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Efecto de la concentración del aceite esencial de las hojas de Schinus molle sobre el crecimiento micelial de Colletotrichum gloeosporioides in vitro

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Academic year: 2020

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(1)Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS. CI. AS. BI. O. LO. G. IC. AS. ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE CIENCIAS BIOLÓGICA. DE. CI EN. Efecto de la concentración del aceite esencial de las hojas de Schinus molle sobre el crecimiento micelial de Colletotrichum gloeosporioides in vitro.. TE. CA. TESIS PARA OBTENER EL TÍTULO DE BIÓLOGO. BL. IO. Autora: Br. MOSTACERO AHÓN GLORIA MARIA. BI. ASESOR: Dr. MARCO LEONCIO SALAZAR CASTILLO. TRUJILLO – PERÚ 2017. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(2) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AUTORIDADES DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLLO. IC. AS. QUE OTORGAN EL TÍTULO PROFESIONAL DE BIÓLOGO. LO. G. RECTOR. AS. BI. O. Dr. Orlando Moisés Gonzales Nieves. CI. SECRETARIO GENERAL. DE. CI EN. Dr. Esteban Ilich Zerpa.. Dr. Rubén Vera Véliz. BI. BL. IO. TE. CA. VICE-RECTOR ACADÉMICO. VICE – RECTOR DE INVESTIGACÍON Dr. Weider Portocarrero Cárdenas. ii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(3) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. LO. G. IC. AS. AUTORIDADES DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS. O. DECANO DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLOGICAS. CI EN. CI. AS. BI. Dr. Freddy Roger Mejía Coico. DE. DIRECTOR DE LA ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE CIENCIAS BIOLÓGICAS:. BI. BL. IO. TE. CA. Dr. Freddy Peláez Peláez. iii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(4) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. PRESENTACIÓN. IC. AS. Señores miembros del Jurado:. G. En cumplimiento con las disposiciones de reglamentos de grados y títulos de la. LO. Escuela Académico profesional de Ciencias Biológicas de la Universidad Nacional. O. de Trujillo, me es honroso someter a vuestra consideración y elevado criterio, el. BI. informe de Tesis titulado: Efecto de la concentración del aceite esencial de las. AS. hojas de Schinus molle sobre el crecimiento micelial de Colletotrichum. CI. gloeosporioides in vitro.. CI EN. Con el cual cumplo con uno de los requisitos indispensables para obtener el título de. CA. DE. Biólogo.. __________________________________ Br. Mostacero Ahón Gloria Maria. BI. BL. IO. TE. Trujillo, Abril del 2017. iv Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(5) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. IC. AS. MIEMBROS DEL JURADO. CI. AS. BI. O. LO. PRESIDENTE. G. Dr. Julio Roger Chico Ruíz. CI EN. Dra. Marlene Rene Rodríguez Espejo. Dr. Marco Leoncio Salazar Castillo VOCAL. BI. BL. IO. TE. CA. DE. SECRETARIA. v Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(6) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DEL ASESOR. El que suscribe, profesor asesor de tesis titulada “Efecto de la concentración. AS. del aceite esencial de las hojas de Schinus molle sobre el crecimiento. IC. micelial de Colletotrichum gloeosporioides in Vitro deja constancia que esta. G. ha sido desarrollada de conformidad con los objetivos propuestos en su perfil. LO. académico y que el informe ha sido revisado y acoge las observaciones y. BI. O. sugerencia alcanzada por los miembros del jurado.. Dr. Marco Leoncio Salazar Castillo. IO. TE. CA. DE. CI EN. CI. trámites correspondientes.. AS. Por lo tanto, autorizo al Br. Mostacero Ahón Gloria Maria a continuar con los. BI. BL. ASESOR. vi Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(7) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. LO. G. IC. AS. A: Dios, por darnos la oportunidad de vivir y por estar con nosotras en cada paso que damos, por fortalecer nuestro corazón e iluminar nuestra mente y por haber puesto en el camino a aquellas personas que han sido soporte y compañía durante todo el periodo de estudio.. DE. CI EN. CI. AS. BI. O. A: Mis padres Bernardo y Emelda por ser el pilar fundamental en lo que soy, en la educación, tanto académica, como de la vida, por su incondicional apoyo perfectamente mantenido a través del tiempo.. BI. BL. IO. TE. CA. A: Mis hermanos: José Antonio, Maria Susana y Maria Angélica, porque me han brindado su apoyo incondicional y por compartir conmigo buenos y malos momento.. vii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(8) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AGRADECIMIENTO:. Agradezco en primer lugar a Dios, por permitirme culminar mi carrera como. AS. también a mis Padres, Hermanos, familiares y amigos quienes me han brindado su. IC. apoyo incondicional.. G. Agradezco el apoyo brindado que, en este andar por la vida, influyo con sus. O. retos que pone la vida.. LO. lecciones y experiencias en formarnos como personas de bien y preparada para los. BI. Agradezco de forma muy especial a todos mis queridos maestros quienes con. AS. responsabilidad y alegría me ilustraron en las aulas de esta universidad y de manera muy especial quiero agradecer a mi asesor Dr. Marco Leoncio Salazar. CI. Castillo y co asesor el Dr. Julio Roger Chico Ruíz, que sin ningún interés me. CI EN. brindaron sus conocimientos científicos que fueron muy importantes para culminar con éxito esta investigación. De igual forma dejo constancia de mis agradecimientos a todos los miembros del laboratorio de Tecnología enzimática y Productos Naturales, Departamento Académico de Química Biológica y Fisiología. DE. Animal, de la Facultad de Ciencias Biológicas - UNT, a las Sras. Ms. Melchora. CA. Veneros C. y Ms. Doris Asmat P. por bridarme su apoyo y amistad.. Agradezco el apoyo brindado a mi profesor Blgo. Carlos Heli Quijano Jara por. IO. TE. compartir sus conocimientos para poder plasmarlo en su realización.. sus conocimientos para poder plasmarlo en su realización.. BI. BL. A las personas que me orientaron en la redacción del proyecto y nos compartieron. viii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(9) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. ÍNDICE. IC. AS. Pág.. G. AUTORIDADES DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO. LO. QUE OTORGAN EL TÍTULO PROFESIONAL DE BIÓLOGO. O. AUTORIDADES DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS. BI. PRESENTACIÓN. AS. MIEMBROS DEL JURADO. CI. DEL ASESOR. AGRADECIMIENTO. DE. ÍNDICE. CI EN. DEDICATORIA. ii iii iv v vi vii viii ix x. RESUMEN. xi. CA. LISTA DE FIGURAS Y TABLAS. I.. INTRODUCCION. 1. MATERIAL Y MÉTODOS. 5. RESULTADOS. IO. II.. xii. TE. ABSTRACT. 9. IV.. DISCUSIÓN. 12. CONCLUSIONES. 14. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS. 15. BL. III.. BI. V.. VI.. VII.. ANEXOS. ix Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(10) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. LISTA DE FIGURAS Y TABLAS. Figura 1. Velocidad de crecimiento de diámetro micelial de C. gloeosporioides. AS. cuando se enfrentan a diferentes concentraciones de aceite esencial de hojas de S. 10. IC. molle.. molle, sobre el crecimiento micelial de C.. LO. esencial de las hojas de S.. G. Tabla 1. Porcentaje de inhibición del crecimiento micelial (ICM) del aceite. 9. BI. O. gloeosporioides en condiciones in vitro.. AS. Tabla 2. Análisis de varianza (ANOVA) de crecimiento micelial de C. gloeosporioides a los 8 días, por cada concentración de aceite esencial de hojas de 11. CI EN. CI. S. molle.. Tabla 3. Pruebas de Múltiple Rangos para crecimiento micelial de C. gloeosporioides a los 8 días, por cada concentración de aceite esencial de hojas de 11. BI. BL. IO. TE. CA. DE. S. molle.. x Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(11) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. RESUMEN. Se evaluó el efecto de la concentración del aceite esencial de las hojas de Schinus molle, sobre el crecimiento micelial de Colletotrichum gloeosporioides, in vitro. Para. AS. ello, se utilizó el medio de cultivo Agar Base Sabouraud más antibiótico, y por. IC. destilación por arrastre de vapor se obtuvo el aceite esencial de S. molle. Se. G. prepararon concentraciones crecientes de aceite esencial (1, 2, 5, 10 µL/mL). LO. respectivamente; teniendo como controles el crecimiento micelial positivo al medio de cultivo con solo agar Sabouraud, y al negativo al medio de cultivo conteniendo. O. carbendazim (0,2 µL/mL). Se sembraron por puntura fragmentos homogéneos de. BI. micelio C. gloeosporioides. En todos los tratamientos y controles, se incubaron por 8 días a temperatura ambiente observando y midiendo (mm con vernier), el. AS. crecimiento micelial después del cuarto día de incubación. Se encontró que. CI. concentraciones mayores de 2 µL /mL del aceite esencial de S. molle inhiben el crecimiento micelial de C. gloeosporioides más del 65%, siendo la inhibición más. CI EN. alta (90.8%), la concentración de 10 µL/mL. Se concluye que el aceite esencial de S. molle si inhibe el crecimiento micelial de C. gloeosporioides en relación directa a la concentración y este aceite puede ser utilizado en el control biológico de este. DE. patógeno.. Colletotrichum gloeosporioides.. BI. BL. IO. TE. CA. Palabras clave: Aceite Esencial - Schinus molle - Crecimiento micelial -. xi Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(12) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. ABSTRACT. The effect of the essential oil concentration of the leaves of Schinus molle on the mycelial growth of Colletotrichum gloeosporioides was evaluated. For this, the. AS. Sabouraud Base Agar culture medium was used more antibiotically, and the essential oil of S. molle was obtained. Increasing concentrations of essential oil (1,. IC. 2, 5, 10 μL / mL) respectively were prepared; Having as controls the positive. G. mycelial growth to the culture medium with only Sabouraud agar and negative to. LO. the culture medium containing carbendazim (0.2 μL / mL). Homogeneous fragments of C. gloeosporioides mycelium were seeded by puncturing. In all. O. treatments and controls, they were incubated for 8 days at room temperature. BI. observing and measuring (mm with vernier), the mycelial growth after the fourth. AS. day of incubation. It was found that concentrations greater than 2 μL / mL of the essential oil of S. molle inhibited the mycelial growth of C. gloeosporioides over. CI. 65%, with the highest inhibition (90.8%) being the concentration of 10 μL / mL. It. CI EN. is concluded that the essential oil of S. molle does inhibit the mycelial growth of C. gloeosporioides in direct relation to the concentration and this oil can be used in the. DE. biological control of this pathogen.. Palabras clave: Essential oil - Schinus molle - mycelial growth - Colletotrichum. BI. BL. IO. TE. CA. gloeosporioides.. xii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(13) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. I.. INTRODUCCION. AS. Schinus molle es una especie vegetal muy difundida en el Perú, siendo su desarrollo óptimo en los climas de los valles interandinos, esta especie pertenece a. IC. la familia Anacardiaceae1. Es una planta con actividad antifúngica y antibacteriana. G. principalmente en las hojas2. Además, tiene importancia etnobotánica, pues se la ha. LO. utilizado en el control de plagas agrícolas en varias localidades del Perú3.. O. Se han evaluado los efectos antibacterianos y antifúngicos de los aceites. BI. esenciales obtenidos de hojas frescas de S. molle, aislados por hidrodestilación obteniendo actividad contra especies bacterianas totales como: Klebsiella. AS. pneumoniae, Alcaligenes faecalis, Pseudomonas aeruginosa, Leuconostroc. CI. cremoris, Enterobacter aerogenes, Proteus vulgaris, Echerichia coli y Bacillus subtilis, entre otras y contra especies fúngicas Aspergillus ochraceus, A.. CI EN. parasiticus, Fusarium culmorum y Alternaria alternata, mostrando una sensibilidad significativa a los aceites volátiles4.. DE. Los aceites esenciales surgen como una alternativa al control de plagas y enfermedades pues su aplicación a nivel de laboratorio ha demostrado eficiencia en. CA. el control de agentes fitopatógenos, creando la posibilidad de contar con productos que garanticen inocuidad en el medio ambiente y garantizando producciones sanas. TE. y libres de residuos contaminantes5.. IO. Generalmente, los aceites esenciales son mezclas complejas de hasta más de. BL. 100 componentes (metabolitos secundarios) que pueden ser compuestos alifáticos de bajo peso molecular (alcanos, alcoholes, aldehídos, cetonas, ésteres y ácidos),. BI. monoterpenos, sesquiterpenos y fenilpropanos. Estos metabolitos secundarios cubren un amplio espectro de efectos farmacológicos mostrando diversas propiedades biológicas, como propiedades antiinflamatorias, antioxidantes, y anticancerígenos5. Otras actividades biológicas también se reportan como biocidas. 1 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(14) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. en contra de una amplia gama de microorganismos como bacterias, hongos, virus, protozoarios insectos y plantas6. En años recientes, se han desarrollado estudios orientados a la búsqueda de. AS. agentes biocontroladores efectivos en la lucha contra plagas agrícolas. Los agentes de control biológico incluyen hongos e insectos, extractos vegetales y aceites. IC. esenciales. Actualmente existe un renovado interés en el estudio de aceites. G. esenciales ya que se buscan alternativas de origen natural para la preservación de. LO. alimentos, lucha contra plagas agrícolas y por los problemas que implica la resistencia de microorganismos a controles químicos y por el creciente rechazo de. O. la sociedad al uso de compuestos químicos como aditivos de alimentos y. AS. BI. pesticidas7.. Es necesario investigar sobre las concentraciones mínimas que inhiban el. CI. crecimiento de microorganismos, usando métodos sensibles y robustos que nos. CI EN. permitan reportar estos datos y valorar la capacidad antimicrobiana de los aceites esenciales. Estos aceites esenciales, son. una buena alternativa. como. antimicrobianos ya que en la actualidad alrededor del mundo estamos buscando formas de cuidar y controlar nuestros cultivos de plagas y enfermedades, sin. DE. destruir más el medio ambiente, tratando de obtener tendencia hacia los productos. CA. naturales y dejar a un lado los productos químicos que tanto daño causan. El género Colletotrichum es causante de enfermedades prácticamente en. TE. todas las cosechas agrícolas del mundo8. Y produce la “antracnosis” que se. IO. caracterizan por el hundimiento necrosado del tejido donde se producen masas de conidias dentro de un acérvulo9. La antracnosis se presenta en tejidos de plantas en. BL. desarrollo y maduros, afecta frutos durante su desarrollo en el campo, así como. BI. frutos maduros durante su almacenaje10, prevalece durante temporadas de lluvias y humedad relativa alta (>80%)11, e infecta con temperaturas de 20 a 28 °C 9. Las etapas de desarrollo de las especies de Colletotrichum pueden separarse en: deposición en la superficie del hospedante, fijación de la conidia en la superficie, germinación de la conidia, producción del apresorio, penetración de la epidermis. 2 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(15) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. de la planta, crecimiento y colonización del tejido del hospedante y producción de acérvulos y esporulación12. El cultivo de Persea americana Mill “palta” es una fuente económica muy. AS. importante, es de consumo creciente debido a su incorporación en la dieta y genera fuentes de empleos directos e indirectos en su cadena productiva. Para el Perú, la. IC. palta ya es uno de los rubros de exportación más importantes y de crecimiento. G. espectacular, que se ha constituido en una de las estrellas de la agro exportación La. LO. creciente demanda del fruto de palto en el mundo ha sido factor importante para. O. que se incremente la superficie cultivada.. BI. El palto es afectado por varias enfermedades producidas por bacterias y hongos principalmente, entre las que destacan por su prevalencia y por los daños. AS. ocasionados al cultivo, C. gloeosporioides “antracnosis”. 13. , enfermedad con. prevalencia en temporadas lluviosas o con humedad relativa alta. Es un patógeno. CI. de postcosecha del palto que infecta principalmente frutos pequeños durante su. CI EN. crecimiento en los huertos. Los cambios fisiológicos en el fruto permiten la activación del patógeno quiescente, ocasionando pérdidas sustanciales por decaimiento de frutos durante el almacenaje y comercialización9. Es una de las. DE. enfermedades principales que afecta la calidad del fruto y llega a causar pérdidas cercanas al 20%, por ello, se hace necesario conocer la interacción planta–patógeno. CA. en sus aspectos moleculares y bioquímicos que sirvan como punto de partida para plantear investigaciones básicas y aplicadas que provean nuevas perspectivas para. TE. el control de la enfermedad.. IO. Los cultivos industriales y de exportación como el cacao, el palto, el mango,. BL. son en algún momento atacados por C. gloeosporioides, el efecto del hongo en algunos lugares ha sido contrarrestado tratándolo mediante el control químico y. BI. medidas culturales, sin embargo, el uso del aceite esencial de hojas de S. molle, resulta novedoso para reemplazar a los químicos debido a que no inducen a resistencia, no contaminan el ambiente y resultan menos costosos.. 3 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(16) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. El propósito de la presente tesis fue evaluar el efecto de la concentración del aceite esencial de las hojas de S. molle sobre el crecimiento micelial de C. gloeosporioides. BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI EN. CI. AS. BI. O. LO. G. IC. AS. in vitro.. 4 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(17) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. II.. MATERIAL Y MÉTODOS. El presente trabajo se llevó a cabo en el laboratorio de Tecnología Enzimática y. AS. Productos Naturales, departamento Académico de Química Biológica y Fisiología. IC. Animal, Facultad de Ciencias Biológicas - Universidad Nacional de Trujillo.. LO. G. Material biológico. Colletotrichum gloeosporioides fue proporcionado por el laboratorio de. O. fitopatología, del departamento Académico de Ciencias Biológicas, Facultad de. BI. Ciencias Biológicas, de la Universidad Pedro Ruiz Gallo el cual fue aislado de. AS. frutos de palto.. CI. S. molle “molle” fue colectado en el distrito de Otuzco, tanto para los ensayos biológicos y su identificación taxonómica en el Herbarium Truxillensis (HUT) de. CI EN. la Universidad Nacional de Trujillo.. Del material recolectado se seleccionaron las hojas sanas (sin signos o síntomas de. CA. DE. enfermedad o ataque de plagas).. Preparación de medio de cultivo. TE. Se realizó la preparación del medio de cultivo Agar Sabouraud Difco14, se esterilizó. IO. a 121°C/15lb/15min y se adicionó el antibiótico (500 g de Doxiciclina), en cada. BI. BL. medio de cultivo preparado15.. Reactivación del hongo Se realizó a partir de la placa Petri que contuvo el cultivo madre, donado por el laboratorio de fitopatología, de la Universidad Pedro Ruiz Gallo, realizando los. 5 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(18) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. repiques sucesivos que garantizó la pureza y viabilidad del patógeno hasta su aplicación, el cultivo se incubó por siete días16.. AS. Obtención del aceite esencial de las hojas de S. molle. El aceite esencial se obtuvo a partir del material vegetal fresco de las especies S.. IC. molle. Después de seleccionar y preparar el material, eliminando tallos y hojas. G. dañadas, se sometió a una extracción por el método destilación por arrastre de. LO. vapor de agua. Luego se colocó en frascos pequeños de color ambar y con tapa. O. rosca, se recomienda refrigerar (5°C).. BI. Aproximadamente 25 kilos de material vegetal, en un destilador (mL) a escala de laboratorio se empleó 500 g de muestra por cada extracción, las que se colocarón. AS. en el equipo de arrastre de vapor de agua17. El tiempo medio de extracción fue de. CI. 15 minutos, luego de alcanzar la temperatura de ebullición del agua (92°C).. CI EN. Los hidrolatos que contuvo los aceites esenciales fueron colectados y almacenados en frascos de vidrio color ámbar de 10 mL de capacidad, hasta la destilación de los. DE. 25 kilos del material vegetal colectado.. Se concentraron los aceites esenciales partiendo, en peras de separación, los. BI. BL. IO. TE. CA. hidrolatos con cloroformo y luego se destiló el cloroformo17.. 6 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(19) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Diseño experimental Se utilizó el diseño completamente al azar de estímulo creciente. El diseño experimental contó con 4 grupos experimentales, un grupo control positivo, un grupo control negativo (con carbendazim 0,5 cc/L), a cada grupo se le realizó 3. Crecimiento micelial (mm). 2. C1 (AS + A +AE, S. molle) 1 µL/mL. 3. C2 (AS + A + AE, S. molle) 2 µL/mL. 4. C3 (AS + A + AE, S. molle) 5 µL/mL. 5. C4 (AS + A + AE, S. molle) 10 µL/mL. 6. C+ (AS + A Carbendazim) 2 µL/mL. ICM. BI. C (AS + A). 8 días. AS. 1. 6 días. %. O. 4 días. Promedio crecimiento micelial (mm). LO. Grupos experimentales. G. IC. (control positivo), ocupe toda la extensión (9cm) de la placa Petri18.. AS. repeticiones. La evaluación de los resultados culminó cuando el micelio del hongo. CI EN. CI. Fuente: Autor, C = Agar Sabouraud +Antibiótico(Doxiciclina), C (1,2,3 y 4) = Agar Sabouraud + aceite esencial + Antibiótico(Doxiciclina), C + = Agar Sabouraud + Antifungico (Carbendazim). % ICM= porcentaje de inhibición del crecimiento micelial.. DE. Evaluación del aceite esencial sobre el crecimiento del hongo. CA. El aceite esencial de S. molle “molle”, se mezcló con el medio agar Sabourand estéril, en las concentraciones de 1, 2, 5 y 10 µL (v/v) y se dispensó en placas Petri.. TE. Luego de la solidificación del medio, se colocó en el centro de cada placa un disco de micelio de 5 mm de diámetro, extraído del cultivo puro de C. gloeosporioides. IO. incubado a temperatura ambiente 27±2ºC 25. 16. . Se registraron las medidas del. BL. diámetro de la colonia del hongo estudiado a partir del cuarto día de experimentación, cada 48 horas, hasta que el crecimiento del tratamiento testigo (0. BI. % de inhibición) complete el diámetro de la placa (9 cm)16. Con los promedios de los datos obtenidos, se determinó la velocidad de crecimiento de diámetro micelial. Así mismo se calculó el porcentaje de inhibición mediante la siguiente formula:. 7 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(20) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 𝑰𝑪𝑴 =. (𝒅𝟎 − 𝒅𝒄 ) ×𝟏𝟎𝟎 𝒅𝟎. Dónde: =. Porcentaje de inhibición del crecimiento micelial,. do. =. Diámetro de la colonia del testigo (0 %),. dc. =. Diámetro de la colonia con la concentración prueba.. LO. G. IC. AS. % ICM. O. Análisis estadístico. BI. Se evaluó la presencia (y dimensión en mm) o ausencia del halo de inhibición del crecimiento del hongo. Los datos se sometieron a un análisis de varianza. AS. (ANOVA), al haber obtenido una razón F significativa se utilizó el análisis de comparaciones múltiples de Tukey (p≤0,05), para determinar entre qué tratamientos. CI. se encontrarón las diferencias significativas. Se Utilizó el paquete estadístico IBM. BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI EN. SPSS Statistics vers. 20, para todos los tratamientos18.. 8 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(21) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. III.. RESULTADOS. Según los resultados obtenidos, las concentraciones del aceite esencial de las hojas de S. molle “molle”, 1, 2, 5 y 10 µL/mL (Tabla 1, Figs. 1)., y según análisis. G. IC. inhibición conforme aumenta las concentraciones del aceite esencial.. AS. estadísticos existen diferencias significativas en los tratamientos, causando. LO. Tabla 1. Crecimiento micelial y Porcentaje de inhibición micelial (ICM), del crecimiento de C. gloeosporioides sobre del aceite esencial de las hojas de Schinus. BI. O. molle en condiciones in vitro.. AS. CI. Grupos experimentales. Crecimiento micelial (mm) 4 días 6 días 8 días. 2. C1 (1 µL/mL). 3. C2 (2 µL/mL). 4. C3 (5 µL/mL). 5. C4 (10 µL/mL). 6. C+. % ICM. 68.6. 70.6. 70.0. 69.7. 0.000. 28.6. 26.6. 27.6. 27.6. 60.419. 25.4. 23.4. 24.4. 24.4. 65.008. 23.8. 21.8. 22.8. 22.8. 67.302. 7.4. 5.4. 6.4. 6.4. 90.822. 0. 0. 0. 0. 100.000. CI EN. C. DE. 1. Promedio crecimiento micelial (mm). TE. CA. Fuente: Autor, C = Agar Sabouraud +Antibiótico(Doxiciclina), C (1,2,3 y 4) = Agar Sabouraud + aceite esencial + Antibiótico(Doxiciclina), C + = Agar Sabouraud + Antifungico (Carbendazim). % ICM= porcentaje de inhibición del crecimiento micelial.. IO. Los resultados obtenidos en el trabajo de enfrentamiento de C. gloeosporioides con las concentraciones al 1, 2, 5 y 10 µL/mL aceite esencial de Schinus molle. BL. permitieron observar halos de control de crecimiento desde 70.6 mm hasta el 6.4. BI. mm respectivamente. 9 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(22) AS. BI. O. LO. G. IC. AS. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. CRECIMIENTO DE DIAMETRO MICELIAL C (2µL/ml). C (10µL/ml). C+. CI EN. 80 70 60 50 40 30 20 10 0. DE. DIAMETRO (MM). C ( 5 µL/ml ). C ( 1 µL/ml). CI. C (0 µL/ml). CA. DIA 0. DIA 4. DIA 6. DIA 8. BI. BL. IO. TE. Fig 1. Crecimiento micelial de C. gloeosporioides bajo la acción de diferentes concentraciones de aceite esencial de hojas de S. molle.. 10 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(23) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Tabla 2.. Análisis de varianza (ANOVA) de crecimiento micelial de C.. gloeosporioides a los 8 días, por cada concentración de aceite esencial de hojas de S. molle. Gl 5 12 17. Cuadrado Medio 1790.31 0.842222. Razón-F 2125.69. Valor-P 0.0000. AS. Suma de Cuadrados 8951.54 10.1067 8961.64. IC. Fuente Entre grupos Intra grupos Total (Corregido.). O. LO. G. Existe suficiente base estadísticas con una P < 0.05, para afirmar que existe diferencia significativa entre la media de crecimiento micelial 8 días entre un nivel de tratamiento y otro.. BI. Tabla 3. Pruebas de Múltiple Rangos para crecimiento micelial de C. gloeosporioides a los 8 días, por cada concentración de aceite esencial de hojas de. BI. BL. DE CA. IO. TE. Contraste C - C+ C - C1 C - C2 C - C3 C - C4 C+ - C1 C+ - C2 C+ - C3 C+ - C4 C1 - C2 C1 - C3 C1 - C4 C2 - C3 C2 - C4 C3 - C4. Casos 3 3 3 3 3 3. Media 0.0 6.4 22.8 24.4 27.6 69.7333. CI EN. Tratamientos C+ C4 C3 C2 C1 C. CI. AS. S. molle.. Sig. * * * * * * * * * * * * * *. Diferencia 69.7333 42.1333 45.3333 46.9333 63.3333 -27.6 -24.4 -22.8 -6.4 3.2 4.8 21.2 1.6 18.0 16.4. Grupos Homogéneos X X X X X X. +/- Límites 2.51725 2.51725 2.51725 2.51725 2.51725 2.51725 2.51725 2.51725 2.51725 2.51725 2.51725 2.51725 2.51725 2.51725 2.51725. * indica una diferencia significativa.. 11 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(24) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. IV.. DISCUSION. AS. Los resultados obtenidos en el trabajo de enfrentamiento de C. gloeosporioides con las concentraciones al 1, 2, 5 y 10 µL/mL aceite esencial de Schinus molle. IC. permitieron observar halos de control de crecimiento desde 70.6 mm hasta el 6.4. G. mm respectivamente.. LO. Los valores obtenidos en la Tabla 1, muestran la capacidad del aceite esencial de Schinus molle para inhibir o detener el crecimiento de C. gloeosporioides,. O. comportándose como efectivo controlador biológico: el “molle” presenta propiedad. BI. antibacteriana y antifúngica y al menos en condiciones experimentales, logra la. AS. inhibición micelial.19. CI. Es necesario mencionar que las concentraciones del aceite esencial de las hojas de. CI EN. S. molle empleadas en la experimentación: 1, 2, 5 y 10 µL/mL, presenta diferencias significativas (Tabla 2), lo cual indica que al usar cualquiera de estas concentraciones se obtendría una inhibición de 60.4, 65.0, 67.3 y 90.8 %. DE. respectivamente.. En la Tabla 3 nos muestra el análisis estadístico de pruebas de Múltiple Rangos. CA. para crecimiento micelial de C. gloeosporioides a los 8 días, por cada concentración de aceite esencial de hojas de S. molle. Indicando que el crecimiento micelial de C.. IO. TE. gloeosporioides a los 8 días tiene diferencias significativas.. BL. Muchas especies vegetales producen aceites esenciales los cuales juegan un papel importante en los mecanismos de defensa contra el hongo Colletotrichum. Se ha. BI. demostrado que los aceites esenciales y sus compuestos tienen un efecto fungicida. Son inocuos para el medio ambiente, para los consumidores y para el control de enfermedades postcosecha. La necesidad de reducir el uso de químicos sintéticos en la agricultura ha incrementado el interés por la posible aplicación de aceites esenciales para el control biológico patógeno20, 21. En otras investigaciones de aceite. 12 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(25) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. esencial de Schinus molle contra Candida albicans se reporta acción inhibitoria mayor a 18 mm20, 21. Cabe señalar, que las diferencias observadas en la curva de crecimiento (Fig. 1) velocidad de crecimiento micelial de podría verse afectadas también por factores ambientales, cantidad de inóculo, y la susceptibilidad del. AS. hongo22,18.. IC. Es necesario mencionar que las concentraciones del aceite esencial empleadas en la. G. experimentación: 1, 2, 5 y 10 µL/mL presenta diferencias significativas (Tabla 2),. LO. lo cual indica que al usar cualquiera de estas concentraciones se obtendría una. O. inhibición alta de 60.4, 65.0, 67.3 y 90.8 % respectivamente. S. molle, tiene una alta. BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI EN. CI. AS. BI. capacidad de acción.. 13 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(26) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. V.. CONCLUSIONES. En relaciones a las concentraciones realizadas se concluye lo siguiente. El aceite esencial de las hojas Shinus molle “molle” inhibe el crecimiento micelial. IC. AS. de C. gloeosporioides.. La inhibición del crecimiento micelial de Colletotrichum gloeosporioides está en. LO. G. relación directa a la concentración del aceite esencial de Shinus molle.. O. El porcentaje de inhibición micelial de Colletotrichum gloeosporioides en la. BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI EN. CI. AS. BI. concentración de 10 µL/mL fue de 90.8%.. 14 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(27) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. VI.. RECOMENDACIONES. Se recomienda profundizar respecto a la utilización del aceite esencial de las hojas de S molle con concentraciones más altas por ejemplo entre 10 y 20 µL/mL.. AS. Aplicar, en situ, el aceite esencial de S. molle en un cultivo sensible al. IC. Colletotrichum gloeosporioides.. BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI EN. CI. AS. BI. O. LO. G. Determinar la actividad fungicida y fungistática.. 15 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(28) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. VII.. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS. 1. Alba A, Bonilla P, Arroyo J. Actividad cicatrizante de una pomada con Aceite Esencial de Schinus molle l. “molle” en ganado vacuno con heridas infectadas. AS. y en ratones. Universidad Nacional Mayor de San Marcos. Tesis para optar el. IC. título de Quimico Farmaceutico. Lima – Perú; 2009.. G. 2. Gundidza M. La actividad antimicrobial del aceite esencial de Schinus molle. LO. linn. Revista Médica Africian. Brasil.1993; 39(11): 231-234.. O. 3. Rodríguez A, Egúsquiza R. Efecto del molle (Schinus molle) y sus extractos en. BI. el control de Phthorimaea operculella en almacenes de papa. Resúmenes y. AS. programa de la 38ª Convención Nacional de Entomología, Chincha, Perú.. CI. Sociedad Entomológica del Perú.1996. pp. 23.. CI EN. 4. Yelasco A. Medicinal Plants from Pampallakta: an Andean Community in Cuzco (Perú). Fitoterapia.1995;66 (5): 447-462. 5. Garcia R. Especies y subspecies de Erwinia en Actividad Biocontroladora de. DE. hongos de suelo sobre microorganismos fitopatógenos. Tesis para optar al. CA. grado de Biólogo. Universidad del Azuay, Cuenca, Ecuador.2000. 6. Kalemba D. Kunicka A. Antibacterial and antifungical properties of essential. TE. oils. Current Medicinal Chemistry. 2003; 10:813-829.. IO. 7. SuhrK, Nielsen P. Antifungal activity of essential oils evaluated by two. BL. different application techniques against rye bread spoilage fungi. Journal of. BI. Applied Microbiology. 2003; 94, pp. 665 – 674.. 8. Whitelaw W, Curtis S, Huang R, Steel C, Blandchard C, Roffey P. Phylogenetic relationships and pathogenicity of Colletotrichum acutatum isolates from grape in subtropical Australia. Plant Pathology.2007; 56(3): 448463.. 16 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(29) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 9. Freeman S, Minz D, Jurkevitch E, Maymon M, Shabi E. Molecular analyses of Colletotrichum species from almond and other fruits. Phytopathology. 2000;90(6):608-614.. AS. 10. Prusky D, Freeman S, Dickman M. Colletotrichum. Host specificity, pathology, and host-pathogen interaction. St. Paul: America Phytopathological. G. IC. Society Press.2000. pp.393.. LO. 11. Talhinhas P, Sreeniva Saprasad S, Neves J, Olivera H. Molecular and phenotypic analyses reveal association of diverse Colletotrichum acutatum. O. groups and a low level of C. gloeosporioides with olive anthracnose. Applied. BI. and Enviromental Microbiology. 2005; 71(.6): 2.987-2.998.. AS. 12. Rodríguez L, González Prieto J, Mayek N. La Infección de Colletotrichum gloeosporioides (Penz.) Penz.Y Sacc. En Aguacatero (Persea americana. CI EN. 2009; 27(1): 53-63.. CI. Mill.): Aspectos Bioquímicos y Genéticos. Revista Mexicana de Fitopatología,. 13. Podila GK, Rogers LM, Kolatukudy PE. Chemical signal from avocado surface. DE. wax trigger germination and appresorium formation in Colletotrichum gloeosporioides. Plant Physiology 1993;103: 267-272.. CA. 14. Merck. Microbiology Manual. 12thedition. Merck KgaA. Darmstadt, Germany;. TE. 2005.. 15. Cano J, Guarro J, Gené J. Molecular and morphological identification of. IO. Colletotrichum species of clinical interest. Journal of Clinical Microbiology,. BL. 2008; 42 (6): 2.450-2.454.. BI. 16. Montes R, Cruz V, Martínez G, Sandoval G, García R. Propiedades Antifúngicas en Plantas Superiores. Análisis Retrospectivo de Investigaciones. Rev Mexicana Fitopatol, 2000;18(2): 125-131. 17 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(30) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 17. Vargas A, Bottia E. Estudio de la composición química de los aceites esenciales de seis especies vegetales cultivadas en los Municipios de Bolívar y el Peñón. Santander, Colombia. Proyecto de grado de Ingeniero Quimico., Universidad Industrial de Santander Facultad de Ciencias, Escuela de Química;. AS. 2008. P. 201.. IC. 18. Rodríguez M, Chico J. Efecto antifúngico in vitro del extracto etanólico de. G. chamico, Datura stramonium, sobre Fusarium oxysporum asparagi y. LO. Stemphylium vesicarium aislados del cultivo de espárrago, Asparagus. O. officinalis, de Moche, Trujillo (Perú). REBIOL, 2012; 32(1): 96-103.. BI. 19. Ramos de León N, Sanabria M, Rodríguez D, Ulacio D. Efecto del extracto etanólico de albahaca genovesa (Ocimum basilicum var. Genovese) sobre. AS. Cercospora apii Fressen y el tizón temprano del celery (Apium graveolens).. CI. Científica UDO Agrícola, 2012; 12(2): 472-478. CI EN. 20. Díaz C, Quesada S, Brenes O, Aguilar G, Cicció, J. Chemical composition of Schinus molle essential oil and its cytotoxic activity on tumour cell lines,. DE. Natural Product Research. 2008; 22(17): 1521-1534.. 21. Morales R. Estudio de la extracción del aceite esencial de la semilla del. CA. Schinus molle Linneo a escala banco. [Tesis, para optar el título de ingeniero. TE. químico]. Lima: Universidad Nacional Mayor de San Marcos; 2000 22. García GRM, Palou GE. Mecanismos de acción antimicrobiana de timol y. IO. carvacrol sobre microorganismos de interés en alimentos. Temas selectos de. BL. ingeniería de alimentos Universidad de las Américas-Puebla. México, 2008;. BI. 2(2): 41-51.. 18 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(31) O. LO. G. IC. AS. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI EN. CI. AS. BI. ANEXOS. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(32) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. ANEXO 1.. Medidas del diámetro de la colonia del hongo Colletotrichun. gloeosporioides a partir del cuarto día. 1° lectura. Con tres repeticiones. Concentración / tiempo. C4 (10 µL/mL). ANEXO 2.. IC. LO. G. 40 42 41 20 18 17 13 11 12 11 9 10 5 3 4 0 0 0. CI EN. C+. O. C3 (5 µL/mL). 40 42 41 19 17 18 13 11 12 10 8 9 6 4 5 0 0 0. BI. C2 (2 µL/mL). 38 40 39 20 18 17 14 12 13 12 10 9 5 3 4 0 0 0. AS. C1 (1 µL/mL). 40 42 41 18 16 17 12 10 11 11 9 10 5 3 4 0 0 0. CI. 40 42 41 11 9 10 13 11 12 12 10 11 5 3 4 0 0 0. C (0 µL/mL). PROMEDIO (mm) 39.6 41.6 40.6 17.6 15.6 15.8 13 11 12 11.2 9.2 9.8 5.2 3.2 4.2 0 0 0. AS. MEDIDAD DE DIAMETROS (mm). Medidas del diámetro de la colonia del hongo Colletotrichun. gloeosporioides, sexto día 2° lecturas. Con tres repeticiones.. DE. Concentración. CA. C (0 µL/mL). TE. C1 (1 µL/mL). BL. IO. C2 (2 µL/mL). BI. C3 (5 µL/mL). C4 (10 µL/mL). C+. 49 51 50 21 19 20 18 16 17 14 12 13 6 4 5 0 0 0. medidas de diametro (mm). 41 43 42 23 21 22 18 16 17 14 12 13 7 5 6 0 0 0. 45 47 46 22 20 21 17 15 16 13 11 10 5 3 4 0 0 0. 43 45 44 24 22 23 18 16 17 13 12 11 6 4 5 0 0 0. PROMEDIO (mm). 43 45 44 22 20 21 18 16 17 15 13 14 6 4 5 0 0 0. 44.2 46.2 45.2 22.4 20.4 21.4 17.8 15.8 16.8 13.8 12 12.2 6 4 5 0 0 0. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(33) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. ANEXO 3. Medidas del diámetro de la colonia del hongo Colletotrichun gloeosporioides, octavo día. 3° lecturas. Con tres repeticiones.. C3 (5 µL/mL). AS. C4 (10 µL/mL). ANEXO 4.. AS. IC. CI EN. CI. C+. Promedios (mm) 68.6 70.6 70 28.6 26.6 27.6 25.4 23.4 24.4 23.8 21.8 22.8 7.4 5.4 6.4 0 0 0. G. C2 (2 µL/mL). O. C1 (1 µL/mL). BI. C (0 µL/mL). Medidas de diámetro micelial (mm) 68 69 68 71 67 70 71 70 73 69 71 70 69 72 68 28 29 28 30 28 26 27 26 28 26 27 28 27 29 27 27 25 26 24 25 25 23 24 22 23 26 24 25 23 24 25 23 23 24 24 23 21 21 22 22 24 22 22 23 23 8 8 7 7 7 6 6 5 5 5 7 7 6 6 6 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0. LO. Concentración / tiempo. Velocidad del crecimiento de diámetro micelial de la colonia del hongo. Colletotrichun gloeosporioides, cuarto día 1° lecturas. Tratamientos. Crecimiento Micelial ( 4 dias) C1 C2 C3 C4 (1µL/mL) (2 µL/mL) (5µL/mL) (10µL/mL) 13 17.6 11.2 5.2 11 15.6 9.2 3.2 12 15.8 9.8 4.2. DE. CA. Repetiones. 40.6. 16.3. 12. 10.1. 4.2. C+. 0 0 0 0. IO. TE. 1 2 3 ̅X 1. C (0 µL/mL) 39.6 41.6 40.6. ANEXO 5.. Velocidad del crecimiento de diámetro micelial de la colonia del hongo. BL. Colletotrichun gloeosporioides, sexto día. 2° lecturas.. BI. Tratamientos. Repetiones. 1 2 3 ̅X 2. C (0 µL/mL) 44.2 46.2 45.2. C1 (1µL/mL) 22.4 20.4 21.4. 45.2. 21.4. Crecimiento Micelial (6 días) C2 C3 C4 (2 µL/mL) (5µL/mL) (10µL/mL) 17.8 13.8 6.0 15.8 12.0 4.0 16.8 12.2 5.0 16.8. 12.7. 5.0. C+. 0 0 0 0. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(34) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. ANEXO 6.. Velocidad del crecimiento de diámetro micelial de la colonia del hongo. Colletotrichun gloeosporioides, octavo día. 3° lecturas. crecimiento micelial (mm) 8 días C1 C2 C3 C4 (1 µL/mL) (2µL/mL) (5µL/mL) (10µL/mL). C (0 µL/mL). 68.6 70.6 70.0. 28.6 26.6 27.6. 25.4 23.4 24.4. 23.8 21.8 22.8. 7.4 5.4 6.4. 69.7. 27.6. 24.4. 22.8. 6.4. 0 0 0 0. LO. G. 1 2 3 ̅ 3 X. C+. IC. Repetiones. AS. Tratamientos. BI. C4 (10µL/mL). C+. 12 16.8 24.4. 10.1 12.7 22.8. 4.2 5 6.4. 0 0 0. Porcentaje de inhibición del crecimiento micelial (ICM) del aceite esencial. DE. ANEXO 8.. 27.6. C3 (5µL/mL). CI EN. 69.7. C2 (2µL/mL). AS. X3. C1 (1 µL/mL) 16.3 21.4. CI. repeticiones. C (0 µL/mL) 40.6 X1 45.2 X2. O. ANEXO 7. Velocidad del crecimiento de diámetro micelial promedio con las tres. de las hojas de Schinus molle, sobre el crecimiento micelial de C. gloeosporioides en. TE. CA. condiciones in vitro.. 59.8 70.4 75.1 89.7 100. 52.7 62.8 71.9 88.9 100. 60.4 65.0 67.3 90.8 100. BI. BL. IO. C (0 µL/mL) C1 (1 µL/mL) C2 (2µL/mL) C3 (5µL/mL) C4 (10µL/mL) C+. % Inhibición del Crecimiento Micelial (ICM) 4 DIAS 6 DIAS 8 DIAS. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(35) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DISEÑO EXPERIMENTAL: ANOVA Simple - Crecimiento Micelial 8 Días por Tratamientos. Variable dependiente: Crecimiento Micelial 4 Días. AS. Factor: Tratamientos: grupo control positivo (C), 4 grupos experimentales 1, 2, 5,. IC. 10µL/ml (C1, C2, C3 y C4) y un grupo control negativo con carbendazim (C+).. G. Número de observaciones: 18. CA. DE. CI EN. CI. AS. BI. O. LO. Número de niveles: 6. ANEXO 9. Comparación de medias para el crecimiento micelial de C.. BI. BL. IO. TE. gloeosporioides en condiciones invitro en 8 días para los diferentes tratamientos con aceite esencial de las hojas de S molle.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(36) BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI EN. CI. AS. BI. O. LO. G. IC. AS. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. ANEXO 10.. Identificación taxonómica en el Herbarium Truxillensis (HUT). Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(37) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. ANEXO 11. Flujograma: Efecto de la concentración del aceite esencial de las hojas de Schinus molle sobre el crecimiento micelial de Colletotrichum gloeosporioides in vitro. MATERIAL Y METODOS. IC. AS. MATERIAL BIOLOGICO. Obtención de C. gloeosporioides Poporcionado por el laboratorio de Fitopatología: 15-09-16.. DE. CI EN. CI. Del cultivo madre, repicar por puntura en OGA (pureza y viabilidad del patógeno).. 4 grupos experimentales, 1 grupo control positivo, 1 grupo control negativo. LO. G. Reactivar el hongo. Diseño experimental. seleccion hojas S. molle. O. sanas (sin signos o síntomas de enfermedad o ataque de plagas).. BI. Agar Sabouraud, (6,5g/100mL) esterilizar 121°C/15lb/15min, adicionar doxiciclina (0,1mg/mL), servir en placas esteriles.. Identificación taxonómica en el Herbarium Truxillensis (HUT). AS. Preparación del medio de cultivo. Colección S. molle “molle” Distrito de Otuzco: 14-08-16. Obtención del aceite esencial Según método de arrastre de vapor de agua.. Destilación por arrastre de vapor Destilar del material vegetal, (500g) los AE por 15 minutos.. Recoger en frascos ambar y conservar en refrigeración.. CA. grupo control positivo. TE. Sin AE, ni Carbendazin Grupos experimentales:. IO. AE. BI. BL. 0,1 µL/mL 0,2 µL/mL 0,4 µL/mL 0,8 µL/mL Incubación. grupo control negativo (con carbendazim (0,2 µL/mL).. 4, 6 y 8 días / T°ambiente Medición del crecimiento/24h RESULTADOS Registrar datos de medición crecimiento micelial del hongo.. de. Realizar Tablas y figuras e interpretar dichos resultados. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(38) IO. TE. CA. DE. CI EN. CI. AS. BI. O. LO. G. IC. AS. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. El aceite esencial se obtuvo a partir del material vegetal fresco de las especies S. molle. se sometió a una extracción por el método destilación por arrastre de vapor de agua.. BI. BL. ANEXO 12.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(39) BI. O. LO. G. IC. AS. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AS. ANEXO 13. Colletotrichum gloeosporioides fue proporcionado por el laboratorio de. CI. fitopatología, del departamento Académico de Ciencias Biológicas,. BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI EN. Facultad de Ciencias Biológicas, de la Universidad Pedro Ruiz Gallo.. ANEXO 14. Preparación del medio de cultivo Agar Sabouraud Difco.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(40) AS. BI. O. LO. G. IC. AS. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. CI. ANEXO 15. Dispensando el medio de cultivo en las placas y tubos para repicar el. BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI EN. cultivo madre de C. gloeosporioides.. ANEXO 16. Reactivación del hongo C. gloeosporioides del cultivo madre. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(41) BI. O. LO. G. IC. AS. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. ANEXO 17. Reactivación del hongo C. gloeosporioides del cultivo madre para. AS. sembrar en las diferentes concentraciones del aceite esencial de hojas S.. BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI EN. CI. molle.. ANEXO 18. Se dispensó el medio de Agar Sabouraud Difco esterilizado a 121. °C/15lb/15 min, en placas Petri.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(42) BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI EN. CI. molle, agregado al medio.. Aceite esencial de las hojas de S.. AS. ANEXO 19.. BI. O. LO. G. IC. AS. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. ANEXO 20. Medición del diámetro de la colonia del hongo C. gloeosporioides (vista base placa).. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(43) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. B. C. D. DE. CI EN. CI. AS. BI. O. LO. G. IC. AS. A. F. BI. BL. IO. TE. CA. E. ANEXO 21. Crecimiento micelial de C. gloeosporioides cuando se enfrenta a las diferentes concentraciones de aceite esencial de S. molle. Después de 4 días; vista frontal: A. placa control C, B. C1 (1 µL/mL), C. C2 (2 µL/mL), D. C3 (5 µL/mL), E. C4 (10 µL/mL), F. placa con anti fúngico.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(44) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. B. C. D. DE. CI EN. CI. AS. BI. O. LO. G. IC. AS. A. F. BI. BL. IO. TE. CA. E. ANEXO 22. Crecimiento micelial de C. gloeosporioides cuando se enfrenta a las diferentes concentraciones de aceite esencial de S. molle. Después de 8 días; vista frontal: A. placa control C, B. C1 (1 µL/mL), C. C2 (2 µL/mL), D. C3 (5 µL/mL), E. C4 (10 µL/mL), F. placa con anti fúngico C+.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(45) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. A. D. DE. CI EN. CI. AS. BI. C. O. LO. G. IC. AS. B. F. BI. BL. IO. TE. CA. E. ANEXO 23. Crecimiento micelial de C. gloeosporioides cuando se enfrenta a las diferentes concentraciones de aceite esencial de S. molle. Después de 8 días; vista base placa: A. placa control C, B. C1 (1 µL/mL), C. C2 (2 µL/mL), D. C3 (5 µL/mL), E. C4 (10 µL/mL), F. placa con anti fúngico C+.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

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