Efecto In Vitro De 04 Derivados Comerciales Del Cacao Sobre El Crecimiento Del Streptococcus Mutans

Texto completo

(1)Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE MEDICINA. E. IN. FO R. MA TI. CA. ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE ESTOMATOLOGÍA. TE. MA S. “EFECTO IN VITRO DE 04 DERIVADOS COMERCIALES DEL CACAO SOBRE EL CRECIMIENTO DEL STREPTOCOCCUS MUTANS”. TESIS PARA OPTAR EL GRADO DE. DE. SI S. BACHILLER EN ESTOMATOLOGÍA. AUTOR:. OF. IC. IN. A. ROSAS URBINA, MARCO ANTONIO. TRUJILLO – PERÚ 2009. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(2) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. I. RESUMEN Este trabajo se realizó en el laboratorio de Microbiología Médica de la. CA. Facultad de Medicina de la Universidad Nacional de Trujillo en el año. MA TI. 2008. Su propósito fue el análisis del efecto “in Vitro” de 04 derivados comerciales del cacao sobre el crecimiento del Streptococcus mutans; para ello, fue necesario evaluar de manera independiente los efectos del. FO R. cacao en polvo, manteca de cacao, chocolate no azucarado y el chocolate. IN. azucarado sobre el crecimiento de Streptococcus mutans y luego hacer una comparación entre ellos. Se realizó un sembrado de Streptococcus. E. mutans en 27 placas petri y se les adicionó discos de difusión preparados. MA S. con diluciones de los derivados de cacao a distintas concentraciones para los grupos experimentales y con agua bidestilada como grupo control. Las. TE. placas petri fueron incubadas a 37 °C en microanaerobiosis por espacio. SI S. de 18 horas. Al análisis posterior se obtuvo la generación de halos. DE. inhibitorios de pequeña longitud para el cacao en polvo, chocolate no azucarado y chocolate azucarado; y la generación de halos de gran. A. longitud para la manteca de cacao; así mismo la no generación de. IN. inhibición alguna para el grupo de control con lo que se concluyó que los. OF. IC. 04 derivados comerciales del cacao presentan efecto inhibitorio sobre el crecimiento de Streptococcus mutans “in Vitro”.. Palabras clave: Cacao, derivados del cacao, inhibición de crecimiento bacteriano, Streptococcus mutans.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(3) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. II. ABSTRACT This present work has been done in the Microbiology Laboratory of the. CA. Medical School of the “Universidad Nacional de Trujillo” in the 2008. It. of cacao over the Streptococcus mutans growth.. MA TI. purpose was the analysis of the “in Vitro” effect of 04 commercial derivates. For that it was necessary to evaluate in an independent way the effects of. FO R. cacao powder, cacao fat, no sugar chocolate and sugar chocolate over the growth of Streptococcus mutans and then make a comparison between. IN. them.. E. A seeding was performed in 27 petri dishes with diffusion discs of the. MA S. cacao derivates in different concentration for the experimental group and bi-distilled water for the control group.. TE. The petri dishes were incubated at 37 ºC in microaerobiosis for 18 hours. SI S. and result in generation of low width inhibition rings for the cacao powder, no sugar chocolate and sugar chocolate and the generation of a high. DE. width for the cacao fat as well the no generation of inhibition ring in any of. A. the control groups with the conclusion that the 04 chocolate derivates. OF. IC. Vitro”.. IN. present an inhibitory effect over the Streptococcus mutans growth “in. Keywords: Cacao, derivates of cacao, inhibition of bacterial growth,. Streptococcus mutans.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(4) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. EVALUACIÓN DE LA TESIS El Jurado deberá: a.. Consignar las observaciones y objeciones pertinentes relacionados a los. Anotar el calificativo final. c.. Firmar los tres miembros del jurado. MA TI. b.. CA. siguientes ítems. TESIS:........................................................................................................................ FO R. ..................................................................................................................................... 1.. DE LAS GENERALIDADES :. IN. ..................................................................................................................................... E. El Título:........................................................................................................ MA S. ........................................................................................................................ Tipo de Investigación:................................................................................... 2.. TE. ......................................................................................................................... DEL PLAN DE INVESTIGACIÓN :. SI S. Antecedentes:................................................................................................ Justificación:.................................................................................................. DE. Problema:...................................................................................................... ......................................................................................................................... A. Objetivos:....................................................................................................... IN. Hipótesis:........................................................................................................ IC. Diseño de Contrastación:............................................................................. OF. Tamaño Muestral:....................................................................................... Análisis Estadístico:..................................................................................... 3. RESULTADOS:................................................................................................... 4. DISCUSIÓN: .................................................................................................................................... ..................................................................................................................................... Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(5) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. 5. CONCLUSIONES: ................................................................................................................................... 6. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS:............................................................. CA. ............................................................................................................................... 7. RESUMEN:........................................................................................................... 8. RELEVANCIA DE LA INVESTIGACIÓN:. MA TI. ................................................................................................................................ FO R. ............................................................................................................................... 9. ORIGINALIDAD: ................................................................................................ 10.1. IN. 10. SUSTENTACION Formalidad:. Exposición:. MA S. 10.2. E. ................................................................................................. ................................................................................................. 10.3. Conocimiento del Tema:. SI S. TE. ............................................................................ CALIFICACIÓN:. DE. (Promedio de las 03 notas del Jurado). Nombre. IN. A. JURADO:. Presidente: Dr....................................... Código Docente ……………. Firma ………………... OF. IC. Grado Académico:……………………………………….………………… Secretario: Dr....................................... ……………. .…….……….... Grado Académico: ………………………………………………………… Miembro: Dr....................................... .……………. ……..….……... Grado Académico: ……………………………………………….………. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(6) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. RESPUESTAS DE TESISTAS A OBSERVACIONES DEL JURADO El Tesista deberá responder en forma concreta a las observaciones del jurado. CA. a manuscrito en el espacio correspondiente:. MA TI. a. Fundamentando su discrepancia. b. Si está de acuerdo con la observación también registrarla.. FO R. c. Firmar. TESIS:....................................................................................................................... ..................................................................................................................................... DE LAS GENERALIDADES:. MA S. 1.. E. IN. ..................................................................................................................................... El Título:....................................................................................................... ......................................................................................................................... TE. Tipo de Investigación:................................................................................... 2.. SI S. ......................................................................................................................... DEL PLAN DE INVESTIGACIÓN:. DE. Antecedentes:................................................................................................ Justificación:.................................................................................................. A. Problema:....................................................................................................... IN. ......................................................................................................................... IC. Objetivos:....................................................................................................... OF. Hipótesis:....................................................................................................... Diseño de Contrastación:............................................................................ Tamaño Muestral:....................................................................................... Análisis Estadístico:..................................................................................... 3. RESULTADOS: .................................................................................................. 4. DISCUSIÓN: ........................................................................................................ Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(7) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. ............................................................................................................................... 5. CONCLUSIONES: ............................................................................................. 6. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS:............................................................. CA. ............................................................................................................................... 7. RESUMEN:........................................................................................................... 8. RELEVANCIA DE LA INVESTIGACIÓN:. MA TI. ................................................................................................................................ FO R. ............................................................................................................................... 9. ORIGINALIDAD: ............................................................................................... IN. 10. SUSTENTACIÓN 10.1. Formalidad:. 10.2. Exposición:. MA S. E. ............................................................................................... TE. ............................................................................................... SI S. 10.3. Conocimiento del Tema:. ................................................... Firma Nombre:. OF. IC. IN. A. DE. ............................................................................................... Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(8) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. ÍNDICE. CA. Pág. DEDICATORIA. MA TI. AGRADECIMIENTOS RESUMEN. INTRODUCCIÓN. II.. MATERIAL Y MÉTODO. III.. RESULTADOS. IV.. DISCUSIÓN. V.. CONCLUSIONES. VI.. 1 - 11. 12 - 21. 22 - 32. 33 - 35. 36 - 37. A. DE. SI S. TE. MA S. E. IN. I.. IN. FO R. ABSTRACT. OF. IC. RECOMENDACIONES. VII.. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS. VIII. ANEXOS. 38. 39 - 43. 44 - 55. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(9) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. 1. I. INTRODUCCIÓN. CA. 1.1. ANTECEDENTES Y JUSTIFICACIÓN DEL PROBLEMA: La caries, según Bhaskar, es la enfermedad más común del ser humano. 1. MA TI. F. V. Domínguez la describe como una secuencia de sucesos de destrucción localizada en los tejidos duros dentarios que evoluciona en. FO R. forma progresiva e irreversible y que comienza en la superficie del diente y luego avanza en profundidad. 2. IN. Centrándonos en los microorganismos responsables de la caries dental,. E. la evidencia actual apoya la idea de que la iniciación de la caries está. MA S. asociada a Estreptococos acidogénicos específicos. 3. TE. Cuantiosos estudios longitudinales han intentado demostrar una relación. DE. lesiones cariosas.. SI S. directa entre la presencia de Streptococcus mutans y la aparición de. A. Rimondia S. Percival y col. en sus investigaciones epidemiológicas sobre. IN. el tema, efectuaron comparaciones de muestras de placa a partir de dos. IC. poblaciones humanas, una con alta y la otra con baja incidencia de caries. OF. demostrando una relación entre la presencia de Streptococcus mutans y la incidencia de lesiones cariosas.. En el estudio, el 71% de fisuras. cariadas tenían cuentas de Streptococcus mutans mayores al 10% del total de microorganismos mientras que el 70% de fisuras libres de caries no tenían ninguna cuenta perceptible. 4. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(10) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. 2. Newman en sus investigaciones obtiene datos que muestran cierta discrepancia con los estudios de Rimondia S. Percival y col., en cuanto a que; aunque la dominación de un sitio con los Streptococcus mutans. CA. ocurre frecuentemente antes de la iniciación de caries, un alto conteo de. MA TI. Streptococcus mutans se encuentra más a menudo después de la ocurrencia de caries y más específicamente en las profundidades de la. FO R. lesión cariosa. 3. IN. Esto permite concluir que ninguna especie parece estar asociada únicamente al inicio de lesiones cariosas, es probable que éste sea el. E. resultado de un ataque combinado de todos los microorganismos. MA S. generadores de ácido de la placa, pero no hay duda de que el Streptococcus mutans es una de las bacterias de mayor potencial. TE. acidogénico y virulencia de la placa dental evidenciando así su gran. DE. SI S. importancia en la aparición de lesiones cariosas.1- 4. La ciencia médica ha estado siempre en la constante búsqueda de. IN. A. insumos y productos con propiedades benefactoras para la salud, que ser incorporados en la alimentación habitual de la persona. IC. pudiesen. OF. humana, dentro de una dieta equilibrada y en cantidades moderadas. El cacao, ha sido estudiado por la medicina desde antaño, y en su extenuante. investigación. se. ha. logrado. evidenciar. numerosas. propiedades medicinales que van desde la mejora del estado nutricional hasta su uso a modo de agente preventivo y coadyuvante en el. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(11) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. 3. tratamiento. de enfermedades crónico degenerativas como ciertas. afecciones cardíacas y la diabetes mellitus. 5 – 9 En el campo de la ciencia estomatológica, desde tiempos remotos han. CA. surgido controversias en cuánto al potencial cariogénico de determinados. MA TI. alimentos y el cariostático de otros, teniendo como prejuicio, que toda sustancia manejada en la constitución de golosinas está considerada. FO R. dentro del grupo de los alimentos cariogénicos.. ha. sido. siempre. motivo. de. IN. Es así que, el cacao, ingrediente principal del chocolate y otros derivados, controversia,. ya. que. permanecen. E. discrepancias en cuánto a su potencial cariogénico por la imagen popular. MA S. que siempre ha imperado y por otra parte, en cuánto a. su potencial. cariostático que numerosos estudios han intentado demostrar mediante. SI S. TE. experimentos de diversa índole. 10 – 16. DE. Una de las más antiguas investigaciones relacionadas; el experimento de Vipeholm (Suecia) en el año 1954, en el que un total de 436 pacientes. A. fueron estudiados durante 5 años, intentó establecer la cariogenicidad de. IN. los alimentos con hidratos de carbono. En éste, un grupo control. OF. IC. consumía una dieta estándar mientras que el grupo experimental consumía la misma dieta suplementada con diferentes tipos de hidratos de carbono durante y entre las comidas; dentro de la realización de la investigación se encontró qué el grupo de pacientes que recibió dosis diarias de chocolate entre comidas obtuvo mayor conteo de caries que el. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(12) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. 4. grupo de control, pero a la vez, éstos produjeron menos cantidad de caries que aquellos con un consumo de toffes y caramelos como. CA. suplemento en su dieta. 10. MA TI. Stralfors en el año l966, publicó un estudio en el cuál se incorporó en la dieta de hámsteres extracto de cacao. Según informa su experimento el chocolate redujo la ocurrencia de caries dental en los hámsteres a los. IN. FO R. cuales se agregó el extracto comparados con el grupo de control.11. Rozeik y col. encontraron en sus experimentos con ratas blancas una cifra. E. considerablemente menor de caries dentales en los animales alimentados. MA S. con una dieta que contenía la ceniza de semilla de cacao que en los. TE. animales del grupo control desprovistos de dicha dieta.12. SI S. Estas investigaciones condujeron a muchos autores a concluir que la ceniza de la semilla de cacao es inhibidora de la formación de caries. Con. DE. el tiempo, estudios más recientes han intentado esclarecer si existe una verdadera relación entre los componentes del cacao y el efecto. IC. IN. A. cariostático. 13 – 16. OF. En el año 2000 T. Ooshima y col intentaron demostrar la actividad inhibitoria del extracto de la cáscara del haba del cacao en la caries dental. realizando estudios tanto “in Vitro” como en animales de experimentación. Este trabajo aisló Streptococcus mutans y Streptococcus sobrinus mediante caldos de cultivo selectivo e intentó examinar el efecto del. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(13) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. 5. extracto de cáscara del haba del cacao en el crecimiento celular de las bacterias, así como la producción de ácido y adherencia celular de las mismas. Los resultados arrojaron que el extracto del cacao inhibió el celular de Streptococcus mutans en un 69%. CA. crecimiento. y del. MA TI. Streptococcus sobrinus en un 72%. Asimismo la producción de ácido se vio afectada arrojando un resultado de un Ph de 4.2 en el grupo de control contra un Ph de 4.5 en el grupo experimental a las 12 horas de. FO R. tiempo de incubación. La adherencia bacteriana de los microorganismos. IN. se vio también disminuida mediante la evaluación de la síntesis de glucanos insolubles necesarios para ésta,. los resultados demostraron. E. una supresión del 15%. Para la investigación en animales se utilizó 75. MA S. ratas que fueron divididas al azar en 5 grupos para su estudio, a las mismas les fue administrada una dieta usual y el aditamento de agua con. TE. diversas concentraciones del extracto de la cáscara del haba del cacao.. SI S. Los resultados del experimento mostraron una inhibición de caries en. DE. aquellos grupos que recibieron una concentración del extracto de cacao. A. mayor al 5%. 13. IN. En el mismo año los autores realizaron una investigación similar pero esta. OF. IC. vez utilizaron extracto de la masa del cacao, el principal componente del chocolate, en lugar de la cáscara de haba del anterior experimento. En contraposición. al. anterior. estudio. se. encontraron. valores. poco. significativos “in Vitro” en cuanto a la inhibición del crecimiento y producción de ácido de los Streptococcus mutans, pero la investigación. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(14) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. 6. arrojó nuevos resultados de importancia. El. extracto de la masa del. cacao redujo la hidrofobicidad de la superficie de las células del Streptococcus mutans, así mismo, se obtuvo una reducción poco. CA. significativa de la adhesividad de los mismos. En el experimento en. conjunto con un. MA TI. animales, esta vez la dieta se basó en extracto de masa de cacao en 40% de sacarosa y agua potable, resultando en. reducción de la caries dental y acumulación de la placa en ratas. FO R. infectadas con Streptococcus sobrinus aunque no de manera significativa.. IN. Esos resultados indicaron a los autores que el extracto de masa del cacao posee cierto potencial anticariogénico pero no lo suficientemente fuerte. MA S. E. como para suprimir la actividad cariogénica de la sacarosa. 13, 14. En el año 2003, Kyoko Ito y col intentaron demostrar las propiedades. TE. anticariogénicas del agua con extracto de cacao disuelto; el experimento. SI S. adicionó un extracto de polvo de cacao disuelto en agua a un modelo de. DE. comida cariogénica y un chocolate blanco que contenía 35% de azúcar. Se seleccionó aleatoriamente cuatro grupos de ratas, el primer grupo no. A. fue infectado por ser el grupo de control, los 3 grupos restantes fueron diariamente por 6 días consecutivos con 0.1ml con una. IN. infectados. OF. IC. suspensión con 4 x 109 unidades formadoras de colonias de Streptococcus sobrinus (resistentes a la estreptomicina) y 50ug de estreptomicina para obtener una flora microbiana oral selectiva. Todos los grupos fueron expuestos al extracto de polvo de cacao disuelto pero la alimentación fue distinta para los grupos; el grupo de control y uno de los. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(15) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. 7. grupos infectados fueron alimentados con una dieta cariogénica libre del chocolate blanco y los 2 grupos restantes infectados con la misma dieta cariogénica y chocolate blanco adicionado. A los 56 días se analizaron los. CA. resultados obteniendo puntajes de caries mediante una plantilla. MA TI. preparada (escala de medición por conteo de lesiones cariosas). El grupo de control obtuvo un puntaje de 10, el grupo infectado sin dieta de chocolate blanco obtuvo un puntaje de 35, mientras que los grupos. FO R. infectados y que fueron alimentados con una dieta rica en chocolate. IN. blanco obtuvieron un puntaje mayor a 10 y menor a 20 en la escala de medición. Estos resultados llevaron a los autores a concluir que existe. de azúcar del mismo.15. MA S. E. una significativa reducción de caries en el chocolate a pesar del contenido. TE. En un estudio similar por Wynfrey Wynn y col, los investigadores utilizaron. SI S. ratas albinas como animales de experimentación. Dividieron los animales. DE. en 3 grupos, un grupo de control y 2 grupos experimentales. Al grupo de control se le alimentó con una dieta con alto contenido de azúcar. Al. A. primer grupo experimental se le agregó 2mg de ceniza de haba de cacao. IN. por cada 100mg de dieta básica. Al segundo grupo experimental se le. OF. IC. agregó además de los 2mg de ceniza de haba de cacao 20mg de margarina vitaminada. Los resultados obtenidos en el experimento fueron; para el primer grupo experimental la no existencia de reducción de caries dental significativa, mientras que en el segundo grupo experimental se obtuvieron resultados significativos de reducción de la misma. Este. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(16) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. 8. experimento llevó a la conclusión de los autores de que la grasa adicionada a la dieta con contenido de cacao es la responsable de efectos. CA. inhibitorios de caries dental. 12. MA TI. En el año 2006, Rimondia y col realizaron un estudio que apuntaba a determinar si los polifenoles del cacao podían interferir con la formación del biofilm por Streptococcus mutans o el Streptococcus sanguinis, así. FO R. como en la formación de ácido del Streptococcus mutans. La actividad. IN. antimicrobiana de los polifenoles fue determinada contra la especie cariogénica (Streptococcus mutans) y la especie que ayuda a su. E. supervivencia (Streptococcus sanguinis) por análisis inhibitorio mínimo de. MA S. concentración. Los dímeros, tetrámeros y pentámeros de polifenol del cacao inhibieron el crecimiento de los Streptococcus sanguinis, mientras. TE. el crecimiento del Streptococcus mutans era inafectado. Sin embargo el. SI S. tratamiento previo de superficies con el pentámero de polifenol del cacao. DE. redujo la formación del biofilm por el Streptococcus mutans en 4 y 24 hrs, mientras que los efectos sobre S. sanguinis eran menores. En cambio, la. A. breve exposición de biofilms preformados al pentámero del polifenol no. IN. tenía ningún efecto significativo. Además también se observó un efecto. OF. IC. reductor de la formación de ácido por el Streptococcus mutans en condiciones similares. Los autores concluyeron que los polifenoles pueden reducir la formación del biofilm por el Streptococcus mutans y el S. sanguinis e inhiben la producción del ácido por el Streptococcus mutans en ausencia de colonias preformadas. 16. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(17) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. 9. Como muestran los antecedentes existen ciertas discrepancias en el. CA. campo en cuánto al efecto del cacao sobre la caries dental.. MA TI. Al haber quedado demostrado por la ciencia médica las propiedades benéficas del cacao y chocolate sobre la salud del ser humano, resulta irónico que en el quehacer odontológico, pudiésemos estar privando a las. FO R. personas de dichas propiedades benefactoras, por la diatriba de sus. IN. supuestos efectos cariogénicos.. Los derivados del cacao como el chocolate, polvo de cacao y otros,. E. poseen como materia básica el cacao mismo y por lo tanto gozan de las. MA S. propiedades básicas inherentes a su componente principal, además, de las añadidas por sus elementos agregados y procesamiento; y por ello, al. TE. ser incluidos en la diatriba mencionada y hacer extensiva su prohibición. SI S. de consumo también posiblemente incurriríamos en la interdicción de un. DE. grupo de alimentos saludables para el ser humano con base en aseveraciones infundadas, por lo cual, resultó necesario evidenciar. A. mediante un estudio propio de la región el efecto de los derivados del. IN. cacao sobre el crecimiento de Streptococcus mutans (al ser considerados. OF. IC. éstos de gran importancia en el origen de la caries dental), a fin de reafirmar o finiquitar las ideas en cuánto a sus efectos cariostáticos o cariogénicos y dilucidar nuestras recomendaciones o censura hacia su consumo no cayendo en una posible privación injusta de alimentos beneficiosos para la salud oral y sistémica del individuo.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(18) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. 10. La importancia científica del presente proyecto se basa en haber generado en nuestro país mediante una investigación propia de la región,. CA. el conocimiento del efecto de 04 derivados comerciales del cacao: cacao. MA TI. en polvo, manteca de cacao, chocolate no azucarado y chocolate azucarado; sobre el crecimiento de los Streptococcus mutans y la difusión de este conocimiento para los fines antes mencionados. Además, con los. FO R. resultados obtenidos, el impacto generado podrá ser aplicado en la. IN. producción de nuevos productos en nuestro medio, derivados del cacao, que contribuyan al control de la caries y mejora de la salud general. MA S. E. además de satisfacer el gusto del paladar más exigente.. TE. La realización del presente pretendió esclarecer el problema:. no azucarado y el chocolate con azúcar sobre el. DE. chocolate. SI S. ¿Cuál es el efecto del cacao en polvo, la manteca de cacao, el. IN. A. crecimiento “in Vitro” del Streptococcus mutans?. OF. IC. Para lo que se formuló la siguiente hipótesis:. El cacao en polvo, la manteca de cacao, el chocolate. no. azucarado y el chocolate con azúcar inhiben el crecimiento de Streptococcus mutans “in Vitro”.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(19) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. 11. 1.2. OBJETIVOS: Los objetivos propuestos fueron los siguientes:. Determinar el efecto “in Vitro” de 04 derivados comerciales del. MA TI. . CA. Objetivo General:. FO R. cacao sobre el crecimiento del Streptococcus mutans.. Objetivos específicos:. Determinar el efecto del cacao en polvo sobre el crecimiento del. . MA S. E. Streptococcus mutans “in Vitro”.. IN. . Determinar el efecto de la manteca de cacao sobre el crecimiento. . SI S. TE. de Streptococcus mutans “in Vitro”.. Determinar el efecto del chocolate no azucarado sobre el. DE. crecimiento de Streptococcus mutans “in Vitro”.. A. Determinar el efecto del chocolate azucarado sobre el crecimiento. IN. . OF. IC. de Streptococcus mutans “in Vitro”.. . Comparar el efecto del cacao en polvo, la manteca de cacao, el. chocolate no azucarado y. el chocolate azucarado sobre el. crecimiento de Streptococccus mutans “in Vitro”.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(20) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. 12. II. MATERIAL Y MÉTODOS 2.1. TIPO Y ÁREA DE ESTUDIO:. CA. La presente investigación es de tipo Experimental y, básica de acuerdo a su orientación.. MA TI. El área de estudio la constituyeron los ambientes de la Sección de Microbiología Médica de la Facultad de Ciencias Médicas de la. FO R. Universidad Nacional de Trujillo durante los meses de octubre y. IN. noviembre del 2008.. E. 2.2. DEFINICIÓN DE LA POBLACIÓN MUESTRAL:. MA S. La población muestral fue creada de acuerdo a los parámetros. TE. microbiológicos experimentales revisados. 18. La unidad de análisis la constituyó el diámetro de halo inhibitorio de. DE. . SI S. 2.3. UNIDAD DE ANÁLISIS. IN. A. los discos de difusión.. IC. 2.4. CRITERIOS DE INCLUSIÓN Placas petri con el caldo de cultivo agar sangre que fueron. OF. . sometidas a un proceso de esterilización.. 2.5. CRITERIOS DE EXCLUSIÓN . Placas petri que hubiesen. presentado algún tipo de daño o. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(21) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. 13. rajadura en su estructura durante el proceso de esterilización. . Placas petri que se hubiesen contaminado accidentalmente luego del proceso de esterilización. Aquellas placas petri cuyo resultado en el proceso de esterilización. CA. . MA TI. hubiese sido dudoso. 2.6. TAMAÑO DE LA MUESTRA:. FO R. Se determinó un tamaño de muestra experimental de 27 placas petri; 9 placas petri por cada concentración, las operaciones se muestran en el. MA S. 2.7. DEFINICIÓN DE VARIABLES:. E. IN. anexo número uno y siguiendo las indicaciones del autor.17. 2.7.1 DERIVADOS COMERCIALES DEL CACAO: Productos comerciales con modificación de la forma o propiedades del. SI S. chocolate u otros.. TE. cacao y adición de algunas sustancias, como la manteca del cacao, el. DE. CACAO EN POLVO: El cacao en polvo. es el producto comercial que resulta de la. IN. A. fermentación y el secado de las semillas (habas o maracas) del fruto. IC. del árbol del cacao y su procesamiento industrial. Se utilizó en el. OF. presente trabajo el producto comercial: Cocoa Hersheys®.. MANTECA DE CACAO: La manteca del cacao es el producto comercial que resulta de la industrialización de la materia grasa que contiene la pasta de cacao.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(22) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. 14. Se utilizó en el presente la manteca de cacao Mycryo.. CHOCOLATE AZUCARADO:. CA. Aquel derivado del cacao que se obtiene de la mezcla de azúcar con. MA TI. pasta de cacao y manteca de cacao y su industrialización. Se utilizó en el presente trabajo el chocolate azucarado Prime Peruvian Dark. CHOCOLATE NO AZUCARADO:. FO R. Chocolate de la marca comercial Winters®.. IN. Chocolate que usa para su edulcoración elementos distintos al. E. azúcar. Para la presente investigación se utilizó el chocolate “Non. Los productos comerciales fueron elegidos por haber sido los. SI S. . TE. edulcoración xilitol.. MA S. sugar free” de la marca comercial Cavalier® que emplea para su. que contienen el más alto contenido de Cacao y pureza en el. IN. A. DE. mercado.. 2.7.2. STREPTOCOCCUS MUTANS:. OF. IC. Cepa de Streptococcus mutans procedentes del laboratorio de microbiología de la Universidad Nacional de Trujillo, la cepa que se utilizó corresponde a la cepa 2657263 ATCC.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(23) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. 15. 2.8. OPERACIONALIZACIÓN DE VARIABLES:. Cuadro Nº 01: Operacionalización De Variables. Independiente Cualitativa. Nominal. Independiente Cualitativa. Nominal. Independiente Cualitativa. Nominal. Independiente Cualitativa. Nominal. CA. Escala. MA TI. Exposición a la manteca de cacao. Tipo. No exposición a la manteca de cacao. IN. Manteca de Cacao. MA S. E. Exposición al chocolate no azucarado. No exposición al chocolate no azucarado. TE. Chocolate no azucarado. A IN IC. Crecimiento de Streptococcus mutans. OF. Exposición al chocolate azucarado. SI S. Chocolate azucarado. DE. DERIVADOS COMERCIALES DEL CACAO. Cacao en polvo. Indicador Exposición al cacao No exposición al cacao. FO R. Variable. No exposición al chocolate azucarado. Inhibición y cantidad de efecto inhibitorio (diámetro de halo inhibitorio) No inhibición (halo inhibitorio = 0). Dependiente Cuantitativa discreta Dependiente Cuantitativa discreta. De razón. De razón. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(24) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. 16. 2.9. DISEÑO EXPERIMENTAL El diseño del presente proyecto de investigación es de tipo experimental.. El. experimento. siguió. un. modelo. de. diseño. MA TI. CA. completamente aleatorizado que se muestra en el siguiente esquema:. Esquema Nº 01: Esquema del diseño experimental.. E11. 24h. 48h. E12. E1 3. 72h. E14. IN. 18h. E1. FO R. CP. 48h. E2 3. 72h. E24. 24h. E32. 48h. E3 3. 72h. E34. E41. 24h. E42. 48h. E4 3. 72h. E44. C1. 24h. C2. 48h. C3. 72h. C4. E31. DE. 18h. SI S. C-A. E3. 24h. E22. E21. TE. 18h. E2. MA S. E. MC. 18h. OF. IC. E4. IN. A. C+A A. H2O. C. 18h. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(25) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. 17. Donde: Grupo 1: Estuvo representado por. E1; constituyó el área de las placas. CA. petri con cultivo de Streptococcus mutans a la cual le fueron aplicados los discos de la variable independiente cacao en polvo y en el cuál se. MA TI. efectuaron observaciones a las 18, 24, 48 y 72 horas. Grupo 2: Estuvo representado por. E2; constituyó el área de las placas. FO R. petri con cultivo de Streptococcus mutans a la cual le fueron aplicados los. IN. discos de la variable independiente manteca de cacao y en el cuál se efectuaron observaciones a las 18, 24, 48 y 72 horas.. E. E3; constituyó el área de las placas. MA S. Grupo 3: Estuvo representado por. petri con cultivo de Streptococcus mutans a la cual le fueron aplicados los. TE. discos de la variable independiente chocolate no azucarado y en el cuál. SI S. se efectuaron observaciones a las 18, 24, 48 y 72 horas. Grupo 4: Estuvo representado por. E4; constituyó el área de las placas. DE. petri con cultivo de Streptococcus mutans a la cual le fueron aplicados los. A. discos de la variable independiente chocolate azucarado y en el cuál se. IN. efectuaron observaciones a las 18, 24, 48 y 72 horas.. C; constituyó. el área de las placas. OF. IC. Grupo 5: Estuvo representado por. petri con cultivo de Streptococcus mutans a la cual le fueron aplicados los discos de la variable control (agua bidestilada) y en el cuál se efectuaron observaciones a las 18, 24, 48 y 72 horas.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(26) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. 18. 2.10. PROCEDIMIENTO Y CAPTACIÓN DE INFORMACIÓN El procedimiento de este experimento se realizó teniendo como base la. CA. prueba de susceptibilidad de difusión en discos de Bauer – Kirby.18, 19, 20. MA TI. 1. OBTENCIÓN DE LA CEPA. El Streptococcus mutans ATCC 2652263 fue obtenido del cepario. FO R. del Laboratorio de la Sección de Microbiología de la Facultad de. E. 2. PREPARACIÓN DE LA CEPA. IN. Medicina de la Universidad Nacional de Trujillo.. MA S. Una vez obtenida la cepa, ésta se cultivó en tubos de ensayo con tapa rosca conteniendo el medio Soya tripticasa, incubándose a 37. TE. ºC con el fin de obtener colonias jóvenes. Luego de 24 horas de. SI S. cultivadas se les agregó solución salina estéril, hasta obtener una turbidez semejante al tubo número 1 de la escala de Mac Farland. DE. (Anexo 05 Fotografía Nº 01). Luego, los tubos con la bacteria estudiada fueron girados entre las manos durante 30 segundos. IN. A. antes de proceder a su sembrado con el fin de haber logrado una. OF. IC. distribución adecuada de los microorganismos.. 3. SEMBRADO Se utilizaron hisopos estériles, los cuales, luego de ser embebidos con la cepa preparada de Streptococcus mutans y a una distancia de 10 cm de la llama del mechero se emplearon para el sembrado. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(27) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. 19. en. placas. petri,. conteniendo. Agar. Sangre,. hisopando. uniformemente sobre toda la superficie del agar y girando cada placa 30 grados por 10 veces aproximadamente (Anexo 05. CA. Fotografía Nº 02). Las placas recién sembradas fueron colocadas. MA TI. dentro de una estufa a 37 ºC de temperatura durante 10 minutos.. 4. PRUEBA DE SUSCEPTIBILIDAD. Para la prueba de susceptibilidad, se prepararon diluciones al. FO R. . IN. 5%, 10 % y 15% teniendo como marco referencial las investigaciones previas para este proceso de investigación.. E. Las diluciones utilizaron como soluto: cacao en polvo,. MA S. manteca de cacao, chocolate no azucarado y chocolate azucarado de cada una de las tres concentraciones. TE. respectivamente, utilizando agua destilada como diluyente; y a. SI S. una temperatura de 45º C para conseguir una fase uniforme. DE. sin modificación de las propiedades de cada soluto. (Anexo 05 Fotografía Nº 03). Se utilizó el método de difusión en discos. Se prepararon. A. . OF. IC. IN. discos de papel de filtro estériles, los cuales se sumergieron. . dentro de cada dilución de los subgrupos de estudio, para el grupo de control los discos fueron sumergidos en agua destilada estéril q.p. (Anexo 05 Fotografía Nº 04). Posteriormente, con una aguja estéril, los discos fueron colocados sobre los cultivos de Streptococcus mutans en las. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(28) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. 20. placas petri previamente preparadas (Anexo 05 Fotografía Nº 05) y utilizando la disposición de los discos que se muestra mediante gráfico en el anexo número 02. El total de Placas. en. el. cálculo. estadístico. (anexo. 1);. en. MA TI. obtenido. CA. Petri empleadas fue de 9, según el tamaño de muestra. concentraciones de 5, 10 y 15 por ciento; lo que arrojó un total de 27 placas petri con 135 discos de inhibición. (Anexo 05. FO R. Fotografía Nº 06).. A continuación las placas petri se incubaron a 37ºC en. IN. . microaerobiosis utilizando la Jarra Gas-Pack (con el método. E. de la vela, mediante el cual se procuró obtener un ambiente. MA S. aproximado de 5 a 10 % de CO2). (Anexo 05 Fotografía Nº 07).. TE. Todo el procedimiento se llevó a cabo dentro del diámetro de 10. DE. SI S. cm. de la llama de un mechero.. 5. Lectura y Registro: Pasadas las 18, 24, 48 Y 72 hrs. se procedió a la observación. A. . IN. de las placas petri examinando los grupos experimentales y el. OF. IC. grupo de control. (Anexo 05 Fotografía Nº 08).. . Los discos que presentaron la generación de un halo alrededor de. los. mismos. fueron. considerados. con. inhibición. de. crecimiento bacteriano, contabilizados como tal y anotados en el anexo número 03.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(29) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. 21. . Los discos que presentaron crecimiento bacteriano sobre ellos fueron considerados sin inhibición de crecimiento bacteriano, contabilizados como tal y anotados en el anexo número 03. Además se midió el diámetro del halo inhibitorio de cada disco. CA. . MA TI. de sensibilidad (mayor inhibición a mayor diámetro de disco), incluyendo el área del disco de papel de filtro y los datos se registraron en el anexo número 04 para su evaluación e. Del registro total se evaluó por medio de análisis de promedios. IN. . FO R. interpretación.. de halos inhibitorios en qué período se generó la mayor. E. inhibición y dichos valores fueron considerados en el análisis e. OF. IC. IN. A. DE. SI S. TE. MA S. interpretación estadística.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(30) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. 22. III. RESULTADOS Los resultados de la presente investigación son presentados en cuadros del 1 al 6.. CA. En el cuadro N° 01 apreciamos según la prueba exacta de Fisher que:. MA TI. El derivado cacao en polvo; representado por E1, presentó una diferencia significativa (p< 0.05) en la presencia de inhibición de crecimiento de los. FO R. Streptococcus mutans comparado con el grupo de control a una concentración del 5 y 15 por ciento; asimismo, presentó una diferencia. IN. altamente significativa (p< 0.001) en la presencia de inhibición de. E. crecimiento de Streptococcus mutans comparado con el grupo control (C). MA S. a la concentración del 10%.. El derivado manteca de Cacao; representado por E2, presentó una. TE. diferencia altamente significativa (p< 0.001) en la presencia de inhibición. SI S. de crecimiento de los Streptococcus mutans comparado con el grupo de control (C) en todas las concentraciones (5, 10 y 15 por ciento).. DE. El derivado chocolate no azucarado; representado por E3, presentó una diferencia muy significativa (p< 0.01) en la presencia de inhibición de. IN. A. crecimiento bacteriano comparado con el grupo de control (C) en las y 10 por ciento, y una diferencia altamente. IC. concentraciones del 5. OF. significativa (p< 0.001) a la concentración del 15 por ciento. El derivado chocolate azucarado; representado por E4, presentó una diferencia significativa (p< 0.05) en la presencia de inhibición de crecimiento bacteriano comparado con el grupo de control (C) en las concentraciones del 5 y 10 por ciento, y una diferencia altamente. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(31) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. 23. significativa (p< 0.001) a la concentración del 15 por ciento. Ningún disco del grupo de control presentó generación de halo inhibitorio. CA. positiva por lo tanto no presentó inhibición bacteriana alguna.. MA TI. En el cuadro N° 02, al aplicar una prueba de promedios marginales para el derivado cacao en polvo, representado por E1, encontramos qué, presentó un promedio marginal de 4,44 mm. de sus diámetros de halo. FO R. inhibitorio de crecimiento de Streptococcus mutans, esto a. una. IN. concentración del 5 por ciento, 8.89 mm. al 10 por ciento y 3.5 mm. al 15 por ciento. Por haber presentado este derivado una mayor significancia. E. mediante la prueba de Fisher a una concentración del 10%, se consideró. MA S. el valor de 8,89 mm. como su diámetro promedio de inhibición de. TE. crecimiento de Streptococcus mutans.. SI S. En el cuadro N° 03, al aplicar una prueba de promedios marginales para. DE. el derivado manteca de cacao (E2); encontramos qué, presentó un promedio marginal de 12.56 mm. de sus diámetros de halo inhibitorio de. A. crecimiento bacteriano a una concentración del 5 por ciento, 15.63 mm. al. IN. 10 por ciento y 19.22 mm. al 15 por ciento. Por haber presentado este. OF. IC. derivado una alta significancia en todas sus concentraciones, se consideró el valor de 15.806 mm. como su diámetro promedio de inhibición de crecimiento de Streptococcus mutans. En el cuadro N° 04, el derivado chocolate no azucarado (E3), al aplicar una prueba de promedios marginales, presentó un promedio marginal de. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(32) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. 24. 5.56 mm. de sus diámetros de halo inhibitorio de crecimiento bacteriano, esto a una concentración del 5 por ciento, 6.19 mm. al 10 por ciento y 9.67 mm. al 15 por ciento. Por haber presentado este derivado una mayor. CA. significancia en sus resultados a una concentración del 15 por ciento, se. MA TI. consideró el valor de 9.67 mm. como su diámetro promedio de inhibición de crecimiento de Streptococcus mutans.. FO R. En el cuadro N° 05, el derivado chocolate azucarado, representado por. IN. E4, presentó un promedio marginal de 3.5 mm. de sus diámetros de halo inhibitorio de crecimiento bacteriano, esto a una concentración del 5 por. E. ciento, 3.66 mm. al 10 por ciento y 8.94 mm. al 15 por ciento. Por haber. MA S. presentado este derivado una mayor significancia en sus resultados a una concentración del 15 por ciento, se consideró el valor de 8.94 mm. como. TE. su diámetro promedio de inhibición de. DE. SI S. mutans.. crecimiento de Streptococcus. En el cuadro N° 05, el derivado chocolate azucarado, representado por. A. E4, presentó un promedio marginal de 3.5 mm. de sus diámetros de halo. IN. inhibitorio de crecimiento bacteriano a una concentración del 5 por ciento,. OF. IC. 3.66 mm. al 10 por ciento y 8.94 mm. al 15 por ciento. Por haber presentado este derivado una mayor significancia en sus resultados a una concentración del 15 por ciento, se consideró el valor de 8.94 mm. como su diámetro promedio de inhibición de. crecimiento de Streptococcus. mutans.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(33) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. 25. En el cuadro N° 06 A, al aplicar el análisis de Varianza para un diseño factorial completo al azar, se aprecia en las pruebas F que al menos una y derivado del cacao, presentan diferencia altamente. CA. concentración. MA TI. significativa comparados con las demás concentraciones y derivados respectivamente. Con dicha información; en el cuadro N° 06 B, se promedió a realizar un análisis de Duncan; obteniendo:. FO R. Al analizar las concentraciones; se obtuvo que la concentración del 5 por. IN. ciento logró diferir significativamente de las otras 2, asimismo, las concentraciones del 10 y 15 por ciento, no presentan una diferencia. E. significativa entre ellas.. MA S. Al analizar los tipos de derivado, se encontró que el promedio marginal de diámetro de inhibición de crecimiento de Streptococcus mutans del manteca. de. cacao;. TE. derivado. representado. por. E2,. difiere. SI S. significativamente del resto de derivados comerciales del cacao,. DE. asimismo, el promedio marginal de los diámetros de inhibición de crecimiento bacteriano del cacao en polvo, chocolate no azucarado y. OF. IC. IN. A. chocolate azucarado no presentan diferencia significativa entre ellos.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(34) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. 26. CUADRO N° 01 PRUEBA EXACTA DE FISHER. 0. 9. E1. 5. 4. C. 0. 9. E2. 9. 0. C. 0. 9. E3. 6. 3. C. 0. 9. E4. 4. 5. Grupo. p = 0.0147 p < 0.05| p = 0.000021 p < 0.001 p = 0.0045 p < 0.01 p = 0.0412 p < 0.05. SI. NO. C. 0. 9. E1. 8. 1. C. 0. 9. E2. 9. 0. C. 0. 9. E3. 6. 3. C. 0. 9. E4. 4. 5. p. Grupo. p = 0.00021 p < 0.001. SI. NO. 0. 9. E1. 4. 5. C. 0. 9. E2. 9. 0. C. 0. 9. E3. 8. 1. C. 0. 9. E4. 9. 0. C. MA TI. C. p. p = 0.000021 p < 0.001. FO R. NO. p = 0.0045 p < 0.01 p = 0.0412 p < 0.05. IN. SI. 15%. Inhibición. p. p = 0.0412 p < 0.05 p = 0.000021 p < 0.001 p = 0.00021 p < 0.001 p = 0.000021 p < 0.001. Significancia:. MA S. E. Grupo. 10% Inhibición. CA. 5% Inhibición. Si p > 0.05; No hay.. . Si p < 0.05; Si hay.. . Si p < 0.01; Existe muy significativa. . Si p < 0.001; Existe altamente significativa. OF. IC. IN. A. DE. SI S. TE. . Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(35) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. 27. CUADRO N° 02 PROMEDIOS MARGINALES E1. E1 10%. E1 15%. (mm.). (mm.). (mm.). 01. 7.5. 9. 02. 0. 0. 03. 7.5. 11. 04. 0. 8. 0. 05. 8. 11.5. 0. 06. 8. 07. 9. MA TI. FO R. E MA S. 9. 14. 0. 0. 9.5. 0. 4.444444. 8.888889. 3.5. p = 0.0147 p < 0.05. p = 0.00021 p < 0.001. p = 0.0412 p < 0.05. SI S. DE. IN. A. Significancia. 6. 9. 0. Promedio marginal. 6. 0. 08 09. 10.5. 8. TE. N°placa. CA. E1 5%. IN. Variable. IC. Significancia:. Si p > 0.05; No hay.. . Si p < 0.05; Si hay.. . Si p < 0.01; Existe muy significativa. . Si p < 0.001; Existe altamente significativa. OF. . Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(36) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. 28. CUADRO N° 03 PROMEDIOS MARGINALES E2. E2 15%. (mm.). (mm.). (mm.). 10.5. 10. 8. 16. 15. 11. 10. 8.75. 03 04 05. 15. 16. MA S. 15.5. 06. 31.5. 15. 13.5. 18. 16. 12.55556. 15.63889. 19.22222. TE. SI S. DE. Promedio final. A. 22. 23.5. 10.5. p = 0.000021 p < 0.001. 15.806 p = 0.000021 p < 0.001. p = 0.000021 p < 0.001. IC. IN. 20. 16. 08. Significancia. 18.5. 24.5. 15. Promedio marginal. 11.5. 13.5. 07. 09. MA TI. 02. 22. FO R. 01. CA. E2 10%. IN. N°placa. E2 5%. E. Variable. OF. Significancia: . Si p > 0.05; No hay.. . Si p < 0.05; Si hay.. . Si p < 0.01; Existe muy significativa. . Si p < 0.001; Existe altamente significativa.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(37) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. 29. CUADRO N° 04. E3 15%. (mm.). (mm.). (mm.). 7. 7. 0. 0. 8. 8.5. 0. 02 03 04 05. 0. MA S. 9. 9 12.5. 9.5. 13.5. 8.25. 11. 0. 10. 8. 5.55556. 6.194444. 9.666667. p = 0.0045 p < 0.01. p = 0.0045 p < 0.01. p = 0.00021 p < 0.001. TE. 08. DE. SI S. 7. IN. A. Significancia. 10. 0. 10.5. Promedio marginal. 11.5. 12.5. 07. 09. 11.5. 0. 8.5. 06. MA TI. 01. CA. E3 10%. FO R. N°placa. E3 5%. E. Variable. IN. PROMEDIOS MARGINALES E3. IC. Significancia:. Si p > 0.05; No hay.. . Si p < 0.05; Si hay.. . Si p < 0.01; Existe muy significativa. . Si p < 0.001; Existe altamente significativa. OF. . Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(38) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. 30. CUADRO N° 05 PROMEDIOS MARGINALES E4. E4 15%. (mm.). (mm.). (mm.). 7. 0. 0. 0. 0. 8. 02 03 04. 0. 0. 0. MA S. 8. 06. 8.5 8. 10. 10. 7. 10. 0. 8. 6. 3.5. 3.666667. 8.944444. p = 0.0412 p < 0.05. p = 0.0412 p < 0.05. p = 0.000021 p < 0.001. TE. 08. DE. SI S. 7. IN. A. Significancia. 10. 8. 9.5. Promedio marginal. 9. 0. 07. 09. 11. E. 0. 05. MA TI. 01. CA. E4 10%. FO R. N°placa. E4 5%. IN. Variable. IC. Significancia:. Si p > 0.05; No hay.. . Si p < 0.05; Si hay.. . Si p < 0.01; Existe muy significativa. . Si p < 0.001; Existe altamente significativa. OF. . Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(39) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. 31. CUADRO N° 06 ANÁLISIS DE VARIANZA PARA UN DISEÑO FACTORIAL COMPLETO AL AZAR. gl. Cuadrado Medio. Concentración. 263.310. 2. 131.655. 7.124. 0.001. Derivado Cacao. 1980.792. 3. 660.264. 35.726. 0.000. 57.799. 3.127. 0.008. 6. 1774.194. 96. Total. 4365.088. 107. p. 18.481. MA S. E. Significancia:. MA TI. 346.792. F. FO R. Concentración * Derivado Cacao Error. CA. Suma de cuadrados. IN. Fuente de variación. Si p > 0.05; No hay.. . Si p < 0.05; Si hay.. . Si p < 0.01; Existe muy significativa. . Si p < 0.001; Existe altamente significativa. OF. IC. IN. A. DE. SI S. TE. . Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(40) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. 32. CUADRO N° 07 ANÁLISIS DE DUNCAN. N. 5%. Alfa 0.05. 36. 10%. 1. 2. 6.514. MA TI. Concentración. 36. 15%. 8.597. 10.333. FO R. 36. p. 1.000. Tipo Chocolate. E1. 27. E3. 27. 5.611. MA S. E2. 5.370. IN. 27. 7.139. 27. 15.806 0.157. 1.000. Significancia:. SI S. TE. p. .090. E. E4. CA. Y. Si p > 0.05; No hay.. . Si p < 0.05; Si hay.. . Si p < 0.01; Existe muy significativa. A. IN. Si p < 0.001; Existe altamente significativa. OF. IC. . DE. . Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(41) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. 33. IV. DISCUSIÓN Resultados de experimentos previos al presente11-16, demuestran que. CA. existe un efecto inhibitorio de caries en el cacao y sus componentes, pero ninguno efectuó un experimento utilizando como agentes de estudio. MA TI. derivados comerciales del mismo; el presente trabajo al hacerlo, reitera los conocimientos de los estudios previos acerca de las propiedades. FO R. inhibitorias de crecimiento bacteriano que posee el cacao y además ofrece el conocimiento de que dichas propiedades se mantienen aún. IN. después de su procesamiento industrial, específicamente, la propiedad. MA S. E. inhibitoria sobre el crecimiento de los Streptococcus mutans.. Los estudios realizados por Wynfrey Wyn y col. 12. encontraron en sus. TE. investigaciones que la grasa adicionada al cacao es la responsable de. SI S. sus efectos inhibitorios sobre la caries dental, en relación a dichas conclusiones, el presente trabajó encontró cierta similitud en cuánto a qué. DE. el derivado manteca de cacao (de naturaleza grasa) fue el que presentó. A. un efecto inhibitorio altamente significativo comparado con el resto de los. IN. otros derivados, con un efecto de más del doble respecto a los promedios. OF. IC. de diámetros de halo inhibitorio de los otros derivados (2.62 a 1).. En otros estudios previos al presente trabajo de investigación13-15, se encuentra una contraposición de ponencias en cuanto a los efectos anticariogénicos del chocolate en ausencia o presencia de azúcares. En la presente investigación se encontró tras aplicar una prueba de Duncan. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(42) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. 34. qué, tanto el chocolate no azucarado como el chocolate azucarado presentaron. un. efecto. inhibitorio. sobre. el. crecimiento. de. los. Streptococcus mutans, además ambos efectos fueron similares entre sí. CA. por no presentar diferencia significativamente estadística entre los. MA TI. promedios de sus diámetros de halo inhibitorio. Estos resultados nos llevarían a cierta inclinación por los resultados de las investigaciones de Kyoto ito y col.. 15. , los cuales aseveran que el chocolate posee un efecto. FO R. anticariogénico aún en presencia de azúcar; no obstante, no podríamos. IN. censurar por completo las aseveraciones de T. Ooshima y col.13,14, las que indican que el chocolate posee cierto potencial anticariogénico. E. aunque no suficiente como para contrarrestar el efecto cariogénico del. MA S. azúcar, ya que sus investigaciones se realizaron en animales de experimentación mientras que los de la presente fueron en condiciones “in. TE. Vitro”, pero si podemos afirmar que a pesar del contenido de azúcar, el. SI S. chocolate azucarado posee cierto efecto inhibitorio contra el crecimiento. DE. de los Streptococcus mutans en condiciones experimentales de primer. A. grado.. IN. En contraposición a los experimentos de Rimondia y col.16, quienes. IC. afirman que el cacao puede reducir la formación del biofilm por. OF. Streptococcus mutans sólo en ausencia de colonias preformadas, la. presente investigación obtuvo valores de diámetro inhibitorio mayores a las 72 horas de su observación, demostrando un efecto de inhibición de crecimiento que se propagaba hacia las colonias de Streptococcus mutans formadas previamente desde su primera incubación.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(43) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. 35. Debe tenerse en consideración que el diámetro inhibitorio antibacteriano que generan las sustancias no sólo depende de su potencia sino de su capacidad de difusión, por lo cuál, los diámetro de inhibición de. CA. crecimiento de Streptococcus mutans generados en el presente, no sólo. MA TI. reflejan la fuerza antibacteriana del derivado del cacao utilizado, sino que conjuntamente reflejan la capacidad de difusión del derivado del cacao en. OF. IC. IN. A. DE. SI S. TE. MA S. E. IN. FO R. materia a través del medio agar sangre conejo. 18-20. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(44) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. 36. V.. CONCLUSIONES. CA. 1. Los 04 derivados comerciales del cacao: cacao en polvo, la manteca de cacao, el chocolate no azucarado y el chocolate con. MA TI. azúcar inhiben el crecimiento de Streptococcus mutans “in Vitro”.. FO R. 2. El cacao en polvo inhibe el crecimiento “In Vitro” de Streptococcus. IN. mutans en un promedio de 8.89 mm. de halo inhibitorio.. E. 3. La manteca de cacao inhibe el crecimiento “In Vitro” de. MA S. Streptococcus mutans en un promedio de 15.806 mm. de halo. TE. inhibitorio.. SI S. 4. El chocolate no azucarado inhibe el crecimiento “In Vitro” de Streptococcus mutans en un promedio de 9.67 mm. de halo. A. DE. inhibitorio.. IN. 5. El chocolate con azúcar inhibe el crecimiento “In Vitro” de. IC. Streptococcus mutans en un promedio de 8.94 mm. de halo. OF. inhibitorio.. 6. El cacao en polvo, el chocolate no azucarado y el chocolate con azúcar poseen una cantidad de efecto de inhibición “In Vitro” de crecimiento de Streptococcus mutans similar, mientras que la. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(45) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. 37. manteca de cacao posee un efecto 2.62 veces mayor a los otros. OF. IC. IN. A. DE. SI S. TE. MA S. E. IN. FO R. MA TI. CA. derivados comerciales.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(46) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. 38. VI. RECOMENDACIONES. . CA. Según el presente estudio se recomienda:. En cuanto a las concentraciones del 5, 10 y 15 por ciento que se. MA TI. emplearon en el presente trabajo; cabe resaltar qué, se encontró que a partir de una concentración del 10 por ciento no existe significativa. en. los. resultados. FO R. diferencia. obtenidos. a. concentraciones mayores (15 por ciento) por lo cuál para futuras. IN. investigaciones podría establecerse la concentración del 10 por. . MA S. E. ciento como óptima para efectos de experimentación.. Considerando los resultados positivos en cuánto a los efectos. TE. inhibitorios de los derivados del cacao sobre el crecimiento de los. SI S. Streptococcus mutans en el presente trabajo que es de experimentación de primer grado, se recomienda efectuar estudios. DE. experimentales de segundo y tercer grado para poder reforzar la. OF. IC. IN. A. imagen anticariogénica de los derivados del cacao.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(47) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. 39. VII. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS. Bhaskar. S. N. Patología bucal. Tercera ed. Buenos Aires,. Domínguez. F. V. Anatomía patológica bucal. En: Julio Barrancos. FO R. 2.. MA TI. Argentina. Editorial El Ateneo; 1977. p 107.. CA. 1.. Money. Operatoria dental. Tercera ed. Buenos aires, Argentina.. IN. Editorial Panamericana; 1999. p 239.. E. Newmann. H. La placa dental. México. Editorial El manual. MA S. 3.. 4.. TE. moderno; 1982. p 19 – 30.. Rimondia S, Deirdre A, Monty S, Sylvie CH, Philip D. The effect of. SI S. cocoa polyphenols on the growth, metabolism, and biofilm. DE. formation by Streptococcus mutans and Streptococcus sanguinis. European Journals of Oral Diseasses 2006; 114: 343 – 348. 02. de. jun.. 2006. via. Hinari. Perú]. IN. A. [Citado. OF. IC. http://www.concytec.gob.pe/alicia/hinari.html. 5.. Ckett. S. La ciencia del chocolate. Primera Ed. Zaragoza, España. Editorial Acribia; 2001. p 18 – 55.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(48) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. 40. 6.. Balzer J, Rassaf T, Heiss C, Kleinbongard P, Lauer T, Merx M. Sustained. benefits. in. vascular. function. through. flavanol-. containing cocoa in medicated diabetic patients. Journal of the. CA. American College of Cardiology 2008; 51(22): 2141 – 2149.. MA TI. Disponible en:. http://www.acc.org/media/releases/highlights/2008/june08/cocoa.. Heiss C, Kleinbongard. P, Dejam A, Perré S, Schroeter H, Sied H.. IN. 7.. FO R. pdf. Acute consumption of flavanol- rich cocoa and the reversal of. E. endothelial dysfunction in smokers. Journal of the American. MA S. College of Cardiology 2005; 46(7): 1276 – 1281. Disponible en: http://www.acc.org/media/releases/highlights/2005/oct05/flavanol.. SI S. Ruzaidi A, Abbe M, Amin I, Nawalyah A, Muhajir A. Protective. DE. 8.. TE. pdf. effect of polyphenol-rich extract prepared from Malaysian cocoa. A. (Theobroma cacao) on glucose levels and lipid profiles in. IN. streptozotocin-induced diabetic rats. Journal of the Science of. OF. IC. Food and Agriculture 2008; 88: 1442 – 1447. Disponible en: http://www.worldcocoafoundation.org/info-center/documentresearch-center/documents/Ruzaidi2008.pdf. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.