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E
I I ~ F L U E ~ C I ADE. LA
TEKFEAATLRA Y ELkifD10
9
1
'KA. CECILIA ALMILAR ZACAñiAS.
.
!,
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7 1DE L A T E M P E R A T U R A Y EL I.iEDIO tYUTRICIU Eh
LA
PRODUCCIUNDE ACIDU L A C T I C U .
I . I
, J u s t i f i c a c i ó n y naturaleza d e l pro,yecto;
.
A m p l i a re l
conocimiento de le f i s i o l o g í ad e
l a s bacteries16cticas
principalmente cuando se verian l a s condiciones nutricionales y l a
tem-
peraturede crecimiento.Su
estudio e s de importancia debidoa s u , u t i l i -
zación an 1es~fermen.taciones semisólidas,s e i
como tembibnan. l a
prapareci6n y conssrvacF6n de
los
alimentos. b* .
i
I
I
ntroduccidn ;L a
escasezen
cuento a c a l i d a d p r o t e i c a en l e elimentscibnd e l o a -
paises más pobres o subdesarrollados, induce a l a busqueda de nuevos--
m.átodos a c c e s i b l e s o coste-ablea por medi,o delos
cuales s e mejorel a ca
,
l i d e d de l e alimentscidn b á s i c a d e l pueblo.
E l d e s a r r o l l o da métodos tendientes a mejorer
l e
calidad proteica,abre
l e p o s i b i l i d a d de u t i l i z a r l o s nosolo
coino fuente de protaine a n i - m e l . s i n o también como fuente de proteina pera l a elinentscibn humana.Pars asegurar une buena a l i m e n t s c i 6 n , p r o t e i c e e s necsaario
no
s o l or e c u r r i r a l a s proteinas de origen v e g e t a l , sino que a e debe r s c u r r i x
-
e diversas t e c n o l o g f e s que. permitan obtener o t r a s fuentes protclicae d i g t i n t a s de ¡as , v e g e t e l e s .
rEjsmplo da ésto son
los
t r e b e j o s l l e v a d o s a cebo an a l Departapaoto de M i c r o b i o l o g í e de l e Universidad del Estedo de,wichigan,en
donde por medio de modelos matemlticos s i m u l a r d n l a fermentacibn continua dala
-
l a c t o s e d e l
suero
a ácido l é c t i c o . , neutralizando con emor+o', coneel ob-.
j e t o de producir u n suplemento a l i m e n t i c i o pera .rumiantes con
un
conte-nido a l t o de protein8 crude. E 1 modelo p r e d i j o
el
tiampo necesario, para.
l o g r a r l o s estados de mayor e . f i c i e n c i e . Posteriormente hicierdn prúebes.
experi'mentales usando L a c t o b e c i l l u s Bulqaricus como'j i n b c u l d .En e l l a b o r a t o r i o de Oretom Dskar s e p e r f e c c i o 6 u n procedimiento por medio d e l cual e l contenido p r o t e i c o de l e yuca sa incremantabe me- d i a n t a el crecimiento d e un moho. S i n embargo pare +btener un buen cre-
1
Antecedentes;
L
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ir,
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3
A I S L A H I E N T O DE §A
T
RIA5 L A E T CAS A H I L O L I T I E I N F L U E N C I A DE L A TERPERATURA Y EL MEDIOIiIUTRICIO E N LA PRODUCCIOir D E A C I D 0 L A C T I C O .
AS
.
.
-
MA. C E C I L I A AGUILAR Z A C A R I A S .
A I S L A M I E N T O DE E A C T E R I A S L A C T I C A S A M I L O L I T I C A S E INFLUEi1iCIA DE LA TEMPERATURA Y EL MEDIO N U T R I C I O EN L A PRODUCCION
DE A C I D 0 L A C T I C O .
I hi T A0 DU CC ION
E l e q u i l i b r i o entre e l incremento poblacional y e l
-
incremento en l a produccidn a l i m e n t i c i a se ha v i s t o afectado grandemente en l a s Gitimas décadas, debido
a
un aumento en l atasa
de c r o cirnien to.Aunado a l problema de l a escasez alimenticia, eneon-
tramos que l a c a l i d a d n u t r i t i v e da l o s productos alimenticios es b o j a , siendo d e f i c i e n t e principelmente de vitaminas y protefnas.
En Rayo de 1 9 6 7 The United Nations Economlc &d So
-
c i a 1 Council, p u b l i c 6 u n documento llamado “Incremento en l a pro
-
ducción y
e l
uso de l a s protefnas”. Dicho documento plantea como-
un problema muy s e r i o l e carencia de p r o t e f n a s a n i v e l mundial, se-1-
ñalando que es p o s i b l e empezar a e l i m i n e r ’ a s a carencie con 1s e l a b o
-
r a c i d n de nuevas t e c n o l o g í a s q u a aprovechen s u s t r a t o s capaces deser
”
,
transformados por microorganismos. dando por resultado e l enriqueci-
y .vitamínico de l a d i e t a . ( 1 4 )
: d e s a r r o l l o de .métodos tendientes a mejorar l a ca-
abre l a p o s i b i l i d a d de u t i l i z a r l o s sustratos no-
I
”
s d l o corn8 fuente de p r o t e í n a p a r a l a alimentacidn animal. sino tam-L
bién como fuente p r o t e i c a ? a r a l a alimentación humana, a s i mismo-
F ootener o t r a s fuentes p r o t e í c a s d i s t i n t a s d e l a s v e s e t a l e s . debido
a que é s t a s no abastecen l a s necesidades de l a poblaci6n.
Con e l descubrimiento de Pasteur en 1 0 5 7 de que l a s - fermentaciones se r e a l i z a b a n por medio de b a c t e r i a s y levaduras (
6
) y partiendo d e l hecho de que p o r medios fermentativos se pueden ll=ver a cabo enriquecimientos p r o t e f c o s , como s e demuestra an v a r i a s
i n v e s t i g a c i o n e s ( 1 5 ) s e han elaborado d i v e r s a s tecnologías fermep
t e t i v a s p a r t i e n d o . d e diversos t i p o s de s u s t r a t o s como son:
s u s t r a t o s amilaceos; sorgo, yuca, maíz, haba. etc. 2 9 , 7, 9 . 4 )
.
s u s t r a t o s i e c t e o s : l e c h e , suero de l e c h e , e t c . ( 3, 10
1
s u s t r a t o s d i v e r s o s ; melazas, a l f a l f a , y o t r o s s u s t r a t o s v e g e t a l e s
-
( 2 6 , 8 , 17 ).
E n t o d o s d l o s se obtuvieran r e s u l t a d o s muy-e=tisfec*
-
t o r i o s an cuanto a l mejoramiento a l i m e n t i c i o ... .
OBJETIVO Y ANTECEDENTES
E1 o b j e t i v o d e e s t e t r a b a j o es i n v e s t i g a r l a p r e s e n
-
c i a d e b a c t e r i a s l é c t i c a s a m i l o l f t i c a s a p a r t i r d e e n s i l a j e s y de-f e r m e n t a c i o n e s t r a d i c i o n a l e s , cuya p r o d u c c i 6 n d e á c i d o l a c t i c 0 s e a '
e l e v a d a
y
d e t e r m i n a r sus c a r a c t e r í s t i c a s de c r e c i m i e n t o con d i f e r e n-
t e s s u s t r a t o s
y
a . d i f e r e n t e s t e m p e r a t u r a s .. ,
D e n t r o da
los
p r o c e s o s f e r m e n t a t i v o s encontramoa a-
l a f e r m e n t a c i ó n l á c t i c a , l a c u a l es l l e v a d a I ) c e b o p o r b a c t e r i a s
-
p e r t e n e c i e n t e s a l a f a m i l i a l a c t o b a c t a r i s c a a e . ~ s t a f a r m e n t a ¿ i S n-
+as da i m p o r t a n c i a d e b i d o a que
el
p r o d u c t o p r i n c i p a l d e l - m e t a b o l i smo
d e d i c h a s - h a c t a r i s s ,el
k c i r l n 1 hrtico, . % i e n e d i f e E a F t e o .y
muy-
i m p o r t a n t e s a p l i c a c i o n e s i n d u s t r i a l e s . Es u t i l i z a d o en l a i n d u s t r i ade
l a
l e c h e y sus d e r i v a d h s . eqJ1a i n d u s t r i a t e x t i l , l a i n i l ¿ s t r i a-
c s r v c c e r a , anla
c o n s e r v a c i ó n de los a l i m e n t o s etc. ( 2 5 , 5 ). ,
- 3 :
. .
.~
. .
-
* .€1 uso d e t é c n i c a s p a r a l a c o n s e r v a c i ó n de l o a a l i
-
mentos. como
el
s a l a d o de c a r n e s , l a d e s e c ' a c i ó n . e l uso d e salmue-
ras
etc,
d a t a d e t i e m p o s muy a n t i g u o s . E x i s t a n e v i d e n c i a s d e que l a. .
- c i v i l i z a c i o n o r i e n ' t a l fué l a p r i m e r a en p r e s e r ' v a r l o s a l i m e n t o s por-^
, .
m e d i o s f e r m e n t a t i v o s .
S e ha e t r i b u i d o a
L.
p l a n t a r u m y L. b r e v i s p r i n c i- ,
-
palrnente,
el
d e s a r r o l l o d e d i c h a s f e r m e n t a c i o n e s . d e b i d b e l r á p i d o -c r e c i m i e n t o y a l a g r a n c a n t i d a d d e á c i d o l á c t i c o quc pueden produ-
c i r . ( 22 )
_.
mentan e l c o n t e n i d o p r o t e f c o y v i t e m l n i c o de é s t o s , a s i como tam, b i e n aumentan
su
d i g e s t i b i l i d a d ( 29 ) .Estudios h e c h o s en c e r e a l e s ( 11) donde comparen
el
a f e c t o d e l a g e r m i n a c i ó n y d e l a f e r m e n t a c i d n se ha v i s t o que
el
-
p o r c i e n t o d e l v a l o r n u t r i t i v o r e l a t i v o de i n c r e m e n t a s i g n i f i c a t i -
vamante d u r a n t e l a f e r m e n t a c i d n n a t u r a l .
E s t u d i o s p o s t e r i o r e s d e m o s t r e r o n que en e s t a s fermen
-
t a c i o n a s predominan l a s b a c t e r i a s 6 c i d o 1 8 c t i a a s . d e l a s c u a l e s se
han a i s l a d o ;
-
L. farmantum
,
C.
c e l l o b i a s s,
P e d i o c o c o s a c i d i l a c t i c i o p a r t i r de t r i g o y d e h a r i n a d e m a f z f e r m e n t a d a s ( 27 )Otro t i p - d e s u s t r a t o s u t i l i s a d n s p e r e l l e v a r a cabo.
l a f e r m e n t a c i d n á c i d o l á c t i c a son
las
r a i c e s , t a l e s como e l cacahua-
t e ( 2 4 ] l a yuca ( ZU
1.
Es
muy p r o b a b l e q u e a 1 i n c r e m e n t o witamf-nice y p r o t a í c o acompañen también e s t a s fcrrn-p+ncinnr?a.
-
Gran p a r t e d e
los
v e g e t a l e - no u t i l i z a d o s p a r ael
-
p r o c e s a m i a n t o son v i s t o s como m a t e r i a l e s de d e s p e r d i c i o , pezmanea-
c i e n d o e n e l l o s un p o t e n c i e 1 n u t r i c i o n a l no u t i l i z a b l e .
Estos
deae- c h o s pueden s e r r e c i c l a d o s y p r e s e r v a d o s en forma de e n s i l a j e s p o r m e d i o d e una f e r m e n t a c i d n l á c t i c a y p o s t e r i o r m e n t e p r o c e s a r s e comoa l i m e n t o p a r a r u m i a n t e s , l a s c o n d i c i o n e s p a r a que e s t o se l l e v e a
c a b o e s t a n r e p o r t a d a s p o r
N.
J. Moon (18
)D e n t r o de l a s f e r m e n t a c i o n e s t r a d i c i o n a l e s de nues
-
t r o p a f s mas i m p o r t a n t e s l l e v a d a s aC E S tenemos e l a masa f e r m e n t a d a d e
u t i l i z a d a como a l i m e n t o fundemental
g r u p o s i n d í g e n a s , como los chamulas
. -
cabo p o r b a c t e i i a s á c i d o l á c t i -maíz, denominada p o z o l , que e s
e n
el
sur de M é x i c o p o r a l g u n o sc i d n presenta una m i c r o f l o r a muy compleja, entre l a s especies des
-
c r i t a s s e encuentran l a s s i g u i e n t e s ;
B a c t e r i a s ; Achromobacter p o z o l i s
,
Aerobacter aerogenes,
Agrobac- terium azotophilum entxe o t r a s .Levaduras; Candida g u i l l i e r m o n d i i
,
&.
k r u s e i, &.
t r o p i c a l i s y-
o t r a s .Hongos; A l t e r n a r i a t e n u i s
,
A s p a r g i l l u s f l a v u s,
Fusarium y o t r o s ( 1 2 )G E N E R A L I D A D E S
a ) B a c t e r i a s -1Bcticas
E l ácido l á c t i c o f u 6 descubierro en 1780 por C. U.
-
Sgheeler. obteniendo10 e p a r t i r de leche ácida y mas tarde a p a r t i rde l a c t o s e y goma tragacanto, mediante tratamientos con dcido n f t r i
co ( 10 ).
c.
Biandeau en 1847 probó quee l
dcido l á c t i c ose
forma-
be mediante farmentaci6n, d i e z años mas tarda Pasteur dewostrb que-e s t a fermentación l e l l e v a b a n a cabo c i e r t a s b a c t e r i a s s 18s c u a l e s
O r l a Jensen an 1919 l e s d i 6 l a c l e s i f i c e c i 6 n de b a c t e r i a s l á c t i c a s .
Dentro de l a s c s r a c t e r S s t i c a s p r i n c i p a l e s de l a s b a g
t e r i a s l á c t i c s s s a encuentran l a s s i g u i e n t e s ;
B a c i l o s c o r t o s y l a r g o s , gram p o s i t i v o s , no formado-
res de esporas, gemeralmentn no ma-vilen, cataioqa negativns, ron c g
pacidad para former Bcido l á c t i c o , anaerobias f a c u l t a t i v a s , s i n c r e cimiento s u p e r f i c i a l no seductores de n i t r e t o :
-
-
A e s t e grupo da b a c t e r i a s l á c t i c a s que se l e s llamó
-
*verdaderas" se suma e l grupo da l a s ' f a l s a s batteries" o Microbac- terium debido a que pueden p r o d u c i r ácido l á c t i c o siendo c a t a l a s e-
p o s i t i v a s y con capacidad de c r e c e r superficialmente.L e s b a c t e r i a s l á c t i c a s "verdaderas" pueden s e r homb-
.fermentatives, produciendo mas d e l 85% de ácido l á c t i c o a partir d e
glucosa,
y
heterofermentatives, produciendo Bcido l á c t i c o , bióxido-de carbono, e t a n o l y ácido a c é t i c o .
Cetabolismo de l a s b a c t e r i a s ácido l á c t i c a s hornoferrnentativas
GLUCOSA
glucosa
6
P. f r u c t o s e
6
P-
K:::
f r u c t o s a 1 . 6 P
I
-
g l i c a r a l d e h i d o 3 PI
t
d i h i d r o x i c e t o n a
P
c,.
~p+KhAD
1 , 3 ’ d i f o s f o g l i c e k a t o NADH
~-
‘JK
ATP ADp9
f o s f o g l i c e r a t o2 f o s f o g l i c e r a t o
f o s f o e n o l p i r u v a to
- -
K:TP
p i r u v a t o
NADH2
6
IU’AD LACTATOCatabolismo de l a s b a c t e r i a s
é c i d o
l é c t i c e s hatroferrnentativas.GLUCOSA
- , .
. .
glucose
6
f'-
NADH?6
fosfogluconatoI
,NADNADH2
r i b u l o s a 5 P
x i l u l o s a 5 P
I
I
.- .
. .
I
g l i c e r a l d e h i c b 3 P a m t i - P
.
NADHZ. . ,
a c e t i l COA
2 ATP
. . p i r u v a t o
.
.
. .
'2
I
Subdivisión de l a s b a c t e r i a s ácido l b c t i c a s .
I
I
Forma, y a r r e g l o de Modo de fermentar c o n f i g u r e
l a s c é l u l a s l a g l u c o s e ' cidn da1 ac.
E s f e r a s en cadena homofermentativo L
Eaferas en cadena hateraferment.
D
L
E s f e r a s
en
t e t i a d a honofermantativoD L
B a c i l o s variados veriados
.-
Género
Streptococos
Leucono s toc
Padiococos
L a c t o b a c i l o s
Dentro da l a s a s p e c i a s hoaofermentativas d e l gCnero
-
de l o s l a r t o b e c i l o s encontrarnos a :
-
L.
ceucatsicu-s4.
l a c t i s,
L.
h a l v i t i c u s,
t.
a c i d o f i l u s,
1.
-
bu1-
g a r i c u o ,L.
t e r m o f i l u s,
L.
,
k.
plantarumy
otros.Dentro da l a s e s p a c i a s hatamfermentatives tenemos
e;
-
p.
buchneri,
4.
b r e v i s,
4.
farmanti y o t r a s . ( 21 )Debido a l a gran capacidad adaptativa, a l rango tan
-
amplio de temperature donde pueden c r e c e r y a l a producción de &ci-do l e c t i f o , se l e s puede encontrar tanto en l a m i c r o f l o r a i n t e s t i n a l , an l a cavidad o r a l , en l a vagina, a s i coma también en l o s productos-
. .
_u__.__ ~ i .
.-.
-- rL
F b J F e r m e n t a c i o n e s t r a d i c i o n a l e s .
i
i ) f e r m e n t a c i o n e s t r a d i c i o n a l e s mundiales.
Dentro d e l a s f e r m e n t a c i o n e s mas a n t i g u a s que se t i e - nen d a t o s se e n c u e n t r a n l a s f e r m e n t a c i o n e s o r i e n t a l e s .
r
8 ;-i. L a
fabrication
d e l “Chiang” d a t a d e 500 años d.c.,
. de este f e r m e n t a c i ó n s e d e r i v ó e l Hiso,
c
c
c
C
c
E n t r e l o s elirnentos f e r m e n t a d o s q~es p o p u l a r e s se en-
cuentren; l e s a l s a d e s o y e . e l miso, e l s a k e y
otros.
E x i s t e n muchos otros a l i m e n t o s o r i e n t a l e s p r e p a r a d o s p o r m e d i o d e f e r m e n t n c i o n e s-
g o l i d a s v e r i a n d o en e l l o s 6nicamente l e msnufactura, e l t i p o do sust r a t o usado, o e l t i p o de m i c r o o r g a n i s m o .
%
€1 humanatto, p o r e j e m p l o , es o b t e n i d o a p a r t i r d e
--
f r i j o l de soya. Los chinosLo
l l a m a n “ t u su” ylos
f i l i p i n o s l t a os i ” .
Este p r o d u c t o es u s a d o como a g e n t e s a b o r i z a n t e .
E 1 tempeh. e s un a l i m e n t o de o r i g e n i n d o n a s i o , o b t e -
2
n i d o e p s r t i r d e f r i j o l d e s o y a f e r m e n t a d o p o r R h i z o p u s o l i g o s p o r u s
-
Como muchos p l a t i l l o s t r a d i c i o n a l e s . e l tempeh es e l p l a t i l l o p r i n
-
c i p e l .E 1
s u f u o ”queso chino” es o b t e n i d o a p a r t i r d e f r i - - j o l d e soya. E 1 o n t i j o r n es un a l i m e n t o d e l e s t e d e l e I n d i a se o b t i e-
.
ne p o r l a f e r m e n t a c i ó n d e c a c a h u a t e m o l i d o . . i i ) fe r m e n t a c i o n e s t r e d i c i o n a i e s mexicanas.
c
2..
L
. .
Es
muy i m p o r t a n t e e l p a p e l que l a s f e r m e n t a c i o n e s t r a-
r
, I d i c i o n e l e s han t e n i d o e n n u e s t r o p a l s . d e b i d o a l uso muy comGn e n t r el e g e n t e d e e s c a s o s r e c u r s o s .
L
c
E 1 v a l o r n u t r i t i v o y m e d i r i n a l s e ha comprobado en a-.* t i g a d o r e s , entre e l l o s destacan l o s l l e v a d o s a cabo por T e o f i l o He
i..
r r e r a y Miguel U i l o a , l o s c u a l e s r e a l i z a r o n u n estudio general sobre
ri
A" l o s a s p e c t o s mas s o b r e s a l i e n t e s de l a m i c r o f l o r a d e l pozo1 ( 28 ).
P En estudios p o s t e r i o r e s sobre e s t a feqmentecibn l o
-
i r h
grarbn a i s l a r una nueva b a c t e r i a Jgrobacterium arotophillum
,
l a cual t i e n el a
capacidad de f i j a r Nitrógeno, y presente adem65 e f e c t o s an-
r".
c t a g ó n i c o s sobre aJgunas especies becterianes patbganes para e l hombre.
ir
Existen o t r o s t i p o d de fermentaciones en donde l a s b a s
t e r i a s & i d o l 4 c t i c a s no son l a s Gnicas responsables ds & s t a s , y que
B i n embargo contribuyen a l l e v a r a cabo
l e
fermentacibn, como e s e lcaso d e l pulque, tesgüino, tuba, colonche, tepache y o t r a s .
.
c
c
E1 a n á l i s i s qufmico comparativo de e s t a s feraehtacio-. ne8 a s i como l e s d a mafz y pozoi, que a continuación se muestran,
-
fuerbn l l e v a d a s e cabo en e l Dpto. de Botánice d e l I n s t i t u t o de Eio
-
_c
f-
l o g f e de l a UNA#.
i
c.
-
..
'c'
Es importante s e ñ a l a r l a e x i s t e n c i a da o t r a s fermenta
-
i
cianea t r a d i c i o n a l e s aún no i n v e s t i g a d a s , que a l i g u a l que l a s ante-
f-
L
r i o r e s,
t i e n e n v a l o r a s n u t r i c i o n a l e s y medicinales no conocidos. !I
(
1 6
I IEn base a l conocimiento de l a s propiedades de l a s f e r -
L
~.
menteciones d i c i o n a l e s se han d e s a r r o l l a d o t e c n o l o g f a s que permi
-
ten; S c a l e r o s procesos, aprovechar l o s
dasperdici0s:industriales
y desechos c o l a s ( 1 ) y obtener ae3ores rendimientos. Asi mismo
s e han d e s a r r o l l a d o planea de i n v e s t i g a c i ó n con e l o b j e t o de optimi-
l-
- r a , r l o s { 2 ) haciendo u s o delos
mas s o f i s t i c a d o s mktodos actuales-
i
r
I
, I
Ii-
como l e computación.
Anfaiisis químico de tesgtlino .pulque tuba y c b l o n c h e
I I * < .
s . , .
*,.
%bide P r o t e i n a C a l c i o Fdsforo H i e r r o T i a m i n a R i b o f l a v i n a N i a r i n a V i t . C.9%
"9s6
-
A n e l i s i s químico d e l pozo1 y d e l maíz.
c
Cons
t
It uyent
es--
_. -. plitrdgeno
P r o t eín a A r g i n i n e
H i s t i d i n e
L i s i n a
t e u c i n e
I s o l e u e i n a
Treonina
V a l i n e
T r i p t o f a n o
Metionina
F e n i l a l a n i n a
Mafz g/lOOg.
1.68 10.50
3-08
2.54 3.05 12.95 5.00 5.05 4.510 . 4 6
1 . 5 4
5 . 3 1
Pozo1 g/LflOg.
2.43
15.18
3.34 2.07
3.36
.
-10.02-
5.16
5.69
4.53
0.71
1 . 4 6
L 8,
v t.
Constituyentes
M e l t g/lOag. P o z o 1 g/lOOg...I
.I
Calcio
28.0
249.0?” F d s f o r o
438.0
i r i
T i e m i
ne
0 . 4 0.
y
L -
Riboflavine
o.
1 5Y” N i a c i n a
-
&,.
r
i, I
-
c
3.26
4.52
0 . 2 7
0.70
9.84
.
c
M A T E R I A L Y METODO
1.
~ l s b o r a c i ó n de e n s i l a j e s .Los
t i p o s de e n s i l a j e s preparados fueron una mezcla-
de c o l con d i v e r s o s t i p o s de h a r i n e s y
col
s i n mezcla de harinas.L a c o l se c o r t ó en pedazos pequetios, l o s qua sa m o l i o
rmn
en u n mortero perfsctemente hasta obtener una pasta. 6stame
me=
c l 6 con harina de t r i g o i n t e g r a l ( M 1 ), h a r i n a de yuca (
H2)),
c e l u-
l o s a
( M3 ) , y c o i s o l a ( M4 ). Estas mezclas se mentuvicron a 4 2C
durante
15 d i a s
an f r a s c o s cerradoo. durante &Sta i n t e r v a l o de tiem-P O
se
h i c i e r ó n datermineciones de pH, y s e tomaron muestras, l a s quepoetcriormenta se sembrarón en c e j e s que conte..ien medios de Tomate,
Rogosa,
LE,
y posteriormente se incubaron-a 37C.
._
O
-
i-1
O
Recto a g a r
Recto peptona
Bacto-AA s i n vitam.
S u l f . de ma-gnasio
hoptohidratado a l 0.9%
Cloruro de c a l c i o
dihidratado a l 0 . 9 %
Jugo de tomate comercial ( c o n t r i fugado)
F o s f a t o Qcido de amonio
a l 9%
Carbonato de sodio
a l 8%
1 5
10
10
10 a i l .
10 m l . 700 m l .
100
n i l faobrenadante)-
l O m l .
m i . n e c e s a r i o s p a r a a j u s t a r e l
.
Becto t r i p t o n a
Bacto E. de L e v a d u r a
Bacto d e x t r o s a
Bacto a r a b i n o s a
Becto secerpsa
Acetato de sodio
C i t r e t o de amonio
F o s f e t o monopotlsico
S u l f a t o de magneaio
S u l f a t o de manganeso
S u l f a t o f e r r o s o
Mcnoole&.u de sorbitan
Bacto a g a r
-
10
5
1 0
5
5 1 5
2
6
o.
57
0.12
0.03
1
15
Mmdio LB (
Q/lt
1
T s i p t o n a
1
E. da Lavedura
o.
5C l o r u r o de eodio 1
2. Aislamiento de b a c t e r i a s í a c t i c a s .
Las c o l o n i a s que crecieron de l o s e n s i l a j e s sembrados
se pasaron nuevamente a c a j a s conteniendo e l mismo medio de c u l t i v o Cdicionendo a é s t e a z ú l de a n i l i n a ( c o l o r a n t e indicador de acid62
1.
Las c a j a s s e incubaron a 3 7 C, l a s c o l o n i a s que se tornerón a z u l e s
-
aran l e s productoras de acidéz. Esta operación se r e a l i z ó l a s veces n e c e s a r i a s h a s t a . o b t e n e r e l c u l t i v o a i s l a d o , v e r i f i c a n d o s e por mediod e t i n c i o n e s de Gram. .
O
Los aislamientos de pozo1 se h i c i e r o n en forma simi
-
l a r , tomando l a muestra directamente.
3.
Almacenamiento de l a s c o l o n i a s productoras de acidez.
Una v e z seleccionadas l a s c o l o n i a s productores de a
-
c i d e f , s e pasaron e tubos conteniendo e l mismo medio usado en e l a i s
-
lamiento. en p o s i c i ó n i n c l i n a d a , se incubó a3 7
C , crecidas l e s c o l o n i a s se almacenaron an e l r e f r i g e r a d o r ..
O
4 .
Siembra de l a s c o l o n i a s produckoras de acidCz en medio pera l a-
d e t s r a i n a c i ó n de
l a
producción de hcido l á c t i c o .-
j
..~
- . Redio p a r a l a determinación de ácido l á c t i c o g / l t
: ,.
E.
de levadura 2.5 , '~~.
T r i p tona 5.0
Cloruro de Sodio 2 . 5
S u l f a t o de amonio 2.0
. G l U ' C S SE 10.0
.~ ~.
L a s c o l o n i a s productoras de a c i d e z s e sembraron e i p cubaron e 37 C. l a presencia d e t . u r ú i d e z en e l m e d i o f u k i n d i c i o d o crecimiento microbieno.
O
p a r a d e t e i i P r I S f r ! ; ~ < : L . n e . o c i 6 n st: a : . ; i t . i v r i ú IFJ m e z c l e
-
fórmico 25%
-
f o s f d i r k o cone.en
une relecilln 3 ~ 1 , agregando 0 . 6 m lde l a mezcla p o r cada 5 m l d e l medio.
Posteriormente se c e n t r i f u g ó a 3 O00 r.p,m, durante
-
1 5 minutos, separando l a s c € l u l a s y determinando
e l
écido l á c t i c o-
en e l sobrenadante, tomando1
m i de é s t e para p r e p a r a r l a muestre.5. Preparación de l a muestre p e r a l a determinación de bcido l á c t i c o .
A 1 in1 de l a muestra se añadieron 2 m l de metano1 ab- s o l u t o mas 0 . 4 m l de ácido s u l f ú r i c o
a l
50%. La muestra se calentó- durante 30 minutos a 55OC. se d e j ó e n f r i a r y s e adicionó1
i 1 de-
agua. se a g i t ó p o r i n v e r s i ó n d e l tubo durante 1 minuto.
M e s
tarde-
s a 1 s adicionaron 0 . 5 m i de cloroformo. s e a g i t ó p o r inversión d e l % - tubo durante medio m i n u t o , s e tomó l a f a s e no acuosa para l a deter- rrinecidn de Bcido l á c t i c o . Previamente se prepsrfi une saliición t e s -t i g o con ácido l á c t i c o a l 1
5
I
I
6.
A l a s muestras e s t e r i f i c a d a s se l e s hizo l a determinación de he& !I
do l e c t i c o en e l cromatógrafo de gesss
,
u t i l i z a n d o hidrógeno y n i -trdgeno como gases acarreadores.
l
7.
Prueba paragenada, de l a s
mezcld con l a s
como p o s i t i v a ;
l a determineci6n de catalacra. --
En un p o r t a o b j e t o s s e colocan unas gotas de agua O X ~
c o l o n i a s en almacenamiento se tomó una asada y se
-
gotes. A l o b s e r v a r s e burbujeo l a reacción se r e p o r t ó
I
de l o c o n t r a r i o se reportó como negativa.
E . Siembra de c o l o n i a s p r u d u c t o r s ~
c'e
acidéz e n m e d i o r i c o y p o t r s ,*
t .
-E1 medio usado f u é s i m i l a r a l que se u t i l i z ó para l a determinacidn d e ácido l á c t i c o Únicamente v a r i a en l a adición de
20
gramos da almiddn en l u g a r de 10 graisos de glucusa, además se e d i c j o
*..
c
-
naron 20 gramos de a g a r . E s t o por l o que respecta a l medio r i c o .
c
..
- 9 .
de
s a
Medio pobre g/lt.
almiddn
a u l f e t o de anonio .
f o s f a t o ácido de p o t e s i o
s u l f a t o de magne
s
i oc l o r u r o de s o d i o
E.
de l e v a d u r aa g a r
Determinación de
Iodo.
20.0
10.0
2.
02.0
2 . 5
a.
520.0
../
l a h i d r ó l i s i ' s d e l almidón p o r medio de vapores
L a s c o l o n i a s que c r e c i e r ó n en l a s c a j a s con a l m i d ó n
I
l a s hizo p a s a r vapores de Iodo sobre l a s u p e r f i c i e ,
si
l a pruebae r a p o s i t i v a u s e observaba un h a l o a l r e d e d o r de l a s c o l o n i a s .
10.. Observación, de
l e
producción de gas por l a s c o l o n i a s productoras de acidez.. .
, .
~~ II
La5 c o l o n i a s s e siembran en e l mismo medio u t i l i z a d o '
incubandose a 37 O
C.
A l a s-
p a r a v e r l e producción de ácido l á c t i c o ,4 8 hrs. se tomó e l pH y se observó s i h a b f a proí!uccirjn d e gas. P a r a
..: ~
.
[:
c
c
e.
c
.'
c
c
c
-I:
--
f
c
c
L,
r:
c
L -
r .
I:
.c
.i
t u b o d e e n s a y e en posPei6n'
inversa.
Se r e p o r t ó producción de g a s dea c u e r d o s i h a b i a o no b u r b u j a s d e n t r o d e l tubo.
11. O b t e n c i ó n d e l a c i n é t i c a de c r e c i m i e n t o a 37OC.
Se p r e p a r ó l i t r o y medio de medio p a r a v e r p r o d u c c i ó b
d e l á c t i c o con
l$
d e g l u c o s a , 750 m i d e l c u a l c o n t e n i e n20
g / l t de-
a g a z . P r e v i a m e n t e se e s c o g i e r ó n 3 c e p a s . d e a c u e r d o a sue c e r a c t e r i o
t i c e s f i s i o l b g i c e s , l e s c u a l e s se rasembraron en e l medio l f q u i d o
-
( 3 t u b o s c o n t e n i e n d o 30 m l c a d a uno ), se i n c u b a r o n a
37
O C, a l a s 24 hra. se seleccind l a da más r á p i d o - c r e c i m i e n t o .€1 i n d c u l o s e l e c c i o n a d o se pasó e un m a t r á z Erlen He-
y e r . c o n t e n i e n d o 60
m l
d e l mismo m e d i o , sa i n c u b ó a 37OC d u r a n t e 1 2-
hrs.
a l t é r m i n o d elos
c u e l e s se pas6 e un volumen meyor [ 600 m i a-
proximadamante ) . I n m e d i a t a m e n t e se i n i c i ó l a o h t e n r ~ i h n de I n c i n á t i
ce.
I
Los p a r á m e t r o s m e d i d o s
se
d e t e r m i n a r o nel
ttl.
i . t12I
.
O'e n t r e uno y o t r o i n t e r v a l o d e t i e m p o t r a n s c u r r i ó un l a p s o de 2 h r s .
se d e t e r m i n ó :
1 Biomasa
!
..
a ) c u e n t a en p l a c a
A1 t i e m p o ' t x s e ' d i l u y d l a muestra, pasando 1 m l d e 6s t&en
9
m l d e l a s o l u c i ó n s a l i n a i s o t ó n i c a é s t é r i l yasi
sucesivame'lo-.'
d e l a s ú l t i -t e p a r a obtener las d i l u c i o n e s 10
mas d i l u c i ó n e s s e tomó 1 m l y se sembró en c e j a s p e t r i , i n c u b a n d o s e
a
3i0t
.
1
-1 10-2 10-3 10-4
\
b ) d e n s i d a d ó p t i c a .
1
1 0 m l y se ley6 en e l espectrofotómetro a 5 4 0 nm. E l blanco usado
-
f u 6 medio de c u l t i v o no inoculado.
I1 pH
i
La determinaci6n d e l pH s e hizo en l a s muestres donde
*
se determinó densided ó p t i c a . E1 pH se determino con un potenciámetro.
1 1 1 Reacción de antrona
P e r a l l e v a r a cebo e s t e reacción s e desprotsfnizó 1a-
muestra previamente. A
1
m i de l e muestra se agregó 1.5 m l de egua,-
se nazckd vigorosamente, se adicinaron 0.2 m l de s u l f a t o de z i n c
-
( 50 g / l t ) 8 8 mezci6 y posteriormente se c a n t r i f u g ó .
-
A 1 m l d e l sobrenadente s e l e adicionaron 4 m l d e l r e a c -.
t i v o de antrona, sa mezcló vigorosemente y ae- puso en
L d u
m s i i a du-
r e n t e 10 minutos a l f i n d de l o s c u a l e s s e e n f r i ó y se ley6 en e l es- pactrofotómetro a 620 nm. E 1 blanco usado f u é agua d e s t i l n d e .
E l - r e a c t i v o de antrone se prepara disolviendo l a a n t o
na an ácido s u l f ú r i c o a una concentración de 0.2
%
i
I
-
IV Acidez t a t e l
A 5 m 1 de & a muestra, tomados directamente, se e d i c i o neron 4 5 in1 de agua d e s t i l a d a
1
d i 1 1: 10 ) agregandole 4 gotas defg
n o f t a l a i n a , s e . t i t u l 6 con hidrdxido de sodio 0 . 1 0 6 2 N
..
V Determinación de ácido l á c t i c o por cromatografía de gases. ,
I
RESULTADOS Y DISCUSION
La g r á f i c a 1 m u e s t r a l a s c u r v a s de pH c o n t r a t i e m p o ,
O
o b t e n i d a s de l o s 4 t i p o s d e e n s i l a j e s e l a b o r a d o s
e
i n c u b a d o s a 4 2 C.Como se puede a p r e c i a r e l medio N l t i e n e un l e n t o de-
cremento en e l pH, en tsnto que l o s m e d i o s
M2.
M3. 'Fd4.el d e s c e n s o-
d e l pH es m6s r4p.id0, d e b i d o p r o b a b l e m e n t e a que en e s t o s m e d i o s l er i q u e z a n u t r i t i v a es e l e v a d e . l o que da p o r r e s u l t a d o un i n c r e m e n t o en e l consumo y d i s p o n i b i l i d a d d e l sustrato, y como c o n s e c u e n c i a una r á p i d s d i s m i n u c i ó n d e l pH d e b i d o a l a p r o d u c c i ó n d e á c i d o .
E1 d e s c e n s o en e l pH d e l M2 es s i m i l a r a l fl3, aún . -
c
cuando e s t e medio no es t e n r i c o , comparandolo can l o s medios 3
y
4.Con r e s p e c t o a e s t e medio se e s p e r a r l a un decremento s i m i l a r a l o b
-
t a n i d o p o r e l medio M 1 ,_.
O
- I
I
De l o s e n s i l a j e s i n c u b a d o s a 37 C no se h i c i e r o n d e
-
term:naciones d e pH d e b i d o a que e s t a s c e p a s ya h a b i e n sidc s i s l e d a s .E n e s t e c a s o l a s c a p a s a i s l a d a a fueron de c o l ( M 1 ), c o l con m a í z
-
(M 2
), p l á t a n o (M J
).I
I
En l a s g r á f i c a s2
y 3 s e muestra e l número y t i p o d ei
m i c r o o r g a n i s m o a i s l a d o a p a r t i r d e l o s e n s i l a j e s i n c u b a d o s e 4 2
y
-
37
O C , d u r a n t e l o s d i f e r e n t e s d i a s que duró l a f e r m e n t a c i ó n . OI
E n
los e n s i l a j e s a O 2 C e l t i p o de m i c r o o r g e n i s m o s--
que predominb f u e r o n l o s l s c t o t a c i l o s ,
-
permaneciendo c o n s t a n t e e l n imero d e a i s l a m i e n t o s o b t e n i d o s d u r a n t e e l t i e m p o d e f a r m e n t a c i b n .
O
A 37 C se o b s e r v a q u e en l o s p r i m e r a s d i e s de l a fer- m e n t a c i ó n e l i n c r e m e n t o en e l núrrero d e m i c r o o r g a n i s m o s a i s l a d o s e s
con l a b i b l i o g r a f í a , en donde se s e ñ a l a que p a r s e s t e tipo de f e m e '
t a c i b n , durante l o s primeros d i e s hay predominio de k t o b a c i l o s y
de leuconostoc, e s t a última especie principalmente, dado que no 80
-
p o r t a pHs muy b a j o s . A medida que decrece
el
pHel
número de especies de leuconoetoc y algunas especies de l a c t o b a c i l o s ven disminuyendo.En l a s g r á f i c a s s a observa, p a r a l o s d i a s p o s t e r i o r e s
incrementos y deciementos i r r e g u l a r e s en ambas e s p e c i e s , debido a
-
que l o s t i p o s de microorganisnos presentes, aGn siendo d e l mismo
-
g4ner0, varían de acuerdo e l pH a x i s t e n t s enel
medio.I
La
g r á f i c a 4 mua-stra e l porcentaje de microorgsnismosh o s o l á c t i c o s y h e t e t o l á c t i c o s con respecto a l o s d i f e r e n t e s medios de
donde fueron a i s l a d o s .
.
O
Para l e c o l B 42
c
y p o z o l . l o s porcentajes son simi-
.
l a r e s , observandQ98Turi iiiarcedo incremento err l o s o r q e n i s m s hetero
-
l á c t i c o s . Esta s i m i l i t u d se debe a que en ambas fue-ntes de aislamie'
to la$emperatura e s
el
f a c t o r que determina a l c a r a c t e r h e t e r o l á c t iI
. -
-
I
I
C O . Aunque
el
pozol como t a l s e encuentre^ a l a temperatura d e l medio ambiente,e6
e l
proceso de su e l a t o r e c i d n e s dondese
l l e v a a cabo l ai
i
. . . .
e a l e c c i d n de organismos en base a l a temperatura.
O
Para l o s medios de c o l incubados a
37
C e l p o r c s n t a j s de microorganismos homolácticos es ligeramente .. mayor debido e que l e s> .
temperatures m e s ó f i l a s favorecen e s t e c a r a c t e r .
. I .
La g r á f i c a 5 mbestre l o s p0rcentaje.s de l o s ' m i c r o o r g o
s de un determinado g€nero. a p a r t i r de l a s d i r e r e n t e s - '-
.
En ambas g r á f i c e s s e observa un predomi$io en e l/
,-
-
* -
. .
c lamiento de M o b a c i l o s
-
segtiido de leuconostoc. -, cc
.,.
r.. O
c o l a 4 2 O C . siendo s i g n i f i c a t i v o también en col a 37
C
y en p o z o l .-
en tanto que p a r a leuconostoc e l porcen$aje mayor i o encontramos e@L"
'p
k p o r o l .
L e b i b l i o g r a f f e reporta una g r a n adaptabilidad p a r a
-
P
- *
l o s l a c t o b a c i l o s respecto a l e temperatura y a l medio n u t r i c i o , s i e p do de tendencies t e r m o f í l i c a s . A 1 comparar con l a g r á f i c a se observa concordancia a e s t e reqpecto.
Es importante obeervar l a ausencia d a s t r e p t o c o c o a an
l o g e n s i l a j e s de c o l y e l b a j o porcentaje de e l l o s en pozol, debido
-
o que l o s requerimiento-s n u t r i c i o n a l e s de Bstos son muy a l t o s , gene-
ralmente s e encuentran en e u s t r a t o s . n o ~ v e g e t a l e s . como e l e s t i e r c o i .
La
ausencia de pediobocos en p o r o l , se d a t a a que es- t o a organismos s a encuentran principalmente en s u s t r e t o s v e g e t a l e s yno en cereales. fermentados cnmn n a e l . c e s n ~ . d e L . ,no.zal:..
-
. -
I
' I I En l a t a b l a
I
se muestran l o a r e s u l t a d o s de ie r e a c-
,,
'- ci6n de l a c a t a l a s e . l a ~ . p r b d u c c i b n de ges.. e l t i p o de Pernc-ioci6n-
( l a s determinaciones d e l t i p o de-fermentacibn no s e r e a l i z a r o n den-
tro
de e s t e proyecto) e l pH f i n s i d e l ,medio ( determinedo an e l me-
d i o donde e e v i o produccibn d e ' g a s ) y l o s gr/lt de ácido l d c t i c o
-
p,roducido. Con respecto a l o s 2 últimos puntos cabe hacer nqtar
l a
-
eetreche rela'cián que e x i s t e e n t r e ~ - l a a l t e produccián de & i d o l a c
-
t i c o y e l notable decremento d e l pH.
-. -
I
I
I
Se puede o b s e r v a r que en l a meyoria de l e s cepas homo
1 6 c t i c a s e1 pH es b a j o , debido a l predominio en ' l a produccidn de é c i
do l d c t i c o .
~~~~
La r e a c c i b n de l a c a t a l a s a no es un método muy c o n f i g
puede heber p r e s e n c i a d e b u r b u j a s a 1 m e z c l a r e l agua o x i g e n a d a con l e
m u e s t r a y no ser o b s e r v a d a s a s i m p l e v i s t e o b i e n s e r c o n f u s a l a pre-
s e n c i a d e b u r b u j a s y r e p o r t a r r e s u l t a d o s e q L i v o c o s .
L a s g r á f i c a s
6.
7,
8 , muestran l a c a n t i d a d de á c i d o 1 6 st i c 0 ( g r / l t ) p r o d u c i d o p o r los d i f e r e n t e s g e n a r o s a i s l a d o s .
En
l a s 3 g r á f i c a s s e o b s e r v a mayor produccidn da a c i d e z a 37OC p a r alos
d i f e r e n t e s g e n e r o s . P a r a l o s-
l a c t o b a c i l o s l a produc-
c i ó n d e a c i d á z no b e r i a mucho r e s p e c t o a l m e d i o , s i n embargo se o b s e L van v a r i a c i o n e s mayores r e s p e c t o a l a t e m p e r a t u r e . L a u c o n o s t o c p o r su
p a r t a p r e s e n t a menor p r o d u c c i ó n d e a c i d e z en c o k e 4 2 C
y
en p o z o l .y
as un t a n t omas
p r o d u c t i v o enc o l
e 37 C en comparacidn c o n l o s -1--
b a c i l o s .O
O
*
-w
P a r a este g e n e r o t a n t o l e t e m p e r a t u r a komo l a f u a n t e d e a i s l a m i e n t o son i m p o r t a n t e s en l a p r n d u c c i ó n de e c i d b z l d e i g u a l farma
que p a r a l o s p e d i o c o c o s d e l a c o l a 37OC.
-
E s impar-tante mencionar que eGn cuando l o p i o d u í ~ i 6 n
-
d e a c i d é t ( a n g r / l t )
es
e l e v a d a p a r alos
s t r e p t o c o c o s a i s l e d o s de-
p o z o l ,
l a
c a n t i d a d d e éstos no e s t a n s i g n i f i c a n t e como p a r a g e n e r a l i-
z a r l e s c o n d i c i o n e s a l a s c u a l e s hay buena p r o d u c c i ó n de a c i d é z . !
L o s d a t o s o b t e n i d o s d e l e n s i l a j e a
37OC
y
d e l p o z o l--
muestren que e s p o s i b l e a i s l a r a p a r t i ' r de e l l o s d i f e r e n t e s g é n e r o s
-
con buenas c a r a c t e r i s t i c e s en c u a n t o a p r o d u c c i d n de a c i d é z . i
L a s g r a f i c a s
9.
10, 11. 1 2 muestran l a s d i s t i n t a s con-
d i c i o n e s e n s a y a d a s a l e s c u a l e s s e h i c i e r o r , c r e c e r los d i f e r e n t e s g on e r o s a i s l % d o s de c o l a 3 7 O C. col a 42OC y p o z a l , e s i como el porcen-
-
t a j e d e c r e c i m i e n t o de cada uno d e e l l a s b a j o e s a s c c n d i c i o n e s . . o b s e L-
v e n d o s e q u e en g e n e r a l hay rnaqc,~ c r r c i m i e n t o a 3 1 O C y en P l m i $ 5 r i r i c o
( almidbn-peptona ), siendo
el
pozol l a fuente de donda se puede a i s l e r l a mayor cantidad de microorganismos a m i l o l f t i c o s h e t e r o l é c t i c o sDe l e s t r e s d i f e r e n t e s fuentes de eislemiento l a que-
aportó mayor cantidad de microorganismos con c a r a c t e r i s t i c a s i á c t i c a s
hornofermentativas, a m i l o l í t i c a s , fué l a de c o l fermentada e
37
C de-donde s e a i s l a r o n
6
cepas con e s t a s c a r a c t e r f s t i c e s . De i g u a l forma de pozol se a i s l a r o n 5 cepas con c a r a c t e r í s t i c a s l á c t i c a s , h e t e r o f e gmentativas, a m i l o l l t i c a s y 4 cepas con l a s mismas carect.erfsticas.de c o l ferementeda a 42
C.
O
O
L e g r á f i c a 13 muestre l a c i n é t i c a de crecimiento da
-
-
O
una cepa e s p e c f F i c a , l l a v a d a a cabo a
37
C.Se puede o b s e r v a r que
a
medida que transcurre e l t i s nr
PO e l númzro d e microorganismos aumenta exponencialrnente entre e l
-
a s i mismo l a absorbancia a 420 nm (biomase) t i e n e
i n t e r v a l o t 5'
t6'
su mayor increaento e n t r e 1 u i i n t e r v s l o s t,,, t7. Indicendo que den
-
I
I t r o d e e s t e ranqo de tiempo es donde se l l e v a a cabo e l mayor c r e c imiento de microorganismos
,
Respecto a l pH,
el
decremento mayor se l o g r a a n t r esl
t7.
De
i g u a l forma a l p o r c e n t a j e de acidhz t o t a l l o g r e ,6'
i n t e r v a l o
t
SU m6Gimo aumento dentro de á s t e i n t e r v a l o .
,
Respecto a l consumo da s u s t r a t o . se midió por medio
-
de l a reección de antzona ( l o s datos de e s t a s mediciones no se repoL t a nan
l a g r s f i c a ) . nbservandose disminución da Cste conforme trans-c u r r i ó e l tiempo, s i n embargo en e l i n t e r v a l o f i n a l s e observó un
re
pentino incremento, quiz6 debido a e r r o r e s e n l a medición o en e l m g
n e j o de l o s r e a c t i v o s .
L
La producción d e acidez mec'ida como g r / l t de & i d o
--
r
i n t e g r a b a e l l á c t i c o producido, bin embargo e l g r e f i c a d o r s i repor
-
t a b a p i c o s r e s p e c t i v o s a l 1ác:tico.Estos p i c o s s e iban increnentando, aunque lentamente
conforme t r e n s c u r r i a e l tiempo de l a fermentacibn,
.
.
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,
I
I
I
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I
I
I I
I
I I
I
. i
Tabla I
E n s i l a j e de c o l a
3
7
'
C
cepe no.
12(2)
13
15
16
17
' 1 821
23-1
26 28 28-A29
30 3 133
4 66 5
,
J66
66-E
6 7
cat a l a s a Perm en t a c i d n
h e t e r o
h e t e r o
h a t e r o
h e t a r o
h a t a r o
homo
h e t e r o
h e t s r o
homo
h e t e r o
homo
. h e t e r o h e t e r o
homo
homo
h e t e r o
h e t e r o
homo
homo
homo
homo
h e t e r o
Ac. L e c t .
i g r / l t )
1.70
0.12
0 . 4 8
O.
69
2.802.65.
O.
54
0.53
3.24
3.63
3.99
4.37
0.44
3.35
3.
O82.11
2.04
3.35
2.94
3.25
3.04 2.41PH
4.95
7.101.20
7.10
3.70
3.70
7.05
.
6-90
4.20
3.65
3.55
4.35
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3 r 9 O
4.10
5.95
4.103.85
3.80 3.203 . 3 5
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,c
c
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homo 3.66-
rr
-
homo 1 . 9 8-
-
homo 3.14-
-
-
h a t e r o 3.68-
homo 3.13-
-
homo 4.14-
-
homo 3.91-
~-
homo 5.58-
h e t a r o 3.93-
homo 4 . 2 3-
-
f
homo 4.516 . 9 0
3.95 3.
eo
3.35 3.603.95
3.35 6.80 3.60 6 . 9 0 3.75-
-
h e t e r o 1 . 9 26.90
.
h e t e r o nd nd
h e t e r o 1.08 3.70
-
-
-
-
homo
2
.-e2 6.90 'homo 1.88 3 . 8 5
-
-
E n s i l a j e de c o l a 4 Z 0 g
h e t e r o 0.00
h e t e r o 5.33 h e t e r o 0 . 9 0 h e t e r o 2 . 5 0 h e t e r o O. 78 h e t e r o 2.68 ha, 3 0 2.62
4 . 2 0
5;
50
4 . 5 5 4 . 5 0 7 . 9 5
4.EO
2OXXXCE
-
-
22XCE29XCE
1 P Z
2PZ
3P
z
7PZ8PZ
l 0 P Z 1 2 ( 1 A ) P Z ;2<1B)Pz 1 3 P Z 1 6 P i 1 9 P Z 21PZ 22PZ 23PZ
-
n d-
ndE n s i l a j e d e pozo1
h e t e r o
h e t e r o
h e t e r o b‘
homo
h e t e r o
h e t s r o
h s t a r o
h e t e r o
h e t e r o
h e t e r o
h e t e r o
h e t c r o
homo
. h e t e r o h c t e r o
h e t e r o
homo
homo
i.
25 1 . 6 51 . 4 2 2.90
.
2.03 O. 31 1 . 5 5 2 . 5 1 0 . 7 3 0 . 4 2 2.06 1 . 8 7 6.46 O. 37
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