Efecto de lipidium meyenii (maca), a dosis de 150 mg/kg y 300 mg/kg, sobre los leucocitos y la celularidad de órganos linfoides de ratones inmunosuprimidos

Texto completo

(1)Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE MEDICINA. na. ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE MEDICINA. ici. “Efecto de lepidium meyenii (maca), a dosis de 150 mg/kg y 300 mg/kg, sobre los. M. ed. leucocitos y la celularidad de órganos linfoides de ratones inmunosuprimidos”. TESIS. de. Para optar al grado de Bachiller en Medicina. ca. AUTOR. lio te. GERBER REYNALDO POLO GUTIÉRREZ. ASESORA. Bi b. Dra. ELVA MANUELA MEJÍA DELGADO CO-ASESORA. Mg. MARILÚ ROXANA SOTO VÁSQUEZ. TRUJILLO-PERU 2014. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(2) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. INDICE I.. Introducción .............................................................................................. 5 1.1 Antecedentes.......................................................................................... 5 1.2 Justificación ........................................................................................... 8 1.3 Enunciado del problema ......................................................................... 8. na. 1.4 Hipótesis ................................................................................................ 8. Material y Método .................................................................................. 10. ed. II.. ici. 1.5 Objetivos ............................................................................................... 9. M. 2.1 Material de estudio............................................................................... 10 2.2 Métodos y técnicas............................................................................... 10. de. 2.3 Variables operacionales ....................................................................... 12 2.4 Diseño procedimental .......................................................................... 13. ca. 2.5 Análisis estadístico .............................................................................. 15. lio te. 2.5 Consideraciones Éticas ........................................................................ 15 2.7 Diseño experimental ............................................................................ 16. Resultados ............................................................................................... 17. IV.. Análisis y Discusión ............................................................................... 30. V.. Conclusiones ........................................................................................... 36. VI.. Recomendaciones ..................................................................................... 38. VII.. Referencias bibliográficas ...................................................................... 39. Bi b. III.. VIII. Apéndice y Anexos .................................................................................. 44. 2 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(3) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. RESUMEN Lepidium meyenii (maca) es una planta peruana a la que se atribuye actividad inmunoestimuladora. El objetivo del presente estudio fue comprobar el efecto del extracto Atomizado de maca ecotipo rojo, dosis: 150 mg/kg y 300mg/kg, sobre el recuento de leucocitos y la celularidad del bazo, timo y médula ósea de ratones. na. inmunosuprimidos con ciclofosfamida. Tras veinte días de tratamiento y ocho días después de la inmunosupresión, se evidenció que el grupo tratado con 150 mg/kg (M2presentó un mayor recuento de leucocitos y celularidad en todos los órganos. ici. IS). ed. linfoides, respecto al grupo no tratado (IS); pero solo es significativo respecto a los. sus valores. fueron superiores.. M. leucocitos, bazo y médula ósea; y al compararse con el grupo control (C), no siempre Así mismo. para todas las variables, excepto la. de. celularidad de la médula ósea, el grupo al que se le administró 300mg/kg de maca (M1IS) tuvo valores mayores que el grupo IS, que el grupo C e incluso que el grupo M2-. ca. IS, pero con diferencia significativa siempre al compararse solo con el primero de estos tres. Además se aprecia que el grupo M1-IS, evidencia valores menores, aunque sin. lio te. diferencia significativa, del recuento celular en la médula ósea en relación a los grupos IS y C. Se concluye que la administración de maca, a dosis de 150 mg/kg y. Bi b. 300 mg/kg, a ratones inmunosuprimidos con ciclofosfamida; puede revertir los efectos supresores de este agente citotóxico, lo cual fue demostrado al favorecer el incremento del recuento de leucocitos, de las células del timo y bazo; y disminuyendo el número celular en la médula ósea, probablemente por un efecto restaurador de la homeostasis inmunológica. Así mismo dichas propiedades se muestran dosis dependiente, siendo 300 mg/kg la dosis óptima. Palabras Clave: lepidium meyenii (maca),. leucocitos,. celularidad de órganos. linfoides, bazo, timo, médula ósea, ratones inmunosuprimidos, ciclofosfamida. 3 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(4) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ABSTRACT Lepidium meyenii (Maca) is a peruvian plant that is attributed as immunostimulatory activity. The objective of this study was to verify the effect of atomized extract of red ecotype, dose: 150 mg / kg and 300mg/kg, on leukocyte count and cellularity of the spleen, thymus and bone marrow of mice immunosuppressed with cyclophosphamide.. na. After twenty days of treatment and eight days after immunosuppression, we found that the group treated with 150 mg / kg (M2-IS) had a higher leukocyte count and cellularity. ici. in all lymphoid organs, compared to untreated group (IS); but is only significant when. ed. compared to the leukocytes, spleen and bone marrow; and when compared with the. M. control group (C), the values were not always superior. Furthermore for all variables, except the bone marrow cellularity, the group that was given 300mg/kg of maca (M1-. de. IS) had values greater than the IS group, the C group and even the M2 Group -IS, but always significant difference when compared only with the first of these three.. ca. Furthermore it is appreciated that the M1-IS group, lower values evidence, though no significant difference in cell counts and marrow compared to the IS and C groups. It is. lio te. conclude that administration of maca at doses 150 mg / kg and 300 mg / kg, to mice immunosuppressed with cyclophosphamide; can reverse the suppressive effects of this. Bi b. cytotoxic agent, which was shown to encourage increased leukocyte count, the cells of the thymus and spleen; and decreasing the cell number in the bone marrow, probably by a restorative effect of immune homeostasis. Also these properties are dose dependent, being 300 mg / kg the optimal dose. . Keywords: Lepidium meyenii (maca), leukocyte, cellularity of lymphoid organs, spleen, thymus, bone marrow, immunosuppressed mice, cyclophosphamide.. 4 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(5) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. I.. INTRODUCCIÓN. 1.1 Antecedentes: La maca, Lepidium meyenii walp, es una planta que crece principalmente en la zona central del Perú, y se cultiva en regiones con grandes altitudes. La porción comestible de esta planta. es la raíz, que presenta hasta 13 colores distintos. denominándose a cada uno como ecotipo, que puede ser amarillo, blanco, negro,. na. morado y rojo 1,2. De su composición se conoce que 55 a 60% consiste en carbohidratos, 10 a. ici. 12% en proteínas, 8 a 9% en fibra y 2 a 3% en lípidos; así también las vitaminas B1, B2, C y E, se encuentran en este alimento 3. El contenido proteico de la maca se. encontrándose presentes entre estos. ed. manifiesta principalmente bajo la forma de cadenas polipeptídicas y aminoácidos, últimos la totalidad de los diez aminoácidos. M. esenciales. Adicionalmente, aminoácidos tales como arginina, serina, histidina, ácido aspártico, ácido glutámico, glicina, valina, fenilalanina, tirosina y treonina, se Respecto a los lípidos se reveló. de. encuentran en cantidades altamente significativas 4.. que la maca es también un importante depósito de diversos ácidos grasos (linoleico, palmítico y oleico, entre otros), esteroles (stigmasterol, sitosterol y camposterol),. ca. saponinas, taninos y alcaloides, los cuales actúan como una importante fuente energética y estructural 5. Por otra parte, la composición mineral de la raíz de la maca,. lio te. previamente desecada, está dada por. altas concentraciones de potasio, superando. largamente a otros vegetales; también contiene calcio y hierro, cuya concentración supera en más del doble a la leche y lentejas, respectivamente, por esta razón ha sido. Bi b. usada también para el tratamiento de la osteoporosis 4. En cuanto a los metabolitos secundarios, las investigaciones fitoquímicas. realizadas en la maca, mencionan (además de las saponinas, esteroides, antocianinas e isotiocinatos) principalmente a los siguientes: a) Alcaloides. Se ha identificado cuatro alcaloides en los extractos y en las raíces pulverizadas de la maca, y se les han denominado macaina 1, 2, 3 y 4. La mayoría de los alcaloides provienen del metabolismo de los aminoácidos, principalmente tirosina, triptófano, arginina y lisina 6,7.. 5 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(6) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. b) Flavonoides. En las raíces pulverizadas de tres ecotipos de maca (amarilla, roja y morada) se identificaron estas sustancias 6. Los flavonoides son pigmentos naturales que se encuentran en vegetales, semillas, frutas y bebidas como vino y cerveza, poseen múltiples efectos beneficiosos principalmente. debido a su acción antioxidante y. eliminadora de radicales libres 8. c) Glucocinolatos: En las raíces y hojas de la maca, se identificó glucocinolatos aromáticos, benzilglucocinolato y p-methoxybenzilglucocinolato; y se les asoció a un. na. efecto anticancerígeno, así mismo sobre procesos hormonales reproductivos 9. La maca es conocida y empleada desde tiempos precolombinos como una planta medicinal y alimenticia, donde la medicina tradicional peruana hace mención de sus. ici. principales propiedades como aumento de fertilidad, afrodisiaca y revitalizante 2; por lo. ed. que se han realizado estudios de esta planta. Así se tiene que estudios realizados en ratas demostraron que la maca revierte parcialmente el efecto deletéreo del acetato de plomo. M. y de la altura, sobre la espermatogénesis 10. En humanos demostró que mejora el conteo de espermatozoides y su movilidad, y tiene un efecto estimulante del deseo sexual en 11. . También. de. varones adultos, todo lo cual es independiente de los cambios hormonales. se ha reportado que la maca presenta un efecto favorable para el tratamiento de la osteoporosis, al mejorar la densidad ósea y restaurar la red trabecular en un modelo de 12. . Otros estudios demostraron que la administración de harina. ca. ratas ovariectomizadas. de maca amarilla a animales diabéticos mejoró el metabolismo de la glucosa, regulando. lio te. la glicemia y elevando los niveles de insulina; también, incrementó las defensas antioxidantes y protegió del daño oxidativo que se presenta en la diabetes 13. Esta planta también ha demostrado poseer actividades sobre la respuesta inmune. Bi b. humoral y celular 14,15.. La respuesta inmune humoral esta mediada por los linfocitos B, que reconocen al antígeno a través de sus inmunoglobulinas de membrana. El elemento efector final de la respuesta humoral son los anticuerpos. Tras la unión antígeno anticuerpo, los antígenos son neutralizados o eliminados por diversos mecanismos mediante su opsonización y fagocitosis o activando el sistema de complemento 16.. 6 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(7) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. La respuesta inmune celular cubre una importante función como mecanismo inmunológico de defensa, actuando principalmente frente a bacterias y virus, así como evitando la aparición y desarrollo de células tumorales. Los linfocitos T reconocen al antígeno mediante su receptor TcR, para esto el antígeno debe ser procesado en el interior de las células presentadoras de antígeno y sus determinantes antigénicos ser expuestos en la superficie de estas células mediante el complejo mayor de histocompatibilidad 16.. na. El sistema inmune debe mantener su equilibrio y capacidad de respuesta, ya que su alteración puede ser la base de un importante número de enfermedades. La modulación de la respuesta inmune ya sea estimulándola o suprimiéndola, puede un estado. libre. de. enfermedades. 16. ici. mantener. .. La. búsqueda. de. agentes. ed. inmunomoduladores que regulen y lleven al equilibrio el sistema inmune, es de interés desde hace mucho tiempo; tal es así que se ha estudiado estas propiedades en la maca 17.. M. Por lo que se ha reportado que el extracto metanólico de maca, ecotipo morado, posee propiedades inmunoestimuladoras importantes, al inducir la producción significativa de 18. . Así. de. interferón - ɤ (INF ɤ) en cultivos de linfocitos T humanos de sangre periférica. mismo la administración del extracto acuoso de esta planta, a ratones inmunosuprimidos con ciclofosfamida, puede revertir los efectos supresores de este agente citotóxico,. ca. incrementando el número de células de médula ósea, sangre periférica, unidades formadoras de colonias esplénicas y producción de mRNA para tres citoquinas (IL-3, 19. . Además se evidenció la modulación de la respuesta. lio te. GM-CSF e IL-7) en el bazo. inmune en ratones inmunosuprimidos y tratados con 300mg/kg de extracto metanólico de maca, ecotipos morado y blanco, al observarse el incremento del recuento de células. Bi b. sanguíneas, del peso corporal, de la celularidad del bazo y timo; y de la producción de anticuerpos hemolíticos y hemaglutinantes. 15. . Para el extracto acuoso de maca, ecotipo. amarillo, a dosis de 300mg/kg de peso, se reportó que favoreció significativamente el incremento de glóbulos blancos, hemoglobina, recuento de células de médula ósea y el título. de. anticuerpos. hemaglutinantes. en. animales. inmunosuprimidos. con. 14. ciclofosfamida .. 7 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(8) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Por otro lado se ha reportado diferencia en los resultados a la administración de diferentes dosis de algunas plantas. Por ejemplo, al emplearse el extracto de Chryranthemun indicum linné en dosis orales de 75 – 300 mg/kg, la respuesta respecto a la producción de anticuerpos e hipersensibilidad tipo IV fue dosis dependiente 20. Bafna y Mishrash, emplearon las dosis orales de 200 – 800 mg/kg y encontraron que el extracto contrarrestaba la mielosupresión inducida por ciclofosfamida de una forma dosis dependiente 21. Para la maca se reportó que en ratas recién destetadas, los niveles. na. de lipoperoxidación en el cerebro (daño oxidativo) disminuyeron al incrementar la dosis. ici. de extracto acuoso de maca 22.. 1.2 Justificación:. ed. Habiendo ya trabajos previos que indican que la maca presenta un efecto inmunoestimulante al favorecer el incremento de leucocitos y de células de órganos. M. linfoides de ratones inmunosuprimidos, la justificación básica de este estudio es confirmar dicho efecto en nuestro medio; y, debido a que es probable que el. de. mencionado efecto varíe cuando se administra a diferentes dosis, se hace necesaria una evaluación comparativa para tener una información más completa y exacta sobre dichas propiedades, con el fin de contribuir a la investigación de esta planta y dimensionar. lio te. ca. adecuadamente su potencial terapéutico.. 1.3 Enunciado del Problema:. ¿Cuál es el efecto de Lepidium meyenii (maca), a dosis de 150 mg/kg y 300 mg/kg,. Bi b. sobre los leucocitos y la celularidad de órganos linfoides de ratones inmunosuprimidos?. 1.4 Hipótesis:. La administración de Lepidium meyenii (maca), a dosis de 150 mg/kg y 300 mg/kg, evidencia un efecto inmunoestimulante al favorecer el incremento del recuento de leucocitos y de la celularidad del bazo, timo y médula ósea de ratones inmunosuprimidos; y el incremento de la dosis produce una mayor superación del estado de inmunosupresión.. 8 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(9) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 1.5 Objetivos: 1.5.1 General: Comprobar el efecto de Lepidium meyenii (maca), dosis: 150 mg/kg y 300mg/kg, sobre el recuento de leucocitos y la celularidad del bazo, timo y médula ósea de ratones inmunosuprimidos.. 1.5.2 Específicos:. na. - Determinar el recuento de leucocitos y celularidad del bazo, timo y médula ósea de ratones sin administración de maca y no inmunosuprimidos.. ici. - Determinar el recuento de leucocitos y celularidad del bazo, timo y médula ósea de ratones sin administración de maca e inmunosuprimidos.. ed. - Determinar el recuento de leucocitos y celularidad del bazo, timo y médula ósea de ratones con administración de maca, dosis: 300 mg/kg, y no. M. inmunosuprimidos.. - Determinar el recuento de leucocitos y celularidad del bazo, timo y médula. inmunosuprimidos.. de. ósea de ratones con administración de maca, dosis: 300 mg/kg, e - Determinar el recuento de leucocitos y celularidad del bazo, timo y médula. ca. ósea de ratones con administración de maca, dosis: 150 mg/kg, y no inmunosuprimidos.. lio te. - Determinar el recuento de leucocitos y celularidad del bazo, timo y médula ósea de ratones con administración de maca, dosis: 150 mg/kg, e inmunosuprimidos.. Bi b. - Determinar el efecto de la administración de 150 mg/kg de maca, sobre el recuento de leucocitos y la celularidad del bazo, timo y médula ósea de ratones inmunosuprimidos.. - Determinar el efecto de la administración de 300 mg/kg de maca, sobre el recuento de leucocitos y la celularidad del bazo, timo y médula ósea de ratones inmunosuprimidos. - Comparar el efecto de la administración de 150 mg/kg con 300 mg/kg de maca, sobre el recuento de leucocitos y la celularidad del bazo, timo y médula ósea de ratones inmunosuprimidos. 9. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(10) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. II.. MATERIALES Y MÉTODOS. 2.1 Material de estudio: 1.1 Material biológico: Ratones Balb/c, machos, provenientes del bioterio del Instituto Nacional de. na. Salud, Lima –Perú; de 8 a 9 semanas de edad y con pesos entre 33 a 35. ici. gramos. ed. 1.2 Material botánico:. El tratamiento administrado fue elaborado en base al extracto Atomizado de. M. Lepidium meyenii (Maca), ecotipo rojo (JUVENS ®); procedente de la. ca. 2.2 Métodos y técnicas:. de. Universidad Peruana Cayetano Heredia, Lima.. 1.1 Tipo de investigación. lio te. El presente trabajo presenta un diseño de investigación experimental, con. Bi b. orientación aplicada y régimen libre.. 10 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(11) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 1.2 Muestra Para determinar el tamaño de la muestra se empleó la siguiente fórmula estadística:. Donde: n: Número mínimo de observaciones que deben efectuarse en el estudio. na. Zα = 1.96; es el nivel de confianza elegido, determinado por el valor de α.. ici. Para una confianza del 95% (α= 0,05).. ed. Zβ = 1.28, es el valor correspondiente al poder estadístico o potencia asignada a la prueba. Para un poder estadístico del 90 % (β = 0.10). M. S: desviación estándar asumida14 = 150. de. E: es el valor mínimo de la diferencia que se desea detectar14 = 308 Reemplazando valores, se obtuvo:. . Según este resultado, para. ca. esta investigación se asumió trabajar con 5 ratones por grupo.. lio te. 1.3 Criterios de Inclusión:. - Ratones Balb/c sanos. Bi b. - Machos. - de 8 a 9 semanas de edad - con peso corporal entre 33 –35 g.. 1.4 Criterios de Exclusión: - Animales con patologías aparentes - Edades superiores a 9 semanas de edad - Peso corporal mayor a 35 g, o inferior a 33g.. 11 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(12) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 1.5 Criterios de eliminación: - Ratones que fallezcan durante el tiempo de ejecución.. 2.3 Variables operacionales:. Indicador. Tipo. Variable Independiente. cualitativa cualitativa. Nominal Nominal. No administración de maca. cualitativa. Nominal. Inmunosupresión. cualitativa. Nominal. cualitativa. Nominal. Número total de leucocitos (103/mm3). Cuantitativa. Razón. Número de células del Timo (103/mm3). Cuantitativa. Razón. Número de células del Bazo (103/mm3). Cuantitativa. Razón. Número de células de la Médula Ósea (103/mm3). Cuantitativa. Razón. Inmunosupresión. M. No inmunosupresión. Bi b. lio te. ca. de. Variable Dependiente. Recuento de células. ici. Administración de maca, dosis: 300 mg/kg Administración de maca, dosis: 150 mg/kg. ed. Administración de Maca. Escala de medición. na. Variable. 12 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(13) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.4 Diseño procedimental 1.1 Metabolitos Secundarios de Lepidium meyenii (Maca). El extracto Atomizado de maca ecotipo rojo (JUVENS ®), fue sometido a marcha fitoquímica según el método propuesto por Miranda y Cuellar. 23. , con. el fin de evidenciar sus metabolitos secundarios.. na. 1.2 Animales de experimentación Todos los ratones fueron mantenidos en condiciones estándar de temperatura,. ici. humedad y luz y recibieron agua ad libitum y dieta de concentrado para animales. 3 días. seleccionaron 30 especímenes. mediante un muestreo probabilístico de. M. Se. ed. (conejina ®), para verificar su adaptación se mantuvieron bajo observación por. números consecutivos, asignándole un número aleatorio a cada espécimen para luego dividirlos en 6 grupos de 5 especímenes cada grupo, siendo de la siguiente. de. manera:. Grupo C: ratones sin administración de maca, no inmunosuprimidos.. ca. Grupo IS: ratones sin administración de maca, e inmunosuprimidos. Grupo M1: ratones con administración de maca, dosis: 300 mg/kg, no. lio te. inmunosuprimidos.. Grupo M1 – IS: ratones con administración de maca, dosis: 300 mg/kg, e inmunosuprimidos. Grupo M2: ratones con administración de maca, dosis: 150 mg/kg, no. Bi b. inmunosuprimidos.. Grupo M2 – IS: ratones con administración de maca, dosis: 150 mg/kg, e inmunosuprimidos.. 13 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(14) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 1.3 Administración de Lepidium meyenii (Maca) Se preparó una solución del extracto atomizado de maca a una concentración de 300mg/kg/día, se diluyó en agua destilada y se conservó a – 4º C bajo cero. Las dosis se administró en un volumen de 0.5 ml por vía oral, empleando una aguja de punción raquídea de acero inoxidable, de 6 cm de longitud, adaptada en la punta con una bolilla lisa. El tratamiento se administró todos los días, durante 20. na. días; en base a los reportes de Torres y Álvarez 14,15, para los grupos M1 y M1 – IS. De la misma manera se administró la dosis de 150mg/kg para los grupos M2. ici. y M2 - IS. Los otros dos grupos (IS y C) recibieron agua pura en las mismas. M. 1.4 La inmunosupresión experimental. ed. condiciones.. Con la finalidad de inducir inmunosupresión en los animales, tres grupos (M1 -. de. IS, M2 - IS e IS) recibieron 50 mg/ kg de peso corporal de Ciclofosfamida en dosis única, inyectando 0.1 ml por vía intraperitoneal, el día 13 del protocolo de. ca. tratamiento en base a los reportes publicados por Torres y Álvarez 14, 15.. lio te. 1.5 Eutanasia y Obtención de la muestra de sangre Se realizó la eutanasia de los ratones, utilizando Pentobarbital sódico 1ml /2.5kg de peso corporal, vía intraperitoneal; posteriormente se realizó la incisión para. Bi b. exponer el corazón y con una jeringa de 1ml se extrajo sangre intracardiaca.. 1.6 Evaluación del peso corporal. Al inicio del protocolo de tratamiento, el 1er día, se registró para cada ratón su peso corporal utilizando una balanza analítica, de la misma manera al final del protocolo, el día 21 vo. Los resultados se expresan como ganancia del peso corporal, es decir la diferencia entre el peso corporal final e inicial, en gramos.. 14 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(15) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 1.7 Determinación del recuento de leucocitos El recuento total de glóbulos blancos se realizó utilizando un hemocitómetro de Neubaüer, la pipeta para dilución de leucocitos y la solución de Turk.. 1.8 Determinación de la Celularidad de órganos linfoides Después de obtener el bazo, timo y las epífisis del fémur derecho de cada animal. na. de experimentación, estos fueron colocados de manera individual, sobre un tamiz en una placa Petri, y cubiertos con otro tamiz. Luego, se procedió a. ici. presionar el órgano con la ayuda de un embolo para disgregar el tejido y liberar las células. Después de esto se agregó 1 ml de solución de Turk. Posteriormente,. ed. se tomó 10 ul de la suspensión que fue diluida. La celularidad se determinó por recuento al microscopio utilizando una cámara de Neubauer.. M. El recuento de las células fue multiplicado por la inversa de su dilución para. de. obtener la cantidad final.. ca. 2.5 Análisis estadístico e interpretación de la información:. Para el procesamiento de los datos se usó el paquete estadístico SPSS 21, los datos. lio te. se presentan en tablas y figuras con sus medias y desviaciones estándar. Para observar que existe diferencia significativa entre las variables de los diferentes grupos de experimentación, se usó Análisis de Varianza. Además se utilizó la prueba de Duncan para observar diferencias entre cada grupo. La prueba fue. Bi b. significativa cuando el valor-p fue menor a 0,05 24. 2.6 Consideraciones éticas: Se tuvo en cuenta el cuidado, la utilización apropiada y el trato humanitario de los animales empleados en la investigación, además se utilizó un ambiente físico y espacio de acuerdo a la raza. Todo ello según lo publicado por la Organización Panamericana de la Salud, respecto al animal como sujeto de experimentación 25.. 15 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(16) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.7 Diseño experimental Protocolo de la administración del extracto acuoso de maca, dosis: 150mg/kg ó 300mg/kg, en ratones inmunosuprimidos con ciclofosfamida. El mismo. Bi b. lio te. ca. de. M. ed. ici. na. protocolo es para los no inmunosuprimidos.. 16 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(17) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. III.. RESULTADOS. 3.1 Metabolitos de Lepidium meyenii (Maca) En la tabla 1 se evidencia que el extracto atomizado de maca, ecotipo rojo, no contiene como metabolitos secundarios a las quinonas ni a los cardenólidos. Sin embargo se observa la presencia leve (+) de catequinas, cumarinas, saponinas y compuestos fenólicos. Respecto a los taninos, flavonoides, antocianinas y. na. alcaloides, se muestra que estos están presentes en cantidad moderada (++) en la sustancia en estudio. Y finalmente los metabolitos que contiene el extracto. ici. atomizado de maca en mayor cantidad son los triterpenos y esteroides,. Metabolitos secundarios en la raíz de Lepidium meyenii (Maca) ENSAYOS. RESULTADO. Catequinas Baljet Lieberman - Burchard Espuma Cloruro férrico Borntrager Kedde Gelatina Shinoda Antocianinas Dragendorff Mayer Wagner. + + +++ + + ++ ++ ++ ++ ++ ++. Bi b. lio te. ca. de. METABOLITOS SECUNDARIOS Catequinas Cumarinas Triterpenos y esteroides Saponinas Compuestos fenólicos Quinonas Cardenólidos Taninos Flavonoides Antocianinas Alcaloides. M. Tabla 1.. ed. evidenciándose una presencia intensa (+++) de estos.. (+++) Presencia intensa, (++) Presencia moderada, (+) Presencia leve, (-) Ausencia.. Fuente: Datos obtenidos por el investigador en el año 2013. 17 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(18) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 3.2 Peso Corporal En relación al peso de los animales de experimentación después de 20 días de tratamiento, la tabla 2, muestra que la mayor ganancia de peso (diferencia entre peso corporal final e inicial) lo obtuvieron los ratones con administración de maca, dosis: 300 mg/kg, no inmunosuprimidos(M1), seguidos del grupo de ratones. con. administración. de. maca,. dosis:. 150. mg/kg,. no. inmunosuprimidos(M2), y por último del grupo que recibió maca a la mayor. na. dosis y fue inmunosuprimido (M1-IS); pero no se halló diferencia significativa entre la ganancia de peso entre estos tres grupos.. De los grupos. ici. inmunosuprimidos se observó que el grupo M1-IS fue el que mostró una mayor. ed. ganancia de peso, seguido del grupo que recibió maca a la menor dosis (M2-IS); así mismo las cifras de variación de peso de los dos grupos mencionados tienden a ser semejantes a los cifras del grupo control(C), lo que se evidencia al no haber. M. diferencia significativa entre estos tres grupos. Por último se evidenció que en los animales inmunosuprimidos pero no tratados con maca (IS) la ganancia de. de. peso fue la menor de todos los grupos de estudio, aunque sin diferencia significativa al compararse con el grupo C y con el grupo M2-IS (tabla 2 y. ca. figura 1).. lio te. Tabla 2. Prueba de Duncan respecto a la diferencia entre Peso corporal final e inicial de los Animales de Experimentación Grupos para Alfa = 0.05. ni. G2. IS M2-IS C M1-IS M2 M1. 5 3 5 3 5 5. -1.62 -0.27 -0.12. Bi b. Grupo de Investigación. G3. -0.27 -0.12 0.6. G1. 0.6 1.52 1.72. Fuente: Datos obtenidos por el investigador en el año 2013 C: ratones sin administración de maca, no inmunosuprimidos. IS: ratones sin administración de maca, e inmunosuprimidos. M1: ratones con administración de maca, dosis: 300 mg/kg, no inmunosuprimidos. M1 – IS: ratones con administración de maca, dosis: 300 mg/kg, e inmunosuprimidos. M2: ratones con administración de maca, dosis: 150 mg/kg, no inmunosuprimidos. M2 – IS: ratones con administración de maca, dosis: 150 mg/kg, e inmunosuprimidos.. 18 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(19) 2 1,5 1 0,5 0. na. -0,5 -1 -1,5. ici. Media de la Diferencia entre Peso corporal Inicial y final (gr). Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. -2 IS. M1. M1-IS. M2. M2-IS. ed. C. M. Grupos Experimentales. ca. de. Figura 1. Diferencia entre peso corporal final e inicial. C: ratones sin administración de maca, no inmunosuprimidos. IS: ratones sin administración de maca, e inmunosuprimidos. M1: ratones con administración de maca, dosis: 300 mg/kg, no inmunosuprimidos. M1 – IS: ratones con administración de maca, dosis: 300 mg/kg, e inmunosuprimidos. M2: ratones con administración de maca, dosis: 150 mg/kg, no inmunosuprimidos. M2 – IS: ratones con administración de maca, dosis: 150 mg/kg, e inmunosuprimidos.. Como se observa en la figura Nº 1, la media de la diferencia entre el peso corporal final. lio te. e inicial fue en el grupo C: -0.12 gr, en el grupo IS: -1.62 gr, en el grupo M1: 1.72gr, en. Bi b. el grupo M1-IS: 0.6gr, en el grupo M2: 1.52gr, y en el grupo M2-IS: -0.27gr.. 19 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(20) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 3.3 Leucocitos Totales El grupo que IS fue el que presentó el recuento de leucocitos más bajo, con diferencia significativa. al compararlo con los otros grupos, excepto al ser. comparado con el grupo C, donde fue menor, pero no significativamente. Respecto a todos los grupos tratados con maca, se observa que el grupo M2 presentó. el. mayor. recuento de leucocitos totales, aunque no. significativamente. Sin embargo el grupo en mención se muestra con valores. na. significativamente mayores de leucocitos al ser comparado con el control. Luego se observa que los grupos M1, M2-IS y M1-IS presentaron un recuento. ici. de leucocitos ligeramente mayor al grupo control, pero no significativamente. Finalmente, de todos los grupos tratados con maca, el que recibió maca a la menor número de leucocitos,. ed. mayor dosis (M1) fue aquel que presentó el. M. aunque esto no fue significativo (tabla 3 y figura 2).. de. Tabla 3. Prueba de Duncan respecto al recuento de leucocitos totales Grupos para Alfa = 0.05. ni. IS C M1 M2-IS M1-IS M2. 5 5 5 3 3 5. lio te. ca. Grupo de Investigación. G3. 2.46 3.73. G2. 3.73 4.674 4.7 5.67. G1. 4.674 4.7 5.67 6.44. Bi b. Fuente: Datos obtenidos por el investigador en el año 2013. C: ratones sin administración de maca, no inmunosuprimidos. IS: ratones sin administración de. maca, e inmunosuprimidos. M1: ratones con administración de maca, dosis: 300 mg/kg, no inmunosuprimidos. M1 – IS: ratones con administración de maca, dosis: 300 mg/kg, e inmunosuprimidos. M2: ratones con administración de maca, dosis: 150 mg/kg, no inmunosuprimidos. M2 – IS: ratones con administración de maca, dosis: 150 mg/kg, e inmunosuprimidos.. 20 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(21) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 6 5. 4 3 2. na. Media del Número de Leucocitos en Sangre x10³. 7. 1. C. IS. ici. 0 M1. M1-IS. M2. M2-IS. ed. Grupos Experimentales. Figura 2. Recuento de leucocitos totales en sangre. C: ratones sin administración de maca,. de. M. no inmunosuprimidos. IS: ratones sin administración de maca, e inmunosuprimidos. M1: ratones con administración de maca, dosis: 300 mg/kg, no inmunosuprimidos. M1 – IS: ratones con administración de maca, dosis: 300 mg/kg, e inmunosuprimidos. M2: ratones con administración de maca, dosis: 150 mg/kg, no inmunosuprimidos. M2 – IS: ratones con administración de maca, dosis: 150 mg/kg, e inmunosuprimidos.. ca. Como se observa en la figura Nº 2, la media del recuento de leucocitos totales en sangre del grupo C fue 3.73 (103/mm3); en el grupo IS: 2.46 (103/mm3); en el grupo. lio te. M1: 4. 67 (103/mm3); en el grupo M1 – IS: 5.67 (103/mm3); en el grupo M2: 6.44. Bi b. (103/mm3); y en el grupo M2 – IS: 4.7 (103/mm3).. 21 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(22) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 3.4 Celularidad del Timo Al analizar el número de células del Timo, se observa que el grupo IS presentó los más bajos valores, siendo significativamente menor al compararlo con los grupos M1-IS, M2 y M1; además se observa que el grupo en mención (IS) presentó menor número de células en el timo que el grupo control y el grupo diferencia significativa.. El grupo M1 presentó. na. M2-IS, aunque sin. significativamente la mayor celularidad del Timo al ser comparado con el resto. ici. de grupos, incluido el control y los demás grupos tratados con maca. Luego se. ser. significativo; por otro. lado. ed. observa que el grupo M2 presentó valores superiores al grupo M1-IS, pero sin estos dos últimos grupos tuvieron. M. significativamente mayor cantidad de células en el timo al ser comparados con. de. el control. Finalmente, se tiene que, de todos los grupos que fueron tratados con maca, el grupo M2-IS, presentó significativamente el menor número de. ca. células en el Timo (tabla 4 y figura 3).. lio te. Tabla 4. Prueba de Duncan respecto a Celularidad del timo Grupo de Investigación. ni. Grupos para Alfa = 0.05 G3. G2. G1. Bi b. IS 5 25.24 M2-IS 3 29.60 C 5 34.12 M1-IS 3 52.17 M2 5 53.30 M1 5 70.60 Fuente: Datos obtenidos por el investigador en el año 2013. C: ratones sin administración de maca, no inmunosuprimidos. IS: ratones sin administración de maca, e inmunosuprimidos. M1: ratones con administración de maca, dosis: 300 mg/kg, no inmunosuprimidos. M1 – IS: ratones con administración de maca, dosis: 300 mg/kg, e inmunosuprimidos. M2: ratones con administración de maca, dosis: 150 mg/kg, no inmunosuprimidos. M2 – IS: ratones con administración de maca, dosis: 150 mg/kg, e inmunosuprimidos.. 22 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(23) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 70 60. 50 40. na. 30 20 10. ici. Media del Número de Células del Timo x10³. 80. C. IS. M1. M1-IS. M2. ed. 0. M2-IS. M. Grupos Experimentales. Figura 3. Celularidad del Timo. C: ratones sin administración de maca, no inmunosuprimidos.. de. IS: ratones sin administración de maca, e inmunosuprimidos. M1: ratones con administración de maca, dosis: 300 mg/kg, no inmunosuprimidos. M1 – IS: ratones con administración de maca, dosis: 300 mg/kg, e inmunosuprimidos. M2: ratones con administración de maca, dosis: 150 mg/kg, no inmunosuprimidos. M2 – IS: ratones con administración de maca, dosis: 150 mg/kg, e inmunosuprimidos.. ca. Como se observa en la figura Nº 3, la media del recuento de células del timo del grupo C fue 34.12 (103/mm3); en el grupo IS: 25.24 (103/mm3); en el grupo M1: 70. 6. lio te. (103/mm3); en el grupo M1 – IS: 52.17 (103/mm3); en el grupo M2: 53.3 (103/mm3); y en. Bi b. el grupo M2 – IS: 29.6 (103/mm3).. 23 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(24) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 3.5 Celularidad del Bazo Respecto a la celularidad del Bazo, se observa que de todos los grupos, IS presentó significativamente el menor número de células en el bazo, incluso al ser comparado con el grupo control y los inmunosuprimidos pero tratados con. na. maca (M1-IS y M2-IS). Al analizar a los grupos que recibieron maca, se observa que el grupo M1-IS presentó significativamente el mayor recuento de células del. ici. Timo, excepto al ser comparado con el grupo M2, donde fue mayor pero no presentó una celularidad del timo. ed. significativamente. Este último grupo. superior al control, pero no fue significativa. Además se observa que el grupo. M. M2-IS presentó valores superiores al grupo M1, pero sin ser significativo; por. de. otro lado estos dos grupos tuvieron menor cantidad de células en el timo al ser comparados con el control, aunque sin ser esto significativo. Finalmente, se. ca. tiene que, de todos los grupos que fueron tratados con maca, el que recibió maca a la mayor dosis (M1) presentó el menor número de células en el Timo,. lio te. pero siendo esto significativo solo al ser comparado con los grupos M2 y M1-IS. Bi b. (tabla 5 y figura 4).. 24 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(25) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Tabla 5. Prueba de Duncan respecto a celularidad del Bazo Grupos para Alfa = 0.05. Grupo de Investigación. ni. G2. IS M1 M2-IS C M2 M1-IS. 5 5 3 5 5 3. 71.82. G4. G3. 128.02 141.4 141.6. na. 141.4 141.6 161.7. G1. ici. 161.7 177.65. Fuente: Datos obtenidos por el investigador en el año 2013. ed. C: ratones sin administración de maca, no inmunosuprimidos. IS: ratones sin administración de maca, e inmunosuprimidos. M1: ratones con administración de maca, dosis: 300 mg/kg, no inmunosuprimidos.. M. M1 – IS: ratones con administración de maca, dosis: 300 mg/kg, e inmunosuprimidos. M2: ratones con administración de maca, dosis: 150 mg/kg, no inmunosuprimidos. M2 – IS: ratones con administración. Bi b. lio te. ca. de. de maca, dosis: 150 mg/kg, e inmunosuprimidos.. 25 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(26) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 180 160 140 120 100 80 60 40 20 0 IS. M1. M1-IS. M2. M2-IS. ici. C. na. Media del Número de Células del Bazo x10³. 200. ed. Grupos Experimentales. Figura 4. Celularidad del Bazo. C: ratones sin administración de maca, no inmunosuprimidos.. M. IS: ratones sin administración de maca, e inmunosuprimidos. M1: ratones con administración de maca, dosis: 300 mg/kg, no inmunosuprimidos. M1 – IS: ratones con administración de maca, dosis: 300 mg/kg, e inmunosuprimidos. M2: ratones con administración de maca, dosis: 150 mg/kg, no inmunosuprimidos. M2 – IS: ratones con administración de maca, dosis: 150 mg/kg, e inmunosuprimidos.. de. Como se observa en la figura Nº 4, la media del recuento de células del bazo del grupo C fue 141.6 (103/mm3); en el grupo IS: 71.82 (103/mm3); en el grupo M1: 128.02. ca. (103/mm3); en el grupo M1 – IS: 177.65 (103/mm3); en el grupo M2: 161.5 (103/mm3); y. Bi b. lio te. en el grupo M2 – IS: 141.4 (103/mm3).. 26 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(27) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 3. 6 Celularidad de la Médula Ósea S e observa el grupo IS presentó una ligera mayor celularidad que el grupo M1IS, aunque sin observarse diferencia significativa entre ambos. Así mismo el grupo mencionado (IS) presenta valores inferiores al ser comparado con los grupos tratados con maca y con el control, pero solo es inferior. na. significativamente al ser comparado con el grupo M2-IS. Al analizar a los grupos que recibieron maca, se observa que el grupo M2-IS presentó el mayor recuento de células del Bazo, excepto al ser. ici. significativamente. ed. comparado con el grupo M2, donde fue mayor pero no significativamente. Además se observa que esté último grupo presentó valores superiores al grupo. M. M1, pero sin ser significativo; por otro lado estos dos grupos tuvieron mayor. de. cantidad de células en el bazo al ser comparados con el control, aunque sin ser esto significativo. Finalmente, se tiene que, de todos los grupos que fueron M1-IS presentó la menor celularidad, pero siendo esto. ca. tratados con maca,. Bi b. lio te. significativo solo al ser comparado con el grupo M2-IS (tabla 6 y figura 5).. 27 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(28) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Tabla 6. Prueba de Duncan respecto a celularidad de la Médula Ósea Grupos para Alfa = 0.05. Grupo de Investigación. ni. G2. G1. ici. na. M1-IS 3 4.2 IS 5 4.36 C 5 4.5 M1 5 4.62 M2 5 5.36 5.36 M2-IS 3 6 Fuente: Datos obtenidos por el investigador en el año 2013. C: ratones sin administración de maca, no inmunosuprimidos. IS: ratones sin administración de. ed. maca, e inmunosuprimidos. M1: ratones con administración de maca, dosis: 300 mg/kg, no inmunosuprimidos. M1 – IS: ratones con administración de maca, dosis: 300 mg/kg, e inmunosuprimidos. M2: ratones con administración de maca, dosis: 150 mg/kg, no. M. inmunosuprimidos. M2 – IS: ratones con administración de maca, dosis: 150 mg/kg, e. Bi b. lio te. ca. de. inmunosuprimidos.. 28 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(29) 6,5 6 5,5 5 4,5 4. 3,5 3 IS. M1. M1-IS. M2. M2-IS. ici. C. na. Media del Número de Células de la Médula Ósea x10³. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ed. Grupos Experimentales. de. M. Figura 5. Celularidad de la Médula Ósea. C: ratones sin administración de maca, no inmunosuprimidos. IS: ratones sin administración de maca, e inmunosuprimidos. M1: ratones con administración de maca, dosis: 300 mg/kg, no inmunosuprimidos. M1 – IS: ratones con administración de maca, dosis: 300 mg/kg, e inmunosuprimidos. M2: ratones con administración de maca, dosis: 150 mg/kg, no inmunosuprimidos. M2 – IS: ratones con administración de maca, dosis: 150 mg/kg, e inmunosuprimidos.. Como se observa en la figura Nº 5, la media del recuento de células de la médula ósea. ca. del grupo C fue 4.5 (103/mm3); en el grupo IS: 4.36 (103/mm3); en el grupo M1: 4.62. lio te. (103/mm3); en el grupo M1 – IS: 4.2 (103/mm3); en el grupo M2: 5.36 (103/mm3); y en el. Bi b. grupo M2 – IS: 6.0 (103/mm3).. 29 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(30) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. IV.. ANÁLISIS Y DISCUSIÓN. El Perú presenta una gran variedad de plantas medicinales, por lo que se ha motivado a profundizar en el estudio y conocimiento de dichas plantas. Lepidium meyenii walp, maca, es una de ellas, la cual es muy conocida por sus efectos en el aspecto reproductivo. 10, 11. . Sin embargo estudios recientes han comprobado sus. na. propiedades antitumorales e inmunomoduladoras que la convierte en una fuerte candidata para la investigación de su actividad inmunoestimuladora 14,15, 19.. ici. En el presente trabajo se reporta la actividad de dos dosis de maca sobre el. en ratones inmunosuprimidos con. M. tanto en ratones inmunocompetentes como. ed. recuento de leucocitos y celularidad de órganos linfoides (timo, bazo y médula ósea),. ciclofosfamida. Ello como una aproximación para los estudios de inmunoestimulación. de. en individuos inmunocomprometidos.. Diversas investigaciones como las de Alzamora, Yllescas y García mencionan. ca. que dichas propiedades en el aspecto inmunológico son atribuidas a sus metabolitos secundarios, de todos ellos principalmente a los alcaloides, compuestos fenólicos, 18, 26, 27. . Por lo que se realizó un tamizaje fitoquímico de la. lio te. flavonoides y saponinas. sustancia utilizada en el estudio, extracto atomizado de maca- ecotipo rojo, donde se. Bi b. logró identificar la presencia leve de catequinas, cumarinas, saponinas y compuestos fenólicos. Además de una presencia moderada de taninos, flavonoides, antocianidinas y alcaloides. Y finalmente se observó una presencia intensa de triterpenos y esteroides (Tabla 1). La presencia de todos estos metabolitos secundarios también ha sido reportada por otros autores; así tenemos que Yllescas (1994) y Gonzales et al. (2006), en sus respectivos trabajos, indican que la maca tiene como metabolitos secundarios a los alcaloides, flavonoides, esteroides, triterpenos, compuestos fenólicos, cumarinas, taninos y saponinas 1, 26. 30 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(31) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Además se tiene que en el trabajo de Sandoval et al. (2002) se encontró la presencia de catequinas 28 y Muhammad et al. (2002) reportan la presencia de antocianinas 29. Sin embargo ninguno de los estudios mencionados reportan la intensidad de la presencia de estos metabolitos, lo cual si se indica en el presente trabajo. Entre los fármacos que causan inmunosupresión, están los agentes alquilantes. na. que provocan su acción citotóxica mediante la inhibición de la división celular a través del bloqueo de la síntesis de ácidos nucleicos, siendo Ciclofosfamida uno de los 30. . En el presente trabajo se utilizó una. ici. fármacos más importantes de este grupo. ed. concentración de 50mg/Kg de ciclofosfamida y sus resultados se evaluaron ocho días después de su administración. Su efecto inmunosupresor se ve reflejado en los valores. M. de la ganancia de peso corporal, recuento de leucocitos totales, celularidad del timo, del. de. bazo y de la médula ósea de los animales del grupo IS, los cuales todos resultaron menores al compararse con los del grupo control. Varias investigaciones avalan la. ca. eficacia de la ciclofosfamida como inmunosupresor, como los realizados por Torres (2008) y Bilal et al. (2001). que utilizando una dosis de 50 mg/kg,. encontraron. lio te. disminución tanto en el peso corporal, título de anticuerpos y dinamismo de los grupos inmunosuprimidos. 14, 31. . Así mismo se observó que no para todas las variables. Bi b. el grupo IS presentó valores inferiores con diferencia significativa respecto al control. Lo mismo se da al analizar a los grupos tratados con maca; e incluso se tiene que en ellos,. algunas variables resultaron con valores similares al comparar. los grupos. inmusuprimidos con los inmunocompetentes. De la Paz et al. (1997) emplearon ciclofosfamida para inducir inmunosupresión en ratones y evaluaron los resultados 2, 4, 7, 9 y 14 días después de la administración de la droga, ellos observaron que la mielosupresión y la leucopenia es más pronunciada hasta el cuarto día, tiempo después los valores tienden a igualarse al control 32. Ya que los resultados de este trabajo fueron 31 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(32) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. evaluados 8 días post ciclofosfamida, esto sería determinante para la recuperación del sistema inmune de manera natural; y por ello no todos los valores de las variables estudiadas de los grupos inmunosuprimidos presentaron valores significativamente inferiores a los inmunocompetentes. Por otro lado, si observamos a todos los grupos inmunosuprimidos, los. na. resultados indican que la administración de maca a ambas dosis contribuyó a revertir el efecto de la ciclofosfamida respecto al peso corporal, al observarse que los grupos. ici. tratados presentaron una ganancia de peso superior respecto a los no tratados, pero. ed. dicho efecto es significativo solo cuando a los animales se les administra la mayor dosis. En el estudio de Castañeda et al. (2007) se reportó que la administración de. M. maca elevó ligeramente las proteínas totales en relación al grupo control. 33. , lo que. animales tratados.. de. tendría relación con los mayores valores en el peso corporal evidenciado en los. ca. De los resultados obtenidos respecto al recuento de leucocitos totales, se infiere que ya que el grupo M1-IS y M2-IS, presentaron significativamente mayor cantidad de. lio te. leucocitos que el grupo IS; la administración de maca logra proteger frente a la leucopenia producida por ciclofosfamida, siendo además esta protección ligeramente. Bi b. mayor cuando se administra una dosis de 300 mg/kg. Este efecto también fue encontrado por Torres (2008) al observar un mayor recuento de glóbulos blancos, linfocitos y hemoglobina en el grupo de ratones tratados con maca, tanto en la respuesta inmune primaria como en la secundaria. 14. . Así mismo García (2010) reportó que en. personas saludables y en aquellas inmunosuprimidas HIV+, tres extractos de maca lograron incrementar el número de leucocitos respecto al control 27. Al observar los valores del. número celular del Timo, se aprecia que la. administración de maca a ambas dosis. logró contrarrestar la disminución de la 32. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(33) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. celularidad del timo producida por la inmunosupresión experimental, pero la superación de dicho estado es significativa solo cuando a los animales se les administra la mayor dosis, ya que se aprecia que este grupo tiene valores significativamente mayores al ser comparado con el grupo IS e incluso con el control. Tal hecho se corresponde con lo encontrado por Torres (2008), en cuyo trabajo se registró un efecto significativo en la. 300 mg/kg de maca, en comparación al no tratado. 14. na. respuesta inmune primaria; con una mayor celularidad del timo en el grupo tratado con . El mismo efecto, a la misma. ici. dosis, reportó Álvarez (2008) al tratar con maca a ratones inmunosuprimidos con. ed. ciclofosfamida 15.. En el ratón, la hematopoyesis ocurre principalmente en la médula ósea, pero. M. también puede darse fuera de ella, en órganos como el bazo, contribuyendo así a la. de. hematopoyesis medular en condiciones de estrés, como una reacción compensatoria a la inmunosupresión por ciclofosfamida, ya que la médula se vuelve inadecuada para 34. .. Así mismo se aprecia que la administración. ca. mantener una hematopoyesis normal. de maca, tanto a 150 mg/kg como a 300 mg/kg de peso corporal, logró tener un efecto consiguiendo que los grupos M1-IS y M2-IS presenten. lio te. inmunoestimulante,. significativamente mayor recuento celular en el bazo que el grupo IS. La acción de la. Bi b. maca sobre la celularidad del bazo fue estudiada por Torres (2008) y Álvarez (2008), quienes encontraron que los ratones inmunosuprimidos y tratados mostraron mayor promedios de celularidad del bazo que los no tratados 14, 15. Además al evidenciarse que el grupo que recibió la mayor dosis presenta significativamente un mayor recuento que el otro grupo tratado, tal efecto se muestra dosis dependiente.. Este resultado en el. bazo podría explicarse por el efecto que tiene la maca al incrementar la producción de tres citoquinas (IL-3, GM-CSF y IL-7) en el bazo, tal como quedó demostrado por. 33 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(34) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Álvarez y Alzamora (2013) 19, lo cual está asociado a una hematopoyesis creciente en el mencionado órgano, tanto en el linaje mieloide como linfoide 35. La médula ósea es un lugar de continua proliferación y renovación de células sanguíneas, además de ser una fuente de células involucradas en la respuesta inmune. Debido a su alto grado de proliferación celular, la médula ósea se convierte en uno de. los ratones inmunosuprimidos con. na. los órganos más afectado durante cualquier terapia de inmunosupresión. Se observa en administración de 150 mg/Kg, una celularidad. ici. significativamente mayor al compararse con el grupo IS e incluso con el control; ello. ed. indicaría que a esta dosis hay una recuperación de la disminución del recuento celular en la médula ósea provocada por la ciclofosfamida, lo que coincide con lo obtenido en. M. el estudio de Torres (2008), donde también dicha celularidad se vio incrementada en. de. los grupos tratados 14. Sin embargo se aprecia que en los ratones inmunosuprimidos la administración de la mayor dosis, disminuye, aunque no significativamente,. el. ca. recuento celular en la médula ósea en relación a los grupos IS, control y el grupo M1. Dicho efecto también es reportado por el estudio de Álvarez (2008), donde los ratones. lio te. inmunosuprimidos que recibieron maca- ecotipo rojo, mostraron los menores promedios celulares de médula ósea respecto al grupos no tratados y al grupo control. 15. . Al. Bi b. parecer en un organismo inmunocomprometido, la administración de 300mg/kg de maca ejerce su acción estimulando a las citoquinas hematopoyéticas, aumentando en la sangre periférica todas las líneas celulares, pero no solo estimulando su proliferación sino también propiciando su migración hacia los órganos linfoides de destino, por lo que también realizaría un efecto quimiotáctico, promoviendo su salida más rápida a la sangre periférica con el objetivo de remplazar las células linfoides que se están agotando por defender el sistema inmune. 16. . Álvarez y Alzamora (2013), evidenciaron. una mayor producción de tres citoquinas (IL-3, FSC-GM y IL-7) en los grupos tratados 34 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(35) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. con maca, lo que influenciaría en la repoblación de la médula ósea y sangre periférica, debido al papel importante que juegan esas citoquinas en la supervivencia, proliferación y diferenciación de las células madre y progenitoras hematopoyéticas. 19. . Todo ello. explicaría el mayor peso corporal, mayor recuento de leucocitos, mayor celularidad del bazo y timo, y el menor recuento de células en la médula ósea que se obtiene al. na. administrar la mayor dosis de maca.. ici. La administración del extracto Atomizado de maca ecotipo rojo, a dosis de 150. ed. mg/kg y 300 mg/kg, a ratones inmunosuprimidos con ciclofosfamida; puede revertir los efectos supresores de este agente citotóxico, lo cual fue demostrado al favorecer el. M. incremento del recuento de leucocitos, de las células del timo y bazo; y disminuyendo. homeostasis. inmunológica.. de. el número celular en la médula ósea, probablemente por un efecto restaurador de la Así mismo dichas propiedades se muestran dosis. ca. dependiente, siendo 300 mg/kg la dosis óptima.. lio te. El efecto inmunoestimulante dosis dependiente, de Lepidium meyenii walp, maca, determinado en el presente trabajo, abre nuevas posibilidades en el campo de la. Bi b. investigación clínica, farmacológica e inmunológica; lo que podría sentar las bases para utilizar esta planta como tratamiento en las personas que padecen algún estado de inmunosupresión, al fin de restaurar el nivel y funcionamiento de su sistema inmune, que unido a su capacidad energizante y revitalizante la colocarían como un excelente agente para ser utilizado en una terapia alternativa o como adyuvante del tratamiento de los pacientes inmunodeprimidos.. 35 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(36) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. V.. CONCLUSIONES. Al analizar el efecto de Lepidium meyenii (maca), dosis: 150 mg/kg y 300mg/kg, sobre el recuento de leucocitos y la celularidad del bazo, timo y médula ósea de ratones inmunosuprimidos, se concluye que: 1. El Grupo de ratones al que no se le administró maca y no fue inmunosuprimido,. de celularidad del bazo de 141.6 (103/mm3). celularidad de la médula ósea de 4.5 (103/mm3).. y de. ici. timo de 34.12 (103/mm3),. na. presentó una media de recuento de leucocitos de 3.73 (103/mm3), de celularidad del. ed. 2. El Grupo de ratones al que no se le administró maca pero fue inmunosuprimido, presentó una media de recuento de leucocitos de 2.46 (103/mm3), de celularidad del de celularidad del bazo de 71.82 (103/mm3) y de. M. timo de 25.24 (103/mm3),. de. celularidad de la médula ósea de 4.36 (103/mm3).. 3. El Grupo de ratones al que se le administró 300 mg/kg de maca y no fue. ca. inmunosuprimido, presentó una media de recuento de leucocitos de 4. 67 (103/mm3),. lio te. de celularidad del timo de 70. 6 (103/mm3), de celularidad del bazo de 128.02 (103/mm3) y de celularidad de la médula ósea de 4.62 (103/mm3). 4. El Grupo de ratones al que se le administró 300 mg/kg. de maca y fue. Bi b. inmunosuprimido, presentó una media de recuento de leucocitos de 5.67 (103/mm3),. de celularidad del timo de 52.17 (103/mm3), de celularidad del bazo de 177.65 (103/mm3) y de celularidad de la médula ósea de 4.2 (103/mm3).. 5. El Grupo de ratones al que se le administró 150 mg/kg. de maca y no fue. inmunosuprimido, presentó una media de recuento de leucocitos de 6.44 (103/mm3), de celularidad del timo de 53.3 (103/mm3),. de celularidad del bazo de 161.5. (103/mm3) y de celularidad de la médula ósea de 5.36 (103/mm3).. 36 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(37) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 6. El Grupo de ratones al que se le administró 150 mg/kg. de maca y fue. inmunosuprimido, presentó una media de recuento de leucocitos de 4.7 (103/mm3), de celularidad del timo de 29.6 (103/mm3),. de celularidad del bazo de 141.4. (103/mm3), y de celularidad de la médula ósea de 6.0 (103/mm3). 7. La administración de 150 mg/kg de maca a ratones inmunosuprimidos, logró tener. na. un efecto inmunoestimulante en relación a los leucocitos, células del bazo y de la médula ósea; que fue demostrado por un recuento significativamente mayor en los. ici. ratones tratados con dicha dosis (M2 – IS) respecto al grupo no tratado (IS).. ed. 8. La administración de 300 mg/kg de maca a ratones inmunosuprimidos, logró tener un efecto inmunoestimulante en relación a los leucocitos, células del timo y del. M. bazo; que fue demostrado por un recuento significativamente mayor en los ratones. de. tratados con dicha dosis (M1 – IS) respecto al grupo no tratado (IS). 9. La administración de 300 mg/kg de maca a ratones inmunosuprimidos, logró tener. ca. un efecto inmunoestimulante significtivamente mayor en relación a los leucocitos y células del bazo respecto a la dosis de 150 mg/kg. Sin embargo los ratones que. lio te. recibieron la mayor dosis, presentaron un menor recuento celular en la médula ósea en relación al otro grupo;. ello probablemente por un efecto restaurador, dosis. Bi b. dependiente, de la homeostasis inmunológica.. 37 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(38) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. VI.. RECOMENDACIONES. 1. Se recomienda profundizar el estudio a nivel molecular de Lepidium meyenii, ya que queda pendiente descubrir cuáles son las cascadas y las moléculas de señalización que están involucradas en su efecto, para una adecuada aplicación. na. en el campo de la nutrición farmacológica. 2. Es necesario que se realicen otros estudios para ampliar el espectro de actividad. ici. inmunoestimulante de Lepidium meyenii.. ed. 3. Es importante que se diseñen estudios para valorar la efectividad, los efectos adversos, así como la dosis terapéutica de Lepidium meyenii para la población. Bi b. lio te. ca. de. M. humana.. 38 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(39) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. VII.. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS. 1. Gonzales GF. Biological effect of Lepidium meyenii, Maca, a plant from the highlands of Perú. En: Singh VK, Bardwaj R, Govil JN, Sharma RK (Eds). Recent Progress in Medical plants. Natural Products. USA: Studium Press LLC.. na. 2006; 15:217-42. 2. Bianchi A. Maca Lepidium meyenii. Bol Latinoam Caribe Plant Med Aromat.. ici. 2003; 2(3):26-44.. ed. 3. Castaño M. Maca (Lepidium peruvianum Chacon): composición química y propiedades farmacológicas. Clin Cancer Res. 2006; 12(5):1447-53.. M. 4. Cikutovic M, Cikutovic P. Plantas Altoandinas y su Efecto Sobre la Fertilidad:. de. ¿Mito o Realidad? Ciencia y Trabajo. 2005; 7(16): 41-48. 5. Bassols G, Gurni A, Rivas M, Vignale N. Micrografía analítica de raíces de. 9(6): 440 – 445.. ca. Lepidium meyenii (Brassicaceae). Bol Latinoam Caribe Plant Med Aromat 2010;. lio te. 6. Piacente S , Carbone V , Plaza A , Zampelli A , C pizza . Investigation of the Tuber Constituents of Maca (Lepidium meyenii walp) J. Agric. Food. Bi b. Chem. 2002; 50 (20): 5621–5625. 7. Canales M, Aguilar J, Prada A, Marcelo A, Huamán C, Carbajal L. Evaluación nutricional. de. Lepidium. meyenii. (Maca). descendencia. Alan [online]. 2000 [citado. en. ratones. albinos. y su. 2013-01-14]; 50(2): 126-133.. Disponible. en:. <http://www.scielo.org.ve/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S000406222000000200003&lng=es&nrm=iso>. ISSN 0004-0622.. 39 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

Figure

Actualización...

Referencias

Actualización...