Frecuencia de cultivos de Pseudomonas aeruginosa y Klebsiella pneumoniae productoras de metalobetalactamasas de origen hospitalario

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(1)Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS. CI EN. CI. AS. BI. O. LO. G. IC. MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA. AS. ESUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE. Frecuencia de cultivos de Pseudomonas aeruginosa y Klebsiella. DE. pneumoniae productoras de metalobetalactamasas de origen hospitalario. CA. TESIS PARA OBTENER EL TÍTULO DE:. BI. BL. IO. TE. BIÓLOGO -MICROBIÓLOGO. AUTORA: Br. Rosa Luz Polo Tacanga ASESOR : Dr. Pedro Mercado Martínez COASESOR: Dr. Percy Asmat Marrufo TRUJILLO – PERÚ 2018. i Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(2) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. LO. Dr. Orlando Gonzáles Nieves. G. IC. AS. AUTORIDADES DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO. DE. CI EN. CI. AS. BI. O. RECTOR. Dr. Rubén Vera Véliz. BI. BL. IO. TE. CA. VICERRECTOR ACADÉMICO. Dr. Steban Ilich Zerpa SECRETARIO GENERAL. ii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(3) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AS. AUTORIDADES DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS. CI EN. CI. AS. BI. O. LO. G. DECANO. IC. Dr. Freddy Rogger Mejía Coico. Dr. William Zelada Estraver. Dra. Bertha Soriano Bernilla. BL. IO. TE. CA. DE. SECRETARIO. BI. DIRECTORA DE LA ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA. iii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(4) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. G. IC. AS. MIEMBROS DEL JURADO DICTAMINADOR. LO. __________________________________. CI EN. CI. AS. BI. PRESIDENTE. O. Dr. Luis Alberto Llenque Díaz. __________________________________. SECRETARIO. BI. BL. IO. TE. CA. DE. Dr. Pedro Mercado Martínez. __________________________________ Ms.C. David Zavaleta Verde VOCAL. iv Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(5) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DEL ASESOR El que suscribe, asesor de la tesis titulada: “Frecuencia de cultivos de Pseudomonas aeruginosa. y Klebsiella pneumoniae productoras de. IC. AS. metalobetalactamasas de origen hospitalario”. LO. G. CERTIFICA:. O. Que esta investigación ha sido desarrollada de conformidad con su. BI. correspondiente proyecto y teniendo en cuenta las orientaciones pertinentes al. AS. tesista.. CI. En cuanto al informe, éste ha sido redactado bajo mi asesoramiento de acuerdo. CI EN. al formato establecido en la Facultad de Ciencias Biológicas y ha acogido las observaciones y sugerencias alcanzadas.. DE. Por ello, autorizo a la Bachiller Rosa Luz Polo Tacanga, continuar con los. __________________________________. IO. TE. CA. trámites correspondientes según sus fines.. BL. Dr. Pedro Mercado Martínez ASESOR. BI. Profesor Principal a D.E Departamento de Microbiología y Parasitología. v Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(6) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DE LA APROBACIÓN. AS. Los profesores que suscriben, miembros del jurado dictaminador,. IC. declaran que la presente tesis ha cumplido con los requisitos formales y. BI. O. LO. G. fundamentos teóricos, siendo aprobada por UNANIMIDAD.. AS. __________________________________. CI. Dr. Luis Alberto Llenque Díaz. DE. CI EN. PRESIDENTE. Dr. Pedro Mercado Martínez SECRETARIO. BI. BL. IO. TE. CA. __________________________________. __________________________________ Ms.C. David Zavaleta Verde VOCAL. vi Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(7) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. IC G. SEÑORES MIEMBROS DEL JURADO DICTAMINADOR:. AS. PRESENTACIÓN. LO. En cumplimiento con las disposiciones vigentes establecidas en el. O. Reglamento de Grados y Títulos de la Universidad Nacional de Trujillo, someto a. y Klebsiella pneumoniae productoras de. AS. de Pseudomonas aeruginosa. BI. vuestra consideración y elevado criterio la tesis titulada: “Frecuencia de cultivos. CI. metalobetalactamasas de origen hospitalario”, con el propósito de obtener el. CI EN. Título Profesional de Biólogo-Microbiólogo.. DE. Esperando que el jurado se sirva calificar este trabajo según su criterio. IO. TE. CA. establecido y, que el presente sea merecedor de vuestra aprobación.. BI. BL. Trujillo, Marzo de 2018.. vii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(8) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. IC. AS. DEDICATORIA. G. A DIOS, y mis pequeños hijos Maria. Augusto Saldaña Polo que son mi fuerza y. O. motivo para superarme cada día y así. LO. Paula Saldaña Polo y Elias Santiago. A mis madre querida Paulina Tacanga Ruiz por ser una. CI EN. CI. AS. un futuro mejor.. BI. poder luchar para que la vida nos depare. Marino Polo por mostrarme el camino a la superación.. BI. BL. IO. TE. CA. incondicional.. DE. ayuda constante e. A mis padre Santiago. A mi amado esposo Miguel Saldaña Cabrera por su amor, paciencia, sacrificio, esfuerzo, consejos y por creer en mí.. viii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(9) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AGRADECIMIENTOS Al Dr. Pedro Mercado Martínez, por haberme dado la oportunidad de. AS. ser parte de su equipo como tesista y por brindarme sus conocimientos,. IC. consejos, apoyo y confianza.. G. Al Biólogo - Microbiólogo Dr. Percy Asmat Marrufo, Jefe de. LO. laboratorio Referencial de Trujillo por el apoyo incondicional en la ejecución. BI. O. del presente informe.. Al Tecnico de Laboratorio Sra. Olga Rubiños del laboratorio del por el apoyo. CI EN. CI. durante la realización de la tesis.. AS. Referencial-Trujillo, encargada del área de Microbiología. Al laboratorio de Referencia Regional en Salud Publica, por las facilidades brindadas para que la presente tesis se realice en sus instalaciones,. BI. BL. IO. TE. CA. DE. así como por los materiales proporcionados.. ix Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(10) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. RESUMEN El objetivo de este trabajo fue determinar la Frecuencia de. AS. cultivos de Pseudomonas aeruginosa y Klebsiella pneumoniae productoras de metalobetalactamasas de origen hospitalario, para el. IC. estudio se analizaron 30 cultivos de ambas especies de. LO. G. microorganismos. Para la detección de metalobetalactamasas se utilizó el Método preliminar de difusión en disco de Kirby-Bauer y. BI. O. de los resultados positivos obtenidos se realizó el Test. AS. Confirmatorio sinergia de doble difusión disco. La frecuencia de cultivos productoras de metalobetalactamasas es 13.3 % y 3.3% Pseudomonas. aeruginosa. CI. para. y. Klebsiella. pneumoniae. CI EN. respectivamente. No encontrando significancia en la producción de metalobetalactamasas entre la misma especie de Pseudomonas. DE. aeruginosa y Klebsiella pneumoniae.. Metalobetalactamasas. BI. BL. IO. TE. CA. Palabras clave: Pseudomonas aeruginosa, Klebsiella pneumoniae,. x Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(11) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. ABSTRACT. AS. The objective of this work was to determine the frequency of crops of Pseudomonas aeruginosa and Klebsiella pneumoniae producers. IC. of metallobetalactamases of hospital origin, for the study 30 crops of. LO. G. both species of microorganisms were analyzed. For the detection of metallobetalactamases, the Kirby-Bauer preliminary disc diffusion. BI. O. method was used and the positive double-disc synergy confirmatory test. AS. was obtained. The frequency of metalobetalactamase producing crops 13.3% and 3.3% for Pseudomonas aeruginosa and Klebsiella. CI. pneumoniae respectively. Not Finding significance in the production of. CI EN. metallobetalactamases between the same species of Pseudomonas. DE. aeruginosa and Klebsiella pneumoniae.. Metalobetalactamasas. BI. BL. IO. TE. CA. Key words: Pseudomonas aeruginosa, Klebsiella pneumoniae,. xi Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(12) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. ÍNDICE. ii. Autoridades de la Facultad de Ciencias Biológicas.......................................... iii. Miembros del Jurado Dictaminador................................................................ iv. G. IC. AS. Autoridades de la Universidad Nacional de Trujillo....................................... v. De la Aprobación….......................................................................................... vi. BI. O. LO. Del Asesor........................................................................................................ AS. Presentación..................................................................................................... CI. Dedicatoria....................................................................................................... vii viii. ix. Resumen........................................................................................................... x. DE. CI EN. Agradecimiento................................................................................................ xi. Indice............................................................................................................ xii. TE. CA. Abstract............................................................................................................ IO. I. Introducción.................................................................................................. 7. 2.1. Material........................................................................................... 7. 2.1.1Material biológico.................................................................... 7. BI. BL. II. Materiales y Método.................................................................................... 1. xii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(13) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 7. 2.2.1. Reactivación de cultivos…….….............................................. 7. 2.2.2. Siembra en agar Cetrimide y Agar Mac Conkey..................... 7. G. IC. AS. 2.2. Procedimiento.................................................................................... LO. 2.2.3. Preparación del inoculo……..................................................... 7. O. 2.2.4. Determinación de cultivos productores de. 8. BI. metalobetalactamasas………………………………………….. AS. 2.2.4.1. Test de Tamizaje: Método de difusión en disco de. CI. Kirby-Bauer para determinar Carbapenemasas……..... 8 9 10. CI EN. 2.2.4.2. Test Confirmatorio: Método de doble difusión disco para determinar Metalobetalactamasas: Clase B de Ambler.. DE. 2.2.5. Análisis estadístico.................................................................... CA. III. Resultados....................................................................................................... TE. IV. Discusión......................................................................................................... IO. V. Enunciado Resumen…………………………………………………………. 11 13 18 19. VII. Referencias Bibliográficas............................................................................. 20. VIII. Anexos.......................................................................................................... 28. BI. BL. VI. Recomendaciones........................................................................................... xiii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(14) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Anexo 1. Evaluación de los datos obtenidos de los cultivos de Pseudomonas aeruginosa productoras de carbapenemasas y. AS. metalobetalactamasas obtenidas de origen hospitalario.. pneumoniae. productoras. de. IC. Anexo 2. Evaluación de los datos obtenidos de los cultivos Klebsiella carbapenemasas. y. LO. G. metalobetalactamasas obtenidas de origen hospitalario.. .Anexo 3. Cultivos de Pseudomonas aeruginosa (A) y Klebsiella. O. pneumoniae (B), donde se observan los halos de inhibición que. BI. se produce entre los discos de antibióticos para el tamizaje. AS. presuntivo de carbapenemasas.. Anexo 4. Cultivos de Pseudomonas aeruginosa (A) y Klebsiella. CI. pneumoniae (B), donde se observa el sinergismo (distorsión de. CI EN. los halos de inhibición) que se produce entre los discos de meropenem e imipenem con el disco central de EDTA, confirmación de la presencia de Metalobetalactamasas.. DE. Anexo 5. Análisis estadístico prueba Z para comparar proporciones. CA. obtenidas en la producción de metalobetalactamasas por cultivos de Pseudomonas aeruginosa.. BI. BL. IO. TE. Anexo 6. Análisis estadístico prueba Z para comparar proporciones obtenidas en la producción de metalobetalactamasas por cultivos de Klebsiella pneumoniae.. Anexo 7. Análisis estadístico prueba Z para comparar proporciones obtenidas en la producción de metalobetalactamasas por cultivos de Klebsiella pneumoniae.. xiv Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(15) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. I. INTRODUCCION. Uno de los principales problemas que han centrado la atención a nivel. AS. académico, científico, de las autoridades sanitarias y de la comunidad en. IC. general, son las infecciones producidas por bacterias resistentes a los. G. carbapenémicos, las cuales están emergiendo como importantes patógenos. LO. en los centros de cuidado de salud. Debido principalmente porque los. O. antibióticos de elección para el tratamiento de las infecciones producidas. BI. por Gram negativos; son precisamente betalactámicos de amplio espectro. AS. tales como cefalosporinas y los carbapenémicos (imipenem y meropenem. CI. principalmente).(Rodríguez;2004). CI EN. Los betalactámicos son un amplio grupo de antibióticos, cuya característica compartida es contener en su estructura molecular un anillo. DE. común de cuatro carbonos denominado anillo betalactámico, son los más utilizada en la clínica, de primera línea en el uso rutinario de todas las. CA. especialidades médicas, de acción bactericida lenta, dependiente del. TE. tiempo, con escasa toxicidad y amplio margen terapéutico. La progresiva aparición de resistencia a los betalactámicos está limitando su empleo. BI. BL. IO. empírico y ha disminuido su eficacia en situaciones clínicas.(Núñez, et al;2006). La estructura química general de betalactámicos corresponde a un anillo betalactámico unido a un segundo anillo que varía en cada grupo: anillo tiazolidínico para penicilinas; anillo dihidrotiazona para cefalosporinas; anillo de cinco carbonos para carbapenems y Los monobactámicos poseen. 1 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(16) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. sólo el anillo betalactámico. Todos los betalactámicos poseen al menos una cadena lateral que justifica las diferencias dentro de cada grupo. Las cefalosporinas. y los carbapenems tienen dos cadenas laterales.. AS. (Gayosso;2012). IC. Los carbapenémicos surgen tras la necesidad de buscar inhibidores de la. LO. G. síntesis de peptidoglucano. Fue a finales de la década de los 70 que Alberts-Schonberg y colaboradores, descubrieron la estructura de la. BI. O. tienamicina, a partir de la cual surge el imipenem, que es el prototipo de este grupo. Se trata de un antibiótico de amplio espectro, que se produce a. AS. partir del microorganismo Streptomyces cattleyay difiere de los demás. CI. betalactámicos en la sustitución de un átomo de azufre por uno de carbono. CI EN. en la posición uno del anillo pentámico; de ahí el nombre de carbapenémico. (Gayosso;2012). DE. Los carbapenemes consiguen entrar fácil y rápidamente en las bacterias gram negativas gracias a que su estructura y su pequeño tamaño les. CA. permiten atravesar a través de las porinas de la membrana externa. El. TE. imipenem emplea exclusivamente la vía de la OprD (antes llamada porina. IO. D2) en Pseudomonas aeruginosa, mientras que meropenem emplea estas y. BI. BL. otras porinas. La diana principal en los bacilos Gram negativos tanto del imipenem como de meropenem, es la PBP-2 (Proteínas fijadoras de penicilinas), aunque también se unen a la PBP-1. (Gómez;2011) Las dos β-lactamasas (BL) que con mayor frecuencia pueden llevar a resistencia a los carbapenems son las β-lactamasas tipo AmpC y tipo. 2 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(17) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. carbapenemasas. Estas últimas se caracterizan por producir resistencia a todos los β-lactamico, incluyendo los. carbapenems, pero presentan. susceptibilidad variable al aztreonam (Perozo et al; 2012 y Mendes et. AS. al;2006).. IC. Las β-lactamasas descritas en la especie e involucradas en la resistencia a. LO. G. carbapenems son metalobetalactamasas (MBL) pertenecientes a las familias imipenem (IMP) y verona integron encoded metallobetalactamase. BI. O. (VIM), y las enzimas Sao Paulo metalobetalactamasa (SPM-1), GIM-1, SeoulImipenemase (SIM-1), y por otro las serino-β-lactamasas de clase A. AS. de Ambler GES-2 y Klebsiella. pneumoniae carbapenemasas (KPC-2).. CI EN. CI. (Ingold, et al;2011 y Gómez, et al;2005). Las MBL, son enzimas que pertenecen a la clase B de Ambler y al grupo 3 según la clasificación funcional de Bush‐Jacoby‐Medeiros. Se. DE. transfieren fácilmente entre diferentes microrganismos, porque se encuentran ubicadas en genes cassetes, localizados principalmente en. CA. integrones tipo uno, así como en plásmidos o transposones, también. TE. hidrolizan. una gran variedad de antibióticos β‐lactámicos, incluyendo. IO. penicilinas, cefalosporinas (1ª, 2ª, 3ª y 4ª generación) y carbapenemas, no. BI. BL. actúan, in vitro, sobre aztreonam.(Días;2008 y Jimenoa et al;2011). La resistencia a los antimicrobianos es uno de los principales problemas de la terapéutica actual. Las principales especies bacterianas que más preocupa en este contexto son Pseudomonas aeruginosa y Klebsiella pneumoniae como causa de infección intrahospitalaria y. 3 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(18) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. adquirida en la comunidad. Estas presentan diversos mecanismos de resistencia así como una elevada capacidad para incorporar nuevas formas de resistencia mediante mutaciones en determinados genes o por la. AS. adquisición horizontal de carbapenemasas. (Livermore;2002 y Pliego-. IC. Castañeda, et al;2005).. LO. G. La resistencia bacteriana se hallan muy ligadas a las infecciones intrahospitalarias, en pacientes críticos con compromiso de la inmunidad,. O. con exposición a cirugías durante la hospitalización y con exposición a. BI. métodos invasivos diagnósticos terapéuticos. También se producen por un. AS. débil sistema de control de las infecciones intrahospitalarias.(Bueno;2010). Intrahospitalarias. (IIH),. CI EN. Infecciones. CI. P. aeruginosa es uno de los principales agentes etiológicos de las especialmente. en. pacientes. inmunosuprimidos, alteraciones de las barreras físicas (quemaduras,. DE. cirugía, lesiones oculares, procedimientos invasivos) y las enfermedades subyacentes,. como. fibrosis. quística. y. diabetes. mellitus.. Los. CA. carbapenémicos imipenem y meropenem son los fármacos de elección. TE. para tratamiento de las infecciones causadas por Pseudomonas aeruginosa.. IO. Sin embargo, la frecuencia de aislamientos de cepas resistentes a estos. BI. BL. medicamentos se ha incrementado considerablemente en todo el mundo y en América Latina, incluyendo Perú donde la prevalencia de infecciones por Pseudomonas aeruginosa resistente a los carbapenémicos ha crecido. más rápidamente que en otras regiones.(Rocha, et al;2015 y Luján;2014). La resistencia a carbapenems en Pseudomonas aeruginosa puede ser el resultado de la sobre-expresión de sistemas de eflujo, de la. 4 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(19) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. impermeabilidad de la membrana externa, de la expresión de β-lactamasas o de una combinación de estos mecanismos. Se ha reportado principalmente tres clases de betalactamasas que hidrolizan carbapenemes,. AS. llamadas serin betalactamasas de clase A, las metalobetalactamasas. IC. pertenecientes a la clase B y las D donde se encuentran las Oxacilinasas.. G. En las de clase B las enzimas principales son las IMP y VIM que tienen un. LO. perfil hidrolítico que incluye todos los antibióticos betalactámicos con la. O. excepción del aztreonam y no se inhiben por el ácido clavulánico,. BI. sulbactan o tazobactam. Sin embargo, se inhiben por agentes quelantes de. AS. cationes divalentes como el EDTA, compuestos tiólicos como el ácido 2-. CI EN. García, et al;2012). CI. mercaptopropiónico, o el ácido dipicolínico. (Melgarejo, et al;2013 y. Otro de los aspectos relevantes para centrar esfuerzos en la detección. DE. de carbapenemasas, es que su presencia se ha asociado con incremento en la morbilidad y la mortalidad, particularmente de los pacientes infectados. CA. por Klebsiella pneumoniae, el cual puede ser el microorganismo causal del. TE. 20% al 30% de los casos de neumonías asociadas al cuidado de la salud, y. IO. se encuentra entre los tres primeros patógenos aislados en bacteriemias. BI. BL. intrahospitalarias por Gram negativos con tasas de mortalidad de más del 50%.(Cuervo, et al;2014 y Tafur, et al; 2008). Las. infecciones. intrahospitalarias. se. han. incrementado. principalmente por Pseudomonas aeruginosa y Klebsiella pneumoniae los cuales tiene asociación con procesos infecciosos graves cuyo tratamiento tiene alta probabilidad de presentar resistencia a un amplio rango de 5 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(20) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. agentes antimicrobianos incluyendo a los carbapenemes(Clazada;2012), los cuales son los antibióticos de primera línea recomendados para infecciones graves hospitalarias o de la comunidad, causadas por multiresistentes productoras de MBL; con frecuencia. AS. microorganismo. IC. estos antibióticos son la única opción terapéutica disponible, por lo que es. G. inquietante que la susceptibilidad a carbapenémicos ya no esté garantizada.. LO. En la actualidad existen reportes de microorganismos con resistencia a. O. carbapenémicos, comprometiendo seriamente el uso clínico de estos. BI. antibióticos, siendo necesario la obtención de información de esta. AS. resistencia para la toma de medidas de prevención de futuras infección. CI. intrahospitalarias. Por tal este trabajo tiene por objetivo determinar la. CI EN. Frecuencia de cultivos de Pseudomonas aeruginosas y Klebsiella pneumoniae productoras de Carbapenemasas y Metalobetalactamasas de. BI. BL. IO. TE. CA. DE. origen hospitalario.. 6 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(21) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. II. MATERIAL Y METODOS. 2.1. MATERIAL. AS. 2.1.1. Material biológico. pneumoniae,. proporcionadas. por. Laboratorio. LO. Referencial de la Libertad. (Anexo N° 01 y 02). el. G. Klebsiella. IC. Se utilizaron 30 cultivos de Pseudomonas aeruginosa y 30cultivos. BI. 2.2.1. Reactivación de cultivos. O. 2.2. PROCEDIMIENTO. AS. Los cultivos de Pseudomonas aeruginosay Klebsiella pneumoniae,. CI. fueron inoculadas en Caldo Infusión Cerebro Corazón (BHI) e. CI EN. incubadas a 35 °C por 18 horas.. 2.2.2. Siembra en Agar Cetrimide y Agar Mac Conkey. DE. Del crecimiento en caldo BHI se sembraron por agotamiento en. CA. medio sólido Agar Cetrimide para Pseudomonas aeruginosa y Agar Mac Conkey para Klebsiella pneumoniae, se incubó a 35 °C. TE. por 24 horas. (Anexo N°03). BI. BL. IO. 2.2.3. Preparación del inoculo Se preparó dos suspensiones una de Pseudomonas aeruginosa aisladas de Agar Cetrimidey otra de. Klebsiella pneumoniae. aisladas de Agar Mac Conkey, en Solución Salina Fisiológica y se ajustó la turbidez al tubo 0.5 de la escala de Mc. Farland(1.5x108 UFC/mL). (Cavalieri y Col; 2005).. 7 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(22) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 2.2.4.Determinación. de. cultivos. productores. de. metalobetalactamasas. AS. 2.2.4.1. Test de Tamizaje: Método de difusión en disco de Kirby-. IC. Bauer para determinar Carbapenemasas.. LO. G. Se preparó agar Mueller Hintón (MH), siguiendo la Norma Técnica N° 30 del Manual de Procedimientos para la Prueba de. BI. O. Susceptibilidad Antimicrobiana por el Método de Difusión en Disco del Instituto Nacional de Salud (Sacsaquispe y. AS. Velasquez;2002)(altura 4mm y pH: 7.2 a 7.4) y las. CI. especificaciones del fabricante. En las Placas de MH se realizó. CI EN. siembra en superficie utilizando 0.5 mL del inoculo y se homogenizo utilizando un asa Digralski. Se dejó 5 minutos a. DE. temperatura ambiente. Luego con la ayuda de una pinza estéril se colocó los discos individuales de imipenem(IM) 10 ug, 10. ug,. cefepime(CFP). 30. ug. y. CA. meropenem(MEM). BI. BL. IO. TE. aztreonam(AZT) 30 ug sobre la superficie del agar. Se incubó por 24 horas a 35 °C, después del cual se observó la presencia de halo de inhibición alrededor de cada uno de los discos y se midió su diámetro.(Galani, et al;2008). El análisis de los resultados se realizó siguiendo los criterios del Protocolo de Trabajo Red Whonet Argentina. (Whonet;2016).(Anexo N°03) Lectura: Se considerará aquellos diámetros de los halos ≤22 mm. para IMI como screening de presencia de carbapenemasas, 8 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(23) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. según. Protocolo. de. Trabajo. Red. Whonet. Argentina.. (Whonet;2016).. AS. 2.2.4.2. Test Confirmatorio: Método de doble difusión disco para. IC. determinar Metalobetalactamasas: Clase B de Ambler. G. Del Test de Tamizaje se seleccionó aquellos cultivos. LO. productores de carbapenemasas y se procedió con el test. BI. Argentina.(Whonet;2016).. O. confirmatorio según Protocolo de Trabajo Red Whonet. AS. De cada cultivo productor de carbapenemasas se. CI. preparó la suspensión en solución Salina Fisiológica. CI EN. ajustando la turbidez al tubo 0.5 de la escala de Mc. Farland. Después de 15 minutos se sembró en la placa que contenga MH con un hisopo estéril estriando en tres. DE. direcciones y por último se pasó tres veces el hisopo por el. CA. perímetro de la superficie del medio, dejando secar por 5. BI. BL. IO. TE. minutos a temperatura ambiente. (Rodríguez;2004). Luego se colocó un disco de EDTA 750 ug en el centro de la placa de MH inoculada con el cultivo de P. aeruginosa a evaluar. A una distancia de 15 mm entre borde y borde se colocó los discos de imipenem y meropenem contrapuestos al disco de EDTA; además se incluyó el disco de aztreonam. Finalmente se incubó las placas a 37°C por. 9 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(24) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 24 horas.(Galani, et al; 2008 y Guevara, et al;2010).(Anexo N°04).. AS. Lectura: La sinergia o deformación del halo de los antibióticos hacia el EDTA, se considerará como productor metalobetalactamasas,. estos. datos. servirán. IC. de. para. LO. G. evaluación de la prueba Z, de lo contrario se informará como no productor de estas enzimas. (Galani, et al; 2008 y. BI. O. Guevara, et al;2010).(Anexo N°04). AS. 2.2.5. Análisis estadístico. CI. Se elaboró una base de datos en una hoja de cálculo en Excel. evaluados. CI EN. (Anexo N°01 y 02) con los resultados obtenidos de los cultivos para. la. determinación. de. producción. de. metalobetalactamasas. Se utilizó la prueba Z para establecer si es. DE. significativa la producción de metalobetalactamasas entre la misma y. K. pneumoniae (Anexo N°05 y. CA. especie de P. aeruginosa. BI. BL. IO. TE. 06)(Ramírez, et al;2015).. 10 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(25) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. III. RESULTADOS. AS. Tabla N°1. Muestra los cultivos de Pseudomonas aeruginosa y. presentan. una. frecuencia. de. 13.3%. y. 3.3%. G. (MBL). IC. Klebsiella pneumoniae productores de metalobetalactamasas. LO. respectivamente, aislados de origen hospitalario; estadísticamente. O. no significativo en la de producción de metalobetalactamasas entre. BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI EN. CI. AS. BI. la misma especies de P. aeruginosa y K. pneumoniae.. 11 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(26) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Tabla N°1. Frecuencia de cultivos de Pseudomonasa aeruginosa y Klebsiella pneumoniae productoras de metalobetalactamasas de origen. N° de cultivos. Metalobetalactamasas (MBL) (+). Klebsiella pneumoniae. 30. 4. O. 30. % 13.3. 1. 3.3. CI EN. CI. AS. BI. Pseudomonas aeruginosa. LO. N. G. Microorganismo. IC. Resultado. AS. hospitalario. BI. BL. IO. TE. CA. DE. p>0.05. 12 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(27) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. IV.DISCUSIÓN En la última década, habido una preocupación creciente acerca de la diseminación intrahospitalaria e interhospitalaria de bacterias Gram. AS. negativos productoras de metalobetalactamasas (MBL), lo que lleva a. IC. brotes difíciles de controlar. Particularmente P. aeruginosa y K.. G. pneumoniae que son patógenos nosocomial que con frecuencia está. LO. implicado en brotes hospitalarios. Los mecanismos de resistencia. O. bacteriana son cada vez más complejos y variados, dando como resultado. BI. el surgimiento de nueva resistencia antibiótica el cual se está analizando. AS. con gran interés en muchos países.(Poulou, et al;2010).. CI. La frecuencia P. aeruginosa y K. pneumoniae productoras de. CI EN. metalobetalactamasas fue de 13.3% y3.3% respectivamente, según Tabla N°1, encontrando que no hay. significancia en la. producción de. DE. metalobetalactamasas entre las mismas especies de P. aeruginosa y K. pneumoniae (Anexo N°05 y 06). Estos porcentaje se asemeja a los. CA. resultados obtenidos por (Riera, et al; 2011) en España, quien reporta un. TE. 6.9%. Igualmente alarmantes son los datos de Extremo Oriente y América. IO. Latina; en un estudio multicéntrico en Corea reportaron un 10.8%.. BI. BL. (Nicolau, et al; 2010). Así también (Jena, et al; 2015) reporto un 11.70%. En un estudio realizado por (Díaz; 2008) detectó la enzima MBLs en cepas peruanas de P. aeruginosa aisladas de muestras biológicas de pacientes del hospital Nacional Guillermo Almenara Irigoyen-ESSALUDy. estableció una incidencia del 6.99 %, la cual es inferior a las reportadas. 13 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(28) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. por otros países, por lo cual se debe hacer estudios multicéntrico para establecer la incidencia.. AS. P. aeruginosa fue el microorganismo con más frecuencia como productores de MBL, como lo muestra la Tabla N°1. Esto puede estar. IC. relacionado con las enzimas β-lactamasas exógenas, que pueden. LO. G. diseminarse por transferencia horizontal genética, siendo de esta manera uno de los mayores contribuyentes de la resistencia antibiótica, generando. BI. O. una creciente amenaza endémica. Así los mecanismos de resistencia mediados por la mutación en P. aeruginosa, conducen a la inactivación del. AS. carbapenem porin OprD, la hiperproducción de la cefalosporinas. CI. cromosómica AmpC o la regulación positiva de los sistemas de eflujo, se. CI EN. seleccionan con mayor frecuencia durante el tratamiento, lo que lleva al fracaso de la terapia antimicrobiana.(Moya, et al; 2017).. DE. P. aeruginosa y K. Pneumoniae productoras de carbapenemasas asiladas de muestras hospitalarias fueron 43.3% y 6.7% (Anexo N°07). CA. respectivamnente. Este valor se ha incrementado según lo que reporta. TE. (Bratu et al; 2001) que realizaron un estudio en el que evaluaron 602. IO. aislados de K. pneumoniae, de los cuales un 3.3% fueron productores de. BI. BL. carbapenemasas. Según (Ruiz; 2016), los genes que codifican las carbapenemasas con mayor frecuencia en las muestras hospitalarias y epidemiológica tienen en su mayoría localización. plasmídica, y se. transfieren y expresan con facilidad en diversas especies de bacilos gramnegativos. Por estas razones y debido a la rápida diseminación producida a nivel mundial durante los últimos años, se han convertido en 14 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(29) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. un problema para los sistemas de salud muy trascendente que tiene especial repercusión a nivel hospitalario.. AS. Las muestras biológicas sirven de información sobre las características genéticas del individuo y sirven para brindar información microbiológica.. IC. Las muestras de mayor frecuencia que se observan según el (Anexo N°01. LO. G. y 02) fue secreción traqueal para P. aeruginosa y secreción bronquial para K. pneumoniae. Según (Mollin; 2016) indica que las muestras biológicas. BI. O. de las que se aislaron P. aeruginosa con probable MBLs fue de secreción traqueal 28% siendo los más frecuentes, correspondiendo al 61% de los. AS. aislamientos de muestras de pacientes del sexo masculino de los cuales el. CI. 95% provenía de internados adultos de diferentes salas: UCIA (38%),. CI EN. Cátedra de Clínica Médica (28%), Urgencias Adultos (18%), Urología (5%), Traumatología (5%) y el 5% provenía de consultorio externo.. DE. La combinación de mecanismos como la conversión de cepas salvajes susceptibles durante el tratamiento (resistencia adquirida); incremento del. CA. desarrollo de la resistencia en cepas resisten a drogas debido a una. TE. quimioterapia inapropiada (resistencia amplificada) y transmisión de cepas. IO. mutantes a personas susceptibles (resistencia transmitida). (Mendoza et al;. BI. BL. 2008), esto ha llevado a la aparición multidrogo resistente (MDR) o incluso extensamente resistentes a los medicamentos (XDR). Además, estudios recientes han revelado que los clones de P. aeruginosa MDR / XDR (ST111, ST175 y ST235) se han diseminado en múltiples instituciones en todo el mundo, y por esa razón, se han clasificado como clones epidémicos de alto riesgo. (Moya, et al; 2017). 15. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(30) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. En un estudio realizado por (Pfennigwerth, et al; 2017) caracterizo un fenotipo de enzima MBL e identifico una subclase B1 denominándola HMB-1, la cual subraya la propagación y diversificación de las. AS. carbapenemasas en patógenos Gram-negativos y especialmente en P.. obtenidos del test de tamizaje de cultivos presuntivos de. G. inhibición. IC. aeruginosa. En el Anexo N°01 se muestra los diámetros de los halos de. LO. carbapenemasas de los cuales P. aeruginosa aislada de secreción traqueal,. O. presento un menor diámetro de halo de inhibición que fue 15mm para. BI. Imipenem y 17mm para Meropenem; según (Whonet; 2016) se considera. AS. un diámetro ≤ 22mm para Imipenem, productoras presuntivas de. CI. carbapenemasas, siendo trece cultivos positivos para el test de. CI EN. carbapenemasas.. Para K. pneumoniae la frecuencia de producción de MBL solo fue 3.3%. DE. según Tabla N°1, apartir de una muestras de secreción bronquial (Tabla N°1). En Perú no se han realizado estudios de frecuencia de K.. CA. pneumoniae productoras de metalobetalactamasas; sin embargo hay. TE. estudios realizados por (Dong, et al; 2017) que observaron altas. IO. frecuencias de resistencias múltiples a antibióticos en las cepas de K.. BI. BL. pneumoniae no susceptibles a Carbapenem aisladas del Hospital Infantil de Beijing y concluyeron que la producción de metalobetalactamasas IMP-4 y NDM-1 es un mecanismo importante para carbapenem no susceptible en K. pneumoniae. K. pneumoniae, presento un diámetro de halo de resistencia de 22mm para Imipenem y 21mm para Meropenem el cual conlleva a plantearse como. 16 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(31) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. presuntiva productora de carbapenemasa, según (Whonet;2016) en el que considera un diámetro ≤22mm para carbapenemasas.(Anexo N°02). Varios estudios demuestran que la transferencia horizontal de genes a través de plásmidos conjugativos y transposones contribuye a la propagación de la. AS. resistencia a los carbapenérmicos. (Rodríguez;2004). Por lo cual estudios. realizado por (Eposito, et al;2017) concluyeron que la resistencia a. IC. imipenem depende principalmente de la expresión de carbapenemasas. que la resistencia a meropenem puede ser aportada por. LO. IM-1.mientras. G. VIM-1 llevada a cabo por plásmido pIncACKP4898, que porta el gen blaV. O. mecanismos de resistencia adicionales en aislamientos de K. pneumoniae,. BI. como permeabilidad alterada debido a cambios en la expresión de porinas o sistemas de eflujo.. AS. La detección de microorganismos productores de carbapenemasas en el. CI. laboratorio clínico es de gran importancia para la determinación de esquemas terapéuticos apropiados y la implementación de medidas de. CI EN. control de infecciones.(Pasteran, et al;2011).La investigación de la frecuencia de P. aeruginosa y K. pneumoniae productoras de MBLs contribuye al buen. limita el fenómeno de la resistencia mediada por ellas,. DE. también. uso terapéutico de los betalactamicos así como. considerando los resultados encontrados en el presente trabajo, es. CA. necesario que se realicen estudios en el Perú, para prevenir el incremento de cultivos productores de metalobetalactamasas principalmente a nivel. TE. hospitalario y tener un control de estas enzimas en el ámbito de la salud. IO. publica donde son de mayor impacto por los patrones de resistencia que. carbapenemicos.. BI. BL. han venido cambiando con el uso inmensurable de los antibióticos. 17 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(32) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. V. ENUNCIADO RESUMEN La. frecuencia. de. Pseudomonas. aeruginosa. y. Klebsiella. pneumoniae productoras de metalobetalactamas aisladas de origen. AS. hospitalario es 13.33% y 3.33% respectivamente; no encontrando. IC. significancia en la producción de metalobetalactamasas entre la. G. misma especie de Pseudomonas aeruginosa y de Klebsiella. BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI EN. CI. AS. BI. O. LO. pneumoniae.. 18 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(33) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. VI. RECOMENDACIONES. Sería adecuado realizar trabajos de investigación con un mayor. AS. número de microorganismo Pseudomonas aeruginosa y Klebsiella. IC. pneumoniae.. G. Pueden aplicarse otras pruebas como concentración mínima. LO. inhibitoria (CMI) para evaluar la resistencia a carbapenems por. O. Pseudomonas aeruginosa y Klebsiella pneumoniae productoras de. AS. BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI EN. CI. molecular.. BI. enzimas tipo metalobetalactamasas y pruebas de biología. 19 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(34) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. VII. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS . Rodríguez C.(2004).Caracterización genética de aislamientos de. AS. Klebsiella pneumoniae, resistentes a carbapenémicos, remitidos al grupo de resistencia bacteriana de Bogotá Grebo por hospitales del. IC. distrito, en un periodo de 3 años.(Tesis post-grado).Universidad. LO. . G. Nacional de Colombia.Colombia. BI. Betalactámicos. Medicrit,3(6):132-135.. O. Núñez B, Morales R, Rivera M y González G.(2006).Nuevos. . AS. Gayosso C.(2012).Indicaciones Terapéuticas de los Antibióticos betalactámicos.(Tesis pre-grado).Universidad autónoma del estado de. CI. México.Toluxa,México. . CI EN. Gómez A.(2011).Presencia de Carbapenemasas en Enterobacterias de muestras recolectadas de nueve hospitales de la ciudad de Quito, de. DE. mayo del 2009 a noviembre del 2010.(Tesis pre-grado).Pontificia Universidad católica del Ecuador.Quito,Ecuador. Perozo M, Castellano G, Chavez K,. CA. . Ling T y Arraiz N.. TE. (2012).Detección fenotípica de Metalobetalactamasas en aislados. IO. clínicos de Pseudomonas aeruginosa.Kasmera.40(2),113-121.. BI. BL. . Mendes R, Castanheira M, Campos A y Gales A. (2006).Metalo-ßlactamases. J Bras PatholMedLab,42(2),103-113.. . Ingold A, Castro M, Nabón a, Borthagara G y. Márquez C.. (2011).Detección del gen codificante de la metalo-β-lactamasa VIM-2 en un integrón de clase 1 asociado con el gen blaCTX-M-2 en un aislamiento. clínico. de Pseudomonas. aeruginosa en. el. 20 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

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(38) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. . Poulou A, Spanakis N,. Pournaras S, Pitiriga V, Ranellou K,. Markou F y Tsakris A. (2010).Recurrent healthcare-associated community-onset infections due to Klebsiella pneumoniae producing. AS. VIM-1 metallo-β-lactamase. Journal of Antimicrobial Chemotherapy,. IC. 65(12),2538–2542. . y Oliver A. (2011). Pseudomonas aeruginosa. LO. C , Cantón R. G. Riera E , Cabot G, Mulet X, García-Castillo M , del Campo R , Juan. O. carbapenem resistance mechanisms in Spain: impact on the activity of. BI. imipenem, meropenem and doripenem. J Antimicrob Chemother,. . AS. 66(9),2022-7.. CI. Nicolau C y Oliver A.(2010). Carbapenemasas en especies del género. CI EN. Pseudomonas. Enferm Infecc Microbiol Clin, 28(1),19-28. . Jena J, Debata N, Sahoo R y Subudhi E. (2015).Phylo genetic study of metallo-β-lactamasas producing multidrug resistant Pseudomonas. . T.. (2008).Pseudomonas. aeruginosa. resistentes. a. los. CA. Díaz. DE. aeruginosa isolates from burn patients. Burns, 41(8), 1758-1763.. TE. carbapenemas en un hospital nacional, en los meses de enero a. BI. BL. IO. octubre del año 2008.(Tesis pre-grado).Universidad Nacional Mayor. . de San Marcos, Lima, Perú. Moya B, Barcelo I, Bhagwat S, Patel M, Bou G, Papp-Wallace K, Bonomo R y Oliver A. (2017). WCK 5107 (Zidebactam) and WCK 5153 Are Novel Inhibitors of PBP2 Showing Potent “β-Lactam Enhancer” Activity against Pseudomonas aeruginosa, Including. 24 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(39) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Multidrug-Resistant. Metallo-β-Lactamase-Producing. High-Risk. Clones. Antimicrob Agents Chemother, 61(6),02529-16. . Pfennigwerth N, Lange F, Belmar C, Hentschke M, Sören G y Kaase. AS. M. (2017).Genetic and biochemical characterization of HMB-1, a. isolate.. Journal. Antimicrobial. LO. Chemotherapy,72(4),1068–1073. . of. G. aeruginosa Clinical. IC. novel subclass B1 Metallo-β-lactamase found in a Pseudomonas. O. Papagiannitsis C, Medvecky M, Chudejova K, Skalova A, Rotova. Characterization. of. AS. Molecular. BI. V, Spanelova P, Jakubu V, Zemlickova H y Hrabak J. (2017). Carbapenemase-Producing. CI. Pseudomonas aeruginosa of Czech Origin and Evidence for Clonal. CI EN. Spread of Extensively Resistant Sequence Type 357 Expressing IMP7 Metallo-β-Lactamase.Antimicrob Agents Chemother, 61(12),181117. . DE. Dong F, Lu J , Wang Y, Shi J, Zhen JH, Chu P, Zhen Y, Han SJ, Guo. CA. YL y Canción W.(2017). Una vigilancia quinquenal de Klebsiella. TE. pneumoniae productora de carbapenemasas en un hospital pediátrico. BI. BL. IO. en China revela un aumento del predominio de NDM-1.Biomed. . EnvironSci,30(8),562-569. Esposito. E, Gaiarsa. S,. M, Crivaro V, Bernardo M, Cuccurullo. Del M, Pennino. Franco F, Triassi. M,Marone P, Sassera D, y Zarrilli R. (2017). Un nuevo plásmido conjugativo del grupo IncA / C1, que codifica la metalo-betalactamasa VIM-1, media la adquisición de la resistencia al. 25 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(40) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. carbapenem en aislamientos de Klebsiella pneumoniae ST104 de neonatos en la unidad de cuidados intensivos del Hospital V. Monaldi de Nápoles. Front Microbiol, 8,2135. . AS. Pasteran F, Veliz O, Rapoport M, Guerriero L y Corso A. (2011).. IC. Sensitive and Specific Modified Hodge Test for KPC and Metallo-. G. Beta-Lactamase Detection in Pseudomonas aeruginosa by Use of a. LO. Novel Indicator Strain, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603.J Clin. O. Microbiol, 49(12),4301–4303. . BI. Wayne P. (2015). Clinical and Laboratory Standard Institute. AS. Performance Standards for Antimicrobial Susceptibility Testing;. CI. Twenty-Fourth Informational Supplement M100-S24.Clinical and. CI EN. Laboratory Standard Institute. . Bratu S, Landman D, Haag R, Recco R, Eramo A, Maqsood A y Quale J.(2005). Rapid spread of carbapenem-resistant Klebsiella. DE. pneumoniae in New York City: a new threat to our antibiotic. Molin Q. (2016).Detección Fenotípica de Carbapenemasas en. TE. . CA. armamentarium. Arch Intern Med,165,1430-1435.. Clínicas San Lorenzo de febrero a julio 2013. Mem. Inst Investig Cienc Salud,14(1),25-31.. BI. BL. IO. Pseudomonas aeruginosa en Pacientes que acudieron al Hospital de. 26 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(41) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. . Mendoza T y Gotuzzo H.(2008).Tuberculosis extremadamente resistente (TB-XDR), historia y situación actual. Acta Méd Peruana, 25(4). Ruiz. C.(2016).Características. microbiológicas. y. clínico-. AS. . en. el. contexto. de. un. brote. hospitalario.(tesis. G. oxa-48. IC. epidemiológicas de enterobacterias productoras de carbapenemasas. BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI EN. CI. AS. BI. O. LO. doctorado).Universidad Complutense de Madrid. Madrid,España.. 27 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(42) CI. AS. BI. O. LO. G. IC. AS. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI EN. ANEXO. 28 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(43) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. ANEXO N°01 Evaluación de los datos obtenidos de los cultivos de Pseudomonas aeruginosa productoras de carbapenemasas y metalobetalactamasas obtennidas de origen. IC. AS. hospitalario.. G LO O. IM. MEM. SINERGI. CFP. AZT. N. 14. 23. BI. MUESTRA. TIPO DE. ORIGEN. SEXO. EDAD. CODIGO LRR. Pseudomonas aeruginosa. A EDTA. F. IIH. Secreción. 2. RN. F. IIH. Sangre. 3. 28. A. IIH. Secreción. 32. 35. N. 19. 23. 33. N. 15. 23. 31. 29. N. 16. 24. Esputo. 29. 27. N. 16. 22. 61. F. IIH. 20. CI EN. traqueal. 4. 36. CI. traqueal. 33. AS. 85. 1. Secreción traqueal. 50. M. IIH. 6. 79. M. IIH. Esputo. 35. 33. N. 14. 23. 7. 79. F. IIH. Liquido de. 21. 21. N. 20. 23. 21. 19. N. 19. 24. DE. 5. CA. drenaje. 2. 10. Secreción traqueal. M. IIH. Sangre. 20. 22. N. 14. 24. 68. M. IIH. Orina. 20. 19. N. 14. 16. 18dias. M. IIH. Secreción. 32. 36. N. 14. 24. BL. 12. BI. IIH. 39. IO. 11. F. TE. 8. traqueal. 13. 23 días. M. IIH. Sangre. 31. 39. N. 14. 17. 14. 26 días. M. IIH. Sangre. 35. 33. N. 14. 23. 15. 68. M. IIH. Orina. 21. 19. N. 14. 23. 16. 29. F. IIH. Secreción. 29. 20. N. 16. 25. 21. 20. N. 14. 15. traqueal 17. 54. F. IIH. Secreción traqueal. 29 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(44) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 59. 18. F. IIH. Secreción. 36. 21. N. 15. 23. 18. 19. P. 14. 20. 31. 33. N. 16. 19. traqueal 72. 19. M. IIH. Secreción de herida. 24. 20. M. IIH. Secreción. AS. traqueal 59. F. IIH. Esputo. 33. 36. N. 14. 15. 22. 56. F. IIH. Secreción. 36. 39. N. 15. 23. 34. 38. N. IIH. Secreción. 14. 23. 14. 11. P. 14. 12. N. 20. 14. traqueal 21. M. IIH. Sangre. 18. 18. 25. 21. M. IIH. Secreción. 15. 17. IIH. Secreción traqueal. 90. 27. F. IIH. Secreción traqueal. M. IIH. Secreción. 32. 19. 20. N. 14. 15. 38. 36. N. 19. 14. 20. 19. P. 14. 19. 20. 20. N. 14. 16. CI EN. 33. 28. 33. AS. F. CI. 35. 26. P. O. 24. traqueal. G. M. LO. 79. 23. BI. herida. IC. 21. traqueal. 71. 29. M. IIH. Secreción traqueal. M. IIH. Secreción. DE. 55. 30. CA. traqueal. R: Resistente =14mm;I:insensible ≤15-17; S:Sensible>18 (Wayne;2015).. TE. Positivo carbapenemasas: IMP≤22mm (Wayne;2015).. N:negativo=no sinergismo IIH: intrahospitalario ;F: femenino; M: masculino; RN: recién nacido. BI. BL. IO. Positivo metalobetalactamasas= sinergismo (distorsión de los halos de inhibición). 30 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(45) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. ANEXO N°02 Evaluación de los datos obtenidos de los cultivos Klebsiella pneumoniae productoras de carbapenemasas y metalobetalactamasas obtenidas de origen. AS. hospitalario.. 46. IIH. Secreción bronquial. 3. 50. M. IIH. Secreción bronquial. 4. 85. F. IIH. Orina. 5. 32. F. IIH. Catéter. 6. 10. M. IIH. F. IIH. F. 84. 11. 20. 12. 36. N. 19. 23. 40. 36. N. 16. 24. 25. 22. N. 15. 17. 39. 36. N. 16. 22. Hemocultivo. 22. 38. N. 14. 15. Secreción bronquial. 35. 36. N. 16. 23. IIH. Sangre. 30. 30. N. 16. 23. IIH. Orina. 30. 31. N. 20. 23. 33. CI. CI EN. M. IIH. Secreción bronquial. 22. 21. P. 19. 16. M. IIH. Secr. Herida operatoria. 32. 33. N. 20. 25. 61. F. IIH. Orina. 39. 38. N. 16. 23. 55. F. IIH. Secreción bronquial. 36. 38. N. 15. 22. IO. 13. EDTA 23. DE. 10. M. AZT. 19. CA. 40. TE. 9. CFP. N. días. mes. SINER. 32. días. 1. O. 2. 33. BI. Secreción bronquial. AS. IIH. 8. MEM. GIA. 81. 14. IC G. IM. 1. 7. LO. MUESTRA. TIPO DE. ORIGEN. SEXO. EDAD. CODIGO LRR. Klebsiella pneumoniae. 65. M. IIH. Secreción bronquial. 35. 38. N. 15. 23. 15. 19. F. IIH. Secreción bronquial. 29. 35. N. 20. 24. 16. 18. F. IIH. Orina. 28. 34. N. 21. 23. 17. 62. F. IIH. Secreción bronquial. 34. 33. N. 20. 23. 18. 24. F. IIH. Orina. 29. 32. N. 20. 23. 19. 2M. F. IIH. Secreción bronquial. 36. 32. N. 21. 23. 20. 85. M. IIH. Orina. 31. 32. N. 21. 23. 21. RN. F. IIH. Sangre. 28. 34. N. 15. 22. 22. 23. F. IIH. Orina. 26. 35. N. 21. 22. BI. BL. 14. 31 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(46) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 7. F. IIH. Orina. 29. 31. N. 20. 22. 24. 64. F. IIH. Secreción bronquial. 29. 29. N. 21. 22. 25. 20. F. IIH. Secreción bronquial. 29. 29. N. 21. 22. 26. 14. M. IIH. Secreción bronquial. 33. 34. N. 16. 23. 27. 8. F. IIH. Secreción vaginal. 35. 36. N. 22. 23. 28. 72. F. IIH. Secreción vaginal. 24. 30. N. 14. 15. 29. 9. F. IIH. Secreción bronquial. 29. 33. N. 19. 23. 30. 25. F. IIH. Heces. 29. 31. N. 19. 23. IC. AS. 23. LO. Positivo carbapenemasas: IMP<22mm (Wayne;2015).. G. R: Resistente =14mm;I:insensible ≤15-17; S:Sensible>18 (Wayne;2015).. O. Positivo metalobetalactamasas= sinergismo (distorsión de los halos de inhibición). BI. N:negativo=no sinergismo. BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI EN. CI. AS. IIH: intrahospitalario ;F: femenino; M: masculino; RN: recién nacido. 32 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(47) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. LO. G. IC. AS. ANEXO N°03. DE. CI EN. CI. AS. BI. O. A. BI. BL. IO. TE. CA. B. Figura 1. Cultivos de Pseudomonas aeruginosa (A) y Klebsiella pneumoniae (B), donde se observan los halos de inhibición que se produce entre los discos de antibióticos para el tamizaje presuntivo de carbapenemasas.. 33 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(48) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. IC. B. IO. TE. CA. DE. CI EN. CI. AS. BI. O. LO. G. A. AS. ANEXO N°04. BI. BL. Figura 2.Cultivos de Pseudomonas aeruginosa (A) y Klebsiella pneumoniae (B), donde se observa el sinergismo (distorsión de los halos de inhibición)que se produce entre los discos de meropenem e imipenem con el disco central de EDTA,confirmación de la presencia de Metalobetalactamasas.. 34 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(49) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. ANEXO N°05: Análisis estadístico prueba Z para comparar proporciones obtenidas en la producción de metalobetalactamasas por cultivos de Pseudomonas aeruginosa .. AS. Formula de la prueba Z para comparación de proporciones Donde:. G. n: observaciones. IC. X: ocurrencias. LO. X/n: proporción de la muestra P/0: proporción propuesta. BI. O. Ho: p≤0.05 la proporción donde la frecuencia de producción de metalobetalactamasas por cultivos de Pseudomonas aeruginosa es significativa. N. %. 4 26 30. 13.3 86.7 100. DE. CI EN. Cultivo de Pseudomonas aeruginosa Positivos Negativos Total. CI. AS. H1: p>0.05 la proporción donde la frecuencia de producción de metalobetalactamasas por cultivos de Pseudomonas aeruginosa es no significativa.. CA. 0.133-p=proporción de resultados positivos, donde los cultivos de Pseudomonas aeruginosa produce metalobetalactamasas.. TE. 0.867-q=proporción de resultados negativos, donde los cultivos de Pseudomonas aeruginosa no produce metalobetalactamasas. IO. Se trabajó a un nivel de confianza del 95% es decir Ztab=±1.96. BL. Rechazar Ho si Z<-1.96 ó Z>+1.96. BI. Como Z (-27.5) por lo tanto Se rechaza Ho, Es decir, podemos determinar estadísticamente que no existe significancia en la producción de metalobetalactamasas entre los cultivos de Pseudomonas aeruginosa.. 35 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..