Efecto bactericida in vitro de Piper aduncum sobre streptococcus pyogenes

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(1)Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE MEDICINA. de. M. ed. ici. na. ESCUELA DE MEDICINA. a. Efecto bactericida in vitro de Piper aduncum sobre Streptococcus pyogenes. te c. TESIS PARA OPTAR EL GRADO DE. Bi b. lio. BACHILLER EN MEDICINA. AUTOR:. BENITES RODRÍGUEZ ALONDRA NATHALIE. ASESOR:. Dra. ELVA MEJÍA DELGADO. TRUJILLO-PERÚ 2017. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(2) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ÍNDICE RESUMEN……………………………………………………………………..….1 I.. INTRODUCCIÓN……………………………………………………..….3 1.1. Antecedentes……………………………………………………..…...3. na. 1.2. Justificación…………………………………………………….…….7 1.3. Problema………………………………………………………..….…8. ici. 1.4. Hipótesis…………………………………………………………..…..8. II.. ed. 1.5. Objetivos……………………………………………………….….….8 MATERIAL Y MÉTODOS………………………………………..….....9. M. 2.1. Material de estudios:…………………………………………..….…9. de. 2.2. Métodos y Técnicas……………………………………………...…..11 2.3. Instrumento de Recolección de Datos………..…………….............15. a. 2.4. Operacionalización de variables.…………………….…….............16. te c. 2.5. Definición conceptual de variables………………….………….…..17 2.6. Análisis estadístico e interpretación de la información……..…….18. lio. 2.7. Aspectos éticos……………………………………………………....18. Bi b. 2.8. Diseño Experimental……………………………………………......19. III.. RESULTADOS…………………………………………………….…….20. IV.. ANÁLISIS Y DISCUSIÓN……………………………………….……..28. V.. CONCLUSIONES……………………………………………….………30. VI.. RECOMENDACIONES…………………………………………..…….30. VII.. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS…………………………..……..31. VIII. ANEXOS…………………………………………………………..……..36. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(3) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. DEDICATORIA. A Dios, por haberme permitido cruzar este largo camino. na. para lograr mis objetivos, además de su infinita bondad y amor.. A mis padres y hermana, por su apoyo constante, diario e incondicional. ed. ici. por su lucha durante todos estos años y por todo su amor.. M. A mis abuelos que desde el cielo me cuidan. de. así como a mis tíos, primos y sobrinos por su apoyo constante.. A Félix Ugaz León y a su familia,. te c. a. por ser luz y guía eterna en mi vida.. A mi enamorado Luis Eduardo, por su amor y paciencia,. Bi b. lio. así como su comprensión y apoyo en mi vida académica y personal.. A mis amigos Fiorella, Crystel, Marcio, José, David, Gianmarco, Maggie y Cyndi por escucharme, motivarme y apoyarme en todo momento.. 1 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(4) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. AGRADECIMIENTOS. A la Dra. Elva Mejía Delgado, mi asesora de tesis y gran maestra, por su gran apoyo y motivación para la culminación de nuestros estudios profesionales y para la. na. elaboración de este trabajo.. ici. Al personal docente y administrativo de la Facultad de Medicina de la UNT, por. ed. su gran apoyo y servicio durante estos siete años de estudio y durante la ejecución de. Bi b. lio. te c. a. de. M. la investigación.. 2 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(5) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Efecto antibacteriano in vitro de Piper aduncum sobre Streptococcus pyogenes. RESUMEN Objetivo: El objetivo de la presente investigación fue evaluar el efecto antibacteriano. na. in vitro del extracto etanólico de Piper aduncum (matico) sobre Streptococcus pyogenes Grupo A. Material y Método: Se preparó el extracto etanólico de Piper. ici. aduncum en cinco concentraciones: 5%, 25%, 50%, 75% y 100%; además se utilizó. ed. como control Penicilina de 10 UI. Se utilizó el método de Kirby Bauer (difusión en. M. disco) y la determinación mínima inhibitoria (CMI) para evaluar la actividad antibacteriana de Piper aduncum sobre Streptococcus pyogenes Grupo A.. de. Resultados:. Al comparar los halos de inhibición según la escala de Duraffourd, Streptococcus. a. pyogenes fue sumamente sensible a las cinco concentraciones del extracto etanólico. te c. de Piper aduncum obteniendo medidas similares al control penicilina y sin que exista diferencia estadísticamente significativa entre concentraciones. Al evaluar la. lio. concentración inhibitoria mínima, se determinó que todas las concentraciones. Bi b. inhibieron el crecimiento de S. pyogenes además que todas tuvieron efecto bactericida.. Conclusiones: Se determinó que el extracto etanólico de Piper aduncum (matico) posee efecto bactericida in vitro sobre el crecimiento de Streptococcus Pyogenes del grupo A. PALABRAS CLAVES: Piper aduncum, Streptococcus pyogenes, extracto etanólico. 3 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(6) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ABSTRACT. Objective: The principal objective of these investigation was to evaluate, in vitro, bactericidal effect of the ethanolic extract of Piper aduncum (matico) on. na. Streptococcus pyogenes Group A. The ethanolic extract of Piper aduncum was prepared in five differents concentrations: 5%, 25%, 50%, 75% and 100%; also. ici. Penicillin of 10 IU was use as control. Methods: The Kirby Bauer (disc diffusion). ed. method and the minimum inhibitory concentration (IMC) were used to evaluate the. M. antibacterial activity of Piper aduncum on Streptococcus pyogenes Group A. Results: When comparing the inhibition halos according to the Duraffourd scale,. de. Streptococcus pyogenes was highly sensitive to the five concentrations of the ethanolic extract of Piper aduncum like Penicillin but there isn´t significantly. a. different between concentrations. Evaluating MIC, growth of S. pyogenes was inhibit. te c. by every kind of concentrations, also all the concentrations show a bactericidal effect. Conclusions: It was determined that the ethanolic extract of Piper aduncum (matico). lio. has bactericidal effect in vitro on the growth of Streptococcus Pyogenes of group A.. Bi b. KEYWORDS: Piper aduncum, Streptococcus pyogenes, ethanolic extract. 4 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(7) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. I. INTRODUCCIÓN 1.1.. ANTECEDENTES Las infecciones de las vías respiratorias altas son probablemente las. na. principales entidades de morbilidad en el mundo. Este tipo de infecciones ocurren anualmente y aquejan a niños y adultos varias veces al año por lo que. ici. no es aventurado afirmar que son causa de 30 a 50% de las visitas de niños a. ed. los servicios de salud (1,2). La faringitis y la amigdalitis son afecciones leves de las vías respiratorias altas. M. muy frecuentes con la llegada del invierno. La faringitis es un proceso. de. inflamatorio difuso de los folículos linfoides de la faringe, con participación de la mucosa y de las estructuras subyacentes(3,4). a. La etiología de la faringitis es diversa. La mayoría de veces el agente causal es. te c. un virus como, por ejemplo, adenovirus, rinovirus, virus respiratorio sincitial, etc. También puede estar causada por bacterias; en este caso el agente causal. lio. más frecuente es Streptococcus pyogenes o estreptococo betahemolítico del. Bi b. grupo A (SGA). Otros estreptococos, como los del grupo C o del grupo G, también producen, aunque infrecuentemente, esta patología (5,6). Diversos estudios han evaluado escalas de predicción clínicas que aumentan las probabilidades de infección causada por SGA. La más conocida es la de Centor,. que. usa. cuatro. criterios:. fiebre,. exudado. o. hipertrofia. faringoamigdalar, adenopatías laterocervicales dolorosas y ausencia de tos, en. 5 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(8) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. la que se suma un punto por cada uno de los criterios presentes, oscilando la puntuación global de 0 a 4. (7) El Streptococcus pyogenes es una bacteria Gram positiva con forma de coco que se dispone en cadenas cortas o largas. Es una bacteria clínicamente muy. na. importante debido a que causa patologías que van desde faringitis hasta síndrome de shock tóxico (8). Para el diagnóstico, la prueba de referencia es el. ici. cultivo de exudado amigdalar, cuya sensibilidad y especificidad son muy. ed. elevadas (90- 95% y >95% respectivamente) sin embargo el periodo de. M. tiempo necesario para realizar la lectura del cultivo constituye la principal limitación para su uso diagnóstico habitual(9–11). de. La faringitis estreptocócica es una enfermedad leve y autolimitada, pero que puede tener complicaciones graves como la fiebre reumática El objetivo. a. fundamental del tratamiento antimicrobiano de esta condición es prevenir el. te c. desarrollo de la fiebre reumática. (5,12) El tratamiento antibacteriano debe administrarse durante al menos 8 días,. lio. aunque preferentemente se recomienda administrarlo durante 10 días, ya que. Bi b. la mayoría de estudios se han efectuado con esta duración. Se recomienda la utilización de fenoximetilpenicilina o penicilina V (1.200.000 UI/12 h por vía oral), ya que el SGA ha sido y sigue siendo sensible a este antibiótico en todo el mundo. (8,13) Desde tiempos remotos, las plantas han constituido un recurso al alcance de los seres humanos, tanto para su alimentación como para la curación de sus enfermedades. Aún en la actualidad muchas plantas son utilizadas en medicina 6. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(9) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. y constituyen laboratorios naturales donde se biosintetiza una gran cantidad de sustancias químicas, considerándoselas como la fuente de compuestos químicos más importante que existe. (14,15) El Piper angustifolium o Piper aduncum (matico) es una planta cosmopolita. na. de la familia de la pimienta (Piperaceae), es un arbolillo delgado, erecto de 4. ici. m de alto. Que se encuentra en Amazonas, Ayacucho, Cajamarca, Cuzco, Huánuco, Junín, Loreto, Madre de Dios, Paseo, San Martín, Ucayali. Sus. ed. hojas son usadas en infecciones urinarias, resfrío, antidiarreico, úlceras,. M. bronquitis (se toma como agua de tiempo), heridas, antiséptico vaginal y herpes. El matico presenta ácidos fuertes, antocianidinas, antocianinas, bases. de. cuaternarias, flavones, fenoles, piperazinas, resinas, saponinas, taninos pirogálicos y triterpenos(15) Entre otros constituyentes importantes figuran. a. varios tipos de alcaloides, a los que se les atribuye un efecto relajante de la Los flavonoides son compuestos fenólicos presentes. te c. musculatura lisa.. lio. ampliamente en la naturaleza, son responsables del buen funcionamiento de las plantas y sus beneficios para la salud humana han sido bien reconocidos en. Bi b. varios estudios (16) El uso de flavonoides contra bacterias, protozoos e infecciones fúngicas tiene dos propósitos: matar las bacterias o. células. fúngicas y contrarrestar la propagación y el efectos de las toxinas bacterianas. Sin embargo, el mecanismo por el cual esto se logra no se conoce del todo todavía. Se cree que puede ser el resultado de una alteración metabólica. Los canales de iones, que son componentes tanto de bacterias como de células. 7 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(10) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. animales, son puntos especialmente sensibles de inhibición y posibles blancos de flavonoides. Además, en las células animales, estos canales están regulados por reacciones de fosforilación / desfosforilación. Los hongos, que frecuentemente acompañan as infecciones bacterianas, pueden morir por. na. flavonoides debido a cualquiera de los dos mecanismos mencionados anteriormente. (17,18) Aparte del papel activo que juegan en la destrucción de. ici. los microorganismos, fortifican la conectividad de los tejidos mediante la. ed. inhibición de algunas de las enzimas que pueden hidrolizar el proteoglicano y. M. la malla proteica. Esta malla obstaculiza la difusión de la infección al tejido. (17,19). de. En la actualidad, su uso etnomedicinal es múltiple y variado siendo empleado para aliviar y curar enfermedades del tracto respiratorio (anti inflamatorio y. a. antitusígeno), en dolencias gastrointestinales (diarreas agudas o crónicas) y. te c. tópicamente en infusión de las hojas para hacer gárgaras y como vulnerario. lio. (para el lavado de heridas externas). (20–22) A la fecha, el resurgimiento de la medicina natural a base de extractos de. Bi b. plantas medicinales, utilizadas con el propósito de solucionar diferentes enfermedades, nos motiva a estudiar e investigar un sin número de especies nativas presentes en nuestro país, las cuales forman parte de la gran biodiversidad, favorecida por los diferentes ecosistemas en las diferentes regiones de Perú. Esta realidad impulsa a investigar plantas con propiedades. 8 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(11) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. curativas lo cual servirá como alternativa en el tratamiento de dichas enfermedades causadas por diferentes microorganismos patógenos. (23). 1.2.. JUSTIFICACIÓN DE LA INVESTIGACIÓN. aduncum. (matico). contra. Streptococus. na. La trascendencia de este trabajo radica en cómo el efecto bactericida de Piper pyogenes. las. ici. enfermedades causadas por este microorganismo.. contrarrestaría. ed. La realización de este proyecto se basa en la repercusión que tendría el. M. certificar los efectos bactericidas del matico con estas bacterias. Esto ayudaría a concretar y avalar el conocimiento de las propiedades beneficiosas de P.. de. aduncum. También permitiría el ampliar su distribución como alternativa o tratamiento coadyuvante de medicamentos farmacológicos en el tratamiento. a. de enfermedades bacteriológicas.. te c. La administración del extracto de P. aduncum a diferentes concentraciones es debido a que para el surgimiento del efecto antimicrobiano deseado, debe. lio. darse a variables concentraciones así se sesga los efectos inesperados que. Bi b. pudiesen presentarse en cada uno de ellos. Asimismo nos permite visualizar qué concentración es la adecuada para contrarrestar a este microorganismo. Adicionalmente, obteniendo los resultados esperados, este estudio podría ser de gran utilidad para el campo médico, ya que podría tomarse las medidas pertinentes con el consumo del matico como aprovechar un posible efecto sinérgico entre éste y los medicamentos comúnmente utilizados en la práctica clínica. Con todo esto se espera que futuras investigaciones logren ratificar lo 9. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(12) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. que planteamos en este proyecto y enfocarse más en los beneficios que puedan obtenerse en un estudio in vivo.. 1.3.. PROBLEMA. na. ¿Cuál es el efecto bactericida in vitro del extracto etanólico de Piper aduncum sobre Streptococcus pyogenes? HIPÓTESIS. ici. 1.4.. 1.5.. OBJETIVOS. . de. 1.5.1. Objetivo General. M. Streptococcus pyogenes.. ed. El extracto etanólico de Piper aduncum tiene efecto bactericida sobre. Conocer el efecto bactericida in vitro del extracto etanólico de Piper. a. aduncum a concentraciones de 5%, 25%, 50%, 75% y 100 % sobre. te c. Streptococcus pyogenes. 1.5.2. Objetivos específicos Determinar la concentración inhibitoria mínima del extracto etanólico. lio. . Bi b. de Piper aduncum al 5%, 25%, 50 %, 75% y 100% sobre Streptococcus. pyogenes.. . Comparar el efecto bactericida “in vitro” del extracto etanólico de Piper aduncum, al 5%, 25%, 50 %, 75% y 100% frente a Streptococcus pyogenes y con el antibiótico penicilina.. 10 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(13) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. . Determinar la susceptibilidad bacteriana del extracto etanólico de Piper aduncum (matico) frente Streptococcus pyogenes.. II. MATERIAL Y MÉTODOS MATERIAL DE ESTUDIO. na. 2.1.. ici. 2.1.1. TIPO DE ESTUDIO:. - Según el período en que se capta la información: Prospectivo. ed. - Según la evolución del fenómeno estudiado: Longitudinal. M. - Según la interferencia del Investigador en el fenómeno que se analiza: Experimental. 2.1.2.1.. de. 2.1.2. POBLACIÓN Y MUESTRA:. CARACTERÍSTICAS GENERALES. a. Se trabajó con cepas de Streptococcus pyogenes expuestas a extracto etanólico. 100%.. CRITERIOS DE SELECCIÓN DE MUESTRA. lio. 2.1.2.2.. te c. de Piper aduncum (matico) en concentraciones de 5%, 25%, 50 %, 75% y. Bi b. Criterios de inclusión - Placas de Agar Sangre con macrodilución de Streptococcus pyogenes y la. concentración. de. extracto. etanólico. de. Piper. aduncum. (matico). correspondiente. Criterios de exclusión. 11 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(14) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. - Placa Petri con la macrodilución que presente algún tipo de deterioro o daño en su estructura durante el proceso de incubación. - Placa Petri con la macrodilución cuyo resultado en el proceso de incubación sea dudoso.. na. Criterios de eliminación. ici. - Placa Petri con la macrodilución que sufra deterioro o daño durante la conservación y los procedimientos, que no permitan su medición posterior.. ed. 2.1.3. DISEÑO ESTADÍSTICO DE MUESTREO. M. Por tratarse de un trabajo experimental, se empleó la siguiente formula estadística para el cálculo del número de repeticiones necesarias que validen el. n. =. de. diseño experimental:. (Z α/2 + Z β)2 2 S2. a. (X1 – X2)2. te c. Siendo n= el número de repeticiones a efectuar en cada investigación. lio. Z α/2 = 1.96 para α = 0.05 Z β = 0.84 para β = 0.20. Bi b. S = 0.8 (X1 – X2) valor asumido por no haber estudios previos. -. n=12. GRUPO 1: 12 repeticiones utilizando extracto etanólico de Piper aduncum (matico) a una concentración de 5%. -. GRUPO 2: 12 repeticiones utilizando extracto etanólico de Piper aduncum (matico) a una concentración de 25%. -. GRUPO 3: 12 repeticiones utilizando extracto etanólico de Piper aduncum. 12 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(15) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. (matico) a una concentración de 50% -. GRUPO 4: 12 repeticiones utilizando extracto etanólico de Piper aduncum (matico) a una concentración de 75%. -. GRUPO 5: 12 repeticiones utilizando extracto etanólico de Piper aduncum. 2.2.. GRUPO 6: 12 repeticiones utilizando discos de Penicilina G sódica 10 UI. ici. -. na. (matico) a una concentración de 100%. MÉTODOS Y TÉCNICAS. ed. 2.2.1. DE LA APROBACIÓN DEL PROYECTO:. M. Para la realización del presente estudio de investigación se obtuvo el permiso para la ejecución, mediante la aprobación del proyecto por el Comité Permanente de. de. Investigación Científica de la Facultad de Medicina de la Universidad Nacional de Trujillo y la correspondiente Resolución de Decanato.. a. 2.2.2. DE LA AUTORIZACIÓN PARA LA EJECUCIÓN:. te c. Contando con la aprobación del proyecto se solicitó el permiso para poder trabajar en el Laboratorio de Microbiología de la Facultad de Medicina de la Universidad. lio. Nacional de Trujillo.. Bi b. 2.2.3. DE LA CERTIFICACIÓN DEL EXAMINADOR: La presente investigación se desarrolló por el investigador principal, bajo la supervisión de su asesora. 2.2.4. EXTRACTO ETANÓLICO DE Piper aduncum (MATICO) PARA EL ESTUDIO 2.2.4.1.. Recolección de Piper aduncum (matico). 13 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(16) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Se recolectaron 5 kg hojas verdes y talluelos de Piper aduncum (matico), del departamento de La Libertad, provincia de Otuzco, ubicada a 2,641 msnm). Los cuales fueron observados a temperatura ambiente, sin desecar hasta el momento de la extracción del extracto etanólico Identificación de Piper aduncum (matico). na. 2.2.4.2.. La planta medicinal completa, fue llevada al Herbario Truxillensis de la. Preparación de la Muestra vegetal. M. 2.2.4.3.. ed. taxonómica. (Anexo N°7). ici. Universidad Nacional de Trujillo para su identificación y determinación. Selección de Piper aduncum (matico): Obtenida la muestra necesaria de matico,. de. fue transportada al laboratorio de Farmacognosia de la Facultad de Farmacia y Bioquímica de la Universidad Nacional de Trujillo y se eliminaron las hojas que. te c. oscuro.. a. presentaron signos de enfermedades evidentes como pigmento café, amarillo u. Lavado: Se lavó el material vegetal con agua destilada, seguido de desinfección,. lio. utilizando hipoclorito de sodio al 0.5 %. Posteriormente se realizó un enjuague. Bi b. con agua destilada estéril, para retirar los residuos de hipoclorito.(24) Secado: Una vez lavadas las hojas se colocaron en papeles Kraft, y se secaron a temperatura ambiente. Molienda y Tamizaje: Se procedió a moler las hojas con molino hasta que se obtuvo polvo grueso y luego se pasó a través de un set de tamices para homogenizar el tamaño de partículas (24) 2.2.4.4.. Preparación del extracto etanólico 14. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(17) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Se colocaron 100 g de hojas secas, pulverizadas y tamizadas, en un recipiente de vidrio de boca ancha. Luego, se añadió etanol de 70º G.L. cantidad suficiente hasta cubrir la muestra por sobre 2 cm de altura. Se mezcló bien, teniendo en cuenta que la mezcla debía ocupar como máximo las ¾ partes del recipiente. Se. na. tapó el recipiente y se maceró por 7 días, agitándose 15 minutos, dos veces al día. Transcurrido el tiempo de maceración, se filtró el líquido al vacío, con papel de. ici. filtro Whatman N° 1. Al líquido filtrado se le denominó extracto etanólico.. ed. A continuación, el extracto etanólico se concentró en un rotavapor hasta que se. M. obtuvo una masa siruposa. Esta se llevó a secar a la estufa a 30 ºC. Al producto resultante se le denominó extracto seco. De este, se preparó las concentraciones. de. de 5%, 25%, 50%, 75% y 100% disueltas en etanol de 70 º G.L. Finalmente, los extractos etanólicos se guardaron en frascos de vidrio de color ámbar y en. te c. a. refrigeración hasta su utilización.(25). 2.2.5. CEPAS BACTERIANAS PARA EL ESTUDIO. lio. Se trabajó con cepas de Streptococcus pyogenes, obtenidas por hisopado faríngeo. Bi b. de pacientes sintomáticos de faringoadmigdalitis, en el laboratorio de Microbiología de la Facultad de Medicina de la Universidad Nacional de Trujillo.. 2.2.6. CRECIMIENTO DE CEPAS BACTERIANAS ESTÁNDARES Streptococcus pyogenes: creció a 37°C en Agar sangre con 5% de sangre de conejo y en condiciones de microanaerobiosis. Se realizaron: la coloración Gram y prueba de Catalasa. 15 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(18) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.2.7. ESTANDARIZACIÓN DE Streptococcus pyogenes Para estandarizar estas cepas bacterianas se utilizó un tubo de ensayo con caldo de Tioglicolato, hasta obtener una turbidez semejante al tubo N°0.5 del Nefelómetro de Mc Farland (suspensión experimental) que corresponde a 10 8. MÍNIMA (CIM). LA. CONCENTRACIÓN. ed. DE. INHIBITORIA. M. 2.2.8. DETERMINACIÓN. ici. condiciones de microanaerobiosis, en jarra Gaspak.. na. bacterias/mL. Los cultivos se incubaron a 37°C por el lapso de 24 a 48 horas en. - En tubos de ensayo se colocó 0.8 ml de cada dilución del Piper aduncum al. de. 5%, 25%, 50%, 75% y 100%.. - Se colocó un inóculo de 0.2 ml del cultivo preparado de Streptococcus. a. pyogenes a cada tubo (incluyendo los tubos control) y se incubaron a 370C por un. te c. lapso de 24 horas en condiciones de microanaerobiosis. - El crecimiento microbiano se evaluó por turbidez del medio de cultivo.. lio. - Se realizó el sembrado del contenido de los tubos en placa con agar Sangre. Bi b. para determinar las cuentas viables para lo cual se tomó 0,1 ml de cada tubo y se dispersó en toda la placa para determinar las unidades formadoras de colonias (UFC) por cada concentración. - Después del sembrado las placas se incubaron a 37°C por 48 horas en jarra Gaspak en condiciones de microanaerobiosis 5 a 10% de CO 2.. 16 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(19) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. - Todos los ensayos se realizaron bajo condiciones asépticas y fueron 12 repeticiones por concentración. - Se contaron las Unidades Formadoras de Colonias (UFC’s) en cada repetición. 2.2.9. DETERMINACIÓN DE EFECTO ANTIBACTERIANO (PRUEBA DE. na. SUSCEPTIBILIDAD). ici. Para la prueba de susceptibilidad se utilizó el método de Difusión en discos Kirby-Bauer.. ed. Se prepararon discos de papel de filtro estériles, los cuales fueron sumergidos. M. dentro de cada una de las concentraciones del extracto etanólico de Piper aduncum, luego con una aguja estéril estos se colocaron sobre los cultivos de. de. Streptococcus pyogenes en placas Petri con agar Muller Hinton-sangre, previamente preparadas.. a. Se realizaron 12 repeticiones por cada concentración. De igual manera se. te c. hicieron 12 repeticiones para el control Penicilina G de 10 UI. Posteriormente las placas se incubaron a 37°C en microanaerobiosis. Todo el. lio. procedimiento se llevó a cabo dentro del diámetro de 10 cm. de la llama de un. Bi b. mechero. Al cabo de 24 horas se realizó la lectura, se midieron los halos de inhibición en mm de cada una de las concentraciones, incluyendo el área del disco de papel de filtro, con un calibrador vernier.. 2.3.. INSTRUMENTO DE RECOLECCIÓN DE DATOS:. Se llenaron los datos obtenidos en las fichas elaboradas (Anexo Nº1 y N°2) El instrumento contiene: 1. El conteo de las Unidades Formadoras de Colonias (UFC) 17 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(20) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2. Medida de halos de inhibición expresada en milímetros (mm). 2.4.. OPERACIONALIZACIÓN DE VARIABLES.. ESCALA DE MEDICIÓN. ed. Extracto etanólico. Se medirá según la designación de la concentración utilizada: 5%, 25%, 50%, 75%, 100%,Control. Cualitativa. Independiente. Ordinal. de. M. Extracto etanólico de Piper aduncum "Matico". ici. na. VARIABLES. DEFINICIÓN TIPO DE VARIABLE OPERACIONAL DIMENSIONES SEGÚN SU SEGÚN SU E NATURALEZA FUNCIÓN INDICADORES. a. Concentración inhibitoria mínima. Bi b. Sensibilidad bacteriana. 2.5.. Cuantitativa. Dependiente. De Razón. Medir halos de inhibición(mm). Cuantitativa. Dependiente. De Razón. te c. lio. Efecto antibacteriano “in vitro” frente a Streptococcus pyogenes. UFC. DEFINICIÓN CONCEPTUAL DE VARIABLES:. Extracto etanólico de Piper aduncum “Matico” Extracto etanólico de Piper aduncum en concentraciones de 5%, 25%, 50%, 75% y 100%.. 18 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(21) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Efecto antibacteriano “in vitro” frente a Streptococcus pyogenes El efecto antibacteriano in vitro frente a Streptococcus pyogenes se estudió mediante la concentración inhibitoria mínima, la cual es la mínima concentración que inhibe el crecimiento de Streptococcus pyogenes. Se tomó como concentración efectiva, al. na. tener como resultados 0 UFC. Para determinar la sensibilidad bacteriana, se utilizó la Escala de Duraffourd, escala. ici. utilizada para determinar cualitativamente el efecto inhibitorio in vitro, según. ed. diámetro de inhibición. (26). Nula (-) para un diámetro inferior a 8 mm.. -. Sensibilidad límite (sensible = +) para un diámetro comprendido entre 8 a 14. M. -. de. mm.. Medio (muy sensible = ++) para un diámetro entre 14 y 20 mm.. -. Sumamente sensible (+++) para un diámetro superior a 20 mm.. te c. a. -. Sensibilidad de Streptococcus pyogenes a Penicilina: Se consideró según el diámetro. -. Sensible para un diámetro superior a 24 mm.. Bi b. -. lio. de inhibición:. Medio y resistente: Hasta la fecha, no se ha descrito ninguna cepa de S. pyogenes con resistencia a penicilina.(27). 2.6.. ANÁLISIS. ESTADÍSTICO. E. INTERPRETACIÓN. DE. LA. INFORMACIÓN. 19 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(22) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Para el análisis estadístico de los datos se utilizó el paquete estadístico SPSS 20 con el cual se construyeron tablas de frecuencia de una entrada con sus valores absolutos, se calculó el promedio de derivación estándar y se realizó los gráficos. Para determinar si hay diferencia de las concentraciones se. na. empleará el análisis de varianza utilizando la prueba F, luego la prueba de comparaciones múltiples de Duncan. Ambas con un nivel de significancia del. ici. 5%. ASPECTOS ÉTICOS. -. Constancia de Asesoría. (Anexo N° 3). -. Constancia de aprobación para ejecución del proyecto por el Comité. M. ed. 2.7.. de. Permanente de Investigación de la Escuela Académico Profesional de Medicina de la Universidad Nacional de Trujillo. (Anexo N°4) Autorización del Departamento de Ciencias Básicas Médicas para acceder al. a. -. te c. Laboratorio de Microbiología de la Facultad de Medicina de la Universidad Nacional de Trujillo. (Anexo N°5). Acta de consentimiento informado para las pruebas de hisopado faríngeo.. lio. -. Bi b. (Anexo N°6) -. Para la ejecución de esta investigación, el personal investigador tomó todas las. medidas estándares de bioseguridad establecida por el Ministerio Nacional de Salud (MINSA) antes, durante y después de cada procedimiento microbiológico. 2.8.. DISEÑO EXPERIMENTAL. 20 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(23) Discos 25%. Discos 50%. Discos 75%. Discos 100%. Bi b. lio. te c. a. de. M. Discos 5%. ed. ici. na. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. III.. RESULTADOS. 21 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(24) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. En el presente estudio experimental cuyo objetivo principal fue conocer el efecto antibacteriano in vitro del extracto etanólico de Piper aduncum sobre Streptococcus pyogenes, se obtuvieron los siguientes resultados: Luego de realizar la prueba de susceptibilidad antibiótica y de haber medido los halos. na. de inhibición, de acuerdo a la escala de Duraffourd se encontró:. ici. Hay un efecto inhibitorio del extracto frente a la bacteria que se empieza a evidenciar. ed. desde la concentración más pequeña, dado que todos de los diámetros son ≥40mm, es. M. decir, el Streptococcus pyogenes fue sumamente sensible a todas las concentraciones. Los promedios de los diámetros de los halos de inhibición con las distintas. de. concentraciones, así como con la Penicilina, se representan en la tabla N°1. El análisis de varianza indica que no hubo una diferencia estadísticamente. a. significativa del diámetro del halo de inhibición del crecimiento de la cepa bacteriana. te c. de acuerdo a la concentración del extracto etanólico de matico y en comparación con. lio. Penicilina, tabla N°2. Las concentraciones del extracto están todas en un mismo grupo lo cual significa que. Bi b. su efecto no difiere significativamente entre ellas, tabla N°3 En el gráfico N°1 (Anexo N°8) se observa una meseta en el halo de inhibición teniendo todas la concentraciones del extracto de P. aduncum, un efecto similar y comparable a la Penicilina.. 22 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(25) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Para la determinación de la Concentración Mínima Inhibitoria (CMI), se registró el número de UFC contabilizadas luego de enfrentar la cepa bacteriana a las distintas concentraciones del extracto de P. aduncum, así como los controles. Al evaluar la CIM, mediante medio de diluciones se determinará que todas las. na. concentraciones utilizadas de Piper aduncum inhibieron el crecimiento de. ici. Streptococcus pyogenes y a partir de la concentración de 75% hubo efecto bactericida, tabla N°4.. ed. En la tabla N°5 se muestra el análisis de varianza donde se indica que no hay una. M. diferencia estadísticamente significativa del número de UFC de la cepa bacteriana entre los grupos del tratamiento vs el grupo de penicilina.. de. La tabla N° indica que los grupos no son estadísticamente diferentes entre sí (con un error de 0.05), lo cual significa que su efecto no difiere significativamente entre ellas. te c. a. y vemos que inhiben el crecimiento bacteriano, al tener en promedio entre 0 y 5 UFC. En el gráfico N°2 (Anexo N°9) se observa una tendencia a disminuir el número de. lio. UFC, es decir mayor efecto antibacteriano, mientras mayor es la concentración del extracto de P. aduncum, un efecto comparable a la Penicilina, en especial con las. Bi b. concentraciones de 75% y 100%.. 23 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(26) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Tabla N°1. na. Resumen descriptivo del efecto bactericida del extracto etanólico de Piper. n. 5%. 12. 25%. 12. 50%. 12. 75%. 44.33. 4.735. 41.33. 6.569. 12. 42.33. 5.774. 12. 48.50. 8.909. 43.33. 7.596. te c. 12. M. 4.764. a. Desv. Estándar. 41.83. 100% Control (penicilina). Promedio. ed. Grupo de tratamiento. de. ici. aduncum según concentración sobre Streptococcus pyogenes. Fuente: Datos obtenidos por el grupo investigador, año 2016. lio. Indica los promedios de los halos de inhibición así como la desviación estándar por. Bi b. cada una de ellas, de lo cual podemos analizar, de manera no significativa, cuál sería la concentración idea a utilizar, evaluando los promedios y que la desviación estándar no sea demasiado alta, de este modo vemos que al 100% el promedio de halo es el más alto y la desviación es de un valor bastante cercano al control.. 24 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(27) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Tabla N°2. Análisis de varianza del diámetro de halos (en mm) según grupo de. GL. CM. Tratamientos. 246.000. 5. 49.200. Error. 3312.000. 66. Total. 3558.000. 71. F. p. 0.980. 0.436. ed. ici. SC. M. 50.182. de. F de V. na. tratamiento. a. Fuente: Datos obtenidos por el grupo investigador, año 2016. te c. La prueba F de Fisher nos indica que entre las distintas concentraciones no hubo una. Bi b. lio. diferencia estadísticamente significativa.. 25 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(28) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Tabla N°3. Prueba de comparación múltiple (Duncan) para los grupos de. na. tratamiento. Subconjunto para alfa = 0.05. Tratamiento. n. 50%. 12. 5%. 12. 75%. 12. 42.33. Control (penicilina). de. ici. Grupos de. 12. 43.33. 12. 44.33. 12. 48.50. M. ed. 1. 25%. 41.83. te c. a. 100%. 41.33. lio. Fuente: Datos obtenidos por el grupo investigador, año 2016 Indica los resultados de la prueba de Duncan, una prueba más exacta que agrupa en. Bi b. secciones de acuerdo a si son diferentes o semejantes en el efecto que se analiza, en este caso la inhibición del crecimiento de Streptococcus pyogenes evidenciado por el diámetro del halo. 26 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(29) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Tabla N°4. Resumen descriptivo de la Concentración Mínima Inhibitoria (UFC) del extracto. na. etanólico de Piper aduncum sobre Streptococcus pyogenes. n. Media. Desv. Estándar. 5%. 12. 0.42. 1.165. 25%. 12. 50%. 12. 75%. 12. 100%. 12. ici. Grupos. de. M. ed. 0.25. Control (penicilina). 12. 0.452. 0.25. 0.452. 0. 0. 0. 0. 0. 0. te c. a. Fuente:Datos obtenidos por el grupo investigador, año 2016. Indica los promedios de UFC/ml así como la desviación estándar por cada una de las. lio. concentraciones, en la cual desde la concentración de 5% hubo inhibición de. Bi b. crecimiento y a partir de 75% efecto bactericida.. 27 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(30) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Tabla N°5. Análisis de varianza para la Concentración Mínima Inhibitoria. CM. Tratamientos. 1.903. 5. 0.381. Error. 19.417. 66. Total. 21.319. 71. F. p. 1.294. 0.277. ici. GL. ed. SC. 0.294. M. F de V. na. (UFC). de. Fuente: Datos obtenidos por el grupo investigador, año 2016. a. La prueba F de Fisher nos indica que entre las distintas concentraciones no hubo una. Bi b. lio. te c. diferencia estadísticamente significativa.. 28 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(31) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Tabla N°6. Prueba de comparación múltiple para la Concentración Mínima Inhibitoria. na. (UFC). Subconjunto para alfa = 0.05. ici. Grupos de Tratamiento. 1. ed. n 12. 100%. 12. Control (penicilina). 12. 25%. 12. 0.25. 12. 0.25. 12. 0.42. de. 0.00 0.00 0.00. te c. a. 50% 5%. M. 75%. lio. Fuente: Datos obtenidos por el grupo investigador, año 2016. Indica los resultados de la prueba de Duncan, en la cual no hubo una diferencia. Bi b. estadísticamente significativa para la concentración inhibitoria mínima entre las concentraciones.. 29 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(32) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. IV. DISCUSIÓN. Desde tiempos muy remotos las plantas medicinales han sido utilizadas por el hombre con fines curativos y también para prevenir enfermedades. El Perú cuenta con una. na. amplia variedad las cuales han sido utilizadas desde tiempos ancestrales y que recientemente están siendo estudiadas. Entre ellas, está las pertenecientes al género. ici. Piper comúnmente conocidas como “matico” que se encuentran distribuidas en las. Madre de Dios, Paseo, San Martín, Ucayali.. ed. regiones de Amazonas, Ayacucho, Cajamarca, Cuzco, Huánuco, Junín, Loreto,. M. El Piper aduncum “matico” tiene diferentes usos en la medicina tradicional y se ha. de. comunicado diferentes actividades biológicas, como antioxidante, hepatoprotector, antialérgico, antitrombótico, anticancerígeno, antibacteriano, antifúngico, entre otras. a. (14,20). Sin embargo, los estudios científicos experimentales que evalúan su actividad. te c. antibacteriana son pocos.. La presente investigación demostró la actividad antibacteriana del extracto etanólico de. lio. Piper aduncum “matico” sobre Streptococcus pyogenes mediante el método de Kirby. Bauer y la determinación de la concentración inhibitoria. Al comparar los halos de. Bi b. inhibición según Durafford (28), las cinco concentraciones (5%, 25%, 50%, 75%,. 100%) se determinó que el Streptococcus pyogenes fue sumamente sensible a todas las concentraciones y con efecto similar a la penicilina, sin embargo no hubo una diferencia significativa entre concentraciones. Además se demostró. su efecto. antibacteriano y bactericida, ya que de un inóculo de 108 b/ml se redujeron de 0-4 bacterias según concentración, sin que haya diferencia significativa entre grupos. 30 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(33) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. además de ser estadísticamente semejante que el antibiótico penicilina. Estos. resultados concuerdan con un estudio en el que se trabajó con la mezcla de Piper aduncum, Plantago mayor y Alternanthera philoxeroides(c.Mart) Griseb conocidas como matico, llantén y lancetilla respectivamente, para evaluar su actividad. na. antibacterial frente a Staphylococus aureus y Echerichia coli así como cuáles son los metabolitos secundarios responsables de su actividad farmacológica con el método de. ici. macrodilución obteniéndose como resultado que la concentración mínima inhibitoria. ed. y la concentración mínima bactericida fue de 10% y que los metabolitos secundarios. M. como flavonoides, compuestos fenólicos, esteroides y alcaloides cuentan con acción antibacterial.(22). Otro estudio realizado en nuestra misma ciudad determinó el efecto. de. de extracto hidroalcohólico de hojas de Piper aduncum L. “matico” sobre Streptococcus b-hemolítico “in vitro” con el método de sacabocados, teniendo como. a. control la penicilina, concluyeron en que el crecimiento de Streptococcus b-. te c. hemolítico es dependiente de la concentración de extracto hidroalcohólico de hojas de Piper aduncum L.(29). lio. Asimismo en distintas investigaciones se ha trabajado con aceites esenciales de. Bi b. plantas de la familia Piperaceae encontrando que presenta actividad antimicrobiana contra bacterias y hongos (30–33). De la misma manera, la inhibición de Streptococcus pyogenes ha sido evaluada con otras plantas medicinales conocidas comúnmente como eucalipto, romero, sangre de grado y algunas macroalgas, encontrando que presentaron actividad antibacteriana contra S. pyogenes.(34–37) La actividad antimicrobiana del extracto etanólico de Piper aduncum se debería a sus componentes activos, sin embargo las propiedades biológicas y químicas de las plantas. 31 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(34) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. medicinales dependen de muchos factores, entre los cuales destacan las propiedades edáficas de la región de cultivo, las condiciones del clima, la fase vegetativa, entre otras; debido a esta razón es importante el estudio de la flora en diferentes sitios, países y zonas geográficas. (14,38) Un estudio realizado en La Universidad Nacional de Trujillo busca. na. realizar el estudio fitoquímico y determinar la concentración de flavonoides totales de las hojas de Piper peltatum L. y Piper aduncum L. procedentes de la región Amazonas, en. ici. este se evidencia abundante presencia de flavonoides, fenoles y taninos en ambas. ed. especies propias de este género.(14) Otro estudio en el cual trabajaron con una muestra obtenida en Cerro de Pasco coincide en que el constituyente más abundante son los. M. flavonoides dejando en segundo lugar los taninos, saponinas y alcaloides (39). En. de. Risaralda, Colombia, se realizaron estudios similares con otras especies de Piper (P. pesaresanum y P. crassinervium), ambos en su caracterización fitoquímica indicaron abundante presencia de flavonoides y cumarinas, en segundo lugar de taninos y fenoles, y. te c. a. menor porcentaje del resto de componentes.(40). Estos hallazgos coinciden con el tamizaje fitoquímico que se hizo de la muestra de. lio. Piper aduncum L. con la que se trabajó, el cual indica que este contiene una abundante cantidad de flavonoides, fenoles y taninos; moderada cantidad de azúcares. Bi b. y compuestos grasos; y leve cantidad de alcaloides, triterpenos y esteroides. (Anexo N°10). Los beneficios para la salud de los flavonoides han sido bien reconocidos en varios estudios (16) El uso de flavonoides contra bacterias, protozoos e infecciones fúngicas tiene dos propósitos: matar las bacterias o células fúngicas y contrarrestar la propagación y el efectos de las toxinas bacterianas. Se cree que el mecanismo pueda. 32 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(35) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. deberse a una alteración metabólica. Los canales de iones son puntos especialmente sensibles de inhibición y posibles blancos de flavonoides, además de estar regulados por reacciones de fosforilación / desfosforilación. (17,18) Por otra parte, los flavonoides fortifican la conectividad de los tejidos mediante la inhibición de algunas. na. de las enzimas que pueden hidrolizar el proteoglicano y la malla proteica, lo cual podría aumentar el efecto antibacteriano al obstaculizar la difusión de la infección al. ici. tejido. (17,19). ed. Según los resultados obtenidos, Piper aduncum abre nuevas posibilidades en el. M. campo de la investigación clínica y de farmacognosia, pudiendo ser así una nueva alternativa natural, de bajo costo y con efecto bactericida para el tratamiento de la. de. faringitis estreptocócica y otras enfermedades cuyos estudios deben ser continuados, aprovechando que el Perú es un país de extraordinaria variedad de recursos vivos y. a. ecosistemas que pueden ser aprovechados económica y científicamente.. te c. Es de relevancia el presente estudio debido a que cumple con las estrategias planteadas por la OMS para el periodo 2014-2023 de fomentar la cobertura sanitaria. lio. universal por medio de la integración de servicios de la medicina tradicional en la. Bi b. prestación de servicios de salud, aprovechando sus posibilidades para contribuir a mejorar los servicios y los resultados sanitarios y asegurando que los usuarios puedan tomar decisiones con conocimiento de causa en lo que concierne al cuidado de su propia salud; además de fortalecer su garantía de calidad, seguridad, uso adecuado y eficacia de la medicina tradicional mediante la reglamentación, evaluación e integración de productos y prácticas de Medicina no tradicional (41). Asimismo su relevancia radica en la alta prevalencia de faringoadmigdalitis por Streptococcus 33 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(36) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. pyogenes (Grupo A) de nuestra región (42) y en la frecuencia de automedicación que hay en nuestro medio la cual llega a ser mayor al 50% especialmente con el uso de antibióticos, indicado por personal no médico en el 60% de resfriados comunes y 76% de broncoespasmos. (43,44).. na. Por lo cual, el presente trabajo es una alternativa para dar solución a tratamiento de infecciones respiratorias del tracto superior causadas por Streptococcus pyogenes. CONCLUSIONES. de. V.. M. ed. ici. (Grupo A), mediante el empleo de extracto etanólico de Piper aduncum “matico”..  El extracto etanólico de Piper aduncum (matico) posee efecto bactericida in. a. vitro sobre el crecimiento de Streptococcus Pyogenes. te c.  Todas las concentraciones tuvieron efecto inhibitorio sobre Streptococcus pyogenes.. lio.  Según la escala de Durafford, el Streptococcus pyogenes fue sumamente. Bi b. sensible a todas las concentraciones de extracto etanólico de Piper aduncum.. 34 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(37) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. VI. RECOMENDACIONES. . Se recomienda realizar estudios en los que se aíslen los principios activos de Piper aduncum. Se recomienda realizar estudios in vivo para una mejor valoración de a. Se recomienda ampliar estudios a otras bacterias y hongos sobre los que pueda. VII.. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS. Adell A, Jalill AEA, Calva R, Hernández P, López A, Nesbitt C, et al. Nuevas. de. 1.. M. tener efecto Piper aduncum.. ed. . ici. efectividad y efectos adversos de Piper aduncum. na. . evidencias acerca de la eficacia de la ampicilina en las faringo amigdalitis. a. bacterianas. Estudio multicéntrico. Rev Méx Pediatría [Internet]. 2003 [cited. te c. 2017 Jan 26];70(s1):3–6. Available from: http://www.medigraphic.com/pdfs/pediat/sp-2003/sps031a.pdf Banegas Y. Prevalencia de las infecciones respiratorias bajas en niños menores. lio. 2.. Bi b. de 5 años atendidos en el hospital de Zumba parroquia Zumba. Año 2015. 2016;. 3.. Cenjor C, García J, Ramos A, Cervera J, Tomás M E AL. Documento de consenso sobre “tratamiento antimicrobiano de la faringo amigdalitis”. Actas Conf en línea [Internet]. 2003;(54: 369-383). Available from: http://www.bvsde.paho.org/texcom/cd050998/cenjor.pdf. 35 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(38) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 4.. Calviño O, Llor C, Hernández S, Cots J. Actualización en las recomendaciones en el manejo diagnóstico y terapéutico de la faringitis aguda. 2015 [cited 2017 Jan 24]; Available from: http://pub.bsalut.net/butlleti/vol33/iss1/2. 5.. Matas L, Méndez M, Rodrigo C, Ausina V. Diagnóstico de las faringitis. na. estreptocócicas. EnfermInfeccMicrobiol Clin [Internet]. 2008;26((13):14-8). Available from: http://www.medigraphic.com/pdfs/pediat/sp-2003/sps031a.pdf Llor C, Cots J. Certezas y dudas sobre el manejo de la faringitis aguda. Vol.. ici. 6.. Cots J, Alós J-I, Bárcena M, Boleda X, Cañada J, Gómez N, et al. Guía clínica. M. 7.. ed. 47, Atención Primaria. 2015.. para el manejo de la faringoamigdalitis aguda del adulto. Farm Comunitarios. de. [Internet]. 2015 Mar 1 [cited 2017 Jan 21];7(1):20–31. Available from: http://www.farmaceuticoscomunitarios.org/journal-article/guia-clinica-manejo-. Cots J, Alós J-I, Bárcena M, Boleda X, Cañada J, Gómez N, et al.. te c. 8.. a. faringoamigdalitis-aguda-del-adulto. Recomendaciones para el manejo de la faringoamigdalitis aguda del adulto.. lio. Acta Otorrinolaringológica Española [Internet]. 2015 May [cited 2017 Jan. Bi b. 21];66(3):159–70. Available from: http://linkinghub.elsevier.com/retrieve/pii/S0001651915000084. 9.. Valencia I. Evaluación de medios de cultivo para el aislamiento de Streptococcus pyogenes en pacientes con diagnóstico clínico de faringoamigdalitis que acuden al laboratorio del SEDALIS durante los meses de julio a diciembre del 2008. Univ Mayor san Andrés La paz, Boliv. 2009;. 10.. Antunes R, Diogo M, Carvalho A, Pimentel T OJS pyogenestoxic-shock 36. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(39) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. syndrome. Streptococcus pyogenestoxic-shock syndrome. ActaMed Port. 2011;24(3:617-20.). 11.. Olender A, Łetowska I, Karyński M, Kiernicka-Ciekot K, Pels K. Problems with identification of beta-hemolytic streptococcus resistant to bacitracin. 12.. na. isolated from patients with pharyngitis. Med DoswMikrobiol. 2012; Fica A. Manejo de la faringoamigdalitis estreptocóccica en pacientes adultos o. ed. http://www.scielo.cl/scielo.php?pid=S0716-. ici. adolescentes. Rev chil infectol [Internet]. 2002; Available from:. 13.. M. 10182002000200003&script=sci_arttext#1. Rodríguez C, Rojas P, Wozniak A, Kalergis A, Cerón I, Riedel I, et al.. de. Resistance phenotypes and genotypes of Streptococcus pyogenes clinical isolates in Chile over a 10-year period. Rev méd Chile [Internet]. 2011;(139( 9. a. ): 1143-1149). Available from: http://dx.doi.org/10.4067/S0034-. 14.. te c. 98872011000900005.. Soto M. Estudio fitoquímico y cuantificación de flavonoides totales de las. lio. hojas de Piper peltatum L. y Piper aduncum L. procedentes de la región. Bi b. Amazonas. In Crescendo. 2015;6(1):33–43. 15.. Mejía K, Rengifo E. Plantas Medicinales de Uso Popular en la Amazonía Peruana. 2000;. 16.. Pérez G. Los flavonoides: antioxidantes o prooxidantes. Rev Cuba Invest Biomed. 2003;22(1):48–57.. 17.. Havsteen BH. The biochemistry and medical significance of the flavonoids. Pharmacol Ther. 2002;96(2):67–202. 37. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(40) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 18.. Kumar S, Pandey AK. Chemistry and biological activities of flavonoids: an overview. ScientificWorldJournal [Internet]. 2013 [cited 2017 Jan 24];2013:162750. Available from: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/24470791 Bahrin LG, Apostu MO, Birsa LM, Stefan M. The antibacterial properties of. na. 19.. sulfur containing flavonoids. Vol. 24, Bioorganic & Medicinal Chemistry. Arroyo J, Bonilla P, Moreno-Exebio L, Ronceros G, Tomás G, Huamán J, et. ed. 20.. ici. Letters. 2014.. M. al. [Gastroprotective and antisecretory effect of a phytochemical made from matico leaves (Piper aduncum)]. Rev Peru Med Exp Salud Publica [Internet].. de. [cited 2017 Jan 24];30(4):608–15. Available from: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/24448937 Paco K, Ponce-Soto LA, Lopez-Ilasaca M, Aguilar JL. Determinación del. a. 21.. te c. efecto cicatrizante de Piper aduncum (Matico) en fibroblastos humanos. Rev Peru Med Exp Salud Publica [Internet]. 2016 Aug 9 [cited 2017 Jan. lio. 23];33(3):438. Available from:. Bi b. http://www.rpmesp.ins.gob.pe/index.php/rpmesp/article/view/2329 22.. Alva RA, Quezada MR, Rodríguez EP. Metabolitos secundarios de mezcla de plantas medicinales con acción antibacterial sobre microorganismos causantes de infección puerperal en la provincia de Chachapoyas. PUEBLO Cont. 2016;25(2):61–9.. 23.. Flores E. Metabolitos secundarios bioactivos de especies del género "Piper" de la flora boliviana. Servicio de Publicaciones, 38. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(41) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Universidad de La Laguna; 2009. 24.. Miranda M. Métodos de Análisis de Drogas y Extractos. Inst Farm y Aliment Univ Habana Cuba. 2002;. 25.. Miranda M, Cuellar A. Manual de Prácticas de Laboratorio: Farmacognosia y. 26.. na. Productos Naturales. Univ la Habana. 2000;1°. Sacsaquispe R VJ. Manual de procedimientos para la prueba de sensibilidad. Cavalieri S, Coyle M. Manual de Pruebas de Susceptibilidad Antimicrobiana.. M. 27.. ed. Nac del Perú – MINSA Lima, Perú. 2002;. ici. antimicrobiana por el método de disco difusión. Ser normas técnicas N°30 Inst. American SocietyforMicrobiology. University of Washington Seattle,. 28.. Duraffourd C, D’Hervicourt L, Lapraz J. Cuaderno de Fitoterapia Clínica.. a. Barcelona: 1987.. Flores J. Efecto de la concentración del extracto hidroalcohólico de hojas de. te c. 29.. de. Washington. 2005;. Piper aduncum L. "matico" sobre el crecimiento de Streptococcus. Noriega P, Mosquera T, Abad J, Cabezas D, Piedra S, Coronel I, et al.. Bi b. 30.. lio. B- hemolítico, "in vitro" Univ Nac Trujillo. 2013;. Composición química, actividad antioxidante y antimicrobiana del aceite esencial proveniente de la hojas de Piper pubinervulum C. DC Piperaceae. La Granja. 2016;24(2).. 31.. Sánchez Y, Correa TM, Abreu Y, Pino O. Efecto del aceite esencial de Piper auritum Kunth y sus componentes sobre Xanthomonas albilineans (Ashby) Dowson y Xanthomonas campestris pv. campestris (Pammel) Dowson. Rev 39. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(42) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Protección Veg. 2013;28(3):204–10. 32.. Azuero A, Jaramillo C, San Martin D, D’Armas H. Análisis del efecto antimicrobiano de doce plantas medicinales de uso ancestral en Ecuador / Analysis of antimicrobial effect of twelve medicinal plants of ancient use in. na. Ecuador. Rev Cienc UNEMI, ISSN-e 1390-4272, Vol 9, No 20, 2016 (Ejemplar Dedic a Septiembre), págs 11-18. 2016;9(20):11–8.. Sánchez Y, Correa T, Abreu Y, Cotilla L, Berroa G, Pino O. Composición. ici. 33.. ed. química del aceite esencial de Piper hispidum Sw. y actividad antimicrobiana. M. sobre Xanthomonas albilineans (Ashby) Dowson y Xanthomonas campestris pv. campestris (Pammel) Dowson. Rev Protección Veg. 2014;29(3):185–91. Álvarez AV, Cáceres A. Inhibición de streptococcus pyogenes y. de. 34.. staphylococcus aureus por extractos vegetales usados en el tratamiento de. 35.. te c. 2015;5(1).. a. afecciones respiratorias. Rev Científica la Fac Ciencias Químicas y Farm.. Rodríguez Y, Espinoza S, Vergara M. Efecto inhibitorio in vitro del extracto. lio. etanólico de Rosmarinus officinalis L. “Romero” sobre el crecimiento. Bi b. Streptococcus pyogenes, Staphylococcus aureus y Pseudomonas aeruginosa. Rev Científica Salud Vida Sipanense. 2014;1(2):63.. 36.. Troncoso N, Saavedra R, Olivares A, Farías J, San-Martín S, Urrutia H, et al. Identificación de compuestos antibacterianos en macroalgas presentes en la Región del Biobío, Chile. Rev Biol Mar Oceanogr [Internet]. 2015 Apr [cited 2017 Jan 27];50:199–204. Available from: http://www.scielo.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S071840. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(43) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 19572015000200007&lng=en&nrm=iso&tlng=en 37.. Corrales L, Castillo A, Melo A. Evaluación del potencial antibacterial in vitro de Croton lechleri frente a aislamientos bacterianos de pacientes con úlceras cutáneas. 2016; García C, Martinez R, Ortega J CF. Componentes químicos y su relación con. na. 38.. las actividades biológicas de algunos extractos vegetales. Química Viva.. Arroyo-Acevedo J, Chávez-Asmat RJ, Anampa-Guzmán A, Donaires R, Ráez-. ed. 39.. ici. 2010;9(2):86–96.. M. Gonzáles J. Protective Effect of Piper aduncum Capsule on DMBA-induced Breast Cancer in Rats. Breast Cancer (Auckl) [Internet]. 2015 [cited 2017 Jan. 40.. Giraldo A. Estudio fitoquímico de Piper pesaresanum y Piper crassinervium. a. (Piperaceae). 2012;. Organización Mundial de la Salud. Estrategia de la OMS sobre medicina. te c. 41.. de. 17];9:41–8. Available from: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/26157333. tradicional 2014-2023. Organización Mundial de la Salud; 2013. LLapa L, Luna J, Macao M. Prevalencia de faringoamigdalitis aguda. lio. 42.. Bi b. estreptocócica mediante el test de detección rápida del antígeno de estreptococo beta hemolítico y los factores asociados en pacientes entre 5 – 19 años en el Centro de Salud No 1 julio – septiembre, Cuenca 2013. 2014;. 43.. Ecker L, Ruiz J, Vargas M, Del Valle LJ, Ochoa TJ. Prevalencia de compra sin receta y recomendación de antibióticos para niños menores de 5 años en farmacias privadas de zonas periurbanas en Lima, Perú. Rev Peru Med Exp Salud Publica [Internet]. 2016 May 18 [cited 2017 Jan 27];33(2):215. 41. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(44) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Available from: http://www.rpmesp.ins.gob.pe/index.php/rpmesp/article/view/2152 44.. Hermoza R. Automedicación en un distrito de Lima Metropolitana, Perú. Rev Medica Hered. 2016;27(1). Colegio Médico del Perú. Código de ética y deontología. Perú 2007.. Bi b. lio. te c. a. de. M. ed. ici. na. 45.. 42 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(45) na. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Bi b. lio. te c. a. de. M. ed. ici. VIII. ANEXOS. 43 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(46) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Anexo N° 01 Diámetros de halos de inhibición en mm en función a cinco concentraciones de Piper aduncum sobre Streptococcus pyogenes. Control: Penicilina Medición de los halos de inhibición de Piper aduncum Concentración del extracto etanólico de Piper. Control. repetición. aduncum. (mm). 50%. (mm). (mm). (mm) 34. 2. 46. 50. 44. 3. 43. 40. 4. 40. 38. 5. 34. 50. 6. 39. 7 8. (mm). (mm). 36. 40. 40. 52. 60. 38. 50. 42. 60. 50. 30. 50. 30. 50. 42. 44. 54. 40. te c. 46. 36. 46. 46. 46. 40. 44. 44. 54. 54. 44. 44. 46. 48. 46. 46. 38. 40. 30. 44. 46. 26. lio. 50. Bi b. 9. 100%. M. 44. 75%. de. 34. a. 1. ici. 25%. ed. 5%. na. N° de. 10. 48. 40. 40. 38. 40. 40. 11. 46. 50. 44. 34. 52. 50. 12. 44. 46. 46. 40. 54. 40. 41.83. 44.33. 41.33. 42.33. 48.50. 43.33. Promedio. Fuente: Datos obtenidos por el investigador, año 2016. 44 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.