la menor esporulación se presentó en la concentración de 0ppm con 2,625, 500 esporas.. DE. En la Fig. 5 se presenta que la mayor viabilidad de las esporas/mL de C. gloeosporioides ocurrió en la concentración de 0 ppm de sulfato de cobre. CA. pentahidratado con 92.86% esporas viables, mientras que la menor viabilidad se. TE. presentó en la concentración de 741 ppm con 29.52% esporas viables.. IO. En la Fig. 6 nos muestra que el mayor número de las esporas germinadas de C.. BL. gloeosporioides se presenta en la concentración de 0 ppm de fosfito de cobre con 4,875,500 esporas, mientras que menor número de las esporas germinadas. BI. se encontró en la concentración de 1430ppm con 562,500 esporas. En la Fig. 7 se observa que no hay diferencia significativa en el crecimiento radial promedio de Colletotrichum gloeosporioides en las concentraciones de 572, 858 y 1430ppm de fosfito de cobre, pero sí entre estos y la concentración de 0ppm;. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(24) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. asimismo se presenta en la Fig. 8 el crecimiento macroscópico y microscópico de C. gloeosporioides a dichas concentraciones de fosfito de cobre. En la Fig. 9 se presenta que la mayor esporulación de C. gloeosporioides fue. AS. lograda en la concentración de 572ppm de fosfito de cobre con 7,812,000 esporas, mientras que la menor esporulación se presentó en la concentración de. G. IC. 0ppm con 2,625, 000 esporas.. LO. En la Fig. 10 encontramos que la mayor viabilidad de las esporas de C. gloeosporioides se presentó en la concentración de 1430 ppm de fosfito de cobre. O. con 92.86% de esporas viables mientras que la menor viabilidad se presentó en. BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI EN. CI. AS. BI. la concentración de 0ppm con 25% de esporas viables.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(25) IC. 4,875,000. G. 4,500,000. LO. 4,000,000 3,062,500. 3,500,000. a. 2,000,000. 1,812,500. b. 1,500,000 500,000 0. 0. CI. AS. 1,000,000. BI. 2,500,000. O. 3,000,000. 247. c. 494. 812,500. d 741. Concentración (ppm) de Sulfato de cobre pentahidratado. CI EN. N° promedio de esporas germinadas de Colletotrichum gloeosporioides. 5,000,000. AS. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. CA. DE. Fig. 1. Número promedio de esporas germinadas de Colletotrichum gloeosporioides frente a diferentes concentraciones de Sulfato de cobre pentahidratado a los 7 días de incubación.. BI. BL. IO. TE. a; b; c; d son significativamente diferentes (p < 0.05). Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(26) G. 40. LO. 34.900. 35. 30.150. AS. 15.792. 15 10. a. a. a. CI EN. 5 0. a. CI. 20. BI. 21.750. 25. O. 30. 0. 247. 494. 741. Concentración (ppm) de Sulfato de cobre pentahidratado. DE. Crecimiento radial promedio de Colletotrichum gloeosporioides (mm). IC. AS. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. TE. CA. Fig. 2. Crecimiento radial promedio de Colletotrichum gloeosporioides frente a diferentes concentraciones de Sulfato de cobre pentahidratado a los 7 días de incubación.. BI. BL. IO. a: no existe diferencia significativa (p > 0.05). A. B. C. D. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(27) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AS. a b c d. }. BI. O. LO. G. IC. a. A. b. c. BI. BL. IO. TE. CA. C. DE. CI EN. CI. AS. B. D. d. Fig. 3. Colonias de Colletotrichum gloeosporioides en Agar Sabouraud con diferentes concentraciones de Sulfato de cobre pentahidratado y sus observaciones microscópicas a los 7 días de incubación a 25°C. A,a) Control B,b)247pmm C,c)494ppm D,d)741ppm. Nótese que las hifas no presentan deformación en ninguno de los tratamientos. (Las observaciones fueron realizadas en fresco con azul de Lactofenol. Imagen aumentada 400veces). Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(28) IC. 12,000,000 10,000,000. LO. 8,687,500. 6,000,000. 2,000,000 0. a 0. d. c. b. CI. 2,625,000. AS. 4,437,500. BI. O. 8,000,000. 4,000,000. G. 10,375,000. 247. CI EN. N° promedio de esporas de Colletotrichum gloeosporioides /mL. AS. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 494. 741. Concentración (ppm) de Sulfato de cobre pentahidratado. CA. DE. Fig. 4. Número promedio de esporas de Colletotrichum gloeosporioides/mL frente a diferentes concentraciones de Sulfato de cobre pentahidratado a los 7 días de incubación.. BI. BL. IO. TE. a; b; c; d son significativamente diferentes (p < 0.05). Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(29) IC G. 92.86 %. 100.00. 78.87%. 90.00. LO. 80.00 70.00. 48.92 %. a. 40.00. b. AS. 30.00. BI. 50.00. O. 60.00. 20.00 10.00 0.00. 247. CI EN. 0. CI. Promedio de esporas viables de Colletotrichum gloeosporioides (%). AS. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. c. 494. 29.52%. d 741. Concentración (ppm) de Sulfato de cobre pentahidratado. 5.. Número promedio de esporas viables de Colletotrichum gloeosporioides/mL frente a diferentes concentraciones de Sulfato de cobre pentahidratado a los 7 días de incubación.. CA. DE. Fig.. BI. BL. IO. TE. a; b; c; d son significativamente diferentes (p < 0.05). Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(30) IC. 4,875,000. G. 4,500,000. LO. 4,000,000 3,500,000 3,000,000. a. 1,500,000. b. 0. CI. 500,000 0. 1,187,500. AS. 1,000,000. O. 2,000,000. BI. 2,500,000. 2,437,500. 572. c 858. 562,500. d 1430. Concentración (ppm) de Fosfito de cobre. CI EN. N° promedio de esporas germinadas de Colletotrichum gloeosporioides. 5,000,000. AS. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. CA. DE. Fig. 6. Número promedio de esporas germinadas de Colletotrichum gloeosporioides frente a diferentes concentraciones de fosfito de cobre pentahidratado a los 7 días de incubación (p<0,05). BI. BL. IO. TE. a; b; c; d son significativamente diferentes (p < 0.05). Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(31) IC G LO. 60. 48.000. 47.975. 10 0. a 0. b. AS. 15.792. 20. BI. 40 30. 45.500. O. 50. 572. CI. Crecimiento radial promedio de Colletotrichum gloeosporioides (mm). AS. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. b. 858. b. 1430. CI EN. Concentracion (ppm) de Fosfito de cobre. b. b. CA. DE. Fig. 7. Crecimiento radial promedio de Colletotrichum gloeosporioides frente a diferentes concentraciones de Fosfito de cobre a los 7 días de incubación.. a ≠ b: existe diferencia significativa (p < 0.05). BI. BL. IO. TE. b: no existe diferencia significativa (p > 0.05). Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(32) E. AS. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. BI. O. LO. G. IC. e. F. CI EN. CI. AS. f. g. BI. BL. IO. TE. CA. DE. G. H. h. Fig. 8. Colonias de Colletotrichum gloeosporioides en Agar Sabouraud con diferentes concentraciones de Fosfito de cobre y sus observaciones microscópicas a los 7 días de incubación a 25°C. E,e) Control F,f) 572pmm G,g) 858ppm H,h)1430ppm. Nótese que las hifas presentan serias deformaciones en todas las concentraciones. (Las observaciones fueron realizadas en fresco con azul de Lactofenol. Imagen aumentada 400veces). Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(33) IC. AS. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. G. 8,000,000. LO. 7,000,000 6,000,000. 4,625,000. 5,000,000. 3,000,000. 2,750,000. 0. CI. a. 1,000,000. AS. c. 2,000,000. 0. O. b 2,625,000. BI. 4,000,000. 572. a 858. 1430. CI EN. N° promedio de esporas de Colletotrichum gloeosporioides /mL. 7,812,500. Concentración (ppm) de Fosfito de cobre. CA. DE. Fig. 9. Promedio de esporas de Colletotrichum gloeosporioides/mL frente a diferentes concentraciones de Fosfito de cobre a los 7 días de incubación.. a ≠ b ≠ c: existe diferencia significativa (p < 0.05). BI. BL. IO. TE. a: no existe diferencia significativa (p > 0.05). Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(34) IC. 92.86%. G. 100.00 90.00 70.00. 49.60%. 60.00. 36.49%. O. a. 40.00. b. 20.00 10.00 0. AS. 30.00. 25.00%. BI. 50.00. 0.00. LO. 80.00. 572. CI. Promedio de esporas viables de Colletotrichum gloeosporioides (%). AS. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. c. 858. d 1430. CI EN. Concentración (ppm) de Fosfito de cobre. Fig.10. Número promedio de esporas viables de Colletotrichum gloeosporioides/mL frente a diferentes concentraciones de Fosfito. DE. de cobre a los 7 días de incubación.. BI. BL. IO. TE. CA. a; b; c; d son significativamente diferentes (p < 0.05). Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(35) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DISCUSIÓN En la Fig. 1 se observa que el número de esporas germinadas/mL de C. gloeosporioides frente a los diferentes tratamientos es menor que el control. No. AS. obstante, dichos porcentajes disminuyen a medida que sube la concentración de. IC. sulfato de cobre pentahidratado.. G. Los resultados obtenidos pueden deberse a que el sulfato de cobre. LO. pentahidratado acidifica el medio causando la disociación del principio activo en iones SO42- y Cu2+. En consecuencia, la velocidad del transporte iónico se. O. incrementa y la espora libera grandes cantidades de iones hidroxilo (OH-) al tratar. BI. de mantener el equilibrio entre el medio externo e interno28, favoreciendo la. AS. entrada del ion SO42- mediante transportadores de membrana por transporte activo, el cual se ira acumulando debido a que es un ion no intercambiable29.. CI. Seguidamente el ion Cu2+ es reducido hasta Cu1+ por las reductasas Fre1 y Fre2 Ctr3 al citosol30.. CI EN. en la pared de la espora y transportado por las proteínas de membrana Ctr1 y. DE. Dentro de la espora el ion sulfato (SO42- ) es reducido hasta ácido sulfhídrico (H2S) interfiriendo en la cadena del transporte de electrones y los citocromos,. CA. afectando la producción de energía, la cual sería necesaria para crear nuevo material celular17; mientras que el ion Cu1+ produce especies del oxígeno reactivo. TE. como peróxido de hidrógeno (H2O2), superóxido (O2-) y radicales hidroxilos (OH-. IO. ) debido al aumento de la concentración de iones cobre intracelularmente, los. BL. cuales reaccionan con grupos sulfhidrilo (-SH) de ciertos aminoácidos causando la desnaturalización de las proteínas y enzimas de la célula fúngica31,. BI. inhibiéndose así la germinación de esporas. Sin embargo, como no se conoce en qué momento los transportadores llegan al punto de saturación donde alcanzan su velocidad máxima de transporte, es posible que al aumentar la concentración de sulfato de cobre pentahidratado a. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(36) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. concentraciones mayores de 741ppm el porcentaje de germinación disminuya aún más (Fig. 1). Además, se debe considerar que la velocidad de transporte iónico en la. AS. membrana no es la misma en todas las esporas debido a que existe una cierta variabilidad entre los individuos, aun cuando estos se reproducen. IC. asexualmente16, lo que conllevaría a la germinación de un número reducido de. LO. G. esporas.. Asimismo, se encontró que el crecimiento radial promedio de C. gloeosporioides. O. frente a los tres tratamientos usados son similares al control (Fig.2), no. BI. hallándose estadísticamente diferencia significativa entre las diferentes. AS. concentraciones utilizadas; lo que significa que las concentraciones empleadas no tienen efecto sobre C. gloeosporioides. Asimismo, las colonias de C.. CI. gloeosporioides a las mismas concentraciones de sulfato de cobre. CI EN. pentahidratado (Fig.3) muestran una colonia típica: micelio aéreo abundante con formación de masas de esporas color naranja y acervulos semisumergidos, las cuales al ser vistas microscópicamente presentaron estructuras similares a las. DE. del control, sin deformaciones.. CA. La razón por la que los porcentajes de crecimiento lineal son similares al control es posiblemente a que el ion SO42- ingresa a la hifa a través de transportadores. TE. específicos por transporte activo; no afectando negativamente el crecimiento. IO. debido a que una vez dentro, el sulfato es reducido por las enzimas ATP sulfurilasa y APS cinasa hasta ácido sulfhídrico (H2S)32, seguidamente el ácido. BL. sulfhídrico (H2S) formado mediante un proceso de mineralización es reducido. BI. nuevamente hasta sulfuro (S2-), para finalmente ser utilizado en la síntesis de aminoácidos como metionina y cisteína, del regulador redox glutatión, el donador de metilación S- adenosil metionina y las vitaminas tiamina y biotina .. 33,34. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(37) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. De igual forma, el ion Cu2+ es reducido por la metaloreductasa Fre1 y Fre2 de la superficie celular hasta Cu+1 y mediante los transportadores Ctr1 y Ctr3 logra atravesar la membrana plasmática de la hifa. Dentro de la célula el ion cobre es captado por la proteína Ccs1 e incorporado en la enzima superóxido dismutasa. AS. 1 (SOD1), la cual cataliza la desintegración de aniones superóxido en peróxido de hidrógeno y oxígeno, evitando un estrés oxidativo en la célula. También, el ion. IC. Cu+1 puede ser capturado por metalotioneínas, proteínas con la capacidad de. G. unir hasta 8 iones cobre en los enlaces sulfhidrilo (-SH) de las cisteínas que lo. LO. conforman, amortiguando así el exceso de cobre intracelular31.. O. Seguidamente los iones Cu+1 son distribuidos mediante diversos transportadores. BI. hacia la mitocondria, el retículo endoplasmático y el aparato de Golgi para ser. AS. utilizados en diferentes procesos celulares como la biosíntesis de la enzima dependiente de cobre nitrito reductasa, la activación de citocromo c oxidasa, la. CI. formación de melanina, la pigmentación de esporas, entre otros procesos.. CI EN. Finalmente, los iones excedentes son almacenados en la vacuola35. No obstante, el hongo que se ha desarrollado en un medio con 741ppm de. DE. sulfato de cobre pentahidratado logra crecer con mayor facilidad los primeros días hasta que los transportadores de membrana de las hifas llegan a saturarse. CA. disminuyendo la velocidad de crecimiento lineal y posteriormente las colonias desarrolladas a 494ppm y 247ppm llegan a alcanzarlo en crecimiento lineal,. TE. encontrándose según el tratamiento estadístico que no existe diferencia. IO. significativa entre las concentraciones evaluadas (Fig. 2) (Anexo 9). BL. La Fig. 4 nos muestra que el porcentaje de esporulación en los tres tratamientos. BI. fue mayor al control. Estos tienen tendencia creciente, es decir, a medida que aumenta la concentración de sulfato de cobre pentahidratado, aumenta el número de esporas, lo que se confirma con el tratamiento estadístico que nos muestra una diferencia significativa entre los tratamientos (p< 0.05). En relación al porcentaje de viabilidad de las esporas/mL de C. gloeosporioides en los tres tratamientos, estos son menores que el control (Fig. 5), descendiendo la. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(38) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. viabilidad a medida que aumenta la concentración del sulfato pentahidratado, encontrándose diferencia significativa entre todas concentraciones incluyendo al control, lo que quiere decir que los tratamientos no tienen el mismo efecto. AS. sobre la viabilidad de esporas. El hongo al tener un crecimiento acelerado ha generado el agotamiento de la. IC. fuente nitrogenada y otros nutrientes en el medio de cultivo, lo que conllevaría. G. a una detención paulatina del crecimiento vegetativo y su posterior. LO. esporulación28. Es por ello que se observa una producción de esporas proporcional a la cantidad de micelio en las colonias de C. gloeosporioides,. O. encontrándose diferencia significativa entre cada tratamiento (Figura 4). Estas. BI. esporas al ser viables, debido a que las condiciones impuestas en el medio son. CI. establecer nuevas colonias.. AS. favorables para su desarrollo, son potenciales unidades infectivas capaces de. CI EN. Resultados que difieren de los encontrados por Oziengbe EO y Osazee JO36 quienes hallaron que el sulfato de cobre a 0.6mg /L (0.6ppm) 0.8 mg /L (0.8ppm) disminuye significativamente la producción de conidios de Colletotrichum. DE. gloeosporioides del 66.3% y 46.7% respectivamente.. CA. Cabe considerar que el hongo aislado, probablemente ya haya estado presente a una frecuencia del uno por ciento o más en ciertas áreas que contenían sulfato. TE. de cobre pentahidratado y la subpoblación de fitopatógenos ha estado. IO. evolucionando por selección durante algunas generaciones. Así al ser expuesto nuevamente a al principio activo en cuestión es capaz de desarrollarse con. BI. BL. normalidad37.. Con respecto al fosfito de cobre pentahidratado en la Fig.6 se muestra que el número promedio de esporas germinadas de C. gloeosporioides en los diferentes tratamientos es menor que el control, donde la germinación desciende a medida que aumenta la concentración del fosfito de cobre; existiendo estadísticamente. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(39) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. diferencia significativa entre todos los tratamientos, en otros términos, cada tratamiento causa un efecto diferente sobre el hongo en cuestión. Considerando que la germinación de esporas es la etapa de crecimiento más. AS. sensible a la inhibición, los resultados obtenidos probablemente sean debido a que el químico también acidifica el medio38 logrando disociar el principio activo. IC. en iones (PO3)3- y Cu2+. Frente a esto la espora libera iones hidroxilo (OH-) al. G. medio externo generando que el pH intracelular disminuya, lo que es. LO. compensado con la entrada de ion fosfito (PO3)3- que es un isóstero del ion fosfato (PO4)-2 a través de los simportadores de fosfato Pho84p y Pho9039,. O. mientras el cobre hace su ingreso por mecanismos anteriormente explicados. AS. BI. previa reducción hasta Cu+1 en la pared celular de la espora. En el espacio intracelular el ion (PO3)3- se acopla en los sitios de unión al fosforo. CI. regulados por el fosfato bloqueando el metabolismo de la pentosa fosfato, e. CI EN. interfiriendo así con la producción de energía necesaria para transformar los componentes de reserva en nuevo material genético, así como la biosíntesis de nucleótidos y ácidos nucleicos39,40. En cambio, el cobre produce especies del. DE. oxígeno reactivo que reaccionaran con los grupos sulfhidrilo (-SH) de muchos aminoácidos generando la desnaturalización de las proteínas, deteniéndose así. CA. la germinación de las esporas. Cabe resaltar que las esporas que llegaron a germinar pueden ser consideradas estériles tras tener el tubo germinativo. IO. TE. vacuolizado o deformado luego de los tratamientos (Anexo 7). Asimismo, se observa en la Fig. 7 y 8 que el crecimiento radial promedio de C.. BL. gloeosporioides frente a diferentes concentraciones de Fosfito de cobre es. BI. mayor respecto al control, sin embargo, no hubo estadísticamente diferencia significativa entre las tres concentraciones de fosfito evaluadas; pero sí entre estas con el control. Al observar la morfología de C. gloeosporioides a las diferentes concentraciones se hallaron colonias con micelio escaso de color atípico en las concentraciones de 858ppm y 1430ppm, las cuales al ser. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(40) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. observadas al microscopio mostraron hifas vacuolizadas y con serias deformaciones. La razón por la que los porcentajes de crecimiento lineal son mayores que el. AS. control es debido a que el fosfito de cobre desciende el pH del medio, logrando que el principio activo se disocie, la hifa en respuesta a la acides del medio. IC. externo libera iones OH- al medio para equilibrar el gradiente electroquímico y. G. posteriormente el simportador Pma1 bombea protones hacia el medio externo. LO. para lograr la captación iones (PO3)3-, de esta forma el fosfito ingresa junto a un H+ a través de los simportadores de fosfato Pho84, Pho87 y Pho90. Finalmente,. O. el cobre hace su ingreso independientemente del (PO3)3- mediante los. BI. transportadores específicos Ctr1 y Ctr3, previa reducción hasta Cu+1 en la pared. AS. celular de la hifa.. CI. Frente al tratamiento de 572ppm, intracelularmente las hifas dejan una parte de. CI EN. iones (PO3)3- en el citosol y otra son movilizados mediante diferentes transportadores de la familia Pho hacia el aparato de Golgi y la vacuola para competir con el fosfato en los sitios de unión al fosforo (P) reguladas por el ion (H2PO4)-. . No obstante, con a los tratamientos de 858ppm y 1430ppm el. DE. 41,42,43. fosfito debido a su gran cantidad se incorpora en los sitios de unión al fosforo. CA. reguladas por fosfato, inhibiéndose así la biosíntesis de adenil ciclasa (AC), el funcionamiento de enzimas fosforilantes como fosfatasa ácida, fosfo- enol. TE. piruvato fosfatasa y fosfofructoquinasa. De igual manera el cobre genera un. IO. estrés oxidativo tras la producción de radicales libres del oxígeno, causando. BL. vacuolización y posterior deformación de las hifas. (Figura 8). BI. Ronaldo JD Dalio44 al investigar el efecto de fosfito de potasio sobre Phytophtora plurivora, patógeno de Fagus sylvatica (Haya europea) encontró que la concentración de 34 mg /ml (3,400ppm) inhibía al 50% del crecimiento micelial. De la misma forma King M et al45 al investigar los cambios morfológicos inducidos en Phytophthora cinnamomi por acción del fosfito encontró que dicho principio. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(41) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. activo interactúa directamente con el hongo causando distorsión de las hifas y lisis de las paredes celulares, concordando con lo encontrado en esta investigación, que el microorganismo, pese sufrir una regulación negativa de muchos procesos celulares, logra crecer, pero con una notable anormalidad en. AS. las hifas.. IC. En la Figura 9. se observa que el número promedio de esporas de C.. G. gloeosporioides desciende a medida que se eleva la concentración del fosfito de. LO. cobre, no obstante, la esporulación obtenida en la concentración de 1430ppm es igual al control. No encontrándose diferencia significativa entre las. O. concentraciones 0ppm y 1430ppm, pero si entre estas y todos los demás. BI. tratamientos, es decir los tratamientos de 572ppm y 858 ppm generan un efecto. AS. diferente sobre la esporulación, mientras que el de 1430ppm no tiene efecto. CI. alguno.. CI EN. Debido al nivel aumentado de fosfito la biomasa obtenida es muy superior a la del control, pero el metabolismo da lugar a la acumulación de materiales potencialmente tóxicos en cantidades mucho mayores de las que normalmente. DE. se encuentra en las células. Por lo tanto, para cuando las concentraciones de nutrientes hayan caído a un nivel que permitiría la esporulación, las condiciones. CA. pueden haber llegado a ser totalmente desfavorables46.. TE. Ronaldo JD Dalio44 investigó el efecto de fosfito de potasio sobre Phytophtora. IO. plurivora, patógeno de Fagus sylvatica (Haya europea) encontrando que la concentración que disminuye la producción de zoosporas al 50% fue 2,9 mg / ml. BL. (2,900ppm). Dichos resultados coinciden con nuestro estudio, que el fosfito. BI. disminuye la esporulación, pero no en su totalidad, pese a que la concentración efectiva es más alta que la utilizada en esta investigación y que el microorganismo en cuestión es un Oomycete. Finalmente, la Fig.10 muestra que el número promedio de esporas viables de C. gloeosporioides frente a las mismas concentraciones es menor que el control y. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(42) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. disminuye a medida que la concentración del fosfito de cobre es mayor, encontrándose estadísticamente diferencia significativa entre todos los tratamientos, lo que significa que cada tratamiento ejerce un efecto diferente. AS. sobre el hongo. Dichos resultados se deben a que el hongo logra desarrollarse en un medio con. IC. concentraciones de fosfito en el rango de 572ppm 1430ppm, sin embargo, en la. G. Figura 8 se observa que las hifas crecen deformes, lo que llevaría a inferir que. LO. hifas deficientes darían como resultado la formación de esporas deficientes, entre estas deficiencias estaría la disminución de la viabilidad, la cual se. O. incrementaría conforme aumenta la concentración del químico en cuestión.. BI. Corroborando lo antes expuesto con el tratamiento estadístico que nos muestra. BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI EN. CI. AS. una diferencia significativa entre los tratamientos (p< 0.05).. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(43) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. CONCLUSIONES. •. El sulfato de cobre pentahidratado en concentraciones en el rango de 257ppm a 741ppm, disminuye significativamente la germinación y la. IC. •. AS. viabilidad de esporas de Colletotrichum gloeosporioides.. El sulfato de cobre pentahidratado en concentraciones en el rango de. G. 257ppm a 741ppm, no inhibe significativamente el crecimiento radial de. O. 257ppm. a. 741ppm,. gloeosporioides.. esporulación. del. hongo. C.. Al incrementarse la concentración de Fosfito de cobre, en el rango de. CI. •. estimula la. BI. El sulfato de cobre pentahidratado en concentraciones en el rango de. AS. •. LO. Colletotrichum gloeosporioides.. CI EN. 572ppm a 1430ppm, Colletotrichum gloeosporioides disminuye la germinación, esporulación y viabilidad de esporas. El fosfito de cobre, en el rango de 572ppm a 1430ppm, estimula el. DE. •. crecimiento radial de Colletotrichum gloeosporioides no existiendo. BI. BL. IO. TE. CA. diferencia significativa entre ellas.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

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