Efecto antibacteriano in vitro del extracto etanólico de hojas de Smallanthus sonchifolius “Yacón” sobre Escherichia coli y Staphylococcus aureus

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(1)Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE MEDICINA. IC. IN. A. -U. NT. ESCUELA PROFESIONAL DE MEDICINA. ED. TESIS:. M. Efecto antibacteriano in vitro del extracto etanólico de hojas de Smallanthus. DE. sonchifolius “Yacón” sobre Escherichia coli y Staphylococcus aureus. MEDICO CIRUJANO. FA. CU. LT. AD. PARA OPTAR EL TÍTULO PROFESIONAL DE:. AUTORA: Medina Marreros, Kathy Karold ASESORA: Dra. Mejía Delgado, Elva Manuela Trujillo – Perú 2018. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(2) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. DEDICATORIA. A Dios, por permitirme estar cumpliendo una. NT. de mis mayores metas, por guiarme cada día,. -U. ayudarme a caminar en el camino correcto y. ED. IC. IN. A. ser mi luz cuando he tenido oscuridad.. M. A mi padre Juan Antonio Medina Barrios por. DE. su apoyo incondicional en este largo camino, por ser mi guía todos los días de mi vida, por. AD. enseñarme a luchar por mis sueños y a nunca. FA. CU. LT. darme por vencida.. A mi madre Cruz Marreros López, por enseñarme con su sacrificio a diario, por motivarme siempre y caminar conmigo dándome fuerza sin importar la distancia.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/. 2.

(3) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. AGRADECIMIENTOS. A mi querida asesora, Dra. Elva Mejía. NT. Delgado, por su considerable e incondicional. -U. apoyo, por guiarme y acompañarme en cada. IC. A mis mejores amigas Andrea Noelia, Sallie,. IN. A. proceso de la realización de este trabajo.. ED. Elisa y Katherine por su apoyo incondicional. FA. CU. LT. AD. DE. ha permitido compartir.. M. y motivación durante estos años que Dios nos. A la Dra. Marilú Soto, por su apoyo en la ejecución del proyecto, el Laboratorio de Farmacognosia – Farmacobotánica de la Facultad de Farmacia y Bioquímica de esta universidad.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/. 3.

(4) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. ÍNDICE. NT. RESUMEN………………………………………………..………………….……...5. -U. ABSTRACT……………………………………………….………………….….….6. A. I. INTRODUCCIÓN…………………………………………………………...…...7. IC. IN. II. MATERIAL Y MÉTODO……………………………...………………….…..15. ED. III. RESULTADOS………………………………………………….………..…....26. M. IV. ANÁLISIS Y DISCUSIÓN…………………….……………………….….….32. DE. V. CONCLUSIONES ……………………………………..……………………….37. AD. VI. RECOMENDACIONES ………………………..…………………………… 38. LT. VII. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS………………………………….….. 39. FA. CU. VIII. ANEXOS…………………………………..………………………………....43. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/. 4.

(5) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. Efecto antibacteriano in vitro del extracto etanólico de hojas de Smallanthus sonchifolius “Yacón” sobre Escherichia coli y Staphylococcus aureus ____________________________________________________________________. NT. RESUMEN OBJETIVO: Conocer el efecto antibacteriano in vitro del extracto etanólico de hojas. -U. de Smallanthus sonchifolius “Yacón” sobre Escherichia coli y Staphylococcus aureus. MATERIALES Y MÉTODOS: Se realizó un estudio experimental que evaluó el. A. efecto antibacteriano in vitro de 3 concentraciones (50%, 75% y 100%) del extracto. IN. etanólico de hojas de Smallanthus sonchifolius “Yacón” sobre Escherichia coli y. IC. Staphylococcus aureus; utilizando etanol 70° GL como tratamiento del grupo control. Se utilizó el método de difusión de discos en base a los fundamentos descritos por. ED. Kirby-Bauer, recomendados en los estándares NCCLS para Pruebas de. M. Susceptibilidad Antimicrobiana. El método de difusión en discos se aplicó para el grupo experimental y el grupo control. Posteriormente se evaluó la sensibilidad. DE. haciendo uso de la escala de Duraffourd. RESULTADOS: El extracto etanólico de hojas de “yacón” no posee efecto antibacteriano sobre la cepa de Escherichia coli;. AD. pero si posee efecto en la cepa de Staphylococcus aureus, para las concentraciones de 50% y 75% del extracto etanólico se hallaron dentro del rango de “sensibilidad límite”. LT. de la escala de Duraffourd y para la de 100% un rango de “sensibilidad media”.. CU. Además se encontró diferencia estadísticamente significativa con el uso de las diferentes concentraciones. CONCLUSIÓN: In vitro, el extracto etanólico de hojas. FA. de Smallanthus sonchifolius “Yacón” sobre Escherichia coli no mostró actividad antibacteriana y sobre Staphylococcus aureus si mostró efecto antibacteriano en sus tres concentraciones (50%, 75% y 100%).. PALABRAS CLAVE: Smallanthus sonchifolius, Escherichia coli, Staphylococcus aureus.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/. 5.

(6) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. Antibacterial in vitro effect of the ethanolic extract of leaves of Smallanthus sonchifolius "Yacón" on Escherichia coli and Staphylococcus aureus ____________________________________________________________________. NT. ABSTRACT OBJECTIVE: To know the antibacterial effect in vitro of the ethanolic extract of. -U. leaves of Smallanthus sonchifolius "Yacón" on Escherichia coli and Staphylococcus aureus. MATERIALS AND METHODS: An experimental study was carried out that. A. evaluated the antibacterial effect in vitro of 3 concentrations (50%, 75% and 100%) of. IN. the ethanolic extract of leaves of Smallanthus sonchifolius "Yacón" on Escherichia. IC. coli and Staphylococcus aureus; using 70 ° GL ethanol as treatment of the control group. The disk diffusion method was used based on the fundamentals described by. ED. Kirby-Bauer, recommended in the NCCLS standards for Antimicrobial Susceptibility. M. Tests. The disk diffusion method was applied for the experimental group and the control group. Subsequently the sensitivity was evaluated using the Duraffourd scale.. DE. RESULTS: The ethanolic extract of "yacon" leaves has no antibacterial effect on the Escherichia coli strain; but if it has an effect on the Staphylococcus aureus strain, for. AD. the 50% and 75% concentrations of the ethanolic extract, a range of "average sensitivity" was found within the "limit sensitivity" range of the Duraffourd scale and. LT. for the 100% range". In addition, a statistically significant difference was found with. CU. the use of the different concentrations. CONCLUSION: In vitro, the ethanolic extract of leaves of Smallanthus sonchifolius "Yacon" on Escherichia coli showed no. FA. antibacterial activity and on Staphylococcus aureus if it showed antibacterial effect in its three concentrations (50%, 75% and 100%).. KEYWORDS: Smallanthus sonchifolius, Escherichia coli, Staphylococcus aureus.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/. 6.

(7) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. I.. INTRODUCCIÓN. Las enfermedades infecciosas constituyen un importante problema para la salud y son la principal causa de muerte en todo el mundo1. La Organización Mundial de la. NT. Salud y los Centros para el Control de Enfermedades de Estados Unidos han descrito más de 100 enfermedades infecciosas que afectan a humanos o a animales que. -U. recientemente han aumentado o que conminan a aumentar en alcance geográfico,. A. actividad epidémica y/o gravedad. 3. IN. Las infecciones nosocomiales son una causa importante de morbimortalidad en. IC. pacientes hospitalizados y constituyen una carga social y económica significativa para. ED. el paciente y el sistema de salud1.. M. Para las infecciones nosocomiales los microorganismos más frecuentes según EPINE en un informe de los hospitales de Madrid en el año 2005 fueron Escherichia. DE. coli (16,3%), Pseudomonas aeruginosa (10%) y Staphylococcus aureus (6,4%)1; y en. AD. el informe del Instituto Nacional de la Salud en el año 2008, se demostró que los microorganismos más frecuentes en los hospitales de Lima-Perú son: Escherichia coli. LT. (22.3%), Staphylococcus coagulasa negativa (20.1%), Staphylococcus aureus (10.2%). CU. y Klebsiella pneumoniae (9.9%).2. FA. Las enterobacterias son el grupo de microorganismos que producen infecciones. tanto en pacientes inmunocompetentes como en inmunodeprimidos y pueden ser adquiridos en la comunidad como en ambientes hospitalarios. Son causantes de una gran variedad de enfermedades en el ser humano, como el 30% de las septicemias, más del 70% de las infecciones del tracto urinario (ITU) y las infecciones intestinales.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/. 7.

(8) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. Algunas enterobacterias son parte de la microbiota intestinal normal, aún así pueden producir infecciones oportunistas, entre los más frecuentes figuran: Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Proteus mirabilis, Citrobacter freundii, Serratia marcescens.. NT. Mientras que otros géneros siempre se asocian a enfermedades, por presentar factores moleculares de patogenicidad, pudiendo causar infecciones en personas previamente. -U. sanas sin factores predisponentes, estas bacterias son: Shigella, Samonella, Yersinia y. A. Escherichia coli (especies patógenas).5. IN. La E. coli es el principal microorganismo anaerobio facultativo que reside en el. IC. intestino grueso formando parte de la flora normal, asimismo es aislado con mayor. ED. frecuencia como agente causal de infecciones de las vías urinarias, heridas, neumonías,. DE. el ambiente hospitalario.5. M. meningitis y septicemia tanto en las infecciones comunitarias como las adquiridas en. Las infecciones provocadas por el género Staphylococcus son un problema de. AD. salud a nivel mundial que ha aumentado en los últimos años. Estas bacterias son causantes de muchas infecciones de piel y tejidos blandos, pudiendo llegar a un nivel. LT. sistémico. Estas infecciones se convierten en un problema mayor, debido a la gran. CU. capacidad de los Staphylococcus de desarrollar múltiples mecanismos de resistencia. FA. contra diferentes tipos de antibióticos (β- lactámicos y no β-lactámicos), limitando las alternativas de tratamiento y orientando a los clínicos al uso de los glicopéptidos6, 7. Staphylococcus aureus es el mayor patógeno humano causante de infecciones a la piel y tejidos, neumonía, septicemia e infecciones por dispositivos asociados. La emergencia de cepas resistentes a meticilina y otros agentes antibacteriales ha llegado. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/. 8.

(9) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. a ser una preocupación mayor especialmente en el ambiente hospitalario, esto es por la alta mortalidad debido a las infecciones sistémicas ocasionadas por Staphylococcus aureus meticilino resistente (SAMR)6.. NT. En investigaciones desarrolladas en nuestro país, se ha reportado el incremento de las infecciones en poblaciones de menores de edad por especies del género. -U. Staphylococcus y cambios en sus patrones de resistencia8. En estudios similares, sobre. A. los mecanismos de resistencia en población semejante de países vecinos, como Chile,. IN. también existen reportes del incremento de estas infecciones y resistencias9.. IC. La emergencia de la resistencia bacteriana ha generado nuevos intereses en la. ED. búsqueda de medicamentos con poder antibacteriano, prueba de ello es el aumento en. M. los últimos años del número de publicaciones, relacionando productos naturales y actividad antimicrobiana, centrándose las investigaciones en los productos naturales. DE. como fuentes de moléculas bioactivas10.. AD. Las plantas tienen un papel fundamental en la vida y desarrollo del hombre, y han tenido aplicación medicinal en las diferentes civilizaciones, incluso en la región andina. LT. peruana, donde muchos pueblos autóctonos hace miles de años, inclusive mucho antes. CU. de la expansión de la civilización Inca comenzaron su utilización para estos fines.. FA. Entre estas plantas existen nueve especies de “raíces y tubérculos andinos” (RTAs), cada una perteneciente a una familia botánica distinta; entre los cuales destaca el yacón (Smallanthus sonchifolius) 11. El Smallanthus sonchifolius (yacón) pertenece a la familia de las compuestas o asteráceas; crece hasta en los 3 500 msnm de altitud, en un rango óptimo de. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/. 9.

(10) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. temperatura de 18 a 25ºC y que no requiere de fertilizantes, pesticidas ni mayores cuidados. Estas características agronómicas permiten su cultivo en diferentes departamentos del Perú (Cajamarca, Junín, Huánuco, Puno y Lima) y, en Sudamérica,. NT. desde Colombia hasta el norte de Argentina, adaptándose a los suelos de Oceanía, Europa y Asia. Siendo el departamento de Cajamarca uno de los centros de diversidad. -U. fenotípica y de mayor producción de yacón. En el departamento de La Libertad es. A. notoria la producción de yacón en Otuzco, en el distrito de Usquil 12, 13.. IN. El yacón es un recurso vegetal valorado por sus propiedades nutricionales y. IC. medicinales y ha concitado interés su uso en el tratamiento de la diabetes, pues se le. ED. atribuye una acción hipoglicemiante. A la raíz se la considera como alimento. M. prebiótico e hipocalórico, lo cual es debido a su contenido de fructooligosacáridos. DE. (FOS), compuestos que no pueden ser hidrolizados por las enzimas digestivas de los humanos. En el caso de las hojas, los extractos acuosos han demostrado tener efectos. AD. hipoglucemiantes, además de poseer capacidad antioxidante y antimicrobiana12. Estudios fitoquímicos realizados con la raíz y las hojas de yacón han encontrado. LT. que contienen ácidos clorogénico, ferúlico, cafeico y flavonoides con propiedades. CU. antioxidantes, por lo que su uso ha sido recomendado en la prevención y tratamiento. FA. de enfermedades tales como diabetes, obesidad, cáncer, hipertensión, ateroesclerosis12. Por otro lado aunque el yacón no ha sido habitualmente utilizado como una. medicina herbal antiinfecciosa, se han identificado una serie de sesquiterpenoslactonas en las hojas de dicha planta, que se demostró que poseen propiedades antimicrobianas14.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/. 10.

(11) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. Alvarado C y cols (2004), realizaron un estudio donde se demostró la actividad antimicrobiana del extracto hidroalcohólico de las hojas de Polymnia sonchifolia “Yacón”, la cual fue determinada por la prueba de sensibilidad por difusión en disco y. NT. por la prueba de concentración mínima inhibitoria (CMI). El extracto hidroalcohólico de “Yacón” fue efectivo en bacterias Gram positivas como Streptococcus pyogenes,. -U. Staphylococcus epidermidis y Staphylococcus aureus, mas no presentó inhibición en. A. bacterias Gram negativas como Proteus mirabilis, Pseudomonas aeruginosa,. IN. Klebsiella pneumoniae, Escherichia coli y Salmonella15.. IC. Choi J y cols (2010), realizaron un estudio en el que se investigó la actividad. ED. antimicrobiana de enhidrina, polimatina B, allo-schkuhriolide componentes obtenidos. M. de las hojas de Smallanthus sonchifolius contra Staphylococcus aureus meticilino. DE. resistente (MRSA). Se evaluó usando el método de micro dilución en caldo contra 2 cepas de ATCC 33591, ATCC 25923 y 15 cepas de aislamiento clínico MRSA; cuyo. AD. resultado se obtuvo que la actividad antibacteriana de Smallanthus sonchifolius se puede atribuir con seguridad a la enhydrina como polimatina B, mientras que la alo-. LT. schkuhriolida no está mostrando ninguna actividad contra cepas de Staphylococcus. CU. aureus. La enhidrina mostró una buena actividad antibacteriana contra todas las cepas. FA. ensayadas (MIC = 125-500 microg / ml) 16. Padla E y cols (2012), Realizaron un estudio en donde se evaluó la actividad. antimicótica y antibacteriana in vitro del ácido ent-kaurenoico de Yacón en diferentes microorganismos, se demostró que el yacón tenía actividad bactericida elevada contra S. aureus y S. epidermidis, baja actividad antimicrobiana contra E. coli, P. aeruginosa,. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/. 11.

(12) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. S. aureus, C. albicans y T. Mentagrophytes, pero se encontró que era inactivo contra A. niger14. Al ser pocos lo estudios enfocados en si en la actividad antibacteriana del yacón,. NT. es motivo por el que el presente trabajo se realiza, con el fin de aportar una alternativa terapéutica para las enfermedades causadas por los microorganismos bacterianos,. -U. sobre todo a aquellos que presentan resistencia; teniendo en cuenta bases empíricas y. A. de esta manera aportar nuevas evidencias que sustenten el empleo de tratamientos. IN. alternativos con plantas medicinales.. IC. JUSTIFICACIÓN:. ED. Las infecciones nosocomiales son una causa importante de morbimortalidad en. M. pacientes hospitalizados y constituyen una carga social y económica significativa para. DE. el paciente y el sistema de salud1. Siendo los microorganismos más frecuentes en los hospitales de Lima-Perú: Escherichia coli (22.3%), Staphylococcus coagulasa. AD. negativa (20.1%), Staphylococcus aureus (10.2%) y Klebsiella pneumoniae (9.9%); así lo demuestra el informe del Instituto Nacional de la Salud en el año 2008.2. LT. Dichos microorganismos adquieren la capacidad de resistir a la acción de los. CU. antibióticos por medio de varios mecanismos, lo que es llamada la “resistencia. FA. antimicrobiana”. Actualmente esto es un problema de gran importancia para la salud pública en todo el mundo, pero es de particular preocupación en los países en vías de desarrollo porque, a corto plazo, en ellos hay menos opciones económicas y apropiadas de tratamiento. El Sistema Mundial de Vigilancia de la Resistencia a los Antimicrobianos de la OMS ha revelado en enero del 2018, la presencia generalizada. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/. 12.

(13) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. de resistencia a los antibióticos en muestras de 500 000 personas de 22 países en las que se sospechaban infecciones bacterianas, además entre las bacterias resistentes más frecuentes se encuentran Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Staphylococcus. NT. aureus y Streptococcus pneumoniae, seguidas de Salmonella spp3.. -U. Por todo lo mencionado es cada vez más importante monitorear los patrones de resistencia ya que ha disminuido la susceptibilidad a los antimicrobianos de los agentes. A. patógenos bacterianos que contribuyen significativamente a la carga ocasionada por. IN. enfermedades respiratorias, febriles, diarreicas y del tracto reproductivo.3 Es por ello. IC. que la búsqueda de nuevos agentes antimicrobianos potentes con mecanismos de. ED. acción novedosos que actúen contra bacterias resistentes a los antibióticos disponibles. M. en la actualidad, es de vital importancia.. DE. El presente proyecto tiene como objetivo evaluar la actividad antibacteriana in vitro. AD. del extracto etanólico de las hojas de Smallanthus sonchifolius “Yacón” sobre Escherichia coli y Staphylococcus aureus, agentes responsables de numerosas. LT. enfermedades infecciosas. De esta manera se busca aportar nuevas evidencias que. FA. CU. sustenten el empleo de tratamientos alternativos con plantas medicinales.. 1.1. PROBLEMA ¿Tiene efecto antibacteriano in vitro el extracto etanólico de hojas de Smallanthus sonchifolius “Yacón” sobre Escherichia coli y Staphylococcus aureus?. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/. 13.

(14) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. 1.2. HIPÓTESIS Ho: El extracto etanólico de hojas de Smallanthus sonchifolius “Yacón” no tiene efecto antibacteriano in vitro sobre el crecimiento de Escherichia coli y. NT. Staphylococcus aureus. Ha: El extracto etanólico de hojas de Smallanthus sonchifolius “Yacón” tiene. -U. efecto antibacteriano in vitro sobre el crecimiento de Escherichia coli y. A. Staphylococcus aureus.. IN. 1.3. OBJETIVOS. IC. 1.3.1. General. Conocer el efecto antibacteriano in vitro del extracto etanólico de. ED. -. M. hojas de Smallanthus sonchifolius “Yacón” sobre Escherichia coli. DE. y Staphylococcus aureus. 1.3.2. Específicos. Determinar el efecto antibacteriano in vitro del extracto etanólico. AD. -. de hojas de Smallanthus sonchifolius “Yacón” a concentraciones de. CU. LT. 50%,75% y 100% a través de la medición del diámetro (en mm) de. FA. -. los halos que se producen en cultivos de Escherichia coli. Determinar el efecto antibacteriano in vitro del extracto etanólico de hojas de Smallanthus sonchifolius “Yacón” a concentraciones de 50%,75% y 100% a través de la medición del diámetro (en mm) de los halos que se producen en cultivos de Staphylococcus aureus.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/. 14.

(15) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. II.. MATERIALES Y MÉTODOS. 2.1. MATERIAL DE ESTUDIO: 2.1.1. Tipo de estudio:. NT.  Según la interferencia del Investigador en el fenómeno que se. -U. analiza: Experimental. 17. A. 2.1.2. Población objetivo. IN. Unidad de análisis y unidad de muestreo. IC. Las unidades de análisis y muestreo estuvieron constituidas por cada. ED. placa Petri, las cuales contenían las cepas en estudio (Escherichia coli o. M. Staphylococcus aureus) con el respectivo tratamiento (extracto. DE. etanólico de hojas de Smallanthus sonchifolius al 50%,75% y 100% o etanol 70° Gay Lussac (GL)).. AD. Tamaño muestral. FA. CU. LT. Para determinación de la muestra del estudio se usó la fórmula: 2. (𝑧𝛼 + 𝑍𝛽 ) 2𝑆 2 𝑛=. 2. (𝑋1 − 𝑋2)2. Donde n: Número de repeticiones a efectuar en la investigación Se establecieron los siguientes criterios:. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/. 15.

(16) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. Zα/2. = 1.96. Para un nivel de confianza del 95%. Zβ. = 0.84. Para una potencia de prueba del 80%. Se obtuvieron n =~ 10 repeticiones como mínimo para cada grupo. NT. experimental a evaluar. Por lo tanto, para efectos de este trabajo se. -U. tomaron 8 grupos para la evaluación: 4 grupos (de 10 repeticiones cada uno) con siembra de Escherichia coli: en los cuales se aplicó extracto. IN. A. etanólico de hojas de Smallanthus sonchifolius en las concentraciones. IC. de 50%, 75% y 100% y etanol 70° GL; y de manera similar, 4 grupos. ED. con siembra de Staphylococcus aureus.. TIPO DE VARIABLE Independiente. NATURALEZA Cualitativa. ESCALA DE MEDICIÓN Nominal. AD. VARIABLE Extracto etanólico de. DE. M. 2.1.3. Variables y escalas de medición:. INDICADOR 100% 75%. sonchifolius “Yacón”.. 50%. LT. hojas de Smallanthus. Efecto antibacteriano. Dependiente. Cuantitativa. De razón. Diámetro del halo de. Staphylococcus. inhibición. CU. in vitro sobre. FA. aureus. Efecto antibacteriano. Dependiente. Cuantitativa. De razón. Diámetro del. in vitro sobre. halo de. Escherichia coli. inhibición. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/. 16.

(17) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. Definiciones de las variables Extracto etanólico de hojas de Smallanthus sonchifolius “Yacón” Definición conceptual: Extracto con olor característico, obtenido a. NT. partir de la desecación de hojas de Smallanthus sonchifolius, por. -U. maceración o percolación en contacto con etanol, seguida de la. A. eliminación de dicho solvente por un procedimiento físico.. IN. Definición operacional: Extracto que posee los principios activos de. IC. la hoja de Smallanthus sonchifolius, cuyo solvente es el etanol,. ED. preparado a las concentraciones de 50%, 75%, 100%.. M. Efecto antibacteriano in vitro sobre Staphylococcus aureus. DE. Definición conceptual: Capacidad para detener la reproducción o. AD. producir la muerte de Staphylococcus aureus en condiciones experimentales. Se consigue el efecto si se consigue un diámetro. LT. inhibitorio mayor de 8 mm.. CU. Definición operacional: Correspondiente a la medida del diámetro del. FA. halo de inhibición en placas petri con siembra de este microorganismo medido a las 24 horas, en milímetros. El diámetro inhibitorio debe ser mayor a 8 mm. Efecto antibacteriano in vitro sobre Escherichia coli. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/. 17.

(18) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. Definición conceptual: Capacidad para detener la reproducción o producir la muerte de Escherichia coli en condiciones experimentales. Se consigue el efecto si se consigue un diámetro inhibitorio mayor de. NT. 8 mm.. -U. Definición operacional: Correspondiente a la medida del diámetro del halo de inhibición en placas petri con siembra de este microorganismo. A. medido a las 24 horas, en milímetros. El diámetro inhibitorio debe ser. IC. IN. mayor a 8 mm.. ED. 2.2. MÉTODO: PROCEDIMIENTO (ANEXO 6). 2.2.1. Recolección de “Smallanthus sonchifolius” (Yacón). M. Se recolectaron especímenes de Smallanthus sonchifolius “Yacón”, de. DE. la provincia de Otuzco, región La Libertad- del distrito de Sinsicap-. AD. Caserio Cuchanga- 3550 msnm durante el mes de diciembre del año 2017, los cuales fueron transportados desde el lugar de recolección en. LT. bolsas de sacos harineros limpios, al laboratorio de Farmacognosia de. CU. la Facultad de Farmacia y Bioquímica de la Universidad Nacional de. FA. Trujillo. 2.2.2. Reconocimiento de “Smallanthus sonchifolius” (Yacón) Un ejemplar completo de la planta fue llevado al Herbarium Truxillense (HUT) de la Universidad Nacional de Trujillo para su identificación y posterior verificación taxonómica.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/. 18.

(19) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. 2.2.3. Preparación de la muestra Selección: El material vegetal recolectado fue transportado al laboratorio de Farmacognosia de la Facultad de Farmacia y. NT. Bioquímica de la Universidad Nacional de Trujillo, donde se seleccionaron las hojas que estaban en buenas condiciones y se. -U. eliminaron aquellas hojas que presentaban ataques de hongos y que. A. se encontraban marchitadas.. IN. Lavado: Se procedió a lavar el material vegetal con agua destilada,. IC. seguido de una desinfección, utilizando hipoclorito de sodio al 0.5 %.. ED. Posteriormente se realizó un enjuague con agua destilada estéril, esto. M. es para retirar los residuos de hipoclorito.. DE. Secado: Una vez lavadas las hojas se colocaron en papeles Kraft, y se secaron en la estufa de circulación de aire a 40 ºC.. AD. Molienda y Tamizaje: Se procedió a moler las hojas desecadas con. LT. molino hasta obtener polvo semigrueso y luego se pasó a través del. CU. tamiz Nº 0.75. 19. FA. 2.2.4. Elaboración del extracto etanólico y concentraciones Se pesaron 150 g de polvo de hojas desecadas y tamizadas. Luego se colocaron en un recipiente de vidrio de boca ancha color ámbar. Posteriormente, se añadieron 500 mL de etanol de 70º G.L. Se mezclaron bien, teniendo en cuenta que la mezcla debe ocupar como. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/. 19.

(20) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. máximo las ¾ partes del recipiente. Se tapó el recipiente y se maceró por 7 días, agitándose 15 minutos, dos veces al día. Transcurrido el tiempo de maceración, se filtró el macerado usando. filtrado se le denomino extracto etanólico.. NT. una bomba de vacío, con papel de filtro Whatman N° 1. Al líquido. -U. A continuación, el extracto etanólico se concentró en un rotavapor. A. hasta obtener una masa siruposa. Posteriormente se llevó a secar a la. IN. estufa de circulación de aire a 40 ºC. Al producto resultante se le. IC. denomino extracto seco. A partir de este extracto seco, se prepararon. ED. las concentraciones de 50% (500 mg/ml), 75% (750 mg/ml) y 100%. M. (1000 mg/ml) disueltas en etanol de 70 º G.L. Finalmente, los extractos etanólicos fueron guardados en frascos de vidrio de color ámbar y en. DE. refrigeración (4-8C) hasta su posterior utilización 19.. AD. 2.2.5. Determinación de efecto antibacteriano:. LT. Preparación de las cepas bacterianas. CU. Se trabajó con cepas de Escherichia coli y Staphylococcus aureus. FA. obtenidas del cepario del Departamento de Microbiología de la Facultad de Medicina de la Universidad Nacional de Trujillo. Preparación del inóculo Las cepas se cultivaron en tubos de ensayo con tapa rosca conteniendo el medio agar Mueller - Hinton, se incubaron a 37ºC con el fin de. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/. 20.

(21) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. obtener colonias jóvenes. Las cepas se diluyeron en tubos con caldo glucosado estéril, hasta obtener una turbidez semejante al tubo número 0.5 de la escala de Mac Farland (1.5 x 108 UFC/ml). Los tubos que. NT. contenían las bacterias fueron girados verticalmente sobre su eje longitudinal entre las manos aproximadamente durante 30 segundos. -U. hasta observar un líquido homogéneo, con el fin de distribuir los. A. microorganismos antes de proceder al sembrado20. IN. Sembrado. IC. Hisopos estériles fueron embebidos con la cepa previamente preparada. ED. de S. aureus y se usaron para sembrar en cada placa petri con Agar. M. Mueller – Hinton a una distancia de 10 cm de la llama del mechero,. DE. hisopando uniformemente sobre toda la superficie del agar y girando cada placa 30 grados por 10 veces aproximadamente. Se realizó el. AD. mismo procedimiento con las cepas de E.coli. Posteriormente las. LT. placas Petri se incubaron a 37°C por 24 horas20.. CU. Prueba de susceptibilidad. FA. Para la prueba de susceptibilidad se utilizó el método de Difusión en discos en base a los fundamentos descritos por Kirby-Bauer. Se prepararon discos de papel de filtro Whatman N°1 de 6 mm de diámetro previamente esterilizados, los cuales fueron sumergidos dentro de las cada una de las 3 diluciones del extracto etanólico de hojas de Smallanthus sonchifolius (concentraciones de 50%, 75% y. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/. 21.

(22) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. 100%), luego con una aguja estéril estos se colocaron sobre los cultivos de Staphylococcus aureus en placas Petri con agar Mueller Hinton y sobre cultivos de Escherichia coli previamente preparados, se usaron 4. NT. discos por placa. Paralelamente se realizó la determinación de la susceptibilidad de los controles para las dos bacterias estudiadas,. -U. constituidos por el etanol de 70º Gay Lussac21.. A. Posteriormente las placas Petri se incubaron a 37°C por 24 horas. Todo. IN. el procedimiento se llevó a cabo dentro del diámetro de 10 cm. de la. IC. llama de un mechero. Pasado este tiempo se realizó la lectura de. ED. resultados. Se midieron los halos de inhibición, incluyendo el área del. M. disco de papel de filtro con una pinza de Vernier, procediéndose de. DE. igual manera con ambos controles. 2.2.6. Lectura de resultados. AD. La lectura de los halos de inhibición producidos se midió en milímetros tomando en cuenta la escala de Duraffourd (escala utilizada para la. LT. determinación cualitativa del efecto inhibitorio in vitro, según diámetro. CU. de inhibición, que considera que la sensibilidad es determinada por un. FA. diámetro superior de 8mm), con las respectivas especificaciones: 21 Condición Resistente o no sensible: (-). Diámetro en mm <8. Sensibilidad límite: (+). 8 – 14. Sensibilidad media: (++). 14 – 20. Sumamente sensible: (+++). > 20. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/. 22.

(23) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. 2.2.7. Procesamiento de los datos: Instrumento de muestreo: La información fue registrada en fichas elaboradas especialmente para. NT. la recolección de datos (ANEXO 1). -U. Método de muestreo:. Se midieron los halos de inhibición en milímetros de cada. IN. A. concentración del extracto, incluyendo el área del disco de papel de. IC. filtro, con una regla milimetrada- Pinza de Vernier, así mismo de los. ED. controles.. M. 2.3. DISEÑO DE LA INVESTIGACIÓN:. DE. Determinación de efecto antibacteriano (Prueba de Susceptibilidad) en Staphylococcus aureus. 50%. FA. CU. LT. 1ml. AD. GRUPO EXPERIMENTAL. 4 discos por placa. 10 discos. X3. GRUPO CONTROL. Etanol 70°GL. 75%. 10 discos. X3. 100%. 1 ml. 10 discos. 10 discos. X3. 4 discos por placa. X3. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/. 23.

(24) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. Las placas se incubaron a 37°C por 24 horas LA LECTURA DE LOS HALOS DE INHIBICIÒN PRODUCIDOS SE MIDIERON EN MILIMETROS TOMANDO EN CUENTA LA. NT. ESCALA DE DURAFFOURD. -U. Determinación de efecto antibacteriano (Prueba de Susceptibilidad) en Escherichia coli. GRUPO CONTROL. IN. A. GRUPO EXPERIMENTAL. 75%. LT X3. CU FA. 100%. 1 ml. ED M. DE. 10 discos. X3. 10 discos. 10 discos. AD. 10 discos. 4 discos por placa. IC. 50%. 1ml. Etanol 70°GL. X3. 4 discos por placa. X3. Las placas se incubaron a 37°C por 24 horas. LA LECTURA DE LOS HALOS DE INHIBICIÒN PRODUCIDOS SE MIDIERON EN MILIMETROS TOMANDO EN CUENTA LA ESCALA DE DURAFFOURD. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/. 24.

(25) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. 2.4. ANÁLISIS E INTERPRETACIÓN DE LA INFORMACIÓN Para analizar la información se calcularon la media y la desviación estándar de los diámetros de inhibición, como medidas de tendencia central, obtenidos al aplicar el. NT. extracto etanólico de hojas de Smallanthus sonchifolius, los cuales se presentaron mediante tablas y gráficos. Los datos se procesaron mediante la prueba de ANOVA. -U. (análisis de varianza) con un nivel de significancia de p< 0.05 y luego se hizo uso de. FA. CU. LT. AD. DE. M. ED. IC. IN. significativa, considerando significativo si p<0.0517.. A. la prueba de Duncan para determinar pares de grupos en los que la diferencia es. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/. 25.

(26) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. III.. RESULTADOS. Al analizar los resultados de aplicar el extracto etanólico de hojas de Smallanthus sonchifolius sobre Escherichia coli y Staphylococcus aureus con. NT. todas las concentraciones estudiadas y según la escala de Duraffourd, se encontró que el extracto etanólico de hojas de “yacón” no posee efecto. -U. antibacteriano sobre la cepa de Escherichia coli, es decir no se formó halo de. A. inhibición (ANEXO N°1 ); contrariamente se encontró un notable efecto sobre. IN. la cepa de Staphylococcus aureus, por lo tanto se realizó el análisis estadístico. IC. solamente en dicha cepa como se aprecia en las siguientes tablas y gráficos:. ED. En la Tabla N°1 se muestran los promedios de los halos de inhibición. M. obtenidos con los 4 tratamientos (concentraciones de extracto etanólico de. DE. hojas de Smallanthus sonchifolius al 50%, 75%, 100% y Etanol 70°GL) sobre el crecimiento de Staphylococcus aureus. Para las concentraciones de 50% y. AD. 75% del extracto etanólico se hallaron dentro del rango de “sensibilidad límite” de la escala de Duraffourd (diámetro de halo de inhibición de 8 a 14 mm),. LT. mientras que para la de 100% un rango de “sensibilidad media” (diámetro de. CU. halo de inhibición de 14 a 20 mm). En el grupo control no se obtuvo halo de. FA. inhibición por lo que solo se consideró el diámetro del disco de papel. En la Tabla N°2 se muestra el análisis de varianza del diámetro de los halos de inhibición obtenidos con los tratamientos de extracto etanólico de hojas de Smallanthus sonchifolius al 50%, 75% y 100% sobre Staphylococcus aureus, hallándose que existe diferencia estadísticamente significativa entre los grupos. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/. 26.

(27) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. (Significancia hallada: 0.0000. La diferencia de medias es significativa al nivel de ≤ 0.05). En la Tabla N°3 se muestra la comparación del tamaño de los halos de. NT. inhibición obtenidos con las concentraciones de extracto etanólico de hojas de. -U. Smallanthus sonchifolius al 50%, 75%, 100% sobre Staphylococcus aureus según prueba de Duncan, hallándose diferencia significativa entre los tres. A. grupos por lo que a mayor concentración se tiene mayor diámetro; en la. IC. mayor (100%) fue de 16.1mm.. IN. concentración menor (50%) el diámetro fue de 12,8mm mientras que para la. ED. En el Gráfico N°1 se muestra las comparaciones de las medias de los diámetros. M. de los halos de inhibición obtenidos con los tratamientos de extracto etanólico. DE. de hojas de Smallanthus sonchifolius al 50%, 75%, 100%, notándose que el mayor efecto antimicrobiano sobre el crecimiento de Staphylococcus aureus. AD. corresponde a la concentración del extracto etanólico de Smallanthus. FA. CU. LT. sonchifolius al 100%, seguido de la concentración al 75% y luego la de 50%.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/. 27.

(28) NT. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. TABLA 1. PROMEDIO DE LOS HALOS DE INHIBICIÓN OBTENIDOS. -U. CON EL EXTRACTO ETANÓLICO DE HOJAS DE Smallanthus sonchifolius. Promedio. Desv. Estándar. ED. Grupos de tratamiento. n. IC. IN. A. AL 50%, 75%, 100% Y ETANOL 70°GL SOBRE Staphylococcus aureus. 10. 12.8. 1.29. 10. 14.0. 1.21. Extrac. Etanólico Yacón 100%. 10. 16.1. 1.32. Etanol 70°. 10. 6. 0. FA. CU. LT. AD. DE. Extrac. Etanólico Yacón 75%. M. Extrac. Etanólico Yacón 50%. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/. 28.

(29) -U. NT. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. TABLA 2. ANÁLISIS DE VARIANZA DE LOS DIÁMETROS DE LOS. A. HALOS DE INHIBICIÓN OBTENIDOS CON EL EXTRACTO ETANÓLICO. IN. DE HOJAS DE Smallanthus sonchifolius AL 50%, 75% y 100% SOBRE. Suma de. Variación. Cuadrados. M. Fuente de. ED. IC. Staphylococcus aureus. Media. DE. GL. 57.989. 2. 28.994. Error. 43.946. 27. 1.628. 101.935. 29. Significancia*. 17.81. 0.0000. CU. LT. AD. Tratamientos. Total. F cuadrática. FA. * La diferencia de medias es significativa al nivel de ≤ 0.05. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/. 29.

(30) NT. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. TABLA 3. PRUEBA DE DUNCAN PARA DETERMINAR PARA. -U. DETERMINAR GRUPOS SIGNIFICATIVOS SEGÚN LA. A. CONCENTRACIÓN DEL EXTRACTO ETANÓLICO DE HOJAS DE. IN. Smallanthus sonchifolius SOBRE Staphylococcus aureus. IC. Subconjunto para α= 0.05. ED. Grupos de Tratamiento. Extrac. Etanólico Yacón. M. n. 10. DE. 50%. 1. 2. 3. 12.8. Extrac. Etanólico Yacón 75%. 14.0. AD. 10. 10. 16.1. FA. CU. 100%. LT. Extrac. Etanólico Yacón. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/. 30.

(31) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. GRÁFICO 1. COMPARACIÓN ENTRE EL PROMEDIO DEL DIAMETRO. NT. DE LOS HALOS DE INHIBICIÓN SEGÚN LOS TRATAMIENTOS CON. -U. EXTRACTO ETANÓLICO DE HOJAS DE Smallanthus sonchifolius AL 50%,. FA. CU. LT. AD. DE. M. ED. IC. IN. A. 75%, 100%. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/. 31.

(32) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. IV. ANÁLISIS Y DISCUSIÓN Durante las últimas décadas las plantas han adquirido un papel fundamental en la vida y desarrollo del hombre, destacando su aplicación medicinal en las diferentes. NT. civilizaciones, incluso en la región andina peruana11. Diversos estudios han demostrado que las hojas de Smallanthus sonchifolius presentan propiedades. -U. hipoglicemiantes, antioxidantes, antiinflamatorias; pero pocos estudios sobre sus. A. propiedades antimicrobianas y antimicóticas. Dichas propiedades se han atribuido a. IN. compuestos terpenoides naturales como el diterpeno ácido ent-kaurenoico y las. IC. lactonas sesquiterpénicas (SL), que están presentes de forma natural en sus hojas; entre. ED. éstas últimas destacan la enhidrina, la uvedalina, la sonchifolina y la polimatina B; las cuales poseen un grupo acetoxi en la posición 9, el cual parece ser necesario para la 12, 14, 22, 23. M. presencia de actividad antibacteriana. . Debido a la variabilidad de estos. DE. compuestos, el completo mecanismo de acción de las lactonas sesquiterpénicas en. AD. microorganismos no está claro por lo que se plantean hipótesis como: Badawy y cols24 quienes informaron que, debido a la alta lipofilicidad de las paredes celulares. LT. bacterianas, las SL lipófilas serían esenciales para mejorar el efecto inhibitorio; y. CU. Trombetta y cols25, plantean que estas podían interferir en la fracción lipídica de la. FA. membrana de S. aureus y romperla, causando la fuga de material intracelular. La presente investigación demostró la susceptibilidad de Staphylococcus aureus al extracto etanólico de hojas de Smallanthus sonchifolius “Yacón” de tres concentraciones (50%, 75% y 100%), la cual se evidencia con el diámetro de los halos de inhibición obtenidos mediante el método de Kirby Bauer y según la escala de. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/. 32.

(33) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. Duraffourd; estos se ubicaron dentro de los rangos de “sensibilidad límite” y “sensibilidad media”. Por otro lado no se demostró efecto antibacteriano sobre Escherichia coli al igual que en los estudios realizados por Padla E y cols14, Alvarado. NT. C y cols15, Forville E y cols23. Estos hallazgos son consistentes a su vez con otros estudios que demostraron la mayor. -U. susceptibilidad de bacterias Gram-positivas a los compuestos derivados de yacón, que. A. las bacterias Gram-negativas. Según autores como Tegos y cols26 y Duffy y cols27 lo. IN. mencionado se fundamenta debido a las diferencias en la estructura de la pared celular. IC. y la permeabilidad de la membrana celular, ya que las que las bacterias Gram-negativas. ED. poseen una membrana externa la cual actúa como barrera de permeabilidad efectiva a. M. la penetración de numerosas moléculas de antibióticos, y un espacio periplásmico que. DE. contiene enzimas capaces de descomponer moléculas extrañas introducidas desde el exterior; las cuales están ausentes en las bacterias Gram-positivas y por ende en éstas. AD. es más accesible la penetración de toxinas. Todo lo mencionado se correlaciona con los siguientes estudios:. LT. Lin F y cols (2003) quienes realizaron la identificación de los compuestos. CU. antimicrobianos en las hojas de yacón (enhidrina, uvedalina) y estudiaron su actividad. FA. antibacteriana mediante extracto metanólico usando el método de difusión de disco, contra Bacillus subtilis (Gram Positiva); obtuvieron un diámetro de inhibición mayor de 10mm que se correspondería con una “sensibilidad límite” según la escala de Duraffourd, lo cual coincide con el presente estudio, en el que usando el mismo método también se demuestra actividad antibacteriana sobre otra bacteria Gram Positiva. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/. 33.

(34) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. (Staphylococcus aureus), con rangos de “sensibilidad límite” e incluso “sensibilidad media” 28. Alvarado C y cols (2004), demostraron la actividad antimicrobiana, determinada por. NT. la prueba de sensibilidad por difusión en disco y por la prueba de concentración mínima inhibitoria (CMI), del extracto hidroalcohólico de las hojas de Polymnia. -U. sonchifolia “Yacón”, especie diferente a la utilizada en el presente estudio pero de la. A. misma familia (Asteraceae), contra bacterias Gram positivas como Streptococcus. IN. pyogenes, Staphylococcus epidermidis y Staphylococcus aureus; mas no se encontró. IC. inhibición en bacterias Gram negativas como Proteus mirabilis, Pseudomona. ED. aeruginosa, Klebsiella pneumoniae, Escherichia coli y Salmonella15.. M. Choi J y cols (2010), realizaron un estudio en el que se investigó la actividad. DE. antimicrobiana de enhidrina, polimatina B, allo-schkuhriolida, componentes obtenidos de las hojas de Smallanthus sonchifolius, contra Staphylococcus aureus meticilina. AD. resistente (MRSA); solo encontraron actividad antibacteriana en dos de los tres componentes mencionados (enhidrina, polimatina B) de Smallanthus sonchifolius, lo. LT. que atribuyeron a sus diferentes propiedades biológicas. Sin embargo estos usaron el. CU. método de CMI, aun así se obtuvo el mismo efecto antibacteriano en una bacteria Gram. FA. positiva, incluso resistente 16. Padla E y cols (2012) evaluaron la actividad antimicótica y antibacteriana in vitro del ácido ent-kaurenoico del extracto de diclorometano de las hojas de Smallanthus sonchifolius en diferentes microorganismos, usando del mismo modo el método de difusión en disco. Demostraron que tenía actividad bactericida elevada contra los. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/. 34.

(35) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. organismos Gram positivos: Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis y Bacillus subtilis; siendo S. aureus más susceptible y presentando un zona de inhibición de 8.93mm que corresponde según Duraffourd a una “sensibilidad límite”, lo que. NT. también se encontró en el presente estudio; de igual forma tampoco se observó actividad inhibitoria contra Gram negativas: Escherichia coli, P. aeruginosa,. -U. Enterobacter aerogenes, Klebsiella pneumoniae y especies fúngicas como Candida. A. albicans y Epidermophyton floccosum 14.. IN. Forville E y cols (2017), quienes evaluaron la actividad antibacteriana mediante el. IC. método de difusión en disco y el ensayo de concentración inhibidora mínima (CIM). ED. de una mezcla de lactonas sesquiterpénicas (SL); obtenidas a partir del extracto de. M. diclorometano de hojas de Smallanthus sonchifolius en las cepas de Escherichia coli,. DE. Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa y Salmonella entérica; encontrando que la mezcla de SL (uvedalina y enhidrina) carece de actividad antibacteriana contra. AD. las bacterias Gram-negativas contrariamente si posee dicha actividad contra la cepa bacteriana Gram positiva: S. aureus, cuyo diámetro de inhibición fue de 8.67 ± 0.5 mm. LT. que corresponde a una “sensibilidad límite” 23. En el presente estudio cuya especie fue. CU. del mismo modo Smallanthus sonchifolius también se obtuvo efecto antibacteriano,. FA. sin embargo a la concentración mayor (100%) se obtuvo un promedio de 16.1 mm que corresponde a “muy sensible” según la escala de Duraffourd. Así mismo es conveniente mencionar que se utilizó como diluyente etanol de 70°GL, el cual comparado con los disolventes usados en los estudios anteriores (diclorometano, metanol) es el menos tóxico, pertenece a la clase 3 y su uso está permitido; según la. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/. 35.

(36) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. OMS puede tener una “ingesta diaria admisible” para evitar posibles efectos adversos 29,30. . A su vez este diluyente se usó como tratamiento control y no demostró efecto. inhibitorio sobre las cepas evaluadas, por lo tanto, el halo de inhibición sobre. a sus componentes y no al etanol utilizado en su preparación.. NT. Staphylococcus aureus al usar extracto etanólico de las hojas de Yacón, fue atribuido. -U. Respecto al análisis estadístico, se encontró diferencia significativa (p<0.05) en la. A. sensibilidad de Staphylococcus aureus a diferentes concentraciones del extracto. IN. etanólico 50%, 75% y 100%; por lo que a mayor concentración se obtuvo mayor halo. IC. de inhibición, lo que indica también que la susceptibilidad bacteriana varía. ED. dependiendo de la concentración del tratamiento usado; resultados similares a los. M. estudios anteriormente mencionados 22, 23, 24.. DE. Por todo lo mencionado anteriormente, se comprueba que las hojas de Smallanthus sonchifolius muestran un gran potencial antibacteriano. Por lo que es una alternativa. AD. prometedora para combatir bacterias patógenas como el S. aureus la cual actualmente. FA. CU. LT. está mostrando resistencia a los antibióticos de uso común.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/. 36.

(37) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. IV.. CONCLUSIONES.  In vitro, el extracto etanólico de hojas de Smallanthus sonchifolius “Yacón”. NT. sobre Escherichia coli no mostró actividad antibacteriana y sobre Staphylococcus aureus si mostró efecto antibacteriano en sus tres. -U. concentraciones (50%, 75% y 100%).. A.  Escherichia coli mostró “sensibilidad nula” in vitro (según la escala de. IN. Duraffourd) al efecto antibacteriano del extracto etanólico de hojas de. IC. Smallanthus sonchifolius “Yacón” en sus tres concentraciones (50%, 75%. aureus. mostró. una. “sensibilidad. límite”. a. las. M.  Staphylococcus. ED. y 100%).. DE. concentraciones de 50% y 75% y “sensibilidad media” al 100% in vitro (según la escala de Duraffourd), al efecto antibacteriano del extracto. FA. CU. LT. AD. etanólico de hojas de Smallanthus sonchifolius “Yacón”.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/. 37.

(38) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. V.. RECOMENDACIONES.  Se recomienda realizar estudios que utilicen menores concentraciones del. NT. extracto etanólico de hojas de Smallanthus sonchifolius, a fin de determinar la concentración mínima inhibitoria contra Staphylococcus aureus.. -U.  Se recomienda realizar el análisis cuantitativo y cualitativo de la. A. composición química del extracto etanólico de hojas de Smallanthus. IN. sonchifolius disponible en el distrito de Sinsicap – Provincia de Otuzco.. IC.  Se recomienda realizar estudios in vitro para valorar la efectividad y. ED. toxicidad que podrían producir los componentes activos del extracto. FA. CU. LT. AD. DE. M. etanólico de hojas de Smallanthus sonchifolius.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/. 38.

(39) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. VI. 1.. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS. Comunidad de Madrid. Prevención y Control de la Infección Nosocomial.. Madrid: Servicio Madrileño de Salud. Dirección General de Atención al Paciente;. 2.. NT. 2007. Instituto Nacional de Salud. Informe de la resistencia antimicrobiana en. Datos recientes revelan los altos niveles de resistencia a los antibióticos en todo. A. 3.. -U. Hospitales del Perú: Ministerio de Salud; 2008.. del. 2018].. Disponible. en:. IC. septiembre. IN. el mundo [Internet]. Organización Mundial de la Salud; 2018 [Citado el 04 de. Jorge R. Rey. Enfermedades infecciosas emergentes. Entomology and. M. 4.. ED. http://www.who.int/mediacentre/news/releases/2018/antibiotic-resistance-found/es/. DE. Nematology Department, Florida Medical Entomology Laboratory. Instituto de Alimentos y Ciencias Agrícolas, Universidad de la Florida. 2010. Instituto Nacional de la Salud del Niño. Detección y caracterización molecular. AD. 5.. β-lactamasas de expectro extendido en E. coli y K. pneumoniae aisladas en el instituto. Mamani E, Luján D, Pajuelo G. Perfil de sensibilidad y resistencia de. CU. 6.. LT. nacional de salud del niño. Lima-Perú. 2015. FA. Staphylococcus aureus: Experiencia en el Hospital Nacional Hipólito Unanue. An Fac Med. junio de 2006; 67(2):120-4. 7.. Morales GI, Yaneth MC, Chávez KM. Caracterización de la resistencia in vitro. a diferentes antimicrobianos en cepas de Staphylococcus spp. en una institución. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/. 39.

(40) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. hospitalaria de la ciudad de Valledupar entre enero y julio de 2009. Rev Cienc Salud. 31 de agosto de 2012; 10(2):5-13. 8.. Quispe-Manco M del C, Zerpa-Larrauri R. Necesidad de detectar mecanismo. NT. de resistencia a macrólidos, lincosamidas y estreptograminas en Streptococcus pyogenes y Staphylococcus aureus en varicela complicada. Rev Peru Med Exp Salud. Montoya C I, Mira O M, Álvarez A I, Cofre G J, Cohen V J, Donoso W G, et. A. 9.. -U. Pública. octubre de 2013; 30(4):714-28.. IN. al. Resistencia inducible a clindamicina en Staphylococcus aureus meticilino. Stella L, Marin D. Metodologias para evaluar in vitro la actividad. ED. 10.. IC. resistente. Rev Chil Pediatría. febrero de 2009; 80(1):48-53.. M. antibacteriana de compuestos de origen vegetal. Scientia et Technica Año XV, No 42,. 11.. DE. Agosto de 2009. Universidad Tecnológica de Pereira. ISSN 0122-1701 Seminario J, Valderrama M, Manrique I. El yacón: fundamentos para el. AD. aprovechamiento de un recurso promisorio. Centro Internacional de la Papa (CIP), Universidad Nacional de Cajamarca. Lima, Perú. 2003 Arnao I, Seminario J, Cisneros R y Trabucco J. Potencial antioxidante de 10. LT. 12.. CU. accesiones de yacón, Smallanthus sonchifolius (Poepp. & Endl.) H. Robinson,. FA. procedentes de Cajamarca - Perú. An. Fac. med. 2011, vol.72, n.4, pp. 239-243. 13.. Arnao I, Suarez S, Cisneros R y Trabucco J. Evaluación de la capacidad. antioxidante de los extractos acuosos de la raíz y las hojas de Smallanthus sonchifolius (yacón). Rev. Soc. Quím. Perú. 2012, vol.78, n.2, pp. 120-125.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/. 40.

(41) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. 14.. Padla E, Solis L, Ragasa C. Antibacterial and antifungal properties of ent-. kaurenoic acid from Smallanthus sonchifolius. Chinese Journal of Natural Medicines 2012, 10(5): 0408−0414. Alvarado C, Gomes M, Bilesky C, Oliveira B. Actividad antimicrobiana del. NT. 15.. -U. extracto hidroalcohólico de las hojas de Polymnia sonchifolia “Yacón”. Universidad Federal de Paraná. 2004.. Choi J, Kang O, Lee Y, Oh Y, Chae H, Obiang-Obounou B, et al.. IN. A. 16.. IC. Antimicrobial activity of the constituents of Smallanthus sonchifolius leaves against. ED. methicillin-resistant Staphylococcus aureus. Eur Rev Med Pharmacol Sci. 2010; 14: 1005-1009.. Bocanegra D. F. Bases Metodológicas de la Investigación Científica. Perú.. M. 17.. DE. PubliCiencia, 2002. 18.. Colegio Médico del Perú. Código de Ética y Deontología. Lima [Perú]: CMP;. Miranda, M. Métodos de Análisis de Drogas y Extractos. Instituto de Farmacia. LT. 19.. AD. 2007.. 20.. CU. y Alimentos. Universidad Habana de Cuba.2002. National Ramirez, Luz Stella; Marin Castaño, Darwin. Metodologías para. FA. evaluar in vitro la actividad antibacteriana de compuestos de origen vegetal. Scientia Et Technica, vol. XV, núm. 42, agosto, 2009, pp. 263-268. Universidad Tecnológica de Pereira. Pereira, Colombia. 21.. Duraffourd C, D’hervicourt, Lapraz J. Cuaderno de fitoterapia Clínica.. Barcelona: Masson, 1987.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/. 41.

(42) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. 22.. Lock O, Rojas R. Química y Farmacología de Smallanthus sonchifolius. (Poepp.) H. Rob. ("Yacón"). Revista de QUÍMICA. Pág: 31-35, 2005. 23.. Forville E, Carpinel D, Andreotti J, Barison A, Rüdiger A, Bolzón G, et al.. NT. Identification and antimicrobial activity of the sesquiterpene lactone mixture extracted from Smallanthus sonchifolius dried leaves. Eur Food Res Technol. 2017.. Badawy M, Abdelgaleil S, Suganuma T, Fuji M. Antibacterial and biochemical. -U. 24.. A. activity of pseudoguaianolide sesquiterpenes isolated from Ambrosia maritima against. Trombetta D, Castelli F, Sarpietro MG, Venuti V, Cristani M, Daniele C, et al.. IC. 25.. IN. plant pathogenic bacteria. Plant Prot Sci. 2014;50 (2):64–69.. ED. Mechanisms of antibacterial action of three monoterpenes. Antimicrob Agents. Tegos G, Stermitz F, Lomovskaya O, Lewis K. Multidrug Pump Inhibitors. DE. 26.. M. Chemother. 2005; 49(6):2474–2478.. Uncover Remarkable Activity of Plant Antimicrobials. Antimicrob Agents. 27.. AD. Chemother. 2002; 46(10): 3133-3141.. Duffy CF, Power RF. Antioxidant and antimicrobial properties of some. Lin F, Morifumi H, Osamu K. Purification and Identification of Antimicrobial. CU. 28.. LT. Chinese plant extracts [J]. Int J Antimicrob Agents, 2001, 17: 527-529.. FA. Sesquiterpene Lactones from yacon (Smallanthus sonchifolius) Leaves. Biosci Biotechnol Biochem. 2003; 76 (10): 2154 – 2159. 29.. Determinación de disolventes residuales. Métodos generales de análisis.. FEUM. 2016, 4: 1-16. 30.. European agency for evaluation of medical products. Human medicines. evaluation unit. Consensus guideline. 1998. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/. 42.

(43) ED. IC. IN. A. -U. NT. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. FA. CU. LT. AD. DE. M. ANEXOS. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/. 43.

(44) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. ANEXO N°1 INSTRUMENTO DE RECOLECCIÓN DE DATOS. NT. “Efecto antibacteriano in vitro del extracto etanólico de hojas de Smallanthus sonchifolius “Yacón” sobre Escherichia coli y Staphylococcus aureus”. FICHA N°. -U. FECHA: 26/01/18. 1.  Staphylococcus aureus. IN. A. CEPA EVALUADA:  Escherichia coli. IC. Medición de los halos de inhibición. Smallanthus sonchifolius “Yacón” 100%. 6. 6. 6. 6. 6. 6. 6. 6. 6. 6. 6. 6. 6. 6. 6. 6. 6. 6. 6. 6. 6. 6. 6. 6. 6. 6. 6. 6. 6. 6. 6. 6. 6. 6. 6. 6. 6. 6. 6. LT. AD. DE. 6. CU. FA. Control Etanol 70° GL. 75%. M. 50% Observación 1 Observación 2 Observación 3 Observación 4 Observación 5 Observación 6 Observación 7 Observación 8 Observación 9 Observación 10. ED. (en mm). N° de observación. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/. 44.

(45) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. FECHA: 26/01/18. FICHA N°. CEPA EVALUADA:  Escherichia coli. 2.  Staphylococcus aureus. NT. Medición de los halos de inhibición (en mm). 13.2. 14.3. 13.2 12. 6. 12.3. 16.4. 6. 14.8. 15.2. 6. 16.5. 16.8. 6. 10.8. 12.7. 14. 6. 13.6. 14.7. 14. 6. 11.7. 14.1. 16. 6. 12.3. 13.1. 17.6. 6. 15.5. 13.5. 17.1. 6. 13.3. 14.3. 17.2. 6. AD. DE. M. IC. 17.1. 12.1. FA. CU. 100%. IN. 75%. Control Etanol 70° GL. ED. 50%. A. Smallanthus sonchifolius “Yacón”. LT. Observación 1 Observación 2 Observación 3 Observación 4 Observación 5 Observación 6 Observación 7 Observación 8 Observación 9 Observación 10. -U. N° de observación. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/. 45.

(46) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. ANEXO N° 02: CONSTANCIA DE ASESORÍA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE MEDICINA. NT. ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE MEDICINA. -U. CONSTANCIA DE ASESORÍA. Yo, Elva Manuela Mejía Delgado, profesora principal a tiempo completo del. IN. A. Departamento Académico de Ciencias Básicas de la Facultad de Medicina de la. IC. Universidad Nacional de Trujillo.. ED. CERTIFICO. M. Ser asesora de la tesis titulada: “Efecto antibacteriano in vitro del extracto etanólico. DE. de hojas de Smallanthus sonchifolius “Yacón” sobre Escherichia coli y Staphylococcus aureus”, perteneciente a la estudiante de Pregrado: Kathy Karold. AD. Medina Marreros, alumna de la Escuela de Medicina de la Facultad de Medicina de. LT. la Universidad Nacional de Trujillo, identificada con DNI: 72239508 y Nº de. CU. matrícula: 1021800313.. FA. Se expide la presente para los fines correspondientes. Trujillo, 02 de octubre del 2018. Elva Manuela Mejía Delgado ASESORA. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/. 46.

(47) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. ANEXO N°3: CONSTANCIA DE APROBACIÓN PARA EJECUCIÓN DEL. FA. CU. LT. AD. DE. M. ED. IC. IN. A. -U. NT. PROYECTO. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/. 47.