Validación de las técnicas Blue Star Forensic y Luminol para detección de sangre en manchas de interés criminalístico en el laboratorio, Trujillo, 2015

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(1)BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI. EN CI. AS. BI O. LO. G. IC AS. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(2) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Dr. ORLANDO GONZALES NIEVES. G. IC AS. RECTOR. LO. Dr. RUBÉN VERA VÉLIZ. AS. BI O. VICERRECTOR ACADÉMICO. Dr. WEYDER PORTOCARRERO CÁRDENAS. CI. EN CI. VICERRECTOR DE INVESTIGACIÓN. DE. Dr. JOSÉ MOSTACERO LEÓN. TE. CA. DECANO DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS. Dr. FREDDY PELÁEZ PELÁEZ. BIOLÓGICAS. BI. BL. IO. DIRECTOR DE LA ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE CIENCIAS. ii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(3) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. PRESENTACIÓN. IC AS. Señores miembros de jurado:. G. En cumplimiento con las disposiciones del reglamento interno vigente de grados y títulos. LO. de la Escuela Académico Profesional de Ciencias Biológicas, Facultad de Ciencias. BI O. Biológicas de la Universidad Nacional de Trujillo, me es honroso someter a vuestra consideración y elevado criterio, el presente trabajo de investigación titulado “Validación. AS. de las técnicas Blue Star Forensic y Luminol para detección de sangre en manchas de. EN CI. interés criminalístico en el laboratorio, Trujillo, 2015”.. Con el cual cumplo uno de los requisitos indispensables para optar el título profesional de. Trujillo, octubre del 2015.. IO. TE. CA. DE. CI. Biólogo.. Br. Valery Roxana Sarmiento Yengle. BI. BL. __________________________________________________. iii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(4) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. G. IC AS. JURADADO DICTAMINADOR. EN CI. AS. PRESIDENTE. BI O. LO. _____________________________________________ Dr. SANTOS ENRIQUE PADILLA SAGÁSTEGUI. SECRETARIO. BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI. _____________________________________________ Dr. JOSÉ ANTONIO SALDAÑA JIMÉNEZ. ______________________________________________ Dr. CARLOS HELI QUIJANO JARA VOCAL. iv Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(5) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DEL ASESOR. IC AS. El que suscribe, profesor asesor de la presente tesis titulada: “Validación de las técnicas Blue Star Forensic y Luminol para detección de sangre en manchas de interés. LO. G. criminalístico en el laboratorio, Trujillo, 2015”.. BI O. CERTIFICA:. AS. Que la investigación ha sido desarrollada en conformidad con los objetivos propuestos y las orientaciones pertinentes; por tal razón el informe ha sido redactado y revisado con mi. EN CI. asesoramiento, acogiendo las observaciones y sugerencias alcanzadas. Por lo tanto autorizo a la Br. Valery Roxana Sarmiento Yengle a continuar con los trámites. _______________________________ Dr. Santos Enrique Padilla Sagástegui ASESOR. BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI. correspondientes.. v Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(6) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. APROBACIÓN. IC AS. Los profesores que suscriben, miembros del jurado dictaminador, declaran que la presente tesis titulada: Validación de las técnicas Blue Star Forensic y Luminol para detección de. G. sangre en manchas de interés criminalístico en el laboratorio, Trujillo, 2015, ha cumplido. BI O. LO. con los requerimientos formales y fundamentales, siendo aprobada por UNANIMIDAD.. AS. Trujillo, octubre del 2015.. EN CI. _____________________________________________ Dr. SANTOS ENRIQUE PADILLA SAGÁSTEGUI. DE. CI. PRESIDENTE. SECRETARIO. BI. BL. IO. TE. CA. _____________________________________________ Dr. JOSÉ ANTONIO SALDAÑA JIMÉNEZ. ______________________________________________ Mg. CARLOS HELÍ QUIJANO JARA VOCAL. vi Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(7) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. IC AS. DEDICATORIA. BI O. LO. G. A Dios todo poderoso por haberme dado la vida, por guiarme, cuidarme, bendecirme y darme la fortaleza necesaria día a día para seguir adelante y poder cumplir con todos mis objetivos trazados.. DE. CI. EN CI. AS. A mi padre Alex Sarmiento, por su amor y compromiso hacia mis estudios y por hacer de mí una profesional destacada, siendo mí apoyo incondicional en cada momento.. BI. BL. IO. TE. CA. A mi madre Ysabel, por su amor, motivación y por hacer de mí una mejor persona con valores humanos para servir a la sociedad.. A mis hermanas Catherine y Patricia, quienes están en los momentos más difíciles y alegres de mi vida brindándome su apoyo para superar las adversidades de la vida y motivarme profesionalmente.. vii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(8) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. IC AS. AGRADECIMIENTO. BI O. LO. G. A la Universidad Nacional de Trujillo porque a través de sus docentes de la Facultad de Ciencias Biológicas, me transmitieron enseñanzas y conocimientos en diferentes áreas durante mi vida universitaria que me ayudan a ser una gran profesional.. EN CI. AS. Al Dr. Enrique Padilla Sagástegui, por su asesoramiento, dirección y apoyo incondicional, impartiéndome sus conocimientos, deseándome e incentivándome a seguir creciendo e investigando.. A Carlos, por su cariño y motivación, por estar siempre a mi lado apoyándome constantemente a cumplir con mis metas y objetivos en mi vida profesional.. BL. IO. TE. CA. DE. CI. Al Departamento de Criminalística – La Libertad, quien pudo hacer posible la realización de la presente tesis, a Capitán Sarmiento y a Superior Cabrera, quienes me asesoraron y apoyaron en todo momento con sus conocimientos y experiencias.. BI. A mis amigos Albert, Elvia y Giancarlos, asimismo familiares quienes en todo momento estuvieron brindándome su apoyo y celebrando mis logros como si fueran los suyos.. viii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(9) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. ÍNDICE. PRESENTACIÓN. iii. LO. G. MIEMBROS DEL JURADO. BI O. DEL ASESOR APROBACIÓN. AS. DEDICATORIA. EN CI. AGRADECIMIENTO ÍNDICE. CI. RESUMEN. CA. DE. ABSTRACT INTRODUCCIÓN. ii. IC AS. AUTORIDADES DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO. v vi vii viii ix x xi 1 10. RESULTADOS. 20. IO. TE. MATERIAL Y MÉTODOS. iv. 25. BL. DISCUSIÓN. BI. CONCLUSIONES. 30. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS. 31. ANEXOS. 37. ix Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(10) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. IC AS. RESUMEN. El estudio del tipo de interacción involucrada en la formación de luz azul brillante o quimioluminiscencia se desarrolló en condiciones de laboratorio, utilizando material. LO. G. biológico y productos químicos en condiciones de manchas sobre diferentes sustratos siguiendo la metodología de Fernanda y Sorieth, obteniendo como resultados valores de. BI O. sensibilidad (1,000 y 0,9773), especificidad (0,9811 y 0,9107), Valor Predictivo Positivo (0,9792 y 0,8958), Valor Predictivo Negativo (1,000 y 0,9808) e Índice de concordancia. AS. entre los observadores (0,99 y 0,94) para las técnicas Blue Star Forensic y Luminol. EN CI. respectivamente con un Índice de Kappa de 0,9297, llegando a concluir que las técnicas Blue Star Forensic y Luminol tiene alta validez en la detección de manchas de sangre que. CI. pueden ser usadas en procesos criminalísticos ya que los criterios de sensibilidad y especificidad tienen valor de concordancia casi perfecta tomando como referencia la. DE. escala del índice de Kappa, por lo tanto ambas tienen reacción positiva solo en células. CA. sanguíneas siendo indiferente a los extractos vegetales y otros fluidos biológicos puestos en diferentes sustratos o soportes sin influencia en la reacción, no obstante, se determinó. BL. IO. TE. que la técnica Blue Star Forensic es más sensible y específica que la técnica de Luminol.. BI. PALABRAS CLAVES: quimioluminiscencia, validación, Blue Star Forensic y Luminol.. x Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(11) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. IC AS. ABSTRACT. The study of the type of interaction involved in the formation of bright blue light or chemiluminescence developed under laboratory conditions, using biological material and. LO. G. chemicals in terms of spots on different substrates using the methodology of Fernanda and Sorieth, obtaining as results sensitivity values (1.000 and 0.9773), specificity (0.9811 and. BI O. 0.9107), positive predictive value (0.9792 and 0.8958), negative predictive value (1.000 and 0.9808) and Index of agreement between observers ( 0.99 and 0.94) for technical Blue. AS. Star Forensic Luminol respectively and a Kappa index of 0.9297, reaching the conclusion. EN CI. that the Blue Star Forensic techniques and have high validity Luminol to detect blood stains that may It is used in criminology processes and that the criteria for sensitivity and. CI. specificity are worth almost perfect agreement by reference to the scale of Kappa therefore. DE. both have positive reaction only in blood cells remain indifferent to the plant extracts and other biological fluids positions on different substrates or substrates without influence on. CA. the reaction, however, it was determined that Blue Star Forensic technique is more. TE. sensitive and specific than Luminol technique.. BI. BL. IO. KEYWORDS: chemiluminescence, validation, and Blue Star Forensic Luminol.. xi Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(12) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. I. INTRODUCCIÓN. IC AS. Entre las investigaciones mencionadas en la actualidad están las relacionadas con los procesos forenses por el aumento de casos imprevistos contra. G. la humanidad, ya sea un crimen, accidente, desastre natural, conflicto armado o de. LO. otro tipo, dejando vestigios en la “escena del delito” o el lugar en el cual se ha. BI O. producido el incidente conteniendo rastros de las actividades efectuadas (Almog, y col., 2009); no obstante estas investigaciones requieren la aplicación de métodos y. AS. técnicas idóneas que permitan determinar o confirmar la existencia y. EN CI. reconstrucción del acto “delictivo” y tener la posibilidad de la identificación y la intervención de los hechos para su esclarecimiento (Silveyra, 2006).. CI. Los casos más frecuentes en la aplicación de la investigación forense son los. DE. homicidios, conocidos como delito, que consiste en una acción u omisión,. CA. mediante el cual se priva de la vida a otra persona, ya sea dolosa o culposamente, que en muchos casos, las evidencias son barridas y limpiadas de la escena, o los. TE. causantes o victimarios se valen de cualquier tipo de sustancias químicas. IO. (solventes orgánicos, inorgánicos o detergentes) para limpiar o borrar de manera. BL. exhaustiva la evidencia (Shanan, y col., 2007); de tal manera que los profesionales. BI. en estas investigaciones o “peritos” llegan a la escena del hecho a localizar e. identificar los indicios y evidencias que puedan encontrarse en dicha escena, es posible que las pruebas más pertinentes e importantes no resulten evidentes ni directamente perceptibles a simple vista, por lo que es necesario la inspección con 1. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(13) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. diferentes técnicas y procedimientos básicos para detectar pruebas materiales, como por ejemplo, el uso de fuentes de luz manuales (detectar pisadas), polvos. IC AS. diversos (revelan huellas dactilares) o el uso de productos químicos como luminol. G. y blue star forensic para visualizar rastros de sangre (Almog, y col., 2009).. LO. De modo tradicional, en las escenas delictuales, la evidencia de vital. BI O. importancia para lograr el esclarecimiento y una condena al culpable es la hematológica, por tal motivo, es imprescindible que los investigadores cuenten. AS. con el conocimiento de las técnicas más eficaces y convenientes para recogerlas,. EN CI. ya que existen casos en que las evidencias sanguíneas presentes en la escena de los hechos, se han deteriorado, ya sea por el lapso de tiempo, por condiciones ambientales (temperatura, humedad y polvo) o por fines particulares del. DE. CI. victimario (Villarreal-Sotelo, y col., 2009).. CA. En este sentido, cuando los peritos recogen las evidencias “supuestamente” hematológicas en la escena, se adopta la decisión de llevar a cabo otros exámenes. TE. en el laboratorio, mediante métodos de orientación, confirmación, especie,. IO. individualidad (grupos sanguíneos y ADN) y otros como la antigüedad de las. BL. muestras, el lugar de procedencia, forma y tamaño de la manchas (Villanueva,. BI. 1998) y para estos casos, se requiere un alto conocimiento de los métodos, puesto que una elección inadecuada de la técnica o una interpretación errónea del resultado, puede hacer perder el valor de un elemento de prueba que, finalmente puede ser trascendental (Monteiro, 2010). Asimismo, estos métodos facilitan al 2. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(14) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. profesional forense la obtención de datos y resultados verdaderos, por ser fáciles de usar, no requiriendo condiciones inalcanzables para aportar información. IC AS. valiosa por los buenos resultados analíticos, los cuales ayudan a la investigación, facilitan el desarrollo del proceso pericial y la rápida acción por parte de las. G. autoridades competentes (Almog, y col., 2009), por tal motivo es fundamental que. LO. estos métodos sean estudiados y validados para la obtención de. BI O. confiables, como lo sostiene Monteiro (2010).. resultados. AS. La validación consiste en establecer una evidencia documentada que. EN CI. permita asegurar la consistencia de un procedimiento o técnica, a partir del cual se pueda obtener un resultado que satisfaga de manera consistente las especificaciones de calidad, permitiendo hacer fundamentaciones acertadas y. CI. apropiadas para brindar información acerca de la precisión y exactitud inherente. DE. del resultado final (Desain, 1992), por lo tanto con la validación de las técnicas de. CA. luminol y blue star forensic, se pretende aportar pruebas que han sido sometidas a diferentes condiciones, las cuales permiten alcanzar resultados confiables, de alta. TE. sensibilidad, alta especificidad y con altos parámetros de calidad que soporten la. BI. BL. IO. más dura controversia jurídica en los estrados judiciales (Monteiro, 2010).. Dada la información bibliográfica que antecede, existen algunas. experiencias tales como la prueba de quimioluminiscencia descubierta accidentalmente por Albrecht (1928) con el nombre de 5-amino-2,3-dihidro-1,4ftalazinadiona, quien publicó su obra “La quimioluminiscencia del Luminol”, 3. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(15) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. indicando que existe una sustancia que producía una emisión de luz tenue azul brillante cuando era adicionado peróxido de hidrógeno en presencia de un. IC AS. catalizador como el cobre, hierro y cobalto, cuya prueba fue confirmada con la. propuesta de Huntress, y col., (1934) y publicado en el artículo "The oxidation of ("Luminol"). as. a. lecture. demonstration. G. 3-aminophthalhydrazide. of. LO. chemiluminescence," en el Journal of the American Chemical Society; pero. BI O. Specht (1937), científico forense del Instituto de Medicina Legal y Criminalística de Jena, realizó los primeros estudios para la aplicación del luminol en la escena. AS. del delito, basando sus estudios en distintos test para detectar sangre sobre. EN CI. diferentes superficies; encontrando una gran efectividad reactiva, a pesar de que habían sido modificadas y limpiadas físicamente.. CI. En 1951, el luminol ya se aplicaba en distintos casos como herramientas de. DE. refuerzo para la investigación criminal, por lo que fue reconfigurado para una. CA. mayor efectividad y mejora en su utilización y resultados; utilizando la molécula descrita por Albrecht, pero adicionándole carbonato de sodio, perborato de sodio y. TE. agua destilada, con la finalidad de detectar pequeñas cantidades de sangre, no. IO. obstante el carbonato de sodio producía una reacción lenta y poca luminosidad;. BL. por otra parte, al perborato de sodio se volvía muy inestable y toxica (Dilbeck,. BI. 2006), por lo que Weber en 1966 modificó la fórmula, reemplazando el perborato de sodio por peróxido de hidrogeno en un medio hidratado de agua destilada, dando como resultado un Luminol termolábil y con un tiempo de duración muy. 4 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(16) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. corto, pero que ofrecía una reacción luminosa que se podía fotografiar en total. IC AS. oscuridad (Buendía, 2008).. Asimismo, en España se realizaron investigaciones sobre la sensibilidad del. G. luminol para detectar machas de sangre lavadas y aparentemente invisibles a. LO. simple vista, al finalizar la investigación demostraron que el luminol es muy. BI O. eficaz para la detección de sangre en manchas que han sido lavadas hasta diez veces, además que la extracción y amplificación del ADN se puede dar con. AS. muestras de sangre que han sido lavadas hasta tres veces (Castelló y Feucht,. EN CI. 2002).. En este contexto, se estudiaron las técnicas de orientación que permiten la. CI. detección previa de la muestra a analizar, utilizando Bencidina, Luminol, O-. DE. Toluidina y Fenolftaleína, sobre diferentes muestras contaminadas con diversas. CA. sustancias, llegando a concluir que existían errores en los resultados de algunas técnicas debido a la contaminación de las muestras, arrojando falsos positivos. TE. para las pruebas de Bencidina, O-Toluidina y Fenolftaleína y verdaderos positivos. IO. y negativos para la prueba de luminol, destacando la sensibilidad y especificidad. BI. BL. de la técnica (Negre, y col.,2003).. Siguiendo con los estudios en estos temas, en Brasil utilizaron pruebas de Bencidina, Luminol, O-Toluidina y Fenolftaleína para determinar sangre en diferentes manchas elaboradas, empleando variantes de tiempo y almacenamiento 5. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(17) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. de la muestra con doce meses de antigüedad, obteniendo resultados poco sensibles para la técnica de Fenolftaleína, poco específicos para la técnica de O-Toluidina y. IC AS. resultados fiables de sensibilidad y especificidad para las técnicas de Bencidina y. G. luminol (Castello, y col., 2004).. LO. Asimismo en el 2005, se realizaron investigaciones para evaluar pruebas. BI O. presuntivas de luminol, piramidón y fenolftaleína como confirmatorias de Absorción – Elución y Aglutinación, con la finalidad de determinar su. AS. sensibilidad e interferencia al ser sometidas a diferentes soportes y condiciones. EN CI. físicas, demostrando que las pruebas presuntivas tenían mayor sensibilidad respecto a las pruebas confirmatorias, ya que estas requieren de muestras que no hayan sido lavadas o modificadas (Villegas, y col., 2005); no obstante la prueba. CI. presuntiva de luminol era toxico y destruía el ADN, por lo tanto la compañía. DE. “Blue Star”, encomendó crear una nueva fórmula a base de Luminol que elimine. CA. estos inconvenientes con lo que se descubrió la fórmula definitiva de luminol y le llamó blue star forensic, cuyos estudios de sus propiedades revelaron que su. TE. importancia reside en la reacción de quimioluminiscencia que da con peróxidos en. IO. presencia de complejos de hierro como catalizadores y conserva el ácido. BL. desoxirribonucleico (ADN) sin alterarlo ni modificarlo, además que este no. BI. presentaba riesgos para la salud humana (Blum, y col., 2006).. A partir del descubrimiento del blue star forensic se comenzaron a realizar nuevas investigaciones, como las pruebas presuntivas de sangre: Luminol, Verde 6 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(18) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. de Leucomalaquita, Fenolftaleína, Hemastix, Hemident y Bluestar, aplicados en manchas sometidas a diluciones con productos químicos de limpieza y fluidos. IC AS. corporales demostrando que verde de leucomalaquita era específico, pero su. sensibilidad era 10 veces menor al luminol y destruía el ADN, fenolftaleína tenía. G. sensibilidad a la mayoría de las pruebas, pero era inespecífica y reducía la. LO. cantidad de ADN recuperable; en cambio, Hemastix no eran muy específico y. BI O. Hemident era específico y sensible, pero destruía el ADN, mientras que luminol y bluestar eran las mejores pruebas de sangre presuntiva, ya que tenían la mayor. AS. sensibilidad y especificidad y no destruían el ADN, no obstante su única. EN CI. desventaja era que debían ser usados con muy poca luz u oscuridad total (Webb, 2006).. CI. A través del tiempo, se desarrollaron otros estudios para evaluar los. DE. reactivos frente al análisis del ADN en manchas de sangre con las técnicas de trozos de tela y alfombras. CA. luminol, fluoresceína y blue star forensic sobre. manchadas con sangre y rociadas con los reactivos para el análisis por. TE. polimorfismo de repeticiones cortas en tándem, demostrando que una vez. IO. completo los perfiles de los 13 principales Sistemas de Índice Combinado de. BL. ADN por polimorfismo de repeticiones cortas en tándem se obtenían hisopos de. BI. cada trozo de alfombra,. concluyendo que luminol, fluoresceína y blue star. forensic no inhiben el análisis de polimorfismo de repeticiones cortas en tándem (Jakovich, 2007).. 7 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(19) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. En Colombia se realizaron estudios de validación de las técnicas de Blue star Forensic Free y Trevenon Roland-Piramidon, utilizando cien muestras con. IC AS. diferentes sustancias colocadas en diferentes tipos de telas concluyendo que las técnicas eran altamente sensibles y medianamente específicas para la. LO. G. determinación de manchas de sangre (Arbeláez y Ríos, 2009).. BI O. En Perú se utilizan las técnicas de luminol y blue star forensic en escenas delictuales para detectar manchas de sangre que no son apreciables al ojo humano,. AS. con la sospecha que haber sido limpiadas, lavadas, pintadas o modificadas para. EN CI. beneficios particulares, o en todo caso, confundidas con manchas coloreadas de diferentes origen, que pueden ser pigmentos naturales de otros seres vivos y que a simple vista pueden confundirse con sangre, como es el caso de los carotenoides,. CI. en sus variaciones anaranjado (caroteno), rojo (licopeno) y amarillo (luteína), que. DE. se les encuentra en raíces, tallos, frutos, flores y hojas de los vegetales, que. CA. posiblemente resulte una reacción positiva con luminol, permitiendo su visualización por fluorescencia; sin embargo solo se procesan como acciones de. TE. rutina las manchas de sangre, sin reportes oficiales a la sociedad, siendo esto. IO. fundamental por su gran importancia en el esclarecimiento de delitos, por tal. BL. motivo se hace imprescindible la validación de las técnicas de blue star forensic y. BI. luminol con la finalidad de aportar al sistema judicial evidencias que sean realizadas con técnicas probadas, de alta sensibilidad, con altos parámetros de calidad que soporten la más dura controversia judicial permitiendo la rápida acción por partes de las autoridades competentes, es por ello y dado los antecedentes con 8. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(20) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. la información bibliográfica nos planteamos el objetivo de validar las técnicas blue star forensic y luminol para la detección de manchas de sangre en condiciones. IC AS. comparativas con otros fluidos como orina, semen y saliva, además de extractos del bulbo de Beta vulgaris “beterraga”, Daucus carota “zanahoria” y Raphanus. G. sativus “rabanito” y frutos de Fragaria vesca “fresa”, Solanum lycopersicum. LO. “tomate” y Vitis vinífera “uva”, por tener pigmentos de color rojo, con tendencia a. BI O. confundirse con manchas de sangre de interés criminalístico con la determinación de parámetros cualitativos de sensibilidad, especificidad, valor predictivo positivo,. BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI. EN CI. AS. valor predictivo negativo e índice de concordancia para ambas técnicas.. 9 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(21) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. II. MATERIAL Y METODOS. IC AS. 2.1. Universo Diferentes tipos de manchas, con sangre o sin sangre, tratadas o no tratadas.. G. 2.2. Muestra. LO. Las muestras estuvieron constituidas por manchas de sangre humana por contener. BI O. hemoglobina (Anexo 1), obtenidas del Hospital de Sanidad de la Policía Nacional de Perú, extraída por punción venosa del brazo de diez voluntarios mayores de 18. AS. años clínicamente sanos, dispuestas en tubos de ensayo 1x18 con anticoagulante Acido Etilendiaminotetraácetico (EDTA) y conservada a temperatura ambiente en. EN CI. gradillas de aluminio durante una hora, manchas de sangre de origen animal (vacuno, porcino, ovino ) obtenidas del Camal El Porvenir en tubos de ensayo. CI. etiquetados conteniendo anticoagulante EDTA, manchas de fluidos biológicos de. DE. origen humano (orina, saliva y semen), donados por diez voluntarios mayores de 18 años clínicamente sanos, informados previamente de la investigación y recolectados. CA. en frascos de vidrio etiquetados y esterilizados (Anexo 2 y 3), asimismo, manchas. TE. de extractos vegetales por sus pigmentos rojizos (Anexo 4), en buen estado de conservación procesados en un extractor (Anexo 5) obtenidos de los mercados. IO. públicos de Trujillo depositados en frascos de vidrio estériles y por ultimo manchas. BL. de productos químicos seleccionados según su condición física y sus fechas de. BI. vencimiento (Anexo 6), todas procesadas en el Laboratorio de Biología Forense de. la Policía Nacional del Perú – Trujillo, como se detalla en la Figura N° 1.. 10 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(22) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 2.3. Selección de muestras y sustratos El material biológicos de origen humano, animal, vegetal que presentan aspecto. IC AS. coloreados en la medula del bulbo de Beta vulgaris, Daucus carota, Raphanus sativus y los frutos de Fragaria vesca, Solanum lycopersicum y Vitis vinífera;. G. asimismo productos químicos como lugol, café, coca cola y vino tinto, fueron. LO. seleccionados por poseer en su estructura interna o externa elementos capaces de. BI O. activar la reacción de quimioluminiscencia, los mismos que fueron distribuidos en sustratos de diferente naturaleza mayormente encontradas en escenas delictuales. AS. (piso no pulido, alfombra, tierra y algodón) en donde fueron dispuestos por un. EN CI. tiempo aproximado de cuatro a cinco horas hasta la evaporación del agua y el tratamiento con los reactivos blue star forensic y luminol en condiciones de oscuridad (Gutiérrez y col., 2003). En este contexto las manchas fueron sometidas a. CI. diferentes condiciones físicas (temperatura y lavado). y sustancias químicas. DE. (reactivos) que pudieran interferir en la reacción de quimioluminiscencia como se. BI. BL. IO. TE. CA. detalla en la Figura N°2, ilustrado en los Anexos 7 – 14.. 11 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(23) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. G IC AS. SANGRE. Sangre Humana. BI. O. LO. Productos Biológicos. Extractos Vegetales. Sangre Animal. UNIVERSO. MUESTRA. BL IO. TE. CA. DE. CI. EN. CI. AS. Fluidos Corporales. BI. Figura N° 1: Representación esquemática de la distribución de los productos biológicos desde su origen para obtener el universo muestral y las muestras correspondientes. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(24) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. G IC AS. MANCHAS DE. BI. O. LO. Tratamiento. Temperatura. Reactivos. AS. Lavado. 10 veces. 15 veces. 3H. 1. 3. H. (2). H. H. (2). (2). BL IO. 1. TE. CA. DE. 5 veces. CI. EN. CI. T°. (2). (2). (2). 1ml. 1ml. 1g. 1g. 1. (2). (2). (2). (2). (2). (2). BI. Figura N° 2: Representación esquemática del tratamiento físico y químico de las manchas de sangre.. 12 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(25) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 2.4. Preparación de diluciones de sangre y reactivos 2.4.1. Sangre. IC AS. Se prepararon diluciones de sangre con agua destilada en probetas de 100. ml, utilizando pipetas de 1 mililitro (1/100), obteniendo concentraciones de. G. 1/100; 1/2; 1/4; 1/8; 1/16; 1/32; 1/64 y 1/128 (Anexo 15), las que fueron. LO. agregadas mediante goteo estático a telas de algodón blanco estéril de dos. BI O. centímetros cuadrados colocadas sobre láminas excavadas de porcelana marcadas según su concentración, se dejó secar en cabina de flujo laminar. AS. para su posterior análisis (Tabla N° 1).. EN CI. Tabla N°1: Diluciones elaboradas para la preparación manchas de sangre y evaluación del comportamiento de los reactivos frente a cada concentración de sangre.. 1/100. 1 1. Volumen de agua destilada (ml) 99 ml. 1/2. 50 ml de dilución 1/100. 50 ml. 1/4. 50 ml de dilución 1/2. 50 ml. 1/8. 50 ml de dilución 1/4. 50 ml. 1/16. 50 ml de dilución 1/8. 50 ml. 1/32. 50 ml de dilución 1/16. 50 ml. 1. 1/64. 50 ml de dilución 1/32. 50 ml. 1/128. 50 ml de dilución 1/64. 50 ml. CA. DE. 1 ml de sangre concentrada. BI. 1. CI. N° Diluciones de Sangre Volumen de dilución (ml) muestra. IO. 1. TE. 1. BL. 1. 1. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(26) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 2.4.2. Reactivos. IC AS. Blue Star Forensic: Dos tabletas de blue star forensic (uno de color beige y un comprimido blanco) fueron sacados de sus bolsas selladas y se. G. añadieron a 175 ml de agua destilada en una botella de spray, la solución se. LO. agitó suavemente por balanceo de la botella durante aproximadamente 5. BI O. minutos hasta que se observó la disolución (Anexo 16).. AS. Luminol: Diez gramos de carbonato de sodio y 0,2 g de luminol. EN CI. premezclado con 180 ml de agua destilada fueron agregados a 180 ml de peróxido de hidrógeno al 3%. Después de mezclar la solución se colocó en. CI. una botella de spray para su posterior uso (Anexo 17).. Tratamiento de muestras. DE. 2.5.. CA. Una vez colocadas las manchas de diferente origen en los sustratos y asignadas con un código numérico en forma aleatoria (Anexo 18 y 19) mantenidos ocultos. TE. hasta el final de la investigación (para evitar sesgo en los datos), se dejó secar a. IO. temperatura ambiente y analizó en oscuridad aplicando los reactivos (blue star. BL. forensic y luminol) en presencia de los controles (control positivo, muestra de. BI. sangre humana conocida y control negativo, agua destilada) para verificar su efectividad determinando la presencia o ausencia de la quimioluminiscencia (Anexo 20), dando un valor positivo para las muestras que al agregar el reactivo. 14 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(27) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. emitían una luz azul brillante en la oscuridad inmediatamente y hasta por un minuto después de agregado el reactivo, mientras que negativo para las muestras. IC AS. que al agregar el reactivo presentaban ausencia de la luz azul brillante, hasta un minuto después de agregar el reactivo (Vidotto y Queiroz, 2011). Análisis estadístico. G. 2.6.. LO. Para la interpretación de los resultados cualitativos obtenidos, siguiendo la. BI O. metodología de Cueva y Alejo (2010), se emplearon los análisis estadísticos de sensibilidad, especificidad, valor predictivo positivo, valor predictivo negativo,. AS. índice de concordancia, índice de kappa y límite de detección de cada técnica. EN CI. expresados en fórmulas matemáticas, para conocer el valor numérico de sus atributos empleando una tabla de contingencia tabulados como:  Verdaderos positivos (a): muestras con sangre que arrojan un resultado. CI. positivo.. DE.  Falsos positivos (b): muestras con sangre que arrojan un resultado negativo.. CA.  Falsos negativos (c): muestras sin sangre que arrojan un resultado positivo.  Verdaderos negativos (d): muestras sin sangre que arrojan un resultado. BI. BL. IO. TE. negativo.. 15 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(28) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Tabla 4: Tabla de contingencia para resultados positivos y negativo de acuerdo a cada muestra.. IC AS. Muestras Con sangre. No sangre. (humano y animales). (vegetales, fluidos y. Quimioluminiscencia. Totales. Verdaderos positivos. Falsos positivos. LO. Positiva. G. productos químicos). a+c. Falsos negativos. Verdaderos negativos. Negativo. (c). (d). b+d. EN CI. AS. Negativa. (b). BI O. (a). Positivos. Sensibilidad: Proporción de los individuos clasificados como positivos identificándose correctamente por la prueba en estudio.. CI. verdaderos positivos (a) total de casos positivos (a + c). DE. S=. CA. Especificidad: Proporción de los individuos clasificados como negativos. E =. verdaderos negativos (d) total de casos negativos (d + b). BI. BL. IO. TE. identificándose correctamente por la prueba en estudio.. Valor Predictivo Positivo: Representa la probabilidad de que alguien con un resultado positivo en la prueba en estudio, tenga la característica de interés.. 16 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(29) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. verdaderos positivos (a) verdaderos positivos + falsos positivos (a + b). IC AS. VPP =. Valor Predictivo Negativo: Representa la probabilidad de que alguien con un. LO. verdaderos negativos (d) verdaderos negativos + falsos negativos (d + c). BI O. VPN =. G. resultado negativo en la prueba en estudio no tenga la característica de interés.. AS. Índice de concordancia (PC): Procedimiento para determinar la concordancia entre observadores o intraobservador, consiste en comparar las opiniones, juicios. EN CI. o resultados emitidos u obtenidos por dos personas diferentes o por la misma. PC =. A + D A+B+C+D. CA. DE. CI. persona en dos ocasiones diferentes, donde:.  A: Resultado de la suma de verdaderos positivos para todos los analistas que. TE. participan en la investigación.. IO.  B: Resultado de la suma de los falsos positivos para todos los analistas que. BL. participan en la investigación.. BI.  C: Resultado de la suma de los falsos negativos para todos los analistas que participan en la investigación.. 17 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(30) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo.  D: Resultado de la suma de los verdaderos negativos para todos los analistas. IC AS. que participan en la investigación.. Índice de Kappa: Medida estadística que ajusta el afecto del azar (CA) en la. G. proporción de la concordancia observada (CO) para elementos cualitativos,. LO. mejora la estimación del porcentaje de concordancia ya que descuenta la. (𝑅 × 𝑇) + (𝑆 × 𝑈) (𝑉 × V). CO =. a+d V. EN CI. AS. CA =. BI O. proporción de la misma que puede ocurrir por azar, donde:. CO − CA 1 − CA. CA. DE. CI. k=.  CA: Medida estadística que ajusta el afecto de la concordancia al azar.. TE.  CO: Medida estadística que ajusta el afecto de la concordancia observada.. IO.  R: Sumatoria de verdaderos positivos con falsos negativos de todos los analistas. BL. que participan en la investigación.. BI.  S: Sumatoria de falsos positivos con verdaderos negativos de todos los analistas que participan en la investigación.. 18 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(31) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo.  T: Sumatoria de verdaderos positivos con falsos positivos de todos los analistas que participan en la investigación.. IC AS.  U: Sumatoria de falsos negativos con verdaderos negativos de todos los analistas que participan en la investigación.. G.  V: Sumatoria de verdaderos positivos, falsos positivos, falsos negativos y. BI O. LO. verdaderos negativos de todos los analistas que participan en la investigación.. Tabla N° 5: Escala de interpretación de los valores del índice de concordancia y el. <0 0 – 0,20. CI. 0,21 – 0,40. Fuerza de Concordancia. EN CI. Valor de Kappa. AS. índice de Kappa de acuerdo a Cueva y Alejo (2010).. Pobre Leve Baja. Moderada. 0,61 – 0,80. Buena. 0,81 – 1,0. Casi perfecta. BI. BL. IO. TE. CA. DE. 0,41 – 0,60. 19 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(32) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. III.. RESULTADOS. IC AS. Los resultados se presentan en cuatro tablas, numeradas de 6 a 9; de las cuales la N° 6, refiere las calificaciones de positivo y negativo con los reactivos blue star forensic y luminol en cada uno de los soportes, la N° 7 refiere el número de resultados de dos. G. observadores anónimos con los reactivos blue star forensic y luminol, la N° 8 los. LO. resultados cualitativos utilizando el reactivo luminol y la N°9, los valores del análisis. BI O. estadístico para sensibilidad, especificidad, valor predictivo positivo, valor predictivo. AS. negativo, índice de concordancia e índice de kappa entre ambas observaciones. Tabla N° 6: Resultados cualitativo tras la evaluación de las muestras tratadas (cuatro por. SustanciaMancha de:. EN CI. ensayo) con los reactivos Blue Star Forensic y Luminol en condiciones de oscuridad. Nº muestras --------. Blue Star Luminol Soporte Forensic O1 O2 O1 O2 negativo negativo negativo negativo Tela. --------. Positivo Positivo Positivo Positivo Tela. DE. Agua destilada Agua destilada Sangre Sangre humana humana. CI. OBSERVACIONES. TE. CA. Sangre de ave. 4. BL. IO. Sangre de ovino. 4. Sangre de vacuno. BI. Sangre. 4. Sangre de porcino 4. Alfombra Piso no pulido Positivo Positivo Positivo Positivo Tela Tierra Alfombra Piso no pulido Positivo Positivo Positivo Positivo Tela Tierra Alfombra Piso no pulido Positivo Positivo Positivo Positivo Tela Tierra Alfombra Piso no pulido Positivo Positivo Positivo Positivo Tela Tierra. 20 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(33) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Continuación…. 4 4 4 4. IC AS. Alfombra Tela Positivo Positivo Positivo Positivo Alfombra Tela Positivo Positivo Positivo Positivo Alfombra Tela Positivo Positivo Positivo Positivo Alfombra Tela Positivo Positivo Positivo Positivo Alfombra Tela Positivo Positivo Positivo Positivo Alfombra Tela Positivo Positivo Positivo Positivo Alfombra Tela Negativo Negativo Positivo Positivo Alfombra Positivo Positivo Positivo Positivo Tela Positivo Positivo Negativo Negativo Alfombra Positivo Positivo Positivo Positivo Tela Positivo Positivo Positivo Positivo Alfombra Positivo Positivo Positivo Positivo Tela Positivo Positivo Positivo Positivo Alfombra Positivo Positivo Positivo Positivo Tela Positivo Positivo Positivo Positivo Alfombra Positivo Positivo Positivo Positivo Tela. EN CI. 4. Positivo. G. 4. Positivo. LO. 4. Positivo. BI O. 4. Positivo. AS. 4. 4 4. CI. Sangre expuesta a 30ºC por (1) una hora. Sangre expuesta a 50ºC por 1 hora. Sangre expuesta a 30ºC por 3 horas. Sangre expuesta a Tto de 50ºC por 3 horas. manchas Sangre lavada 5 veces con agua a chorro. Sangre lavada 10 veces con agua a chorro. Sangre lavada 15 veces con agua a chorro. Sangre + 1 mililitro de hipoclorito de sodio Sangre + 1 mililitro de ácido acético. Sangre + 1 mililitro de peróxido de hidrogeno Sangre + 1 gramo de detergente en polvo Sangre + 1 gramo de hidróxido de sodio. DE. 4. BI. BL. IO. TE. CA. Dilución de sangre al 1/100 Dilución de sangre al 1/2 Dilución de sangre al 1/4 Dilución de sangre al 1/8 Dilución de sangre Dilución al 1/16 Dilución de sangre al 1/32 Dilución de sangre al 1/64 Dilución de sangre al 1/128. Tela. 4. Positivo. Positivo. Positivo Positivo. 4. Positivo. Positivo. Positivo Positivo. 4. Positivo. Positivo. Positivo Positivo. Tela Tela Tela 4. Positivo. Positivo. Positivo Positivo. 4. Positivo. Positivo. Negativo Negativo. 4. Positivo. Positivo. Negativo Negativo. 4. Positivo. Positivo. Negativo Negativo. 4. Positivo. Positivo. Negativo Negativo. Tela Tela Tela Tela. 21 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(34) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Continuación…. 4. Negativo Negativo Negativo. 4 Negativo. Negativo Negativo Negativo. 4. Negativo Negativo Negativo. BI O. Fragaria vesca “Fresa”. Negativo. AS. 4. Negativo. Negativo Negativo Negativo. EN CI. Raphanus sativus “Rabanito”. LO. G. Daucus carota “Zanahoria”. Negativo. 4. TE. CA. DE. Vitis vinífera “Uva”. 4. Saliva. 4. BL. IO. Orina. Negativo Negativo Negativo. CI. Solanum lycopersicum 4 Negativo Producto “Tomate” vegetal. Negativo. Negativo Negativo Negativo. BI. 4. Tela Tierra. Alfombra Piso no pulido Tela Tierra Alfombra Piso no pulido Tela Tierra Alfombra Piso no pulido Tela Tierra Alfombra Piso no pulido Tela Tierra. Alfombra Piso no pulido Negativo. Negativo Negativo Negativo. Negativo. Negativo Negativo Negativo. Fluido biológico Semen. Alfombra Piso no pulido Tela Tierra Alfombra Piso no pulido. IC AS. Beta vulgaris “Beterraga”. Tela Tierra Alfombra Piso no pulido Tela Tierra Alfombra Piso no pulido. Negativo. Negativo Negativo Negativo. Tela Tierra. 22 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(35) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Continuación… Alfombra. Gaseosa “Coca Cola”. LO. 4. 4. Alfombra Piso no pulido Negativo Negativo Negativo Negativo Tela Tierra. BI O. Producto Café Químico. Negativo Negativo Negativo Negativo Piso no pulido Tela Tierra Alfombra Piso no pulido Negativo Negativo Negativo Negativo Tela Tierra. IC AS. 4. G. Lugol. Negativo Negativo Positivo. EN CI. 4. Piso no pulido Negativo Negativo Negativo Negativo Tela Tierra. AS. Vino tinto. Positivo Alfombra. CI. Tabla N° 7: Número de casos con resultado cualitativo de verdaderos positivos (a),. DE. falsos positivos (b), falsos negativos (c), y verdaderos negativos (d), obtenidos por dos. CA. observadores anónimos para las muestras tratadas con Blue Star Forensic. Muestras. Observador 1. Con sangre. TE. Quimiolu-. No sangre. Observador 2 Con sangre. No sangre. IO. miniscencia (humana y animal) (vegetales, fluidos y (humana y animal) (vegetales, fluidos y reactivos químicos). reactivos químicos). (a) 47. (b) 1. (a) 47. (b) 1. Negativa. (c) 0. (d) 52. (c) 0. (d) 52. BI. BL. Positiva. 23 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(36) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Tabla N° 8: Resultados cualitativo de verdaderos positivos (a), falsos positivos (b), falsos negativos (c), y verdaderos negativos (d), obtenidos por los analistas para las. Muestras. Con sangre. Quimiolu-. Observador 2. No sangre. Con sangre. No sangre. G. Observador 1. IC AS. muestras rociadas con Luminol.. LO. miniscencia (humana y animal) (vegetales, fluidos y (humana y animal) (vegetales, fluidos y (b) 5. Negativa. (c) 1. (d) 51. AS. (a) 43. (a) 43. (b) 5. (c) 1. (d) 51. EN CI. Positiva. reactivos químicos). BI O. reactivos químicos). Tabla N°9:Análisis estadísticos de Sensibilidad, Especificidad, Valor Predictivo Positivo, Valor Predictivo Negativo, Índice de concordancia, Concordancia al Azar,. CI. Concordancia Observada e Índice de Kappa para resultados cualitativos obtenidos por. DE. los analistas de cada muestras rociadas con blue star forensic y luminol.. Blue Star Forensic Luminol Observador Observador Observador Observador 1 2 1 2. TE. CA. Reactivos Análisis Estadístico. Concordancia Entre observadores. 1,0000. 1,0000. 0,9773. 0,9773. ------. Especificidad. 0,9811. 0,9811. 0,9107. 0,9107. ------. Valor Predictivo Positivo 0,9792. 0,9792. 0,8958. 0,8958. ------. 1,0000. 0,9808. 0,9808. ------. BL. IO. Sensibilidad. Valor Predictivo Negativo 1,0000. BI. Índice de concordancia entre los dos observadores Concordancia al Azar Índice de Kappa. 0,9900. 0,9400. Casi perfecta. 0,5018. Moderada. 0,9297. Casi perfecta. 24 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(37) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. IV.. DISCUSIÓN. IC AS. En la tabla 6, se presentan los resultados de las observaciones en condición de. positivos o negativos en los soportes o sustratos utilizados, pudiéndose definir con. G. seguridad que las observaciones positivas solo se producen en manchas que han sido. LO. causadas por sangre humana o de animales (vacuno, porcino, caprino y ave), cuyas peroxidasas que. BI O. razones científicas se pueden fundamentar por la presencia de. reaccionan con el radical amino del reactivo luminol y con el radical carboxilo de las. AS. moléculas proteicas que se encuentran en la membrana celular, estimuladas por átomos. EN CI. de hierro presente en la molécula de hemoglobina de los glóbulos rojos, o de átomos de cobre o cobalto, como lo sostiene Albrecht (1928) en sus estudios sobre el luminol, por lo tanto se debe sostener que los extractos vegetales (“beterraga”, “zanahoria”,. CI. “rabanito”, “fresa”, “tomate” y “uva”), fluidos biológicos (semen, saliva y orina) y. DE. productos químicos (lugol, café, gaseosa y vino), pueden presentar peroxidasas, pero no los radicales amino y carboxilo ni la presencia de hierro, cobre ni cobalto que son los. IO. TE. peroxidasas.. CA. elementos químicos que estimulan la reacción de blue star forensic y luminol con las. BL. En la experiencia, utilizamos manchas de sangre de origen humano y animal. BI. (vacuno, porcino, ovino y ave) por contener en su estructura molecular hierro en el grupo Hem el cual reacciona directamente con los reactivos luminol (C8H7O2N3) y blue. star forensic (mezcla de luminol + agente oxidante + agente alcalino) en un medio alcalino, en el que se disuelve y carga negativamente la molécula, con el oxidante 25 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(38) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. peróxido de hidrogeno, el cual libera y reemplaza dos nitrógenos, llevando a la molécula al estado de excitación y finalmente un catalizador, que usualmente es una sal o metal de. IC AS. transición como lo indica Cuellar (1998) en su estudio sobre Hematología.. G. Esta reacción se fundamenta, porque el hierro (Fe2+) de la hemoglobina es un. LO. poderoso catalizador, que permite una excelente optimización de la oxidación con los. BI O. reactivos blue star forensic y luminol (Álvarez, y col., 2004) mediante la secuencia de reacciones detallas por estudios de sistemas redox, concordando con Cedrón (2011) en. AS. su estudio del luminol como molécula destacada y Montserrat, y col (2014), en sus. EN CI. estudios de implementación de métodos de luminol y o-toluidina para detección de sangre y comparación de su utilidad explicada y fundamentada del siguiente modo:. CI. 1. La base atrapa los hidrógenos unidos a los átomos de nitrógeno.. DE. 2. La reacción del di anión resultante con oxígeno molecular permite el intercambio. CA. de las amidas por los ésteres correspondientes, mediante una adición cíclica formándose nitrógeno molecular.. TE. 3. El peróxido formado, se rompe dando lugar al anión 3-aminoftalato.. IO. 4. La ruptura del peróxido de hidrógeno da lugar a la molécula en estado excitado.. BL. 5. La molécula excitada en estado basal, libera energía en forma de luz, de una. BI. coloración azul brillante.. 6. La reacción mostrada es lenta, pero se acelera en presencia de hierro (Fe) presente en la hemoglobina originando que el proceso sea más rápido y produciendo la luz de manera casi inmediata al contacto con los reactivos. 26. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(39) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Asimismo, en las reacciones de sangre más un mililitro de hipoclorito de sodio, resulta un falso negativo, debido a que el anión hipoclorito (ClO) tiene capacidad Redox,. IC AS. por lo cual le confiere una marcada actividad perjudicial frente a todos los compuestos orgánicos incluida la hemoglobina, concordante con los reportes de Cedrón (2011) en. G. sus estudios del luminol como molécula destacada, similar a la reacción de sangre más. LO. un mililitro de ácido acético, que resulta un falso negativo con el luminol, debido a que. BI O. los radicales hidroxilos quedan libres al producirse la reacción, lo cual impide la producción de luminiscencia , concordante con Doménech y col, (2004), quienes. EN CI. AS. estudiaron el potencial redox de agentes oxidantes.. En el mismo contexto, la reacción de sangre diluida a concentraciones 1/16, 1/32, 1/64 y 1/128, reportan falsos negativos con la técnica de luminol, lo que significa la. CI. diferencia de sensibilidad y especificidad de los reactivos; por lo tanto, se deduce que. DE. blue star forensic, tiene mayor límite de detección, ya que tiene respuesta positiva a. CA. 1/128 ml de concentración, a diferencia de luminol, que solo presenta respuesta positiva a 1/8 ml de concentración, debido a la estructura química del blue star forensic (fórmula. TE. patentada y no disponible para su publicación) como lo sostiene Dilbeck (2006) en sus. IO. estudios del uso de blue star en casos criminales y Webb (2006) en su estudio de. BL. comparación entre luminol y blue star forensic. Al analizar muestras de extractos. BI. vegetales por contener pigmentos con tendencia al rojo semejante a la sangre, como es el caso de las antocianinas y los carotenoides, en sus variaciones anaranjado (caroteno), rojo (licopeno) y amarillo (luteína), y por presentar en la composición química de sus células peroxidasas y catalasas, entre la que destaca la catalasa, que es una enzima que 27. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(40) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. se encuentra en las células animales y protistas, la cual utiliza como cofactor al grupo Hem y la peroxidasa, una enzima que presenta como grupo prostético al grupo Hem. IC AS. como lo refiere SISIB (2015) al determinar la actividad de la peroxidasa y su regeneración, quien sostiene que los pigmentos vegetales contenidos en los extractos. G. (“beterraga”, “zanahoria”, “rabanito”, “fresa”, “tomate” y “uva”) inhibían la reacción de. LO. quimioluminiscencia por no presentar radicales amino y carboxilo en las moléculas. BI O. proteicas de las membranas celulares, como se indica en el anexo N° 4, donde aparecen solo radicales oxidrilos y metilos, al igual que en los fluidos biológicos de origen. AS. humano (orina, saliva y semen) que también poseen peroxidasas y catalasas,. EN CI. determinando, la baja capacidad reactiva de estas enzimas, ya que ni con la técnica de blue star forensic ni luminol se obtuvo emisión de luz azul brillante tal como lo indican Gutiérrez y Carmona (2004) en sus estudios de validación de los métodos de Trevenon-. CA. DE. manchas de sangre y fluidos.. CI. Roland y Verde de Leucomalaquita como pruebas presuntivas en la investigación en. Sin embargo, la reacción positiva del vino tinto con Luminol, teniendo como. TE. sustrato alfombra, puede deberse a la presencia de los elementos químicos contenidos en. IO. el vino, por algún proceso de degradación por acción bacteriana y por la presencia de sales como. BL. alcoholes, ácido láctico, ácido Succínico y ácido Acético; además de. BI. fosfatos, cloruros, yodo, bromo y flúor, como lo sostiene Cooper (2001) en sus estudios sobre el efecto del Blue Star Forensic en la tipificación de manchas diversas para identificación de ADN, a lo que le llamó falso positivo.. 28 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(41) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Dada esta fundamentación teórica, los resultados tienen coherencia con los valores en la tabla N° 7 y 8, en las que consolidan los resultados con los valores. IC AS. verdaderos positivos elevados para blue star forensic (N° 7) y luminol (N° 8) durante la experiencia desarrollada con la participación de dos observadores con experiencia en. G. procesos criminalísticos, con la finalidad de contrastar los reportes de observación, lo. LO. que nos permite afirmar con seguridad que los resultados tienen confiabilidad por los. BI O. resultado obtenidos en la tabla N° 9, en la cual la sensibilidad, especificidad y valor predictivo, tienden a la perfección (valor 1) como lo refiere Castelló y Feucht, (2002) en. AS. sus estudios de revelado de manchas latentes, especificidad del Luminol y evaluación de. EN CI. su efecto sobre el estudio del ADN. Este mismo criterio se tiene en cuenta para la concordancia, siguiendo la escala del índice de kappa, cuyos valores se acercan a la unidad (1), concordante con Fernanda y Sorieth, (2009) en su estudio de validación de. CA. DE. investigación de sangre.. CI. los métodos Bluestar Forensic y Trevenon Rolamidón – Piramidón como pruebas en la. Por lo tanto, con la validación o comprobación y certificación con evidencias. TE. convenientemente documentadas de las técnicas blue star forensic y luminol,. IO. demostramos un alto grado de confianza, seguridad en el método analítico y en la. BL. calidad de los resultados ya que son altamente sensibles y presentan una especificidad. BI. mayor al 90%, lo que las hace muy útiles en la detección de manchas de sangre de interés criminalístico permitiendo la disminución del número de fallas y repeticiones, como lo demostraron Castelló, y col., (2004) y Webb (2006), evaluando y comparando. la efectividad del luminol y blue star forensic. 29 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(42) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. CONCLUSIONES. IC AS. V.. Las técnicas de blue star forensic y luminol tienen alta validez en la detección de. G. manchas de sangre que pueden ser usadas en procesos criminalísticos.. BI O. tomando como referencia la escala del índice de Kappa.. LO. Los criterios de sensibilidad y especificidad tienen valor de concordancia casi perfecta. Las técnicas de blue star forensic y luminol tienen reacción positiva solo en células. AS. sanguíneas y es indiferente a los extractos vegetales y otros fluidos biológicos.. EN CI. El sustrato o soporte no tiene influencia en la reacción de la sangre encontrada en las manchas con los reactivos de blue star forensic y luminol.. BI. BL. IO. TE. CA. técnica de luminol.. DE. CI. La técnica de blue star Forensic tiene un límite de detección de sangre mayor que la. 30 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(43) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS. IC AS. VI.. Albrecht, H. 1928. Über die Chemiluminescenz des Aminophthalsäurehydrazids (On the of. aminophthalic. acid. hydrazide).. Revista. Aleman,. G. chemiluminescence. LO. Zeitschriftfür Physikalishe Chemie 136(2): 321-330. Alemania.. BI O. Almog, J., Bertler, C., Bramley, B., Clarke, D., Dahlenburg, R. y Deforest, P. 2009. La escena del delito y las pruebas materiales Sensibilización del personal no forense. AS. sobre su importancia. Sección de Laboratorio y Asuntos Científicos Oficina De. EN CI. Las Naciones Unidas Contra La Droga Y El Delito. Nueva York. Álvarez, M., Castelló, A., y Verdú, F. 2004. Estudio De la especificidad del luminol.. CI. Revista brasileira de medicina legal, 4ta edición. Brasil.. DE. Arbeláez L F, Ríos, L. S. 2009. Validación de los métodos Bluestar Forensic Free y Thevenon Roland-Piramidón como pruebas preliminares en la investigación de. CA. sangre de interés forense. Pontificia Universidad Javeriana. Facultad de Ciencias.. TE. Carrera Bacteriología. Colombia. Tesis, 40-41.. IO. Barni, F., Lewis, S., Berti, A., Miskelly, G., y Lago, G. 2007. Forensic application of the. BL. luminol reaction as a presumptive test for latent blood detection. Recent Talanta. BI. Articles 72, 896–913.. 31 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(44) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Blum, L., Esperanca, P. y Rocquefelte, S. 2006. New high-performance reagent and procedure for latent bloodstain detection based on luminol chemiluminescence.. Buendia, R. 2008. Luminol: La. IC AS. Forensic Sci. Vol. 39 (3): 81-100. Brasil.. confidencia de un espectro. Laboratorio de. LO. G. gwen.Medellín, Colombia.. BI O. Castello, A., Gil, P. y Negre, M. 2004. Influencia del ambiente en el estudio criminalístico de muestras biológicas. Revista Brasilera de Medicina Legal. 2(1).. AS. Brasil.. EN CI. Castelló, P. Feucht, M. 2002. Revelado de manchas latentes: Efectividad del Luminol y evaluación de su efecto sobre el estudio del AND. Development of Latent stains:. CI. effectiveness of luminol and evaluation of its effect on AND analysis. Cuadernos. DE. de Medicina forense N° 28. Sevilla, España. Cedrón, C. 2011. La molécula destacada: El Luminol. Revista de Química Pontificia. CA. Universidad Católica del Perú, vol. 25, Nº 1-2. Lima, Perú.. TE. Cooper, Q. 2001. French Defense Department Gendarmerie National Criminal Research. IO. Institute Biology Department. The effect of the Blue Star Blood reagent on DNA. BL. typing. New York. USA.. BI. Cuellar A. 1998. Fundamentos de Medicina – Hematología. 5ta Edición. Editorial corporación para investigaciones biológicas. Medellin, Colombia.. 32 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(45) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Cueva, C., Alejo, A. 2010. Validez y fiabilidad de las medidas de exposición y medición. Universidad Nacional Autónoma de México, Facultad de Psicología. IC AS. División de Estudios Profesionales. México, DF.. Desain, C. 1992. Documentation basics. "Master Method Validation Protocols". Revista. LO. G. Bio Pharm. p.p. 30-34. USA.. BI O. Dilbeck, L. 2006. Use of Bluestar Forensic in Lieu of Luminol al Crime Scenes”. Journal of Forensic Identification. Journal of Forensic Identification. Academic. AS. Press. New York. USA. pp 56 (5).. USA.. Disponible. EN CI. Doménech, X., Jardim, W., Litter, M. 2004. Potencial Redox de Agentes Oxidantes. en:. http://www.miliarium.com/prontuario/tabla. CI. /Química/Potencial Redox.htm. DE. Fernanda, L. y Sorieth, L.2009. Validación de los Métodos Bluestar Forensic Free y Thevenon Rolamidón-Piramidón como pruebas preliminares en la Investigación. CA. de sangre de interés forense. Bogotá, Colombia.. TE. Gutiérrez, A., Gutiérrez, Y., Carrillo, E. 2013. Volumen plaquetario medio: el tamaño sí. IO. importa. Medicina Interna de México 29 (3): 307-308. México, DF.. BL. Gutiérrez, R., Carmona, A. 2004. Validación de los métodos de Trevenon-Roland y. BI. Verde de Leucomalaquita como pruebas presuntivas en la investigación de sangre en mancha y fluidos. IBF. Pereyra, España.. 33 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..