Compatibilidad del nematicida oxamilo con Trichoderma viride, Pochonia chlamydosporia y, Paecilomyces lilacinus en condiciones de laboratorio

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(1)Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO. FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. M. UN I. CA C. IÓ. ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA. N. FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS. EM. AS. DE. IN. Compatibilidad del nematicida oxamilo con Trichoderma viride, Pochonia chlamydosporia y, Paecilomyces lilacinus en condiciones de laboratorio. SI. ST. TESIS PARA OPTAR EL TÍTULO DE. DI RE. CC. IO. N. DE. BIÓLOGO - MICROBIÓLOGO AUTOR: Br. Alfredo Felipe Torres Cava. TRUJILLO-PERÚ 2012. i Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(2) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. UN I. Dr. Orlando Velásquez Benítez. CA C. IÓ. N. AUTORIDADES DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO QUE OTORGAN EL TÍTULO PROFESIONAL DE BIÓLOGO-MICROBIÓLOGO. IC. A. Y. CO. M. RECTOR DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO. ÁT. Dra. Vilma Julia Méndez Gil. RM. VICE-RECTORA ACADÉMICA DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE. EM. AS. DE. IN. FO. TRUJILLO. Dra. Flor Marlene Luna Victoria Mori. NACIONAL DE TRUJILLO. DI RE. CC. IO. N. DE. SI. ST. VICE-RECTORA ADMINISTRATIVA DE LA UNIVERSIDAD. Dr. Regné Cortez Lara. SECRETARIO GENERAL DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO. ii. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(3) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. CO. Dr. Hermes Mario Escalante Añorga. M. UN I. CA C. IÓ. N. AUTORIDADES DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLOGICAS DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO QUE OTRORGAN EL TITULO PROFESIONAL DE BIOLOGO MICROBIOLOGO. ÁT. IC. A. Y. DECANO DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS. RM. Dr. César Augusto Jara Campos. AS. DE. IN. FO. SECRETARIO DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS. EM. Ms. C. Pedro Arnaldo Alvarado Salinas DIRECTOR DE LA ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE. DI RE. CC. IO. N. DE. SI. ST. MICROBIOLOGÌA Y PARASITOLOGÍA. iii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(4) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DEL ASESOR. El que suscribe: Ms. C. Juan Héctor Wilson Krugg asesor de la presente. IÓ. N. tesis titulada: “Compatibilidad del nematicida Oxamilo con Pochonia. CA C. chlamydosporia, Paecilomyces lilacinus y Trichoderma viride en condiciones de. M. UN I. laboratorio”. Y. CO. CERTIFICA:. IC. A. Que, la investigación ha sido desarrollada de conformidad con su. ÁT. correspondiente proyecto de tesis y teniendo en cuenta las orientaciones. RM. pertinentes.. Que, el informe ha sido redactado bajo mi asesoramiento, acogiendo las. FO. observaciones y sugerencias alcanzadas, por ello, autorizo al Bachiller Alfredo. IN. Felipe Torres Cava para continuar con los procedimientos correspondientes. AS. 26 de Diciembre del 2012. DI RE. CC. IO. N. DE. SI. ST. EM. Trujillo,. DE. según sus fines.. Ms. C. Juan Héctor Wilson Krugg ASESOR. iv. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(5) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. PRESENTACIÓN. IÓ. N. SEÑORES MIEMBROS DEL JURADO DICTAMINADOR:. CA C. Cumpliendo con las disposiciones establecidas por el Reglamento de. UN I. Grados y Títulos de la Universidad Nacional de Trujillo, presento a su. M. consideración y elevado criterio la presente Tesis titulada: “Compatibilidad del. CO. nematicida Oxamilo con Pochonia chlamydosporia, Paecilomyces lilacinus y. A. Y. Trichoderma viride en condiciones de laboratorio” con el objetivo de obtener el. DE. IN. FO. RM. ÁT. IC. título profesional de Biólogo-Microbiólogo.. DI RE. CC. IO. N. DE. SI. ST. EM. AS. Trujillo, 26 de Diciembre del 2012. Br. Alfredo Felipe Torres Cava. v Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(6) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. CO. M. UN I. CA C. IÓ. N. MIEMBROS DEL JURADO. --------------------------------------------. DE. IN. FO. RM. ÁT. IC. PRESIDENTE. A. Y. Ms. C. Gerardo Alayo Espinoza. AS. --------------------------------------------. SECRETARIO. DI RE. CC. IO. N. DE. SI. ST. EM. Ms. C. Juan Héctor Wilson Krugg. -----------------------------------------------Ms. C. Eduardo Muñoz Ganoza VOCAL. vi. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(7) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. APROBACIÓN Los profesores que suscriben, miembros del Jurado dictaminador, declaran. IÓ. N. que el presente Informe de Tesis titulado: Compatibilidad del nematicida Oxamilo. CA C. con Pochonia chlamydosporia, Paecilomyces lilacinus y Trichoderma viride en. UN I. condiciones de laboratorio, ha cumplido con los requisitos formales y. ÁT. IC. A. Y. CO. M. fundamentales, siendo APROBADO por UNANIMIDAD.. RM. -------------------------------------------Ms. C. Gerardo Alayo Espinoza. ST. EM. AS. DE. IN. FO. PRESIDENTE. Ms. C. Juan Héctor Wilson Krugg SECRETARIO. DI RE. CC. IO. N. DE. SI. --------------------------------------------. -----------------------------------------------Ms. C. Eduardo Muñoz Ganoza VOCAL. vii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(8) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. CA C. UN I. lograr superar este reto, el más transcendental de mi vida.. IÓ. A Dios, nuestro Señor, por darme la fuerza y entereza para. N. DEDICATORIA. CO. M. A la memoria de mi padre Alfredo, quien seguramente, desde el. cielo estará observándome con gran atención y emoción como. ÁT. IC. A. Y. culmino mi carrera.. RM. A mi querida madre Carmela, quien con su estímulo y muestras. FO. de cariño constantes ha permitido que culmine, lo que para ella. DE. IN. ha sido un caro anhelo postergado por muchos años y que hoy. EM. AS. se ve realizado.. ST. A mis hermanos Carmela, Maruja y Aurelio, por creer en mí y. SI. por su apoyo incondicional y de todo tipo que me permitió. DI RE. CC. IO. N. DE. arribar a buen puerto.. A Corith, mi esposa, y a mi hijita Natalie, por su cariño y. paciencia.. A mis tíos Felipe y Ricardo por la confianza depositada en mi persona.. viii. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(9) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AGRADECIMIENTOS. y profesor, Ms .C. Juan. CA C. IÓ. Héctor Wilson Krugg, por todo su apoyo, amistad y comprensión, mi más. N. A mi querido amigo, asesor, condiscípulo. sincero y profundo agradecimiento, sin los cuales me hubiera sido. CO. M. UN I. imposible realizar y concluir mi carrera y tesis.. Y. Al Ms. C. Miguel Ángel Muñoz Ríos, docente de las Cátedras de. IC. A. Micología y Fitopatología de la Universidad Nacional de Trujillo por su. ÁT. desinteresado apoyo y sugerencias para resolver las dudas y interrogantes. IN. FO. RM. que se presentaron en la realización de la presente tesis.. DE. A mis compañeros de clase que me hicieron un espacio entre ellos pese a. AS. la brecha generacional existente entre nosotros; a mis profesores y no. EM. docentes amigos que me otorgaron su apoyo y amistad para lograr. DI RE. CC. IO. N. DE. SI. ST. culminar mi carrera y por ende la realización de este proyecto.. ix Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(10) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. RESUMEN. Se determinó el efecto de diferentes concentraciones del nematicida. IÓ. N. Oxamilo sobre la germinación y el crecimiento de Trichoderma viride, Pochonia. CA C. chlamydosporia y Paecilomyces lilacinus. Se trabajó con tres concentraciones del. UN I. nematicida (480 ppm, 1680 ppm y 3000 ppm), además de un control (0ppm). Para. M. evaluar el efecto del oxamilo sobre la germinación de T. viride, P.. CO. chlamydosporia y P .lilacinus , se inoculó 15 ul de suspensión de esporas (106. A. Y. esporas /ml) de cada hongo en cuatro puntos equidistantes sobre las placas de. ÁT. IC. Petri que contenían Agar Papa Dextrosa con las diferentes concentraciones de. RM. oxamilo, además del grupo control y se incubó a 25°C por 16 horas para T. viride. FO. y 24 horas para P. lilacinus y P. chlamydosporia, se hizo el recuento y correspondiente a cada. DE. IN. determinación del porcentaje de esporas germinadas. AS. concentración de Oxamilo, además del control. Para evaluar el crecimiento, se. EM. sembró por puntura en el centro de cada placa con el nematicida a partir de. ST. cultivos monospóricos y se incubó a 25ºC durante 3 días para T. viride, 13 días. SI. para P. lilacinus y 17 días para P. chlamydosporia . Se realizaron cuatro ensayos. DE. por cada concentración incluyendo el control. Los resultados fueron expresados. IO. N. como porcentaje promedio de germinación y de crecimiento respectivamente,. CC. encontrándose que el oxamilo disminuye el porcentaje de germinación de los tres. DI RE. hongos y disminuye el porcentaje de crecimiento de P. lilacinus y P.. chlamydosporia, no afectando significativamente a T. viride cuyo crecimiento. radial fue casi el mismo, tanto para el. control, como para las diferentes. concentraciones usadas del Oxamilo.. x. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(11) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. CONTENIDO. IÓ. N. AUTORIDADES DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO …….ii. CA C. AUTORIDADES DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLOGICAS DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO QUE OTORGAN EL TITULO. UN I. PROFESIONAL DE BIOLOGO MICROBIOLOGO………………………….iii. M. ASESOR .......................................................................................................... … iv. CO. PRESENTACIÓN............................................................................................ … v. Y. MIEMBROS DEL JURADO........................................................................... …. vi. IC. A. APROBACIÓN………………........................................................................ ….vii. ÁT. DEDICATORIA .............................................................................................. …viii. RM. AGRADECIMIENTOS………………………………………………………... .ix. FO. RESUMEN……………………………………………………………………… x. DE. IN. I. INTRODUCCIÓN…………………………………………………………… 1. AS. II. MATERIAL Y MÉTODOS…………………………………………………. 9. EM. 1. Material de estudio……………………………………………………………..9. ST. 2. Procedimiento………………………………………………………………… 9. SI. 2.1. Evaluación del efecto del nematicida Oxamilo sobre T. viride, P.. DE. chlamydosporia y P. lilacinus ..................................................................... ... 9 III. RESULTADOS…………………………………………………………….. 14. IO. N. IV. DISCUSIÓN…………………………………………………………………29. CC. V. CONCLUSIONES……………………………………………………………37. DI RE. VI. RECOMENDACIONES……………………………………………………..38 VII. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS…………………………………… 39 ANEXOS ......................................................................................................... ….44. xi Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(12) DI RE. CC. IO. N. DE. SI. ST. EM. AS. DE. IN. FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. M. UN I. CA C. IÓ. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(13) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. I.-. INTRODUCCIÓN. La protección del ambiente y el desarrollo humano sustentable van de la mano y. IÓ. N. es necesario ampliar las investigaciones sobre la utilización de métodos biológicos. CA C. para la protección de los cultivos debido a que estos son atacados por insectos y. UN I. enfermedades que reducen significativamente la producción1 . Las enfermedades. M. producidas por microorganismos fitopatógenos, tales como bacterias, nemátodos u. CO. hongos, constituyen la mayor causa de pérdida en la producción agrícola, tanto en. .. IC. grupos que originan mayores pérdidas agrícolas2. A. Y. la cosecha como en la post cosecha, siendo los hongos uno de los principales. RM. ÁT. En la actualidad se utilizan muchos compuestos químicos como insecticidas,. FO. fungicidas, bactericidas, herbicidas y rodenticidas. Si bien el propósito del uso de. IN. plaguicidas es matar organismos no deseados, como aquellos que destruyen. DE. cultivos y transmiten enfermedades, muchas veces, estos. afectan a los. AS. controladores biológicos, por lo que es necesario estudiar su compatibilidad con. EM. los químicos empleados.. SI. ST. Para controlar estos problemas,hoy en día se viene utilizando el Manejo Integrado. DE. de Plagas(MIP), el cual busca la utilización adecuada de un conjunto de métodos. N. de control culturales, biológicos y químicos con el propósito de minimizar los. CC. IO. efectos indeseables en el medio ambiente3 . químicos se encuentran los nematicidas,fungicidas,. DI RE. Entre los controladores. insecticidas, bactericidas y herbicidas, teniéndose entre ellos al VIDATE24 LS cuyo principio activo es el Oxamilo : S-Metil N`,N`-dimetil N(metilcarbamoiloxi) -1-tio-oxamimidato4 el cual es un “nematicida insecticida” del grupo de los carbamatos que se aplica al suelo o al follaje para el control de nemátodos ,. 1 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(14) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. insectos chupadores y algunos ácaros que afectan gran variedad de cultivos. El producto es absorbido por las raíces y el follaje, se transloca en forma ambimóvil (floema-xilema). Se degrada rápidamente en gas carbónico, agua y amoniaco y no. IÓ. N. afecta a predatores y abejas una vez que el rocío de la aspersión se ha secado. CA C. sobre el follaje. Su vida media en el suelo es de 2 a 3 semanas, persistiendo en las. UN I. raíces para proporcionar un efecto “nematostático” por más de 60 días5.. CO. M. En últimas décadas se vienen utilizando controladores biológicos (organismos o. Y. sus productos) como una alternativa al uso de controladores químicos, ya que. IC. A. estos tienen un impacto negativo en el medio ambiente, los primeros deben tener. ÁT. la misma efectividad que los químicos pero sin sus efectos negativos, aumentando. RM. el rendimiento de los cultivos y protegiéndoles de ciertos microorganismos. FO. fitopatógenos6…7. DE. IN. Entre estos controladores biológicos tenemos a ciertos hongos, entre los cuales,. AS. los más utilizados, son los de los géneros Beauveria, Paecilomyces, Pochonia y. EM. Trichoderma, siendo el hongo antagonista por excelencia Trichoderma, el cual es. ST. un hongo imperfecto que presenta conidióforos ramificados en forma piramidal o. SI. cónica dando origen a fiálides con extremos ahusados, desde donde se desprenden. DE. esporas circulares hialinas. Existen especies de Trichoderma, como T. viride,. IO. N. T.harzianum, T. aureoviride, T. virens, T.atroviride. T. hamatum, T. koningii; de. CC. las cuales la primera es la más estudiada entre los numerosos agentes de control. DI RE. biológico, por ser fácilmente adaptable a las condiciones climáticas y ser factible de aislar, propagar y evaluar in vitro2,7,8. La mayoría de especies de Trichoderma presentan clamidosporas, las cuales puden ser intercalares y en ocasiones terminales. Las clamidosporas toleran. 2. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(15) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. condiciones ambientales adversas, son estructuras de supervivencia y permiten al hongo perdurar a través del tiempo43 . Las especies de Trichoderma producen tres tipos de propágulos: hifas, clamidosporas y conidias44.. IÓ. N. Los representantes del género Trichoderma son utilizados para el control de un. CA C. amplio número de patógenos del suelo dada su versatilidad, adaptabilidad y fácil. UN I. manipulación9. De manera particular, los hongos del género Trichoderma se. CO. M. pueden encontrar en la rizósfera, donde son capaces de competir por nutrimentos. Y. y espacios con otros microorganismos. Además este grupo fúngico es importante. IC. A. para las plantas, al contribuir con el control de hongos fitopatógenos ,ya que. ÁT. poseen propiedades micoparasiticas y antibióticas. Las cepas de Trichoderma más. RM. comercializadas para el control biológico son Trichoderma viride, T.polysporum. FO. y T. harzianum, la cual es la más utilizada y reportada en la literatura(Harman. DE. IN. 2000, Avila- Miranda et al.2006, Rojo et al. 2007)38,39,40.. AS. Los miembros del gènero Trichoderma tienen el potencial de sintetizar y liberar. EM. enzimas como polisacarasas, celulasas, xilanasas y quitinasas, las cuales se han. et. al.(1996). DE. Eden. SI. 2007)41,42... ST. aprovechado en procesos industriales (Kubicek y Harman 1998, Verma et al.. encontraron. una. reducción. en. la. infección. del. IO. N. tomate(Lycopersicon esculentum) causada por en hongo Botrytis cinerea, causante. CC. del moho gris, hasta del 100%, utilizando T. harzianum y Cladosporium. DI RE. cladosporioides . Por otro lado Eland y Zimand(1993), encontraron una reducción del 90 % del daño causado por Botrytis cinerea en plantas de pepino cultivadas en invernadero con la aplicación de T.harzianum. El antagonista incrementó su. capacidad de controlar la enfermedad cuando la temperatura fue superior a 200 C y. 3 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(16) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. la humedad relativa alrededor del 80%. Trichoderma sp. se cita en muchas investigaciones como agente de control biológico de patógenos, debido a su abundancia, rápido crecimiento y color oscuro, que le proporciona resistencia a la. IÓ. N. luz solar.. CA C. En la acción biocontroladora de Tichoderma se han descrito diferentes. UN I. mecanismos de acción que regulan el desarrollo de hongos fitopatógenos dianas.. CO. M. Entre estos, los principales son la competencia por el espacio y nutrientes, el micoparasitismo y la antibiosis, los que tienen una acción directa sobre el. IC. A. Y. patógeno45.Estos mecanismos se ven favorecidos poe la habilidad de los. ÁT. aislamientos de Trichoderma para colonizar la rizósfera de las plantas. Otros. RM. autores han sugerido distintos mecanismos responsables de su actividad. FO. biocontroladora, que incluyen, además de los mencionados, la secreción de. DE. IN. enzimas y la producción de compuestos inhibidores.45,46.. AS. Un ejemplo fehaciente de estas interacciones es el notificado por Durman et al.,. EM. quienes encontraron una disminución del crecimiento de R. solani y de la. ST. viabilidad de los esclerocios por la acción de Trichoderma spp.. SI. Las especies de Trichoderma durante el proceso de micoparitismo crecen. DE. quimiotrópicamente hacia el hospedante, se adhieren a las hifas del mismo, se. IO. N. enrollan en ellas frecuentemente y las penetran en ocasiones. La degradación de. CC. las paredes celulares del hospedante se observa en los estadíos tardíos del proceso. DI RE. parasítico47 . Muchas cepas de Trichoderma producen metabolitos secundarios volátiles y no volátiles, algunos de los cuales inhiben el desarrollo de otros microorganismos. Dennis y Webster. 48. , ellos encontraron un compuesto no volátil llamado. 4. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(17) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. trichodermina,posteriormente en otros trabajos encontraron que Trichoderma spp, produce dos antibióticoa más: la gliotoxina y la viridina. Más tarde Oliver y Germain, citados por Martínez49informaron que T. harzianum. IÓ. N. Rifai produce numerosos antibióticos como son : trichodermina, suzukacilina,. CA C. alamecitina, dermadina, trichotecenos y trichorziacina.. UN I. La efectividad de Trichoderma en la disminución de los daños y control de. M. poblaciones de Meloidogyne ha sido reportada por Meyer S., Jayant B. y Avila-. CO. Salazar J.M.9. Y. Otras especies como Paecilomnyces lilacinus y Pochonia. IC. A. chlamydosporia (ex Verticillium chlamydosporium) han sido consideradas como. ÁT. los agentes de control más promisorios para el manejo de poblaciones de. RM. nemátodos formadores de agallas9.. FO. P. lilacinus es un hongo que se presenta en forma natural en muchos suelos del. DE. IN. mundo. Es un parásito facultativo de huevos de nemátodos y en ocasiones es. AS. capaz de infectar estadíos móviles o sedentarios. Se cultiva fácilmente in vitro, es. EM. un buen competidor de la rizósfera, ataca huevos de diferentes especies de. ST. nemátodos. Como limitaciones tiene que requiere altas temperaturas del suelo y. SI. un alto número de propágulos(106 por gramo de suelo)9.. DE. P. chlamydosporia es un paràsito facultativo de huevos de nemàtodos formadores. IO. N. de agallas y quistes que ha sido considerado el principal responsable del declive. CC. de las poblaciones del nemátodo Heterodera avenae Wollenweber, crece. DI RE. fácilmente in vitro, algunos aislamientos son competidores de la rizósfera y virulentos,producen esporas de resistencia y sobreviven en el suelo durante la temporada de cultivo10.. 5 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(18) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Al utilizar métodos en forma conjunta (químicos y biológicos), se busca que ambos controladores, siendo aplicados a un mismo sustrato, muestren compatibilidad, es decir que ninguno de ellos minimice o inhiba al otro. Cuando. IÓ. N. uno de ellos afecta al otro, se dice que son incompatibles y por lo tanto no deben. CA C. aplicarse juntos12.Tratamientos combinados del hongo con nematicidas como el. UN I. aldicarb han demostrado compatibilidad y efectividad en el control de nemátodos. CO. M. formadores de agallas11.. La compatibilidad entre los controladores biológicos con quimicos empleados en. IC. A. Y. la agricultura, se ha venido estudiando desde inicios desde el siglo XXI12 asì, se. ÁT. han realizado estudios de compatibilidad entre Beauveria bassiana con diversos. RM. insecticidas como Crabaril13, Fenvalerate14, Abamectina15, Triflumuròn16,. FO. encontrando compatibilidad entre estos. Asì mismo Castiglioni, et al.17 estudiaron. DE. IN. la compatibilidad in vitro de Beauveria bassiana y Metarhizium anisopliae con. el crecimiento vegetativo, la conidiogénesis y la. EM. concentraciones varía. AS. Nimkol-LR , detallando que el efecto de este insecticida a diferentes. ST. germinación de las conidias de estos hongos entomopatógenos.. SI. De la misma manera, Vásquez, et al.18 evaluaron la compatibilidad de B .bassiana. DE. con el insecticida Fenoxicarb, encontrando que a diferentes concentraciones de. IO. N. este químico, no se inhibía la germinación conidial ni el crecimiento micelial del. CC. hongo. También Goswani, et al. DI RE. mostaza sobre. 19. estudiaron la acción del aceite natural de. P. lilacinus y T.viride, y encontraron que existía. compatibilidad entre ellos. Cabe señalar también que insecticidas como el forato o el carbofurano pueden estimular o inhibir el crecimiento de especies de Trichoderma spp31, más aún, T.. 6. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(19) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. viride es compatible con el herbicida triflurina32 al contribuir en su degradación en el suelo. Valdez-Leyva P.et al.. evaluaron el desempeño de Trichoderma viride in vitro. IÓ. N. frente a dos fungicidas comerciales como el Captan y el Carbothiram y hallaron. CA C. que eran compatibles en la germinación de conidias a diferentes concentraciones. UN I. usadas de ambos quimicos20.. CO. M. En relación a la incompatibilidad, en otra investigación, Sànchez21,determinó el. Y. efecto de diferentes concentraciones de metribuzina sobre el crecimiento y. IC. A. germinación de Trichoderma viride, en condiciones de laboratorio, obteniendo. ÁT. como resultado la disminución progresiva del porcentaje de germinaciòn y. RM. consecuentemente la velocidad de crecimiento.. FO. En La Libertad son escasos los estudios acerca de la compatibilidad entre los. DE. IN. controladores biológicos y los químicos. Debido a que T. viride, P.lilacinus y P.. AS. chlamydosporia, se utilizan para el control de diversos fitopatógenos que habitan. EM. en el suelo, se torna imprescindible realizar estudios de su compatibilidad con los. ST. fungicidas y nematicidas que también se aplican al suelo , sobre todo si se les. SI. pretende emplear dentro de un programa de Manejo Integrado de Plaga(MIP), lo. DE. cual es necesario ya que permitiría a los agricultores planificar mejor los. IO. N. tratamientos químicos adecuados, a efecto de minimizar cualquier efecto nocivo. CC. en la actividad de los hongos habitantes del suelo, por lo que el objetivo del. DI RE. presente trabajo está orientado a conocer la compatibiidad de Trichoderma viride,. Pochonia. chlamydosporia. y. Paecilomyces. lilacinus,. con. las. concentraciones de 480ppm, 1689 ppm y 3000 ppm del nematicida-insecticida Oxamilo en condiciones de laboratorio.. 7 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(20) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. II.- MATERIAL Y MÉTODO. N. 1. Material de estudio . CA C. IÓ. Cultivos puros de Trichoderma viride, Pochonia chlamydosporia y. Paecilomyces lilacinus proporcionados por la cátedra de Fitopatología. UN I. del Departamento de Microbiología y Parasitología. Universidad. CO. M. Nacional de Trujillo. . Y. Nematicida-Insecticida VIDATE24 LS cuyo principio activo es el. IC. A. Oxamilo.. ÁT. 2. Procedimiento. IN. chlamydosporia.. FO. RM. 2.1 Evaluación del efecto del Oxamilo sobre T. viride, P. lilacinus y P.. DE. 2.1.1 Evaluación del efecto del Oxamilo sobre la germinación de. AS. esporas de T. viride, P. chlamydosporia y P. lilacinus.. EM. 2.1.1.1 Preparación del medio agar papa dextrosa con el. DI RE. CC. IO. N. DE. SI. ST. nematicida Oxamilo para la germinación. Se preparó el agar papa dextrosa (APD) y se distribuyó en cuatro matraces conteniendo 60 ml de medio cada uno. El medio de cultivo fue esterilizado en autoclave y se dejó enfriar hasta una temperatura aproximada de 50 0C y estando aún fundido el medio, a tres de los matraces se les adicionó Oxamilo en cantidad suficiente para obtener una concentración final de 480 ppm, 1680 ppm y 3000. 8. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(21) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. ppm respectivamente del nematicida. Al matraz restante no se le adicionó el Oxamilo, pues sirvió como control. Luego el medio de cultivo contenido. IÓ. N. en los cuatro matraces fue servido en placas Petri. CA C. estériles.. UN I. 2.1.1.2 Reactivación del cultivo de Trichoderma viride,. CO. M. Pochonia chlamydosporia y Paecilomyces lilacinus. Y. Para la reactivación de T. viride, P. chlamydosporia y P. a partir de cultivos puros se procedió a. IC. A. lilacinus. ÁT. sembrar en frascos planos conteniendo APD inclinado. FO. ambiental.. RM. y luego se incubó durante 7 a 10 días a temperatura. DE. IN. 2.1.1.3 Preparación del inóculo de conidias.. AS. El inóculo de conidias se obtuvo agregando 10 ml de. EM. Twen 80 estéril al 0.1% a cada frasco plano con APD. DI RE. CC. IO. N. DE. SI. ST. que contenían los respectivos cultivos de T. viride, P. chlamydosporia y P. lilacinus.. Luego se agitó. moderadamente con el fin de liberar las conidias del hongo y la suspensión resultante se colocó en un matraz estéril, donde se determinó la concentración de conidias mediante el recuento en Cámara de Neubauer. Luego, esta suspensión se diluyó con Twen 80 al 0.1% estéril hasta obtener una concentración final de 5,04 x 106. 9 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(22) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. conidias/ml para T. viride, 7.25 x 106. para P.. chlamydosporia y 1 x 107 para P. lilacinus. 2.1.1.5. Inoculación e incubación para la evaluación de la germi-. IÓ. N. nación.. CA C. Se colocó una gota de cada suspensión de conidias. UN I. obtenidas para los tres hongos testados en cuatro puntos. previamente. envenenado. con. las. tres. Y. Dextrosa. CO. M. equidistantes de las placas Petri conteniendo Agar Papa. IC. A. concentraciones usadas del Oxamilo con la ayuda de. ÁT. una jeringa de tuberculina utilizándose un control sin el. RM. nematicida. Posteriormente se incubó a temperatura. FO. ambiental por 24 horas para T. viride y 16 horas para. DE. IN. P.chlamydosporia y P. lilacinus.. AS. 2.1.1.6 Lectura. EM. Se agregó una gota de azul de lactofenol y una. DI RE. CC. IO. N. DE. SI. ST. laminilla en cada unos de los puntos donde se sembró la suspensión (tres placas de cada concentración del Oxamilo y el control), luego se observó y se realizó el recuento en el microscopio a 40x hasta contar 100 esporas. (número. de. esporas. germinadas. y no. germinadas). Los resultados se expresaron como porcentaje promedio de germinación el cual fue obtenido comparando el número de esporas germinadas. 10. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(23) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. en las placas con las diferentes concentraciones del Oxamilo en relación a las del grupo control. 2.2.2 Evaluación del efecto del nematicida Oxamilo sobre el. IÓ. N. crecimiento de T. viride, P. chlamydosporia y P. lilacinus.. CA C. 2.2.1.1 Preparación del medio de cultivo. UN I. El medio de cultivo para la evaluación del. CO. M. crecimiento fue preparado de manera similar al medio. Y. de germinación, en este caso se emplearon tres placas. IC. A. para cada concentración usada, además del control.. ÁT. 2.2.1.2 Siembra e incubación. RM. A partir de los cultivos puros. de T. viride, P.. FO. chlamydosporia y P. lilacinus se sembró por puntura. DE. IN. en la parte central de las placas Petri conteniendo Agar previamente preparadas en el paso. AS. Papa Dextrosa. EM. anterior, las cuales fueron incubadas a temperatura. DI RE. CC. IO. N. DE. SI. ST. ambiental por 3 días para T. viride, 13 días para P.. lilacinus, y 17 días para P. chlamydosporia, tiempos que tardaron los tres hongos en cubrir la placa en los controles respectivos.. 2.2.1.3 Lectura A partir del primer día de siembra, y hasta el tercer día, se midió el radio de crecimiento micelial en centímetros (cm.) de T. viride en diferentes direcciones, obteniendo un radio promedio de crecimiento por día. 11 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(24) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. por cada concentración usada del nematicida Oxamilo, así como también para el grupo control, lo mismo se hizo para P. lilacinus (13 días de evaluación) y para P.. IÓ. N. chlamydosporia (17 días de evaluación) Los resultados. CA C. del crecimiento de T. viride, P. lilacinus y P.. UN I. chlamydosporia se expresaron en centímetros. y en. CO. M. porcentaje de crecimiento (%C), teniendo en cuenta el. Y. crecimiento alcanzado por el grupo control (100%), de. IN. 2.2 Análisis de datos. FO. RM. ÁT. IC. A. la siguiente manera:. DE. La determinación del efecto del nematicida Oxamilo sobre T.. AS. viride, P. lilacinus y P. chlamydosporia , se realizó analizando el. EM. porcentaje de germinación y el porcentaje de crecimiento de los. SI. ST. tres hongos anteriormente mencionados, en las diferentes. DE. concentraciones del nematicida empleado, procesando los datos en. (ANOVA), según el paquete estadístico SPSS v. 15.. DI RE. CC. IO. N. base a la prueba de Análisis de Varianza Unidireccional. 12. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(25) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. III.- RESULTADOS. En las figuras 1 y 4 se observa que al incrementarse la concentración del oxamilo. IÓ. N. disminuye el porcentaje de germinación de T. viride hasta un 8% con respecto al. CA C. control , encontrándose que existe una diferencia significativa entre este y las tres. UN I. concentraciones usadas (480, 1680 y 3000 ppm) y por lo tanto podemos afirmar. Y. CO. M. que T. viride e incompatible con el oxamilo.. IC. A. En las figuras 2 y 5 podemos observar que no existe diferencia significativa entre. ÁT. las tres concentraciones empleadas del oxamilo, es decir que son estadísticamente. RM. iguales y que el efecto sobre la germinación del hongo es el mismo en todas,. FO. disminuyendo aquella hasta un 0% para P. chlamydosporia , encontrándose que. DE. IN. para el control el porcentaje de germinación fue del 94%. Asimismo podemos. EM. AS. inferir que P. chlamydosporia es incompatible con el oxamilo.. ST. En las figuras 3 y 6, podemos ver que existe una diferencia significativa entre el. SI. control y las tres concentraciones empleadas del oxamilo y que las. DE. concentraciones de 1680 y 3000 ppm son estadísticamente iguales, esto quiere. IO. N. decir que el efecto del nematicida es igual para ambas. En la concentración de 480. CC. ppm vemos que el % de germinación cae de 100% hasta 4%. Podemos decir. DI RE. igualmente que el oxamilo es incompatible con P. lilacinus al disminuir drásticamente su germinación.. 13 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(26) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. En las figuras 7 y 10 el oxamilo presenta un efecto inhibitorio sobre T. viride, observándose una ligera disminución en el crecimiento hasta un valor de 92.78%; por otro lado podemos apreciar que no existe una diferencia significativa entre las. IÓ. N. concentraciones empleadas, esto quiere decir que el efecto del nematicida sobre el. CA C. hongo es prácticamente igual en todas. Con respecto al control, si existe una. CO. M. UN I. diferencia significativa entre este y las 3 concentraciones empleadas.. Y. En las figuras 8 y 11 podemos observar que el oxamilo disminuye el crecimiento. IC. A. de P. chlamydosporia hasta un valor de 63.99% y que existe una diferencia. ÁT. significativa entre el control y las tres concentraciones empleadas del nematicida.. RM. Por otro lado podemos apreciar que en los tratamientos de 480 y 1680 ppm no. FO. existe diferencia significativa entre ambos, esto quiere decir que estadísticamente. DE. IN. son iguales y que sí existe una diferencia significativa entre la concentración de. EM. AS. 3000 ppm y las de 480 y 1680 ppm.. ST. En las figuras 9 y 12 podemos ver nuevamente que el oxamilo inhibe el. SI. crecimiento de P. lilacinus hasta un valor de 70.7% y que con respecto al control. DE. y las tres concentraciones empleadas del oxamilo si existe una diferencia. IO. N. significativa. Asimismo en las concentraciones de 480 y 1680 no hay diferencia. CC. significativa, más si la hay entre la concentración de 3000 ppm y las de 480 y. DI RE. 1680 ppm.. 14. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(27) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. En la figura 13 podemos apreciar invasión del tejido micelial de Pochonia chlamydosporia frente a la dosis más alta usada del Oxamilo (3000 ppm). En la figura 14. Podemos ver la observación microscópica (40x) del daño causado. IÓ. N. en las hifas de P. chlamydosporia por el Oxamilo en la concentración de 3000. DI RE. CC. IO. N. DE. SI. ST. EM. AS. DE. IN. FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. M. UN I. CA C. ppm.. 15 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(28) a. RM. a. ÁT. IC. A. Y. CO. M. UN I. CA C. IÓ. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. a. ST. EM. AS. DE. IN. FO. a. frente a Oxamilo a las. SI. Figura 1. Porcentaje de germinación de T. viride. DE. concentraciones de: 0 ppm; 480 ppm; 1680 ppm y 3000 ppm a las 16 horas de. IO. N. incubación.. DI RE. CC. a: p < 0.05 : existe diferencia significativa. 16. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(29) ÁT. IC. A. Y. CO. M. UN I. CA C. IÓ. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. IN. b. b. ST. EM. AS. DE. b. FO. RM. a. de Pochonia chlamydosporia frente a. SI. Figura 2 Porcentaje de germinación. DE. Oxamilo a las concentraciones de: 0 ppm; 480 ppm; 1680 ppm y 3000 ppm a las. CC. IO. N. 24 horas de incubación.. DI RE. a: p < 0.05 : si existe diferencia significativa b: p > 0.05 : no existe diferencia significativa. 17 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(30) ÁT. IC. A. Y. CO. M. UN I. CA C. IÓ. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. RM. a. IN. b. EM. AS. DE. a. FO. b. SI. ST. Figura 3 .Porcentaje de germinación de Paecilomyces lilacinus frente a Oxamilo. DE. a las concentraciones de: 0 ppm; 480 ppm; 1680 ppm; y 3000 ppm a las 24 horas. CC. IO. N. de incubación.. DI RE. a: p< 0.05: Existe diferencia significativa. b: p> 0.05: No existe diferencia significativa.. 18. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(31) IÓ. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. CA C. b. B. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. M. UN I. A. D. ST. EM. AS. DE. IN. FO. C. DE. SI. 9. IO. N. Fig. 4 Observación microscópica (40x) de conidias germinadas y no germinadas. CC. de Trichoderma viride frente a Oxamilo a las concentraciones de: A) 0 ppm ; B). DI RE. 480 ppm) ; C) 1680 ppm y D) 3000 ppm. Germinadas No Germinadas. 19 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(32) CA C. IÓ. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. B. ÁT. IC. A. Y. CO. M. UN I. A. D. DE. SI. ST. EM. AS. DE. IN. FO. RM. C. IO. N. Figura 5. Observación microscópica (40x) de conidias germinadas y no. CC. germinadas de Pochonia chlamydosporia frente a Oxamilo a las concentraciones. DI RE. de: A) 0 ppm) 480 ppm) 1680 ppm y D) 3000 ppm. Germinadas No Germinadas. 20. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(33) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. B. Y. CO. M. UN I. CA C. IÓ. N. A. D. EM. AS. DE. IN. FO. RM. ÁT. IC. A. C. ST. Figura 6. Observación microscópica (40x) de conidias germinadas y no. SI. germinadas de Paecilomyces lilacinus frente a Oxamilo a las concentraciones de:. DE. A) 0 ppm; B) 480 ppm; C) 1680 ppm D) 3000 ppm.. IO. N. Germinadas. DI RE. CC. No Germinadas. 21 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(34) b. b. b. AS. DE. IN. FO. RM. ÁT. IC. A. Y. a. CO. M. UN I. CA C. IÓ. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. EM. Figura 7. Porcentaje de crecimiento de T. viride a los tres días de incubación. ST. frente a Oxamilo a las concentraciones de: 0 ppm; 480 ppm; 1680 ppm y 3000. DE. SI. ppm.. IO. N. a: p< 0.05 Existe diferencia significativa. DI RE. CC. b: p> 0.05 No existe diferencia significativa. 22. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(35) b. c. A. b. ST. Porcentaje de crecimiento de Pochonia chlamydosporia frente a. SI. Figura 8.. EM. AS. DE. IN. FO. RM. ÁT. IC. a. Y. CO. M. UN I. CA C. IÓ. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DE. Oxamilo a las concentraciones de: 0 ppm; 480 ppm; 1680 ppm y 3000 ppm a los. CC. IO. N. 17 días de incubación.. DI RE. a: p < 0.05 Si existe diferencia significativa b: p> 0.05 No existe diferencia significativa a,b y c: p< Si existe diferencia significativa. 23 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(36) b. c. CO. b. DE. IN. FO. RM. ÁT. IC. A. Y. a. M. UN I. CA C. IÓ. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AS. Figura 9. Porcentaje de crecimiento de Paecilomyces lilacinus frente a Oxamilo a. ST. DE. SI. incubación.. EM. las concentraciones de: 0 ppm; 480 ppm; 1680 ppm y 3000 ppm a los 13 días de. N. a: p < 0.05 Si existe diferencia significativa. CC. IO. b: p> 0.05 No existe diferencia significativa. DI RE. a ,b y c: p< Si existe diferencia significativa. 24. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(37) CA C. 480 ppm. IC. A. Y. CO. M. UN I. 0ppm. IÓ. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 1680 ppm. DE. SI. ST. EM. AS. DE. IN. FO. RM. ÁT. 3000 ppm. IO. N. Figura 10. Crecimiento radial de T. viride frente a Oxamilo a las concentraciones. DI RE. CC. de: 0 ppm; 480 ppm; 1680 ppm; y 3000 ppm a los 3 días de incubación.. 25 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(38) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 480 ppm. 1680 ppm. 3000 ppm. SI. ST. EM. AS. DE. IN. FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. M. UN I. CA C. IÓ. N. 0 ppm. DE. Figura 11. Crecimiento radial de P. chlamydosporia frente a Oxamilo a las. IO. N. concentraciones de: 0 ppm; 480 ppm; 1680 ppm y 3000 ppm a los 17 días de. DI RE. CC. incubación.. 26. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(39) 480 ppm. 1680 ppm. 3000 ppm. SI. ST. EM. AS. DE. IN. FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. M. UN I. CA C. IÓ. 0 ppm. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DE. Figura 12. Crecimiento radial de P. lilacinus frente a Oxamilo a las. IO. N. concentraciones de: 0 ppm; 480 ppm; 1680 ppm y 3000 ppm a los 13 días de. DI RE. CC. incubación.. 27 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(40) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. a. SI. ST. EM. AS. DE. IN. FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. M. UN I. CA C. IÓ. a. N. a. DE. Figura 13. Invasión del tejido micelial de Pochonia chlamydosporia por el. DI RE. CC. IO. N. nematicida Oxamilo a la concentración en ppm más alta usada (3000 ppm).. 28. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(41) ST. EM. AS. DE. IN. FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. M. UN I. CA C. IÓ. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. SI. Figura 14. Observación microscópica (40x) del daño causado en las hifas de. DI RE. CC. IO. N. DE. P. chlamydosporia por el Oxamilo en la concentración de 3000 ppm. 29 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(42) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DISCUSIÓN. En relación a la compatibilidad entre el nematicida Oxamilo. sobre la. IÓ. N. germinación de Trichoderma viride (Figuras 1 y 4), se observa que las. CA C. concentraciones utilizadas tienen un efecto inhibitorio significativo en la de. UN I. 480 ppm y drásticamente mayor en las de 1680 ppm y 3000 ppm lo cual. M. probablemente se deba a que cuando se inicia el proceso de germinación, la. Y. CO. conidia absorbe agua del medio ambiente.22 Momentos previos a la. IC. A. germinación propiamente dicha, las conidias de T. viride incorporan agua y. ÁT. nutrientes del medio externo, constituido en este caso por el APD, ocasionando. RM. el hinchamiento hidrostático de estas23, lo que podría ocasionar que el oxamilo. FO. agregado al medio de cultivo ingrese a la conidia, provocando que esta se vea. DE. IN. afectada en su germinación ocasionando un retardo de la misma24, retardo que. EM. AS. va en aumento conforme se incrementa la concentración en ppm del Oxamilo.. ST. Esta disminución de la germinación podría deberse a que el agroquímico. SI. evaluado bloquearía las funciones metabólicas de la conidia. Asimismo, dicho. DE. bloqueo metabólico, también podría verse favorecido por la acumulación de. IO. N. iones sobre la superficie de la membrana celular. Estos agroquímicos,. DI RE. CC. análogos a los grupos prostéticos de las enzimas del hongo, se difundirían en el citoplasma donde serían captadas por receptores específicos, afectándose la permeabilidad de la membrana y la síntesis enzimática (celulasas, glucanasas, proteasas, quitinasas), y consecuentemente los procesos metabólicos25.. 30. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(43) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Estudios realizados por Boucias et al.26 establecen otra probable explicación para la inhibición de la germinación de esporas; ellos demostraron que el tratamiento de las esporas de los hongos con productos agroquímicos, tanto. IÓ. N. iónicos como moleculares, pueden neutralizar la carga electrostática de la. CA C. superficie y/o remover la capa mucosa que recubre la conidia, afectando así el. UN I. proceso de reconocimiento de sustrato y la transducción de las señales de. CO. M. iniciación de la germinación.. Y. Así cabe también resaltar que el porcentaje de germinación de las conidias de. A. T. viride obtenido en todas las concentraciones de Oxamilo empleadas, está. ÁT. IC. muy por debajo de lo recomendado por el SENASA (2001)27, el cual señala. RM. que un biopreparado para ser usado como controlador biológico debe tener. FO. como característica un porcentaje de germinación de conidias igual o mayor al. DE. IN. 90% a las 18 horas de incubación, no ocurriendo así con los porcentajes de. AS. germinación hallados en todas las concentraciones evaluadas.(Fig. 1,2 y 3). EM. Los resultados obtenidos en las figuras anteriormente mencionadas concuerdan. ST. con lo reportado por Cholango (2009)28 quien encontró que el agroquímico. SI. Score, el cual no debería afectar a Trichoderma, ya que sus hongos diana son. DE. Erysiphe spp.,. Alternaria spp., Botrytis cinerea,. es incompatible con. IO. N. Trichoderma sp; asimismo Muiño y col29, encontraron que Trichoderma spp.es. DI RE. CC. incompatible con el agroquímico benomil que está diseñado para controlar solamente a hongos fitopatógenos.. 31 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(44) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Podemos observar también que, después de realizado el análisis estadístico de HSD de Tukey, se encontró que existe diferencia estadísticamente significativa entre las medias de los porcentajes de germinación. del control con los. IÓ. N. tratamiento realizados, así como también con la concentración de 480 ppm con. CA C. las demás concentraciones utilizadas y que no existe diferencia significativa. UN I. entre las medias de los porcentajes de germinación entre las concentraciones de. CO. M. 1680 ppm y 3000 ppm de Oxamilo (Fig. 1). Esto se debe probablemente a que. Y. la acción de toda sustancia tóxica depende de la concentración de la misma, es. IC. A. decir que a mayor concentración en ppm del oxamilo, mayor será el efecto. ÁT. negativo para el hongo en cuanto a su germinación.. RM. Al igual como sucede con el catión Aluminio, el Oxamilo pudiera actuar. FO. intracelularmente, inhibiendo la activación de enzimas dependientes de la. DE. IN. calmodulina35, probablemente interfiriendo en la síntesis del ergosterol de la. AS. membrana plasmática fúngica e inhibir las quitina sintasas33.. EM. En cuanto al efecto del oxamilo sobre el crecimiento de T. viride, se pudo. ST. comprobar que el nematicida afecta al hongo en todas las concentraciones. SI. empleadas (Figuras 7 y 10), observándose una ligera disminución en el. DE. crecimiento hasta un valor de 92.78 %. Cabe indicar además que el efecto. IO. N. inhibitorio del Oxamilo sobre el crecimiento de Trichoderma viride es menor. DI RE. CC. que el producido sobre la germinación, debido a que durante el crecimiento el hongo presenta un mayor número de mecanismos que le permiten resistir el efecto de los agroquímicos 30 Con respecto a P. chlamydosporia en cuanto a lo se refiere a la germinación, el. Oxamilo la disminuye a 0% a las 16 horas de incubación, en todas las. 32. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(45) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. concentraciones usadas (Figuras 2 y 5), probablemente debido que al entrar en contacto con la pared de la espora, afecte algunos procesos relacionados con la función de la membrana plasmática33-34. Asimismo, igual que el aluminio,. IÓ. N. puede que el Oxamilo se concentre mayormente en la pared celular, en la parte. CA C. péptica de la misma, pudiendo asociarse a las glicoproteínas33, aumentando la. UN I. compactación de las proteínas de membrana. (Fig.13). Esto pudiera deberse a. CO. M. que se altera la configuración tridimensional de estas proteínas, ocasionando. Y. que ingrese a la célula el Oxamilo, produciendo el daño anteriormente. IC. A. mencionado.. ÁT. Por otro lado la pared celular es una estructura esencial para los hongos y su. RM. eliminación o los defectos en su formación tienen efectos profundos en el. IN. DE. celular por lisis34 (Fig. 14).. FO. crecimiento y la morfología de la célula fúngica, pudiendo causar la muerte. AS. Analizando el porcentaje de crecimiento de P. chlamydosporia (Fig. 8 y 11). EM. observamos que disminuye notablemente desde la concentración de 480 ppm. ST. hasta la de 3000 ppm, pudiendo apreciarse en esta última la penetración del. SI. Oxamilo hacia el interior de la célula fúngica (Fig.14), debido probablemente. DE. al unirse a la B-1,3-D-glucano sintetasa, responsable de la síntesis del B-1,3-. IO. N. D-glucano, produciendo el hinchamiento y la lisis celular en las zonas de. DI RE. CC. crecimiento en la pared celular35. Realizado el análisis estadístico Anova y post Anova Tukey del crecimiento de P. chlamydosporia , podemos deducir que existe diferencia significativa entre. el control y las demás concentraciones usadas, más no se aprecia diferencia. 33 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(46) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. estadística significativa entre las concentraciones de 480, 1680 y 3000 ppm empleadas en el presente experimento. Esto quiere decir que el efecto del oxamilo sobre el crecimiento de P.. IÓ. N. chlamydosporia es notorio si comparamos el control con las concentraciones. CA C. empleadas, pero a partir de aquél es casi el mismo o sea no se ve un. UN I. decremento marcado en el desarrollo del hongo conforme se incrementan las. CO. M. concentraciones del nematicida.. Y. Por otro lado en lo que respecta a la germinación de Paecilomyces lilacinus ,. IC. A. podemos decir después de analizar las figuras 3 y 6, que el Oxamilo inhibe la. ÁT. germinación de este hongo, existiendo una diferencia significativa entre el. RM. control y las diferentes concentraciones del nematicida empleadas en el. FO. presente experimento, más no entre estas últimas.. DE. IN. La tendencia decreciente en el porcentaje de germinación de P. lilacinus. AS. frente a las diferentes concentraciones del nematicida, puede deberse a que el. EM. Oxamilo afecta la permeabilidad de las conidias, provocando una posible. ST. interferencia en la germinación, e impidiendo la captación de nutrientes de. SI. manera normal, incrementándose este efecto conforme se incrementa la. DE. concentración del nematicida36.. IO. N. Probablemente el Oxamilo, al igual que otros nematicidas, como las saponinas. DI RE. CC. alteran la permeabilidad de las membranas celulares por interacción con los esteroles que forman parte de la membrana fúngica y que. constituyen. aproximadamente el 25% de esta, ocasionando la muerte del organismo, ya que la membrana plasmática desempeña una importante función en la división celular y el metabolismo en las células fúngicas. El oxamilo, así, inhibe la. 34. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(47) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. síntesis de los esteroles o se fijan al mismo modificando la permeabilidad de la membrana plasmática, ocasionando una disminución el crecimiento.37 Otra posible explicación a este fenómeno de inhibición de la germinación de las. IÓ. N. conidias, estaría dada por la acción común de diversos compuestos químicos. CA C. usados para el control de hongos fitopatógenos, que inhiben o bloquean el. UN I. transporte de electrones en la cadena respiratoria de los hongos (Hewit, 2000),. CO. M. específicamente a nivel del centro QO (Ubiquinona) de la cadena respiratoria. Y. (Neuburger y col. 2003).. IC. A. Asimismo observando el porcentaje de crecimiento de P. lilacinus (Figuras 9 y. ÁT. 12) podemos deducir que existe una diferencia significativa entre el control con. RM. las tres concentraciones usadas, esto quiere decir que el oxamilo disminuye el. FO. porcentaje de crecimiento de P. lilacinus en todas las concentraciones. DE. IN. empleadas hasta un valor de 70.7 %. También podemos decir que existe un. AS. diferencia significativa entre las concentraciones de 480 y 1680 ppm con la de. EM. 3000 ppm.. ST. Por otro lado, los resultados obtenidos en el presente estudio, son solo. SI. aplicables a experimentos in vitro, ya que según Douglas y col. (2001), los. DE. pesticidas que son inhibitorios en el laboratorio, no siempre exhiben el mismo. IO. N. efecto en el campo. Lo dicho puede estar en función de la concentración del. DI RE. CC. pesticida, los diferentes factores bióticos y abióticos presentes en el campo en el momento de la aplicación. Por ejemplo, Keller y col. (1993), observaron que un tercio de los fungicidas que evaluaron in vitro, inhibían completamente el crecimiento micelial de Beauveria brongniartii y el resto, o prevenían o reducían la germinación de sus conidias, y que al ser asperjados en granos de. 35 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(48) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. cebada, su crecimiento fue sustancialmente menos inhibido por estos fungicidas, concluyendo que la mayoría de estos, no tendrían un efecto adverso. DI RE. CC. IO. N. DE. SI. ST. EM. AS. DE. IN. FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. M. UN I. CA C. IÓ. N. sobre B. brongniartii al aplicarlos al suelo.. 36. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(49) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. V. CONCLUSIONES. De acuerdo a los resultados obtenidos en el presente trabajo se puede concluir. CA C. IÓ. N. que:. UN I. El Oxamilo inhibe significativamente la germinación de las conidias de. CO. M. Trichoderma viride, Pochonia chlamydosporia y Paecilomyces lilacinus bajo. Y. condiciones de laboratorio.. IC. A. El Oxamilo no presenta un efecto inhibitorio significativo sobre el crecimiento de. ÁT. T. viride bajo condiciones de laboratorio.. RM. El oxamilo disminuye el crecimiento de P. chlamydosporia y P. lilacinus en las. FO. tres concentraciones empleadas bajo condiciones de laboratorio. DI RE. CC. IO. N. DE. SI. ST. EM. AS. condiciones de laboratorio.. DE. IN. El oxamilo no es compatible con T. viride, P. chlamydosporia y P.lilacinus en. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(50) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. IÓ. N. VI. RECOMENDACIONES. CA C. Cabe resaltar que los resultados encontrados en el laboratorio pueden. UN I. diferir con los obtenidos en campo, en consecuencia es recomendable realizar. CO. M. estudios en el agro para evaluar no solo la persistencia del Oxamilo en el suelo de. Y. cultivo y así poder programar mejor la aplicación de Trichoderma viride,. IC. A. Pochonia chlamydosporia y Paecilomyces lilacinus determinando con exactitud. ÁT. su compatibilidad con el nematicida en un agrosistema específico. También es. RM. necesario saber hasta qué punto las concentraciones de Oxamilo que manejan los. FO. agricultores en el campo son compatibles con la aplicación de hongos. DE. IN. biocontroladores como T. viride, P. chlamydosporia y P.lilacinus. Todo esto. DI RE. CC. IO. N. DE. SI. ST. EM. AS. enmarcado dentro de un Manejo Integrado.. 30. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(51) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS. 1.. Clemencia Guedez, Carmen Castillo, Luis Cañizales y Rafael Olivar.. IÓ. N. “Control Biológico”: Una herramienta para el desarrollo sustentable y sostenible.”. CA C. Laboratorio de Fitopatología y Control Biológico “Dr. Carlos Díaz Polanco”. Romero F.R. Manejo Integrado de Plagas. México: Ed. Universidad. CO. M. 2.. UN I. NURR-ULA- Trujillo-Venezuela.. Y. Autónoma de Chapingo. 2004.. Rey M, Delgado-Jarana J, Rincón A., Limón C, Benítez T. Mejora de. IC. A. 3.. ÁT. cepas de Trichoderma para su empleo como biofungicidas. RevIberoamMicol. University Cornell. Extension Toxicology Network. 1993(En línea). FO. 4.. RM. 2000; 17:S31-S36.. DE. IN. acceso (8 de Marzo del 2011) New York-USA. Disponible en. AS. http://pmep.cce.cornell.edu/profiles/extoxnet/pyrethrins-ziram/thiabendazole-. EM. ext.html.. ST. 5. Ramac.com.ni/index.php?options=com_content&view=article&id=60&Itemid. SI. =133.. DE. 6. Gromovykh T, Tulpanova V, Shmarlovskaya S, Gromovykh V, Makhova. IO. N. H. Strains of Trichoderma Benefit for Biological Control Seedlings Pathogens.. CC. MBAO 1999: 38-69.. DI RE. 7. Howel, C. Mechanics employed by Trichoderma species in the biological control of plant diseases: The history and evolution of current concepts. Plant diseases 2003; 87(1): 4-10.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..