Determinación del efecto in vitro del extracto de las hojas de croton alnifolius l “tunga” sobre escherichia coli y proteus mirabilis”
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(2) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. DEDICATORIA. A Dios, por ser mi guía espiritual Lisseth. IC A. A mis padres. UI M. por su amor, confianza, consejos;. Lisseth. RM. AC. IA. Y. BI. O. Q. pero sobre todo por su apoyo incondicional. FA. A mi hijita,. DE. ALEJANDRA. TE. CA. por ser la luz de mi vida, mi fortaleza y. IO. la razón de seguir adelante. BI BL. Lisseth. A ÓSCAR por ser mi compañero y amigo todo este tiempo, por compartir mis penas y alegrías Lisseth. i Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(3) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. A Dios por siempre acompañarme e iluminarme en cada paso que doy en la vida Hernán. UI M. IRMA Y ALBERTO. IC A. Con amor y gratitud a mis queridos padres. Q. por su cariño, dedicación, confianza y sacrificio. BI. O. incondicional y perseverante, por ser ahora y siempre mi. Hernán. RM. AC. IA. Y. fuente de inspiración y fortaleza. FA. A mis hermanos. DE. GIOVANA, CARLOS Y DIANA. CA. Por su estar siempre presentes en mi vida y. alcanzar mis metas.. BI BL. IO. TE. sobre todo por brindarme la confianza para. Hernán. A mis amigos, por su apoyo constante y cariño Hernán. ii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(4) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. AGRADECIMIENTOS. IC A. Al profesor Hugo E. Casanova Herrera, por su orientación, asesoramiento,. Q. UI M. confianza y conocimientos brindados para la elaboración del presente trabajo. BI. O. A la cátedra de Bioquímica por las facilidades prestadas para la ejecución de. AC. IA. Y. nuestro trabajo de investigación.. RM. A todos los docentes, compañeros y amigos que con su apoyo hicieron posible la. BI BL. IO. TE. CA. DE. FA. realización de este trabajo.. iii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(5) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. PRESENTACIÓN. Señores miembros del jurado:. Dando cumplimiento a las disposiciones establecidas en el reglamento para la. IC A. obtención de GRADOS Y TITULOS DE LA FACULTAD DE FARMACIA Y. UI M. BIOQUÍMICA DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO, presentamos a. O. Q. vuestra consideración y elevado criterio el Informe de investigación Tipo 1 intitulado. BI. “DETERMINACIÓN DEL EFECTO in vitro DEL EXTRACTO DE LAS HOJAS. RM. AC. IA. Y. DE Croton alnifolius L. “TUNGA” SOBRE Escherichia coli Y Proteus mirabilis”. FA. Dejamos a vuestra consideración, señores miembros del jurado la calificación. IO. TE. CA. DE. del presente trabajo.. BI BL. Trujillo, Junio del 2011. Rodríguez Crespo, Carmen Lisseth. Saavedra Quiroz, Hernán Enrique. iv Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(6) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. JURADO DICTAMINADOR. IC A. M.Sc. Valdemar Vigo Alcántara. FA. RM. AC. IA. Y. BI. O. Q. UI M. PRESIDENTE. MIEMBRO. BI BL. IO. TE. CA. DE. M.Sc. Francisco Saavedra Suárez. M.Sc. Hugo E. Casanova Herrera MIEMBRO. v Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(7) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ÍNDICE. PÁGINAS PRELIMINARES. i. Agradecimiento……………………………………………………………………... iii. Presentación……………………………………………………………………........ iv. Jurado dictaminador ……………………………………………………………….. v. IC A. Dedicatoria………………………………………………………………………….. UI M. Índice………………………………………………………………………………… vi. BI. O. Q. Resumen…………………………………………………………………………….. vii. RM. AC. IA. Y. Abstract……………………………………………………………………………… viii. INTRODUCCIÓN.…………………………………………………………….. 1. II.. MATERIAL Y MÉTODOS.………………………………………………….. 10. CA. DE. FA. I.. IO. TE. III. RESULTADOS………………………………………………………………… 16. BI BL. IV. DISCUSIÓN……………………………………………………………………. 20. V.. CONCLUSIONES……………………………………………………………... 25. VI. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS……………………………………….. 26. VII. ANEXOS……………………………………………………………………….. 33. vi Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(8) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. RESUMEN:. El presente trabajo reporta el efecto antimicrobiano de los extractos obtenidos de las hojas Croton alnifolius L “Tunga”, especie colectada en las afueras de la provincia de Santa Cruz, en el Departamento de Cajamarca. Se estudió el efecto antimicrobiano. IC A. sobre cepas de Escherichia coli y Proteus mirabilis utilizando el método de Kirby Bauer. UI M. modificado o método de pocillo en placa de cultivo. Todos los ensayos realizados con el. O. Q. extracto acuoso en cantidades crecientes (300 µg, 400 µg, 600 µg y 800 µg) mostraron. Y. BI. efecto antibacteriano in vitro sobre las cepas en estudios, alcanzando halos de inhibición. AC. IA. de diámetro promedio desde 6.8 mm hasta 10.5 mm para E. coli y desde 6.7 mm hasta. RM. 11.3 mm para P. mirabilis. En el extracto etanólico, sólo las concentraciones más altas. FA. de 600 µg y 800 µg presentaron actividad antibacteriana sobre E. coli y P. mirabilis,. DE. obteniendo halos de inhibición desde 9.8 mm hasta 10 mm de diámetro para la primera. CA. cepa y de 7.8 mm hasta 11mm de diámetro para la segunda. Ninguna cantidad utilizada. TE. de extracto hexánico mostró efecto inhibidor in vitro sobre el crecimiento de E. coli y. BI BL. IO. P.mirabils.. Palabras clave: Croton alnifolius L., Tunga, Escherichia coli, Proteus mirabilis, antibacteriano.. vii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(9) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ABSTRACT. The present inform reports the antimicrobial effect of the extracts that was getting from the Croton alnifolius L. “Tunga”’s leafs, which is a specie collected from the outside of. IC A. Santa Cruz’s province, in Cajamarca’s department. It was studied the antimicrobial. UI M. effect on strains of Escherichia coli and Proteus mirabilis using the Kirby Bauer’s. Q. method modified or method of the bowl in culture plate. In all the essays where the. BI. O. aqueous extract was used in growing proportions (300 µg, 400 µg, 600 µg and 800 µg). IA. Y. showed and antibacterial effect on the strains in use, showing inhibitory halos of. AC. average diameter from 7 mm to 10.5 mm for E. coli and from 7.5 mm to 11.3 mm for. RM. P.mirabilis. On the etanolic extract just the higher concentrations of 600 µg and 800 µg. FA. showed antimicrobial activity on E. coli and P. mirabilis, with inhibitory halos from. DE. 9.8mm to 10 mm for the first strain and from 7.8 mm to 11 mm of it for the second one.. TE. CA. None quantity of the hexanoic extract showed an inhibitory effect in vitro of the E.coli. BI BL. IO. and P. mirabilis’s growth.. Keywords: Croton L. alnifolius, Tunga, Escherichia coli, Proteus mirabilis, antibacterial, abstract, urinary tract infection.. viii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(10) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. I. INTRODUCCION:. Desde los albores de la humanidad, los pueblos han hecho esfuerzos de diversa naturaleza por mantener su salud, y en su búsqueda impasible por conservar el equilibrio y bienestar en su vida, el hombre ha acumulado un vasto arsenal de conocimientos tradicionales para curar y prevenir las enfermedades físicas y “del alma”;. IC A. de este conjunto de conocimientos nace la Medicina tradicional (MT), la que ha sido. UI M. durante siglos el único sistema guardián del cual las generaciones pasadas se han valido. O. Q. para resolver sus principales necesidades de salud 1,2,3.. BI. La Medicina Tradicional es definida por la Organización Mundial de la Salud (OMS). IA. Y. como la suma total de conocimientos, técnicas y procedimientos basados en las teorías,. AC. las creencias y las experiencias indígenas de diferentes culturas, sean o no explicables,. RM. utilizados para el mantenimiento de la salud, así como para la prevención, el. FA. diagnóstico, la mejora o el tratamiento de enfermedades físicas y mentales. En países. DE. donde el sistema sanitario dominante se basa en la medicina alopática, o donde la MT. TE. CA. no se ha incorporado en el sistema sanitario nacional, la MT se clasifica a menudo como. BI BL. IO. medicina “complementaria”, “alternativa” o “no convencional” 4,5.. En muchos países desarrollados, del 70% al 80% de la población ha recurrido alguna vez a una u otra forma de medicina alternativa o complementaria. La MT entraña la utilización de medicamentos herbarios, partes de animales y minerales. El empleo de plantas para prevenir, tratar o aliviar problemas de salud tiene la mayor prevalencia entre las diversas formas de medicinas tradicionales de los pueblos que habitan en la tierra. Una planta es considerada como medicinal cuando al menos una parte de esta posee propiedades medicamentosas 6,7,8.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(11) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Las medicinas herbarias se sirven de hierbas o materiales herbarios, preparaciones y productos herbarios acabados cuyos ingredientes activos son partes de plantas u otras materias vegetales; el interés por estos medicamentos herbarios ha aumentado en las dos últimas décadas, tanto en países desarrollados como en desarrollo 6,9.. Los tratamientos herbarios resultan muy lucrativos en el mercado internacional. En 2003-2004 generaron unos ingresos anuales de US$ 5000 millones en Cuba. Sólo en. IC A. China la venta de esos productos reportó US$ 14 000 millones en 2005. En Brasil, los. Q. UI M. ingresos generados por la medicina herbaria ascendieron a US$ 160 millones en 2007 6.. BI. O. En el Perú contamos con referencias muy concretas sobre las plantas medicinales, como. IA. Y. la “zarzaparrilla”, el “achiote”, la “sangre de drago” y otras por parte de varios. AC. historiadores como Pedro Cieza de León, Nicolás Bautista Monardes, Antonio de la. FA. RM. Calancha, entre otros 3.. DE. En un estudio realizado por Villar López y Villavicencio Vargas (1992) se hace una. CA. clasificación de las plantas medicinales en 4 grupos: Plantas depurativas (ayudan a la. TE. remisión, liberación y eliminación de toxinas del organismo), Plantas curativas o de. BI BL. organismo) 10.. IO. sostén, Plantas sintomáticas y Plantas preventivas (incrementan las defensas del. Existen algunas plantas con propiedades antibióticas, entre ellas podemos mencionar el Allium Sativum “ajo”, que contiene que contiene su principio activo en la alicina, un glicósido sulfurado que por su acción de un fermento hidrolizante (alinasa) se desdobla en una esencia que contiene alicina con acción equivalente a la penicilina (actúa sobre estafilococo piógenes, bacilo coli, gérmenes del grupo disentérico y betatífico). También el Plantago major “llantén”, que contiene un principio activo en la aucubina.. 2 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(12) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Además, la literatura describe que plantas como M. mollis “muña” y el T. minuta “huacatay” poseen propiedades antifúngicas 3,11. Otra planta que podemos mencionar es la Arctotaphylos uva-ursi “gayuba”, la cual es utilizada para el tratamiento de procesos inflamatorios de las vías urinarias como cistitis o uretritis. También es útil en prostatitis consecuencia generalmente de una infección de. IC A. vías urinarias 12.. UI M. La infección del tracto urinario (ITU) es considerada generalmente como la existencia. Q. de microorganismos patógenos en el tracto urinario con o sin presencia de síntomas.. BI. O. Esta patología representa una de las infecciones más frecuentes en la población,. Y. predominando en el sexo femenino, y afectan a cualquier edad, desde los recién. RM. AC. IA. nacidos hasta los ancianos 13,14.. FA. Las ITU son clasificadas de diversas formas: alta o baja, aguda o crónica, no. DE. complicada o complicada, sintomática o asintomática, nueva o recurrente y comunitaria. CA. o nosocomial 14.. IO. TE. Algunos pacientes con ITU (sintomático) presentan disuria (escozor en la uretra durante. BI BL. o inmediatamente después de miccionar). A la disuria se le asocian habitualmente otros síntomas como fiebre, tenesmo, polaquiuria y dolor suprapúbico, por lo menos 1 de estos síntomas más un urocultivo positivo (>105 UFC/ml) contribuyen con el diagnóstico de la infección 14,15,16,17,18.. El origen bacteriano de la ITU es el más frecuente (80%-90%); en este caso, la definición exacta exige no sólo la presencia de gérmenes en las vías urinarias, sino también su cuantificación en al menos 105 unidades formadoras de colonias (UFC)/mL de orina. Sin embargo, varios estudios han establecido que un tercio o más de los 3 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(13) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. pacientes, mayoritariamente mujeres sintomáticas, tiene conteos de UFC por debajo de este nivel y presentan ITU 14.. En más del 95% de los casos, un único microorganismo es el responsable de la ITU. El agente etiológico más frecuente de ITU en ambos sexos es la Escherichia coli, responsable del 75% a 80% de casos; el 20% a 25% restante incluye microorganismos. UI M. sp., Streptococcus faecalis, Pseudomonas aeruginosa 13,14,16.. IC A. como: Staphylococcus saprophyticus, Proteus mirabilis, Proteus vulgaris, Klebsiella. Q. Como se ha mencionado, la E. coli, un bacilo entérico gramnegativo, es la causa mas. BI. O. común de infecciones del aparato urinario y es responsable casi del 90% de infecciones. IA. Y. urinarias en mujeres jóvenes, los miembros de este género, son habitantes casi. AC. universales de las vías intestinales de lo humanos y animales de sangre caliente, aunque. RM. no significa que sean los organismos dominantes en estas hábitats. La E. coli tiene un. FA. papel nutricional en las vías intestinales sintetizando vitaminas, especialmente la. CA. DE. vitamina K 17,18.. TE. La Escherichia tipo salvaje en raras ocasiones muestra algún requerimiento de factor de. IO. crecimiento y es capaz de crecer en una amplia variedad de fuentes de carbono y. BI BL. energía como azúcares, aminoácidos y ácidos orgánicos, etc 18.. La E. coli nefropatógena produce una hemolisina. La mayor parte de las infecciones se deben a un pequeño número de tipos de antígeno O de E. coli. El antígeno K parece ser importante en la patogenia de la ITU alta. La pielonefritis se vincula con un tipo específico de pelos, los pelos P que se unen a la sustancia P del grupo sanguíneo 17.. El Proteus es otro agente frecuente de ITUs y en muy raros casos produce enteritis, este bacilo gramnegativo se caracteriza por su rápida movilidad y producción de ureasa. Las 4 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(14) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. especies de Proteus producen infecciones en humanos sólo cuando la bacteria abandona el intestino. El P. mirabilis causa infecciones del tracto urinario y en ocasiones otras infecciones 17,18.. La habilidad de producir ureasa, le permite al Proteus hidrolizar con rapidez la urea con liberación de amonio, lo cual le confiere alcalinidad a la orina en este tipo de infección, además la rápida movilidad de Proteus puede contribuir a su capacidad de invadir el. UI M. IC A. aparato urinario 17.. Q. Aunque todas las bacterias entéricas pueden utilizar nitratos como aceptor de electrones. BI. O. alternativo anaeróbico, Proteus tiene la capacidad adicional de emplear varios. RM. AC. tiosulfato, tetrationato y dimetil sulfóxido 18.. IA. Y. compuestos de azufre como aceptores de electrones para crecimiento anaeróbico:. FA. Las cepas de Proteus varían mucho en cuanto a la susceptibilidad a antibióticos. El. DE. P.mirabilis casi siempre se inhibe con penicilinas; los antibióticos más activos para. CA. otros miembros son los aminoglucósidos y cefalosporinas 17.. IO. TE. La terapéutica usualmente empleada para el manejo de ITUs se basa en el control de la. BI BL. infección y los síntomas. La antibioticoterapia de elección usada en pacientes con ITU nosocomial no complicada son las fluoroquinolonas, la asociación de ampicilina con aminoglucósido (gentamicina) o cefalosporinas de tercera generación. En el caso se ITU nosocomial complicado se pueden utilizar asociaciones penicilinas/inhibidor de betalactamasas como ampicilina/sulbactam o piperacilina/tazobactam, o recurrir al empleo de carbapenemas como imipenem, ertapenem o meropenem 14,19.. La terapéutica en ITU adquiridas en comunidad no complicadas se basa en el empleo de sulfametoxazol/trimetoprima como terapia de primera línea, en caso de alergia a las 5 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(15) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. sulfas se utiliza nitrofurantoina y si existen cepas resistentes a estos antimicrobianos, las fluoroquinolonas, como el Ciprofloxacino, o la asociación de amoxicilina/ac. Clavulánico y las cefalosporinas representan una buena alternativa 14,19,20.. Por lo general, las infecciones del tracto urinario se pueden tratar sin ingresar en el hospital. Sin embrago constituye un hecho de notable importancia por su frecuencia, por. IC A. sus consecuencias a corto y a largo plazo y por sus repercusiones sociales 13.. UI M. En nuestro medio también contamos con algunas plantas con propiedades en. Q. enfermedades urológicas como Desmodium mollicum “manayupa”, Malva silvestris L. BI. O. “malva”, Ephedhra americana “pinco-pinco” con acción desinflamatoria de las vías. IA. Y. urinarias. Así mismo, se tiene información que la Bixa Orellana “achiote” además de. AC. poseer efecto antinflamatorio de vías urinarias, posee también acción antibacteriana. RM. sobre Neisseria gonorrhoeae, Thrichomona vaginalis, Staphylococcus aureus y. DE. FA. Streptococcus faecalis y en menos medida para Echerica coli y antifúngica 3.. CA. La especie de estudio en esta investigación, la C. alnifolius Lam. conocida. TE. popularmente como “rañuel” o “tunga”, es un arbusto perteneciente a la familia. IO. Euphorbiaceae, el cual frecuenta terrenos arenosos, pendientes o laderas rocosas, secas,. BI BL. quebrada areno-rocosas; y su hábitat se encuentra entre los 200 – 2400 m.s.n.m. en los departamentos de Cajamarca, La Libertad; Lima y Arequipa. Son variadas las propiedades terapéuticas descritas por fuentes bibliográficas de los miembros del género Croton, podemos destacar por ejemplo que el látex de C. palanostigma Klotzsch es de útil como cicatrizante de heridas superficiales, úlceras gástricas sangrantes; además la resina es antiséptica y evita la putrefacción o inflamación de las heridas, las hojas picadas se usan como descongestionante en mordidas de serpiente. Las hojas de C. adipatus H.B.K. se usan contra picaduras de culebras colocándolas sobre las heridas; la 6 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(16) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. resina de C. draconoides es utilizada contra úlceras estomacales, uterinas y contra cualquier herida, cortadura o úlcera del cuerpo, además, esta planta es utilizada para lavados vaginales, gárgaras, contra infecciones bucales y de la garganta, etc 21,22,25.. Sin embargo, la especie del genero Croton que ha recibido mayor atención por los investigadores por su amplia gama de propiedades terapéuticas es la C. lechleri Muell. Arg, la cual además de presentar beneficios semejantes al C. palanostigma Klotzsch,. IC A. presenta propiedades medicinales con un amplio fundamento científico. Entre los. UI M. estudios realizadas podemos mencionar las investigaciones realizados a mediados de. O. Q. 1970 por un grupo de científicos norteamericanos (Persinos et al., 1974), en este estudio. Y. BI. se logró aislar un alcaloide denominado taspina, el cual, en dosis de 20 mg/Kg logró. IA. reducir la inflamación inducida en ratas de laboratorio; los investigadores estimaron que. RM. AC. la taspina podría ser usada en enfermedades inflamatorias como el reumatismo (Neil,. FA. 1988). Vaisberg y col. (1989) de la universidad Cayetano Heredia comprobaron el. DE. efecto cicatrizante in vivo de la taspina en ratas. Ubillas y col. (1994) han aislado del. CA. latex de C. lechleri una protoanthocyanidina denominada SP-303, la cual a demostrado. IO. TE. actividad frente a virus tipo ADN y ARN 26,27.. BI BL. La C. alnifolius Lam. “tunga”, no está exenta propiedades terapéuticas, en nuestra universidad se han llevado a cabo dos investigaciones con esta especie, la primera que mencionaremos es un estudio ejecutado en nuestra facultad (2009) donde se realizó la detección de metabolitos secundarios, encontrando entre sus fitoconstituyentes: taninos, flavonoides, esteroides, quinonas, cardenólidos, alcaloides(23); además, otro estudio realizado el año siguiente, ha demostrado que el extracto etanólico de los tallos de C. alnifolius L. a posee un efecto leishmanicida 24.. 7 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(17) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Al observar la enorme variedad efectos terapéuticas de las distintas especies del género Croton, es lógico pensar que existan algunas propiedades medicinales que aun faltan conocer. Por ejemplo, no se han realizado estudios de las propiedades antibacterianas del C. alnifolius, pero los trabajos de investigación antes mencionados aperturan nuestro interés hacia potenciales aplicaciones que tendría esta especie en el campo de fitoterapia. Es por ello que hemos decidido realizar este trabajo de investigación para. IC A. determinar el efecto antibacteriano de los extractos las hojas de C. alnifolius sobre. UI M. bacterias frecuentes en enfermedades del tracto urinario- E. coli y Proteus mirabilis,. Y. BI. O. Q. para lo cual nos planteamos el siguiente problema:. AC. IA. ¿Cuál es el efecto in vitro de los extractos de las hojas de Croton alnifolius L. “Tunga”. BI BL. IO. TE. CA. DE. FA. RM. frente a Escherichia coli y Proteus mirabilis?. 8 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(18) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. En la presente investigación queremos alcanzar el siguiente objetivo:. . Determinar el efecto antibacteriano in vitro de los extractos de las hojas de. BI BL. IO. TE. CA. DE. FA. RM. AC. IA. Y. BI. O. Q. UI M. IC A. Croton alnifolius L. “Tunga” en Escherichia coli y Proteus mirabilis.. 9 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(19) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. II. MATERIAL Y MÉTODO 1. MATERIALES: 1.1 MATERIAL BIOLÓGICO: 1.1.1 -. Material botánico:. Se recolectó 1 Kg hojas secas de Croton alnifolius L. “Tunga” colectados en las afueras de la provincia de Santa Cruz – Departamento de. Se emplearon cepas de Escherichia coli y Proteus mirabilis obtenidas. Q. -. Material microbiológico:. UI M. 1.1.2. IC A. Cajamarca.. BI. O. del Laboratorio de Bacteriología del departamento académico de. Y. Microbiología y Parasitología de la facultad de Ciencias Biológicas de la. AC. IA. Universidad Nacional de Trujillo.. Equipos:. TE. 1.2.2. DE. De uso común en laboratorio.. CA. -. Material de vidrio:. FA. 1.2.1. RM. 1.2 MATERIAL DE LABORATORIO:. Marca. Modelo. Balanza Analítica. H.W. Kessel. Sartorius. Baño María. H.W. Kessel. Bionet. Cocina Eléctrica. Folmesa. Sartorius. Equipo de destilación a reflujo. H.W. Kessel. Circular. Estufa. H.W. Kessel. Thelco. Refrigeradora. Coldex. RN30. BI BL. IO. Equipo. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(20) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 1.2.3. Solventes:. -. Agua destilada. -. Alcohol etílico 96º. -. Hexano. 1.2.4. Agar Mueller-Hinton. IC A. -. Medios de cultivo:. Q. UI M. 2. MÉTODO:. BI. O. 2.1 RECOLECCIÓN Y CLASIFICACIÓN TAXONÓMICA DE LA. Y. ESPECIE BOTÁNICA:. AC. IA. Se recolectó 1 Kg de las hojas de Croton alnifolius L. “Tunga” en las afueras. RM. de la provincia de Santa Cruz – Departamento de Cajamarca.. DE. FA. La identificación de esta especie botánica se realizó mediante el método. CA. tradicional o clásico de herborización, para lo cual, se seleccionó el material en. TE. el campo, verificando que este en buenas condiciones, en estado de floración y. IO. de fructificación; la identificación se llevo a cabo en el Herbarium truxillensis. BI BL. de la Universidad Nacional de Trujillo.. 2.2 PREPARACIÓN DE LA MUESTRA: Se seleccionaron las hojas de la planta, limpiándolas adecuadamente; luego fueron sacadas a temperatura ambiente y después se procedió a cortar la muestra en trozos y triturarla mediante procesos mecánicos.. 11 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(21) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.3 OBTENCIÓN DE LOS EXTRACTOS DE LAS HOJAS DE Croton alnifolius L “Tunga” 24,28: Se pesaron 100 g de hojas secas y molidas de la especie en estudio y fueron introducidas en un balón fondo redondo de 1 litro, luego se adicionó alcohol etílico de 96º en cantidad suficiente para cubrir la muestra, se agitó en forma circular por un lapso breve para asegurarnos de que toda la droga esté en. IC A. contacto con el solvente. Después se realizó un reflujo por 1 hora y se filtró en. UI M. caliente, el extracto obtenido se dejó enfriar hasta temperatura ambiente.. Q. Transcurrido el lapso de 3 horas se formaron 2 fases, un precipitado y un. BI. O. sobrenadante, estas fases fueron separadas por un proceso de filtración. El. Y. precipitado formado quedó retenido en el papel filtro, esta fracción fue secada. AC. IA. y diluida en 5 ml de hexano, la cual se le consideró como el extracto hexánico. RM. (H). El filtrado obtenido fue divido en 2 fracciones, la primera se conservó. FA. como tal y fue considerada como el extracto etanólico (E); la segunda. DE. fracción fue llevada a calor hasta obtener un concentrado de contextura. CA. pastosa, después de esto se dejó enfriar hasta temperatura ambiente para luego. IO. TE. agregar 5 ml de agua destilada, se agitó la solución resultante y se procedió a. BI BL. filtrar, el filtrado obtenido corresponde al extracto acuoso (A). Los extractos obtenidos se taparon herméticamente y fueron conservados en refrigeración para su posterior evaluación. FUNDAMENTO: El método para la obtención de los extractos de plantas medicinales descrita por Q.F. Hugo E. Casanova Herrera, se fundamenta en los efectos de la polaridad de los solventes, el pH y la temperatura del medio sobre la solubilidad de los metabolitos secundarios de las plantas medicinales. 28. 12 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(22) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.4 ENSAYOS MICROBIOLÓGICOS 28,29,30,31,32 ACTIVIDAD. ANTIBACTERIANA. POR. EL. MÉTODO. DE. DIFUSIÓN DE KIRBY BAUER MODIFICADO Se empleó la técnica de difusión en placa, según el método de Kirby Bauer (Bauer et al., 1966) la cual fue modificada, sustituyéndose el disco de papel por pocillos en el medio de cultivo agar Mueller-Hinton solidificado. IC A. (Ahmad et al., 1998).. UI M. Este método se funda en la difusión de una muestra a través de una capa. Q. de agar solidificado, en una extensión tal que el crecimiento de. BI. O. microorganismos sensibles es inhibido en zonas alrededor del área que. PREPARACIÓN DEL INÓCULO. AC. 2.4.1. IA. Y. contiene una concentración conocida del extracto de Croton alnifolius L... RM. Fueron tomados cuatro colonias del cultivo original de cada germen a. DE. FA. ensayar con el asa baceriológica y se suspendieron en 5 mL de solución. CA. salina 0.9%. Se dejó reposar hasta alcanzar una densidad bacteriana. TE. similar a la turbidez del tubo Nº 3 de Nefelómetro de Mc Farland (900. BI BL. IO. millones de bacterias por ml).. 2.4.2. PREPARACIÓN DEL MEDIO DE CULTIVO Y SIEMBRA EN PLACA. Para esta técnica, se vertieron 20 ml de agar Mueller-Hinton en placas petri hasta obtener un grosor homogéneo de aproximadamente 4 mm de espesor. Las placas fueron mantenidas a 37°C en una estufa durante a 60 minutos, con la finalidad de eliminar la humedad de la superficie. Se realizó una siembra en superficie utilizando una pipeta estéril, con la cual se procedió a verter 2 ml del inóculo sobre la superficie las placas 13 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(23) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. con de agar nutritivo. Luego de distribuir el inóculo uniformemente se procedió a inclinar y eliminar el exceso con una micropipeta. Se dejó secar por 15 minutos antes de depositar el extracto de Croton alnifolius L “Tunga”.. 2.4.3. APLICACIÓN DEL EXTRACTO. IC A. Se realizaron perforaciones de aproximadamente 6 mm de diámetro con. UI M. un sacabocado estéril y se procedió a inocular con una micropipeta los. Q. volúmenes equivalentes a 300 µg, 400 µg, 600 µg y 800 µg del peso seco. CULTIVO. Proteus mirabilis. 300 µg. 400 µg. ETANÓLICO (µg). 300 µg. ACUOSO (µg). 300 µg. 600 µg. 800 µg. 300 µg. 400 µg. 600 µg. 800 µg. 600 µg. 800 µg. 300 µg. 400 µg. 600 µg. 800 µg. 600 µg. 800 µg. 300 µg. 400 µg. 600 µg. 800 µg. FA. HEXÁNICO (µg). DE. EXTRACTO. RM. AC. Escherichia coli. IA. Y. BI. O. de cada uno de los extractos.. 400 µg. BI BL. IO. TE. CA. 400 µg. Se efectuaron cuatro ensayos por cada extracto en cada bacteria (E.coli y P. mirabilis). Adicionalmente se llevaron a cabo controles negativos para medir actividad antimicrobiana de los solventes hexano y etanol, para determinar si estos poseen actividad antimicrobiana que puede interferir con la prueba.. 14 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(24) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Una vez depositados los extractos en las placas, estas fueron llevadas a refrigeración a una temperatura de 4° C por un lapso de 15 minutos. A continuación, se dejaron 5 minutos a temperatura ambiente. Finalmente, fueron llevadas a incubación aeróbica a 37° C durante 24 horas.. 2.4.4. MEDIDA DE LOS HALOS DE INHIBICION:. Transcurridas 24 horas se midieron los halos de inhibición de. IC A. crecimiento bacteriano en Escherichia coli y Proteus mirabilis de cada. UI M. una de las muestras del extracto de las hojas de Croton alnifolius L.. AC. IA. 3. ANÁLISIS DE RESULTADOS 28,33,34:. Y. BI. O. Q. “tunga”.. RM. El diámetro promedio de los halos de inhibición obtenidos en el ensayo fueron. FA. comparados con medidas estándares de los halos de inhibición de. DE. microorganismos con extractos medicinales (Magallanes C. 2003; Ríos N.. TE. CA. 2009; Bamberger KL 2010) y se expresaron de la siguiente manera:. IO. MEDIA DE HALOS INTERPRETACIÓN. BI BL. DE INHIBICIÓN: < a 6 mm. (-) :. No hay efecto antibacteriano. ≥ 6 mm y < 8 mm. (+) :. Poco efecto antibacteriano. ≥ 8 mm y < 10 mm. ( ++ ): Mediano efecto antibacteriano. ≥ a 10 mm. (+++): Alto efecto antibacteriano. 15 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(25) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. III. RESULTADOS: TABLA Nº 1: Efecto antibacteriano in vitro de tres extractos de hojas de Croton alnifolius L.sobre cepas de Escherichia coli .. ETANÓLICO. ACUOSO. A. HEXÁNICO. M. 800. 300. 400. 600. 800. µg. µg. µg. (µg. µg. µg. µg. 0. 9. 11. 11. 0. 10. 11. 10. 0. 0. 9. 9. 10. 9. 10. 9. 11. 0. 0. 0. 8. 9. 10. 8. 10. 10. 0. 0. 0. 0. 11. 10. 9. 9. 10. 11. 0,0. 0,0. 0,0. 4,5. 9.8. 10. 7. 9,3. 10. 10.5. (-). (-). (-). (-). (++). (+++). (+). (++). (+++). (+++). 400. 600. 800. 300. INOCULADO (µg). (µg. µg. µg. µg. (µg. E1. 0. 0. 0. 0. E2. 0. 0. 0. E3. 0. 0. 0. E4. 0. 0. PROMEDIO (mm). 0,0. 0,0. EFECTO ANTIBACTERIANO. (-). FA RM. DE. (-). DONDE:. BI. BI B. LI O. EN CADA ENSAYO. TE CA. DE INHIBICIÓN (mm). Y. DIÁMETRO DE LOS HALOS. 400. UI. 300. O. CANTIDAD DE EXTRACTO SECO. AC IA. 600. Q. IC. EXTRACTO. Diámetros de inhibición: (-) <6 mm: No hay efecto antibacteriano; (+) ≥ 6 y < 8 mm: poco efecto antibacteriano; (++) ≥ 8 y <10 mm mediano efecto antibacteriano; (+++) ≥ 10 mm: alto efecto antibacteriano.. 16 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(26) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. BI B. LI O. TE CA. DE. FA RM. AC IA. Y. BI. O. Q. UI. M. IC. A. GRÁFICO Nº 1: Diámetro de los halos de inhibición de crecimiento de Escherichia coli con tres extractos de hojas de Croton alnifolius L.. 17 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(27) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. TABLA Nº 2: Efecto antibacteriano in vitro de tres extractos de hojas de Croton alnifolius L. sobre cepas de Proteus mirabilis.. ETANÓLICO. 300. 400. 600. 800. 300. INOCULADO (µg). µg. µg. µg. µg. µg. E1. 0. 0. 0. 0. E2. 0. 0. 0. 0. E3. 0. 0. 0. E4. 0. 0. PROMEDIO (mm). 0,0. 0,0. EFECTO ANTIBACTERIANO. (-). ACUOSO. 400. 600. 800. 300. 400. 600. 800. µg. µg. µg. µg. µg. µg. µg. 8. 10. 11. 10. 10. 10. 11. 0. 0. 0. 9. 0. 0. 11. 12. 0. 0. 0. 10. 12. 10. 11. 12. 11. 0. 0. 0. 0. 11. 12. 10. 10. 10. 11. 0,0. 0,0. 0,0. 2,0. 7,8. 11,0. 7.5. 7,8. 10,8. 11,3. (-). (-). (-). (-). (+). (+++). (+). (+). (+++). (+++). UI. M. IC. A. CANTIDAD DE EXTRACTO SECO. Q. HEXÁNICO. FA RM. EXTRACTO. O. 0. TE CA. Y. LI O. (-). BI B. DONDE:. DE. CADA ENSAYO ENSAYOS. AC IA. DE INHIBICIÓN (mm) EN. BI. DIAMETRO DE LOS HALOS. Diámetros de inhibición: (-) <6 mm: No hay efecto antibacteriano; (+) ≥ 6 y < 8 mm: poco efecto antibacteriano; (++) ≥ 8 y <10 mm mediano efecto antibacteriano; (+++) ≥ 10 mm: alto efecto antibacteriano.. 18 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(28) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. BI B. LI O. TE CA. DE. FA RM. AC IA. Y. BI. O. Q. UI. M. IC. A. GRÁFICO Nº 2: Diámetro de los halos de inhibición de crecimiento de Proteus mirabilis con tres extractos de hojas de Croton alnifolius L.. 19 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(29) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. IV. DISCUSIÓN: El ensayo realizado con las hojas de C. alnifolius L. “Tunga” comienza con la extracción de los metabolitos secundarios, para lo cual se realizó previamente la trituración de la muestra, con la finalidad reducir el tamaño de las hojas para aumentar la superficie contacto entre la droga y el solvente. El siguiente paso fue macerar la muestra triturada y luego se realizó la extracción a reflujo para la obtención de. IC A. metabolitos que se encuentran disueltos en el citoplasma de las células vegetales. Este. UI M. método de extracción fue empleado por las múltiples ventajas que presenta, como por. Q. ejemplo su bajo costo, porque se evitan pérdidas de disolvente y se reducen las. BI. O. posibilidades de incendio cuando el disolvente es inflamable y se calienta con cocina. IA. Y. eléctrica o mechero 12,35,36,37.. AC. Además, para la extracción de los metabolitos se empleó diferentes solventes con. RM. polaridad creciente, comenzando con el hexano para las sustancias de menor polaridad,. DE. compuestos más polares 37,38.. FA. etanol para moléculas de polaridad intermedia y terminando con el empleo agua para los. CA. Para los ensayos microbiológicos se utilizó el método Kirby Bauer modificado o. IO. TE. método de los pocillos debido a que algunos estudios han demostrado que la variación. BI BL. de discos de difusión por pozos en la placa de cultivo, brindan sensibilidad al método para detectar actividad antimicrobiana de los extractos de plantas medicinales 29,30,31. En los resultados obtenidos, podemos observar en las tablas 1 y 2 que todos los ensayos realizados con el extracto acuoso en cantidades crecientes han presentado efecto antibacteriano in vitro sobre las cepas en estudios, alcanzando halos de inhibición de diámetros promedio desde 7 mm (poco efecto antibacteriana) hasta 10.5 mm (alto efecto antibacteriana) para E. coli y halos de inhibición desde 7.5 mm hasta 11.3 mm para P. mirabilis. Además, en estos cuadros también podemos percatarnos que para el. 20 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(30) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. extracto etanólico, sólo las concentraciones mas altas de 600 µg y 800 µg han exhibido efecto antibacteriano sobre E. coli y P. mirabilis, obteniendo halos de inhibición desde 9.8 mm hasta 10 mm de diámetro para la primera cepa y de 7.8 mm hasta 11 mm de diámetro para la segunda. En los ensayos realizados con el extracto hexánico, ninguna de las cantidades utilizada mostró efecto inhibidor sobre el crecimiento de E. coli y P.mirabils.. IC A. Los controles negativos realizados con los solventes etanol 96º y hexano nos. UI M. sirvieron para identificar si estos poseen actividad antibacteriana que puede interferir en. Q. los resultados obtenidos, ninguno de los solventes mostraron efecto inhibitorio sobre el. BI. O. crecimiento de las cepas de E. coli y P.mirabils (Anexos III y IV).. IA. Y. Las gráficas 1 y 2 nos permiten observar que, a medida que aumentamos las. AC. cantidades de los extractos etanólico y acuoso, también aumenta el diámetro de. RM. inhibición sobre el crecimiento de E. coli y P. mirabilis. Asimismo, podemos notar el. FA. nulo poder inhibitorio del extracto hexánico para cada uno de los gérmenes.. DE. Las propiedades antimicrobianas encontradas se pueden explicar por los. CA. metabolitos semi polares y polares de las hojas de la Croton alnifolius L. extraídos. IO. TE. según su polaridad con los distintos solventes. La marcha fitoquímica llevada a cabo en. BI BL. esta especie (2009) evidencia la presencia de alcaloides, taninos, flavonoides, esteroides, quinonas, cardenólidos y saponinas 23. Los alcaloides son bases orgánicas que comprenden una gran familia de más de 15000 metabolitos secundarios, de gran variedad estructural cuya única característica común es que contienen un átomo de nitrógeno en su estructura. A valores de pH normales del citosol (pH de 7,2) o de la vacuola (pH de 5 a 6), el átomo de nitrógeno está protonado; por tanto, los alcaloides están cargados positivamente y, por lo general, son solubles en agua 39,40.. 21 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(31) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Los alcaloides se sintetizan a partir de unos pocos aminoácidos comunes, en concreto lisina, tirosina y triptófano. El papel de los alcaloides en las plantas ha sido objeto de especulación durante mucho tiempo; se pensó que eran desechos nitrogenados, compuestos de almacenamiento de nitrógeno o reguladores del crecimiento; sin embargo en la actualidad se considera que la principal función de estos compuestos es la defensa frente a predadores 39.. IC A. Algunos estudios atribuyen a los alcaloides aislados en especies vegetales. UI M. propiedades antibacterianas, antifúngicas41,42 e incluso antiparasitarias43. Estas acciones. Q. antimicrobianas de los alcaloides se podrían deber a la presencia de nitrógeno en su. BI. O. estructura como amina o amida, estos grupos nitrogenados pueden interaccionar. IA. Y. probablemente con blancos intracelulares de los microorganismos produciendo. AC. inhibición en su crecimiento. Alarcón y col. (2006) menciona en su estudio que es. RM. probable que la actividad se encuentre directamente relacionada con el enlace N-H, ya. FA. que al bloquear este enlace, mediante la sustitución del hidrógeno por un grupo. DE. diferente se observa la pérdida total de la actividad antibacteriana 41,44.. CA. Los taninos son una clase de polímeros fenólicos vegetal con propiedades. IO. TE. defensivas contra herbívoros. Estos polifenoles poseen cinco características generales. BI BL. que los distinguen: a) solubilidad en agua, b) masa molecular entre 500 y 3000-5000, c) estructura y carácter polifenólico, d) complejación intermolecular (astringencia) y e) características. estructurales. (taninos. hidrolizables,. florotaninos. y. taninos. condensados)39,45,46. Cabe destacar que los taninos no sólo representan una defensa química frente a predadores, sino también han demostrado actividad contra microorganismos patógenos. Akiyama y col. (2001) expone una se serie de mecanismos antimicrobianos de los taninos, los cuales se pueden resumir de la siguiente manera: (I) La propiedad. 22 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(32) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. astringente del tanino puede inducir la formación de complejos con enzimas o sustratos. Muchas enzimas microbianas cultivadas en bruto o en forma purificada se inhiben cuando se mezcla con los taninos. (II) la toxicidad de un tanino puede estar relacionado con su acción sobre las membranas de los microorganismos. (III) La complejación de iones metálicos por los taninos también puede dar cuenta de la toxicidad de estos polifenoles. El ácido tánico puede funcionar como un sideróforo, quelando el hierro del. IC A. medio interno y haciendo que este catión no esté disponible para la bacteria. El. UI M. crecimiento de microorganismos en condiciones aerobias necesitan hierro para una. Q. variedad de funciones, incluyendo la reducción de los precursores de ribonucleótidos de. BI. O. ADN, la formación del grupo hemo, y otros funciones esenciales para la viabilidad de la. IA. Y. bacteria 39,47.. AC. Los flavonoides comprenden varias clases de sustancias naturales, entre las cuales. RM. están muchas de las que les confieren colores amarillo, naranja, rojo, violeta y azul, a. FA. muchas flores, hojas y frutos, especialmente. Los flavonoides contienen en su estructura. DE. química un número variable de grupos hidroxilo fenólicos, lo que les confiere una gran. CA. capacidad antioxidante. Pueden unirse a los polímeros biológicos, tales como enzimas,. IO. TE. transportadores de hormonas, y ADN; quelar iones metálicos transitorios, tales como. BI BL. Fe2+, Cu2+, Zn2+, catalizar el transporte de electrones, y depurar radicales libres. Debido a este hecho se han descrito efectos protectores en patologías tales como diabetes mellitus, cáncer, cardiopatías, infecciones víricas, úlcera estomacal y duodenal, e inflamaciones. Otras actividades que merecen ser destacadas son sus acciones antibacterianas 48,49,50. La acción antimicrobiana se debería a que los flavonoides por la presencia en su estructura de hidroxilos fenólicos, penetran fácilmente a través de la membrana celular. 23 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(33) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. bacteriana, se combina y precipitan las proteínas protoplasmáticas desnaturalizándolas y actuando como venenos protoplasmáticos 41. Las saponinas son un grupo de sustancias glicosídicas que se disuelven en agua y poseen la propiedad de formar espuma al agitar la solución. Por hidrólisis de una saponina se obtienen carbohidratos y una aglicona: “Sapogenina”, la cual estructuralmente pude ser de tipo esteroidal (C27) o triterpenoidal (C30). Se cree que la. IC A. toxicidad de las saponinas se debe a su capacidad de formar complejos con esteroles. UI M. produciendo la ruptura de las membranas bacterianas 39,40.. Q. Los resultados obtenidos de los ensayos antimicrobianos nos demuestran el efecto. BI. O. antibacteriano de los extractos etanólico y acuoso de las hojas de C. alnifolius Lam. IA. Y. “Tunga” sobre cepas bacterianas comunes en infecciones del tracto urinario – E. coli y. AC. P. mirabilis. Este estudio no ha podido determinar cual es el metabolito(s) relacionados. RM. con la actividad antibacteriana, o si existen otros metabolitos que puedan ejercer. FA. sinergismo o interfiere con la actividad antimicrobiana, sin embargo, este ensayo puede. DE. servir para que futuras investigaciones se encarguen de dilucidar cual o cuales son los. BI BL. IO. TE. CA. principios activos relacionados con esta actividad antibacteriana 41.. 24 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(34) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. V. CONCLUSIONES:. Después del análisis de resultados se llego a las siguientes conclusiones:. 1. Se logró determinar el efecto antibacteriano in vitro de los extractos etanólico y acuoso de las hojas de Croton alnifolius L. “tunga” sobre las cepas de. UI M. IC A. Escherichia coli y Proteus mirabilis.. Q. 2. Ninguna cantidad de extracto hexánico usado en este ensayo mostró efecto. IA. Y. BI. O. antibacteriano sobre las cepas de E. coli y P. mirabilis.. AC. 3. El extracto acuoso exhibió mayor halo de inhibición que el extracto etanólico,. RM. siendo el diámetro promedio de 7 mm a 10.5 mm y de 0,0 mm a 10 mm. DE. FA. respectivamente para la cepa de E. coli.. CA. 4. El extracto acuoso exhibió mayor halo de inhibición que el extracto etanólico,. IO. TE. siendo el diámetro promedio de 7.5 mm a 11.3 mm y de 0,0 mm a 11 mm. BI BL. respectivamente para la cepa de P. mirabilis.. 5. Se determinó que al aumentar la cantidad de extracto, tanto acuoso como etanólico, el efecto antibacteriano será mayor, siendo la cepa de Proteus mirabilis la que mostró mayor sensibilidad.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(35) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. VI. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS:. 1.. Vergara Quintero M: Tres concepciones históricas del proceso Saludenfermedad. Hacia la Promoción de la Salud, 2007; 12: 41 – 50. 2.. Castro Méndez I: Actualidad de la medicina Tradicional Herbolaria. Rev cubana plant med [en línea] 2006 [fecha de acceso: 29 de abril del 2011];. IC A. 11(2). Disponible en:. Villar López M y Villavicencio Vargas O. Editores. Manual de fitoterapia,. Q. 3.. UI M. http://www.bvs.sld.cu/revistas/pla/vol11_2_06/pla01206.htm. BI. O. EsSalud; Organización Panamericana de la Salud. Lima: Impresos RAMA. Zhang X: Pautas Generales para las metodologías de investigación y. AC. 4.. IA. Y. SAC. 2001. Organización Mundial de la Salud: Estrategias de la OMS sobre medicina. DE. 5.. FA. Ginebra: OMS; 2000. RM. evaluación de la medicina tradicional, Organización Mundial de la Salud.. TE. Organización Mundial de la Salud: Medicina Tradicional. Informe de un grupo. IO. 6.. CA. tradicional 2002-2005. Informe de un grupo científico de la OMS; 2000. 7.. BI BL. científico de la OMS. Ginebra: OMS; 2008 Morón Rodríguez F. Editor. Rev cubana plant med [en línea] 2007 [fecha de acceso: 29 de abril de 2011]; 12(2). Disponible en: http://bvs.sld.cu/revistas/pla/vol12_2_07/pla01207.htm 8.. Bruneton J: Farmacognosia, fitoquímica, plantas medicinales. 2º ed. Zaragoza: Acribi S.A.; 1993.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
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(38) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 24. Carranza Vega, DE; Huayanay Viera, JA. Determinación del efecto leshmanicida in vitro de los extractos del tallo de Croton alnifolius L. (Tunga) en Leishmania (V) peruviana. (Informe de Investigación tipo II para optar el grado de Bachiller en Farmacia y Bioquímica). Trujillo: Universidad Nacional de Trujillo. 2010 25. Vanaclocha B y Cañigueral S.: Fitoterapia: Vademecum de prescripción. 4º ed,. IC A. España: Masson; 2003.PP: 448-450. UI M. 26. Vega Orcacita M: Etnobotánica de la amazonia peruana. Quito: ABYA-YALA;. Q. 2001. p: 80-83. BI. O. 27. Carlson T: Medical ethnobotanical reserch as a method to identify bioactive. IA. Y. plants to treat infectious diseases. En: Iwu M and Wootton J. Ethnomedicine. AC. and drug Discovery. 5º ed. England: Elsevier Science; 2002. p. 45- 52. RM. 28. Bamberger Vazallo KL y Collave Alvarado SR. Efecto de los extractos de. FA. Clinopodium Taxifolium “chinininga” frente a cepas de Staphylococcus aureus. DE. y Klebsiella pneumoniae in vitro. (Informe de investigación tipo I). Trujillo:. CA. Universidad Nacional de Trujillo. 2010. IO. TE. 29. Toribio MS, Oriani DS, Fernández JG, Toso RE, Tortone CA. Estudio de la. BI BL. actividad antimicrobiana de cuatro especies del género Baccharis. Ciencia veterinaria [en línea] 2007 [fecha de acceso: 05 de mayo del 2011]: 9 (1). Disponible en: http://www.biblioteca.unlpam.edu.ar/pubpdf/revet/n09a05toribio.pdf 30. Rojas JJ, García AM, López AJ. Evaluación de dos metodologías para determinar la actividad antimicrobiana de plantas medicinales. REDALYC [en línea] 2005 [fecha de acceso: 05 de mayo del 2011]. 4 (2). Disponible en: http://redalyc.uaemex.mx/pdf/856/85640204.pdf. 29 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
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(42) BI. O. Q. UI M. IC A. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. BI BL. IO. TE. CA. DE. FA. RM. AC. IA. Y. ANEXOS. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(43) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ANEXO I Ensayo del efecto antibacteriano in vitro del extracto héxanico de las hojas de Croton alnifolius L. (tunga) en cantidades de 300 µg, 400 µg, 600 µg y 800 µg sobre el crecimiento de Escherichia coli.. E2. DE. FA. RM. AC. IA. Y. BI. O. Q. UI M. IC A. E1. E4. BI BL. IO. TE. CA. E3. Diámetro de los halos de inhibición (mm) del extracto hexánico de hojas de Croton alnifolius L en cantidades crecientes sobre Escherichia coli Cantidad de. E2. E3. E4. 300 µg. 0. 0. 0. 0. 0,0. 400 µg. 0. 0. 0. 0. 0,0. 600 µg. 0. 0. 0. 0. 0,0. 800 µg. 0. 0. 0. 0. 0,0. extracto seco EXTRACTO HEXÁNICO. Promedio. E1. (mm). Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(44) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Ensayo del efecto antibacteriano in vitro del extracto etanólico de las hojas de Croton alnifolius L. (tunga) en cantidades de 300 µg, 400 µg, 600 µg y 800 µg sobre el crecimiento de Escherichia coli.. E2. FA. RM. AC. IA. Y. BI. O. Q. UI M. IC A. E1. E4. CA. DE. E3. BI BL. IO. TE. **Los puntos rojos marcados en la placa indican el perímetro del halo de inhibición. Diámetro de los halos de inhibición (mm) del extracto etanólico de hojas de Croton alnifolius L en cantidades crecientes sobre Escherichia coli Cantidad de. E2. E3. E4. 300 µg. 0. 0. 0. 0. 0,0. 400 µg. 9. 9. 0. 0. 4,5. 600 µg. 11. 9. 8. 11. 9,8. 800 µg. 11. 10. 9. 10. 10,0. extracto seco EXTRACTO ETANÓLICO. Promedio. E1. (mm). Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
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