PONTIFICIA UNIVERSIDAD JAVERIANA
FACULTAD DE CIENCIAS
CARRERA DE MICROBIOLOGIA INDUSTRIAL
VALIDACION RETROSPECTIVA Y CONCURRENTE DE LA
EFECTIVIDAD DE LOS DESINFECTANTES UTILIZADOS EN EL
LABORATORIO DE AGUAS Y LODOS DE LA PONTIFICIA
UNIVERSIDAD JAVERIANA
CUFIÑO VANEGAS FRANCY HELENA
MILLAN MORA JENIFFER PAOLA
BOGOTA D.C
VALIDACION RETROSPECTIVA Y CONCURRENTE DE LA
EFECTIVIDAD DE LOS DESINFECTANTES UTILIZADOS EN EL
LABORATORIO DE AGUAS Y LODOS DE LA PONTIFICIA
UNIVERSIDAD JAVERIANA
CUFIÑO VANEGAS FRANCY HELENA
MILLAN MORA JENIFFER PAOLA
APROBADO
Dra. Ingrid Schuler P.h.D Janeth Arias Palacios
VALIDACION RETROSPECTIVA Y CONCURRENTE DE LA
EFECTIVIDAD DE LOS DESINFECTANTES UTILIZADOS EN EL
LABORATORIO DE AGUAS Y LODOS DE LA PONTIFICIA
UNIVERSIDAD JAVERIANA
CUFIÑO VANEGAS FRANCY HELENA
MILLAN MORA JENIFFER PAOLA
Janeth Arias Palacios Luz Karime Medina Córdoba
Bacterióloga M.C Microbióloga Industrial
Directora Coodirectora
Diana Aldana
Microbióloga Industrial
NOTA DE ADVERTENCIA
Artículo 23 de la Resolución No.13 de julio de 1946 ‘La Universidad
no se hace responsable por los conceptos emitidos por sus alumnos
en sus trabajos de tesis. Solo velara por que no se publique nada
contrario al dogma y a la moral católica y por que las tesis no
contengan ataques personales contra persona alguna, antes bien
RESUMEN
En el presente estudio se realizo una validación retrospectiva y concurrente de los desinfectantes utilizados en el laboratorio de aguas y lodos de la Pontificia Universidad Javeriana. Con respecto al estudio concurrente se evaluó la eficacia de un desinfectante de alto nivel llamado FAGETRIALD a base de Glutaraldehido, empleado en la desinfección de áreas y superficies. El método utilizado para evaluar la eficacia del desinfectante frente a bacterias, fue la técnica de placa en agar mediante la siembra en estría, por medio de este procedimiento se logro determinar el porcentaje de inhibición del desinfectante de alto nivel FAGETRIALD a base de glutaraldehido, frente a cuatro microorganismos con propiedades y características diferentes:
Pseudomonas aeruginosa (ATCC 9027), Staphylococcus aureus ( ATCC 6538),
Bacillus subtilis (ATCC 6633) y Salmonella choleraesius (ATCC 1317). Se determino la eficacia del desinfectante en tres concentraciones distintas; La primera, correspondiente a la recomendada por el fabricante en su etiqueta; la segunda, correspondiente a la mitad de la dosis recomendada y la ultima, el doble de la dosis recomendada por el fabricante, determinando las siguientes concentraciones (0.25% V/V, 0.50% V/V, 1% V/V). Asimismo, estas concentraciones se valoraron en tres tiempos diferentes 5, 10 y 15 minutos para las siguientes cepas (Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, Salmonella choleraesius), y en el caso del estudio con un microorganismo esporulado (Bacillus subtilis) el tiempo de exposición de esta cepa frente al desinfectante fue de 2, 4 y 6 horas. Según el ensayo experimental, la reducción de la población microbiana en donde se valoraron los tiempos de 5, 10 y 15 minutos, fue de 99.05% para la concentración de 0.25%V/V y de 100% para las concentraciones de 0.50% V/V y 1%V/V. Con respecto al microorganismo esporulado este reflejó una reducción de 29.16% en la concentración de 0.25%V/V, en la concentración recomendada (0.50%) fue de 69.33% y en la concentración de 1%V/V fue de 99%.
Por otra parte se evaluó la efectividad del desinfectante FAGETRIALD frente un microorganismo micotico, el cual fue Penicillium sp. Se utilizo la Técnica de dilución en placa, queconsistió en agregar a un medio de cultivo ya preparado y estéril (PDA), las diferentes concentraciones del desinfectante a evaluar, sembrando después el microorganismo de interés por punción central para su desarrollo. Para el caso de este estudio, dicha técnica arrojo un porcentaje de reducción poblacional del 100%. El control de este experimento fue el medio de cultivo sin el desinfectante donde se indujo el crecimiento normal del microorganismo, dado que tenía las condiciones necesarias para su desarrollo.
INTRODUCCION
El mantenimiento de unas condiciones adecuadas y seguras en la manipulación de muestras en el laboratorio, exige la implementación de mecanismos que aseguren la higiene total de superficies, manos, equipos y utensilios de trabajo. La razón de ello, es que las impurezas y suciedades, se fijan de manera compleja a las superficies. Por norma general pueden estar encerradas mecánicamente en poros y hendiduras. Por tal razón, es necesaria la implementación de programas de limpieza y desinfección, con desinfectantes apropiados para los requerimientos del laboratorio para el cual se destinen, teniendo en cuenta la rotación de los mismos, para evitar la generación de resistencia por parte de los microorganismos contaminantes y alteradores de los procesos y resultados que allí se realicen.
Hoy en día, existen soluciones al alcance, para asegurar que la limpieza y desinfección se efectúen correctamente en el ambiente de laboratorio, buscando la eficiencia, eficacia y seguridad, que en las proporciones adecuadas de agua, producto químico, tiempo y temperatura brinden la calidad y la seguridad que se requiera. De esta manera la disposición apropiada de estos agentes desinfectantes y teniendo en cuenta los factores que los pueden llegar alterar, se puede lograr la idealizada bioseguridad como objetivo común de laboratorios y analistas.
El presente trabajo de grado muestra la información obtenida para realizar el Programa de Limpieza y Desinfección para los Laboratorios de Aguas y Lodos de la Pontificia Universidad Javeriana, utilizando como herramienta de trabajo la información de datos retrospectivos de los muestreos de ambientes y superficies de los años 2000 hasta 2009 con los desinfectantes utilizados en el laboratorio (Cloro y Desinfloor) y por otra parte los resultados de la validación concurrente que se realizó de un nuevo desinfectante a utilizar (FAGETRIALD) y los protocolos de limpieza y desinfección ya existentes en el laboratorio. En dicho nuevo programa de Limpieza y Desinfección, se especifica la rotación de desinfectantes a seguir y las concentraciones ideales a preparar y aplicar para cada laboratorio.
Para el estudio de los datos retrospectivos se utilizo un diseño observacional, retrospectivo donde se analizaron los datos y se calcularon su respectivas desviaciones estándar, para luego graficar los índices de carga microbiana antes y después de la utilización de cada desinfectante estudiado. Las variables de estudio para este diseño fueron la efectividad de los desinfectantes, los desinfectantes utilizados y las diferentes concentraciones de los desinfectantes utilizadas.
JUSTIFICACION Y PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA
En todos los ambientes de experimentación, en los que se trabaje con microorganismos, es necesario el uso de desinfectantes que impidan la contaminación microbiana de forma eficaz. El principal objetivo de la desinfección, es reducir la carga microbiana en equipos y superficies de trabajo hasta rangos permisibles.
Por otro lado, el hecho de hacer uso de un desinfectante cualquiera no significa tener con él un 100% de control de un problema infeccioso; es necesario evaluarlo periódicamente frente a diferentes retos, ya que el buen desempeño de este, está ligado a factores físicos, físico – químicos, estructurales y biológicos. Por consiguiente es de vital importancia detectar a tiempo la presencia de nuevos agentes microbianos mutantes, y comprobar frente a ellos la eficacia del desinfectante.
Para el caso específico de este proyecto, la presencia de una contaminación microbiana persistente en los laboratorios de Indicadores de calidad de aguas y lodos, pertenecientes a la facultad de Ciencias de la Pontificia Universidad Javeriana, ha traído como consecuencia, gran variedad de inconvenientes en los estudios y análisis que allí se llevan a cabo, entre los cuales se puede enumerar no solo la contaminación de medios de cultivo y muestras, sino también, una reducción sustancial en la confiabilidad de los análisis que allí se llevan a cabo y un riesgo para la salud de los analistas que allí laboran, teniendo en cuenta que dentro de la población contaminante encontrada, existen microorganismos patógenos (Salmonella sp., Staphylococcus aureus., Bacillus subtillis)
Por esta razón, es de vital importancia, indagar sobre la razón por la cual esta contaminación se viene presentando, evaluando así, en primera medida, dos factores fundamentales desde el punto de vista de la limpieza y desinfección, como principal herramienta para el control de la flora contaminante, que muy posiblemente serian la causa de dicho problema de contaminacion. Estos dos factores son: (a) Eficacia de los desinfectantes utilizados (Hipoclorito de sodio, DESINFLOOR® y FAGETRIALD®) y (b) Protocolo de limpieza y desinfección que allí se ejecuta.
MARCO TEORICO
En el marco de la limpieza y desinfección se deben establecer conceptos claros con respecto a lo que se entiende por Desinfectante, y a los microorganismos que se busca eliminar con los procesos de limpieza y desinfección que se llevan a cabo de rutina en los laboratorios de experimentación e investigación.
En primera medida, los desinfectantes son unas sustancias que reducen de una manera importante la población microbiana de un medio, pudiendo actuar sobre ellos de dos formas: con el sufijo “cida” como los fungicidas o bactericidas que provocan su muerte, o con el sufijo “estático” como los fungiestáticos o bacteriostáticos que inhiben el crecimiento o la multiplicación de los microorganismos. Pueden actuar de varias maneras: desnaturalización de proteínas del protoplasma celular, alteración o rotura de las paredes celulares, inactivación del complejo enzimático, acción oxidante o reductora entre otras (1). Un buen desinfectante, debe como mínimo poseer las siguientes características:
- Eficacia para el mayor espectro de microorganismos posibles y tener una rápida acción biocida.
- No provocar fenómenos de resistencia. Los fenómenos de resistencia ocurren cuando el uso reiterado de determinados desinfectante provoca la aparición de mutaciones genéticas en los microorganismos que los hacen más resistentes frente a la acción biocida.
- Mantenerse estable en presencia de residuos orgánicos y de aguas duras. Las aguas duras son las que contienen en abundancia carbonatos y bicarbonatos de calcio y magnesio, por lo que corta el jabón e impide la formación de espuma.
- Ser soluble en agua y arrastrarse fácilmente con el enjuagado, sin dejar residuos.
- No transmitir olores ni sabores en las superficies donde este se aplique. - No deteriorar las superficies con las que entra en contacto.
- No resultar contaminante para el medio ambiente. (2)
El hecho de que un desinfectante no cumpla con estas características, puede dar cavida a la generación de contaminaciones no deseadas dentro del laboratorio de trabajo, es decir, deje de cumplir su función fundamental.
Sin embargo, un desinfectante puede NO cumplir a cabalidad con su función, por causas que no siempre atañen a su naturaleza, sino más bien, a ciertas condiciones presentes en el medio de acción del mismo. Dichas condiciones tienen que ver con:
- Concentración del agente y tiempo de actuación: Que para obtener el efecto deseado, dependen del tipo químico del desinfectante y del tipo de microorganismos a eliminar.
Los agentes aniónicos suelen ser más efectivos a pH ácidos, (b) Los agentes catiónicos muestran más eficacia a pH alcalinos. (3)
- Temperatura: Normalmente, al aumentar la temperatura aumenta la potencia de los desinfectantes. Para muchos agentes la subida de 10 grados supone duplicar la tasa de muerte.
- Naturaleza del microorganismo y otros factores asociados a la población microbiana: Dentro de los cuales se tienen que tener en cuenta factores fisiológicos y del crecimiento microbiano, como la especie de microorganismo, la fase de crecimiento en la cual se encuentra (ya que a según la fase de crecimiento la población será mayor o menor) y la presencia de estructuras de resistencia (que de estar presentes necesitan de mayor severidad en el tratamiento).
- Presencia de materiales extraños: La existencia de materia orgánica en el material a tratar (p. ej., sangre, suero, pus) afecta negativamente a la potencia de los desinfectantes, hasta el punto que pueden llegar a hacerlos inactivos en cuanto a su poder desinfectante y/o esterilizante.
- VALIDACIÒN:
Validación es establecer, por medio de evidencia documentada, y con un alto grado de aseguramiento, qué un procedimiento específico o producto cumple con unas especificaciones y atributos de calidad predeterminados.
El proceso de validación se inicia con las actividades de pre validación, los cuales consisten en la recopilación de la información relacionada con el proceso en la revisión de las evaluaciones de riesgos, una calificación técnica a las instalaciones locativas y a los equipos, existencia de procedimientos para las tareas u operaciones, y el entrenamiento a los trabajadores. Posteriormente se procede a elaborar protocolos en donde se definen los objetivos específicos de las evaluaciones a efectuar, las responsabilidades de cada una de las áreas involucradas en la validación, se establece las variables de interés que se quieren monitorear y el plan de monitoreo respectivo además de incluir los criterios de aceptación que no son otra cosa que la comparación de los resultados con los niveles permisibles o los resultados esperados. (4)
- Elementos de la validación
o Evidencia documentada: Incluye los experimentos, datos, resultados analíticos que apoyan la formula maestra, las especificaciones del producto en proceso y terminado, y el proceso de fabricación aprobado.
o Reproducibilidad: se deben fabricar múltiples lotes (por lo menos tres), de tamaño comercial para demostrar que el proceso es reproducible. o Especificaciones y atributos de calidad y pre-determinados: los
controles para producto en proceso deben haber sido establecidos durante el desarrollo del proceso y del producto. (6)
Tipos de validación
o Validación prospectiva: Se lleva a cabo durante la etapa evolutiva en la cual se incluye una división del proceso de producción en pasos separados, y el análisis de los puntos potencialmente críticos en el proceso de fabricación. De igualo manera se puede entender como una validación conducida antes de la distribución de un producto nuevo, o producto hecho bajo un proceso de fabricación revisado. (6)
o Validación concurrente: Establecimiento de evidencia documentada para demostrar que un proceso cumple con su propósito, basados en la información obtenida durante la implementación del mismo, consiste en el monitoreo del proceso de las variables criticas que puedan demostrar que el proceso está bajo control. Se puede decir que este tipo de validación se utiliza cuando no existen datos disponibles de procesos anteriores. (6)
o Validación retrospectiva: Establecimiento de evidencia documentada para demostrar que el proceso cumple con su propósito, a partir de unos datos previamente establecidos o una revisión histórica del mismo, se podría hablar de un proceso para un producto ya en distribución basada en datos acumulados de producción, de prueba y control. (6)
o Revalidación: Es la repetición de un proceso de validación o parte del mismo, esto no significa que debe volver a repetirse todo el proceso, solo se realiza cuando hay un cambio en uno de los componentes críticos del proceso o en la formulación. (6)
- PROGRAMA DE LIMPIEZA Y DESINFECCION
conjunto de actividades que son aplicadas a cada una de las áreas, para eliminar o disminuir a un mínimo aceptable la carga microbiana presente en los equipos, utensilios, personal, planta física y en el ambiente. (7)
Aspectos metodológicos:
La metodología que se empleara para el desarrollo de la fase de laboratorio de esta investigación, estará fundamentada en diversos estudios microbiológicos realizados anteriormente, que prueban o evalúan la eficacia de cualquier sustancia que se espera, pueda ejercer un efecto antimicrobiana:
- Técnica de Estrías: Empleado por Medina, 2008 (8). Para la evaluación “In
vitro” de la eficacia de un desinfectante de alto nivel a base de Peróxido de hidrogeno, consiste en una prueba semicuantitativa basada en el cálculo de porcentajes de inhibición según el crecimiento observado tras el montaje de la técnica.
OBJETIVOS
OBJETIVO GENERAL
Realizar una validación retrospectiva y concurrente de la efectividad de los desinfectantes utilizados en los laboratorios de indicadores de calidad de aguas y lodos de la facultad de Ciencias de la Pontificia Universidad Javeriana.
OBJETIVOS ESPECIFICOS
- Verificar la eficacia de los desinfectantes utilizados en la limpieza y desinfección de superficies de los laboratorios de indicadores de calidad aguas y lodos de la facultad de ciencias de la Pontificia Universidad Javeriana, mediante una validación retrospectiva.
- Evaluar y validar de manera concurrente, la eficacia de un desinfectante a utilizar en el laboratorio de indicadores de calidad aguas y lodos de la facultad de ciencias de la Pontificia Universidad Javeriana.
METODOLOGIA
METODOLOGIA 1 Validación concurrente (TECNICA POR ESTRIAS)
PREPARACION TUBO No.2 (PATRON DE MAC FARLAND)
Staphylococcus aureus , Pseudomona
aeruginosa, Salmonella typhi, Bacillus
subtilis.
PREPARACIÓN DE INOCULO
0.2mL BaCl + 9.8mL H2SO4
Tubo con 5mL de solución salina 0.85%, con una concentración final 6x108 células. (Suspensión bacteriana)
Agregar 0.5mL de la suspensión bacteriana a 4.5mL de Caldo Nutritivo
Incubar 37°C por 24 horas.
(Staphylococcus aureus , Pseudomona aeruginosa,
Salmonella typhi)
37°C por 72 horas. (Bacillus
subtilis)
PREPARACIÓN CONCENTRACIÓN DE DESINFECTANTE (FAGETRIALD)
Concentraciones 0.25%, 0.5% y 1%( V/V)
Ejemplo 0.25% V/V
Agregue 0.25mL de FAGETRIALD en
100mL de agua.
MÉTODO DE ESTRIAS
Tomar 1mL del inóculo y agregar a los 9 mL de las diferentes concentraciones del desinfectante
preparadas.
Tiempos de contacto con el
desinfectante: 5,10 y 15 minutos
(Staphylococcus aureus , Pseudomona
aeruginosa, Salmonella typhi)
Tiempos de contacto con el
desinfectante: 2, 4 y 6 horas.
(Bacillus subtilis)
METODOLOGIA 2 Validación Concurrente (DILUCION EN AGAR)
Se divide la caja de petri en cuatro partesiguales y sembrar
Cuadrante 1: Control Positivo, Cuadrante 2: 5 min, 2 h,
Cuadrante 3:10 min, 4 h, Cuadrante 4: 15 min 6 h.
Incube con los respectivos tiempos
Lectura de inhibición
Porcentaje cada estría 25%
PREPARACION MEDIO CULTIVO (AGAR PDA)
Pesaje
Esterilización 121°c/15lb presión/20 minutos.
PREPARACIÓN CONCENTRACIÓN DE DESINFECTANTE (FAGETRIALD)
Concentraciones 0.25%, 0.5% y 1%( V/V)
Agregar las concentraciones de desinfectantes al medio de cultivo ya esterilizado
Servir en Cajas Petri
Sembrar Penicillium sp por punción central
Incubar a 25°C durante 7 días
Lectura
Servir en Cajas Petri
METODOLOGIA 1. Validación Retrospectiva
Resultados y discusión
Antes del uso de un nuevo desinfectante, en ambientes de análisis microbiológico, como los laboratorios, sea este de uso clínico, ambiental, de alimentos o docencia, es necesaria su validación, cuyo objetivo principal es establecer las concentraciones, tiempos de acción y rotación, bajo la cual se aplicara en el laboratorio.
Para este efecto, existen diversos tipos de técnicas que permiten determinar dichos parámetros, dentro de los cuales se encuentra el usado en el presente estudio, la siembra por estrías, para el caso de bacterias, y la técnica de dilución en agar, para el caso del hongo. Según lo reportado por Klingeren B., los diferentes métodos utilizados para la evaluación cuantitativa de la eficacia de los desinfectantes comparten el mismo principio, y difieren en algunos detalles como lo son: Preparación del inoculo, carga orgánica de la superficie a tratar, tiempos de exposición, y criterios de interpretación (9).
Sin embargo, aunque mínimas, las diferencias tanto físicas como técnicas que existen en los diferentes métodos utilizados, pueden resultar en diferencias significativas para los resultados obtenidos, mas específicamente en los factores de reducción, si se compara de una a la otra (9). Los principales factores que pueden llegar a determinar estas diferencias son esencialmente, la Materia Orgánica presente, la ayuda mecánica para lograr un contacto directo de la bacteria con el agente desinfectante, y los mecanismos de recuperación o revivificación para el microorganismo que se empleen (medios de cultivo, siembra) (9).
Los resultados obtenidos de la validación concurrente a través de este ensayo experimental se examinaron por medio de un análisis descriptivo a través de tablas y graficas, donde se observa el comportamiento de cada microorganismo después de
RECOLECCION DE DATOS
Reportes de muestreo de ambientes y superficies años 2008-2009
ANALISIS DE DATOS
Prueba T
ser expuesto a cada unas de las concentraciones y tiempo evaluado del desinfectante, de esta forma se estableció la mejor concentración del desinfectante que actué frente a cada microorganismo.
Con respecto a la tabla 1,2,3 y 4 donde se observan los resultados obtenidos de los diferentes microorganismos evaluados, se puede decir que el desinfectante FAGETRIALD inhibe en un 100% al microorganismo que origino el estudio de este trabajo el cual es Staphylococcus aureus. En los dos ensayos se logro esta inhibición dando como resultado que se puede aplicar la mínima concentración evaluada la cual corresponde a 0,25% durante el mínimo tiempo evaluado el cual fue cinco minutos. Los mismos resultados se observaron para Salmonella typhy y Pseudomona aureginosa. Por otro lado el comportamiento de Bacilllus subtilis fue muy variado, en la concentración de 0,25% durante dos horas de exposición tuvo un promedio de inhibición de un 19%, a las cuatro horas presento una inhibición del 25% y a las 6 horas fue de un 38%. A medida que avanzaba la concentración el porcentaje de inhibición era mayor. En el caso de la concentración de 0,50% durante las dos horas se logro una inhibición de un promedio del 29%, a las 4 horas de 39,5% y a las 6 horas de 58%. Por último a la concentración del 1% durante las 2 horas se logro una inhibición promedio de 96%, a las 4 y 6 horas de un 100%. Este comportamiento se atribuye a que los microorganismos esporulados forman una barrera a la entrada de los agentes antimicrobianos, ya que las membranas que rodean el núcleo de la endospora actúa como factor adicional al limitar la penetración del agente químico (Henao 2008). Como se sabe las esporas poseen un núcleo con gran contenido de dipicolinato de calcio, lo cual aumenta su termoresistencia y también ayuda a dar resistencia frente a sustancias químicas (10). Es por esto que los tiempos de exposición para Bacillus subtilis son mayores con respecto a la demás bacterias evaluadas. La técnica utilizada para estos microorganismos fue la de estrías y el porcentaje se definió de la siguiente forma cada estría tenía un valor de 25% en total eran cuatro por cada cuadrante para un total de 100%. Para que la estría fuera valida tenía que tener más del 50% de crecimiento. El hecho de haber empleado un método de estrias (Tecnica In vitro), para determinar el porcentaje de inhibición bacteriano, hizo posible asegurar, experimentalmente hablando, que se dieran todas las condiciones para lograr una inhibición del 100% para la mayoría de los microorganismos implicados, dado que no existía materia orgánica presente que interfiriera en la forma de acción del desinfectante, se empleo ayuda mecánica para lograr una mezcla adecuada de la suspensión bacteriana con el desinfectante (empleo de vortex), y las condiciones de cultivo para la recuperación de los microorganismos fueron satisfactorias (medio de cultivo nutritivo, tiempos y temperaturas de incubación específicos según genero bacteriano).Con respecto al hongo evaluado el cual fue
Penicillium sp. presentó un porcentaje de inhibición promedio del 100% en todas las concentraciones evaluadas.
agente químico que se utiliza como sustancia esterilizante y como desinfectante de alto nivel. El mecanismo de acción consiste en la aniquilación de componentes celulares alterando la síntesis proteica de los ácidos ADN y ARN (11). El formaldehido es el aldehído más sencillo y se emplea sobre todo como desinfectante gaseoso. Es un desinfectante de alto nivel. Es activo frente al grupo amino de la molécula proteica y, en solución acuosa, es marcadamente bactericida y esporicida, presentando también un efecto letal contra los virus de la influenza y poliomielitis (11). Su mecanismo de acción produce inactivación de microorganismos por aniquilación del grupo amino y sulfidrilo de proteínas y del anillo nitrogenado de bases pùricas lo que hace alterar la síntesis de los ácidos nucleícos (11). El cloruro de alquidimetillbencilamonio y de alquildimetilletilbencilamonio son compuestos de amonio cuaternario, considerados como agentes activos catiónicos potentes en cuanto a su actividad desinfectante, ya que son tensoactivos pera eliminar bacterias gram positivas y gram negativas, estas últimas en menor grado. Son bactericidas, fungicidas y virucidas. Su mecanismo de acción es atribuida a la inactivación de enzimas, desnaturalización de proteínas esenciales y la ruptura de la membrana celular (11). El mecanismo de acción del alcohol isopropilico consiste en la desnaturalización de proteínas y algunas ocasiones destruyen a los microorganismos por lisis direct (12). De acuerdo a los componentes de este desinfectante se confirma que es de alto nivel y logro inhibir en su totalidad a todos los microorganismos evaluados en la concentración más baja, a excepción de Bacillus subtilis, el cual tiene un mecanismo de esporulación lo cual lo hace más resistente pero logra inhibirse a la más alta concentración. De acuerdo a los resultados de inhibición se decidió utilizar el desinfectante en el laboratorio de Aguas y Lodos de la Pontificia Universidad Javeriana a una concentración de 0,25% durante 5 minutos, pues con estos dos parámetros se logra una inhibición del 100% .
Por otra parte el estudio de la validación retrospectiva se intento estudiar por medio de una prueba T, pero los datos retrospectivos se encontraban muy dispersos. Ya que los resultados del 2007 tenían datos no coherentes dado que solamente aparecía el registro del recuento de las unidades formadores de colonia después de la aplicación de los desinfectantes y con los registros del 2008 y 2009, la prueba estadística realizada arrojo una distribución NO normal de los datos, por lo cual se decidió analizar dichos registros por medio de una estadística descriptiva (Ver gráficos 5 a 12).
Con respecto a los resultados obtenidos en la revisión, organización, tabulación y análisis de dichos datos retrospectivos, se determino la poca o nula eficiencia en el modo de uso y aplicación de los desinfectantes utilizados hasta entonces (hipoclorito de Sodio y Desinfloor), al expresar estos, altos índices de crecimiento de la población microbiana después de la limpieza y desinfección, sobre todo, en el caso del hipoclorito de sodio, debido a que probablemente, se utilizaban bajas concentraciones para la aplicación del mismo. Por otro lado, dichos resultados, también dejaron ver, la ineficiencia en la rotación establecida para los mismos, y en el seguimiento de los protocolos establecidos para su aplicación
una resistencia al agente desinfectante, lo cual supone un problema en la limpieza y desinfección, problema que muy comúnmente se da (3).
Finalmente, en base a los resultados obtenidos tanto en la validación retrospectiva, como en la validación concurrente de un nuevo desinfectante (FAGETRIALD),se realizo una modificación de fondo y forma, del protocolo de limpieza y desinfección, redactado específicamente para los Laboratorios de Indicadores de Calidad en Aguas y Lodos de la Pontificia Universidad Javeriana (Documento ubicado en el laboratorio). Dentro de las modificaciones de dicho protocolo figuran como las más importantes:
- Determinación de una nueva rotación de desinfectantes que incluye: (a) Distribución en la aplicación de los desinfectantes especifica para cada uno de los laboratorios componentes de la línea de indicadores de Calidad de Lodos y Aguas (Ver anexo 3); (b) Determinación de concentraciones especificas para la preparación de cada uno de los desinfectantes a utilizar en la limpieza y desinfección, para cada uno de los laboratorios componentes de la línea de indicadores de Calidad de Lodos y Aguas; (c) Procedimiento para la preparación de cada una de las soluciones de desinfectantes según su concentración (Ver anexo 4); (d) Procedimiento para ejecutar las actividades de limpieza y desinfección en cada uno de los laboratorios componentes de la línea de indicadores de Calidad de Lodos y Aguas (Ver anexo 5).
Conclusiones:
- Se realizó una validación retrospectiva y concurrente de la efectividad de los desinfectantes utilizados en los laboratorios de indicadores de calidad de aguas y lodos de la facultad de Ciencias de la Pontificia Universidad Javeriana.
- Se logró verificar la eficacia de los desinfectantes utilizados en la limpieza y desinfección de areas y superficies de los laboratorios de indicadores de calidad aguas y lodos de la facultad de ciencias de la Pontificia Universidad Javeriana, mediante una validación retrospectiva.
- Se evaluó y validó de manera concurrente, la eficacia de un nuevo desinfectante a utilizar en el laboratorio de indicadores de calidad de aguas y lodos de la facultad de ciencias de la Pontificia Universidad Javeriana, obteniendo asi datos precisos de las concentraciones y tiempos de actuación, específicos, para su aplicación en dichos laboratorios.
- Se redactó un nuevo programa de limpieza y desinfección, que incluye modificaciones a los instructivos y protocolos allí consignados, de acuerdo a los resultados obtenidos en las validaciones realizadas (Documento ubicado en el laboratorio).
Bibliografia:
(1) Togores, J.H. 2003. Tratado de Enología. Editorial Mundi-Prensa Libros. Pág. 698.
(2) Hyginov, C. (2001) Guía para la elaboración de un plan de limpieza y desinfección. Ed. Acribia.
(3) Universidad Nacional del Nordeste. Acción de los agentes químicos sobre las
http://fai.unne.edu.ar/biologia/microgeneral/microianez/19_micro.html#desinanti sep. [Consulta 20 de junio de 2010].
(4) Estrada Carlos. Los procesos de validación como herramienta para el control de riesgos laborales. 1999. [En linea] http://www.ibermutuamur.es/El-proceso-de-validacion-como.html. [Consulta 20 de junio de 2010].
(5) Rodriguez Rebeca. Mayo de 2004. Validacion de procesos. Taller de validación OMS. Experto Nacional en medicamentos. FDA. Guatemala. [En linea]
http://www.paho.org/Spanish/AD/THS/EV/bpm-validacion-procesos-fda-ppt. [Consulta 28 de mayo de 2010].
(6) Guia de validación de métodos analíticos. Ministerio de Salud. [En linea] http://www.ministeriodesalud.go.cr/protocolos/guiavalidacionmetodosanaliticos. pdf . [Consulta 28 de mayo de 2010]
(7) Albarracin, Fanny. Carrascal, Ana Karina. 2005. Manual de buenas practicas de manufactura para microempresas lácteas. Primera edición. Editorial Pontificia Universidad Javeriana. Bogotá, D.C
(8) Medina C, Luz Karime., Valencia, Ligia., 2008. Evaluacion de la eficacia de un desinfectante de alto nivel, a base de peróxido de hidrogeno, empleado en la estrilizacion de dispositivos, e instrumentos hospitalarios. Microbiologia Industrial. Pontificia Universidad Javeriana. Facultad de ciencias. Departamento de microbiología. Bogota. 88.
(9) Klingeren, B. Disinfectant Testing on surfaces. 1995. National Institute of public health, and environmental protection. Journal of hospital infection. 30, 397-408. (10) Murray T., Popham, L., Setlow, P. Identification and characterization of
pbpC, the gen encoding Bacillus subtilis PBP3. Journal of bacteriology. 178,
6001-6005.
(11) Gutierrez,J. Monsalve, I. Evaluación de la eficacia de glutaraldehido al 2% y MadaCide-1 como sustancias desinfectantes frente a las cepas S. aureus, E.coli, C.albicans y B.subtilis. Pontificia Universidad Javeriana. Bogota. 2006.Pag 19-20.
ANEXOS
ANEXO 1. Tablas y gráficos
Tabla No. 1. Porcentajes de inhibición de un desinfectante a base de Glutaraldehido (FAGETRIALD) sobre Salmonella typhi.
Salmonella typhi
Concentración
Porcentaje de inhibición
5' 10' 15'
Promedio Promedio Promedio
0,25% 100% 100% 100%
0,50% 100% 100% 100%
1% 100% 100% 100%
Grafica 1. Porcentajes de inhibición de un desinfectante a base de glutaraldehido sobre
Salmonella typhi.
0% 20% 40% 60% 80% 100% 120%
5' 10' 15'
Por
ce
n
taje
d
e
in
h
ib
ic
io
n
Tiempos de exposicion en minutos
Porcentaje de Inhibicion de un desinfectante a base de
Glutaraldehido (FAGETRIALD) sobre Salmonella typhi
0,25%
0,50%
[image:21.595.85.516.189.602.2]Tabla No.2. Porcentajes de inhibición de un desinfectante a base de Glutaraldehido (FAGETRIALD) sobre Staphylococcus aureus.
Staphylococcus aureus
Concentración
Porcentaje de inhibición
5' 10' 15'
Promedio Promedio Promedio
0,25% 100% 100% 100%
0,50% 100% 100% 100%
1% 100% 100% 100%
Grafica 2. Porcentajes de inhibición de un desinfectante a base de glutaraldehido sobre
Staphylococcus aureus.
Tabla No.3. Porcentajes de inhibición de un desinfectante a base de Glutaraldehido (FAGETRIALD) sobre Pseudomonas aeruginosa.
Pseudomonas aeruginosa
Concentración
Porcentaje de inhibición
5' 10' 15'
Promedio Promedio Promedio
0,25% 100% 100% 100%
0,50% 100% 100% 100%
1% 100% 100% 100%
0% 20% 40% 60% 80% 100% 120%
5' 10' 15'
Por ce n taje d e in h ib ic io n
Tiempos de exposicion en minutos
Porcentaje de Inhibicion de un desinfectante a base de
Glutaraldehido (FAGETRIALD) sobre Staphylococcus aureus
0,25%
0,50%
[image:22.595.83.519.81.506.2] [image:22.595.178.418.612.726.2]Grafica 3. Porcentajes de inhibicion de un disinfectante a base de glutaraldehido sobre
Pseudomonas aeruginosa.
Tabla No.4. Porcentajes de inhibición de un desinfectante a base de Glutaraldehido (FAGETRIALD) sobre Bacillus subtilis.
Bacillus subtilis
Concentración
Porcentaje de inhibición
2h 4h 6h
Promedio Promedio Promedio
0,25% 19% 25% 38%
0,50% 29% 39% 58%
1% 95% 100% 100%
0% 20% 40% 60% 80% 100% 120%
5' 10' 15'
Por
ce
n
taje
d
e
in
h
ib
ic
io
n
Tiempos de exposicion en minutos
Porcentaje de Inhibicion de un desinfectante a base de
Glutaraldehido (FAGETRIALD) sobre Pseudomonas aeruginosa
0,25%
0,50%
[image:23.595.89.513.72.322.2]Grafica 4. Porcentajes de inhibicion de un disinfectante a base de glutaraldehido sobre
Bacillus subtilis.
VALIDACION RETROSPECTIVA:
Grafica 5.Indicadores contaminación bacteriana mesón bacterias en Laboratorio 235. Año 2009 0% 20% 40% 60% 80% 100% 120%
2h 4h 6h
Por ce n taje d e In h ib ic io n
Tiempo de exposicion en horas
Porcentaje de Inhibicion de un desinfectante a base de
Glutaraldehido (FAGETRIALD) sobre Bacillus subtilis
0,25% 0,50% 1% 0,0000 0,2000 0,4000 0,6000 0,8000 1,0000 1,2000 1,4000 1,6000 1,8000
Febrero Marzo Abril
Log p ob laci on b act er iana
Grafica 6.Indicadores de contaminación bacteriana ambiente bacterias en laboratorio 235. Año 2009
Grafica 7. Indicadores de contaminación Fúngica mesón bacterias en laboratorio 235.
Año 2009. 0 0,2 0,4 0,6 0,8 1 1,2 1,4 1,6
Febrero Marzo Abril
Log p o b lac io n b ac te ri an a
Indicadores de contaminacion bacteriana ambiente bacterias
0,0000 0,0500 0,1000 0,1500 0,2000 0,2500 0,3000 0,3500 0,4000 0,4500
Febrero Marzo Abril
Lo g p o b lac io n b ac te rian a
Grafica 8. Indicadores contaminación bacteriana Ambiente Virus en Laboratorio 235. Año 2009.
Grafica 9. Indicadores contaminación bacteriana Mesón siembra en Laboratorio Bioensayos. Año 2009
1,4000 1,4500 1,5000 1,5500 1,6000 1,6500
Marzo Abril
Log
p
ob
laci
on
b
act
er
iana
Indicadores de contaminacion bacteriana Ambiente virus
0,0000 0,5000 1,0000 1,5000 2,0000 2,5000
Febrero Marzo Abril
Log
Pob
lac
io
n
B
ac
te
ri
an
a
Grafica 10. Indicadores contaminación bacteriana ambiente siembra en Laboratorio Bioensayos. Año 2009
Grafica 11. Indicadores contaminación bacteriana Mesón central en Laboratorio Parasitología. Año 2009
0 0,2 0,4 0,6 0,8 1 1,2 1,4 1,6 1,8 2
Febrero Marzo Abril
Log Pob lac io n B ac te ri an a
Indicadores de contaminacion bacteriana Ambiente siembra
0,0000 0,5000 1,0000 1,5000 2,0000 2,5000
Febrero Marzo Abril
Log p o b lac io n b ac te ri an a
Grafica 12. Indicadores contaminación fúngica Mesón central en Laboratorio Parasitología. Año 2009
[image:28.595.174.422.65.295.2]ANEXO 2. Registros fotográficos
Figura 1. Observación de resultados obtenidos en la validación concurrente para
Salmonella typhi.
0,0000 0,5000 1,0000 1,5000 2,0000 2,5000
Febrero Marzo Abril
Log
p
o
b
lac
io
n
Fu
n
gi
ca
Figura 2. Observación de resultados obtenidos en la validación concurrente para
Staphylococcus aureus.
ANEXO 3. Rotación de desinfectantes para los laboratorios pertenecientes a la línea de Lodos y Aguas de la PUJ.
ANEXO 4. Preparación de cada una de las soluciones detergentes y desinfectantes a utilizar en las actividades de Limpieza y Desinfección.
PREPARACION DE LA SOLUCION DE DETERGENTE
el aseo. Mezcle muy bien con el trapero LIMPIO o con el instrumento con el cual vaya a efectuar la limpieza y desinfección hasta homogenizar la solución
PREPARACION DE CLORO= 1%
Mida 26.25 mL del desinfectante con una pipeta de 10 mL, diluya este volumen de desinfectante en 2 litros de agua, previamente medidos en un balde o recipiente para el aseo. Mezcle muy bien con el trapero LIMPIO o con el instrumento con el cual vaya a efectuar la limpieza y desinfección hasta homogenizar la solución.
Esta concentración se prepara de acuerdo al inserto del desinfectante, el cual indica que el Clorox viene a una concentración de 5.25%.
PREPARACIÓN DE DESINFLOOR= 0.5% ( 2 Litros)
Mida 10 mL del desinfectante con una pipeta de 10 mL, diluya este volumen de desinfectante en 2 litros de agua, previamente medidos en un balde o recipiente para el aseo. Mezcle muy
Hipoclorito de sodio Agua
bien con el trapero LIMPIO o con el instrumento con el cual vaya a efectuar la limpieza y desinfección hasta homogenizar la solución.
Preparación de Fagetriald= 0.25% (2 Litros)
Mida 5 mL del desinfectante con una pipeta de 10 mL, diluya este volumen de desinfectante en 2 litros de agua, previamente medidos en un balde o recipiente para el aseo. Mezcle muy bien con el trapero LIMPIO o con el instrumento con el cual vaya a efectuar la limpieza y desinfección hasta homogenizar la solución.
Fagetriald Agua
5 mL 2000 mL
Desinfloor Agua
ANEXO 6. Modelo de rotación de desinfectantes con meses de muestreo para el año 2011
MES
DESINFECTANTE A UTILIZAR Y CONCENTRACIÓN
BIOENSAYOS BACTERIAS Y VIRUS PARASITOLOGIA
ENERO Cloro 1% Cloro 1% Cloro 1%
FEBRERO
Cloro 1% Cloro 1% Cloro 1%
MARZO
Desinfloor 0.5% Desinfloor 0.5% Desinfloor 0.5%
ABRIL
Cloro 1% Cloro 1% Cloro 1%
MAYO
Fagetriald 0.25 % Fagetriald 0.25% Fagetriald 0.25%
JUNIO
Cloro 1% Cloro 1% Cloro 1%
JULIO
Cloro 1% Cloro 1% Cloro 1%
AGOSTO
Desinfloor 0.5% Desinfloor 0.5% Desinfloor 0.5%
SEPTIEMBRE Cloro 1% Cloro 1% Cloro 1%
OCTUBRE
Fagetriald 0.25 % Fagetriald 0.25% Fagetriald 0.25%
DICIEMBRE
Cloro 0.5% Cloro 1% Clorox 1%
En enero de 2011 se continua el ciclo, por tanto seguiría Desinfloor.
Mes de Monitoreo
Clorox 0.5%: 10mL en 2 Litros de Agua
Clorox 1%: 20mL en 2 Litros de Agua
Desinfloor 0.5%: 10mL en 2 Litros de Agua
