Validación de una técnica analítica por cromatografía líquida de alta performance (hplc) para cuantificar teofilina anhidra en tyrex 27mg/5ml jarabe”

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(1)Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUIMICA. AC I. A. Y. BI. O. Q. UI. M IC. A. ESCUELA ACADEMICO PROFESIONAL DE FARMACIA Y BIOQUIMICA. DE. FA. RM. “Validación de una Técnica Analítica por Cromatografía Líquida de Alta Performance (HPLC) para Cuantificar Teofilina Anhidra en TYREX 27mg/5mL JARABE”. AUTOR. ASESOR. BI BL IO. TE CA. INFORME DE PRÁCTICAS PRE-PROFESIONALES PARA OPTAR EL GRADO PROFESIONAL DE QUIMICO FARMACEUTICO. : Br. BUSTAMANTE CHU, VICTOR ENRIQUE. : Dr. ALVA PLASENCIA, PEDRO. TRUJILLO – PERU 2012. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(2) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. DEDICATORIA. A ti, Dios Padre maravilloso,. M IC. A. por guiar mis pasos y e iluminar mi camino,. UI. por rodearme de gente buena y. AC I. A. Y. mi familia.. BI. O. Q. regalarme mi más grande tesoro;. FA. RM. Gracias te doy Señor por este paso que me permites dar,. DE. Y por mantener siempre a mi lado a mi madre,. TE CA. ella que jamás suelta mi mano,. BI BL IO. ella que jamás se rinde,. ella por quien a través de sus brazos,. eres Tú quien me brinda su amor y ternura.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(3) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. A. DEDICATORIA. UI. M IC. Con amor y respeto a mis queridos padres:. BI. O. Q. OSCAR BUSTAMANTE ZÁRATE y. A. Y. MARIA ROXANA CHU JIMENEZ, a quienes. RM. AC I. agradezco con toda mi alma el que siempre estén. FA. ahí para mí, por su amor y comprensión en todo. TE CA. DE. momento y porque sé que jamás dejaran de apoyarme. BI BL IO. y estar a mi lado en cada paso que doy.. Los amo.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(4) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. AGRADECIMIENTO. M IC. A. A MI ASESOR:. Y. BI. O. Q. UI. Dr. PEDRO MARCELO ALVA PLASENCIA. AC I. A. Quien me brindó su valiosa orientación e incondicional apoyo para la realización y. BI BL IO. TE CA. DE. FA. RM. culminación del presente informe, en todo momento.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(5) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. PRESENTACION. SEÑORES MIEMBROS DEL JURADO: En cumplimiento con las normas establecidas en el reglamento de Grados y Títulos de la. M IC. A. Facultad de Farmacia y Bioquímica de la Universidad Nacional de Trujillo, someto a su. BI. O. Q. el grado profesional de químico farmacéutico titulado:. UI. elevado criterio profesional, el informe de prácticas pre-profesionales para obtener. A. Y. “Validación de una Técnica Analítica por Cromatografía Líquida de Alta. AC I. Performance (HPLC) para Cuantificar Teofilina Anhidra en TYREX 27mg/5mL. RM. JARABE”. FA. Manifiesto mi más sincero reconocimiento y agradecimiento a todos los docentes, mis. DE. maestros, que han contribuido con cada una de sus enseñanzas y experiencias a mi. BI BL IO. TE CA. formación profesional.. Trujillo, Julio 2012. BUSTAMANTE CHU, Víctor Enrique. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(6) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. JURADO DICTAMINADOR. Dr. JESUS GALLARDO MELENDEZ.. MIEMBRO:. Dr. PEDRO ALVA PLASENCIA.. MIEMBRO:. Ms. YURI CURO VALLEJOS.. BI BL IO. TE CA. DE. FA. RM. AC I. A. Y. BI. O. Q. UI. M IC. A. PRESIDENTE:. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(7) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. M IC. A. ÍNDICE. O. Q. UI. ABSTRAT ………………………………………………………………............. i. Y. BI. RESUMEN………………………………………………………………............... ii. AC I. A. I. INTRODUCCIÓN………………………………………………………......... 1. FA. RM. II. MATERIAL Y MÉTODO………………………………………………........ 14. DE. III. RESULTADOS.………………………………………………………............ 25. TE CA. IV.DISCUCIÓN.………………………………………………………................ 30. BI BL IO. V. CONCLUSIÓN.………………………………………………………............. 34 VI.REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS……………………………………… 35. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(8) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. RESUMEN El procedimiento analítico para cuantificar el principio activo Teofilina Anhidra por cromatografía líquida de alta performance (HPLC) en TYREX 27mg/5mL Jarabe fue desarrollado en los laboratorios de Control de Calidad Fisico-Quimico del Laboratorio Farmaceutico “Instituto Quimioterapeutico” IQFARMA.. M IC. A. Para la validación se evaluaron los parámetros de desempeño de los procedimientos analíticos como son: selectividad, linealidad, exactitud y precisión. Para dar mayor sustento. UI. a ésta validación se realizó también la determinación del límite de cuantificación y límite de. BI. O. Q. detección.. Y. Los resultados de éstos parámetros de desempeño se sometieron a pruebas estadísticas. AC I. A. demostrando que el procedimiento analítico propuesto para la cuantificación del principio activo “Teofilina Anhidra” en el producto farmacéutico TYREX 27mg/mL Jarabe es. DE. FA. RM. selectivo, lineal, exacto y preciso.. Como paso previo a éste procedimiento se evaluó también la aptitud del sistema. Los. TE CA. resultados obtenidos fueron conformes a las especificaciones para un método cromatográfico recomendadas por la United States Pharmacopeia (USP 34), comprobando. BI BL IO. que el equipo, el sistema electrónico, las operaciones analíticas y las muestras a analizar constituyen un sistema integral que puede evaluarse como tal.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(9) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. SUMMARY. The analytical procedure to quantify the active Anhydrous Theophylline by high performance liquid chromatography (HPLC) Tyrex 27mg/5mL syrup was developed in the. A. laboratories of Quality Control Laboratory of Physical-Chemical Pharmaceutical. M IC. "chemotherapeutic Institute" IQFARMA.. UI. For validation parameters were evaluated performance of analytical procedures such as. O. Q. selectivity, linearity, accuracy and precision. To give further support to this validation was. Y. BI. also performed to determine the limit of quantification and detection limit.. A. The results of these performance parameters were subjected to statistical evidence showing. AC I. that the proposed analytical method for quantification of the active "Anhydrous. RM. Theophylline" in the pharmaceutical Tyrex 27mg/5mL syrup is selective, linear, accurate. FA. and precise.. DE. As a preliminary to this procedure was also evaluated the ability of the system. The results were in accordance with the specifications for a chromatographic method recommended by. TE CA. the United States Pharmacopeia (USP 34), checking the computer, electronics, analytical. such.. BI BL IO. operations and samples to be analyzed constitute an integral system that can be evaluated as. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(10) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. I.. INTRODUCCION. La industria farmacéutica consciente de su alta responsabilidad, actúa siempre buscando mejorar la calidad del medicamento a lo largo del proceso que lo crea 1. Los conceptos sobre Calidad y el control del medicamento han ido variando en el. IC A. tiempo. Con el incremento de la producción industrial, del comercio internacional, y. UI M. teniendo como objetivo alcanzar la excelencia, se han ido sistematizando los. Q. conceptos y se han creado herramientas y normas para lograr y mantener la calidad.. BI. O. Es así que ahora se emplea el término de "Gestión de la Calidad". Para ello se han. Y. reformulado normas que han dado como resultado, por ejemplo, la serie ISO 9001,. AC. IA. un enfoque muy importante es el del Mejoramiento Continuo de la calidad. Y, por. RM. supuesto, lo es también la realización de Auditorias de la calidad. 2,3. FA. Dentro de los avances en la Industria Farmacéutica llegan a mejorar una serie de. DE. normas o herramientas específicas para lograr la producción de medicamentos de. TE. CA. muy buena calidad. Uno de ellos es el de las Buenas Prácticas de Manufactura-BPM. IO. ("Good Manufacturing Practices", "GMPs"). Cuando recién se presentaron, a nivel. BI BL. de la FDA de los EEUU, la Asamblea Mundial de la Salud aprobó una primera versión, la cual fue actualizada con un nuevo documento en 1975. Posteriormente, se han actualizado estas normas y se han preparado, por OMS y por OPS, Guías muy adecuadas. 2 La Comisión FAO/OMS del Codex Alimentarius ha aprobado también las BPM para el procesamiento de alimentos. En síntesis, las BPM indican lo que debe hacerse, y las medidas a tomar, durante la elaboración de productos farmacéuticos para lograr su conformidad a las especificaciones que garanticen su calidad, eficacia e inocuidad. 3, 4,5 1. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(11) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Para asegurar la eficacia y seguridad terapéutica de un preparado farmacéutico se debe determinar su calidad, la que depende de la estabilidad del producto. Esta puede definirse como "la capacidad para permanecer dentro de las especificaciones establecidas para asegurar su identidad, fuerza, calidad y pureza" 1,6.. IC A. Muchos factores inciden sobre la estabilidad de un producto farmacéutico, entre. UI M. ellos, la actividad del o los principios activos, la interacción potencial entre éstos y. O. Q. los excipientes, el proceso de elaboración, la forma posológica, el sistema de. BI. recipiente, revestimiento y cierre, las condiciones ambientales durante el transporte,. IA. Y. almacenamiento y manipulación, y el tiempo transcurrido desde la elaboración hasta. AC. el uso del producto. El objetivo de este tipo de estudios es controlar, evaluar y. RM. mejorar la calidad de los productos farmacéuticos disponibles en el mercado. FA. mediante muestreos programados desde los lugares de dispensación y expendio,. DE. comprobando a través de análisis correspondientes, el cumplimiento de las. BI BL. IO. proceda.7, 8. TE. CA. especificaciones respectivas y aplicando las medidas correctivas necesarias, cuando. Otro concepto a considerar, cuando se aplican las BPM en la industria farmacéutica es referente a la Validación, definida por la OMS como el acto documentado para probar que los procedimientos, procesos, equipos, materiales, o sistemas aplicados producen efectivamente los resultados esperados. 9 La validación garantiza la calidad del medicamento, puesto que le confiere fiabilidad a los resultados obtenidos en el análisis. Se pueden validar diversas técnicas analíticas, procesos de fabricación y limpieza. La validación en procesos establece 2. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(12) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. una evidencia objetiva, que provee un alto grado de aseguramiento de que un proceso específico producirá consistentemente, resultados y productos que cumplan con sus especificaciones predeterminadas. 10,11,12 Es así que Dentro del complejo Sistema de Gestión de Calidad, el proceso de validación de los métodos analíticos constituye una etapa clave que aporta la. IC A. demostración de las competencias necesarias para llegar a generar resultados. UI M. confiables y precisos.13,14. Siendo el método o técnica analítica aquel método de. Q. investigación que consiste en la desmembración de un todo, descomponiéndolo en. BI. O. sus partes o elementos para observar las causas, la naturaleza y los efectos. El. Y. análisis es la observación y examen de un hecho en particular. Es necesario conocer. AC. IA. la naturaleza del fenómeno y objeto que se estudia para comprender su esencia. El. RM. método analítico nos permite conocer más del objeto de estudio, con lo cual se. FA. puede: explicar, hacer analogías, comprender mejor su comportamiento y establecer. CA. TE. validarlo.15, 16, 17,18. DE. nuevas teorías. Una vez que se ha desarrollado un método analítico, es conveniente. IO. La realización de un método de validación completo es una tarea que puede ser. BI BL. tediosa, pero las consecuencias de no hacerlo es seguro una pérdida de tiempo, dinero y recursos.. 19. Dentro de las razones que justifican la validación de métodos. analíticos se encuentran: -. Demostrar que los métodos son adecuados a los análisis propuestos en las condiciones descritas. La validación es la herramienta que permite obtener las pruebas documentales al respecto.. 3. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(13) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. -. Trabajar con métodos que ofrezcan confianza y seguridad en los resultados, lo cual a su vez minimizará el número de fallos y repeticiones permitiendo un importante ahorro de costos. 1, 19. -. Trabajar con métodos validados permite no sólo el conocimiento del método analítico sino también cumplir con las exigencias legales tanto del registro de. IC A. especialidades farmacéuticas como de las Buenas Prácticas de Laboratorio, con el fin. Q. UI M. de asegurar la calidad y eficacia del producto.1, 20. BI. O. Existen 4 tipos de validaciones, las cuales son:. Y.  Prospectiva. AC. IA.  Concurrente. RM.  Retrospectiva. FA.  Revalidaciones. DE. Es importante tener en cuenta que solo dos de ellas son aceptadas por la FDA. CA. (Prospectiva y Concurrente). IO. TE. Una validación Prospectiva, Se realiza cuando la verificación del cumplimiento de. BI BL. las condiciones establecidas para un proceso o método analítico se lleva a cabo antes de la comercialización del producto. Este tipo de validación se aplica cuando se elabora un nuevo método analítico. Es típico en los laboratorios de investigación y desarrollo, y se realiza de acuerdo con un protocolo perfectamente planificado. Comprende el estudio de todos los criterios necesarios para demostrar el buen funcionamiento del método. 1, 21,22 Una validación retrospectiva Se realiza cuando la idoneidad del método o proceso analítico se basa en la garantía constatada a través de los datos analíticos del 4. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(14) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. producto ya comercializado, se aplica a métodos no validados previamente y de los que se tiene una amplia historia de resultados.1, 22,23 La Revalidación es la introducción de un cambio que pueda afectar la idoneidad del método analítico establecido por la validación, podrá exigir una nueva validación, es decir una revalidación total o parcial de dicho método analítico. Los criterios a estudiar se deciden en función del tipo de cambio efectuado.1, 16,24. O. Q.  Cambios importantes en el método analítico.. UI M.  Cambios importantes en la matriz del producto.. IC A. Entre los motivos que exige una nueva validación tenemos:. AC. IA. Y. BI.  Cambios en las especificaciones.. RM. En todo proceso de validación hay parámetros que se deben cumplir como lo es la. FA. linealidad, que nos da la capacidad del método analítico para obtener resultados. DE. directamente proporcionales a la concentración o cantidad del analito en un rango. CA. definido. Se determina mediante el tratamiento matemático de los resultados. TE. obtenidos en el análisis del analito a diferentes cantidades o concentraciones. La. BI BL. IO. selección del rango y del número de puntos experimentales está estrictamente relacionada con la aplicación del método. 2, 15,25 Un parámetro importante a considerar es la precisión, éste refleja la medida en que los valores de una serie repetida de ensayos analíticos que se realizan sobre una muestra homogénea son semejantes entre sí.15 Su estudio incluye el ensayo de repetibilidad, la cual se desarrolla bajo las mismas condiciones, utilizando la misma muestra, analizada por el mismo analista, en el mismo laboratorio, con los mismos equipos y reactivos, durante una misma sesión de trabajo en un período corto. Este 5. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(15) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. parámetro permite evaluar la incertidumbre en la estimación de la media, es decir, el error aleatorio que se corresponde con la dispersión de los datos alrededor de la media. 1, 20,26 Otro parámetro es la Exactitud, que indica la capacidad del método analítico para obtener resultados lo más próximos posibles al valor verdadero. A diferencia de la. IC A. precisión, que refleja el error aleatorio, la exactitud refleja el error sistemático o la. UI M. tendencia a él. Cuando existen interferencias en el método por falta de selectividad. Q. (desviación por exceso en los resultados), o cuando se trata de métodos analíticos. BI. O. muy laboriosos, con varias etapas, como extracciones, purificaciones, etcétera. Y. (desviación por defecto en los resultados), el método se considera no exacto. Para. AC. IA. asegurar una buena exactitud, según Martin-Smith y Rudd, es necesario eliminar los. RM. errores que no están sujetos a tratamiento estadístico (calibración o control. FA. incorrectos de equipos), los errores inherentes a blancos (errores constantes) y los. DE. que dependen de la cantidad del analito presente (errores proporcionales). Ellos. CA. opinan que la mejor manera de identificar estos errores será realizando una prueba. TE. interlaboratorio, es decir el trabajo realizado con el mismo método en diferentes. BI BL. IO. laboratorios. 1, 3, 13,14. La selectividad se define como la capacidad de un método analítico para medir exacta y específicamente el analito sin interferencias de impurezas, productos de degradación o excipientes que pueden estar presentes en la muestra. Este parámetro se expresa como el grado de inexactitud del método. La evaluación de este parámetro es especialmente importante en el caso de los métodos analíticos diseñados para la cuantificación del analito en formulaciones y en estudios de estabilidad. 11, 15,27. 6. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(16) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Aunque la especificidad y la selectividad se consideran términos equivalente, algunos autores los diferencian, considerando la selectividad como la capacidad de detectar simultánea o separadamente sustancias químicas diferentes presentes en una misma muestra y a la especificidad como la capacidad de detectar el analito sin interferencias de otro compuesto. La selectividad se determina comparando los resultados del análisis de muestras con los resultados del análisis de las muestras en. UI M. IC A. presencia de productos relacionados. 1, 10,28. Q. La determinación de los límites es una propiedad del método para presentar un gran. El límite de detección o cantidad mínima detectable hace referencia a la. Y. 39.. BI. O. cambio en la respuesta cuando se produce un pequeño cambio en la concentración. 1,. AC. IA. mínima concentración del compuesto en estudio que es posible detectar con certeza. RM. pero no necesariamente cuantificada, bajo las condiciones experimentales. FA. establecidas.1, 24,29. DE. Un resultado “positivo” no es suficiente para que el analista considere detectado un. TE. CA. analito. Se precisa, además, conocer el límite de detección en las condiciones del. IO. método. De lo contrario, se puede incurrir en un falso positivo: suponer el analito. BI BL. presente en la muestra cuando de hecho no lo está.1, 29. El límite de detección es un parámetro analítico de gran interés en análisis de trazas, contaminantes y productos de degradación.28 El límite de cuantificación o cantidad mínima cuantificable es la concentración más baja de un compuesto presente en una muestra, que puede ser cuantificada con un grado de confianza previamente establecido (exactitud y precisión) bajo las condiciones experimentales establecidas.1, 26, 27. 7. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(17) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. El límite de cuantificación es un término cuantitativo (menor cantidad medible) mientras que el límite de detección es cualitativo (menor cantidad detectable). 1,26 Por naturaleza sabemos que un proceso en que interviene directa o indirectamente la mano del hombre siempre tiene variabilidades que son imposibles de eliminar, sin embargo, sí es posible controlarlas. La Estadística es una herramienta indispensable para el control de estas variables, ya que mediante el Control Estadístico de Procesos. IC A. no sólo es posible una inspección de rutina, sino que además, ayuda a identificar. UI M. errores y a tomar decisiones que permiten minimizarlos; en otras palabras, posee las. BI. O. Q. herramientas que le dan la solidez científica a los procesos de validación. 1, 20,25. Y. En la industria farmacéutica se debe validar aquellos procesos de producción y de. AC. IA. prestación de servicios, donde los productos resultantes no puedan verificarse. RM. mediante actividades de seguimiento o medición posteriores.11. FA. Por otra parte, la Teofilina es un broncodilatador, es decir, una sustancia que amplía. CA. DE. el diámetro de las vías aéreas del pulmón y hace más fácil la respiración.. TE. La teofilina puede ayudarle a sentir menor opresión torácica, menor falta de aire y. IO. menor sensación de pitos en el pecho.. -. BI BL. Este medicamento se usa para: Tratar o prevenir crisis de asma. Tratar los estados broncoespásticos reversibles asociados a enfermedades broncopulmonares con dificultad respiratoria a largo plazo, como la enfermedad pulmonar obstructiva crónica y la bronquitis crónica y, -. Para el tratamiento de la insuficiencia cardiaca, en determinadas circunstancias.. -. Las formas orales no alcohólicas se emplean también para el tratamiento de la apnea del recién nacido.. 8. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(18) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Los métodos analíticos deben validarse para cumplir con las exigencias contempladas en la Dirección general de medicamentos, insumos y drogas (DIGEMID) en el artículo 176º del Manual de Buenas Practicas de Manufactura de productos farmacéuticos, así como también en la USP 34 y las exigencias legales contempladas en el procedimiento de productos farmacéuticos de la comunidad. IC A. económica europea en sus apartados 2E y 2F. 2, 3,11. UI M. Por ser una metodología desarrollada internamente en el laboratorio, debe ser. Q. validada de acuerdo a los requerimientos establecidos en la USP 34 (United States. BI. O. Pharmacopeia) y la ICH (International Conference on Harmonisation of Technical. IA. Y. Requirements for Registration of Pharmaceuticals for Human Use).. AC. La validación se llevó a cabo en el Laboratorio de Control de Calidad Fisicoquímico. FA. RM. del Laboratorio Farmacéutico “Instituto Quimioterapéutico” IQFARMA. IO. TE. PROBLEMA:. CA. DE. Por todo lo mencionado anteriormente se plantea lo siguiente:. BI BL. ¿La técnica analítica para la validación de la cuantificación de Teofilina Anhidra en TYREX 27mg/5mL JARABE. por Cromatografía Líquida de Alta Performance. (HPLC), cumple con los parámetro de validación según la USP 34? HIPÓTESIS: La técnica analítica para la validación de la cuantificación de Teofilina Anhidra en TYREX 27mg/5mL JARABE. por Cromatografía Líquida de Alta Performance. (HPLC), cumple con los parámetro de validación según la USP 34. 9. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(19) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. OBJETIVOS OBJETIVO GENERAL Validar el método analítico empleado para la cuantificación por Cromatografía Líquida de Alta Performance (HPLC) de Teofilina Anhidra en. O. Q. UI M. IC A. TYREX 27mg/5mL JARABE.. BI. OBJETIVO ESPECIFICO. IA. Y. Establecer si los ensayos de linealidad, exactitud, precisión y especificidad. AC. conducen a validar el método analítico empleado para la cuantificación de. BI BL. IO. TE. CA. DE. FA. RM. Teofilina Anhidra en TYREX 27mg/5mL JARABE .. 10. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(20) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. II. MATERIAL Y METODO. 2.1. MATERIALES 2.1.1.Material de Estudio: . Producto Tyrex 27mg/5mL Jarabe, frasco por 120 mL, 30 frascos.. Placebo: correspondiente a los excipientes utilizados en la. UI M. . IC A. Lote: 10101881.. O. Q. manufactura de Tyrex 27mg/5mL Jarabe, pero sin la adición. Y. BI. del principio activo(Teofilina Anhidra).. AC. IA. 2.1.2. Material de Vidrio:. El de uso común en laboratorio (Anexo 01). FA. RM. . analítica OHAUS ADVENTURER Modelo: DV215CD. CA.  Balanza. DE. 2.1.3. Equipos: (Anexo 02). IO. TE. Clase: 01 Serie:1129322623. BI BL.  Balanza analítica OHAUS ADVENTURER Modelo: AR2140 Clase: 01 Serie: k1711227140153P.  Cromatográfo HPLC ELITE LACHROM DAD Pump: L-2130, Detector (DAD):L-2455, Autosampler: L-2200, Coluumn oven; L2350  Columna cromatográfica Lichrospher 100 RP-18 de 250 mm x 4,0 mm (5um).  Ultrasonido BRANSON Modelo: 5510 11. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(21) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación.  Equipo de filtración  Ultra purificador de agua SARTORIUS 2.1.4. Reactivos: (Anexo 03)  ER Teofilina Amhidra (Estándar de Referencia), Tipo: Estandar secundario Tipo A, Proveedor. United Pharma, Potencia: 100.874% tal cual. IC A.  1-octanosulfonato de sodio GR.. UI M.  Metanol HPLC.. BI. O. Q.  Acido Acético Glacial.. IA. PROCEDIMIENTO ANALITICO. AC. 3.1.1. Y. 3.1. METODO. RM. 3.1.1.1 LINEALIDAD. FA. a) Para la linealidad del sistema. DE. Preparar soluciones del estándar de 50%, 75%, 100%, 125% y 150%; siendo la 0.68mg Teofilina Anhidra/ mL. la. TE. CA. concentración final de la muestra. BI BL. IO. concentración al 100%. Preparación de la solución stock de Teofilina Anhidra: Pesar 84.34mg de Teofilina Anhidra y transvasar a una fiola de 50mL de capacidad, adicionar 25 mL de agua, sonicar por 5 minutos con agitación constante, enfriar completar a volumen con agua purificada y mezclar. Concentración final 1.687 mg de Teofilina Anhidra/ mL.. 12. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(22) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Preparación de las muestras:  Solución estándar al 50% En una fiola de 10 mL de capacidad adicionar 2 mL de la solución stock de teofilina anhidra y enrasar con agua purificada. Agitar y filtrar la solución a través de membrana de nylon de 0.22 um. Preparar por triplicado. UI M. IC A.  Solución estándar al 75%. Q. En una fiola de 10 mL de capacidad adicionar 3 mL de la solución stock de. BI. O. teofilina anhidra y enrasar con agua purificada. Agitar y filtrar la solución a. AC. RM.  Solución estándar al 100%. IA. Y. través de membrana de nylon de 0.22 um. Preparar por triplicado. FA. En una fiola de 10 mL de capacidad adicionar 4 mL de la solución stock de. DE. teofilina anhidra y enrasar con agua purificada. Agitar y filtrar la solución a. CA. través de membrana de nylon de 0.22 um. Preparar por triplicado. BI BL. IO. TE.  Solución estándar al 125% En una fiola de 10 mL de capacidad adicionar 5 mL de la solución stock de teofilina anhidra y enrasar con agua purificada. Agitar y filtrar la solución a través de membrana de nylon de 0.22 um. Preparar por triplicado  Solución estándar al 150% En una fiola de 10 mL de capacidad adicionar 6 mL de la solución stock de teofilina anhidra y enrasar con agua purificada. Agitar y filtrar la solución a través de membrana de nylon de 0.22 um. Preparar por triplicado 13. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(23) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. b) Tratamiento estadístico de los resultados 1, 27. i.. Cálculo de la recta de regresión:. Ecuación de la recta:. IC A. y=bx+a. UI M. Donde:. O. Q. x : Concentración del analito. Y. BI. y : Valor de la respuesta en área del pico cromatográfico. IA. b : Valor de la pendiente de la recta. RM. AC. a : Valor del intercepto de la recta con el eje`` y´´. IO. TE. CA. DE. FA. Fórmulas para hallar b:. BI BL. Fórmulas para hallar a:. Siendo a y b los estimadores de la ordenada al origen y pendiente respectivamente, n el número de mediciones, Xi el valor de la concentración e Yi el valor medido en el ensayo i.. 14. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(24) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ii.. Interpretación estadística de la Regresión Lineal:.  Coeficiente de Correlación ``r´´. : Indica el grado de relación entre las variables “x” (concentración), e “y” (respuesta).  Test de hipótesis para el Coeficiente de Correlación ``r´´ : H0. :. r es diferente de 1. IC A. Criterio de aceptación: r no debe ser significativamente diferente de 1. Coeficiente de Determinación:. CA. DE. iii.. FA. RM. AC. IA. Y. BI. O. Q. UI M. Formulas para hallar ``r´´:. TE. Está dado por el cuadrado del coeficiente de correlación ``r´´; indica la proporción de. IO. la varianza total de ``y´´. Este debe ser mayor o igual a 0.99 para ingredientes activos. BI BL. en una formula.. El valor r = 1 indica una recta perfectamente lineal, r = -1 una recta perfectamente lineal de pendiente negativa y r = 0 la no correlación entre X e Y. En la práctica, r es generalmente mayor de 0.99 y los valores de 0.90 son raros.. Sin embargo, el indicador del modelo lineal no es r sino un test estadístico.. 15. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(25) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. iv.. Test de Hipótesis para demostrar regresión en función del coeficiente de correlación ``r´´:. H0. =. No existe correlación entre “x” e “y“. IC A. Criterios de aceptación: Si el valor de ``t´´ experimental obtenido es mayor que el. UI M. ``t´´ teórico de la tabla, calculado para (n-2) grados de libertad y un nivel de. O. Q. significación del 95.0% (probabilidad de 0.05; t tabla: 2.306), entonces se rechaza la. Y. BI. hipótesis nula, siendo la correlación lineal significativa con la probabilidad. TE. CA. DE. FA. Fórmula para hallar ``t´´: texp. RM. AC. IA. calculada.. BI BL. IO. 3.1.1.2 EXACTITUD Preparar soluciones del estándar de 80%, 100%, 120%; siendo la concentración final de la muestra en el ensayo 0.68mg/ mL, la concentración al 100%. Inyectar en el sistema en orden creciente y por triplicado.  Solución estándar al 80% Pesar 53.93 mg del estándar de referencia de Teofilina anhidra, transvasar a una fiola de 100mL y adicionar 12.6 mL de placebo. Preparar por tripliclado. 16. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(26) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación.  Solución estándar al 100% Pesar 67.41 mg del estándar de referencia de Teofilina anhidra, transvasar a una fiola de 100mL y adicionar 12.6 mL de placebo. Preparar por tripliclado..  Solución estándar al 120%. IC A. Pesar 80.89 mg del estándar de referencia de Teofilina anhidra, transvasar a una. BI. O. a) Tratamiento estadístico de los resultados. Q. UI M. fiola de 100mL y adicionar 12.6 mL de placebo. Preparar por tripliclado.. IA. Y. La exactitud de un método, también conocida como error sistemático o tendencia,. AC. corresponde a la diferencia entre el valor obtenido (media) y el valor verdadero.. FA. RM. Matemáticamente, suele expresarse del siguiente modo:. es el valor medio y. BI BL. Donde. IO. TE. CA. DE. Recuperación:. es el valor verdadero.. Si bien el valor verdadero de concentración no se conoce, puede estimarse. De hecho, la norma ASTM 456- 38 (American Section of the International Association for Testing Materials), al referirse a la exactitud de un método analítico habla de la concordancia entre el valor medio y el valor aceptado como referencia. De esta manera es posible independizarse del término “valor verdadero”.. 17. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(27) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Para determinarlo se utilizará un ensayo t de Student, efectuando varias determinaciones del estándar a distintos niveles de concentración (50%, 100%, 150%) y calculando el t experimental, tob, que se compara con el t de tablas para n – 1 grados de libertad en el nivel de confianza escogido, generalmente p = 0.05.. O. Q. UI M. IC A. El valor tob puede calcularse como:. Y. BI. Siendo R la recuperación porcentual. AC. IA. Los valores de tob se comparan con los tabulados para el intervalo de confianza. RM. requerido con n-1 grados de libertad y la exactitud se evalúa para el promedio de. FA. recuperaciones de todas las concentraciones.. DE. Si tob < ttabla, no existe diferencia significativa con el 100% de recuperación y la. TE. CA. exactitud es apropiada.. BI BL. IO. 3.1.1.3 PRECISION. a) Para la precisión del sistema (Repetibilidad)  Preparación de la solución estándar Preparar según la técnica analítica, pesar una cantidad equivalente a 86mg de Teofilina Anhidra y transferirlo a una fiola de 100 mL. Adicionar 50 mL de agua purificada, sonicar por 20 minutos. Enfriar si es necesario y completar a volumen con agua purificada, filtrar la muestra por membrana de nylon de 0.2um,. 18. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(28) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Concentración final: 0.68mg/ mL  Preparación de la solución muestra Pesar una cantidad equivalente a 68mg de Teofilina Anhidra (aproximadamente 12,6mL de jarabe en una fiola de 100 mL. Completar a volumen con agua purificada y mezclar. filtrar la muestra por membrana de nylon de 0,2um. IC A. Concentración final: .0.68mg/ mL. Q. UI M. Nota: Las muestras se analizaron por 6 veces.. BI. O. Tratamiento estadístico de los resultados. IA. Y. La precisión se expresa matemáticamente como la desviación estándar, σ, estimada. AC. analíticamente por s o más comúnmente con la desviación estándar relativa (DSR) o. FA. RM. coeficiente de variación (CV). El estimador s de la desviación estándar se calcula. BI BL. IO. TE. CA. DE. como:. Donde n es el número de medidas, Xi es el valor medido en el ensayo i y. es. estimador de la medida poblacional , calculado como:. La desviación estándar relativa o coeficiente de variación se calcula como:. 19. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(29) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Ambos estimadores, desviación estándar y desviación estándar relativa permiten evaluar la incertidumbre en la estimación de la medida (error aleatorio, correspondiente a la dispersión de datos alrededor de la medida).. IC A. Para la precisión del método adicionalmente se hallaran los intervalos de confianza. O. Q. UI M. para cada nivel de concentración estudiado.. BI. Los intervalos de confianza se calculan a partir de:. RM. AC. IA. Y.  Los resultados promedios. FA. Donde:. DE. = media de una serie de resultados obtenidos en un mismo nivel de concentración. TE. CA. = valor de la t de student de tablas para n-1 grados de libertad y p = 0.05. IO. = número de análisis. BI BL. s = desviación estándar 3.1.1.4. PRECISION INTERMEDIA. El objetivo del estudio de la precisión intermediaria es determinar la variabilidad del método efectuando una serie de análisis sobre la misma muestra, en un mismo laboratorio pero en condiciones diferentes. En el tratamiento de estándares y muestras se procedió tal cual se realizo en la precisión. (3.1.1.3) 20. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(30) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. La estimación de la precisión intermediaria se realiza con el cálculo de la desviación estándar relativa, considerando los resultados de análisis de analista 1 y analista 2. También se realizara precisión intermedia por diferente equipo.. 3.1.1.5.. ESPECIFICIDAD. IC A. Se analiza por separado el estándar, placebo y cada uno de los excipientes. En la. UI M. proporción indicada en la Orden de Manufactura del Producto.. O. Q. Donde se deberá demostrar ausencia del blanco en la matriz.. Y. BI. Se verificara en un isograma de un barrido espectral de 200nm a 400nm de longitud. AC. IA. de onda que no existe interferencia de excipientes.. RM. Se comprobara la capacidad de la técnica analítica para medir exacta y. FA. específicamente el analito sin interferencia de impurezas, excipientes y otras. LIMITES. TE. 3.1.1.7.. CA. DE. sustancias presentes en la matriz. BI BL. IO. LIMITE DE DETECCION Y LÍMITE DE CUANTIFICACION Realizar una curva de calibración con concentraciones bajas del analito. El cálculo del límite de detección y límite de cuantificación se realizó a partir de una curva de calibración a bajas concentraciones: 0.5, 1, 5, 25 y 50ppm.. 21. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(31) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación.  Preparación de solución madre: Se peso 31,03mg de estándar y llevo a una fiola de 50mL, se agrega 20mL de agua y sonicar por 5 minutos. Luego llevar a volumen con agua purificada. (Concentración final 0.63mg/mL) Nota: 1ppm = 1ug/mL. UI M. IC A.  Preparación de Soluciones:. RM. FA. 25 ppm = Peso St/50 x 1/25. BI. = Peso St/50 x 2/50 x 5/25. Y. 5 ppm. IA. = Peso St/50 x 2/50 x 1/25. AC. 1 ppm. O. Q. 0.5 ppm = Peso St/50 x 2/50 x 5/25 x 1/10. DE. 50 ppm = Peso St/50 x 2/25. TE. CA. SISTEMA CROMATOGRAFICO (Anexo 04) Longuitud de Onda:. ‒. Flujo:. 1.7mL/min. Volumen de Inyección:. 10uL. BI BL. ‒. IO. ‒. 254nm. La desviación estándar relativa para inyecciones repetidas no es más de 2,0%. Los tiempos de retención relativo son aproximadamente 0.6 para la teofilina anhidra y 1.0 para cafeína. El factor de resolución entre teofilina anhidra y cafeína no es menor de 2.0%. El factor de asimetría no es mayor de 2.. 22. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(32) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. III. RESULTADOS. TABLA N ° 1:. Evaluación de la Aptitud del sistema mediante las áreas y tiempos de retención.. Tiempos de. 32457935. 2. 32457998. 3. 32292244. 4. 32400078. 5. 32409370. IC A. 1. retencion. UI M. Áreas. 4.67 4.67. BI. Y. IA. AC RM FA. Promedio. 4.67 4.67 4.67. 32403525. 4.67. 67744. 0.0. 0.209. 0.00. TE. CA. DE. S DRS%. O. Q. N° de Repeticiones. BI BL. IO. Fuente: Elaboración propia. 23. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(33) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. FIGURA N ° 1:. Cromatograma correspondiente al estándar de Teofilina. AC. IA. Y. BI. O. Q. UI M. IC A. anhidra y Cafeína. RM. TIEMPO DE. NOMBRE. ASIMETRIA RESOLUCION. DE. FA. RETENCION. AREA. Teofilina anhidra 32457935 1.196. 6.91. Cafeina. 26865171 1.269. 0 3.971. BI BL. IO. TE. CA. 4.67. 24. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(34) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. TABLA N ° 2:. Parámetros de Linealidad en para la validación de la valoración de Teofilina Anhidra en TYREX 27mg/5mL jarabe. Valor. obtenido. aceptable. 0.9998. >= 0.9990. UI M. Coeficiente de Correlación ( R ). Resultado. IC A. Linealidad. Valor. 0.9996. >= 0.9990. Conforme. BI. O. Q. Coeficiente de determinación ( R2 ). Conforme. t exp > t tabla. AC. IA. Y. Significación Estadística(b) de 172,5014> la Varianza (S2) de la pendiente 2.160. para p =. RM. b. FA. 0.05. Significación Estadística(a) del 5.6382. CA. estadístico. t exp > t. DE. Test. > tabla. Conforme. para p = 0.05. BI BL. IO. linealidad. 2.160. TE. Intercepto (proporcionalidad). de. Conforme. t exp > t. Test Estadístico del Coeficiente 348.980. de Correlación. 2.160 ( CV ). > tabla. Conforme. para p = 0.05. Factor Respuesta. 1.477. < 2%. Conforme. Fuente: Elaboración propia. 25. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(35) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. FIGURA N ° 2:. Representación grafica de la curva de calibración. CA. DE. FA. RM. AC. IA. Y. BI. O. Q. UI M. IC A. (CONCENTRACION vs AREAS). BI BL. IO. TE. Fuente: Elaboración propia. 26. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(36) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. TABLA Nº 3:. Ensayos estadísticos para evaluar la Exactitud del método para la validación de la valoración de Teofilina Anhidra en TYREX 27mg/5mL jarabe. Porcentaje de Recuperación Valor obtenido. Resultado. Promedio. IC A. Recuperación. Valor normal. 99.793. 98% a 102%. UI M. (Rprom). Q. 0.6953 (Gexp) < 0.8709 G exp <. O. Test G de COCHRAN. G Conforme. tablas. estadístico. t. de 1.816(t exp) < 2.306. AC. Test. IA. Y. BI. (Gtab). Conforme. t exp < t tabla. Conforme. RM. STUDENT. BI BL. IO. TE. CA. DE. Fuente: Elaboración propia. FA. (t tabla). 27. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(37) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. TABLA Nº 4:. Precisión Determinación de la Repetibilidad para la validación de la valoración Teofilina Anhidra en TYREX 27mg/5mL jarabe. PESO MUESTRA (g). 1. 15.5000. 2. 15.5003. 3. 15.5001. Promedio. IC A. N°. 26.867. 26.888. RM. AC. IA. Y. BI. O. Q. UI M. 26.870. 15.5000. 26.932. 15.5006. 26.950. 15.5004. 27,006. IO. TE. 5. CA. DE. FA. 4. BI BL. 6. PROMEDIO. 26,919. CV ( % ). 0.202. Fuente: Elaboración propia. 28. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(38) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. TABLA N° 5:. Parámetros de Precisión Intermedia para la validación de la valoración Teofilina Anhidra en. TYREX 27mg/5mL. jarabe. Concentración. RECUPERADO. Hallada. 1. 99.70%. 26.919. ANALISTA. 2. 100.32%. 27.085. Q. UI M. ANALISTA. 27.002. 0.202 0.216 ------. Y. BI. O. PROMEDIO. CV ( % ). IC A. PORCENTAJE. 0.4347. ------. ------. < 2%. Conforme. Conforme. FA. RM. Valor aceptable de CV%. AC. IA. CV ( % ). DE. Resultado. BI BL. IO. TE. CA. Fuente: Elaboración propia. 29. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(39) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. TABLA 6:. Ensayo de especificidad de Teofilina Anhidra en 27mg/5mL jarabe. TYREX. y sus excipientes como componentes de su. formulación CONCENTRACION. VALOR. ( mg/mL ). ACEPTABLE. MATERIA PRIMA. 0.01001. Aceite de castor. 0.0100. IC A. Teofilina Anhidra. Ninguna Lectura. Conforme. Conforme. Q. hidrogenado. UI M. 0.00000. RESULTADO. 0.00000. Sacarosa. 0.00000. O. Nipagin-Metilparabeno. Ninguna. BI. 0.00000. Lectura. Conforme. RM. AC. IA. Y. Nipasol-Propilparabeno. FA DE. Lectura Ninguna. 0.00000. Lectura. IO. Ninguna. 0.00000. Lectura. BI BL. Alcohol etílico 96%. Acido cítrico anhidro Citrato. trisodico. dihidratado. Agua purificada. Lectura Ninguna. TE. CA. Sorbitol solución al 70%. Ninguna. Ninguna. 0.00000. Lectura Ninguna. 0.00000. Lectura Ninguna. 0.00000. Lectura. Conforme. Conforme. Conforme. Conforme. Conforme. Conforme. Conforme. Fuente: Elaboración propia 30. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(40) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Lectura del placebo: Ninguna 0.00000. Conforme. Placebo. TABLA 7:. Lectura. Limite de Cuantificación y Limite de Detección de método de la de. UI M. IC A. la valoración de Teofilina Anhidra en TYREX 27mg/5mL jarabe Valor. O. Q. Valor obtenido. Resultado. >= 0.9990. Conforme. >= 0.9990. Conforme. 44.322. -. -. 0.869 > 2,160. -. -. Y. BI. aceptable. IA. 0.99999. RM. AC. Coeficiente de Correlación ( R ). 0.99999. 2. DE. FA. Coeficiente de determinación ( R ). TE BI BL. IO. B. CA. A. para p = 0,05. Limite de Detección. 0.0001ug/mL. Limite de Cuantificación. 0.0002ug/mL. Fuente: Elaboración propia. 31. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(41) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. IV. DISCUSIÓN. La tabla N° 01 de la aptitud del sistema se evidenció una buena repetibilidad de los resultados. Al evaluar las áreas, observamos que la desviación estándar relativa (DRS) obtenida es de 0.209 %, siendo el máximo aceptado de 2%. Una DRS alta en las áreas podría deberse a problemas en el sistema de inyección. En. IC A. éste caso tenemos una DRS adecuada con lo que podemos presumir que el sistema. UI M. de inyección está trabajando de manera apropiada y se encuentra apto para poder. O. Q. llevar a cabo la validación.. Y. BI. En cuanto al tiempo de retención también se evidenció una buena repetibilidad dando. IA. una DRS de 0,000 La DRS alta en los tiempos de retención podrían deberse a fallas. RM. AC. en la fase móvil es decir si se trabaja con un sistema de gradiente.. FA. En este caso el sistema es isocrático por lo que no existiría problemas. También. DE. puede deberse a fallas en la bomba, provocando que la velocidad de flujo no sea. CA. constante, diferencias de presión o en su defecto a fugas en la columna.. TE. En este caso tenemos una DRS baja con lo que podemos presumir que todos los. BI BL. IO. sistemas están trabajando de manera adecuada y se encuentran aptos para llevar a cabo la validación. En la figura N° 01 se evidencia el cromatograma correspondiente a la Aptitud del Sistema mostrando una resolución entre Teofilina anhidra y Cafeína de 3.971% y una asimetría de 1.269, cumpliendo con los parámetros establecidos en la técnica analítica (Anexo 04) La tabla N° 2 muestra el parámetro evaluado, la linealidad, al analizar los resultados obtenidos se pudo constatar que el valor de coeficiente de correlación fue 0,9998; lo. 32. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(42) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. que indica la existencia de una proporcionalidad entre las concentraciones y las respuestas, señalando que el sistema conserva la linealidad esperada. De igual forma, el análisis estadístico de regresión ofreció al método un intercepto el valor de t de Student experimental fue mayor que el t Tabla (172,5014> 2,160) para el p=0,05 % de confianza, por lo que el intercepto difiere significativamente de cero, lo que significa que el método a evaluar no está afectado por un error sistemático. Por otra. IC A. parte, se mostraron pendientes próximas a la unidad, con t de Student muy altas. UI M. (5,6382 > 2,160) y valores de probabilidad (p= 0,05) establecido como límite, por lo. O. Q. que deducimos que el valor observado no fue significativo, el cual indicó la escasa. Y. BI. variación entre la concentración y la respuesta del equipo.1, 2,22. AC. IA. Al observar la Figura Nº 2, nos percatamos que la linealidad determina la región de. RM. la curva respuesta o de cuantificación en que hay relación directa entre la señal. FA. instrumental y la concentración del producto analizado, siendo un método lineal,. DE. estos valores pueden verse afectados si existe un cambio en la valoración del. CA. contenido de principio activo, en la uniformidad de contenido, la velocidad de. IO. TE. disolución así como cuantificación de impurezas.1, 10. BI BL. La exactitud de un procedimiento analítico expresa la proximidad entre el valor que es aceptado convencionalmente como valor verdadero o un valor de referencia y el valor experimental encontrado, como se puede evidenciar en la Tabla Nº 3 el valor de los porcentajes promedio de muestra recuperada de Teofilina Anhidra fue 99.793%, están dentro de los límites de las especificaciones (95.0% - 105.0%) ; al aplicar el Test G de Cochran resultó que el G Experimental es menor que G Tablas (0.6953 < 0.8709) significa que el valor concentración no influyeron en los resultados, la recuperación es satisfactoria.11,18,21 33. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(43) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. La recuperación esperada depende de la matriz de la muestra, del procedimiento de la preparación de la muestra y de la concentración del analito en la misma.1, 11 En el Test estadístico t de Student observado en la tabla Nº 3, al ser T Experimental menor que t Tabla (1.816 < 2.306), refiere a que no existe diferencia significativa entre la recuperación media y el 100%, por lo que la exactitud es correcta según sus 6.13. Este resultado nos condujo a considerar que los. IC A. respectivas especificaciones.. UI M. errores sistemáticos del método no fueron significativos, por lo que puede. O. Q. considerarse exacto.5. BI. La precisión, evaluada como repetibilidad, mostró resultados satisfactorios, pues el. IA. Y. coeficiente de variación determinado fue 0.202 (Ver Tabla N °4). Su estimación se. AC. realiza con el cálculo del coeficiente de variación de las respuestas obtenidas y con. FA. RM. los intervalos de confianza cada nivel de concentración estudiado.1,2. DE. El cálculo coeficiente de variación permite deducir el número de replicados que se. CA. deben realizar en el ensayo para un determinado intervalo de aceptación. 1 Según la. TE. ICH Q2B recomienda introducir los intervalos de confianza en el estudio de 10, 19. Se obtuvo el intervalo de confianza individual de. BI BL. IO. precisión – repetibilidad.14,. 26.780% a 27.049% y un intervalo de confianza de la media de 26.862% a 26.970%; siendo nuestro resultado conforme por encontrarse dentro de la especificación.1, 16. Los resultados de la reproducibilidad se muestran en la tabla N ° 5. Como se observa el coeficiente de variación total (0.4347%) es menor que el 2.0 %. Además se comprobó que no existen diferencias significativas desde el punto de vista estadístico entre los resultados obtenidos para ambos analistas. Con esto se comprobó el grado 34. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(44) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. de concordancia (grado de dispersión) entre una serie de medidas de tomas múltiples a partir de una misma muestra homogénea en las condiciones establecidas en la técnica analítica aplicada.1, 6, 11,19. El objetivo del estudio de la precisión es conocer la variabilidad del método, esta. IC A. variación puede deberse a errores aleatorios inherentes a todo método de ensayo. Los. UI M. factores susceptibles a influir sobre los resultados de un ensayo no pueden ser. Q. siempre controlados como al analista, el equipo instrumental, los reactivos, el. Y. BI. O. tiempo, etc., es por ello la importancia de este ensayo.10, 11, 18. AC. IA. En la tabla N° 06 se muestra la especificidad del método donde se obtuvo como. RM. resultado, que no existían diferencias estadísticamente significativas entre los valores. FA. medios de absorbancia de las sustancias de referencia y las muestras y la del placebo. DE. con dichas sustancias, lo cual demuestra que el placebo no absorbió. CA. significativamente en la longitud de onda de trabajo, pues las absorbancias fueron. TE. valores muy cercanos a cero. Los resultados demostraron la no existencia de. BI BL. IO. sustancias que puedan interferir en el procedimiento.9, 11, 14 La especificidad del método analítico se debe determinar antes de iniciar el estudio de otros parámetros de revalidación, dado que así se conoce en que grado de respuesta del método es únicamente es proporcionada por el analito, sin interferencia de otras sustancias relacionadas con el de una u otra forma, como son los excipientes, impurezas, productos de degradación. El grado de selectividad asociado a un método analítico adquiere mayor relevancia si su finalidad es evaluar la estabilidad del principio activo o de la formula 35. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(45) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. farmacéutica; este es él parámetro debe revisarse en mayores ocasiones pues está vinculado al origen de la muestra, la optimización de la preparación, la especificidad de la medida y las condiciones instrumentales.7, 17, 21 En la Tabla N° 07 se evidencia el límite de detección obtenido fue de 0.0001 ug/mL, lo que nos indica que a esta concentración el analito puede ser detectado por el. IC A. HPLC. 5,7. UI M. El límite de cuantificación obtenido fue de 0.0002 ug/ml, lo que nos indica que a esta. Q. concentración el analito puede ser cuantificado con un grado de confianza. BI. O. previamente establecido (exactitud y precisión) bajo las condiciones experimentales. BI BL. IO. TE. CA. DE. FA. RM. AC. IA. Y. establecidas.. 36. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(46) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. V. CONCLUSIONES. •. La. metodología. analítica. validada. para. la. cuantificación de. Teofilina Anhidra en TYREX 27mg/5mL JARABE por cromatografía líquida de alta performance, cumple con los parámetros de desempeño de la validación, es decir, es una metodología selectiva, lineal, precisa y exacta;. IC A. demostrando así su confiabilidad para poder ser empleada en los laboratorios. BI. Mediante el cumplimiento satisfactorio del proceso de validación, queda. Y. •. O. Q. UI M. de control de calidad.. BI BL. IO. TE. CA. DE. FA. RM. AC. IA. demostrada la aplicabilidad e idoneidad de ésta metodología analítica.. 37. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(47) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. VI.. 1.. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS. Aguilar G, Alcántara A, Chárvel A, García JL, Garzón A, Guerrero ME, et al. Validación de métodos analíticos. México: C.E.S.A; 1992.. 2.. International Conference on Harmonization (ICH) of Technical Requirements. UI M. BI. OMS. Practica adecuadas para la fabricación de productos farmacéuticos en:. Y. 3.. O. Q. analytical procedures.Geneva:ICH-Q2B;1996.. IC A. for the Registration of Pharmaceuticals for Human Use. Validation of. Rampazoo P. Standardisation and validation of analytical methods in the. FA. 4.. RM. AC. IA. 32º informe técnico de la OMS. Ginebra: Harla; 1992.. Pharmacopeial Convention. The united states pharmacopeia usp 29 and the. TE. 5.. CA. DE. pharmaceutical industry. London: Hewlett Packard; 1990. p.807-815.. 6.. BI BL. IO. national formulary NF 30. Ed 34. EE.UU: Rockville; 2012.. Concha AM, Olate MG, Vásquez R, Chicago G, Silva X, Dalidet E et al. Control de estantería de principios activos. Chile: F.C.; 2000.p.15-27.. 7.. Calpena AC, Escribano E, Fernández C. Validación de los métodos analíticos. España: F.C.N.; 2001.p.749-758.. 38. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(48) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 8.. Castillo B, González R. Protocolo de validación de métodos analíticos para la cuantificación de fármacos. Cuba: R.C faro; 1996. p. 43-51.. 9.. Aguilar G, Alcántara A, Chárvel A, García JL, Garzón A, Guerrero ME, et al.Validación de métodos analíticos. México: C.E.S.A; 1992.. Concha AM, Olate MG, Vásquez R, Chicago G, Silva X, Dalidet E et al.. IC A. 10.. Connors K, Amidon G, Kennon L. Chemical stability of pharmaceuticals.. BI. 11.. O. Q. UI M. Control de estantería de principios activos. Chile: F.C.; 2000.p.15-27.. Gernidas S. Analytical procedure and methods validation. Barcelona: G.F.I.;. RM. 12.. AC. IA. Y. New York: Advisory Board; 2006. p.175-198.. DE. FA. 2000.. CA. Analytical Procedures and Methods Validation Chemistry, Manufacturing,. TE. 13.. IO. and Controls Documentation.2004 [Fecha de Acceso 16 de Junio de 2012]. BI BL. URL disponible en: http://scielo.sld.cu/scielo.php?script=sci_arttext&pid. 14.. Desarrollo y validación de metodologías analíticas utilizadas en el análisis de fármacos. medicinales:. materias. primas,. productos. intermedios. y. preparaciones. 2004 [Fecha de Acceso 28 de Mayo de 2012] URL disponible en: http://betafm.ceride.gov.ar/Sitio%20UNL/Proyectos/caid%202000/Desarrollo %20y%20validaci%F3n%20de%20metodolog%EDas.htm 39. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(49) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 15.. Hoffman F. Statistical validation and quantitative determination. Madrid: Basel L. R.; 2000.p.22-28.. 16.. Hortwitz W. Evaluation of analytical methods used for regulation of food and drugs. España: A.Chem.; 1999. p. 56-98.. Recomendaciones armonizadas para la validación de métodos de análisis en. IC A. 17.. http://news.reseau-concept.net/images/oiv_es/Client/. AC. Rubinson K. Análisis instrumental. España: Prentice Hall; 2000.p. 636-675.. RM. 18.. IA. Y. resolution_OENO_ES_2005_08.pdf.. O. Q. en:. BI. disponible. UI M. el laboratorio. París. 2005 Julio [Fecha de Acceso 20 de Junio de 2012] URL. FA. Taylor H, John K. Validation of analytical methods. Madrid: A.L.C.Y.;. Comité de Expertos de la OMS en especificaciones para las preparaciones. TE. 19.. CA. DE. 1993.(vol 55).. BI BL. IO. farmacéuticas. 31º Informe Técnico de la OMS. Ginebra: OMS; 1990.. 20.. Analytical Procedures and Methods Validation Chemistry, Manufacturing, and Controls Documentation.2004 [Fecha de Acceso 16 de Junio de 2012] URL disponible en: http://scielo.sld.cu/scielo.php?script=sci_arttext&pid. 21.. Instituto Nacional de Salud. Estandarización de metodologías analíticas en el laboratorio de salud pública. 2003 [ Fecha de Acceso 05 de Mayo de 2012]. 40. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(50) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. URL. disponible. en:. http://www.fepafem.org.ve/investigaciones/investigaciones2006/art4.htm. 22.. Fernández, A.; Serret, Y.; Morales, I. y Jiménez, E.. Centro de investigación y desarrollo de medicamentos. Validación de los métodos analíticos para la identificación y cuantificación del dextrometorfano jarabe. 2002 [Fecha de 20. Marzo. de. 2012]. URL. disponible. IC A. Acceso. en:. Validación de métodos analíticos. 2000 [Fecha de Acceso 20 de Junio de. BI. 23.. O. Q. UI M. http://www.bvs.sld.cu/revistas/far/vol36_1_02/far04102.htm. Introducción a la metodología analítica. 2002 [Fecha de Acceso 28 de Mayo 2012]. URL. disponible. en:. DE. FA. de. RM. 24.. AC. IA. Y. 2012] URL disponible en: http://gonza.us.es/spanish/validar.htm. Validación de métodos de laboratorio clínico. 2003 [Fecha de Acceso 28 de. IO. 25.. TE. CA. http://www.ugr.es/~clinares/webfarm/transparencias1.ppt.. BI BL. Junio de 2012] URL disponible en: http://www.labnutricion.cl/validacion.htm. 26.. Aguilar G, Alcántara A, Chárvel A, García JL, Garzón A, Guerrero ME, et al.Validación de métodos analíticos. México: C.E.S.A; 1992.. 27.. Bermejo M. Química analítica general, cuantitativa e instrumental. Madrid:Paraninfo S. A.; 1991.(vol 2). 41. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(51) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 28.. Calpena AC, Escribano E, Fernández C. Validación de los métodos analíticos.España: F.C.N.; 2001.p.749-758.. 29.. Castillo B, González R. Protocolo de validación de métodos analíticos para la. BI BL. IO. TE. CA. DE. FA. RM. AC. IA. Y. BI. O. Q. UI M. IC A. cuantificación de fármacos. Cuba: R.C faro; 1996. p. 43-51.. 42. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.