“Determinación de la Concentración Mínima Inhibitoria y Concentración Mínima Bactericida del aceite esencial de Citrus reticulata variedad satsuma (mandarina), en el crecimiento de Pseudomonas aeruginosa y de Staphylococcus aureus”

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(1)DI. RE. CC. IO. N. DE. SI S. TE. M. AS. DE. IN. FO. RM. ÁT IC. A. Y. CO. M. UN I. CA. CI. Ó. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. i Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(2) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AUTORIDADES DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO QUE OTORGAN EL TÍTULO PROFESIONAL DE. CA. CI. Ó. N. BIÓLOGO – MICROBIÓLOGO. Dr. Orlando Velásquez Benites. CO. M. UN I. RECTOR DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO. Y. Dra. Vilma Méndez Gil. RM. ÁT IC. A. VICERECTORA ACADÉMICA. FO. Dr. Santiago Uceda Duclós. DE. IN. SECRETARIO GENERAL DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO. AS. Dr. Hermes Escalante Añorga. DE. SI S. TE. M. DECANO DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS. Dr. César Jara Campos. DI. RE. CC. IO. N. SECRETARIO DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS. Ms. C. Pedro Alvarado Salinas. DIRECTOR DE LA ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA. ii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(3) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. PRESENTACIÓN. UN I. CA. CI. Ó. N. Señores miembros del jurado dictaminador:. M. En cumplimiento con las disposiciones establecidas en el Reglamento de Grados y. CO. títulos de la Facultad de Ciencias Biológicas de la Universidad Nacional de Trujillo, es. Y. honroso presentar y someter a vuestra consideración y elevado criterio el presente. ÁT IC. A. informe de tesis titulada: “Determinación de la Concentración Mínima Inhibitoria y. RM. Concentración Mínima Bactericida del aceite esencial de Citrus reticulata variedad. FO. satsuma (mandarina), en el crecimiento de Pseudomonas aeruginosa y de. IN. Staphylococcus aureus”, con el cual pretendo obtener el Título Profesional de Biólogo –. DE. Microbiólogo.. N. DE. SI S. TE. M. AS. Trujillo, abril del 2013.. CC. IO. ________________________. DI. RE. Br. Sandra Elisa Vidal Eustaquio. iii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(4) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. MIEMBROS DEL JURADO. Los suscritos, miembros del jurado, declaran que la presente tesis ha sido ejecutada en. Ó. N. concordancia con las normas de la Escuela Académico Profesional de Microbiología y. A. Y. ___________________________. CO. M. UN I. CA. CI. Parasitología de la Universidad Nacional de Trujillo.. ÁT IC. Ms. C. Pedro Alvarado Salinas. DE. IN. FO. RM. PRESIDENTE. AS. ___________________________. SECRETARIO. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI S. TE. M. Dr. Pedro Mercado Martínez. ___________________________ Ms. C. Anibal Quintana Diaz VOCAL. iv Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(5) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. APROBACIÓN. Los profesores que suscriben, miembros del Jurado Examinador, declaran que el. CI. esencial de Citrus. CA. Inhibitoria y Concentración Mínima Bactericida del aceite. Ó. N. presente Informe de Tesis titulado: “Determinación de la Concentración Mínima. UN I. reticulata variedad satsuma (mandarina), en el crecimiento de Pseudomonas. M. aeruginosa y de Staphylococcus aureus”, ha cumplido con los requisitos formales y. ÁT IC. A. Y. CO. fundamentales, siendo APROBADO por UNANIMIDAD.. RM. ___________________________. FO. Ms. C. Pedro Alvarado Salinas. M. AS. DE. IN. PRESIDENTE. Dr. Pedro Mercado Martínez SECRETARIO. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI S. TE. ___________________________. ___________________________ Ms. C. Anibal Quintana Diaz VOCAL. v Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(6) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DEL ASESOR. El que suscribe, profesor asesor de la tesis titulada“Determinación de la. Ó. N. Concentración Mínima Inhibitoria y Concentración Mínima Bactericida del aceite. UN I. Pseudomonas aeruginosa y de Staphylococcus aureus”, CERTIFICA:. CA. CI. esencial de Citrus reticulata variedad satsuma (mandarina), en el crecimiento de. CO. M. Que ésta ha sido desarrollada, de acuerdo al reglamento establecido por la Facultad de. Y. Ciencias Biológicas de la Universidad Nacional de Trujillo, estando en conformidad con. ÁT IC. A. su correspondiente proyecto, y que el informe ha sido redactado acogiendo las. RM. observaciones y sugerencias alcanzadas.. FO. Por lo tanto, autorizo a Sandra Elisa Vidal Eustaquio, continuar con el trámite del. DE. IN. reglamento correspondiente.. SI S. TE. M. AS. Trujillo, Abril del 2013.. DE. _________________________. IO. N. Dr. Pedro Mercado Martínez. DI. RE. CC. ASESOR. vi Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(7) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. N. DEDICATORIA. CI. Ó. A Dios. RM. ÁT IC. A. Y. CO. M. UN I. CA. Por iluminar mi sendero cada día y fortalecer mi espíritu en los momentos más difíciles de mi carrera y de mi vida.. FO. A mi madre. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI S. TE. M. AS. DE. IN. Porque creyó en mí, dándome ejemplos dignos de superación y entrega, porque estuviste apoyándome en los momentos más difíciles de mi vida y de mi carrera, pero más que nada, por su amor y sacrificio.. A mi tía Elva Por haberme apoyado siempre, por sus consejos, sus valores, por la motivación que me ha permitido ser una persona de bien.. vii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(8) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. A mi hija Lucero. ÁT IC. A. Y. CO. M. UN I. CA. CI. Ó. N. Porque es uno de los motivos más grandes que tengo para seguir adelante en la vida y su llegada me ha dado mucha felicidad.. A Marianella y Pool. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI S. TE. M. AS. DE. IN. FO. RM. Por ser un apoyo para mí, por ser mi fortaleza, porque los quiero mucho, y espero que también cumplan todas sus metas que se han trazado en la vida.. A la memoria de Fidelia Porque eres mi inspiración, porque significas mucho para mí, y tu recuerdo sigue vivo en mi corazón.. viii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(9) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AGRADECIMIENTOS. Al Dr. Pedro Mercado Martínez, mi asesor, por brindarme su apoyo con paciencia y. CI. Ó. N. dedicación, por ser mi guía y orientarme durante el desarrollo de la presente tesis de. UN I. CA. investigación.. CO. M. Al Ing. Modesto Lorenzo Vega Díaz, por sugerencias brindadas y por el tiempo que. ÁT IC. A. Y. me brindó en la extracción del aceite de mandarina.. Al profesor y amigo Miguel por apoyarme y brindarme su apoyo con materiales de. FO. RM. laboratorio para la realización de la presente tesis.. DE. IN. A mis amigos María, Richar, Jhomeny, Grace y Liz porque estuvieron conmigo. M. AS. durante el desarrollo del presente trabajo, y apoyarme en todo momento.. SI S. TE. A toda mi familia especialmente a mi prima Deysi por estar en los momentos más. DI. RE. CC. IO. N. DE. difíciles, por darme apoyo material, moral y espiritual.. ix Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(10) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. RESUMEN El presente trabajo tuvo por objetivo la determinación de la Concentración Mínima Inhibitoria y Concentración Mínima Bactericida del aceite. esencial de Citrus. Ó. N. reticulata variedad satsuma (mandarina), en el crecimiento de Pseudomona aeruginosa. CA. CI. y de Staphylococcus aureus. El aceite se obtuvo por hidrodestilación de arrastre con. UN I. vapor de agua a partir del flavedo de la mandarina. Los cultivos empleados para. M. determinar la CMI y la CMB fueron: Staphylococcus aureus y de Pseudomona. CO. aeruginosa. La CMI se determinó con el método de Macrodilución en caldo utilizando. Y. seis concentraciones; dando como resultado el 5% frente Staphylococcus aureus y el. ÁT IC. A. 13% frente Pseudomona aeruginosa. La CMB se obtuvo por el método de Dilución en. RM. agar, utilizando la técnica de siembra en superficie en agar Muller-Hinton y los. FO. resultados fueron 7% para Staphylococcus aureus y 15% para Pseudomona. IN. aeruginosa, El aceite esencial de Citrus reticulata variedad Satsuma “mandarina”. DE. resultó ser más eficaz contra los cultivos de Staphylococcus aureus que contra los. M. AS. cultivos de Pseudomonas aeruginosa. TE. Palabras clave: Concentración Mínima Inhibitoria, Concentración Mínima Bactericida,. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI S. aceite esencial, Macrodilución, dilución en agar.. x Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(11) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. ABSTRACT This study aimed at determining the Minimum Inhibitory Concentration and Minimum Bactericidal Concentration essential oil of Citrus reticulata variety Satsuma. Ó. N. (tangerine), on the growth of Pseudomonas aeruginosa and Staphylococcus aureus.. CA. CI. The oil is obtained by steam distillation method water from the flavedo of tangerine.. UN I. Cultures used to determine the MIC and the MBC were: Staphylococcus aureus and. M. Pseudomonas aeruginosa. The MIC was determined by the Macrodilution method. CO. using six concentrations, resulting in 5% for Staphylococcus aureus and 13% for. A. Y. Pseudomonas aeruginosa. WBC was obtained by the agar dilution method, using the. ÁT IC. technique of surface plating on Muller-Hinton agar and the results were 7% for. RM. Staphylococcus aureus and Pseudomonas aeruginosa 15%, so that the action of. AS. DE. IN. than against Pseudomonas aeruginosa.. FO. essential oil of Citrus reticulata var. Satsuma is better against Staphylococcus aureus. M. Keywords: Minimum Inhibitory Concentration, Concentration Minimal Bactericidal,. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI S. TE. essential oil, macro dilution, agar dilution.. xi Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(12) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. INDICE. Ó. N. Pág. ii. CA. CI. Autoridades De La Universidad Nacional De Trujillo. iii. UN I. Presentación. CO. M. Miembros Del Jurado. Y. Aprobación. ÁT IC. A. Del Asesor. RM. Dedicatoria. FO. Agradecimientos. v vi vii ix x. IN. Resumen. iv. xi. DE. Abstract. xii. M. AS. Índice. 1. SI S. TE. Introducción. 18 23. Referencias Bibliográficas. 24. Anexos. 32. DI. Conclusiones. RE. CC. IO. Discusión. 14. N. Resultados. 9. DE. Material Y Métodos. xii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(13) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. INTRODUCCION En la actualidad, se observa un aumento de infecciones producidas por una. N. amplia variedad de bacterias patógenas y el indiscriminado uso de fármacos para el. CI. Ó. tratamiento de estas infecciones, ha ocasionado un rápido desarrollo de resistencia de. CA. estos patógenos, así mismo, el uso de algunos conservantes sintéticos de la industria. UN I. alimentaria muestran ciertas características cancerígenas y teratogénicas por su. CO. M. toxicidad residual, por ello han despertado el interés en la búsqueda de nuevos agentes. Y. antimicrobianos para combatir las infecciones y superar los problemas de resistencia. ÁT IC. A. bacteriana y los efectos secundarios de algunos agentes disponibles, por lo que, actualmente se promueve el consumo alternativo de compuestos de origen natural. FO. RM. (derivados de vegetal)1-3.. IN. En investigaciones recientes se ha demostrado que tanto como Pseudomonas. han estimulado la búsqueda de tratamiento alternativo. AS. antibacterianos que. DE. aeruginosa que como Staphylococcus aureus presentan amplios patrones de resistencia. SI S. TE. M. constituyendo una extensa línea de investigación en los últimos años 4. Pseudomonas aeruginosa es la especie que más comúnmente se ha aislado en. DE. brotes de infecciones nosocomiales. P. aeruginosa. es una bacteria Gram negativa. IO. N. aislada frecuentemente en ambientes intrahospitalarios y también se ha asociado con la. CC. contaminación de fuentes comunes como agua, antisépticos y equipo médico, como. DI. RE. otros5,6. En el 2008 se presentaron casos de resistencia a los antibióticos en el hospital universitario de Lima-Perú contra los que se encontró el mayor porcentaje de resistencia fueron: ceftazidima (71%), aztreonam (62%), ciprofloxacina (57%) y gentamicina (55%)7. P. aeruginosa también representa un serio problema en la industria alimenticia. 1 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(14) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. ya que puede descomponer los alimentos que se mantienen en refrigeración. Los alimentos implicados son vegetales crudos, agua, leche no pasteurizada 8. Por otra parte, Staphylococcus aureus, forma parte de la familia. CI. Ó. N. Microccocaceae, el género Staphylococcus contiene más de 30 especies diferentes y. CA. muchas de éstas son habitantes naturales de la piel y las membranas mucosas del. UN I. hombre. S. aureus es un coco Gram-positivo, no móvil, es un microorganismo que. CO. M. posee características particulares de virulencia y resistencia a los antibióticos. En los humanos causa una amplia variedad de enfermedades infecciosas entre ellas. A. Y. “gastroenteritis” que es causado por la contaminación de alimentos. El principal. ÁT IC. impacto de este microorganismo se debe a las cepas de S. aureus resistentes a la. RM. meticilina (MRSA), que tradicionalmente se encontraban limitadas al ámbito. FO. hospitalario, produciendo infecciones nosocomiales a nivel mundial. Sin embargo, en. IN. años recientes las cepas MRSA han aparecido en la comunidad, provocando problemas. AS. DE. en muchos países 9,10.. TE. M. Por los problemas que causan estas bacterias, se han llevado a cabo estudios en soluciones para tales efectos, entre los cuales se. SI S. los cuales se intenta encontrar. DE. mencionan el uso de productos naturales como los aceites esenciales (compuestos. N. aromáticos producidos por varios géneros de plantas que poseen diferentes funciones. CC. IO. biológica) y/o extractos de vegetales con actividad antifúngica y antibactericida. RE. (contienen compuestos que son sintetizados por las plantas como mecanismo de defensa. DI. contra algunos microorganismos)11,12. Los aceites esenciales son líquidos aceitosos obtenidos a partir de diferentes. partes de las plantas como flores, yemas, semillas, hojas, ramas, corteza, hierbas, madera, frutos y raíces13. Además son compuestos olorosos, muy solubles en alcohol y 2 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(15) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. poco solubles en agua, estos han sido ampliamente investigados debido al amplio rango de acción antimicrobiano que presentan14. Los aceites esenciales se forman en las partes verdes (con clorofila) del vegetal. CI. Ó. N. y al crecer la planta son transportadas a otros tejidos, en concreto a los brotes en flor. Se. CA. desconoce la función exacta de un aceite esencial en un vegetal; puede ser para atraer. UN I. insectos para la polinización o para repeler insectos nocivos, o puede ser simplemente. CO. M. un producto metabólico intermedio 15.. Y. Los aceites esenciales son sustancias orgánicas constituidas por terpenos,. ÁT IC. A. sesquiterpenos y compuestos aromáticos (fenoles), todos ellos fácilmente separables ya sean por métodos químicos o físicos, y se les obtiene por destilación por arrastre con. FO. RM. vapor de agua dependiendo del método y la condición del vegetal13,16.. IN. El efecto antimicrobiana de los aceites esenciales debe su acción a la actividad. DE. que generan frente al microorganismo, al favorecer el deterioro de varios sistemas. M. AS. enzimáticos, incluyendo aquellos que están involucrados en la producción de energía y. SI S. TE. la síntesis de componentes estructurales17.. DE. Según Smith et al18, generalmente se reconoce que la acción antimicrobiana. N. depende del carácter lipofílico o hidrofílico del aceite esencial. Teniendo en cuenta la. CC. IO. gran cantidad de los componentes químicos presentes en los aceites esenciales, lo más. RE. probable es que su actividad antimicrobiana no se puede atribuir a un solo mecanismo,. DI. sino que se da a varios niveles en las células microbianas. Los aceites fenólicos (fenoles y ácidos fenólicos), se han encontrado como buenos inhibidores de bacterias, cuando el compuesto fenólico cruza la membrana celular, puede interactuar con las enzimas y con las proteínas causando un flujo contrario de protones a través de ella, afectando la actividad celular. Estos son caracterizados por un anillo aromático, un grupo hidroxilo u 3. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(16) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. otros 41 grupos como el terbutil o el isopropal, alteran la polaridad y la topografía de la molécula y por lo tanto pueden cambiar la afinidad de la misma con sitios de unión diferentes en la bacteria. La hidrofobicidad y descripciones esteáricas (tamaño. Ó. N. molecular y forma), también tienen papeles importantes en la actividad antibacteriana.. CI. La pérdida de potasio es la primera indicación de daño en las membranas de los. UN I. CA. microorganismos. Esto confirma el hecho de que la disrupción de las membranas. CO. M. contribuye al modo de acción de los grupos fenólicos como el eugenol y el timol. Por otro parte se ha encontrado que la actividad antimicrobiana presentada por. isopropanoides, estos serían. ÁT IC. denominados “terpenoides” o. A. Y. los aceites esenciales es debida en gran medida a la presencia de un tipo de compuestos los principales. RM. contribuyentes de la actividad antimicrobiana de los aceites esenciales, siguiendo en. FO. orden de actividad los terpenoides que contienen grupos alcoholes, luego los que poseen. DE. IN. aldehídos y por último los que tienen grupos cetónico 19, 20.. AS. Sin embargo, el mecanismo de acción específico de estos compuestos no ha. TE. M. sido claramente definido. Aunque, se propone como posible sitio de acción la. SI S. membrana celular donde los terpenoides actuarían desencadenando una serie de. DE. procesos que podrían arribar a la muerte bacteriana 21.. IO. N. En los últimos años, se han realizado diversas investigaciones para identificar. CC. los diferentes componentes presentes en los aceites esenciales en las diversas variedades. RE. de mandarina. Nelson en 1934 realizó un estudio de la composición química del aceite. DI. esencial de distintas variedades de mandarina que se cultivaban en Florida, Estados Unidos, en sus procedimientos extrae los aceites esenciales al comprimir el flavedo (cáscara), su estudio determina que variedades similares de mandarina poseían aceites con diferencias en su composición química22. 4. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(17) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. En estudios se identificaron y cuantificaron los componentes del aceite esencial extraído de tres variedades de mandarina; Citrus reshni (Mandarina Cleopatra), Citrus reticulata (Mandarina común) y Citrus reticulata Blanco o Citrus tangerina. Ó. N. (Mandarina Dancy), variedades de mandarina que se producen en Guatemala. Para. CI. realizar la separación, identificación y cuantificación de los principales componentes de. UN I. CA. los aceites esenciales se realizaron análisis mediante cromatografía de gases acoplada a. M. espectrometría de masas, esta técnica instrumental permitió establecer que los aceites. CO. esenciales poseían al menos 28 componentes, 7 de los cuales se encontraban presentes. Y. en las tres variedades de mandarina investigadas. Las tres variedades de mandarina. ÁT IC. A. presentaron altas concentraciones relativas del hidrocarburo monoterpénico limoneno. RM. seguido del γ-terpinoleno y en menor concentración relativa, el α-terpineol y β-pineno,. FO. los que posiblemente serían responsables de la acción bactericida de este aceite23.. IN. En el Perú se cultivan algunas variedades de mandarina, entre las cuales. DE. destacan las variedades, Satsumas (Okitsu, Owari y Clausellina), Clementinas. AS. (Clementina Fina, Oroval, Clemenules, Marisol, Oronules, Clemenpons, Esbal,. TE. M. Loretina, Hernandina), Tangerinas y Tangelos; teniendo en cuenta que en general el. SI S. flavedo de la mandarina se desecha, existe la posibilidad de viabilizar de manera. DE. comercial la extracción del aceite esencial del mismo mediante el método de arrastre. N. con vapor de agua24.. CC. IO. Los aceites esenciales están adquiriendo gran importancia ya que se ha. RE. reportado un efecto en el control de contaminaciones microbianas en diferentes tipos de. DI. alimentos: pan, carne, queso, frutas y hortalizas frescas25,26 .Se ha reportado que la aplicación de aceites esenciales de cítricos como. mandarina, cidra, limón y lima,. aumentó la vida útil de ensalada de frutas y redujeron la carga microbiana, sin alterar las características sensoriales del producto27.. 5 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(18) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. En estudios realizados con el aceite esencial de Citrus reticulata se han reportado que éste posee características antifúngicas, antimicrobianas y fitoterapéuticas, las cuales le hacen una especie promisoria para su uso en actividades farmacéuticas,. N. control de plagas en el sector agrícola y la preservación de los alimentos para evitar la. CA. CI. Ó. proliferación de microorganismos causantes de enfermedades28,29.. UN I. Germaná et al30 reportaron que el aceite esencial de mandarina presenta. CO. M. propiedades fungicidas, inhibiendo el desarrollo del hongo Colletotrichum acutatum.. Y. Cáceres31 y Bergonzelli et al32 extrajeron aceite esencial del flavedo de la. ÁT IC. A. mandarina Citrus reticulata Blanco o Citrus tangerina (Mandarina Dancy) para efectuar. RM. pruebas fitofarmacéuticas, comprobando que este aceite esencial presentaba capacidad. FO. inhibitoria hacia el crecimiento de bacterias tales como: Staphylococcus aureus,. IN. Escherichia coli, Bacillus subtilis, Pseudomona aeruginosa, Helycobacter pilori y. DE. Salmonella sp que resultan ser patógenas para el hombre.. M. AS. Martínez et al33, realizaron el estudio de la actividad antibacteriana del aceite. TE. esencial de mandarina variedad Dancy el cual presentó actividad antibacteriana del. SI S. tipo bactericida contra Bacillus subtilis, S. aureus y Listeria monocytogenes a todas la. DE. concentraciones excepto al 1%. La concentración mínima inhibitoria (CMI) del aceite. IO. N. esencial de mandarina variedad Dancy para B. subtilis fue de 9%, para S. aureus y L.. RE. CC. monocytogenes fue de 7%. Es enorme la difusión y popularidad de las terapias vegetales en el mundo.. DI. Entre las variadas aplicaciones terapéuticas de los vegetales se incluye la acción antibacteriana por lo que se aconsejan ya no como alternativas en los servicios de salud, sino como primera intención para diversas afecciones, antes de pasar a otros medicamentos más agresivos34,35. 6. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(19) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Los. aceites esenciales de orégano, jengibre, romero, naranja,. mandarina. variedad Dancy entre otros han sido reconocidos por muchos autores como portadores de principios activos eficaces en el control de diferentes especies microbianas, por lo. CI. Ó. un problema debido a la resistencia a antibióticos por el uso inadecuado de estos 36.. N. cual es importante resaltar la utilidad que representaría contra diversas bacterias que son. UN I. CA. Se ha estudiado la importancia de estos aceites debido a su disponibilidad, a lo poco o ningún efecto secundario y toxicidad que pueden causar al hombre, así como la. CO. M. mejor biodegradabilidad comparado con antibióticos y preservantes disponibles 37. Por. Y. todas estas propiedades, se ha evaluado el control que pueden ejercer estos compuestos. ÁT IC. A. contra microorganismos patógenos en alimentos, y por tanto la posibilidad de ser. RM. utilizados como un método de eliminación de microorganismos patógenos17.. FO. En la industria alimenticia los aceites esenciales extraídos del flavedo de las. IN. variedades de mandarina son importantes, ya que pueden ser utilizados como agentes. DE. antimicrobianos, actuando al mismo tiempo como saborizantes y preservantes contra la. AS. descomposición bacteriana. Igualmente puede utilizárseles en el sector de la salud, ya. TE. M. que pueden desarrollarse formulaciones que permitan la fabricación de medicamentos. SI S. genéricos como fitofármacos derivados de sus componentes.. DE. La actividad antimicrobiana del aceite esencial extraído del flavedo de la. N. mandarina variedad Dancy ha sido utilizado contra algunas cepas patógenas para el ser. CC. IO. humano, entre las cepas bacterianas que se pueden mencionar están las siguientes:. RE. Listeria monocytogenes, Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Bacillus subtilis,. DI. Pseudomonas aeruginosa, Helycobacter pilori y Salmonella31-33. Considerando que el Perú destaca en la siembra de cultivos de “mandarina”. Citrus reticulata desecha,. variedad Satsuma y por lo general el flavedo de la mandarina se. y debido a que Staphylococcus aureus y Pseudomona aeruginosa son. 7 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(20) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. responsables de enfermedades transmitidas por alimentos y causantes de infecciones intrahospitalarias, además,. que no existe documento alguno que indique que. concentración mínima de este aceite esencial se debe aplicar para lograr inhibir o causar. Ó. N. la muerte a estas bacterias es que se pretende obtener el aceite esencial del flavedo de. CI. esta mandarina y evaluar su actividad antimicrobiana frente a Staphylococcus aureus y. UN I. CA. Pseudomona aeruginosa.. M. Este documento brinda la oportunidad de evaluar la actividad antimicrobiana. CO. de aceite esencial de mandarina Citrus reticulata variedad Satsuma en otras especies. Y. de microorganismos y así poder utilizarlo como conservante de alimentos, sanitizante o. ÁT IC. A. desinfectante natural, así mismo encontrar nuevos agentes activos a partir de una fuente. FO. RM. de materia prima más económica y natural como es el flavedo de la mandarina.. IN. En este proyecto se plantearon los siguientes objetivos:. DE. Determinar la Concentración Mínima Inhibitoria (CMI) y la Concentración. AS. Mínima Bactericida (CMB) del aceite esencial Citrus reticulata variedad satsuma. TE. M. en el crecimiento de Pseudomonas aeruginosa y de Staphylococcus aureus. SI S. (Pruebas in vitro).. DE. Determinar si existe diferencia significativa del efecto inhibitorio y bactericida del. IO. N. aceite de Citrus reticulata variedad satsuma “mandarina” entre cultivos de la. DI. RE. CC. misma especie en ambas bacterias.. Establecer si existe diferencia significativa de las CMI y la CMB del aceite de. Citrus reticulata “mandarina” entre. cultivos de Pseudomonas aeruginosa y. cultivos de Staphylococcus aureus.. 8 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(21) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. MATERIAL Y MÉTODO. MATERIAL BIOLÓGICO. Ó. N. Nueve cultivos de Pseudomonas aeruginosa (FGB-001, FGB-002, FGB-003, FGB-. CA. CI. 004, FGB-005, FGB-006, FGB-007, FGB-008 y FGB-09), proporcionados por el. UN I. Laboratorio de Fisiología y Genética Bacteriana, obtenidas de ambientes intra. M. hospitalarios.. CO. Nueve cultivos de Staphylococcus aureus (ST-001, ST-002, ST-003, ST-004, ST-. A. Y. 005, ST-006, ST-007, ST-008 y ST-009), proporcionados por el Laboratorio de. ÁT IC. Referencia Regional “La Libertad” de la ciudad de Trujillo.. FO. RM. Citrus reticulata variedad Satsuma, obtenidos del mercado “La Hermelinda”.. IN. PROCEDIMIENTO. DE. 1. Obtención del aceite esencial de la mandarina. M. AS. 1.1. Preparación de los frutos de la mandarina.. TE. 1.1.1 Recolección y transporte de la muestra:. SI S. Las frutos maduros de mandarina (Citrus reticulata) variedad Satsuma se. DE. recolectaron del mercado “La Hermelinda” de Trujillo, las cuales al llegar laboratorio. se. almacenaron. en. refrigeración. para. evitar. la. IO. N. al. CC. desnaturalización de componentes.. DI. RE. 1.1.2 Selección Sólo. fueron utilizadas. aquellas. mandarinas. que. no. presentaron. magulladuras, cortes o demás lesiones en su flavedo que indicaron que no están aptas para entrar al proceso de extracción.. 9 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(22) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 1.1.3 Lavado Se realizó con el propósito de eliminar restos de partículas extrañas, suciedad y restos de tierra y pesticidas que puedan estar adheridos a la. Ó. N. materia prima.. CI. 1.1.4 Corte. UN I. CA. En esta etapa se extrajo la parte blanca de la cáscara y se cortó en trocitos. M. pequeños y se obtuvo solo el flavedo de las mandarinas, para aumentar el. Y. CO. área de contacto con el vapor de agua.. ÁT IC. A. 1.2. Extracción del aceite esencial. RM. Se realizó un proceso de hidrodestilación por arrastre con vapor de agua 38, 39 del flavedo en una pera de. FO. (Anexo.1), en donde se colocaron 150 g. IN. decantación el cual estuvo conectado a un balón de 1000ml que contenía agua. DE. éste último fue calentado en una cocina hasta alcanzar la temperatura de. AS. ebullición del agua, lo cual generó la salida de los aceites esenciales que. TE. M. estaba en la pera de decantación con en el flavedo de la mandarina. El aceite. SI S. esencial fue arrastrado por el vapor de agua, que al condensarse formó una. DE. mezcla de aceite más agua que se obtuvo en otra pera de decantación esta fue. N. cubierta debido a la inestabilidad fotoquímica de los componentes del aceite. fracción de aceite extraída. se. CC. IO. Después de una decantación simple, la. oleosa, la separación de la menor porción de agua se hizo con la ayuda de una. DI. RE. centrifugó a 6000 rpm durante 15 min, con el fin de separar la fase acuosa de la. jeringa. El tiempo de extracción fue de 80 min, contándose desde el instante en el que caerá la primera gota en la pera de decantación.. 10 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(23) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 1.3. Envasado El aceite fue envasado en frascos ámbar de 12 ml de capacidad, debido a que. Ó. N. son inestables fotoquímicamente.. CA. refrigeración a 4 ºC para los análisis. UN I. El aceite esencial se conservó en. CI. 1.4. Almacenamiento. CO. M. posteriores.. A. Y. 2. Preparación de inóculos bacterianos. ÁT IC. 2.1. Reactivación de los cultivos. RM. Cada cultivo bacteriano fue reactivado en caldo infusión cerebro corazón (BHI). FO. por 18 horas a 37 °C y posteriormente sembrado en Agar BHI por 18 horas a. IN. 37°C.. DE. 2.2. Estandarización del inóculo. M. AS. Se tomó una pequeña cantidad de colonias, para luego ser suspendidas en. TE. solución salina fisiológica estéril hasta alcanzar la turbidez equivalente al tubo. SI S. N°1 del Nefelómetro de Mac Farland (3x108 ufc/mL).. IO. N. satsuma.. DE. 3. Concentración Mínima Inhibitoria del aceite esencial de Citrus reticulata var.. CC. La Concentración Mínima Inhibitoria (CMI) del aceite esencial de mandarina se. RE. realizó con el método Macrodilución en Caldo 40,41 (Anexo 2) y por triplicado que. DI. consistió en lo siguiente: Se empleó un tubo control para cada una de las bacterias en estudio, con caldo Muller-Hinton y 20uL de la suspensión bacteriana que dieron como volumen final. 2mL. 11 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(24) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Se preparó una serie de seis tubos con caldo Muller-Hinton y se agregó las concentraciones de 3; 4; 5; 6; 7; 8 % de aceite esencial Citrus reticulata variedad satsuma más 20uL de la suspensión bacteriana de Staphylococcus aureus para dar. Ó. N. como volumen final 2 mL.. CI. Se preparó una serie de seis tubos con caldo Muller-Hinton y se agregó las. de Pseudomonas. M. variedad satsuma con 20uL de la suspensión bacteriana. UN I. CA. concentraciones de 12; 13; 14; 15; 16; 17 % de aceite esencial Citrus reticulata. CO. aeruginosa para dar como volumen final 2 mL.. Y. Luego los tubos del grupo control y el experimental se llevaron a incubar a 37°C. ÁT IC. A. por 24 horas.. RM. La lectura se realizó del primer tubo que no presentó turbidez la cual, se tomó como. FO. CMI del aceite esencial Citrus reticulata variedad satsuma.. DE. solvente tween 8042 al 0.1%.. IN. Debido a la poca solubilidad del aceite, se le agregó al caldo Muller-Hinton el. AS. 4. Concentración Mínima Bactericida del aceite esencial Citrus reticulata var.. SI S. TE. M. satsuma. 43, 44. (Anexo3) y. DE. Para determinar la CMB se utilizó el método de Dilución en Agar. N. se realizó por triplicado, que consistió en extraer 100 µL de los tres primeros tubos. CC. IO. en los cuales no se observó crecimiento visible de la bacteria (inhibición de. RE. crecimiento); esta suspensión fue inoculada en placas Petri con la técnica de siembra. DI. en superficie. También se utilizó una placa control para cada una de las bacterias: un control positivo en agar Muller-Hinton con 100 µL de inóculo (anexo 4). Las placas de control y las placas experimentales se dejaron incubar durante 24 horas a 37 °C.. 12 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(25) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Luego se procedió con la lectura; se consideró CMB la placa que no hubo crecimiento bacteriano o la menor concentración de aceite de Citrus reticulata var. Satsuma que mató el 99,9% del inóculo original.. CI. Ó. N. 5.- Análisis Estadístico. CA. El proceso y análisis de los datos obtenidos de los resultados de las CMI y CMB. UN I. del aceite esencial de citrus reticulata fueron sometidos al test de Kolmogorov-. CO. M. Smirnov para determinar la distribución normal de los valores (Normal: p>0.05, y. Y. No Normales: p<0.05). Como los valores de la CMI y CMB no siguieron una. ÁT IC. A. distribución normal a excepción de la CMB de Staphylococcus aureus, en este caso se utilizó el Anova de un factor para determinar la significancia de los valores, los. RM. demás fueron analizados con el test no paramétrico de Kruskal-Wallis para. IN. FO. determinar la diferencia significativa entre los grupos; para eso se hizo uso de los. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI S. TE. M. AS. Microsoft Office Excel 2007.. DE. siguientes programas estadísticos: SPSS Statistics 17.0 para Windows, G-Stat 2.0 y. 13 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(26) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. RESULTADOS En la tabla 1.Se muestra los porcentajes del efecto inhibitorio y bactericida del aceite. N. esencial Citrus reticulata variedad Satsuma “Mandarina”, frente a los cultivos de. CI. Ó. Staphylococcus aureus, donde los promedios de la Concentración Mínima Inhibitoria. UN I. CA. (CMI) y la Concentración Mínima Bactericida (CMB) fueron 5 y 7% respectivamente. En la tabla 2. Se observa los porcentajes del efecto inhibitorio y bactericida del aceite. CO. M. esencial Citrus reticulata variedad Satsuma “Mandarina”, frente a los cultivos de. Y. Pseudomonas aeruginosa, donde los promedios de la Concentración Mínima Inhibitoria. ÁT IC. A. y la Concentración Mínima Bactericida fueron 13 y 15% respectivamente.. RM. En la fig.1 se compara los promedios de los porcentajes de CMI y CMB del aceite frente a Pseudomonas aeruginosa y. FO. esencial Citrus reticulata variedad Satsuma. IN. Staphylococcus aureus y se observa que existe diferencia significativa del efecto del. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI S. TE. M. AS. DE. aceite entre ambas bacterias (p<0.05).. 14 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(27) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Tabla 1.Porcentaje de la Concentración Mínima Inhibitoria Mínima Bactericida del aceite de. Citrus. y Concentración. reticulata. var. Satsuma. CI. Ó. N. “mandarina” frente a los cultivos de Staphylococcus aureus.. CA. Cultivos de Concentración Mínima. Concentración Mínima. Inhibitoria (%). Bactericida (%). UN I. Staphylococcus. CO. M. aureus 5. ST-002. 5. ST-003. 6. ST-004. 5. 7. ST -005. A ÁT IC. RM. FO. 7. 5. 6. 6. 7. 5. 7. ):. 5. 7. No existe diferencia significativa (p>0.05). DI. RE. CC. IO. N. DE. Promedio (. 5. IN. SI S. ST -009. 7. 7. DE. TE. M. AS. ST -007. 5. 7. 5. ST -006. ST -008. Y. ST-001. Tabla 2. Porcentajes de la Concentración Mínima Inhibitoria y Concentración Mínima Bactericida. del aceite de. Citrus. reticulata. var. Satsuma. “mandarina” frente a los cultivos de Pseudomonas aeruginosa. 15 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(28) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Cultivos de Concentración Mínima. Concentración Mínima. Inhibitoria (%). Bactericida (%). FGB-001. 13. 15. FGB-002. 14. 16. FGB-003. 13. FGB-004. 13. FGB-005. 14. FGB-006. 13. FGB-007. 14. FGB-008. 13. Pseudomonas. UN I. CA. CI. Ó. N. aeruginosa. CO. M. 15. 16. RM. 14. 16. 13. 15. IN. FO. 15. TE. M. AS. ):. 15. 15. DE. FGB-009 Promedio (. ÁT IC. A. Y. 15. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI S. No existe diferencia significativa (p>0.05). 16 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(29) 16. Ó. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 14. UN IC AC I. 15 13. CO. M. 12. Y. 10. 7 5. P. aeruginosa. RM. 6. S.aureus. ÁT IC A. 8. FO. 4. b. b. a. IN. a. DE. 2. AS. 0. CMB %. SI ST. EM. CMI %. DE. Letras diferentes: existe diferencia significativa entre grupos. frente. a. Staphylococcus. CC I. Satsuma. aureus. y. frente. a. Pseudomonas. DI RE. var.. O. N. Fig. 1 Comparación de los promedios de los porcentajes de CMI y las CMB (%) del aceite esencial de Citrus reticulata. 17 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.. aeruginosa.. (p>0.05)..

(30) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DISCUSIÓN. N. En los trabajos que actualmente se han realizado, se ha demostrado la capacidad. AC I. Ó. antimicrobiana que presentan los aceites esenciales de diversas especies de vegetales, como. IC. los extraídos del pericarpio (flavedo) de frutos cítricos, estos aceites actúan sobre una. M UN. variedad de bacterias, hongos y otros patógenos45.. CO. El efecto antimicrobiano de estos aceites esenciales se debe a que poseen. Y. sustancias fenilpropánicas y terpénicas con actividad biológica. Sin embargo su mecanismo. IC. A. de acción aún no está claramente establecido, aunque se cree que involucra el rompimiento. ÁT. de la membrana celular donde estos compuestos surtirían un efecto desencadenando una. FO. RM. serie de procesos que podrían arribar a la muerte bacteriana21,46,47.. IN. En este estudio como se esperaba, el aceite esencial de Citrus reticulata Var.. DE. Satsuma presentó efecto antibacteriano contra los cultivos de Staphylococcus aureus y. EM AS. Pseudomonas aeruginosa.. ST. En la Tabla 1 se demuestra que, el aceite esencial de Citrus reticulata Var.. SI. Satsuma tiene efecto inhibitorio y bactericida frente a Staphylococcus aureus presentando. DE. como promedio una CMI del 5% y una CMB de 7%, así mismo se muestra que el aceite. IO. N. esencial actúa significativamente por igual contra los cultivos de Staphylococcus aureus. En la Tabla 2, los resultados demuestran que, el aceite esencial de Citrus reticulata. DI. RE. CC. con p<0.05.. Var. Satsuma tiene efecto inhibitorio y bactericida frente a Pseudomonas aeruginosa presentando como promedio una CMI del 13% y una CMB de 15%, así mismo se muestra. 18 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(31) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. que el aceite esencial actúa significativamente por igual. contra los cultivos de. N. Pseudomonas aeruginosa con p<0.05.. AC I. Ó. En la fig.1se demuestra que, los promedios de CMI y la CMB del aceite esencial Staphylococcus aureus es significativamente. IC. Citrus reticulata Var. Satsuma frente a. M UN. menor, que los promedios de CMI y CMB de este aceite frente a Pseudomonas aeruginosa,. CO. presentando un p>0.05.. Y. Estos resultados determinan que, el aceite esencial de Citrus reticulata Var.. ÁT. IC. A. Satsuma es más eficaz contra Staphylococcus aureus que contra Pseudomonas aeruginosa.. RM. Existen trabajos similares que corroboran con lo antes mencionado, como el de. FO. Dabbah et al, donde aceites esenciales de cítricos entre ellos, el aceite esencial de. IN. “mandarina”, tuvo mayor actividad antibacteriana frente a cepas como S. aureus y menor. DE. actividad contra cepas de P. aeruginosa. Así mismo los resultados obtenidos por Martinez. EM AS. et al, determinan que la actividad antimicrobiana de la “mandarina” variedad Dancy. ST. resulta más eficaz contra bacterias Gram positivas como S. aureus, E. faecalis, E. coli,. SI. Klebsiella sp y Proteus mirabilis, que contra bacterias Gram negativas como P. aeruginosa. DE. La diferencia que existe en el efecto de este aceite esencial de mandarina frente a. IO. N. Staphylococcus aureus y Pseudomonas aeruginosa se debería a la diferencia de la. CC. estructura y constitución de su pared celular, Pseudomonas aeruginosa es una bacteria. DI. RE. Gram negativa presenta una pared celular más compleja que está compuesta por dos capas situadas por fuera de la membrana citoplasmática, la primera y más cercana a la membrana es similar (más delgada) a la de las bacterias Gram positivas como Staphylococcus aureus,. está constituida por péptidoglicanos,. la segunda denominada membrana externa está 19. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(32) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. constituida por fosfolípidos con ácidos grasos saturados y entre las dos capas se halla un espacio periplásmico rico en enzimas, esta estructura les confiere un mayor grado de. Ó. N. resistencia a los agentes antimicrobianos48. Además poseen mecanismos de defensa como:. AC I. presencia de b-lactamasas, modificación enzimática del agente antimicrobiano, cambios en. IC. la permeabilidad de la membrana externa debida a la presencia de bombas de expulsión,. CO. M UN. etc, que generan dificultades para encontrar sustancias que sean efectivas contra ellas49. El estudio sobre la caracterización de los componentes del aceite de algunos. A. Y. cítricos como la mandarina, de Bergonzelli et al. en el 2003, han demostrado que este. ÁT. IC. aceite tiene los siguientes compuestos como componentes mayoritarios: limoneno, α-. RM. pineno, β-pineno, mirceno, p-cimeno, γ-terpineno, linalol, acetato de linalilo, α-terpineol,. FO. citronelol, acetato de geranilo, N-metil antranilato de metilo, entre otros . La identificación. IN. del componente principal de estos cítricos lo llevó a cabo mediante cromatografía de gases,. DE. su estudio determinó que más del 90% del aceite de Citrus reticulata lo compone el. EM AS. terpenoide limoneno el cual presenta una gran capacidad inhibitoria de crecimiento. ST. bacteriano en los alimentos, principalmente sobre las bacterias Gram positivas 32.. DE. SI. El mecanismo de acción de los componentes de Citrus reticulata variedad satsuma no está esclarecida hoy en día, pero se sabe que los posibles sitios de acción de este. IO. N. aceite serían sobre la pared celular y/o membrana celular y sobre su acción enzimática o su. La actividad antimicrobiana de Citrus reticulata variedad satsuma son similares. DI. RE. CC. estructura genética de su protoplasma50.. con relación a la mayoría de trabajos con otros aceites esenciales estudiados porque estos presentan más actividad biológica contra bacterias Gram positivas que contra. Gram. 20 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(33) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. negativas, sin embargo las concentraciones de aceites utilizadas frente a estas bacterias varían entre las especies de vegetales , esto se debería a mayormente a las diferencias en. Ó. N. sus componentes, también puede influir el método de extracción, el índice de madurez, la. IC. AC I. variedad y las condiciones en que se almacenen los aceites esenciales, etc 51.. M UN. Entre estos trabajos, se presenta el realizado por Juárez et al52 en Citrus sinensis (cítrico similar a citrus reticulata) inhibe mejor. a cepas de. CO. L. “naranja dulce”. microorganismos Gram positivos, como: Staphylococcus aureus ATCC 25933 y. A. Y. Staphylococcus epidermidis, demostrando actividad antibacteriana significativa a. ÁT. IC. concentraciones de 100 y 50%, respectivamente, que con los microorganismos Gram. RM. negativos: Bacillus subtilis, Escherichia coli y Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853.. IN. FO. Por otra parte Vásquez et al39, realizaron la extracción y caracterización del aceite. DE. esencial de jengibre (zingiber officinale), el cual mostró ser más eficaz contra cepas. EM AS. Staphylococcus aureus que, contra cepas Pseudomonas aeruginosa, mientras que el trabajo de Bastos Oyarzabal et al 53 afirma que aceite esencial de Origanum vulgare L. ante. ST. bacterias aisladas en leche de bovino, tuvo un buen efecto contra bacterias Gram positivas,. DE. SI. la concentración bactericida mínima media varió de 0,23 a 2 % frente a las bacterias aisladas de leche bovina, con la menor concentración para el género Streptococcus y la. IO. N. mayor para Staphylococcus coagulasa negativa. En cuanto a las cepas patrones la. En cuanto al trabajo de Carhuapoma et al54 al evaluar la actividad antibacteriana. DI. RE. CC. concentración bactericida mínima fue de 3,17 % para S. aureus.. del aceite esencial de Minthostachys mollis griseb “ruyaq muña”, obtuvo que se este aceite es menos eficaz contra P. aeruginosa que presentó 9 % (p/v) de CMI y 10 % (p/v) de CMB,. 21 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(34) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. con respecto a otras especies bacterianas, estos resultados se debería a los mecanismos de. N. resistencia ya mencionados con anterioridad que presenta esta bacteria.. AC I. Ó. Todos estos trabajos entre otros, corroboran con los resultados obtenidos, por lo. IC. que se afirma que, el aceite esencial Citrus reticulata variedad satsuma es más eficaz frente. M UN. a las bacterias de Staphylococcus aureus (Gram positiva), que contra Pseudomonas. CO. aeruginosa (Gram negativa), esto se debido a los componentes que son propios de este aceite así también a las diferentes estructuras y constitución de sus membranas presentes en. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI. ST. EM AS. DE. IN. FO. RM. ÁT. IC. A. Y. estas bacterias55.. 22 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(35) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. CONCLUSIONES. Ó. N. 1. El aceite esencial de Citrus reticulata variedad Satsuma “mandarina” tiene efecto. AC I. inhibitorio y bactericida frente a Staphylococcus aureus y Pseudomonas aeruginosa. IC. presentando así, una CMI de 5 %, CMB de 7% y CMI de 13%, CMB 15 %. El efecto antimicrobiano del aceite esencial de Citrus reticulata variedad Satsuma. CO. 2.. M UN. respectivamente.. “mandarina”. Y. no presentó diferencia significativa entre cultivos de la misma. IC. A. especie.. ÁT. 3. El aceite esencial de Citrus reticulata variedad Satsuma “mandarina” resultó ser. RM. significativamente más eficaz contra los cultivos de Staphylococcus aureus que. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI. ST. EM AS. DE. IN. FO. contra los cultivos de Pseudomonas aeruginosa.. 23 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(36) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS Sauceda E.; Uso de Agentes Antimicrobianos Naturales en la. N. 1. Rodríguez. AC I. Ó. Conservación de frutas y hortalizas. Ra Ximhai, 2011; (7):1. M UN. IC. 2. Hersom, A.C y Hulland E.D.; Conservas Alimenticias. Editorial Acribia S.A.. CO. Zaragoza. España. 1974; pp. 61-62.. Y. 3. Mimica-dukic N, Bozin B, Sokovic M, Mihajlovic B, Matavul M.Antimicrobial and. IC. A. antioxidant activities of three Mentha species essential oils. Planta Med. 2003 May;. RM. ÁT. 69 (5): 413-419.. FO. 4. Gil de M. Mónica. Staphylococcus aureus: Microbiología y aspectos moleculares de. IN. resistencia a la meticilina. Rev Chil infect.2000;.17(2): 145-152. DE. 5. Wendt C, Herwaldt LA.; Epidemics: Identification and management. En: Wenzel. EM AS. RP, Ed. Prevention and control of nosocomial infections. 3rd edition. Baltimore. ST. (MD): Williams and Wilkins. 1997; 177-213. SI. 6. García Rodriguez; Casal M.; Rodríguez F. Evolución de la resistencia antibiótica. DE. de Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli y Bacteriodes fragilis (1997-2001).. CC. IO. N. Rev Esp Quimioterap,2003;vol. 16(4):421-427. RE. 7. Luján Roca, Ibarra Trujillo, Mamani Huamán. Resistencia a los antibióticos en. DI. aislados clínicos de Pseudomonas aeruginosa en un hospital universitario en Lima,. Perú. Rev Biomed. 2008; 19:156-160.. 24 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

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(39) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 23. Mazariegos J.; Identificación y cuantificación de los componentes principales del aceite esencial del flavedo (cáscara) de Citrus reshni (Mandarina Cleopatra), Citrus. por medio de Cromatografía de Gases acoplada a. AC I. (Mandarina Dancy). Ó. N. reticulata (Mandarina común) y Citrus reticulata Blanco o Citrus tangerina. M UN. IC. Espectrometría de Masas. [Tesis en Química]. Universidad de San Carlos de. CO. Guatemala. Facultad de Ciencias Químicas y Farmacia. 2008; 117 p.. 24. Lozano A, Loarca G, Lecona S, Mejía E. El orégano: Propiedades, Composición Y. A. Y. Actividad Biológica De Sus Componentes. Archivos Latinoamericanos de Nutrición. ÁT. IC. (ALAN). 2005. (4).. FO. RM. 25. Martínez M.; Aceites Esenciales. Facultad de Química Farmacéutica. Medellín.. IN. Universidad de Antioquía. 2001; Pp. 1-12.. DE. 26. Davidson P.M.; Chemical preservatives and natural antimicrobial compounds. En:. EM AS. Food Microbiology: and Fundamentals and frontiers, 2 Ed. Doyle MP, LR Beuchat,. ST. TJ Montville (Eds.). ASM Press, Washington, D.C., USA. 2001; 29: 593-627. SI. 27. Lanciotti R., Gianotti A., Patrignani F., Belletti N., Guerzoni E.. and Gardini. DE. F.; Use of Natural aroma compounds to improve shelf-life and safety of minimally. CC. IO. N. processed fruits. Trends Food Sci. Tech., 2004; 15: 201-208.. RE. 28. Carrillo I. Efecto de la actividad de agua, pH y temperatura de incubación en la. DI. capacidad antimicótica de mezclas de benzoato de sodio-vainilla. UDLAP. 1999. 29. Dabbah R., Edwards A., Motas W. Antimicrobial Activity of Some Citrus Fruits Oils on Selected Food- Borne Bacteria. Appl. Microbiology. 1970. 19 (1): 27-31. 27 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

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(44) RM. ÁT. IC. A. Y. CO. M UN. IC. AC I. Ó. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI. ST. EM AS. DE. IN. FO. ANEXOS. 32 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

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