2018
“EVALUACIÓN DEL EFECTO LARVICIDA DEL EXTRACTO ETANÓLICO DE Ocimum basilicum (ALBAHACA) SOBRE LARVAS DE CUARTO (4) ESTADIO DE Aedes aegypti EN
CONDICIONES DE LABORATORIO”
SANDRA PAOLA MEJIA SERRANO
INGRY PAOLA PÉREZ VARGAS
UNIVERSIDAD DISTRITAL FRANCISCO JOSÉ DE CALDAS FACULTAD DE MEDIO AMBIENTE Y RECURSOS NATURALES
2018
“EVALUACIÓN DEL EFECTO LARVICIDA DEL EXTRACTO ETANÓLICO DE Ocimum basilicum (ALBAHACA) SOBRE LARVAS DE CUARTO (4) ESTADIO DE Aedes aegypti EN
CONDICIONES DE LABORATORIO”
SANDRA PAOLA MEJIA SERRANO COD. 20142085071
INGRY PAOLA PÉREZ VARGAS COD. 20142085058
Trabajo de grado en modalidad de investigación-innovación presentado como requisito para optar por el título de Tecnólogas en Saneamiento Ambiental
DIRECTOR
DIEGO TOMAS CORRADINE MORA Médico Veterinario M Sc Salud Pública
UNIVERSIDAD DISTRITAL FRANCISCO JOSÉ DE CALDAS FACULTAD DE MEDIO AMBIENTE Y RECURSOS NATURALES
NOTA DE ACEPTACIÓN
Diego Tomas Corradine Mora
Docente Director
Ángela María Wilches Flórez
Bogotá, Octubre del 2018
Dedicatoria
Dedicamos este trabajo a nuestros parientes y amigos cercanos quienes con gran apoyo y confianza nos acompañan en el desarrollo del trascender humano y que nos llenan de fortaleza para enfrentar los obstáculos del camino y para construir un horizonte lleno de sueños, en donde, algunos llegan a ser tangibles con este logro.
Agradecimientos
Agradecemos a la vida por permitirnos haber hecho parte de la comunidad estudiantil de la Universidad Distrital Francisco José de Caldas que para el contexto educativo de nuestro país es para nosotras todo un privilegio habernos formado en una universidad de carácter estatal que promueve el pensamiento crítico, libre y autónomo.
Nos sentimos felices con nuestro proceso de formación profesional, gracias al acompañamiento del equipo de docentes del proyecto curricular Tecnología en Saneamiento Ambiental quienes nos brindaron sus conocimientos, especialmente al profesor Diego Tomas Corradine Mora quien fue una guía imprescindible para el desarrollo de este trabajo. Así mismo, agradecemos a la profesora Ángela María Wilches por ser parte en el proceso de evaluación de este trabajo de investigación que fue concebido con gran dedicación y esfuerzo a nuestros compañeros por hacer parte de nuestra trayectoria, por crecer juntos y permitirnos dar lugar a la creación del conocimiento colectivo.
Contenido
1) Resumen...12
2) Abstract...14
3) Introducción...16
4) Objetivos...19
4.1) Objetivo general...19
4.2) Objetivos específicos...19
5) Marco teórico...20
5.1) Marco referencial...20
5.1.1) Aedes aegypti...20
5.1.2) Ciclo de vida...24
a) Fase 1: huevo...25
b) Fase 2: larva...26
c) Fase 3: pupa...27
d) Fase 4: adulto...28
5.1.3) Distribución de Aedes aegypti en el mundo...30
5.1.4) Aedes aegypti en Colombia...31
5.1.5) Enfermedades de Salud Publica………... 33
a) El dengue...33
b) El zika...35
c) Fiebre amarilla...36
d) Fiebre del Chikunguña... 36
5.1.7) Ocimum basilicum (Albahaca)...43
5.1.8) Propiedades...45
5.1.9) Aceites esenciales...45
5.2) Antecedentes...47
6) Metodología...51
6.1) Obtención de larvas………...51
6.2) Obtención del extracto: ...52
6.3) Preparación de las diluciones...54
6.4) Bioensayos...55
6.5) Lecturas de Mortalidad………56
6.6) Análisis………56
7) Resultados...56
7.1) Eficiencia del extracto natural de Ocimum basilicum (Albahaca) como larvicida a las diferentes concentraciones experimentales……….58
7.2) Análisis de mortalidades en los distintos tratamientos experimentales en relación con el tiempo de exposición………..……….60
7.3) Análisis de regresión logarítmica, para el cálculo de las concentraciones letales CL 50 y CL 90………..………..……….61
7.4) Análisis de tiempos letales TL 50 y TL 90……….62
7.5) Análisis Estadístico Anova de un factor………...65
8) Discusión y análisis de resultados...67
9) Conclusiones...69
Índice de figuras
Figura 1. Aedes aegypti adulto. ...21
Figura 2. Ciclo de vida de Aedes aegypti. ...24
Figura 3. Huevos de Aedes aegypti. ...25
Figura 4. Larva de Aedes aegypti...26
Figura 5. Pupa de Aedes aegypti. ...27
Figura 6. Adulto de Aedes aegypti………...28
Figura 7. Distribución de Aedes aegypti en América Latina………...30
Figura 8. Distribución de Aedes aegypti en Colombia...31
Figura 9. Ocimum basilicum (Albahaca)...44
Figura 10. Jaula de cría Aedes Aegypti...51
Figura 11. Extractor Soxlhet...53
Figura 12. Rotoevaporador IKA RV10………...53
Figura 13. Extracto de Albahaca ……….………...54
Figura 14. Montaje de Bioensayos...55
Figura 15. Curva de regresión logarítmica para porcentajes de mortalidad y concentraciones…..62
Índice de tablas
Tabla 1. Taxonomía Aedes aegypti...23
Tabla 2. Taxonomía Ocimum basilicum (Albahaca)………...44
Tabla 3. Porcentaje de mortalidad corregido con la fórmula de Abbott……….57
Índice de anexos
Anexo 1. Registro de mortalidades en los tratamientos. ...82 Anexo 2. Cálculo de las aproximaciones de las concentraciones letales CL 50 y CL 90………...84 Anexo 3. Formato registro para porcentajes de mortalidades acumuladas durante los
1. Resumen
El mosquito Aedes aegypti es el principal vector responsable de la transmisión de una variedad de enfermedades tales como el dengue, el zika, la fiebre amarilla y la fiebre del chikunguña las cuales aquejan diferentes poblaciones del mundo principalmente en las zonas tropicales.
En el área de investigación de salud pública se contempla el control biológico y prevención de enfermedades transmitidas por vectores, esto mediante el planteamiento de soluciones alternativas que controlen la reproducción del vector y que no tengan impactos negativos sobre el medio ambiente.
El presente trabajo de investigación tiene como fin último demostrar la eficacia del efecto larvicida del extracto etanólico de Ocimum basilicum (albahaca), sobre larvas de cuarto estadio de Aedes aegypti en condiciones de laboratorio, para lo cual fueron realizados 5 bioensayos con larvas vivas sometidas a concentraciones en un rango de 1100 ppm hasta 1500 ppm del mencionado extracto, cada bioensayo contó con cuatro repeticiones y un testigo, utilizando un total de 625 larvas de cuarto estadio y realizando lecturas de mortalidad para evaluar el efecto tóxico del extracto a las 0, 2, 12, 24, 36 y 48 horas.
se considera un resultado favorable teniendo en cuenta que la OMS establece que la concentración de los larvicidas y repelentes no debe sobrepasar las 5000 ppm, además los resultados obtenidos para todos los tratamientos realizados estuvieron por encima del 50% de mortalidad.
Palabras clave: Aedes aegypti, mosquito, control biológico, larvicida, Ocimum basilicum,
2. Abstract
Aedes aegypti mosquito is the first vector responsible for the transmission a lot of diseases such as dengue, zika, yellow fever and chikunguña fever, these diseases afflict different populations of the world, the tropics places is one of the most afflict.
The public health area has as mission the biologic control and prevention of vector-borne diseases, the biologic control and prevention of vector-borne diseases is achieved with the propose alternative solutions that control the reproduction of the vector and that do not have negative impacts on the environment.
The purpose of this research work is demonstrate the efficacy of the larvicidal effect of the ethanolic extract of Ocimum basilicum (basil), on the fourth stage larvae of Aedes aegypti under laboratory conditions. We prepare 5 bioassays with live larvaes, the larvaes were subjected to concentrations in a range of 1100 ppm to 1500 ppm of basil extract each bioassay had four repetitions and a control, using a total of 625 fourth-stage larvae and performing mortality readings to evaluate the toxic effect of the extract at 0, 2, 12, 24, 36 and 48 hours.
of larvicides and repellent must not exceed 5000 ppm, also the results obtained from all the
treatments we evaluated were greater than 50% mortality.
key words: Aedes aegypti, mosquito, biologic control, larvicide, Ocimum basilicum, basil,
3. Introducción
Las principales enfermedades transmitidas por vectores representan alrededor del 17% de la carga mundial estimada de enfermedades transmisibles y causan más de 700.000 muertes al año, siendo las tasas de morbilidad y mortalidad desproporcionadamente altas en las poblaciones que carecen de infraestructuras adecuadas y en el mismo sentido de sistemas de acueducto, alcantarillado y saneamiento básico, encontrándose además una mayor incidencia las zona tropicales y subtropicales (Organización Mundial de la Salud (OMS), 2017).
La transmisión y el riesgo de las enfermedades transmitidas por vectores están cambiando de forma rápida debido a la urbanización no planificada, al aumento de los movimientos de personas y bienes, a cambios medioambientales, entre otros (OMS, 2017).
El mosquito Aedes aegypti es considerado como el vector primario de los virus del dengue, la fiebre del chikungunya, del zika y de la fiebre amarilla urbana, los seres humanos se infectan por picaduras de hembras infectadas, que a su vez se infectan principalmente al succionar la sangre de personas infectadas (Olano, 2016).
El virus infecta el intestino medio del mosquito y luego se extiende hasta las glándulas salivales en un período de entre 8 y 12 días. Tras este período de incubación, el mosquito puede transmitir el virus a las personas al picarlas (OMS, 2018).
carácter prioritario en el contexto regional y nacional, siendo el mosquito Aedes aegypti encontrado en todos los departamentos hasta los 2.302 msnm (Cabezas et al., 2017)
El dengue es una enfermedad infecciosa producida por el virus del dengue (DENV). Pertenece al género Flavivirus, de la familia Flaviviridae que, a la vez, pertenece al grupo de los Arbovirus (virus transmitidos por artrópodos), existen 4 serotipos llamados DENV-1, DENV-2, DENV-3 y DENV-4, el dengue representa uno de los mayores retos de la salud pública en la región tropical y subtropical, con 50 a 100 millones de casos anuales de fiebre por dengue y 250 000 a 500 000 casos de fiebre hemorrágica por dengue y síndrome de shock por dengue (Ochoa et al., 2015).
Por otro lado, la fiebre del chikunguña, tiene como agente causal un arbovirus re-emergente de amplia expansión en la última década, este que pertenece al género Alfavirus, familia Togaviridae, encontrándose así que en el mes de diciembre del año 2013, la Organización Mundial de la Salud (OMS) y la Organización Panamericana de la Salud (OPS), emitieron la primera alerta epidemiológica sobre la entrada del virus que provoca la fiebre del chikungunya en la región del Caribe, al detectarse por primera vez su transmisión autóctona en la región de las Américas (Placeres et al., 2014).
asintomáticas que contribuyen a la diseminación de la enfermedad si son picados por los mosquitos vectores (Ministerio de Salud, 2014).
Es de vital importancia dar un enfoque al control de vectores para hacer frente al impacto de las enfermedades transmitidas por los mismos, tal enfoque debe ir dirigido a la implementación de alternativas innovadoras que permitan controlar la propagación del mosquito sin generar impactos negativos en el medio ambiente.
Por tal razón el presente trabajo de investigación-innovación expone el diseño y aplicación a nivel de laboratorio de un larvicida orgánico a base de Albahaca (Ocimum basilicum) con el fin de controlar el desarrollo en la etapa larvaria del mosquito Aedes aegypti, destacando la acción de repelencia natural en sus componentes activos para lo cual serán seguidos los lineamientos y directrices del documento “Guidelines for laboratory and field testing of mosquito larvicides” de la Organización Mundial de la Salud (2005).
4. Objetivos
4.1. Objetivo general
Evaluar el efecto larvicida del extracto etanólico de Ocimum basilicum sobre larvas de Aedes aegypti para su control biológico en condiciones de laboratorio.
4.2. Objetivos específicos
● Evaluar el efecto larvicida del extracto etanólico de Ocimum basilicum (Albahaca) a concentraciones de 1100, 1200, 1300, 1400 y 1500 ppm.
● Estimar las concentraciones letales LC 50 y LC 90 del extracto etanólico de Ocimum basilicum, sobre larvas de cuarto estadio de Aedes aegypti.
5. Marco teórico
5.1. Marco referencial
5.1.1. Aedes aegypti
Este mosquito, de origen africano, fue introducido en América a principios de siglo. Es una especie diseminada por el hombre por medio del transporte de sus adultos, huevos, larvas o ninfas en barcos, aviones o transportes terrestres. En América es un mosquito doméstico que se caracteriza por reproducirse en recipientes artificiales del domicilio o sus alrededores. Prefieren agua limpia, con bajo tenor orgánico y de sales disueltas. La puesta de huevos la realizan en la superficie del recipiente en la interfase agua-aire. El ciclo completo de A. aegypti, de huevo a adulto, se completa en óptimas condiciones de temperatura y alimentación en 10 días (Nelson M, 1986).
Es un eficaz vector de arbovirosis como la fiebre amarilla y el dengue, motivando con esta última enfermedad una de las grandes problemáticas de salud pública mundial, con alta morbilidad capaz de bloquear las actividades de ciudades y países en picos epidémicos de esta enfermedad viral. Además es un ejemplo de adaptación de una especie de mosquito al ámbito humano, con criaderos, hábitat, fuente de alimentación, desplazamientos activos y pasivos ligados al ámbito domiciliario (OPS/OMS en Uruguay, 2014).
de agua, lo que lleva a su almacenamiento, muchas veces inadecuado (tanques bajos y albercas), dentro de los domicilios, así como por la falta de saneamiento básico que resulta en la disposición de residuos sólidos a campo abierto, especialmente de residuos que pueden contener agua lluvia, problemas que se presentan con mayor frecuencia en las áreas rurales (Cabezas et al., 2017)
Figura 1. Aedes aegypti adulto.
Fuente: (Organización Mundial de la Salud, 2017).
Los sitios de cría del Aedes son fundamentalmente artificiales: urbanos (en baldíos, cementerios, desarmaderos, basurales) o domésticos (neumáticos, floreros, botellas, bebederos de animales, latas abiertas o contenedores de cualquier tipo, depósito de agua de bebida, cisternas, vasijas, tinajas, todo tipo de recipientes en desuso, aún pequeños). (MinSalud Argentina,s.f).
propicias el mosquito no suele desplazarse a grandes distancias de los sitios de oviposición, pero, eventualmente puede reconocerse un rango de dispersión activa de hasta 1-2 kilómetros. Por otro lado la dispersión a través de medios de transporte (automóviles, trenes, camiones, ómnibus, barcos, aviones, otros) es uno de los factores más importantes de diseminación de estos mosquitos (MinSalud Argentina,s.f).
Este mosquito en su taxonomía se encuentra dentro de la clase Insecta, esta es la que más cantidad tiene de especies de todos los seres vivos, con más de 1.000.000 especies descritas y a su vez se encuentra dentro el orden Diptera (que significa dos alas), con más de 150.000 especies conocidas se sitúan entre los 4 órdenes con mayor número de especies de todos los seres vivos. Una de sus principales características es la posesión de sólo dos alas, ya que el segundo par de alas está transformado en unos muñones llamados halterios que le sirven para estabilizar el vuelo, siendo los dípteros los organismos mejor adaptados al vuelo. Los dípteros necesitan alimentarse de comida líquida ya que no poseen un aparato masticador, sino lamedor-chupador (Galán, 2016).
Tabla 1. Taxonomía Aedes aegypti
Taxonomía Aedes aegypti
Reino Animalia
Phylum Artrópoda
Subphylum Mandibulata
Clase Insecta
Orden Diptera
Suborden Nematócera
Familia Culicidae
Subfamilia Aedinae
Tribu Aedini
Género Aedes
Especie Aedes aegypti
5.1.2. Ciclo de vida
Su ciclo de vida manifiesta una metamorfosis completa que comprende estados inmaduros de vida acuática y adultos de vida aérea, este ciclo se divide en 4 fases que son huevo, larva, pupa y adulto los cuales se pueden apreciar a continuación en la figura 2.
a) Fase 1: huevo
Tiene alrededor de un milímetro de largo, son inicialmente de color blanco, para tornarse negros Figura. 3, con el desarrollo del embrión, que evoluciona en óptimas condiciones de temperatura y humedad en un lapso de dos a tres días. Con posterioridad a ese período, los huevos son capaces de resistir desecación y temperaturas extremas de hasta siete meses a un año. La mayor parte de cada postura es de eclosión rápida, mientras un porcentaje reducido constituye los llamados huevos resistentes, inactivos o residuales (Marquetti, 2008).
Figura 3. Huevos de Aedes aegypti. Fuente: (Eiman, 2010).
b) Fase 2: larva
Las larvas que emergen inician un ciclo de cuatro estados larvarios, creciendo a lo largo de tres mudas desde un largo de 1 mm a los 6,7 mm finales. Estas larvas, que poseen como caracteres morfológicos típicos (fuertes espículas torácicas laterales quitinizadas, peine de escamas unilineal en 8º segmento y sifón con forma de oliva corta, que destaca por su color negro, se alimentan con el zoo y fitoplancton de los recipientes que habitan (Marquetti, 2008).
Figura 4. Larva de Aedes aegypti. Fuente: (Benítez, 2016).
Las larvas viven en el agua. Salen de los huevos de mosquito. Este proceso tiene lugar cuando los huevos quedan cubiertos por agua (de la lluvia o de un rociador). Las larvas pueden verse en el agua. Son sumamente activas, por lo que a veces se las llama “saltarinas”
(CDC, 2016).
c) Fase 3: Pupa
Las larvas mudan al estado de pupa, las cuales no se alimentan y tienden a moverse poco, presentan un estado de reposo donde se producen importantes modificaciones y cambios anátomo-fisiológicos que conducirán a la última fase del desarrollo. Reaccionan inmediatamente a estímulos externos y se mantienen en la superficie del agua debido a su flotabilidad, propiedad que favorece la emergencia del insecto adulto (Eiman, 2010).
Figura 5. Pupa de Aedes aegypti. Fuente: (CEIP, 2016).
d) Fase 4: Adulto
El último estado es el adulto alado. Inmediatamente luego de emerger de la pupa permanecen en reposo para lograr el endurecimiento del exoesqueleto y de las alas. Dentro de las 24 horas siguientes, machos y hembras se aparean, generalmente por única vez en el caso de las hembras y se inicia la etapa reproductora. El apareamiento se realiza por lo general durante el vuelo, una sola inseminación del macho es suficiente para fecundar todos los huevos que una hembra produce durante toda su vida (Eiman, 2010).
Figura 6. Adulto de Aedes aegypti. Fuente: (CEIP, 2016).
claras. Abdomen agudo con franjas basales y manchas laterales. Machos fitófagos, hembras hematófagas previas a la oviposición (desove). Vive alrededor de un mes. Se aparean generalmente en el vuelo. Lugar de reposo son sitios oscuros, preferentemente en el interior de viviendas (paredes, techos, cortinas y debajo de muebles) (CEIP, 2016).
Las hembras también se alimentan de jugos de plantas. Generalmente, después de cada alimentación sanguínea se desarrolla un lote de huevos, pero si el mosquito es perturbado antes de estar completamente lleno de sangre puede alimentarse con sangre más de una vez entre cada postura. Si una hembra completa su alimentación (2 o 3 mg de sangre) desarrollará y pondrá aproximadamente 200 huevos, dispersos en distintos lugares. La hembra tiende a depositar sus huevos en varios lugares y no en un solo lugar. Hay un umbral de distensión del estómago que estimula el desarrollo de los ovarios, por eso el período entre alimentación sanguínea y postura es de 3 días en condiciones óptimas de temperatura; la hembra puede alimentarse de sangre nuevamente el mismo día que pone el huevo (Montero, 2009)
5.1.3. Distribución de Aedes aegypti en el mundo
Se distribuye en forma permanente entre los 35° de latitud norte y 35° de latitud sur pero puede extenderse hasta los 45° norte y hasta los 40° sur, la altitud promedio en donde se encuentra es por debajo de los 1.200 metros, aunque se ha registrado en alturas de alrededor de los 2.400 metros sobre el nivel del mar (Eiman, 2010).
Las condiciones climáticas idóneas para el desarrollo y establecimiento de los Aedes son: más de 500 mm de precipitaciones anuales, más de 60 días de lluvia al año, temperatura media del mes frío superior a 0ºC, temperatura media del mes cálido superior a 20ºC, temperatura media anual superior a 11ºC y humedad del 60 - 70%. Por eso son originarios y se establecen en las zonas tropicales y subtropicales (CEIP, 2016)
5.1.4. Aedes aegypti en Colombia
La distribución de Aedes aegypti en Colombia hasta el año 2015 evidenció su presencia en municipios por debajo de los 2200 - 2300 metros sobre el nivel del mar, donde viven cerca de 26 millones de personas que se encuentran expuestas a diversas enfermedades, como se puede apreciar en la figura 8 (Laiton-Donato 2016).
La distribución biogeográfica de Aedes aegypti se ha expandido debido al calentamiento global y a factores socioeconómicos y culturales, los patrones de distribución del mosquito han cambiado con nuevos registros altitudinales y una extensa distribución en todos los continentes, específicamente se pensaba que en Colombia la especie no habitaba por encima de los 1.585 msnm, sin embargo, se registró su presencia en 22 municipios por encima de los 1600 msnm y a 2.200 msnm en Málaga (Santander), siendo este último el registro altitudinal más alto para Suramérica hasta ahora (López et al., 2016).
5.1.5. Enfermedades de salud pública causadas por Aedes aegypti
Aedes aegypti es el principal vector de los arbovirus del dengue, la fiebre del zika, la fiebre amarilla y la fiebre del chikunguña, estas enfermedades son de importancia para la salud pública porque representan una alta carga de morbilidad y mortalidad para las personas, sus familias y las comunidades, así como altos costos y sobrecargas de los sistemas de salud de los países (OPS. OMS, 2018).
A continuación se describen cada una de estas enfermedades:
a. El dengue
El dengue es una enfermedad viral aguda, endemo-epidémica, enfermedad constante en una población determinada, causada por un arbovirus de la familia Flaviviridae y transmitida por la picadura de hembras de mosquitos del género Aedes, principalmente el aegypti. El virus posee cuatro serotipos (DENV1, DENV2, DENV3, DENV4), los serotipos no desencadenan inmunidad cruzada, lo cual significa que una persona puede infectarse y enfermar hasta cuatro veces. (Ministerios de Salud, 2012).
susceptible. La susceptibilidad es en toda persona que no haya enfermado previamente por el virus y se traslade a áreas endémicas. (Ministerio de Salud, 2012).
A finales del 2008 fue desarrollada una clasificación del dengue de acuerdo a su severidad: -Dengue sin signos de alarma: vivir en zonas endémicas del dengue y presentar dos de las siguientes manifestaciones clínicas: náuseas y vómitos, erupción, dolores articulares, ningún signo de alarma, serología confirmatoria, y ocurrencia en el mismo lugar y tiempo de otros casos confirmados.
-Dengue con signos de alarma: presenta las mismas condiciones de la forma anterior y dolor a la palpación abdominal, sangramiento de mucosas, extravasación sanguínea, sangramiento de mucosas, letargia y decaimiento.
-Dengue severo: cualquiera de las siguientes manifestaciones: shock o dificultad respiratoria, sangramiento severo y daño severo de órganos (Ortega et al., 2015).
b. El zika
El Zika es una enfermedad viral emergente ocasionada por el virus Zika, arbovirus del género flavivirus (familia Flaviviridae), muy cercano filogenéticamente a virus como el dengue. Solo 1 de cada 4 personas presenta sintomatología, usualmente leve. Sin embargo, desde finales del 2015 en Latinoamérica se empezó a sospechar la posible asociación de este virus con microcefalia en fetos de mujeres gestantes infectadas por el virus y en algunos pacientes manifestaciones de síndromes neurológicos (Ministerio de Salud, 2016).
Una de cada cinco personas infectadas con virus Zika desarrolla la enfermedad con manifestaciones clínicas moderadas. Los síntomas duran de dos a siete días e incluyen fiebre, conjuntivitis no purulenta, cefalea, mialgias, artralgias, entre otros. Las manifestaciones clínicas graves son poco frecuentes, hasta el momento no se ha informado sobre ninguna muerte atribuida a la infección por el virus del Zika (Ministerio de Salud, 2016).
El virus Zika se transmite por la picadura de mosquitos del género Aedes, tanto en un ámbito urbano (A. aegypti), una vez que el virus ingresa al cuerpo se elimina por el sudor, saliva, semen, el periodo de incubación es de 3 a 7 días, el virus se trasmite por la picadura del Aedes aegypti infectado con el virus Zika, se ha descrito trasmisión por la trasfusión de sangre y nuevos estudios revelan la posible trasmisión sexual (Cabrera et al., 2016).
confirmado 1.186 mujeres embarazadas infectadas con Zika, a las que se suman 10.053 casos sospechosos, se presentaron 24 casos de microcefalia por diferentes causas y 8 de estos se relacionan con el virus del Zika. Además, en el país se notificaron 401 casos de síndromes neurológicos con antecedentes compatibles con infección por Zika (Cabrera et al., 2016).
c. Fiebre amarilla
La fiebre amarilla es una enfermedad hemorrágica vírica transmitida por los mosquitos que es endémica en las zonas tropicales de África y América del Sur. El vector del virus de la fiebre amarilla en el ciclo de transmisión urbana de una persona a otra es Aedes aegypti, mientras que en el ciclo selvático de transmisión de un mono a otro y accidentalmente de un mono a una persona intervienen distintas especies de mosquitos. No todos los mosquitos contagian la fiebre amarilla, sólo aquellos que previamente han picado a un individuo enfermo. Se llama fiebre amarilla, porque a muchos de los que se enferman se les pone la piel de ese color. Alrededor del 90% de los casos anuales de fiebre amarilla, estimados en 200 000, se producen en África, donde los brotes son frecuentes y la transmisión es tanto de ciclo urbano como selvático. En América del Sur predomina la fiebre amarilla selvática, como el que está sucediendo en Brasil en este momento (OPS/OMS en Uruguay, s.f).
inicial en una segunda fase, más tóxica. Vuelve la fiebre elevada y se ven afectados varios órganos, generalmente el hígado y los riñones. En esta fase son frecuentes la ictericia (color amarillento de la piel y los ojos, hecho que ha dado nombre a la enfermedad), el color oscuro de la orina y el dolor abdominal con vómitos. Puede haber hemorragias orales, nasales, oculares o gástricas. La mitad de los pacientes que entran en la fase tóxica mueren en un plazo de 7 a 10. El diagnóstico de la fiebre amarilla es difícil, sobre todo en las fases tempranas. En los casos más graves puede confundirse con el paludismo grave, la leptospirosis, las hepatitis víricas (especialmente las formas fulminantes), otras fiebres hemorrágicas, otras infecciones por flavivirus (por ejemplo, el dengue hemorrágico) y las intoxicaciones. En las fases iniciales de la enfermedad a veces se puede detectar el virus en la sangre mediante la reacción en cadena de la polimerasa con retrotranscriptasa. En fases más avanzadas hay que recurrir a la detección de anticuerpos mediante pruebas de ELISA o de neutralización por reducción de placa (OMS, 2018).
El virus de la fiebre amarilla es un arbovirus del género Flavivirus transmitido por mosquitos de los géneros Aedes y Haemogogus. Las diferentes especies de mosquitos viven en distintos hábitats. Algunos se crían cerca de las viviendas (domésticos), otros en el bosque (salvajes), y algunos en ambos hábitats (semidomésticos) (OMS, 2018).
Hay tres tipos de ciclos de transmisión:
a otros monos. Las personas que se encuentren en la selva pueden recibir picaduras de mosquitos infectados y contraer la enfermedad.
● Fiebre amarilla intermedia: En este tipo de transmisión, los mosquitos semidomésticos (que se crían en la selva y cerca de las casas) infectan tanto a los monos como al hombre. El aumento de los contactos entre las personas y los mosquitos infectados aumenta la transmisión, y puede haber brotes simultáneamente en muchos pueblos distintos de una zona. Este es el tipo de brote más frecuente en África.
● Fiebre amarilla urbana: Las grandes epidemias se producen cuando las personas infectadas introducen el virus en zonas muy pobladas, con gran densidad de mosquitos y donde la mayoría de la población tiene escasa o nula inmunidad por falta de vacunación. En estas condiciones, los mosquitos infectados transmiten el virus de una persona a otra.
d. Fiebre del Chikunguña
La fiebre del chikunguña, tiene como agente causal un virus de ARN del género Alphavirus de la familia Tagaviridae, es una enfermedad endémica en países del sudeste de Asia, África y Oceanía, emergente para la región de las Américas, reportándose transmisión en al menos 16 países de esta zona geográfica (Martínez et al., 2015).
El cuadro clínico general se denomina fiebre Chikungunya, pueden llegar a ser asintomáticos del 3 al 25 %, de las personas infectadas y la enfermedad se desarrolla de forma aguda o subaguda y crónica sin tener ninguna preferencia por sexo ni por edad. Los recién nacidos, las personas mayores de 65 años y las que presentan algunas enfermedades crónicas como comorbilidades son las más susceptibles a desarrollar la infección grave. La presentación clínica se caracteriza por la presencia de 2 fases: aguda y crónica. La fase aguda dura generalmente 10 días con síntomas como fiebre, artralgia y alteraciones en la piel, la fase aguda se define por la persistencia de estos síntomas durante más de 3 meses y genera un importante deterioro en la calidad de vida del paciente (Martínez et al., 2015).
5.1.6. Prevención y control
La prevención y el control se basan en gran medida en la reducción del número de depósitos de agua, naturales y artificiales que puedan servir de criadero de los mosquitos, la vigilancia epidemiológica y entomológica, refuerzo de las campañas para la educación de la comunidad en el que se da una influencia social que proporciona conocimientos, forja actitudes y promueve prácticas dirigidas a mejorar la salud de la población, mejoras en los sistemas de saneamiento (Ochoa et al., 2015).
Las estrategias de eliminación del mosquito Aedes aegypti van encaminadas tanto al control del mosquito adulto como de sus formas larvales, por lo que generalmente se da lugar a fumigaciones y usos de larvicidas, se resalta entonces que el control del vector es la principal medida para evitar la transmisión del dengue, el zika, la fiebre amarillas y la fiebre del chikunguña entre otras enfermedades de interés en salud pública (Bisset et al., 2011). Sabiendo esto, los mecanismos de control se dividen en los siguientes:
Control Químico: El control químico consiste en la utilización de plaguicidas de uso en salud
Los principales métodos de aplicación de insecticidas de uso en salud pública para el control del Aedes aegypti son el focal, tratamiento perifocal y la aplicación espacial, que se explican detalladamente a continuación:
- Control focal: Este realizan en las formas inmaduras de Aedes aegypti, es decir, las larvas y es aplicado en depósitos de agua o sumideros de aguas lluvia que no puedan ser eliminados controlados con otro método (Min Protección Social/INS/OPS, s.f).
- Control perifocal: Consiste en el tratamiento de todos los recipiente infectados por Aedes aegypti, ya sea que contengan agua o no, rociando sus paredes por dentro y por fuera, la fumigación se extiende para cubrir cualquier pared dentro de un radio de 60 cm. del recipiente (Min Protección Social/INS/OPS, s.f).
- Control Espacial: Es un tratamiento que se realiza en el aire con el fin de reducir rápidamente la población de Aedes aegypti, provocando la muerte inmediata de los insectos que están volando irrumpiendo con una nube de gotas de insecticida (Min Protección Social/INS/OPS, s.f).
Control Físico: El control de recipientes artificiales como envases desechables, llantas y barriles
Control Biológico: El control biológico se basa en la introducción de organismos vivos que se alimentan, compiten, eliminan y parasitan larvas del Aedes aegypti en los depósitos de agua limpia. Solo se puede utilizar contra las formas inmaduras del vector, y su principal ventaja es que evita la contaminación química del ambiente (Min Protección Social/INS/OPS, s.f).
El control biológico es definido como el control de la población objetivo por el uso de enemigos naturales como depredadores, parásitos, patógenos, competidores o toxinas de microorganismos o plantas (Woodring and Davidson, 1996).
Las distintas propiedades de las plantas y sus diferentes formas de utilización, nos ofrecen un amplio espectro de posibilidades para el control de numerosos organismos, los extractos vegetales están constituidos por un conjunto de principios activos, con características insecticidas o repelentes, químicamente distintos entre sí, cuyas proporciones son variables. Esto hace que la presión de selección sobre los organismos a controlar no sea siempre la misma, disminuyendo así, las probabilidades de desarrollar resistencia, lo que representa una gran ventaja en su aplicación (Millán, 2008).
5.1.7. Albahaca: Ocimum basilicum
La albahaca (Ocimum basilicum L.) es una planta aromática y medicinal, herbácea, anual, de tallos erectos y ramificados, frondosa, que alcanza de 30 a 50 cm de altura, perteneciente a la familia Lamiaceae (ver la taxonomía completa en la tabla 2). Las hojas de 2 a 5 cm, suaves, oblongas, opuestas, pecioladas, aovadas, lanceoladas y ligeramente dentadas. Las flores son blancas, dispuestas en espigas alargadas, asilares, en la parte superior del tallo o en los extremos de las ramas (Vega et al., s.f).
Es una hierba anual, de 20 a 90 cm de altura con o sin pelos y cuyo tallo es cuadrado, generalmente de color verde o purpúreo. Las hojas son más largas que anchas o en ocasiones la punta más ancha que la base, también de color verde y a menudo purpúreas; tiene las flores reunidas en una espiga en la punta de las ramas, de color blanco tendiendo a púrpura. Sus frutos son como pequeñas nueces. Es originaria de África, Asia e Islas del Pacífico. Se localiza en áreas con climas cálido, semicálido, semiseco, seco, muy seco y templado, entre el nivel del mar y los 2300 m. Es cultivada en huertos familiares y está asociada a bosques tropicales caducifolio, subperennifolio y perennifolio, matorral xerófilo, pastizal y bosques de encino y de pino (BDMTM, 2009).
Tabla 2. Taxonomía Ocimum basilicum
Taxonomía Ocimum basilicum
Reino Plantae
Phylum Magnoliophyta
Clase Magnoliopsida
Subclase Asteridae
Orden Lamiales
Familia Lamiaceae
Subfamilia Nepetoideae
Tribu Ocimeae
Género Ocimum
Especie Ocimum basilicum L.
Fuente: (Universidad Nacional, 2014).
5.1.8. Propiedades
● Reduce la inflamación.
● Acelera la recuperación de los resfriados. ● Evita la debilidad muscular.
● Repele los mosquitos.
● Esta planta medicinal y aromática tiene propiedades antiespasmódicas, antibacterianas, antiinflamatorias, estimulantes y sedantes (Ecoagricultor,2013)
● Posee propiedades medicinales como estimulante, estomacal y antiespasmódica, se utiliza en terapias aromáticas y en la preparación de cosméticos.
● También es una magnífica planta acompañante en el control biológico de los insectos de los huertos, por ejemplo, intercalada con tomates, ajíes y otras hortalizas (ACTAF, 2008).
5.1.9. Aceites esenciales
Los aceites esenciales son sustancias de origen vegetal cuyas mezclas de metabolitos secundarios volátiles, insolubles en agua, les confieren características particulares según sus diferentes proporciones. Estos aceites se originan en los tejidos secretores de las plantas y, por lo general, son líquidos a temperatura ambiente, más ligeros que el agua, de olor fuerte y penetrante que recuerda su planta de origen, e incoloros o de color amarillo traslúcido
(Andrade et al., 2017).
consistencia, su origen y la composición química de sus componentes mayoritarios (Andrade et al., 2017).
La actividad larvicida de los aceites esenciales y sus componentes generalmente se evalúan con el método propuesto por la OMS en el 2005 para estandarizar los procedimientos de evaluación de la actividad larvicida en el laboratorio y en campo. (Andrade et al., 2017).
Es más apropiado clasificar el aceite esencial de albahaca por su composición química que por su origen botánico, criterio que perdura internacionalmente hasta nuestros días; definiéndose cuatro grandes grupos (Vega et al., s.f):
● Grupo I. Tipo Europeo. Rico en Metil chavicol o estragol y Linalol; sin alcanfor. Representa el aceite de mejor calidad por su fino olor.
● Grupo II. Tipo Reunión. Rico Metil chavicol o estragol y Alcanfor sin Linalol. ● Grupo III. Tipo Cinamato de Metilo. Rico en Metil chavicol o estragol, Linalol y
Cinamato de Metilo.
● Grupo IV. Tipo Eugenol. Rico en Eugenol
Su principal principio activo, el Estragol, (1-alil-4-metoxibenceno), es un potente carcinógeno y genotóxico natural que en altas concentraciones puede ser neurotóxico; dicha toxicidad es un derivado de los alquil bencenos. Concretamente, este metabolito es el hidroxiestragol, que a su vez se metaboliza en sulfoxiestragol y en hidroxiestragol-2′,3′-óxido. Estos compuestos, a dosis elevadas, pueden inducir mutaciones a nivel del ADN y, eventualmente, ser cancerígenos (Mestres, s.f).
5.2. Antecedentes
Sabiendo que enfermedades tales como el dengue, la fiebre del zika, la fiebre amarilla y el chikunguña son prevenibles mediante el control de Aedes aegypti, se ha tratado de dar una respuesta mundial para el control de vectores (OMS, 2017).
Lo anterior hace necesario que haya acceso a una mayor variedad de insecticidas pues según el estudio de Rawlins (1998) las poblaciones de mosquitos de Aedes aegypti no se pueden controlar aun cuando presentan poca resistencia a los insecticidas y teniendo en cuenta que estos insecticidas son a base de productos químicos que además de ser tóxicos para el medio ambiente resultan costosos y para sociedades relativamente pobres, la elección de los métodos de control de vectores está limitada por la disponibilidad de fondos, es por esto que las técnicas de control biológico de Aedes aegypti se están volviendo cada vez más populares (Rawlins, 1998), pues representan un escenario contrario al anteriormente mencionado.
Los insecticidas botánicos son sustancias que se derivan de plantas los cuales se caracterizan por tener una toxicidad muy baja para los humanos y otros vertebrados, descomponerse en pocas horas después de aplicados o ser específicos para el vector que deseamos controlar, por estas razones son considerados ambientalmente benignos, su efecto en la vida silvestre y el medio ambiente es menos perjudicial que el de los insecticidas convencionales (Farrill, 2008).
Los aceites esenciales forman las esencias odoríferas de un gran número de especies de plantas y árboles, se extraen de flores, frutos, raíces, hojas, semillas entre otros y se caracterizan por poseer acción insecticida (Farrill, 2008).
objetivos atractivos porque estos se reproducen en el agua y, por lo tanto, es fácil tratarlos en este hábitat, los resultados obtenidos en el estudio demostraron la acción larvicida de Ocimum basilicum al alcanzar una mortalidad de 86.7% para un tiempo de 24 horas y concentración de 50 ppm en bioensayos con grupos de 10 larvas, para los mismo bioensayos y tiempos C. winterianus, L. angustifolia alcanzaron una mortalidad de 63.3% y 60% respectivamente.
La investigación desarrollada por Manzoor et al (2013) en The Journal of Animal & Plant Sciences LARVICIDAL ACTIVITY OF ESSENTIAL OILS AGAINST Aedes aegypti and Culex quinquefasciatus LARVAE (DIPTERA: CULICIDAE) donde se utilizaron aceites esenciales como A. calamus, M. arvensis, O. basilicum, S. lappa, C. citraes a concentraciones de 500, 250, 125, 62.5, 31.25, 15.62, 7.81, 3.90, 1.90, 0.97 ppm con tres réplicas y con 2 ml de acetona al 100% por 24 horas; cuyos resultados arrojaron que a concentración de 250 ppm se logra el 50% de muertes y con 1000 ppm se tiene el 100% de efectividad.
Por último en la Universidad Nacional de Trujillo, Perú, Torres y Roldán (2015) evaluaron el efecto insecticida del extracto alcohólico de hojas Ocimum basilicum a concentraciones de 1.5, 2.0 y 4.5% en larvas de cuarto estadio de dos cepas de Aedes aegypti, una endógena de Sullana, Perú y una de referencia (Rockefeller), la concentración letal media (CL50) y la concentración letal 90 (CL90) encontradas en el trabajo fueron CL50 de 2.900% y CL90 de 4.783% para la cepa Sullana y un CL50 de 3.158% y CL90 de 5.924% para la cepa Rockefeller, lo que demuestra el efecto larvicida del extracto de O. basilicum, en donde, las autoras afirman que esto se debe a que la planta presenta alcaloides, glicósidos, flavonoides, fenoles, saponinos, triterpenoides ,proteínas , resinas, esteroides y taninos los cuales se reconocen por tener propiedades larvicidas.
6. Metodología
El proyecto se llevó a cabo en condiciones de laboratorio acorde a los lineamientos de la Organización Mundial de la Salud; Guidelines for laboratory and field testing of mosquito larvicides (WHO, 2005) y para evaluar la eficacia del extracto etanólico se realizó el siguiente procedimiento:
6.1. Obtención de Larvas
La evaluación del efecto larvicida del Ocimum basilicum, se realiza obteniendo las larvas de Aedes aegypti cepa Rockefeller en el laboratorio de Zoonosis de la Facultad del Medio Ambiente y Recursos Naturales de la Universidad Distrital Francisco José de Caldas. Para la crianza de las larvas, se introdujeron los huevos en recipientes de polietileno en agua a una temperatura de 27°C – 30 °C (Figura 10), por el tiempo necesario hasta alcanzar el estadio 4 de desarrollo (5 – 7 días). Se alimentaron con comida para peces ya que contiene lo necesario para su desarrollo. (Autoras).
6.2. Obtención del Extracto
Figura 11. Extractor Soxlhet Fuente: (Autoras).
6.3. Preparación de las Diluciones
Para la preparación de 1100 ppm, se tomó un balón aforado de 1L y se introdujeron 1,1 ml del extracto (Figura 13), luego se le agregó 0.1% (1 ml) de acetona como emulsificante que permitirá una mejor disolución del extracto en agua y se llenó el balón con agua declorinada, hasta el aforo correspondiente a 1 L. Para la preparación de 1200 ppm, se introdujeron 1,2 ml del extracto en el balón aforado y se sigue el procedimiento anterior; así se continuarán haciendo las demás diluciones, hasta 1500 ppm, teniendo en cuenta que para la de 1300 ppm se introducirán 1,3 ml en el balón, para la de 1400 ppm 1,4 ml y finalmente para la de 1500 ppm 1,5 ml. (Autoras)
6.4. Bioensayos
Para los bioensayos se sirvió el extracto diluido, en vasos de polipropileno con capacidad de 200 ml; se utilizaron 525 larvas de IV estadio de Aedes aegypti, en el cual se distribuyeron, 25 larvas para cada una de las repeticiones de los 5 tratamientos experimentales y el grupo testigo. Para el grupo testigo, sólo se adiciono 0.1% de acetona en el balón aforado y se completó el volumen con agua hasta 1 litro. (Figura 14).
6.5. Lecturas de Mortalidad
Luego de realizados los montajes, se tomaron lecturas de mortalidad a las 0, 2, 12, 24, 36 y 48 horas, considerando como muerta una larva cuando no presenta movimientos natatorios, se encuentran en el fondo del recipiente, no reacciona al ser tocada con una aguja de punta roma y aquellas que se muestran moribundas.
6.6. Análisis
Para lograr una evaluación estadística completa, fue necesario obtener datos como (tiempo, concentraciones y mortalidad) durante cada bioensayo; posteriormente se tabularon los datos en Excel y se utilizó la fórmula de Abbott para corregir el porcentaje de mortalidad, además de encontrar las dosis letales efectivas en los ensayos biológicos (CL 50 - CL 90) y luego de tenerlos organizados se utilizó el software estadístico R versión 3.5.1 para el análisis estadístico ANOVA de un factor.
7. Resultados
Tabla 3: Porcentajes de mortalidad corregidos con la fórmula de Abbott.
Tratamientos % de Mortalidad corregido con Abbott
0 Horas 2 horas 12 Horas 24 Horas 36 Horas 48 Horas
%
Promedio %
Promedio %
Promedio %
Promedio %
Promedio %
Promedio
Testigo 0 0 0 0 0 4
1100 ppm 0 0 0 0 51 53.12
1200 ppm 0 0 0 0 54 59.37
1300 ppm 0 0 0 58 71 71.87
1400 ppm 0 0 0 60 82 90.62
1500 ppm 0 0 73 84 91 95.83
Fuente: Autoras.
% M. tratamiento: Mortalidad acumulada del tratamiento
% M. testigo: Mortalidad acumulada del testigo
7.1. Eficiencia del extracto natural de Ocimum basilicum (Albahaca) como larvicida a las diferentes concentraciones experimentales
Se midió la eficiencia a través de los bioensayos experimentales como larvicida del extracto de Ocimum basilicum en las concentraciones de 1100, 1200, 1300, 1400 y 1500 ppm en un tiempo de 48 horas, evidenciando los siguientes resultados:
Tratamiento 1 (1100 ppm):
Se evidencia efectividad a partir de las 36 horas de exposición al tratamiento con una mortalidad del 51%, superando la eficiencia superior al 50% así indicando que a partir de esta concentración se tuvieron resultados satisfactorios y al finalizar el bioensayo a las 48 horas se tuvo una mortalidad del 53,12% .
Tratamiento 2 (1200 ppm):
Para las 36 horas, el tratamiento tuvo un porcentaje de mortalidad del 54% mostrando mayor efectividad que en el tratamiento 1 (1100 ppm) y para las 48 horas del bioensayo se evidencia nuevamente la eficiencia teniendo una mortalidad del 59.37%.
Tratamiento 3 (1300 ppm):
Tratamiento 4 (1400 ppm):
A las 24 horas aumentó el porcentaje de mortalidad llegando el 60% de eficiencia hasta llegar al porcentaje de mortalidad del 90.62% al cabo de las 48 horas, este bioensayo demuestra la eficiencia del extracto ya superando el 90%.
Tratamiento 5 (1500 ppm):
Se obtienen resultados satisfactorios a las 12 horas de exposición al tratamiento logrando un porcentaje de mortalidad del 73%; al finalizar el bioensayo a las 48 horas alcanzando una mortalidad del 95.83% siendo este un resultado satisfactorio para la investigación ya que supera el 95% de eficiencia.
Bioensayos en el grupo testigo
7.2. Análisis de mortalidades en los distintos tratamientos experimentales en
relación con el tiempo de exposición.
Tratamiento 1 (1100 ppm):
En este bioensayo se registró a las 36 horas la primera mortalidad llegando a un porcentaje de 51% donde se empiezan a ver indicios de toxicidad en los individuos al superar el 50% de mortandad y finalizando el tratamiento a las 48 horas hay un 53.12% de mortalidad.
Tratamiento 2 (1200 ppm):
En el segundo bioensayo al igual que el primero, también se da la primera muerte a las 36 horas representando el 54 % que a diferencia del primer bioensayo al mismo tiempo, el porcentaje fue mayor y finalmente a las 48 horas llega al 59.37% de mortandad, mostrando buenos resultados.
Tratamiento 3 (1300 ppm):
En el tercer bioensayo se registra el porcentaje de letalidad a las 24 horas con un porcentaje de 58% mejorando el tiempo de efectividad, luego a las 36 horas el porcentaje aumenta a 71% de muertes de los individuos tratados y a las 48 horas llega a 71.87%.
Tratamiento 4 (1400 ppm):
demostrando la relación entre el aumento de concentración con el tiempo de exposición y la cantidad de individuos muertos
Tratamiento 5 (1500 ppm):
En el quinto bioensayo se evidencia una alta toxicidad y efectividad en relación al tiempo y concentración registrando la primera muerte a las 12 horas con un porcentaje de 73%, luego a las 24 horas aumenta considerablemente al 84% de mortandad, luego a las 36 horas alcanzó al 91% demostrando ser un buen resultado y finalizando a las 48 horas llega al 95.83% superando el umbral del 95% para que la investigación sea satisfactoria
7.3. Análisis de regresión logarítmica, para el cálculo de las concentraciones
letales CL 50 y CL 90.
La curva logarítmica es también una recta pero en lugar de referirse a las variables originales X e Y, está referida a logX y a Y, siendo logX la variable independiente o regresora y Y la variable dependiente, el cambio en las variables originales conlleva a la transformación adecuada de los datos de partida (Regresión y correlación, 2014), permitiéndonos así graficar el aumento progresivo de las mortalidades para cada una de las concentraciones.
Figura 15. Gráfica Curva de regresión logarítmica para porcentajes de mortalidad y concentraciones.
Fuente: Autoras.
En la parte inferior derecha de la gráfica se encuentra la ecuación de la línea de tendencia logarítmica, en la cual la variable independiente x se reemplazó en un rango de las concentraciones de 1050 ppm a 1600 ppm, en donde, la ecuación fue aplicada desde la concentración mínima (1050 ppm) aumentando de a 5 ppm hasta llegar a la concentración máxima (1600 ppm), tal como se puede observar en el Anexo 2, esto con el propósito de calcular un aproximado en las dosis letales CL 50 y CL 90, cabe resaltar que se toma como concentración de punto de inicio 1050 ppm, debido a que la concentración mínima usada en los bioensayos (1100ppm) arrojó resultados por encima del 50% de la mortalidad.
lado, para la dosis letal CL 90 encontramos que el rango de concentración se encuentra entre 1435 ppm y 1440 ppm, obteniendo resultados de mortalidad 89.8% y 90.3% respectivamente.
Dada la posibilidad de despejar la ecuación de la línea de tendencia logarítmica que nos permite hallar la dosis de concentración exacta CL 50 y CL 90, a continuación se presenta la respectiva ecuación despejada y los resultados obtenidos.
● Ecuación de la línea de tendencia logarítmica → y = 144.06ln(x) - 956.84
Despejando x →
● Cálculo de CL 50 → Donde y= 50 ● Cálculo de CL 90 →
Donde y= 0.90
7.4. Análisis de tiempos letales TL 50 y TL 90.
Figura 16. Gráfica Porcentajes de mortalidad corregidos con Abbott en relación con el tiempo. Fuente: Autoras.
De acuerdo a la relación entre el porcentaje de mortalidad corregida y el tiempo medido en horas, con la figura 16 se puede analizar que todos los bioensayos superaron el 50% de mortalidad total acumulada, demostrando que desde 1100 ppm se obtienen resultados favorables.
Los tiempos letales TL 50 son alcanzados en 1100 ppm a las 35 horas, en 1200 ppm a las 33 horas, en 1300 ppm a las 22 horas, en 1400 ppm al mismo tiempo que el bioensayo anterior y en 1500 ppm a las 8 horas de iniciado el tratamiento.
7.5. Análisis Estadístico ANOVA de un factor
Para realizar el análisis ANOVA de un factor se utilizó el software estadístico R versión 3.5.1 para comparar una hipótesis nula (H0) y una hipótesis alternativa (H1), con el fin de demostrar si se presentó diferencias significativas sobre los promedios de mortalidad en la investigación y así mismo permitirá rechazar una u otra de las siguientes hipótesis:
● La Hipótesis nula (H0) observa que los promedios de mortalidad sobre los tratamientos realizados con Ocimum basilicum (Albahaca) no difieren significativamente.
● La Hipótesis alternativa (H1) es válida cuando por lo menos un par de los promedios de los tratamientos tienen diferencias significativas, es decir, se observa un efecto significativo del larvicida para al menos una de las concentraciones empleadas.
Entonces si se rechazara la hipótesis alternativa (H1) la concentración de los tratamientos no tiene alguna significancia en los resultados de las mortalidades, y en caso que se rechazara la hipótesis nula (H0), las concentraciones de los tratamientos si inciden o tienen mucha significancia en el porcentaje de mortalidad de las larvas.
Tabla 4. Análisis de varianza ANOVA de un factor
ANÁLISIS DE VARIANZA
Fuente de variación
Grados de libertad
Suma de cuadrados
Promedio de los cuadrados
F Pr(>F)
Entre grupos 4 5187 1296,8 63,987 0,000000003032
Dentro de los grupos
15 304 20,3
TOTAL 19 5491
Fuente: Autoras.
8. Discusión y análisis de resultados
La capacidad larvicida del extracto etanólico de Ocimum basilicum (Albahaca) sobre las larvas del estadio IV del Aedes aegypti muestra los primeros resultados de mortalidad en el primer bioensayo 1100 ppm a las 36 horas del tratamiento con un porcentaje del 51% y al cabo de las 48 horas se logra un porcentaje del 53,12%, lo que demuestra resultados favorables con el hecho de superar el 50% de mortalidad acumulada. Cuando se aumenta la concentración a 1200 ppm aumenta el porcentaje de mortalidad de 54% a las mismas 36 horas y a las 48 horas llega al 59.37%, donde se denota el progresivo aumento de la actividad larvicida. En el bioensayo de 1300 ppm se observa un aumento en la capacidad tóxica del extracto a las 24 horas de exposición con un porcentaje del 58% de mortalidad, a las 36 horas aumenta al 71% y logrando un leve aumento a las 48 horas con el 71.87%, en 1400 ppm se vuelven a obtener resultados positivos a las 24 horas con el porcentaje del 60% y así sucesivamente aumentando progresivamente hasta que a las 48 horas con el 90.62% de la mortalidad demuestra la toxicidad en cuanto a la exposición al extracto y finalmente en 1500 ppm la efectividad mejora considerablemente al obtenerse resultados a partir de las 12 horas con un porcentaje de mortalidad del 73%, así aumenta al 84% a las 24 horas, a las 36 horas con el 91% y finalmente llega al 95.83% de mortalidad acumulada de mostrando que al aumento de concentración está estrechamente relacionado con la efectividad del larvicida.
horas de exposición al tratamiento. Para los tiempos letales TL 90 la concentración de 1400 ppm a las 48 horas de exposición muestra un porcentaje de 90.62% y el 1500 ppm a partir de las 36 horas se encuentran resultados superiores con el porcentaje del 91% y a las 48 horas el 95.83% demuestra la efectividad y la toxicidad del Ocimum basilicum (Albahaca) en la eliminación de las larvas expuestas.
A través de la regresión logarítmica se logró establecer el valor exacto de la dosis de concentración para así obtener el valor para CL 50 y CL 90, valores que se encuentran en el Anexo 2, allí se evidencia que en el rango de 1085 ppm y 1090 ppm se obtiene la CL 50 y en el rango de concentración entre 1435 ppm y 1440 ppm se obtiene la CL 90. este resultado está precisado a través de la fórmula de regresión logarítmica que aparece en la figura 15, donde se muestra que se necesita una concentración de 1084 ppm para alcanzar la CL 50 y una concentración de 1431 ppm para alcanzar la CL 90.
extracto en agua y se utilizó el Rotoevaporador IKA RV10 para obtener la solución madre separando el etanol del extracto.
Reconociendo los resultados positivos que fueron obtenidos se afirma que el extracto de Ocimum basilicum se puede usar selectivamente en lugares donde el agua está estancada y por consiguiente afectaría las larvas expuestas al extracto. Es necesario realizar estudios adicionales sobre formulaciones contra mosquitos sobre su eficacia y rentabilidad, pues tal como lo establece Manzoor et al (2013) los productos basados en estos aceites esenciales pueden contribuir en gran medida a la reducción de la química ambiental y a una reducción general de la densidad de población de vectores significativos como A. aegypti.
9. Conclusiones
● El extracto etanólico de Ocimum basilicum posee una eficiente capacidad larvicida, pues este muestra una toxicidad superior al 50% sobre las larvas de cuarto estadio de Aedes
aegypti para todas las concentraciones evaluadas.
● Se encontró que el extracto etanólico de Ocimum basilicum tiene una capacidad larvicida del 100% para 1535 ppm sobre las larvas de cuarto estadio de Aedes aegypti.
● Se determinó por medio del método de regresión logarítmica que la concentración letal que causa mortalidad sobre el 50% de las larvas de cuarto estadio de Aedes aegypti es 1084.67 ppm y la concentración letal que causa mortalidad sobre el 90% de las larvas es 1431.81 ppm.
● La validación de la Hipótesis alternativa (H1) demuestra que hay un efecto significativo del larvicida sobre las larvas de cuarto estadio de Aedes aegypti para las concentraciones empleadas, según el análisis estadístico de varianza ANOVA de un factor.
● Las concentraciones utilizadas en los bioensayos cumplen con lo establecido por la OMS sobre el valor máximo de concentración establecido que fue inferior a 5000 ppm.
10. Recomendaciones
● Es importante contar con la disponibilidad de los huevos de Aedes aegypti como base fundamental para poder dar lugar a la realización de los bioensayos, pues no todos los huevos logran eclosionar y dar lugar al desarrollo de la etapa larvaria del mosquito.
● Se debe tener la certeza de la fase larvaria (cuarto estadio) en la que se encuentran los mosquitos, desde su momento de eclosión, pues el paso de la fase de larva de cuarto estadio a pupa en los bioensayos puede ser común que se presente y esto conlleva a la invalidez de la prueba realizada.
● Evaluar la eficiencia del extracto etanólico de Ocimum basilicum como insecticida o repelente para mosquitos adultos de Aedes aegypti, sabiendo que la toxicidad del extracto tiene efecto sobre las diferentes etapas de vida del mosquito.
● Determinar el potencial larvicida de una mezcla de extracto naturales de plantas aromáticas pertenecientes al género Ocimum que al igual que el Ocimum basilicum presentan propiedades insecticidas y repelentes, con el fin de obtener un extracto de mayor eficiencia por cotoxicidad.
11. Bibliografía
● Amer Abdelkrim, Mehlhorn Heinz. (2006). Larvicidal effects of various essential oils against Aedes, Anopheles, and Culex larvae (Diptera, Culicidae). Parasitol Res (2006) 99: 466–472.
● Araguaia, M. (2015). Recuperado el 07 de enero de 2018, de: http://www.alunosonline.com.br/biologia/aedes-aegypti.html
● Asociación Cubana de Técnicos Agrícolas y Forestales ACTAF (2008), Albahaca http://www.actaf.co.cu/revistas/condimentos/Albahaca.pdf
● Barthel, W. F. (1973). Toxicity of Pyrethrum and its Constituents to Mammals. In: Pyrethrum the Natural Insecticide. Academic Press Nueva York.
● Benitez, Elisabet. (2016) Universidad Nacional de Cordoba, UnCiencia (2016) El 86% de las larvas de mosquitos identificadas en Córdoba son Aedes aegypti
http://www.unciencia.unc.edu.ar/2016/octubre/el-86-de-las-larvas-de-mosquitos- identificadas-en-cordoba-son-aedes-aegypti
● Biblioteca Digital de la Medicina Tradicional Mexicana (2009), Atlas de las Plantas de la Medicina Tradicional Mexicana, Albahaca,
http://www.medicinatradicionalmexicana.unam.mx/monografia.php?l=3&t=Ocimum_bas ilicum&id=7195
http://scielo.sld.cu/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0375- 07602011000200010&lng=es&tlng=es.
● Cabezas Laura, Cabanzo Wilson, Santa Fernando, Olano Victor, Sarmiento Diana, Vargas Sandra, Jaramillo Juan, Stenstrom Thor, Overgaad Hans, Matiz María.
(2017).Distribución espacial de Aedes aegypti (Diptera:Culicidae), en el área rural de dos municipios de Cundinamarca, Colombia. Biomédica 2017;37(Supl.2):41-9. Recuperado de: https://www.revistabiomedica.org/index.php/biomedica/article/view/3469/3724. ● Cabrera Hernández, Yailín, Vega Jiménez, Junior, Miranda Folch, José Jesús, Martínez
Rodríguez, Senén, García Cuervo, Dalia, & Martínez Abreu, Judith. (2017). Infección por virus Zika como un reto para la Salud Pública. Revista Médica Electrónica, 39(2), 304- 312. Recuperado de: http://scielo.sld.cu/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1.
● CDC (2016). Centro para el control y prevención de enfermedades. Recuperado de: https://www.cdc.gov/zika/pdfs/spanish/MosquitoLifecycle-sp.pdf
● CEIP (2016) Aedes aegypti y Aedes albopictus Recuperado de:
http://www.ceip.edu.uy/documentos/galerias/prensa/1243/pre_aedes_aegypti.pdf ● Ecoagricultor (2013), Albahaca para la fatiga, el insomnio o la ansiedad y su poder
antibacteriano y antiinflamatorio. https://www.ecoagricultor.com/la-albahaca-para- combatir-la-fatiga-el-insominio-o-la-ansiedad-y-su-poder-antibacteriano-y-
antiinflamatorio/
● Eiman, Mirta (2010) Directrices para la Prevención y Control de Aedes aegypti Recuperado de: http://www.saludneuquen.gob.ar/wp-
● ELife (2015) Distribución global del mosquito Aedes aegypti. Recuperado de: http://www.bbc.com/mundo/noticias/2016/01/160126_zika_virus_graficos_all ● EPA,(1996) SW-846 Test Method 3540C: Soxhlet Extraction. United States, North
America: Office of Chemical Safety and Pollution Prevention. ● Farrill Hipólito. (2008). Insecticidas Biorracionales. Recuperado de:
http://academic.uprm.edu/ofarrill/HTMLobj-323/biorational.pdf ● Galán, Carlos (2016). Clase Insecta y orden Diptera Recuperado de:
http://www.taxateca.com/claseinsecta.html
● Gallego B. Jaime, (2006), Manual de parasitología, Morfología y biología de los parásitos de interés sanitario. Publicaciones I ediciones de la Universidad de Barcelona, Título II, 2006.
● Kenneth L. Knight and Alan Stone (1977), A Catalog Of The Mosquitoes Of The World (Diptera: Culicidae), ENTOMOLOGICAL SOCIETY OF AMERICA, trustees and editorial boar, Volume VI. Washington, D. C. Recuperado en http://mosquito-taxonomic- inventory.info/sites/mosquito-taxonomic-inventory.info/files/Ward%201992.pdf
● Khormi HM, Kumar L. (2014) Climate change and the potential global distribution of Aedes aegypti . Recuperado de: Presencia de Aedes (Stegomyia) aegypti (Linnaeus, 1762) y su infección natural con el virus del dengue en alturas no registradas para Colombia, Revista Biomédica - Instituto Nacional de Salud 2016.
https://www.revistabiomedica.org/index.php/biomedica/article/view/3301/3147 ● Laiton-Donato, Katherine (2016) Análisis filogenético del virus del chikungunya en
