Efecto de la Abamectina sobre la germinación, el crecimiento y la actividad entomopatógena de Beauveria bassiana e Isaria fumosorosea en condiciones de laboratorio

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(1)Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS. AS. BI. O. LO. G. IC. AS. ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA. DE. CI EN. CI. Efecto de la Abamectina sobre la germinación, el crecimiento y la actividad entomopatógena de Beauveria bassiana e Isaria fumosorosea en condiciones de laboratorio.. CA. TESIS PARA OPTAR EL TÍTULO DE. AUTOR: Br. KENET JHONATAN QUISPE AVALOS ASESOR: Ms.C. JUAN HECTOR WILSON KRUGG. BI. BL. IO. TE. BIÓLOGO - MICROBIÓLOGO. TRUJILLO-PERÚ 2016. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(2) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. IC. Dr. Orlando Gonzáles Nieves. AS. AUTORIDADES DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO. BI. O. LO. G. RECTOR DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO. AS. Dr. Rubén César Vera Véliz. VICE-RECTOR ACADÉMICO DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE. DE. CI EN. CI. TRUJILLO. Dr. Weyder Portocarrero Cárdenas. NACIONAL DE TRUJILLO. BL. IO. TE. CA. VICE-RECTOR DE INVESTIGACIÓNDE LA UNIVERSIDAD. Dr. Steban Alejandro Ilich Zerpa. BI. SECRETARIO GENERAL DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO. ii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(3) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AS. AUTORIDADES DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS. IC. Dr. Freddy Rogger Mejía Coico. BI. O. LO. G. DECANO DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS. AS. Dr. William Elmer Zelada Estraver. DE. CI EN. CI. SECRETARIO DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS. Dra. Bertha S. Soriano Bernilla. DIRECTORA DE LA ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE. BI. BL. IO. TE. CA. MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA. iii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(4) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DEL ASESOR. El que suscribe: Ms.C. Juan Héctor Wilson Krugg, asesor de la presente. AS. tesis titulada: Influencia de la Abamectina sobre la germinación, el crecimiento y la. IC. actividad entomopatógena de Beauveria bassiana e Isaria fumosorosea en. LO. G. condiciones de laboratorio.. BI. O. CERTIFICA:. Que, la investigación ha sido desarrollada de conformidad con su. AS. correspondiente proyecto de tesis y teniendo en cuenta las orientaciones pertinentes. Que, el informe ha sido redactado bajo mi asesoramiento, acogiendo las. CI. observaciones y sugerencias alcanzadas. Por ello, autorizo al Bachiller Quispe. según sus fines.. IO. TE. CA. DE. Trujillo, de Octbre 2016. CI EN. Avalos Kenet Jhonatan, para continuar con los procedimientos correspondientes. BL. Ms.C. Juan Héctor Wilson Krugg. BI. ASESOR. iv Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(5) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. PRESENTACIÓN. AS. SEÑORES MIEMBROS DEL JURADO DICTAMINADOR:. IC. Cumpliendo con las disposiciones establecidas por el Reglamento de Grados y Títulos de la Universidad Nacional de Trujillo, presento a su. G. consideración y elevado criterio la presente Tesis titulada: Influencia de la. LO. Abamectina sobre la germinación, el crecimiento y la actividad entomopatógena de. O. Beauveria bassiana e Isaria fumosorosea en condiciones de laboratorio, con el. BI. objetivo de obtener el título profesional de Biólogo-Microbiólogo.. TE. CA. DE. CI EN. Trujillo, de Octubre del 2016. CI. AS. Espero que este trabajo sea de su aprobación.. IO. ________________________________. BI. BL. Br. Kenet Jhonatan Quispe Avalos. v Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(6) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. LO. Dra. Manuela Luján Velásquez. G. --------------------------------------------. IC. AS. MIEMBROS DEL JURADO. CI EN. CI. AS. BI. O. PRESIDENTE. -------------------------------------------Ms. C.Juan Héctor Wilson Krugg. BI. BL. IO. TE. CA. DE. SECRETARIO. -----------------------------------------------Ms. C. Eduardo José Muñoz Ganoza VOCAL. vi Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(7) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. APROBACIÓN Los profesores que suscriben, miembros del Jurado dictaminador, declaran que el presente Informe de Tesis titulado: Efecto de la Abamectina sobre la germinación,. AS. el crecimiento y la actividad entomopatógena de Beauveria bassiana e Isaria. O. LO. G. y fundamentales, siendo APROBADO por UNANIMIDAD.. IC. fumosorosea en condiciones de laboratorio, ha cumplido con los requisitos formales. BI. -------------------------------------------Dra. Manuela Luján Velásquez. CI EN. CI. AS. PRESIDENTE. --------------------------------------------. SECRETARIO. BI. BL. IO. TE. CA. DE. Ms. C. Juan Héctor Wilson Krugg. -----------------------------------------------Ms. C. Eduardo José Muñoz Ganoza VOCAL. vii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(8) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DEDICATORIA. A Dios por permitirme estudiar, conocer y dedicarme a esta linda carrera, por ser mi. AS. fortaleza en los momentos de debilidad, por darme una maravillosa familia y amigos en el transcurso de mi vida y por todas las experiencias y conocimientos que adquiero día a. LO. G. IC. día.. O. A mi familia por apoyarme siempre en todo momento y creer en mí, por su amor u. CI. AS. mi vida.. BI. enseñanzas que me dan con el pasar del tiempo que permitieron lograr éste objetivo en. CI EN. A mi hermano Carlos por acompañarme y ayudarme con el desarrollo de éste trabajo,. BI. BL. IO. TE. CA. DE. por la estima que me brinda.. viii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(9) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AGRADECIMIENTOS. AS. Mi más profundo agradecimiento a mi amigo y asesor Ms. C. Juan. IC. Héctor Wilson Krugg por el apoyo, confianza y el tiempo brindado día a día. LO. G. para el desarrollo del presente trabajo con éxito.. O. A mis amigos del laboratorio de Fitopatología Milagros, Jhonatan. BI. quienes contribuyeron en la realización del presente trabajo, muchas gracias. AS. por su colaboración, y en especial a Vania que de alguna manera u otra a. BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI EN. CI. pesar de todo me apoyó física y emocionalmente a seguir adelante.. ix Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(10) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. RESUMEN Se determinó el efecto de diferentes concentraciones del insecticidaacaricida. Abamectina. sobre. la. germinación,. crecimiento. y. actividad. AS. entomopatógena de Beauveria bassiana e Isaria fumosorosea, a una concentración. IC. mínima de 900 ppm y máxima de 1800 ppm. El efecto de Abamectina sobre el. G. porcentaje de germinación de Beauveria bassiana e Isaria fumosorosea se. LO. determinó colocando 2mLde cada concentración del insecticida-acaricida en. O. frascos pequeños, adicionando2mL de la suspensión de conidias, con lo cual se. BI. obtuvo una concentración final de 1x105conidias/mL, ésta se incubó a una. AS. temperatura de 25ºC, durante 24 horas, y luego se realizó el conteo de conidias. CI. germinadas. Para la evaluación del porcentaje de crecimiento se incorporó el. CI EN. insecticida-acaricida en agar papa sacarosa y se sirvió en placas Petri, así como también una placa control por cada hongo sin incorporar el insecticida-acaricida, se. DE. sembró por puntura en la parte central de las placas de Petri de acuerdo a su correspondiente concentración de cada insecticida, incubándose a 25°C durante 7. CA. días. Para evaluar la actividad entomopatógena se recolectaron18 larvas de. TE. Spodoptera frugiperda con los hongos crecidos en medios con el insecticidaacaricida a las dos concentraciones trabajadas, se inoculó también los controles con. IO. el hongo crecido en sólo agar papa sacarosa a un grupo de las larvas recolectadas.. BL. Se encontró que la Abamectina disminuye la germinación de las esporas de. BI. Beauveria bassiana e Isaria fumosorosea. En cuanto a la evaluación del crecimiento radial de B. bassiana e I. fumosorosea, se encontró que la. concentración mínima retarda el crecimiento de ambos hongos; mientras la concentración máxima inhibe el crecimiento de éstos. Con respecto a la capacidad. x Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(11) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. entomopatógena, ésta no fue afectada por la presencia del insecticida-acaricida a. BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI EN. CI. AS. BI. O. LO. G. IC. AS. 900 ppm causando la muerte de las larvas de S. frugiperda.. xi Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(12) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. CONTENIDO. AUTORIDADES DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO ................................. ii. AS. AUTORIDADES DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLOGICAS………………………iii. IC. ASESOR .......................................................................................................................................... iv. G. PRESENTACIÓN ........................................................................................................................... v. LO. MIEMBROS DEL JURADO ........................................................................................................ vi. O. APROBACIÓN ............................................................................................................................. vii. BI. DEDICATORIA ........................................................................................................................... viii. AS. AGRADECIMIENTOS ................................................................................................................. ix. CI. RESUMEN ....................................................................................................................................... x. CI EN. CONTENIDO……………………………………………………………………………………...xii INTRODUCCIÓN ........................................................................................................................... 1 MATERIAL Y MÉTODO .............................................................................................................. 7 Material biológico ................................................................................................................ 7. 2.. Procedimiento ...................................................................................................................... 7. CA. DE. 1.. 2.1. Evaluación del efecto de la abamectina sobre la germinaciónde conidias de B.. TE. bassianae I.fumosorosea. .................................................................................................... 7. IO. 2.2. Evaluación del efecto de la abamectina sobre el crecimiento de B. bassianae I.. BI. BL. fumosorosea ........................................................................................................................ 9. 2.3. Evaluación del efecto de la abamectina sobre la patogenicidad de B. bassiana e I. fumosorosea. ..................................................................................................................... 11 2.4. Análisis de datos ...................................................................................................... 14. RESULTADOS .............................................................................................................................. 15 DISCUSIÓN .................................................................................................................................. 27. xii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(13) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. CONCLUSIONES ......................................................................................................................... 34 RECOMENDACIONES ............................................................................................................... 35. AS. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS ........................................................................................ 36. IC. ANEXOS ........................................................................................................................................ 44. LO. G. Anexo 1. Estructura y fórmula química de la Abamectina ............................................................. 45 Anexo 2: Ficha técnica del insecticida-acaricida Bamectín. ........................................................... 46. BI. O. Anexo 3. Insecticida-acaricida Bamectín cuyo principio activo es la abamectina .......................... 48 Anexo 4: Cultivo puro de Beauveria bassiana ............................................................................... 49. AS. Anexo 5: Cultivo puro de Isaria fumosorosea. ............................................................................... 50. CI. Anexo 6: Conidias de Beauveria bassiana en Cámar de Neubauer. ............................................... 51. CI EN. Anexo 7: Conidias de Isaria fumosorosea en Cámara de Neubauer............................................... 52 Anexo 8: Porcentaje de germinación de Beauveria bassiana a diferentes concentraciones de. DE. abamectina a las 24 horas de evaluación.. ....................................................................................... 53 Anexo 9: Porcentaje de germinación de Isaria fumosorosea a diferentes concentraciones de. CA. abamectina a las 24 horas de evaluación.. ....................................................................................... 54 Anexo 10: Análisis de varianza y de Duncan (post varianza) de germinación de Beauveria. TE. bassiana a diferentes concentraciones de abamectina. .................................................................... 55. IO. Anexo 11: Análisis de varianza y de Duncan (post varianza) de germinación de Isaria. BL. fumosorosea a diferentes concentraciones de abamectina............................................................... 56. BI. Anexo 12: Crecimiento radial promedio de Beauveria bassiana (cm.) a la concentración de 0 ppm de abamectina durante 7 días de evaluación en condiciones de laboratorio. ................................... 57 Anexo 13: Crecimiento radial promedio de Beauveria bassiana (cm.) a la concentración de 900 ppm de abamectina durante 7 días de evaluación en condiciones de laboratorio. ........................... 58. xiii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(14) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Anexo 14: Crecimiento radial promedio de Beauveria bassiana(cm.) a la concentración de 1800 ppm de abamectina durante 7 días de evaluación en condiciones de laboratorio.. .......................... 59 Anexo 15: Crecimiento radial promedio de Isaria fumosorosea (cm.) a la concentración de 0 ppm. AS. de abamectina durante 7 días de evaluación en condiciones de laboratorio.. .................................. 60 Anexo 16: Crecimiento radial promedio de Isaria fumosorosea (cm.) a la concentración de 900. G. IC. ppm de abamectina durante 7 días de evaluación en condiciones de laboratorio.. .......................... 61. LO. Anexo 17: Crecimiento radial promedio de Isaria fumosorosea (cm.) a la concentración de1800 ppm de abamectina durante 7 días de evaluación en condiciones de laboratorio.. .......................... 62. O. Anexo 18: Análisis de varianza y de Duncan (post varianza) del crecimiento de Beauveria basiana. BI. a diferentes concentraciones de abamectina.. .................................................................................. 63. AS. Anexo 19: Análisis de varianza y de Duncan (post varianza) del crecimiento de Isaria. BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI EN. CI. fumosorosea a diferentes concentraciones de abamectina............................................................... 64. xiv Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(15) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. INTRODUCCIÓN. El control químico se mantiene, desde hace aproximadamente siete décadas,. AS. como el método principal de control de plagas. En todo este tiempo se han. IC. acumulado suficientes evidencias de los riesgos que presenta el uso de plaguicidas. G. para la salud y el ambiente, riesgos que además comprometen la sostenibilidad de. O. LO. los sistemas agrícolas.1. BI. En diferentes lugares del mundo los sistemas agroalimentarios tienen una. AS. alta dependencia de insumos químicos, como en los países en desarrollo; pero en. CI. otras partes se desarrollan experiencias que están demostrando que los problemas. CI EN. de plagas se pueden enfrentar desde una perspectiva ecológica y sostenible.1. DE. Abamectina es un material altamente tóxico, sin embargo los productos formulados que contengan abamectina la mayoría son de baja para mamíferos.. CA. Formulaciones de concentrados emulsionables pueden causar irritación ocular. TE. moderada e irritación leve de la piel. Los síntomas de intoxicación observados en animales de laboratorio incluyen dilatación de las pupilas, vómitos, convulsiones. BI. BL. IO. y/o temblores y coma.2. La abamectina es una mezcla de avermectinas que contienen más 80% de. avermectina B1a y el resto de avermectina B1b, es un producto de fermentación natural de la bacteria Streptomyces avermitilis, se utiliza para controlar plagas de insectos y ácaros de una gama de agronómico, frutas, vegetales, y cultivos. 1 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(16) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. ornamentales, ya que cumple funciones como: insecticida, acaricida y antihelmíntico con poderosa actividad translaminar.2. AS. Actúa principalmente por ingestión y contacto directo sobre arañitas e. IC. insectos frutales; tanto los insectos como ácaros quedan inmovilizados poco. G. después de ingerirla, dejan de alimentarse y/o no ovipone y en un corto tiempo. LO. terminan muriendo. Pueden requerirse 3-4 días para alcanzar su máxima eficacia;. BI. O. es decir, es un plaguicida de acción lenta y larga vida residual.2. AS. Esta característica es una de las razones, junto a la excelente relación. CI. costo/beneficio, ya que no supone mucho gasto económico, que explican la. CI EN. expansión, el interés permanente de los usuarios y la imagen amigable del control biológico en la sociedad no involucrada directamente con las actividades agrícolas.3. DE. El control biológico fue concebido a inicios del siglo XIX cuando algunos. CA. naturistas de diferentes países reseñaron el importante papel de los organismos entomófagos y entomopatógenos en la naturaleza. Con el intento de la lucha o. TE. control biológico se intenta reestablecer el perturbado equilibrio ecológico,. IO. mediante la utilización de organismo vivos o sus metabolitos, para eliminar o. BI. BL. reducir los daños causados por organismos perjudiciales.4. El control biológico se define como la reducción de la cantidad de inóculo o de la actividad que produce la enfermedad de un agente patógeno, mediante uno. 2 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(17) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. o más organismos diferentes al hombre. Debido a lo antes mencionado se ha sido visto como una de las técnicas de control de plagas y enfermedades más seguras desde el punto de vista ambiental ya que no hay contaminación y por ende supone. IC. AS. menos riesgos para otras especies, incluido el hombre.5. G. En el control biológico se usan diferentes microorganismos como: bacterias,. LO. hongos, nematodos, ácaros, entre otros. Entre los microorganismos que se usan en. O. el control biológico, existe un grupo importante de hongos que presentan, en forma. BI. natural, efectos antagónicos con otros microorganismos, acción que está siendo. CI. AS. aprovechada como una forma de control biológico de patógenos vegetales.6. CI EN. La temperatura, la humedad relativa y la radiación solar son los factores abióticos medioambientales más importantes que afectan la germinación, el crecimiento vegetativo y la viabilidad de los hongos entomopatógenos.7 Éstos. DE. pueden favorecer o desfavorecer el crecimiento, germinación y capacidad. Existe también otro grupo de importancia que presentansu efecto patogénico. BI. BL. IO. TE. CA. entomopatógena del hongo según su presencia.8. contra plagas de insectos. En este grupo se encuentran los hongos entomopatógenos Beauveria bassiana e Isaria fumosorosea que son unos de los más promisorios en. 3 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(18) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. control biológico de ciertos grupos de insectos de importancia en la economía agrícola.9-12. AS. Los hongos entomopatógenos constituyen un grupo de microorganismos en. IC. donde la ingestión por el hospedero no es un prerrequisito para llevar a cabo el. G. proceso de infección, debido a que la enfermedad puede ser desarrollada por. LO. contacto del patógeno con su hospedero, logrado una penetración directa de la. BI. O. cutícula.13. AS. Los hongos entomopatógenos tienen un gran potencial como agentes. CI. controladores, constituyendo un grupo con más de 750 especies, diseminados en el. CI EN. medio ambiente y provocando infecciones fungosas a poblaciones de artrópodos, para la Food and Agriculture Organization (FAO) los géneros más importantes son. DE. Metarhizium, Beauveria, Paecilomyces, Verticillium, Rhizopus y Fusarium.14-15. CA. B. bassiana e I. fumosorosea, al igual que otros hongos entomopatógenos, antes de matar a su hospedero le causa síntomas, este tipo de mecanismo de acción. TE. de hongo ha sido estudiado y se ha descubierto la participación de ciertos tipos de. BL. IO. metabolitos en este proceso, que hace certera la patogenicidad de este hongo.16 Beauveria bassiana, es un hongo entomopatógeno; que al igual que otros. BI. antes de matar a su hospedero le causa síntomas importantes como son: pérdida de sensibilidad, falta de coordinación, letargo, inapetencia, melanización y parálisis. Con la muerte del insecto, el beneficio se incrementa pues la esporulación y posterior dispersión del hongo permite un control más allá de la aplicación.17. 4 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(19) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Isaria fumosorosea es un hongo entomopatógeno que ha demostrado gran potencial como agente microbiológico para el control de insectos plaga pertenecientes a diferentes Ordenes, además de que ha sido inofensivo contra. IC. AS. organismos benéficos.18. G. Con la muerte del insecto, el beneficio se incrementa pues la esporulación y. LO. posterior dispersión del hongo, permite un control más amplio luego de la. BI. O. aplicación, ya que las esporas se siguen diseminando por mucho más tiempo.19-21. AS. La interacción entre los controladores biológicos y ciertas sustancias usadas. CI. en el control químico pueden ser favorables siempre y cuando exista compatibilidad. CI EN. entre la acción de los componentes de los dos tipos de control, maximizando su potencial, disminuyendo el impacto ambiental y favoreciendo a los organismos. DE. beneficiosos.22. CA. Se han realizado un gran número de trabajos referentes a la compatibilidad de sustancias químicas como herbicidas, fungicidas, nematicidas, insecticidas y. TE. coadyuvantes; con organismos que se consideran enemigos naturales de plagas depredadores,. IO. como:. parasitoides. y. microorganismos. entomopatógenos,. BL. encontrándose que algunos de estos químicos disminuyen la actividad de estos. BI. organismos y alteran su fisiología cuando estos son utilizados sin un concepto de manejo integrado de plagas.23. 5 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(20) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Se han realizado diversos estudios de compatibilidad con hongos entomopatógenos como Beauveria bassiana,24-30Metarhizium,31Lecanicillium. AS. lecanii32 e Isaria fumosorosea.33-35. IC. De acuerdo a estos estudios, el efecto que producen diversos agroquímicos. G. está relacionado con la germinación, que es de carácter irreversible y el desarrollo. O. LO. micelial de estos hongos.36. BI. Las personas agrícolas aplican abamectina a sus suelos de cultivo y follaje. AS. para poder controlar distintas plagas, pero como se sabe este producto químico es. CI. altamente residual. La aplicación de enemigos naturales como los hongos es una. CI EN. buena alternativa de solución porque estos controlarían biológicamente una plaga, pero para ello es necesario conocer si el controlador biológico (hongo) tiene. DE. compatibilidad con el producto químico aplicado (abamectina).. CA. Por lo tanto el motivo de este trabajo fue evaluar el efecto de la abamectina sobre la germinación, el crecimiento y la actividad entomopatógena de Beauveria. BI. BL. IO. TE. bassiana e Isaria fumosorosea.. 6 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(21) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. MATERIAL Y MÉTODO. Material biológico. AS. 1..  Cultivo puro de Beauveria bassiana e Isaria fumosorosea. IC. proporcionadas por el laboratorio de Fitopatología del.  Larvas de Spodoptera frugiperda.. LO. G. Departamento de Microbiología y Parasitología.. BI. O.  Insecticida-acaricida BAMECTIN, cuyo componente activo es. Procedimiento. CI. 2.. AS. la abamectina.. CI EN. 2.1. Evaluación del efecto de la abamectina sobre la germinación de conidias de B. bassiana e I. fumosorosea.. DE. 2.1.1. Reactivación del cultivo de B. bassiana e I. fumosorosea. A partir del cultivo puro de B. bassiana e I. fumosorosea se. CA. sembró por puntura en tres tubos de ensayo de 16 x 180 mm. durante 7 días y se obtuvieron cultivos jóvenes.. BI. BL. IO. TE. con Agar Papa Sacarosa cada hongo, fueron incubados a 25ºC. 2.1.2. Propagación del cultivo deB. Bassiana e I. fumosorosea. A partir del cultivo joven de B. bassiana e I. fumosorosea se sembraron por suspensión en frascos planos conteniendo Agar Papa Sacarosa el cual se incubó a 25ºC durante 10 días.. 7 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(22) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 2.1.3. Preparación del inóculo de conidias El inóculo de conidias se obtuvo agregando 10 mL de solución. AS. Tween 80 al 0.1% a cada frasco plano con Agar Papa Sacarosa. IC. que contenía a B. bassiana luego se agitó moderadamente con. G. el fin de liberar las conidias del hongo. La suspensión. LO. resultante fue colocada en un matraz estéril, donde se. O. determinó la concentración de conidias mediante el recuento. BI. en Cámara de Neubauer, que fue estandarizada a una. AS. concentración de 2 x 105esp/mL. El mismo procedimiento se. CI EN. CI. realizó para I. fumosorosea.. 2.1.4. Preparación de soluciones de Abamectina. Se realizaron diferentes diluciones del insecticida-acaricida en. DE. Caldo Papa Sacarosa hasta poder alcanzar las concentraciones. CA. de 900 y 1800 ppm del producto original.. BI. BL. IO. TE. 2.1.5. Inoculación e incubación para evaluar la germinación Se colocó 2 mL de caldo papa sacarosa yel insecticidaacaricida doble concentrado en frascos pequeños de penicilina estériles (3 por tratamiento), a los cuales se les agregó 2mL de la suspensión de conidias de B. bassiana obtenido previamente, con lo cual se obtuvo una dilución de 1x105esp/mL y concentraciones finales de 900 ppm y 1800. 8 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(23) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. ppm del insecticida-acaricida Abamectina. Se preparó también una suspensión de conidias control (0 ppm), agregándole 2 mL de la suspensión de conidias en 2mL de caldo papa sacarosa.. AS. Posteriormente cada frasco se incubó a una temperatura de. IC. 25ºC durante 24 horas. Se realizó el mismo procedimiento con. LO. G. las conidias de I. fumosorosea.. O. 2.1.6. Lectura. BI. Se agregó 5 gotas de azul de lactofenol en cada uno de los. AS. frascos (de cada concentración del insecticida-acaricida y el. CI. control), luego se observó y se realizó el recuento en el. CI EN. microscopio a 40x en láminas portaobjetos con cubreobjetos. Se contaron las conidias germinadas, para cada concentración del insecticida-acaricida evaluado, incluyendo el control. Con. CA. DE. el fin de determinar el porcentaje de germinación.. BI. BL. IO. TE. 2.2. Evaluación del efecto de la abamectina sobre el crecimiento de B. bassiana e I. fumosorosea. 2.2.1. Preparación del medio de cultivo Se preparó Agar Papa Sacarosa en tres matraces conteniendo 350 mL de medio cada uno. El medio de cultivo fue esterilizado en autoclave y se dejó enfriar hasta una temperatura aproximada de 45°C. Estando aún fundido el medio, a dos de los matraces se adicionó abamectina en. 9 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(24) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. cantidad suficiente para obtener una concentración final 900 y 1800 ppm, respectivamente. El matraz restante con medio de cultivo se utilizó como control. Luego, el medio de cultivo. AS. de cada uno de los tres matraces se sirvió en placas de Petri. IC. estériles (ocho placas por cada concentración, incluyendo el. G. control).. LO. 2.2.2. Siembra e incubación. O. A partir de un cultivo joven de B. bassiana e I. fumosorosea. BI. se sembró por puntura en la parte central de las placas de Petri. AS. con Agar Papa Sacarosa previamente preparadas (cuatro. CI. placas por concentración incluidas las placas del control de. CI EN. cada hongo); estas placas fueron incubadas a 25°C durante siete días.. DE. 2.2.3. Lectura. A partir del tercer día hasta el séptimo día de incubación, se. CA. midió el radio de crecimiento micelial en milímetros (mm) del. BI. BL. IO. TE. hongo en cuatro direcciones diferentes, obteniendo un radio promedio de crecimiento por día por cada concentración del insecticida-acaricida y el grupo control. Los resultados de crecimiento de Beauveria bassiana e Isaria fumosorosea se expresaron en centímetros y en porcentaje de crecimiento (%C), teniendo en cuenta el crecimiento alcanzado por el grupo control (100%), de la siguiente manera:. 10 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(25) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AS. *La fórmula es una regla de tres simple.. 2.3. Evaluación del efecto de la abamectina sobre la patogenicidad. IC. de B. bassiana e I. fumosorosea.. LO. G. 2.3.1. Recolección e identificación de adultos de Spodoptera frugiperda. BI. O. Se recolectaron 20 ejemplares en su estado larval en frascos de vidrio de boca ancha, se trasladaron al laboratorio de. CI. de suelo.. AS. Fitopatología donde se les retiró residuos vegetales y restos. CI EN. 2.3.2. Crianza de S. frugiperda.. Los insectos fueron colocados en placas de Petri y. DE. observados diariamente por un periodo de cinco días (cuarentena). La alimentación consistió en pedazos de hojas. CA. y granos de choclo, las cuales también sirvieron para. BI. BL. IO. TE. mantener la humedad. Las placas fueron limpiadas retirando los ejemplares muertos y colocándoles alimento fresco.. 2.3.3. Propagación del cultivo deB. Bassiana e I. fumosorosea. A partir del cultivo de B. bassiana que creció en medio Agar papa sacarosa con las dos concentraciones de abamectina se sembró en tubos de ensayo con el medio con químico. Luego se sembró por suspensión en frascos planos conteniendo Agar Papa Sacarosa con las diferentes concentraciones de. 11 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(26) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. abamectina, los cuales se incubaron a 25ºC durante 10 días. Además se realizó propagación de un cultivo de B. bassiana que creció en medio Agar papa sacarosa sin abamectina. El. AS. mismo procedimiento se realizó para I. fumosorosea.. IC. 2.3.4. Preparación del inóculo de conidias de B. bassiana e I.. G. fumosorosea.. LO. El inóculo de conidias se obtuvo agregando 10 mL de. O. solución Tween 80 al 0.1% a cada frasco plano con Agar. BI. Papa Sacarosa que contenía a B. bassiana, luego se agitó. AS. moderadamente con el fin de liberar las conidias del hongo.. CI. Seguidamente, la suspensión resultante fue colocada en un. CI EN. matraz estéril, donde se determinó la concentración de conidias mediante el recuento en Cámara de Neubauer, que fue. estandarizada. a. una. concentración. final. de. DE. 107conidias/mL. El mismo procedimiento se hizo para I.. CA. fumosorosea.. BI. BL. IO. TE. 2.3.5. Inoculación de S. frugiperda. Los ejemplares adultos de S. frugiperda fueron colocados en placas Petri en grupos de cinco ejemplares. La inoculación de la solución acuosa conteniendo una concentración de 1 x 107conidias/mL se realizó por aspersión; un grupo de S. frugiperda fué inoculado con conidias de B. bassiana que creció en ausencia de abamectina. 12 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(27) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. y el otro grupo fué inoculado con B. bassiana que creció en la concentración mínima de abamectina (900 ppm) se trabajó.Se siguió proporcionando alimento en forma. AS. equitativa al número de larvas. El mismo procedimiento se. IC. realizó para I. fumosorosea.. G. 2.3.6. Observación de síntomas y/o signos de S. frugiperda. LO. Después de la inoculación, se evaluó durante una semana a. O. los grupos para determinar síntomas de ataque por B.. BI. bassiana e I. fumosorosea como pérdida de apetito, parálisis,. AS. muerte y momificación del insecto.. CI. 2.3.7. Aislamiento de B. bassiana e I. fumosorosea a partir de S.. CI EN. frugiperda infectados experimentalmente. Los ejemplares muertos se colocaron en placas de Petri dándoles un ambiente como cámara húmeda y se incubó a. DE. temperatura de 25°C aproximadamentehasta la aparición de. CA. micelio en la superficie del insecto. Se procedió a la. resultante.. BI. BL. IO. TE. identificación microscópica y macroscópica de la colonia. 13 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(28) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 2.4. Análisis de datos La determinación del efecto del insecticida-acaricida abamectina sobre. AS. B. bassiana e I. fumosorosea se realizó analizando el porcentaje de germinación y el crecimiento B. bassiana e I. fumosoroseaen las. IC. diferentes concentraciones del insecticida-acaricida, procesando los. LO. G. datos en base a la prueba de Análisis de Varianza Unidireccional. BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI EN. CI. AS. BI. O. (ANOVA), según el paquete estadístico SPSS v.22. 14 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(29) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. RESULTADOS. En la Fig. 1 se observa el efecto que tiene la abamectina a diferentes. AS. concentraciones sobre la germinación de B. bassiana evaluadas a las 24 horas de. IC. incubación a 25ºC.. G. En la Fig. 2 se observa el porcentaje de germinación de Beauveria bassina a las. LO. concentraciones de 900 y 1800 ppm de abamectina a las 24 horas de incubación.. O. En la Fig. 3 se observa el efecto que tiene la abamectina a diferentes. evaluadas a las 24 horas de incubación.. AS. BI. concentraciones (900ppm y 1800ppm) sobre la germinación de I. fumosorosea. CI. En la Fig. 4 se observa el porcentaje de germinación de Isaria fumosorosea a las. CI EN. concentraciones de 900 y 1800 ppm de abamectina a las 24 horas de incubación. En laFig. 5se observa el crecimiento de Beauveria bassiana en placas de Petri en. DE. las concentraciones de 900ppm y 1800ppm y también un control. En la Fig. 6 se observa el porcentaje de crecimiento de Beauveria bassiana a las. CA. concentraciones de 900ppm y 1800ppm de abamectina a los 7 días de incubación.. TE. En la Fig. 7 se observa el crecimiento de Isaria fumosorosea en placas de Petri en las concentraciones de 900ppm y 1800ppm y también un control.. IO. En la Fig. 8 se observa el porcentaje de crecimiento de Isaria fumosorosea a las. BL. concentraciones de 900ppm y 1800ppm de abamectina a los 7 días de incubación.. BI. En la Fig. 9 se muestra la larva de S. frugiperda infectada con B. bassiana resembrada en APS sin abamectina así como la observación microscópica del hongo aislado nuevamente de la larva; también se muestra la larva infectada con B.. 15 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(30) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. bassiana resembrada en APS con abamectina a 900 ppm y su respectiva observación microscópica. En la Fig. 10 se muestra la larva de S. frugiperda infectada con I. fumosorosea. AS. resembrada en APS sin abamectina así como la observación microscópica del. IC. hongo aislado nuevamente de la larva; también se muestra la larva infectada con I.. G. fumosorosea resembrada en APS con abamectina a 900pm y su respectiva. BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI EN. CI. AS. BI. O. LO. observación microscópica.. 16 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(31) G. IC. AS. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. CI EN. CI. AS. BI. O. LO. CONTROL. ABAMECTINA 1800 PPM. BI. BL. IO. TE. CA. DE. ABAMECTINA 900 PPM. 17 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(32) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Fig. 1 Observación microscópica (40X) de esporas germinadas y no germinadas de Beauveria bassiana enfrentado a diferentes concentraciones de abamectina, 900. AS. ppm y 1800 ppm.. 100.00. IC G. 90.00. 70.00. LO. 80.00. a. O. 60.00. BI. 50.00 40.00. AS. 30.00 20.00 10.00. CI. Germinación de Beauveria bassiana (%). 100.00. CI EN. 0.00. 0. 0.12. b. 900 ppm. 0.11. b. 1800 ppm. DE. Concentración de Abamectina (ppm). CA. Fig. 2 Porcentaje de germinación de Beauveria bassiana frente a las concentraciones de 900 ppm y 1800 ppm del insecticida-acaricida Abamectina a las. TE. 24 horas de incubación.. BI. BL. IO. a,b:p<0.05 : Existe diferencia significativa.. 18 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(33) AS. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. G. IC. CONTROL. CI EN. CI. AS. BI. O. LO. CONTROL. ABAMECTINA 1800 PPM. BI. BL. IO. TE. CA. DE. ABAMECTINA 900 PPM. 19 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(34) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Fig. 3 Observación microscópica (40X) de esporas germinadas y no germinadas de Isasria fumosorosea frente a diferentes concentraciones de abamectina, 900 ppm y. AS. 1800ppm.. IC. 100.00 100.00. G LO. 80.00 70.00 60.00. O. a. BI. 50.00. 36.66. 40.00. AS. 30.00. a. CI. 20.00 10.00 0.00. CI EN. Germinación de Isaria fumosorosea (%). 90.00. 0. 900 ppm. 11.79. a 1800 ppm. DE. Concentración de Abamectina (ppm). CA. Fig. 4 Porcentaje de germinación de Isaria fumosorosea frente a las concentraciones de 900 ppm y 1800 ppm del insecticida-acaricida Abamectina a las. TE. 24 horas de incubación.. BI. BL. IO. a: p<0.05 : Existe diferencia significativa.. 20 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(35) AS. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. B. CA. DE. CI EN. CI. C. AS. BI. O. LO. G. IC. A. TE. Fig.5.Crecimiento radial de Beauveria bassiana frente a diferentes concentraciones. IO. del insecticida Abamectina en condiciones de laboratorio y a los 7 días de. BL. incubación: A: Crecimiento de Beauveria bassiana en A.P.S. con 0 ppm de. BI. abamectina, B: Crecimiento de Beauveria bassiana en A.P.S. con 900 ppm de abamectina, C: Crecimiento de Beauveria bassiana en A.P.S. con 1800 ppm de. abamectina.. 21 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(36) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 100.00%. AS. 90.00%. 70.00%. IC. 80.00%. 59.49%. 60.00%. G. a. 40.00%. LO. 50.00%. a. O. 30.00%. BI. 20.00% 10.00% 0.00% 0 ppm. AS. Crecimiento de Beauveria bassiana (%). 100.00%. 900ppm. 0.00%. a. 1800pm. DE. CI EN. CI. Concentración de Abamectina (ppm). Fig.6. Porcentaje de crecimiento de Beauveriabassianafrente a diferentes. CA. concentraciones (ppm) del insecticida-acaricida Abamectina a los 7 días de incubación.. BI. BL. IO. TE. a: p<0.05 : Existe diferencia significativa.. 22 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(37) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. B. G. IC. AS. A. CI EN. CI. AS. BI. O. LO. C. Fig.7.Crecimiento radial de Isaria fumosorosea frente a diferentes concentraciones. DE. del insecticida Abamectina en condiciones de laboratorio y a los 7 días de. CA. incubación: A: Crecimiento de I. fumosorosea en A.P.S. con 0 ppm de abamectina, B: Crecimiento de I. fumosorosea en A.P.S. con 900 ppm de abamectina, C:. BI. BL. IO. TE. Crecimiento de I. fumosorosea en A.P.S. con 1800 ppm de abamectina.. 23 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(38) AS. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. IC. 100.00%. G. 90.00%. 79.30%. LO. 80.00% 70.00%. 40.00%. AS. 30.00%. BI. a. 50.00%. O. a. 60.00%. 20.00% 10.00% 0.00%. 900ppm. CI EN. 0 ppm. CI. Crecimiento de Isaria fumosorea (%). 100.00%. 0.00%. b. 1800ppm. DE. Concentración de Abamectina (ppm). CA. Fig.8. Porcentaje de crecimiento de Isaria fumosorosea frente a diferentes. TE. concentraciones (ppm) del insecticida-acaricida a los 7 días de incubación.. BI. BL. IO. a,b:p<0.05 : Existe diferencia significativa.. 24 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(39) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. B. O. LO. G. IC. AS. A. D. CA. DE. CI EN. CI. AS. BI. C. Fig. 9. A. Larva de Spodoptera frugiperda colonizada con B. bassiana procedente. TE. de un medio con 0 ppm de abamectina (Control). B. Conidias y conidióforo típico. IO. de B. bassiana observada a 40 X. C. Larva de S. frugiperda colonizada con B.. BL. bassiana procedente de un medio con 900 ppm de abamectina. D. Conidias y. BI. conidióforo típico de B. bassiana observada a 40 X.. 25 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(40) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. B. LO. G. IC. AS. A. D. CA. DE. CI EN. CI. AS. BI. O. C. TE. Fig.10. A. Larva de Spodoptera frugiperda colonizada con I. fumosorosea. IO. procedente de un medio con 0 ppm de abamectina (Control). B. Conidias y. BL. conidióforo típico de I. fumosorosea observada a 40 X. C.Larva de S. frugiperda. BI. colonizada con I. fumosorosea procedente de un medio con 900 ppm de abamectina.. D. Conidias y conidióforo típico de I. fumosorosea observada a 40 X.. 26 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(41) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DISCUSIÓN. AS. De acuerdo a los datos obtenidos en relación a la evaluación del porcentaje de germinación de Beauveria bassiana, se observa que hay inhibición de ésta en las. IC. concentraciones de 900ppm y 1800ppm del insecticida-acaricida abamectina. LO. G. (Figura 1). Si bien estadísticamente se observa que no hay diferencia entre las concentraciones de 900ppm y 1800ppm de abamectina sin embargo si hay. BI. O. diferencia significativa de estas concentraciones con el control (Figura 2), esto. AS. indica que ambas concentraciones tienen el mismo efecto en la germinación de dicho hongo inhibiéndolo. En cambio para la evaluación del porcentaje de. CI. germinación de Isaria fumosorosea, se observa que hay una disminución de éstas. CI EN. en ambas concentraciones (900ppm y 1800ppm) del insecticida-acaricida abamectina (Figura 3). Estadísticamente se observa diferencia significativa de éstas. DE. concentraciones referentes a control (Figura 4), existiendo también diferencia. CA. significativa entre las dos concentraciones.. TE. La inhibición del porcentaje de germinación de Beauveria bassiana puede. IO. ser ocasionado debido a que en el medio crecen bacterias, éstas pudieron haberse. BL. colocado alrededor de la conidia y absorber el agua que se encuentra en el medio quedando en éste en su mayoría el insecticida-acaricida, lo mismo pudo haber. BI. sucedido con Isaria fumosorosea sólo que aquí hubo una disminución. Las bacterias necesitan grandes cantidades de agua, requieren cierto grado de humedad para crecer37. La reproducción de las bacterias está entre 15 a 30 minutos y en alrededor de 16 horas su número puede ascender a unos 5.000 millones, en cambio la de los 27. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(42) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. hongos dura mucho más tiempo.38, debido a esto es que las conidias de los hongos no pueden germinar, por la ausencia o falta de agua en el medio, el cual las bacterias aprovechan primero. Sin embargo se observa que hay un porcentaje de conidias que. AS. si germinaron en el caso de Isaria fumosorosea esto puede deberse a que el. IC. insecticida-acaricida puede actuar de forma sinérgica permitiendo que éstas. LO. G. germinen.39. O. En cuanto al porcentaje de crecimiento de Beauveria bassiana, se observa. BI. que hay variación en el porcentaje de crecimiento en medio con la concentración. AS. mínima 900ppm de abamectina en comparación con el control y en medio con la. CI. concentración máxima 1800ppm no hubo crecimiento (Figura 6), lo mismo sucedió. CI EN. con Isaria fumosorosea (Figura 8).Sin embargo al realizar el análisis de varianza se obtiene que para crecimiento de Beauveria bassiana, si hay diferencia significativa entre los resultados originales de los tres tratamientos,pero en el análisis de varianza. DE. para crecimiento de Isaria fumosorosea hay diferencia significativa entre el grupo. CA. de la concentración máxima (1800 ppm) y los grupos control y concentración. TE. mínima (900 ppm).. IO. El proceso de germinación puede ser dividido en tres fases: hinchamiento. BL. hidrostático de conidias, la aparición del tubo germinal y elongación del tubo. BI. germinal.40 El primer paso incluye la conversión de la conidia de reposo, cuya. latencia se controla por la presencia interna de bloques metabólicos, las barreras de penetración de nutrientes, propios inhibidores y bajo contenido de agua; un período de hinchazón gradual de la conidia incluyendo aumento tanto en el diámetro y la. 28 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(43) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. biomasa. La segunda fase, cuando el tubo germinativo emerge de la conidia ampliada cuyo crecimiento se produce con el apoyo de la movilización y la utilización de compuestos de almacenamiento en la conidia. En la última fase ocurre. AS. la biosíntesis y la extensión de la absorción y el metabolismo de los nutrientes del. G. IC. medio.41. LO. Bamectin (Anexo 2) cuyo principio activo es la abamectina, es un. O. insecticida-acaricida que actúa por contacto e ingestión, tiene limitada actividad. BI. sistémica, pero exhibe movimiento translaminar, es absorbido vía foliar. El modo. AS. de acción de este insecticida-acaricida es de la siguiente manera: interfiere con el. CI. sistema nervioso del insecto, causando una parálisis y muerte del mismo; éste. CI EN. mecanismo se basa en el bloqueo de la transmisión de señales en las conexiones neuromusculares por el mecanismo de amplificación de la acción del GABA (inhibidor neurotransmisor ácido 𝛾 – aminobutírico), a través de un aumento de la. CA. DE. permeabilidad de la membrana al calcio.42. La acción conjunta de un hongo entomopatógeno y un agente químico. TE. introduce múltiples factores de mortalidad sobre los insectos objetivo, lo que puede. IO. representar una ventaja en el manejo de plagas y retrasar alguna expresión de. BL. resistencia a nuevos insecticidas, especialmente cuando se piensa en reducir las. BI. poblaciones de insectos plaga con una ecología compleja.43. El crecimiento de Beauveria bassiana e Isaria fumosorosea en placas de Petri frente a la concentración mínima de abamectina (900ppm), se puede deber a. 29 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(44) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. una variabilidad genética o al uso de vías alternas permitiendo la reducción o no absorción del compuesto activo, ya que cuando las hifas van creciendo cada vez se vuelven más selectivas en la absorción de nutrientes a través de su pared celular,. AS. también pudo deberse a la destoxificación realizado por el hongo.44 Podemos decir. IC. que la abamectina no ejerce una función de fungicida, solo retarda el crecimiento. LO. G. de los hongos, no los mata.. O. En cuanto a los resultados obtenidos en la evaluación de la capacidad. BI. entomopatógena de Beauveria bassiana e Isaria fumosorosea ésta no se vió. AS. afectada en ninguno de los dos hongos ya que es posible observar los síntomas. CI. causado por B. bassiana e Isariafumosoroseaen larvas de S. frugiperda como. CI EN. melanización y momificación de la larva, observándose también que cada hongo creció en el tegumento de la larva y luego su posterior reconocimiento mediante la observación microscópica, solo en la concentración de 900ppm porque en la. DE. concentración máxima no hubo crecimiento, por lo tanto no pudo procesarse (Fig.. CA. 9 y 10).. TE. Esto pudo deberse a que durante todo el proceso de tratamiento ocurrió una. IO. variación genética u otro mecanismo que proporcionen una cierta resistencia ante. BL. el producto químico (abamectina). El mecanismo de acción para la capacidad. BI. entomopatógena de B. bassiana e I. fumosorosea consta principalmente de tres fases: La adhesión de la espora a la cutícula del insecto y su posterior germinación, la penetración del hemocele y la replicación en el hemocele.45. 30 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(45) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Para el caso de los hongos entomopatógenos, el factor humedad y la temperatura se consideran importantes en la infectividad, de modo que la tasa de mortalidad disminuye cuando aumenta la temperatura y la humedad relativa. AS. permanece baja durante períodos prolongados, éstas tres características como el. IC. crecimiento, germinación y actividad entomopatógena se encuentran favorecidos o. G. desfavorecidos por el tipo de ecosistemas los cuales ayudan a regular la humedad y. O. LO. temperatura.46. BI. El proceso de la enfermedad de los hongos entomopatógenos sobre los. AS. hospederos se puede dividir en las siguientes fases: adhesión, germinación,. CI. formación de apresorios y estructuras de penetración, colonización y reproducción. CI EN. del patógeno. En todos los casos la unidad infectiva es la espora o el conidio que inician su proceso infectivo cuando las esporas viables son retenidas en la superficie. DE. del integumento y se realiza la asociación entre patógeno y hospederos.47. CA. La adhesión de la espora a la cutícula del hospedero es el primer contacto que hace la espora con la superficie del hospedero; las características físicas y. TE. químicas de las superficies de la cutícula del insecto y la espora son las responsables. IO. de esta unión. En algunos hongos, la adhesión es un fenómeno no específico,. BL. mientras en otros, esto es un proceso específico, determinado por componentes. BI. como la glicoproteínas que pueden servir como un receptor específico para las esporas.48. 31 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(46) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. La germinación es el proceso mediante el cual una espora emite uno o varios pequeños tubos germinativos, que al crecer o alargarse dan origen a las hifas. 49 La espora que germina en el insecto forma un tubo germinativo a través de las hifas. AS. penetrando en la cutícula del insecto, después que las hifas penetran en el insecto,. IC. después que las hifas penetran en el insecto forma una apresorio el cual ayuda a la. LO. G. adhesión de la espora.50. O. La penetración ocurre en la cutícula del insecto como resultado de la. BI. combinación entre la degradación enzimática de la cutícula y la presión mecánica. AS. por el tubo germinal. La acción enzimática está determinada principalmente por. CI. proteasas, lipasas y quitinasas, las cuales causan degradación de la cutícula, lo que. CI EN. facilita la penetración física.50Esta acción depende de las propiedades de la cutícula como su grosor, esclerotización y la presencia de sustancias antifúngicas y nutricionales, así las enzimas del hongo entomopatógeno degradan la cutícula del. DE. insecto ayudadas por presión mecánica, algunos hongos producen mucílago y un. CA. apesorio que asiste el anclaje de la espora a la superficie. Estructuras como estas crean focos de fuerza hidrostáticas, tan necesarias como las enzimas líticas en el. BL. IO. TE. sitio de penetración.51. Los hongos producen cuerpos hifales que flotan libremente e invaden el. BI. hemocele hasta ocasionar la muerte. La habilidad de un hongo para superar los mecanismos de defensa de sus huéspedes se debe en gran parte a la producción de toxinas, lo cual constituye uno de los componentes principales de patogenicidad y uno de los más difíciles de establecer; dentro de estos metabolitos se destacan. 32 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(47) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. toxinas como Destruxinas, Citocalasina, Beauvericina y Metaricina, algunas de las cuales son específicas para algunos géneros de hongos entomopatógenos. Algunos biotipos producen suficientes toxinas para causar la muerte del insecto antes de que. IC. AS. los órganos estén invadidos.52. G. Mediante las observaciones microscópicas realizadas se pudo comprobar. LO. verdaderamente que tanto Beauveria bassiana e Isaria fumosorosea fueron los que. O. colonizaron a las larvas de Spodpotera frugiperda, se evidenció la patogenicidad de. CI. AS. hogos mantienen su actividad entomopatógena.. BI. cada hongo sólo en la concentración mínima y el control, comprobando que ambos. CI EN. Anderson et al (1989) evidenciaron la compatibilidad de B.bassiana con diferentes insecticidas como fenvalerate, carbaril, entre otros.53 Vásquez, Saldarriaga y Pineda (2006) evaluaron la compatibilidad de B.bassianacon. DE. fenoxicarb (insecticida) los resultados fueron parecidos, con la diferencia que en. CA. éste trabajo no hubo crecimiento a la concentración mayor (1800ppm).54Lisneyi Machado Monteagudo (2016) evaluó la compatibilidad de B. bassiana frente a. TE. varios plaguicidas entre ellos abamectina, obteniendo resultados similares al de éste. IO. trabajo, con la diferencia que aquí se vió afectada la germinación de ambos. BL. hongos.55Grijalba, Gómez y Zuluaga realizaron un estudio de compatibilidad de I.. BI. fumosorosea con plaguicidas comerciales obteniendo resultados en la disminución en la germinación y crecimiento respecto al control, lo mismo ocurrió en el presente trabajo.56 La actividad entomopatógena de B. bassiana e I. fumosorosea a la concentración mínima no se vió afectada.. 33 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(48) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. CONCLUSIONES. . Las concentraciones de 900 ppm y 1800 ppm de abamectina inhiben la. AS. germinación de Beauveria bassiana y disminuyen significativamente la. La cocentración de 900 ppm de abamectina no afecta significativamente al. G. . IC. germinación de Isaria fumosorosea.. crecimiento de Isaria fumosorosea.. La concentración de 1800 ppm de abamectina inhibe el crecimiento de. CI. Beauveria bassiana.. AS. . O. La concentración de 900 ppm de abamectina no afecta significativamente al. BI. . LO. crecimiento de Beauveria bassiana.. La concentración de 1800 ppm inhibe el crecimiento de Isaria fumosorosea.. . La concentración de 900 ppm de abamectina no afecta la capacidad. CI EN. . BI. BL. IO. TE. CA. DE. entomopatógena de Beauveria bassiana ni tampoco de Isaria fumosorosea.. 34 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(49) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. RECOMENDACIONES. . Realizar un estudio de campo para evaluar la compatibilidad de. IC. Realizar el mismo procedimiento con otros tipos de insectos plaga para. BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI EN. CI. AS. BI. O. LO. poder comprobar la eficacia de los hongos en ellos.. G. . AS. Abamectina y Bauveria bassiana e Isaria fumosorosea.. 35 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(50) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS 1. Pérez-Consuegra, N.; C. Infante; C. Rosquete; JA. Ramos; C. Gonzáles. 2010. Disminuyendo la relevancia de los plaguicidas. Alternativas a su uso.. AS. Agroecología Universidad de Murcia (España) Vol.5:79-87. 2. France Andrés, Gerding Marcos y Sandoval Alici. Patogenicidad de. IC. aislamientos chilenos de Beauveria bassiana en adultos de Asynonychus. G. cervinus(Boh.)(Coleoptera: Curculionidae). Agric. Tec. 2002;62(4).. LO. 3. Orietta-Fernández, Larrea-Veja. Microorganismos antagonistas para El control fitosanitario. Avances enel Fomento de Productos Fitosanitarios No. O. Sintéticos. Manejo Integrado de Plagas (Costa Rica). 2001; 62:96-100.. BI. 4. Badii MH, Abreu JL. Control biológico una forma sustentable del control de. AS. plagas. International Journal of GoodConscience. 2006; 1(1):82-89. Disponible en:. CI. http://www.spentamexico.org/v1-n1/1(1)%2082-89.pdf. CI EN. 5. AZEVEDO, J. L.; MELO, I. S. Controle microbiano de insectos – pragas e seu melhoramento genético. In: Controle Biológico. Jaguariúna: Embrapa, 1998. Vol.1: 69-93.. y. Dale-Larraburre. DE. 6. Malpartida-Zevallos Jenny; Narrea-Cango Mónica. William. Patogenicidad de Beauveria bassiana (Bals) Vuill., sobre el gusano. CA. defoliador del maracuyá Dionejuno(Cramer) (Lepidoptera: Nymphalidae) en. TE. laboratorio. Ecol. apl. 2013; 12 (2): 75-81. 7. Vidal C, Fargues J. Climatic constraints for fungal biopesticides.Use of. IO. Entomopathogenic Fungi in Biological Pest Management. 2007, Kerala,. BL. India: p 39-55.. BI. 8. Deacon JW. Introducción a la micología moderna. México. Ed. Limusa. 1990. p. 89 9. Tafoya Felipe, Zuñiga-Delgadillo Mario, Alatorre Raquel, Cibrian-Tovar Juan, Stanley David. Pathogenicity of Beauveria bassiana(deuteromycota: hyphomycetes) against the cactus weevil, Metamasiuss pinolae (coleoptera: 36. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..